Metode standardizate

pentru evaluarea biologica

a dispozitivelor medicale
 Dispozitive medicale
orice instrument, aparat, echipament,
material sau alt articol, utilizat singur
sau in combinatie, impreuna cu orice
accesoriu, inclusiv software-ul necesar
functionarii corespunzatoare a acestuia,
destinat de producator sa fie folosit
pentru om, in scop de:
a) diagnosticare, prevenire,
monitorizare, tratament sau ameliorare
a unei afectiuni sau a unei leziuni;
b) investigatie, inlocuire sau
modificare a anatomiei sau a unui
proces fiziologic;
c) control al conceptiei,
si care nu isi indeplineste actiunea
principala prevazuta prin mijloace
farmacologice, chimice, imunologice
sau metabolice, dar a carui functionare
poate fi asistata prin astfel de mijloace
(HG 344 /2004)
dispozitiv medical activ - orice
dispozitiv medical a carui functionare se
bazeaza pe o sursa de energie electrica
sau pe orice sursa de putere, alta dect
cea generata direct de organismul uman
sau de gravitatie
dispozitiv medical implan-
tabil activ - orice dispozitiv medical
activ care este destinat sa fie introdus,
partial ori total, prin interventie medicala
sau chirurgicala, in organismul uman
sau, prin interventie medicala, intr-un
orificiu natural al acestuia, si care este
destinat sa ramna implantat dupa
finalizarea procedurii
dispozitiv individual la
comanda - orice dispozitiv medical
implantabil activ, destinat sa fie utilizat
exclusiv pentru un pacient determinat,
realizat special conform prescriptiei unui
medic specialist care, pe propria
raspundere, ii stabileste caracteristicile
specifice ale proiectului
 Biocompatibilitate
Un biomaterial, in acceptiunea actuala, in sens larg, este
un material destinat a fi pus in contact cu tesuturile vii si
fluide biologice pentru a diagnostica, trata, modifica forme
sau a inlocui parti de tesut, organe sau a stimula unele
functii ale acestora.

Definitia general acceptata pentru biocompatibilitate unui

material vizeaza proprietatile acestuia care asigura o
reactie adversa minima in mediul biologic.
Biocompatibilitatea - determinata de:

Natura materialelor componente

Tipul de tesut care va fi expus la

dispozitivul medical

Durata expunerii
 PROBLEMATICA BIOMATERIALE:

Cum se caracterizeaza un material care va

prelucrat ca dispozitiv medical/implant?

Cum se evalueaza materialele pentru a

determina daca sunt biocompatibile?

Cum se evalueaza biomaterialele pentru a

determina daca vor functiona adecvat in
vivo?
 Testare Biomateriale: 4 etape
Caracterizare materii
prime chimic, fizic, biologic

citotoxicitate, sensibilizare,
Biocompatibilitate iritare, toxicitate sistemica,
hemocompatibilitate,
material carcinogenicitate

mediu, procesare, sterilizare,

Validare produs si validare produs finit (dispozitiv
proces medical)

Testare pentru Audit periodic, teste pentru

punerea pe piata avize aplicare
Categorii de dispozitive medicale Definitii si
exemple
Dupa durata de expunere

Expunere limitata.
Dispozitive cu durata de expunere mai mica
de 24 h.
Expunere prelungita.
Dispozitive a carui termen de utilizare
(singular, multiplu sau termen lung) este
cuprins intre 24h si 30 zile.
Contact permanent.
Dispozitive a carui termen de utilizare
(singular, multiplu sau termen lung) este mai
mare de 30 zile.
 Standarde pentru testarea
biomaterialelor
Standarde ISO 10993:
ISO 10993-1: Evaluare si testare in cadrul unui proces de gestionare a riscului
ISO 10993-2: Conditii pentru protectia animalelor
ISO 10993-3: Teste pentru genotoxicitate, carcinogenitate si toxicitate asupra
functiei de reproducere
ISO 10993-4: Selectarea testelor pentru interactiunile cu sngele
ISO 10993-5: Teste pentru citotoxicitate in vitro
ISO 10993-6: Teste pentru efecte locale dupa implantare
ISO 10993-7: Reziduuri de sterilizare cu oxid de etilena
ISO 10993-8: Selectarea si calificarea materialelor de referinta utilizate pentru
teste biologice
ISO 10993-9: Cadru pentru identificarea si cuantificarea produsilor potentiali de
degradare
ISO 10993-10: Teste de iritare si de sensibilizare cutanata
ISO 10993-11: Teste pentru toxicitate sistemica
ISO 10993-12: Prepararea esantioanelor si a materialelor de referinta
ISO 10993-13: Identificare si cuantificare a produselor de degradare din
dispozitive medicale pe baza de polimeri
ISO 10993-14: Caracterizarea materialelor
 Standarde pentru testarea
biomaterialelor

ISO 10993-11: Teste pentru toxicitate sistemica

ISO 10993-12: Prepararea esantioanelor si a materialelor de referinta
ISO 10993-13: Identificare si cuantificare a produselor de degradare din
dispozitive medicale pe baza de polimeri
ISO 10993-14: Identificarea si cuantificarea produselor de degradare din
materiale ceramice
ISO 10993-15: Identificarea si cuantificarea produselor de degradare din
metale si aliaje
ISO 10993-16: Proiectarea studiilor toxicocinetice pentru produse de
degradare si substante extractibile
ISO 10993-17: Stabilirea limitelor admisibile pentru substante extractibile
ISO 10993-18: Caracterizare chimica a materialelor
ISO/TS 10993-19: Caracterizarea fizico-chimica, morfologica si
topografica a materialelor
ISO/TS 10993-20:Principii si metode pentru testarea imunotoxicitatii
dispozitivelor medicale
 Standard ISO 10993-1: Evaluare
si testare
Principii de evaluare a toxicitatii
1. Caracterizarea si identificarea compozitiei
biomaterialului, potentiale impuritati si substante
extractibile;
2. Considerarea de efecte toxice pentru produsele de
extractie si produsele de degradare;
3. Teste realizate de personal specializat;
4. Analiza date la autoritatile de verificare;
5. Reevaluare de efecte toxice daca au loc modificari de
compozitie, in timpul prelucrari sau la utilizare;
6. Analiza datelor: nonclinice, clinice, postmarket etc.
7. Toate materiale teste de citotoxicitate, sensibilizare si
teste de iritare
17
 Standard ISO 10993-14:
Caracterizarea materialelor
Proprietati chimice, toxicologice,
fizice, electrice, morfologice si
mecanice:
Material
Aditivi
Contaminanti de proces si reziduuri
Substante extractibile
Produse de degradare
 Standard ISO 10993-14:
Caracterizarea materialelor
De ce caracterizam?
Stabilirea amprentei
Determinarea prezentei de substante
extractibile
antioxidanti contaminanti surfactanti

stabilizatori plastifianti monomeri

 Standard ISO 10993-14:
Caracterizarea materialelor
Amprenta chimica
Spectroscopie IR

Spectroscopie RAMAN

Analiza termica (punct topire, grad de

cristalinitate, T vitrifiere)
Standard ISO 10993-14:
Caracterizarea materialelor
Spectru FTIR - Polyurethane

Spectru RAMAN os
700 PO4, n 1

600
Intensity (a.u.)

500

400

300 CO3, n 2
Amide III Amide I
200 Collagen Collagen

CH2 Wag
100 PO4, n 2 PO4, n 4

0
320 520 720 920 1120 1320 1520 1720
-1
Frequency (cm )
 Standard ISO 10993-14:
Caracterizarea materialelor

Teste mecanice
Intindere, compresiune, incovoiere
Rezistenta la soc
Rezistenta la oboseala
Conditii de testare:
 Standard ISO 10993-5:
Citotoxicitate

- Testarea citotoxicitatii prin metoda

contactului direct
- Testarea citotoxicitatii prin metoda
extractului
 Standard ISO 10993-5:
Citotoxicitate
Materialele toxice inhiba caile metabolice ale
celulelor
Surse de materiale toxice: componente extractibile
Aditivi pentru prelucare
Plastifianti
Monomeri
Doza de agent chimic eliberat in:
Doza de expunere: doza aplicata sistemului
Doza eliberata: doza absorbita de celule
 Testare In vitro

Culturi de celule:
Prelevare tesut
Maruntire fina
Extragere celule libere din
MEC, prin digestie(tripsina,
colagenaza etc.)
Conditionarea placi/ petri cu
nutrienti, temperatura 37oC!

26
 Testare In vitro: Contact direct
Contact direct
Monstrat confluent de celule,
(fibroblaste)
biomaterial in contact direct
24 ore, 37C
Celulele:
Modificare morfologie
Mor
Pierd aderenta la start
Hematoxylin blue: coloratie celule vii
aderente
Biomaterial
toxicitate=celule moarte/celule vii !
Fibroblaste?
Usor de mentinut
Buna corelatie cu testele pe animale
Sunt prezente in procesele de
vindecare a ranilor
 Testare In vitro: Contact direct

Monostrat de celule (L929 mouse fibroblast L929 mouse fibroblast cells (100 x ) , citotoxic
cells , 100 x) - contact celula-celula bine pozitiv metoda testului in elutie. Spatiile
definit Indicatie material non-citotoxic mari dintre celule indica o dezintegrare
(raspuns negativ) puternica a celulelor

28

http://www.devicelink.com/mddi/archive/98/04/013.html
Testare In vitro : Difuzie in agar

Difuzie in agar
Biomaterial
Intre celule si material
Strat de agar
se interpune un strat
de agar
Substantele chimice
difuzeaza prin agar
Se utilizeaza coloratii
pentru evidentierea
celulelor sanatoase
Zona necolorata in
jurul biomaterialului
celule moarte
29
 Testare In vitro :
Difuzie in agar

Material control pozitiv. Zona decolorata indica faptul ca prezenta probei determina liza celulelor material
toxic

http://www.devicelink.com/mddi/archive/98/04/013.html
 Testare In vitro:Metoda
Extractului
Extractia
CUM?

Biomaterial
- Mentinere material in
solvent sau solutii apoase
(De ce solvent sau apa?)
Materialele se vor dizolva,
migra in solutie
Se aplica solutia in cultura
de celule
Coloratie celule viabile

31
Teste In vitro: Comparatie
 Standard ISO 10993-10:
Sensibilizare
Contact prelungit a substantei chimice
ce interactioneaza cu sistemul imunitar
Pielea utilizare frecventa deoarece
cele mai multe reactii la biomaterial
sunt mediate celular
Sensibilitatea dermica zone rosiatice
si umflare

33
 Standard ISO 10993-10:
Sensibilizare

Sensibilizare la manusi din latex utilizare saptamani- luni

http://www.devicelink.com/mddi/archive/98/05/025.html
 Standard ISO 10993-10:
Sensibilizare
Porcusori de guineea: raspuns la sensibilizatori
dermici
Metode de testare:
Probe repetate(Buehler): pentru dispozitive topice electrozi
dermici, componente chirurgicale
Faza de inducere: expunere directa sub pansamente ocluzive: 6
ore/zi, 3 zile/saptamana, 3 saptamani
Faza de refacere: 2 saptamani odihna pentru a permite
dezvoltarea unui raspuns
Expunere finala
Maximizare (Magnuson-Kligman): materiale in contact cu alta
zona decat pielea
Extracte fluide preparate in solutii saline sau ulei vegetal
Injectarea extractului cu adjuvanti care amplifica raspunsul imun
Doua saptamani odihna
Aplicarea topica a extractului
 Standard ISO 10993-10:
Sensibilizare

Raspuns pozitiv la testul maximizare porcusor de guinea

http://www.devicelink.com/mddi/archive/98/05/025.html
 Standard ISO 10993-10: Iritatia

Iritatia: raspuns local al tesutului caracterizat

de semnal obisnuit de inflamatie
roseata
umflare
caldura
durere
Substante chimice
aditivi
sin prelucrare
agenti de prelucare(e.g. urme tensioaactivi, urme
etilen oxid)
contaminanti
37
 Standard ISO 10993-10: Iritatia

Teste pentru evaluare iritare

1. Teste in vitro
2. Teste in vivo
3. Teste clinice(optional)

Teste in vivo pentru iritatie:

- Intracutanat;
- Piele primara;
- Ocular.
 Standard ISO 10993-10: Iritatia

Test intracutanat:
Iepuri (albino)
Se prepara extract sub control de temperatura,
timp, suprafata material/volum (apa sau solventi pe
baza de ulei)
Extractul se injecteaza in piele
Situsuri multiple
Control injectare
Observatii (roseata, umflare) la 24h, 48h, 72h
Teste agresive, extracte preparate in conditii
extreme maximizeaza sansa de a obtine efect
iritant
 Standard ISO 10993-10: Iritatia

Test de iritatie intracutanata - albino rabbits

http://www.devicelink.com/mddi/archive/98/06/012.html
 Standard ISO 10993-10: Iritatia

Testul pe piele
Mai putin agresiv
Se depune materialul pe spatele animalului
Se acopera cu material ocluziv
Aplicatie la 4-24 h
Observatie 72 h
Scor pentru roseata si umflare
Comparatie cu piele normala
Tip de raspuns: neglijabil, putin, moderat, sever
 Standard ISO 10993-10: Iritatia

Testul ocular:
Produse in contact cu ochiul
Extractul fluid(solid sau pulbere)
Se administreaza in sacul conjunctival - albino
rabbit
Ochiul netratat - control
Observare regulata peste 72 h
Scor pe baza de:
Umflare si inrosire a conjunctivei
Raspuns iris la lumina
Opacifiere cornee
Prezenta de fragmente
 Standard ISO 10993-11:
Efecte sistemice
Efecte de eliberare a substantelor in ficat,
inima, rinichi, creier
Uzual se utilizeaza soareci si sobolani
Metode de aplicare:
dermica
inhalare
intravenos
intraperitoneal
oral
43
 Standard ISO 10993-11:
Efecte sistemice
Aplicare:
Extracte fluide(intraperitoneal sau intravenos)
implantare de material (in special biodegradabile)
(intramuscular, intraperitoneal, subcutanat)
Colectare
Probe de sange(hematologie, chimia serului)
Probe de tesut(patologie)
Observare de semne adverse:
convulsii
epuizare
pierdere in greutatie
 Standard ISO 10993-11:
Efecte sistemice
Persistenta
acut (in 24 ore)
sub-acut (14-28 zile)
sub-cronic (pana la 90 zile sau pana la 10%
din durata de viata a animalului)
cronic (peste 90 zile sau peste 10% din
durata de viata a animalului)
 Standard ISO 10993-6:
Efectul implantului
Presupune evaluarea efectului
dispozitivului medical asupra
tesutului inconjurator
Soareci, sobolani, porci de guinea,
iepuri
Important pt implant - dimensiune,
sterilizare si implantare aseptica
Atentia orientata pe efecte locale 46
 Standard ISO 10993-6:
Efectul implantului
Iepuri:
dimensiune material : 1x10 mm
sterilizat;
anestezie;
4 probe test si 4 probe control (inerte pentru
organism ) implante in muschiul paralombar;
probele test si control pe partile opuse;
termen scurt: raspuns tisular observat dupa 1-2
saptamani
termen lung: raspuns tisular observat dupa 12-78
saptamani
 Standard ISO 10993-6:
Efectul implantului

La fiecare interval de timp se observa

dimensiunea capsulei fibroase
Material reactiv: 2-4 mm grosime
Nu se observa capsula la control
Examinare histopatologica
Reactie inflamatorie la implant
Celule moarte in jurul implantului
 Scala pentru analiza histologica a calitatii vindecarii

Parametru urmarit Scor

Proliferare fibroblaste 0-lipsa fibroblaste
1 =putine fibroblaste
2= mai multe fibroblaste
3= numar egal de fibroblaste si fibrocite
4=fibrocite mature dominante
Organizarea colagenului 1 =dezorganizat, fara fibre vizibile
2= organizare relativa, imatur (fibre vizibile)
3= organizat, aproape normal
4= organizare normala
Tesutul de granulatie 1 = tesut de granulatie nesanatos, infectat
2= tesut de granulatie partial nesanatos
3- tesut de granulatie sanatos dar inca nu completat cu
epiderm
4= tesut de granulatie sanatos, completat cu epiderm
Delimitarea leziunii 1 = zona leziunii marcata distinct de tesutul sanatos
2= tesut sanatos in zona leziunii, dar imatur si usor de
demarcat
3= tesutul in zona leziunii bine integrat in tesutul normal
SCOR TOTAL
 Standard ISO 10993-6:
Efectul implantului

Raspuns minim Raspuns sever

http://www.devicelink.com/mddi/archive/98/08/013.html
Standard ISO 10993-6:
Efectul implantului
 Standard ISO 10993-4:
Hemocompatibilitate
Sangele - celule:
Eritrocite(viabilitate)
Limfocite(raspuns imun)
Celule albe (inflamatie)
Proteinele coagularii
Teste : In vitro si in vivo
Testele in vitro necesita utilizarea de
anticoagulanti

52
 Standard ISO 10993-4:
Hemocompatibilitate
Metode de testare hemocompatibilitate

Test Metoda Observatii

Tromboza Aderare plachete, leucocite, Microscopie optica sau SEM
agregate, eritrocite, fibrina etc.

Coagulare Timp partial de tromboplastina

Plachete Numarare plachete
Hematologie Numar leucocite; hemoliza Hemoliza- fragilitatea
(hemoglobina din plasma) membranei celulelor rosii in
contact cu materialul sau
dispozitivul
Imunologie C3a, C5a, TCC, Bb, iC3b, C4d,
SC5b-9
 Standard ISO 10993-4:
Hemocompatibilitate

Neutrofile si limfocite normale material Celule fragmentate ca urmare a expunerii

control , negativ la un material control pozitiv