Tabelul de Concordanta

Tabelul de concordan
la proiectul Hotrrii Guvernului cu privire la aprobarea Cerinelor privind metodele de analiz i evaluare calitativ a laptelui i a produselor lactate
1. Titlul actului comunitar, subiectul reglementat i scopul acestuia
Regulamentul (CE) nr. 273/2008 al comisiei din 5 martie 2008 de stabilire a normelor de aplicare a regulamentului (CE) nr. 1255/1999 al consiliului
privind metodele de analiz i evaluare calitativ a laptelui i a produselor lactate, publicat n Jurnalul Oficial al Uniuniii Europene sria L, nr. 088 din
29.03.2008, p. 1.
Subiectul reglementat este stabilirea metodelor de analiz i evaluare calitativ a laptelui i a produselor lactate.
Scopul este organizarea pieei sectorului lapte i produse lactate.
Commission Regulation (EC) No 273/2008 of 5 March 2008 laying down detailed rules for the application of Council Regulation (EC) No 1255/1999
as regards methods for the analysis and quality evaluation of milk and milk products (OJ L 088, 29.3.2008, p.1).
The covered subject is to establish methods of analysis and quality evaluation of milk and milk products.
The aim is to organize market of milk and milk products sector.
2. Titlul actului normativ naional, subiectul reglementat i scopul acestuia
Hotrrea Guvernului cu privire la aprobarea Cerinelor privind metodele de analiz i evaluare calitativ a laptelui i a produselor lactate.
Subiectul reglementat este stabilirea metodelor de analiz i evaluare calitativ a laptelui i a produselor lactate.
Scopul este verificarea calitii laptelui i produselor lactate.
Government Decision regarding the approval of requirements concerning methods of analysis and quality evaluation of milk and milk products.
The covered subject is to establish methods of analysis and quality evaluation of milk and milk products.
The aim is to check the quality of milk and milk products.
3. Gradul de compatibilitate
Parial compatibil.
4. Prevederile i cerinele 5. Prevederile actului normativ 6. Diferene 7. Motivele ce explic 8. Instituia 9. Termenul-
reglementrilor naional (capitolul, articolul, faptul c proiectul responsabil limit de
comunitare (articolul, paragraful) subparagraful, punctul etc.) este parial asigurare a
compatibil sau compatibilitii
incompatibil complete a
actului naional
Art. 1. (1) Prezentul regulament Capitolul I. Domeniul de aplicare. Pct. Parial n actul naional este Ministerul Din momentul
stabilete anumite metode de referin 1. Cerinele privind metodele de analiz compatibil. specificat organul care Agriculturii i intrrii n vigoare
pentru analiza chimic, fizic i i evaluare calitativ a laptelui i a va aplica metodele de Industriei a actului naional
microbiologic i pentru evaluarea produselor lactate (n continuarea referin prenotate, ct Alimentare armonizat
senzorial a laptelui i a produselor textului - Cerine) stabilesc anumite i produsele care vor fi
lactate care urmeaz s fie folosite n metode naionale de referin pentru supuse ncercrilor de
cadrul msurilor prevzute n efectuarea de ctre laboratoarele laborator.
organizarea comun a pieei n sectorul naionale acreditate a analizelor chimice,
laptelui i al produselor lactate instituit
fizice i microbiologice i pentru
prin Regulamentul (CE) nr. 1255/1999, evaluarea senzorial a laptelui i a
precum i normele de aplicare a produselor lactate (n continuare -
metodelor respective. produse), provenite att din producia
autohton, ct i din import.
Capitolul II. Dispoziii generale. Pct. Compatibil - Ministerul Din momentul
Art. 1. (2) Lista metodelor de referin 3. Metodele de referin pentru analiza Agriculturii i intrrii n vigoare
aplicabile analizelor menionate la chimic, fizic i microbiologic i Industriei a actului naional
alineatul (1) figureaz n anexa I la pentru evaluarea senzorial a laptelui i Alimentare armonizat
produselor lactate, precum i normele de
prezentul regulament.
aplicare a metodelor respective sunt
prevzute n anexa nr. 1 la prezentele
Cerine.
- Incompatibil Prevederi UE - -
Art. 1. (3) Comisia actualizeaz lista n neaplicabile
conformitate cu procedura prevzut la
articolul 42 din Regulamentul (CE)
nr. 1255/1999.
Capitolul II. Dispoziii generale. Pct. Parial Din primul alineat a Ministerul Din momentul
Art. 2. Metodele de rutin pot fi folosite 4. Metodele de rutin folosite pentru compatibil. fost exclus sintagma Agriculturii i intrrii n vigoare
analizele necesare trebuie s fie validate n conformitate cu Industriei a actului naional
pentru analizele necesare n conformitate i verificate cu regularitate pe baza normele comunitare, Alimentare armonizat
cu normele comunitare, cu condiia s metodei de referin. Rezultatele sunt deoarece sunt
fie calibrate n mod adecvat i verificate comparate innd cont de inegalitile prevederi UE cu
constante, de repetabilitate i de caracter opional.
cu regularitate pe baza metodei de
reproductibilitate. Ultimul alineat nu este
referin. Rezultatele sunt comparate n cazul unor contestaii, rezultatul prevzut n actul
innd cont de inegalitile constante, de obinut prin metoda de referin este naional, deoarece
repetabilitate i de reproductibilitate. hotrtor. acestea sunt prevederi
UE neaplicabile
n cazul unor contestaii, rezultatul
obinut prin metoda de referin este
hotrtor.
Statele membre informeaz Comisia cu

privire la folosirea metodelor de rutin
n cadrul analizei menionate la
articolul 1.

Art. 3. Cu excepia analizei 5. Evaluarea conformitii unui lot cu Agriculturii i intrrii n vigoare
marcatorilor, anexa II la prezentul limita legal, cu excepia analizei Industriei a actului naional
regulament se aplic n scopul definirii marcatorilor se specific n anexa nr. 2 la Alimentare armonizat
prezentele Cerine i se aplic n scopul
conformitii cu cerinele legale n ceea
definirii conformitii cu cerinele n
ce privete compoziia. ceea ce privete compoziia.
Capitolul II. Dispoziii generale. Pct. Parial Standardul FIL Ministerul Din momentul
Art. 4. (1) Pentru lapte i produse lactate 6. Pentru evaluarea senzorial a laptelui compatibil 99C:1997 este Agriculturii i intrrii n vigoare
altele dect untul destinat depozitrii i produselor lactate, altele dect untul substituit cu Industriei a actului naional
publice, metoda de referin care trebuie destinat depozitrii publice, ca metod standardele SM ISO Alimentare armonizat
de referin se folosete fie standardele 22935-1:2015, SM
folosit de ctre statele membre pentru
SM ISO 22935-1:2015, SM ISO 22935- ISO 22935-2:2015,
evaluarea senzorial este fie standardul 2:2015, SM ISO 22935-3:2015, fie alte SM ISO 22935-
FIL 99C:1997, fie alte metode metode comparabile. 3:2015. Standardele
comparabile pe care acestea le notific Pct. 7. Pentru verificarea performanei FIL nu sunt aplicate pe
evaluatorilor i a preciziei rezultatelor n teritoriul Republicii
Comisiei.
analizele senzoriale se aplic procedurile Moldova.
descrise n anexa nr. 3 la prezentele
Procedurile descrise n anexa III se Cerine.
aplic n vederea verificrii performanei
evaluatorilor i a preciziei rezultatelor n
analizele senzoriale.

Art. 4. (2) Pentru untul destinat 8. Pentru untul destinat depozitrii Agriculturii i intrrii n vigoare
depozitrii publice, procedurile descrise publice, procedurile descrise n anexa nr. Industriei a actului naional
n anexa III se aplic n vederea 3 la prezentele Cerine se aplic n Alimentare armonizat
vederea verificrii performanei
verificrii performanei evaluatorilor i a
evaluatorilor i a acurateii rezultatelor
acurateii rezultatelor n analizele n analizele senzoriale.
senzoriale. Pct. 9. Procedura prevzut n anexa nr.
4 la prezentele Cerine se aplic ca
Procedura prevzut n anexa IV se metod de referin pentru evaluarea
aplic ca metod de referin pentru senzorial.
evaluarea senzorial.

Art. 5. (1) Metoda de analiz prevzut 10. Metoda de analiz prevzut n Agriculturii i intrrii n vigoare
n anexa V se folosete ca metod de anexa nr. 5 la prezentele Cerine se Industriei a actului naional
referin pentru determinarea folosete ca metod de referin pentru Alimentare armonizat
determinarea coninutului de trigliceride
coninutului de trigliceride ale acidului
ale acidului enantic n unt, ulei de unt i
enantic n unt, ulei de unt i smntn. smntn.
n anexa VI se folosete ca metod de anexa nr. 6 la prezentele Cerine se Industriei a actului naional
referin pentru determinarea vanilinei n folosete ca metod de referin pentru Alimentare armonizat
determinarea vanilinei n untul
untul concentrat, unt i smntn.
concentrat, unt i smntn.
n anexa VII se folosete ca metod de anexa nr. 7 la prezentele Cerine se Industriei a actului naional
determinarea coninutului de etil ester al
coninutului de etil ester al acidului beta-
acidului beta-apo-8'-carotenic n untul
apo-8' carotenic n untul concentrat i n concentrat i n unt.
unt.

n anexa VIII se folosete ca metod de anexa nr. 8 la prezentele Cerine se Industriei a actului naional
determinarea coninutului de -sitosterol
coninutului de -sitosterol i
i stigmasterol n unt i n untul
stigmasterol n unt i n untul concentrat. concentrat.
Capitolul II. Dispoziii generale. Pct. Parial Sintagma n Ministerul Din momentul
Art. 5. (5) Untul concentrat, untul i 14. Untul concentrat, untul i smntna compatibil conformitate cu Agriculturii i intrrii n vigoare
smntna se consider a fi marcate n se consider a fi marcate n cazul n care normele comunitare Industriei a actului naional
conformitate cu normele comunitare rezultatele obinute sunt conforme cu relevante nu a fost Alimentare armonizat
specificaiile prevzute la pct. 12 i 13 transpus n actul
relevante, n cazul n care rezultatele
din anexa nr. 5 la prezentele Cerine, pct. naional, deoarece sunt
obinute sunt conforme cu specificaiile 8 din anexele nr. 6 i 7 la prezentele prevederi UE cu
prevzute la punctele 10 i 11 din Cerine i pct. 12 din anexa nr. 8 la caracter opional.
anexa V i punctul 8 din anexele VI, VII prezentele Cerine.
i VIII.

Art. 6. (1) Metoda de referin pentru 15. Metoda de referin prevzut n Agriculturii i intrrii n vigoare
analiza prevzut n anexa IX se anexa nr. 9 la prezentele Cerine asigur Industriei a actului naional
folosete pentru a se asigura faptul c faptul c, brnza produs numai din lapte Alimentare armonizat
de oaie, din lapte de capr sau din lapte
brnza produs numai din lapte de oaie,
de bivoli sau dintr-un amestec de lapte
din lapte de capr sau din lapte de de oaie, capr i bivoli nu conine
bivoli sau dintr-un amestec de lapte de cazein din lapte de vac.
oaie, capr i bivoli nu conine cazein Pct. 16. Se consider c este prezent
din lapte de vac. cazeina din lapte de vac n cazurile n
care coninutul de cazein din lapte de
Se consider c este prezent cazeina din vac al probei analizate este egal sau mai
lapte de vac n cazurile n care mare dect coninutul probei de referin
coninnd 1 % lapte de vac n
coninutul de cazein din lapte de vac al
conformitate cu anexa nr. 9 la prezentele
probei analizate este egal cu sau mai Cerine.
mare dect coninutul probei de referin
coninnd 1 % lapte de vac n
conformitate cu anexa IX.

Art. 6. (2) Metodele de rutin pentru 17. Metodele de rutin pentru detectarea Agriculturii i intrrii n vigoare
cazeinei din laptele de vac n brnzeturi Industriei a actului naional
detectarea cazeinei din laptele de vac n prevzute la pct. 15 i 16 pot fi folosite Alimentare armonizat
brnzeturi prevzute la alineatul (1) pot cu condiia c:
fi folosite cu condiia ca: a) limita de detecie s fie de
maximum 0,5 %
b) s nu existe rezultate fals pozitive;
(a) limita de detecie s fie de
c) cazeina din lapte de vac s poat
maximum 0,5 %; i fi detectat cu sensibilitatea
necesar chiar i dup perioade
(b) s nu existe rezultate fals pozitive; lungi de maturare, cum este cazul
i n condiii obinuite de
comercializare.
(c) cazeina din lapte de vac s poat n cazul n care niciuna dintre cerinele
fi detectat cu sensibilitatea menionate mai sus nu este ndeplinit,
necesar chiar i dup perioade se folosesc metodele de referin
prevzute n anexele nr. 9 la prezentele
lungi de maturare, cum este cazul
Cerine.
n condiii obinuite de
comercializare.
n cazul n care niciuna dintre cerinele

menionate mai sus nu este ndeplinit,
se folosesc metodele de referin
prevzute n anexa IX.

Art. 7. Bacteriile coliforme n unt, lapte 18. Detectarea bacteriilor coliforme n Agriculturii i intrrii n vigoare
praf degresat, cazein i cazeinai se unt, lapte praf degresat, cazein i Industriei a actului naional
detecteaz n conformitate cu metoda de cazeinai se efectueaz n conformitate Alimentare armonizat
cu metoda de referin prevzut n
referin prevzut la anexa X.
anexa nr. 10 la prezentele Cerine.
Art. 8. Coninutul de lactoz al 19. Determinarea coninutului de lactoz Agriculturii i intrrii n vigoare
produselor care intr sub incidena al produselor care intr sub incidena Industriei a actului naional
codului NC 2309 se determin n codului 2309 al Nomenclaturii Alimentare armonizat
combinate a mrfurilor se efectueaz n
conformitate cu metoda de referin
prevzut n anexa XI. prevzut n anexa nr. 11 la prezentele
Cerine.
Art. 9. (1) Zerul nchegat n laptele praf 20. Detectarea zerului nchegat n Agriculturii i intrrii n vigoare
degresat destinat depozitrii publice se laptele praf degresat se efectueaz n Industriei a actului naional
detecteaz n conformitate cu metoda de conformitate cu metoda de referin Alimentare armonizat
prevzut n anexa nr. 12 la prezentele
referin prevzut n anexa XII.
Cerine.
Art. 9. (2) Zerul nchegat n laptele praf 21. Zerul nchegat n laptele praf Agriculturii i intrrii n vigoare
degresat i n amestecurile destinate degresat i n amestecurile destinate Industriei a actului naional
utilizrii ca furaje pentru animale se utilizrii ca furaje pentru animale se Alimentare armonizat
detecteaz n conformitate cu metoda de
detecteaz n conformitate cu metoda de
referin prevzut n anexa nr. 12 la
referin prevzut n anexa XII. n cazul prezentele Cerine. n cazul detectrii
detectrii zerului nchegat se aplic zerului nchegat se aplic anexa nr. 13 la
anexa XIII. prezentele Cerine.

Art. 10. Zara n laptele praf degresat se 22. Detectarea zarei n laptele praf Agriculturii i intrrii n vigoare
detecteaz n conformitate cu metoda de degresat se efectueaz n conformitate cu Industriei a actului naional
referin prevzut n anexa XIV. metoda de referin prevzut n anexa Alimentare armonizat
nr. 14 la prezentele Cerine.
Art. 11. Reziduurile antimicrobiotice n 23. Detectarea reziduurilor Agriculturii i intrrii n vigoare
laptele praf degresat se detecteaz n antimicrobiotice n laptele praf degresat Industriei a actului naional
conformitate cu metoda de referin se efectueaz n conformitate cu metoda Alimentare armonizat
de referin prevzut n anexa nr. 15 la
prevzut n anexa XV.
prezentele Cerine.
Art. 12. Coninutul de lapte praf 24. Determinarea coninutului de lapte Agriculturii i intrrii n vigoare
degresat n furajele combinate se praf degresat n furajele combinate se Industriei a actului naional
detecteaz n conformitate cu metoda de efectueaz n conformitate cu metoda de Alimentare armonizat
referin prevzut n anexa nr. 16 la
referin prevzut n anexa XVI.
prezentele Cerine.

Art. 13. Amidonul n laptele praf 25. Detectarea amidonului n laptele Agriculturii i intrrii n vigoare
degresat, n laptele praf denaturat i n praf degresat, n laptele praf denaturat i Industriei a actului naional
furajele combinate se detecteaz n n furajele combinate se efectueaz n Alimentare armonizat
prevzut n anexa XVII. Cerine.
Art. 14. Coninutul umed n smntna 26. Determinarea coninutului umed n Agriculturii i intrrii n vigoare
deshidratat se determin n smntna deshidratat se efectueaz n Industriei a actului naional
conformitate cu metoda de referin conformitate cu metoda de referin Alimentare armonizat
prevzut n anexa XVIII.
Cerine.
Art. 15. Coninutul umed n zara praf 27. Determinarea coninutului umed al Agriculturii i intrrii n vigoare
acid destinat utilizrii n furaje se zarei praf acide destinate utilizrii n Industriei a actului naional
furaje se efectueaz n conformitate cu Alimentare armonizat
metoda de referin prevzut n anexa
determin n conformitate cu metoda de nr. 19 la prezentele Cerine.
referin prevzut n anexa XIX.

Art. 16. Puritatea grsimilor din lapte se 28. Determinarea puritii grsimilor din Agriculturii i intrrii n vigoare
determin n conformitate cu metoda de lapte se efectueaz n conformitate cu Industriei a actului naional
referin prevzut n anexa XX. metoda de referin prevzut n anexa Alimentare armonizat
nr. 20 la prezentele Cerine.
Capitolul II. Dispoziii generale. Pct. Parial n actul naionat este Ministerul Din momentul
Art. 17. Analizele se realizeaz n 29. Analizele se realizeaz n laboratoare compatibil stipulate standardul Agriculturii i intrrii n vigoare
laboratoare n care exist un sistem acreditate conform SM SR EN ISO/CEI conform cruia sunt Industriei a actului naional
analitic de asigurare a calitii, inclusiv 17025 n care exist un sistem analitic de acreditate Alimentare armonizat
asigurare a calitii, inclusiv proceduri laboratoarele. Avnd n
proceduri interne de control al calitii.
interne de control al calitii. vedere c la pct. 1 este
Laboratoarele neacreditate particip la Pct. 30. n laborator trebuie s fie stipulat c toate
programe de testare a competenei cel disponibil pentru consultare o descriere laboratoarele trebuie s
puin o dat pe an i rezultatele acestora detaliat a sistemelor utilizate de fie acreditate,
nu trebuie s aib o deviaie mai mare de asigurare a calitii. prevederile privind
2 R (deviaia standard a Pct. 31. Laboratoarele acreditate n cerinele pentru
reproductibilitii aferente metodei de conformitate cu standardele laboratoarele
internaionale de referin adoptate ca neacreditate, nu sunt
referin) de la valoarea agreat. O
standarde moldovene asigur transpuse n actul
descriere detaliat a sistemelor utilizate participarea la testele de competen naional. Ultimul
trebuie s fie disponibil pentru dup cum este stabilit n standardul de alineat este redactat, n
consultare n laborator. referin. conformitate cu
legislaia naional
Laboratoarele acreditate n conformitate privind acreditarea
cu standardele prevzute la articolul 12 laboratoarelor.
din Regulamentul (CE) nr. 882/2004 al
Parlamentului European i al Consiliului
din 29 aprilie 2004 privind controalele
oficiale efectuate pentru a asigura
verificarea conformitii cu legislaia
privind hrana pentru animale i
produsele alimentare i cu normele de
sntate animal i de bunstare a
animalelor sunt scutite de obligaia de a
susine teste de competen.
Capitolul II. Dispoziii generale. Pct. Parial Standardul ISO Ministerul Din momentul
Art. 18. (1) Prelevarea de probe se 32. Prelevarea de probe se realizeaz n compatibil 707FIL 50, Lapte i Agriculturii i intrrii n vigoare
realizeaz n conformitate cu conformitate cu prezentele Cerine produse lactate Industriei a actului naional
regulamentul relevant pentru produsul n pentru produsul n cauz. n cazul n Orientri privind Alimentare armonizat
care nu exist dispoziii privind prelevarea de probe
cauz. n cazul n care nu exist
prelevarea de probe, se folosete este substituit cu
dispoziii privind prelevarea de probe, se standardul SM SR EN ISO 707:2012 standardul naional
folosete dispoziia menionat n ISO Lapte i produse lactate. Ghid pentru SM SR EN ISO
707FIL 50, Lapte i produse lactate eantionare. 707:2012 Lapte i
Orientri privind prelevarea de probe. produse lactate. Ghid
pentru eantionare
Capitolul II. Dispoziii generale. Pct. Parial n actul naional este Ministerul Din momentul
Art. 18. (2) Rapoartele de laborator 33. Rapoartele de ncercri emise de compatibil stipulat standardul ce Agriculturii i intrrii n vigoare
privind rezultatele analizei trebuie s laborator privind rezultatele analizei ofer informaii Industriei a actului naional
conin suficiente informaii pentru a se trebuie s conin suficiente informaii privind rapoartele de Alimentare armonizat
conform pct. 5.10 din standardul SM SR ncercri.
putea realiza o evaluare a rezultatelor n
EN ISO/CEI 17025 pentru a se putea
conformitate cu anexa II i anexa XXI. efectua o evaluare a rezultatelor n
conformitate cu prevederile anexei nr. 2
i 21 la prezentele Cerine.
Art. 18. (3) Pentru analizele obligatorii neaplicabile (pentru a
conform regulilor comunitare se nu crea confuzii).
preleveaz probe martor.

Art. 18. (4) Procedura descris n 36. n cazul n care rezultatele unei Agriculturii i intrrii n vigoare
anexa XXI se folosete n cazurile n analize nu sunt acceptate de ctre Industriei a actului naional
care rezultatele unei analize nu sunt operator, se folosete procedura descris Alimentare armonizat
n anexa nr. 21 la prezentele Cerine.
acceptate de ctre operator.
Capitolul II. Dispoziii generale. Pct. Parial n actul naional a fost Ministerul Din momentul
Art. 18. (5) n cazul n care 37. n cazul n care productorul poate compatibil concretizat cine poart Agriculturii i intrrii n vigoare
productorul poate dovedi, n termen de dovedi, n termen de cinci zile lucrtoare rspundere pentru Industriei a actului naional
cinci zile lucrtoare de la prelevarea de la prelevarea probelor, c procedura realizarea incorect a Alimentare armonizat
de prelevare a probelor nu a fost probelor. Avnd n
probelor, c procedura de prelevare a
realizat corect, laboratorul i asum vedere c cheltuielile
probelor nu a fost realizat corect, responsabilitatea pentru repetarea vor fi suportate de
aceasta trebuie repetat, n msura n acesteia. agenii economici,
care acest lucru este posibil. n cazul n acetia nu trebuie s
care prelevarea probelor nu poate fi plteasc pentru
repetat, lotul trebuie acceptat. greelile
laboratoarelor.
Totodat, ultima fraz
nu este preluat, pentru
a nu crea situaii de
admitere pe pia a
unor produse
neconforme.
Art. 19a. Notificrile prevzute la neaplicabile
articolul 2, articolul 4 alineatul (1) i n
anexa III punctul C se efectueaz n
conformitate cu Regulamentul (CE) nr.
792/2009 al Comisiei.
Art. 20. Regulamentul (CE) neaplicabile
nr. 213/2001 se abrog.
Trimiterile la regulamentul abrogat se

interpreteaz ca trimiteri la prezentul
regulament i se citesc n conformitate
cu tabelul de coresponden din
anexa XXII.
n Hotrrea Guvernului. Pct. 2. Parial Conform prevederilor Ministerul Din momentul

Art. 21. Prezentul regulament intr n Prezenta Hotrre intr n vigoare dup compatibil actului naional, s-a Agriculturii i intrrii n vigoare
vigoare n a treia zi de la data publicrii 24 luni din data publicrii n Monitorul acordat un termen de Industriei a actului naional
n Jurnalul Oficial al Uniunii Europene. Oficial al Republicii Moldova. 24 de luni, pentru ca Alimentare armonizat
agenii economici s
dispun de timp
Se aplic de la 31 martie 2008.
suficient pentru a se
conforma noilor
Prezentul regulament este obligatoriu n cerine.
toate elementele sale i se aplic direct Alineatele doi i trei
n toate statele membre. sunt prevederi UE
neaplicabile.
Anexa nr. 1 Parial n actul naional nu Ministerul Din momentul
Anexa I (art. 1) Lista metodelor de referin compatibil sunt indicate unele Agriculturii i intrrii n vigoare
Abrevieri: abrevieri (MS, FIL, Industriei a actului naional
Lista metodelor de referin Min. = minimum IUPAC, ADPI), Alimentare armonizat
Max. = maximum deoarece sunt
Anex = anexa la regulamentul prevederi UE
Index: Min. = minimum, Max. = menionat anterior neaplicabile. Totodat,
maximum, Anex = anexa la SNF = substane solide negrase s-a completat cu
regulamentul menionat anterior, SNF = PV = valoarea peroxidului abrevierea SMP care se
A = aspect regsete n tabel, dar
substane solide negrase, PV = valoarea
F = miros nu este prezentat
peroxidului, A = aspect, F = miros, C = C = consisten explicaia acesteia.
consisten, TBC = numr total de TBC = numr total de bacterii
bacterii, Therm = numr de bacterii Therm = numr de bacterii termofile
termofile, MS = stat membru, FIL = SMP = furaje combinate i i lapte praf
Federaia Internaional a Laptelui, ISO degresat
= Organizaia Internaional de SCM = lapte condensate ndulcit
EMC = lapte sau smntn evaporate
Standardizare, IUPAC = Uniunea
ISO = Organizaia Internaional de
Internaional de Chimie Pur i Standardizare
Aplicat, ADPI = Institutul American
pentru Produse Lactate, SCM = lapte
condensat ndulcit, EMC = lapte sau
smntn evaporate.
Anexa nr. 1, Partea A [2] Parial A fost exclus colonia Ministerul Din momentul
Anexa I (art. 1), Partea A [1] compatibil Regulamentul Agriculturii i intrrii n vigoare
Comisiei, deoarece Industriei a actului naional
aceasta este o Alimentare armonizat
prevedere UE
neaplicabil.
Standardele prevzute
n colonia Metoda de
referin sunt
substituite cu
standardele naionale.
Unele produsele de
acelai tip (unt fr
sare, unt srat, cazeina
acid, cazeina cheag,
cazeinai) au fost
comasate, fiind
stabilite limitele. De
asemenea, la finele
tabelului a fost plasat
o Not care explic
sensul limitelor
stabilite n a treia
coloni.
Anexa nr. 1, Partea B [4] Parial A fost exclus colonia Ministerul Din momentul
Anexa I (art. 1), Partea B [3] compatibil Regulamentul Agriculturii i intrrii n vigoare
Comisiei, deoarece Industriei a actului naional
aceasta este o Alimentare armonizat
prevedere UE
neaplicabil.
Au fost perfectate
denumirile produselor
enumerate n a doua
coloni, conform
Legii nr. 172 din
25.07.2014 privind
aprobarea
Nomenclaturii
combinate a
mrfurilor.
n colonia a patra a
fost exclus sintagma
specificate mai apoi,
dup caz, n
Regulamentul (CEE)
nr. 3846/87 al Comisiei
(JO L 366, 24.12.1987,
p. 1), partea 9 din
nomenclatura pentru
export sau
Regulamentul (CE)
nr. 2535/2001
(JO L 341, 22.12.2001,
p. 29), deoarece e o
prevedere UE
neaplicabil.
Standardele prevzute
n colonia Metoda de
referin, ct i n
Notele 1 i 3 sunt
substituite cu
standardele naionale.
Notele 6, 7 i 8 au fost
excluse, deoarece sunt
prevederi UE
neaplicabile.
Anexa nr. 2 Evaluarea conformitii Compatibil - Ministerul Din momentul
Anexa II (art. 3) Evaluarea unui lot cu limita legal, pct. 1. Agriculturii i intrrii n vigoare
conformitii unui lot cu limita legal, Principiu Industriei a actului naional
pct. 1. Principiu n cazurile n care este stabilit o norm Alimentare armonizat
de reglementare care prevede proceduri
detaliate de prelevare a probelor, aceste
n cazurile n care legislaia relevant
proceduri trebuie utilizate. n toate
prevede proceduri detaliate de prelevare
celelalte cazuri, se utilizeaz o prob din
a probelor, aceste proceduri trebuie
cel puin 3 uniti de prob luate la
utilizate. n toate celelalte cazuri, se
ntmplare din lotul supus controlului.
utilizeaz o prob din cel puin 3 uniti
Se poate prepara o prob compozit.
de prob luate la ntmplare din lotul
supus controlului. Se poate prepara o Rezultatul obinut este comparat cu
prob compozit. Rezultatul obinut este limitele legale prin calcularea
comparat cu limitele legale prin intervalului de ncredere de 95 % pe
calcularea intervalului de ncredere de baza a 2 x deviaia standard, unde
95 % pe baza a 2 x deviaia standard, deviaia standard relevant depinde:
unde deviaia standard relevant depinde 1) de validarea metodei n cadrul
1. de validarea metodei n cadrul colaborrii internaionale cu valorile
colaborrii internaionale cu valorile pentru r i R; sau
pentru r i R sau 2. n cazul validrii 2) n cazul validrii interne, de
interne, de calcularea reproductibilitii calcularea reproductibilitii interne.
interne. Acest interval de ncredere este Acest interval de ncredere este apoi
apoi comparat cu incertitudinea de comparat cu incertitudinea de
msurare a rezultatului. msurare a rezultatului.
Anexa II (art. 3) Evaluarea Anexa nr. 2 Evaluarea conformitii Compatibil - Ministerul Din momentul
conformitii unui lot cu limita legal, unui lot cu limita legal, pct. 2. Agriculturii i intrrii n vigoare
pct. 2. Metoda este validat n cadrul n cazul n care metoda este validat n Industriei a actului naional
colaborrii internaionale cadrul colaborrii internaionale, Alimentare armonizat
n acest caz, deviaia standard a deviaia standard a repetabilitii r i
repetabilitii r i deviaia standard a deviaia standard a reproductibilitii
reproductibilitii R au fost stabilite i R au fost stabilite i laboratorul poate
laboratorul poate demonstra demonstra conformitatea cu
conformitatea cu caracteristicile de caracteristicile de performan ale
performan ale metodei validate. metodei validate.
A se calcula media aritmetic A se calcula media aritmetic x din n
msurtori repetate.
A se calcula incertitudinea extins (k =
din n msurtori repetate. 2) din x pe baza
A se calcula incertitudinea extins (k =
2) din

U=2 2R
n1 2
n r

pe baza n cazul n care rezultatul final x al
msurtorii se calculeaz utiliznd o
formul de
forma x = y 1 + y 2, x = y 1 y 2, x = y 1
n cazul n care rezultatul final x al y 2 sau x = y 1 / y 2, se respect
msurtorii se calculeaz utiliznd o procedurile obinuite de combinare a
formul de deviaiilor standard n astfel de cazuri.
forma x = y 1 + y 2, x = y 1 y 2, x = y 1 y Se apreciaz c lotul nu respect limita
2 sau x = y 1 / y 2, se respect procedurile legal superioar UL n cazul n care x
obinuite de combinare a deviaiilor U > UL;
standard n astfel de cazuri. n caz contrar, se apreciaz c lotul
Se apreciaz c lotul nu respect limita respect UL.
legal superioar UL n cazul n care Se apreciaz c lotul nu respect limita
legal inferioar LL n cazul n care x+
n caz contrar, se apreciaz c lotul U < LL;
respect UL. n caz contrar, se apreciaz c lotul
Se apreciaz c lotul nu respect limita respect LL.
legal inferioar LL n cazul n care
;
n caz contrar, se apreciaz c lotul
respect LL.
Anexa II (art. 3) Evaluarea Anexa nr. 2 Evaluarea conformitii Compatibil - Ministerul Din momentul
conformitii unui lot cu limita legal, unui lot cu limita legal, pct. 3. Agriculturii i intrrii n vigoare
pct. 3. Validarea intern asociat cu n cazurile n care se folosesc metode Industriei a actului naional
calcularea deviaiei standard a care nu sunt specificate n prezentele Alimentare armonizat
reproductibilitii interne Cerine i nu sunt stabilite msuri de
n cazurile n care se folosesc metode precizie, se realizeaz o validare intern.
care nu sunt specificate n prezentul Se utilizeaz deviaia standard a
regulament i nu sunt stabilite msuri de repetabilitii interne sir i deviaia
precizie, se realizeaz o validare intern. standard a reproductibilitii interne siR n
Se utilizeaz deviaia standard a locul r i R , respectiv, n formulele de
repetabilitii interne sir i deviaia calcul ale incertitudinii extinse U.
standard a reproductibilitii interne Regulile de luare a unei decizii sunt
siR n locul r i R , respectiv, n aceleai ca la punctul 1 din prezenta
formulele de calcul ale incertitudinii anex. Cu toate acestea, n cazul n care
extinse U. se consider c lotul nu respect limita
Regulile de luare a unei decizii sunt legal, msurtorile se repet folosind
aceleai ca la punctul 1. Cu toate metoda specificat n prezentele Cerine,
acestea, n cazul n care se consider c decizia urmnd s fie luat n
lotul nu respect limita legal, conformitate cu punctul 1.
msurtorile se repet folosind metoda
specificat n prezentul regulament,
decizia urmnd s fie luat n
conformitate cu punctul 1.
Anexa nr. 3 Parial Actul naional nu Ministerul Din momentul
Anexa III (art. 4) Evaluarea evaluatorilor i fiabilitatea compatibil prevede specificaiile Agriculturii i intrrii n vigoare
rezultatelor n analizele senzoriale indicate la alineatul 4 Industriei a actului naional
Evaluarea evaluatorilor i fiabilitatea n cazul n care se folosesc metode de litera B i cele de la Alimentare armonizat
rezultatelor n analizele senzoriale punctare se aplic urmtoarele litera C, deoarece sunt
proceduri. prevederi UE
1. Determinarea indicelui de neaplicabile.
n cazul n care se folosesc metode de
repetabilitate
punctare se aplic urmtoarele proceduri
Cel puin 10 probe sunt analizate de
(Standard FIL 99C:1997).
un evaluator ca duplicat prob martor
A. Determinarea indicelui de
ntr-o perioad de 12 luni. Aceast
repetabilitate
procedur se realizeaz de obicei n
Cel puin 10 probe sunt analizate de un cteva edine. Rezultatele pentru
evaluator ca duplicat prob martor ntr-o caracteristicile produsului individual
perioad de 12 luni. Aceast procedur sunt evaluate utilizndu-se formula:
se realizeaz de obicei n cteva edine. w1 = 1 + (((xi1 xi2)2 /n)
Rezultatele pentru caracteristicile unde:
produsului individual sunt evaluate w1 - indice de repetabilitate;
utilizndu-se formula: xi1 - punctajul pentru prima evaluare
a probei xi;
xi2 - punctajul pentru a doua evaluare
a probei xi;
unde:
wI n - numrul de probe.
: indice de repetabilitate;
Probele care urmeaz a fi evaluate
xi1 : punctajul pentru prima evaluare a trebuie s reflecte o gam larg de
probei xi; calitate. w1 nu trebuie s depeasc 1,5
xi2 : punctajul pentru a doua evaluare a (pe o scar de 5 puncte).
probei xi; 2. Determinarea indicelui de
deviaie
n : numrul de probe. Acest indice trebuie utilizat pentru a se
Probele care urmeaz a fi evaluate verifica n cazul n care un evaluator
trebuie s reflecte o gam larg de utilizeaz aceeai scal pentru evaluarea
calitate. w1 nu trebuie s depeasc 1,5 calitativ ca i un grup de evaluatori
(pe o scar de 5 puncte). experimentai. Punctajul obinut de
B. Determinarea indicelui de evaluator este comparat cu media
deviaie punctajelor obinute de grupul de
evaluatori.
Acest indice trebuie utilizat pentru a se
Pentru evaluarea rezultatelor se
verifica n cazul n care un evaluator
utilizeaz urmtoarea formul:
utilizeaz aceeai scal pentru evaluarea
D1 = 1 + (|(xi1 xi1)2 + (xi2 xi2)2|)/(2n)
calitativ ca i un grup de evaluatori
unde:
experimentai. Punctajul obinut de
xi1; xi2 - a se vedea punctul 1;
evaluator este comparat cu media
xi1; xi2 - punctajul mediu al grupului
punctajelor obinute de grupul de
de evaluator pentru prima, respective a
evaluatori.
doua evaluare a probei xi;
Pentru evaluarea rezultatelor se n - numrul de probe (cel puin 10
utilizeaz urmtoarea formul: per 12 luni).
Probele care urmeaz a fi evaluate
trebuie s reflecte o gam larg de
calitate. D1 nu trebuie s depeasc 1,5
unde: (pe o scar de 5 puncte).
xi1; xi2 : a se vedea punctul A; n cazul n care se constat c evaluatorii
individuali depesc limita de 1,5 pentru
: punctajul mediu al grupului de
; evaluatori pentru prima, respectiv indicii de repetabilitate sau de deviaie,
expertul (experii) autoritii publice
a doua evaluare a probei x ;
i
trebuie s efectueze una sau mai multe
verificri aleatorii de reevaluare
n : numrul de probe (cel puin zece asupra probelor clasificate de acetia n
per 12 luni). urmtoarele cteva sptmni sau s
Probele care urmeaz a fi evaluate efectueze una sau mai multe verificri
trebuie s reflecte o gam larg de n paralel cu evaluatorii respectivi.
calitate. DI nu trebuie s depeasc 1,5 Este necesar o monitorizare atent n
(pe o scar de 5 puncte). vederea lurii unei decizii de meninere a
serviciilor acestora. Constatrile trebuie
Statele membre notific orice dificulti s fie atestate n mod corespunztor,
ntmpinate n aplicarea prezentei fiind reinute ca dovad n aciunile
proceduri. ulterioare.
n cazul n care se constat c evaluatorii
individuali depesc limita de 1,5 pentru
indicii de repetabilitate sau de deviaie,
expertul (experii) autoritii publice
trebuie s efectueze una sau mai multe
verificri aleatorii de reevaluare
asupra probelor clasificate de acetia n
urmtoarele cteva sptmni sau s
efectueze una sau mai multe verificri
n paralel cu evaluatorii respectivi.
Este necesar o monitorizare atent n
vederea lurii unei decizii de meninere
a serviciilor acestora. Constatrile
trebuie s fie atestate n mod
corespunztor, fiind reinute ca dovad
n aciunile ulterioare.
C. Compararea rezultatelor obinute
n regiuni diferite ale statelor membre
i n diferite state membre
Dup caz, se organizeaz un test cel
puin o dat pe an pentru a compara
rezultatele obinute de evaluatorii din
diferite regiuni. n cazul n care se
constat diferene semnificative, se iau
msurile necesare pentru a se identifica
motivele i pentru a se obine rezultate
comparabile.
Statele membre pot organiza teste pentru
a compara rezultatele obinute de
evaluatorii lor cu cele obinute de
evaluatori ai statelor membre nvecinate.
Diferenele semnificative duc la
investigaii detaliate n scopul de a
obine rezultate comparabile.
Statele membre notific Comisiei
rezultatele acestor comparaii.
Anexa nr. 4 Evaluarea senzorial a Parial Alineatul doi conine Ministerul Din momentul
Anexa IV (art. 4) Evaluarea senzorial untului, pct. 1. Domeniul de aplicare compatibil prevederi UE Agriculturii i intrrii n vigoare
a untului, pct. 1. Domeniul de aplicare Scopul procedurii de evaluare senzorial neaplicabile. Industriei a actului naional
a untului este de a furniza o metod Alimentare armonizat
Scopul acestei proceduri de evaluare uniform aplicabil pe teritoriul
republicii.
senzorial a untului este acela de a
furniza o metod uniform aplicabil n
toate statele membre.
A se consulta actualul standard

internaional FIL pentru lapte i produse
lactate, FIL 99 prile 1, 2, 3 privind
Evaluarea senzorial, pentru detalii
suplimentare.
Anexa nr. 4 Evaluarea senzorial a Compatibil - Ministerul Din momentul

Anexa IV (art. 4) Evaluarea senzorial untului, pct. 2. Definiii Agriculturii i intrrii n vigoare
a untului, pct. 2. Definiii Evaluarea senzorial - examinarea Industriei a actului naional
caracteristicilor unui produs cu ajutorul Alimentare armonizat
Evaluare senzorial nseamn organelor de sim.
Panel - un grup de evaluatori selectai
examinarea caracteristicilor unui produs
care, pe perioada evalurii, lucreaz
cu ajutorul organelor de sim. independent, fr a comunica ntre ei i
fr a se influena reciproc.
Panel nseamn un grup de evaluatori Evaluatorul - o persoan aleas pentru
selectai care, pe perioada evalurii, capacitatea sa de a efectua un test
lucreaz independent, fr a comunica senzorial. Acest tip de evaluator poate
ntre ei i fr a se influena reciproc. avea experien limitat.
Evaluatorul expert - o persoan cu un
Evaluatorul este o persoan aleas grad nalt de sensibilitate senzorial i cu
experien n metodologia senzorial,
pentru capacitatea sa de a efectua un test
care este capabil s efectueze evaluri
senzorial. Acest tip de evaluator poate coerente i sigure ale unor produse
avea experien limitat. variate. Acest tip de evaluator dispune pe
termen lung de o bun memorie
Evaluatorul expert este o persoan cu senzorial.
un grad nalt de sensibilitate senzorial Punctare - evaluarea senzorial realizat
i cu experien n metodologia de un panel, folosindu-se o scal
numeric. Trebuie s se foloseasc un
senzorial, care este capabil s
nomenclator al defectelor.
efectueze evaluri coerente i sigure ale Clasificare - clasificarea calitativ
unor produse variate. Acest tip de realizat pe baza punctrii.
evaluator dispune pe termen lung de o Documente de control - documentele
bun memorie senzorial. folosite pentru nregistrarea punctajelor
individuale pentru fiecare caracteristic
i a clasificrii finale a produsului (acest
Punctare nseamn evaluarea document poate fi folosit i pentru
senzorial realizat de un panel, nregistrarea compoziiei chimice).
folosindu-se o scal numeric. Trebuie
s se foloseasc un nomenclator al
defectelor.
Clasificare nseamn clasificarea

calitativ realizat pe baza punctrii.
Documente de control: documentele

folosite pentru nregistrarea punctajelor
individuale pentru fiecare caracteristic
i a clasificrii finale a produsului.
(Acest document poate fi folosit i
pentru nregistrarea compoziiei
chimice.)
Anexa nr. 4 Evaluarea senzorial a Parial Alineatul unu conine Ministerul Din momentul
Anexa IV (art. 4) Evaluarea senzorial untului, pct. 3. Camer de testare compatibil prevederi UE Agriculturii i intrrii n vigoare
a untului, pct. 3. Camer de testare Evaluatorii din camera de testare nu neaplicabile. Industriei a actului naional
trebuie s fie influenai de factori Alimentare armonizat
A se consulta ISO 8589 i ISO/DIS externi.
n camera de testare nu trebuie s existe
22935-2 FIL 99-2 punctul 7, pentru mai
mirosuri strine i trebuie s fie uor de
multe detalii. curat. Pereii trebuie s aib o culoare
deschis i nereflectant.
Sunt necesare msuri de precauie pentru Camera de testare i iluminarea acesteia
ca evaluatorii dintr-o camer de testare trebuie s fie de aa natur nct s nu
s nu fie influenai de factori externi. afecteze proprietile produsului care
urmeaz s fie punctat.
Camera trebuie dotat cu un sistem
n camera de testare nu trebuie s existe adecvat de control al temperaturii care s
mirosuri strine i trebuie s fie uor de permit pstrarea unei temperaturi
curat. Pereii trebuie s aib o culoare constante a untului. Untul trebuie s aib
o temperatur de 12 C (2 C) n
deschis i nereflectant.
momentul clasificrii.
Camera de testare i iluminarea acesteia
trebuie s fie de aa natur nct s nu
afecteze proprietile produsului care
urmeaz s fie punctat.
Camera trebuie dotat cu un sistem

adecvat de control al temperaturii care s
permit pstrarea unei temperaturi
constante a untului. Untul trebuie s aib
o temperatur de 12 C (2 C) n
momentul clasificrii.
Anexa nr. 4 Evaluarea senzorial a Parial Standardul ISO/DIS Ministerul Din momentul
Anexa IV (art. 4) Evaluarea senzorial untului, pct. 4. Selecia evaluatorilor compatibil 22935-1 este substituit Agriculturii i intrrii n vigoare
a untului, pct. 4. Selecia evaluatorilor Un evaluator trebuie s fie familiarizat cu standardul naional Industriei a actului naional
cu produsele din unt i s aib SM ISO 22935-1, Alimentare armonizat
Un evaluator trebuie s fie familiarizat competena necesar pentru a realiza o standardele FIL nu
cu produsele din unt i s aib gradare a sensibilitii senzoriale. sunt aplicate pe
competena necesar pentru a realiza o Competena evaluatorului este teritoriul Republicii
gradare a sensibilitii senzoriale. monitorizat de ctre autoritatea Moldova.
Competena evaluatorului este competent n mod regulat (cel puin o
monitorizat de ctre autoritatea dat pe an).
competent n mod regulat (cel puin o 1) Cerinele generale i testele de
dat pe an). selecie care trebuie aplicate naintea
utilizrii oficiale a unui nou
4.1. Se consult ISO/DIS 22935-1 FIL evaluator sunt specificate n SM ISO
99-1 punctul 4 (recrutarea) i punctul 5.1 22935-1.
pentru detalii privind cerinele generale Formarea profesional trebuie s fie
i testele de selecie care trebuie aplicate continu, iar edinele generale trebuie
naintea utilizrii oficiale a unui nou s aib loc n mod regulat. Formarea
evaluator. profesional a panelului se efectueaz
conform SM EN ISO 8586.
Este esenial ca formarea profesional s 2) Formarea iniial trebuie s acopere
fie continu, iar edinele generale urmtoarele:
trebuie s aib loc n mod regulat. A se a) teoria general i importana
consulta ISO 8586-1 pentru informaii practic a evalurii senzoriale;
privind formarea profesional a b) metodele, scalele i descrierea
panelului. percepiilor senzoriale;
4.2. Formarea iniial trebuie s acopere c) detectarea i recunoaterea
urmtoarele: caracteristicilor senzoriale i
termenilor senzoriali specifici;
- teoria general i importana practic a d) pregtire de baz n fabricarea
evalurii senzoriale; untului;
- metodele, scalele i descrierea e) referine i probe valide care s l
percepiilor senzoriale; ajute pe evaluator n identificarea
- detectarea i recunoaterea aromelor specifice i a intensitii
caracteristicilor senzoriale i termenilor aromei produsului.
senzoriali specifici;
- pregtire de baz n fabricarea untului;
- referine i probe validate care s l
ajute pe evaluator n identificarea
aromelor specifice i a intensitii
aromei produsului.
Anexa nr. 4 Evaluarea senzorial a Parial n actul naional nu Ministerul Din momentul
Anexa IV (art. 4) Evaluarea senzorial untului, pct. 5. Cerine pentru panel compatibil este inclus sintagma Agriculturii i intrrii n vigoare
a untului, pct. 5. Cerine pentru panel Numrul evaluatorilor din panel sau persoane Industriei a actului naional
trebuie s fie impar, numrul minim autorizate. Pe Alimentare armonizat
fiind de trei. Majoritatea acestora trebuie teritoriul Republicii
Numrul evaluatorilor din panel trebuie s fie angajai ai autoritii competente, Moldova nu sunt
s fie impar, numrul minim fiind de dar s nu fie angajate n industria de persoane autorizate
trei. Majoritatea acestora trebuie s fie prelucrare a laptelui. n panel pot fi pentru evaluarea
maxim doi experi neangajai ai senzorial a produselor
angajai ai autoritii competente sau
autoritii competente. lactate. De asemenea, a
persoane autorizate care nu sunt angajate nainte de evaluare, trebuie avui n fost inclus sintagma
n industria de prelucrare a laptelui. vedere mai muli factori pentru obinerea n panel pot fi maxim
unor performane optime ale subiecilor: doi experi neangajai
Conductorul panelului trebuie s 1) subiecii nu trebuie s sufere de ai autoritii
rspund pentru ntreaga procedur i boli care le-ar putea afecta competente, pentru a
poate participa n panel. performana. ntr-un asemenea caz, clarifica mai exact nr.
evaluatorul n cauz trebuie celor neangajai in
nainte de evaluare, trebuie avui n nlocuit n panel cu un alt industria de prelucrare
evaluator; a laptelui.
vedere mai muli factori pentru obinerea
2) subiecii trebuie s se prezinte n Alineatul doi a fost
unor performane optime ale subiecilor: mod punctual la evaluare i s exclus, deoarece se
dispun de suficient timp pentru repet la pct. 9.
- subiecii nu trebuie s sufere de boli realizarea evalurii;
care le-ar putea afecta performana. ntr- 3) subiecii nu trebuie s foloseasc
un asemenea caz, evaluatorul n cauz substane cu miros puternic cum ar
trebuie nlocuit n panel cu un alt fi parfum, loiune dup ras,
deodorant etc. i trebuie s evite
evaluator;
consumul de alimente cu arome
puternice (de exemplu, foarte
- subiecii trebuie s se prezinte n mod condimentate) etc.;
punctual la evaluare i s dispun de 4) subiecii nu au voie s fumeze, s
suficient timp pentru realizarea mnnce i s bea altceva dect
evalurii; ap cu o jumtate de or nainte de
evaluare.
- subiecii nu trebuie s foloseasc
substane cu miros puternic cum ar fi
parfum, loiune dup ras, deodorant etc.
i trebuie s evite consumul de alimente
cu arome puternice (de exemplu, foarte
condimentate) etc.;
- subiecii nu au voie s fumeze, s

mnnce i s bea altceva dect ap cu o
jumtate de or nainte de evaluare.

Anexa IV (art. 4) Evaluarea senzorial untului, pct. 6. Performana Agriculturii i intrrii n vigoare
a untului, pct. 6. Performana Toi evaluatorii trebuie s participe n Industriei a actului naional
mod regulat la panele de evaluare Alimentare armonizat
Toi evaluatorii trebuie s participe n senzorial pentru a-i pstra
competenele. Frecvena acestora
mod regulat la panele de evaluare
depinde de volumul i capacitatea de
senzorial pentru a-i pstra producie a untului i, n msura n care
competenele. Frecvena acestora acest lucru este posibil, trebuie s se
depinde de volumul i capacitatea de organizeze cel puin un panel pe lun.
producie a untului i, n msura n care Evaluatorii principali trebuie, de
acest lucru este posibil, trebuie s se asemenea, s participe la un numr de
organizeze cel puin un panel pe lun. panele n fiecare an i, n msura n care
acest lucru este posibil, cel puin o dat
pe trimestru.
Evaluatorii principali trebuie, de
asemenea, s participe la un numr de
panele n fiecare an i, n msura n care
acest lucru este posibil, cel puin o dat
pe trimestru.
Anexa nr. 4 Evaluarea senzorial a Parial n actul naional nu Ministerul Din momentul
Anexa IV (art. 4) Evaluarea senzorial untului, pct. 7. Prelevarea i compatibil este inclus sintagma Agriculturii i intrrii n vigoare
prepararea probei referin: n ISO/DIS Industriei a actului naional
a untului, pct. 7. Prelevarea i Este esenial ca identitatea probelor s 22935-2 FIL 99-2 Alimentare armonizat
prepararea probei fie ascuns n timpul evalurii, astfel temperatura de
nct s se evite orice posibilitate de evaluare a untului este
Este esenial ca identitatea probelor s favorizare. Probele trebuie s fie codate. 14 C 2 C,
Aceast etap are loc naintea evalurii deoarece acestea sunt
fie ascuns n timpul evalurii, astfel
propriu-zise. Se stabilete temperatura prevederi UE cu
nct s se evite orice posibilitate de untului n timpul transportului ctre caracter opional.
favorizare. Probele trebuie s fie codate. camera de testare (6 C 2 C).
Cnd evaluarea senzorial se realizeaz
Aceast etap are loc naintea evalurii ntr-un antrepozit frigorific, proba este
propriu-zise. Se stabilete temperatura prelevat cu ajutorul unui prelevator de
untului n timpul transportului ctre unt. n cazul n care evaluarea senzorial
camera de testare (6 C 2 C). se realizeaz n alt loc dect n
antrepozitul frigorific, se preleveaz o
prob de cel puin 500 g. Pe parcursul
Cnd evaluarea senzorial se realizeaz
evalurii, untul trebuie s aib o
ntr-un antrepozit frigorific, proba este temperatur de 12 C (2 C). Deviaiile
prelevat cu ajutorul unui prelevator de mari trebuie evitate.
unt. n cazul n care evaluarea senzorial
se realizeaz n alt loc dect n
antrepozitul frigorific, se preleveaz o
prob de cel puin 500 g. Pe parcursul
evalurii, untul trebuie s aib o
temperatur de 12 C (2 C) (referin:
n ISO/DIS 22935-2 FIL 99-2
temperatura de evaluare a untului este
14 C 2 C). Deviaiile mari trebuie
evitate cu orice pre.
Anexa nr. 4 Evaluarea senzorial a Parial n actul european se Ministerul Din momentul
Anexa IV (art. 4) Evaluarea senzorial untului, pct. 8. Evaluarea valorii compatibil face referin la Agriculturii i intrrii n vigoare
a untului, pct. 8. Evaluarea valorii fiecrei caracteristici testarea dispersiei apei, Industriei a actului naional
fiecrei caracteristici 1) Evaluarea senzorial se realizeaz ceea ce n actul Alimentare armonizat
pentru urmtoarele trei caracteristici: naional nu este
aspect, consisten i arom. prevzut, deoarece nu
8.1 Evaluarea senzorial se realizeaz
Aspectul implic urmtoarele exist un standard
pentru urmtoarele trei caracteristici: caracteristici: culoare, puritate vizibil, naional pentru
aspect, consisten i arom. absena contaminrii fizice, absena aceasta.
fungilor i uniformitatea de dispersie a
Aspectul implic urmtoarele apei. La definiia
caracteristici: culoare, puritate vizibil, Consistena implic urmtoarele Consisten este
absena contaminrii fizice, absena caracteristici: corp, textur i fermitate. specificat c Comisia
fungilor i uniformitatea de dispersie a Tartinabilitatea poate fi monitorizat prin poate decide s
utilizarea mijloacelor fizice, n cazul n armonizeze
apei. Dispersia apei se testeaz n
care agentul economic dorete acest metodologia n viitor.
conformitate cu standardul FIL lucru n vederea satisfacerii cerinelor n actul naional
112A/1989. clientului. aceast prevedere nu
Corp - termenul care se refer la este, deoarece sunt
Consistena implic urmtoarele coeziunea produsului n timp ce este prevederi UE
caracteristici: corp, textur i fermitate. consumat. n mod normal este asociat cu neaplicabile.
Tartinabilitatea poate fi monitorizat prin fermitatea i tartinabilitatea i trebuie s
utilizarea mijloacelor fizice, n cazul n fie uniform n ntregul produs. Se afl n
strns legtur cu textura i reprezint
care un stat membru dorete acest lucru abilitatea produsului de a-i menine
n vederea satisfacerii cerinelor poziia iniial. Este indicat de rezisten
clientului. Comisia poate decide s la tiere, putnd fi msurat mecanic i
armonizeze metodologia n viitor. prin evaluare buco-tactil i tactil.
Aroma - caracteristica perceput n
Corp este termenul care se refer la cavitatea bucal, n principal prin
coeziunea produsului n timp ce este intermediul papilelor gustative de la
nivelul limbii.
consumat. n mod normal este asociat cu
Mirosul - caracteristica perceput prin
fermitatea i tartinabilitatea i trebuie s
intermediul nasului i al simului
olfactiv.
fie uniform n ntregul produs. Se afl n
strns legtur cu textura i reprezintO deviaie semnificativ fa de
abilitatea produsului de a-i menine temperatura recomandat mpiedic
evaluarea sigur a consistenei i a
poziia iniial. Este indicat de rezisten
aromei. Temperatura este extrem de
la tiere, putnd fi msurat mecanic i important.
prin evaluare buco-tactil i tactil. Clasificarea untului trebuie amnat n
cazul n care temperatura se afl n afara
Aroma este caracteristica perceput n intervalului recomandat.
cavitatea bucal, n principal prin 2) Fiecare caracteristic trebuie s fac
intermediul papilelor gustative de la obiectul unei evaluri senzoriale
nivelul limbii. separate. Punctarea se realizeaz n
conformitate cu tabelul 1 [6].
3) Pentru a se obine uniformitate,
Mirosul este caracteristica perceput
uneori este de dorit ca, nainte de
prin intermediul nasului i al simului nceperea evalurii, evaluatorii s
olfactiv. puncteze mpreun una sau mai
multe probe de referin, n privina
O deviaie semnificativ fa de aspectului, a consistenei i a
temperatura recomandat mpiedic aromei.
evaluarea sigur a consistenei i a 4) Punctajul de acceptare este
urmtorul:
aromei. Temperatura este extrem de
Maxim Necesar
important.
Aspect 5 4
Clasificarea untului trebuie amnat n Consisten 5 4
cazul n care temperatura se afl n afara Arom/miros 5 4
intervalului recomandat. n cazurile n care nu se obine punctajul
necesar, trebuie s se prezinte o descriere
8.2. Fiecare caracteristic trebuie s fac a defectului.
Punctajul acordat de fiecare evaluator
obiectul unei evaluri senzoriale
pentru fiecare caracteristic trebuie
separate. Punctarea se realizeaz n
nregistrat n documentul de control.
conformitate cu tabelul 1. Produsul este acceptat sau respins pe
baza deciziei majoritii.
8.3. Pentru a se obine uniformitate, Nu trebuie s se nregistreze n mod
uneori este de dorit ca, nainte de frecvent cazuri n care diferenele dintre
punctajele individuale acordate pentru
nceperea evalurii, evaluatorii s
fiecare caracteristic s fie mai mari de
puncteze mpreun una sau mai multe un punct (nu mai frecvent de un caz la
probe de referin, n privina aspectului, 20 de probe). n caz contrar, competena
a consistenei i a aromei. panelului trebuie verificat de
conductorul panelului.
8.4. Punctajul de acceptare este
urmtorul:
A se consulta partea 7 Nomenclator i

descrierea aplicabil punctelor n
momentul punctrii.
axim
Necesar
Aspect
Consisten
5
Arom/miros
- n cazurile n care nu se obine

punctajul necesar, trebuie s se
prezinte o descriere a defectului.
- Punctajul acordat de fiecare
evaluator pentru fiecare
caracteristic trebuie nregistrat n
documentul de control.
- Produsul este acceptat sau respins
pe baza deciziei majoritii.
- Nu trebuie s se nregistreze n
mod frecvent cazuri n care
diferenele dintre punctajele
individuale acordate pentru fiecare
caracteristic s fie mai mari de un
punct (nu mai frecvent de un caz la
20 de probe). n caz contrar,
competena panelului trebuie
verificat de conductorul
panelului.
Anexa IV (art. 4) Evaluarea senzorial untului, pct. 9. Supraveghere Agriculturii i intrrii n vigoare
a untului, pct. 9. Supraveghere Conductorul panelului, care trebuie s Industriei a actului naional
fie angajat oficial al autoritii Alimentare armonizat
competente i care poate fi membru al
Conductorul panelului, care trebuie s panelului, trebuie s rspund n general
fie angajat oficial al autoritii pentru ntreaga procedur. Acesta trebuie
competente i care poate fi membru al s nregistreze n documentul de control
punctajele individuale pentru fiecare
panelului, trebuie s rspund n general
caracteristic i s confirme dac
pentru ntreaga procedur. El/ea trebuie produsul este acceptat sau respins.
s nregistreze n documentul de control
punctajele individuale pentru fiecare
caracteristic i s certifice dac
produsul este acceptat sau respins.
Compatibil - Ministerul Din momentul
Anexa IV (art. 4) Evaluarea senzorial Anexa nr. 4 Evaluarea senzorial a Agriculturii i intrrii n vigoare
a untului, pct. 10. Nomenclator untului, pct. 10. Nomenclator Industriei a actului naional
Alimentare armonizat
A se consulta tabelul 2 anexat. Tabelul 2. Defectele untului
I. Aspect:
Tabelul 2. Tabelul defectelor untului 1. nelegat (necompact), umed
2. neuniform, n dou culori
I. Aspect 3. cu dungi
4. pestri, marmorat
1. nelegat (necompact), umed 5. cu aspect granulat
6. separare a uleiurilor
2. neuniform, n dou culori 7. Supracolorat
8. textur slab, deschis
9. Granulat
3. cu dungi
10. materii strine
11. Mucegit
4. pestri, marmorat
12. sare nedizolvat
II. Consisten:
5. cu aspect granulat 13. dezemulsionat, friabil,
sfrmicios
6. separare a uleiurilor 14. pstos, de consistena aluatului,
gras
7. supracolorat
15. Lipicios
16. Tare
8. textur slab, deschis 17. Moale
III. Miros i arom:
9. granulat 18. fr miros
19. impur (1)
10. materii strine 20. arome strine
21. Vechi
11. mucegit 22. brnzos, miros de brnz lactic
23. Acid
12. sare nedizolvat
Anexa IV (art. 4) Evaluarea senzorial neaplicabile
a untului, pct. 11. Referine
FIL 99C:1997 Evaluarea senzorial a

produselor lactate prin punctare
Metoda de referin
ISO/DIS 22935 FIL 99 Standardul

internaional pentru lapte i produse
lactate Evaluarea senzorial prile
1-3
ISO 8586-1 Analiza senzorial

Orientri generale pentru selecia,
formarea i monitorizarea evaluatorilor
partea 1
ISO 8589 Analiza senzorial Orientri

generale pentru proiectarea camerelor de
testare
FIL 112A:1989 Untul Determinarea

valorii dispersiei apei

Anexa IV (art. 4) Evaluarea senzorial untului, pct. 8. Evaluarea valorii Agriculturii i intrrii n vigoare
a untului, Tabelul 1 Punctajul pentru fiecrei caracteristici, subpunctul 2) Industriei a actului naional
Fiecare caracteristic trebuie s fac Alimentare armonizat
unt [5] obiectul unei evaluri senzoriale
separate. Punctarea se realizeaz n
conformitate cu tabelul 1. [6]
Anexa nr. 5 Determinarea Compatibil - Ministerul Din momentul

Anexa V (art. 5) Determinarea coninutului de trigliceride ale Agriculturii i intrrii n vigoare
coninutului de trigliceride ale acidului enantic n unt, ulei de unt i Industriei a actului naional
acidului enantic n unt, ulei de unt i smntn prin analiza cromatografic Alimentare armonizat
n faz gazoas a trigliceridelor, pct. 1.
smntn prin analiza cromatografic
Obiectul
n faz gazoas a trigliceridelor, pct. 1. Prezenta metod stabilete o metod
Obiectul pentru determinarea coninutului de
trigliceride ale acidului enantic n unt,
Prezenta metod stabilete o metod ulei de unt i smntn.
pentru determinarea coninutului de
trigliceride ale acidului enantic n unt,
ulei de unt i smntn.

Termini i definiie
n faz gazoas a trigliceridelor, pct. 2. Coninutul de acid enantic - coninutul
Termini i definiie de trigliceride ale acidului enantic
determinat prin procedura specificat n
Coninutul de acid enantic: coninutul de prezenta metod.
trigliceride ale acidului enantic Not: Coninutul de acid enantic este
determinat prin procedura specificat n exprimat n kg/ton din produs pentru
prezenta metod. uleiul de unt i unt, iar pentru smntn
este exprimat n kg/ton din grsimea
din lapte.
Not: Coninutul de acid enantic este
exprimat n kg/ton din produs pentru
uleiul de unt i unt, iar pentru smntn
este exprimat n kg/ton din grsimea
din lapte.
Anexa nr. 5 Determinarea Parial Standardul ISO 14156 Ministerul Din momentul
Anexa V (art. 5) Determinarea coninutului de trigliceride ale compatibil este substituit cu Agriculturii i intrrii n vigoare
coninutului de trigliceride ale acidului enantic n unt, ulei de unt i standardul naional SM Industriei a actului naional
acidului enantic n unt, ulei de unt i smntn prin analiza cromatografic ISO 14156. Alimentare armonizat
n faz gazoas a trigliceridelor, pct. 3. Standardele FIL nu
Principiu sunt aplicate pe
n faz gazoas a trigliceridelor, pct. 3. Grsimea din lapte este extras din teritoriul Republicii
Principiu diferite produse n conformitate cu SM Moldova.
ISO 14156. Determinarea cantitativ a Alineatul Not nu
Grsimea din lapte este extras din coninutului de trigliceride ale acidului este prevzut n actul
diferite produse n conformitate cu ISO enantic n grsimea extras este realizat naional, deoarece este
14156 FIL 172:2001. Determinarea prin cromatografie n faz gazoas n o prevedere UE cu
cantitativ a coninutului de trigliceride coloan capilar (GC). Rezultatul caracter opional.
obinut pentru prob este evaluat prin
ale acidului enantic n grsimea extras
aplicarea standarduluiprivind
este realizat prin cromatografie n faz trigliceridele acidului caproic.
gazoas n coloan capilar (GC).
Rezultatul obinut pentru prob este
evaluat prin aplicarea standardului intern
privind trigliceridele acidului caproic.
Not: S-a constatat de asemenea c

tributirina este un standard intern
satisfctor.
Reactivi
n faz gazoas a trigliceridelor, pct. 4. Se folosesc reactivi de calitate analitic
Reactivi recunoscut.
1) n-Hexan
A se folosi numai reactivi de calitate 2) Trigliceride etalon ale acidului
analitic recunoscut. caproic, cel puin 99 % puritate
3) Trigliceride etalon ale acidului
4.1. n-Hexan enantic, cel puin 99 % puritate
4) Sulfat de sodiu, anhidru (Na2SO4)
4.2. Trigliceride etalon ale acidului
caproic, cel puin 99 % puritate
4.3. Trigliceride etalon ale acidului

enantic, cel puin 99 % puritate
4.4. Sulfat de sodiu, anhidru (Na2SO4)
Anexa nr. 5 Determinarea Parial Actul naional cu Ministerul Din momentul

Anexa V (art. 5) Determinarea coninutului de trigliceride ale compatibil conine exemple. Agriculturii i intrrii n vigoare
coninutului de trigliceride ale acidului enantic n unt, ulei de unt i Acestea sunt prevederi Industriei a actului naional
acidului enantic n unt, ulei de unt i smntn prin analiza cromatografic UE cu caracter Alimentare armonizat
n faz gazoas a trigliceridelor, pct. 5. opional.
Aparatur
n faz gazoas a trigliceridelor, pct. 5. Aparatura obinuit de laborator:
Aparatur 1) Balan analitic echilibrat la 1 mg
2) Baloane cotate cu capacitate de
Aparatur obinuit de laborator i, n 10 ml i 20 ml
special, urmtoarele: 3) Tuburi de centrifug cu capacitate
de 30 ml
5.1. Balan analitic echilibrat la 1 mg 4) Evaporator rotativ
5) Cuptor care s poat fi meninut la o
temperatur de 50 C 5 C
5.2. Baloane cotate cu capacitate de
6) Hrtie de filtru de porozitate medie
10 ml i 20 ml cu diametrul de aproximativ 15 cm
7) Aparatur de cromatografie n faz
5.3. Tuburi de centrifug cu capacitate gazoas
de 30 ml a) Cromatograf n faz gazoas dotat
cu un injector cu sau fr divizare
5.4. Evaporator rotativ sau n coloan i cu un detector
cu ionizare n flacr
5.5. Cuptor care s poat fi meninut la o b) Coloan de cromatografie n faz
temperatur de 50 C 5 C gazoas cu faz staionar care a
fost folosit cu succes n
operaiunea de separare a
5.6. Hrtie de filtru de porozitate medie trigliceridelor (100 %
cu diametrul de aproximativ 15 cm dimetilpolisiloxan sau 5 % fenil-
95 % metilpolisiloxan). Se
5.7. Aparatur de cromatografie n faz selecteaz faza staionar, se
gazoas ajusteaz lungimea coloanei (ntre
4 m i 15 m), diametrul intern
5.7.1. Cromatograf n faz gazoas dotat (ntre 0,22 mm i 0,50 mm) i
cu un injector cu sau fr divizare sau grosimea stratului (0,12 m sau
mai mult), innd cont de
n coloan i cu un detector cu
experiena laboratorului i de
ionizare n flacr. sistemul de injectare aplicat. n
orice caz, coloana selectat
5.7.2. Coloan de cromatografie n faz produce n acelai timp o separare
gazoas cu faz staionar care a fost complet ntre vrful solventului i
trigliceridele acidului caproic i o
folosit cu succes n operaiunea de rezoluie a liniei de baz ntre
separare a trigliceridelor (100 % vrfurile trigliceridelor acidului
dimetilpolisiloxan sau 5 % fenil-95 % caproic i ale acidului enantic
8) Sering pentru injectare, cu
metilpolisiloxan). Selectai faza
capacitate de 5 l.
staionar, ajustai lungimea coloanei
(ntre 4 m i 15 m), diametrul intern
(ntre 0,22 mm i 0,50 mm) i grosimea
stratului (0,12 m sau mai mult), innd
cont de experiena laboratorului i de
sistemul de injectare aplicat. n orice
caz, coloana selectat produce n acelai
timp o separare complet ntre vrful
solventului i trigliceridele acidului
caproic i o rezoluie a liniei de baz
ntre vrfurile trigliceridelor acidului
caproic i ale acidului enantic. Mai jos
sunt enumerate cteva exemple de
condiii aplicabile.
5.7.2.1. Exemplu de condiii aplicabile

folosind un injector cu divizare:
- gaz vector: heliu;
- presiunea n capul coloanei: 100 KPa;
- coloan: coloan din sticl de siliciu
de 12 m lungime, 0,5 mm diametru
intern, 0,1 m grosimea stratului;
- faz staionar: 100 %
dimetilpolisiloxan sau 5 % fenil-95 %
dimetilpolisiloxan (de exemplu, HT5);
- temperatura coloanei: temperatur
iniial de 130 C, meninut timp de
1 min, ridicat cu o rat de 20 C/min.
pn la 260 C i apoi ridicat cu o rat
de 30 C/min. pn la 360 C; a se
menine 10 min. la 360 C;
- temperatura detectorului: 370 C;
- temperatura injectorului: 350 C;
- raportul de fracionare 1:30;
- cantitatea din proba injectat: 1 l.
5.7.2.2. Exemplu de condiii aplicabile

folosind un injector n coloan:
- gaz vector: hidrogen (sistem de flux
constant);
- presiunea n capul coloanei: 89 kPa;
- coloan: coloan din sticl de siliciu
de 4 m lungime, 0,32 mm diametru
intern, 0,25 m grosimea stratului;
- faz staionar: 5 % fenil, 95 %
dimetilpolisiloxan;
- temperatura coloanei: temperatur
iniial de 60 C, meninut timp de
2 min, ridicat cu o rat de 35 C/min.
pn la 340 C, meninut la aceast
temperatura timp de 5 min;
- temperatura detectorului: 350 C;
- cantitatea din proba injectat: 1 l.
5.8. Sering pentru injectare, cu

capacitate de 5 l.
Anexa nr. 5 Determinarea Parial Standardul ISO 707- Ministerul Din momentul
Anexa V (art. 5) Determinarea coninutului de trigliceride ale compatibil 1997 Lapte i Agriculturii i intrrii n vigoare
coninutului de trigliceride ale acidului enantic n unt, ulei de unt i produse lactate Industriei a actului naional
acidului enantic n unt, ulei de unt i smntn prin analiza cromatografic Metode de prelevare a Alimentare armonizat
n faz gazoas a trigliceridelor, pct. 6. probelor este substituit
Prelevarea probelor cu standardul naional
n faz gazoas a trigliceridelor, pct. 6. Proba primit n laborator trebuie s fie SM SR EN ISO
Prelevarea probelor reprezentativ i care s nu fi fost 707:2012 Lapte i
deteriorat sau modificat n timpul produse lactate. Ghid
Este important ca laboratorul s transportului sau pe durata depozitrii. pentru eantionare.
primeasc o prob care s fie cu adevrat Metoda recomandat de prelevare a Standardele FIL nu
reprezentativ i care s nu fi fost probelor este prezentat n SM SR EN sunt aplicate pe
deteriorat sau modificat n timpul ISO 707:2012 Lapte i produse lactate. teritoriul Republicii
transportului sau pe durata depozitrii. Ghid pentru eantionare. Moldova.
Prelevarea probelor nu face parte din

metoda specificat n actualul standard
internaional. n standardul
FIL:50C:1995 sau ISO 707-1997
Lapte i produse lactate Metode de
prelevare a probelor este prezentat
metoda recomandat de prelevare a
probelor.
Anexa V (art. 5) Determinarea coninutului de trigliceride ale compatibil este substituit cu Agriculturii i intrrii n vigoare
coninutului de trigliceride ale acidului enantic n unt, ulei de unt i standardul naional SM Industriei a actului naional
acidului enantic n unt, ulei de unt i smntn prin analiza cromatografic ISO 14156. Alimentare armonizat
n faz gazoas a trigliceridelor, pct. 7. Standardele FIL nu
Prepararea probei de analiz i a sunt aplicate pe
n faz gazoas a trigliceridelor, pct. 7. cantitii analizate teritoriul Republicii
Procedur Prepararea probei de analiz i a Moldova.
cantitii analizate se realizeaz n
7.1. Prepararea probei de analiz i a conformitate cu SM ISO 14156.
cantitii analizate 1) Ulei de unt, unt
a) Se topete ntre 50 g i 100 g din
A se proceda n conformitate cu ISO proba de analiz n cuptor
14156 FIL 172:2001. b) Se pun ntre 0,5 g i 1 g de sulfat
de sodiu anhidru ntr-o hrtie de
filtru pliat
7.1.1. Ulei de unt, unt
c) Se filtreaz grsimea prin hrtia de
filtru care conine sulfat de sodiu
7.1.1.1. Se topete ntre 50 g i 100 g din
anhidru, colectnd filtratul ntr-un
proba de analiz n cuptor (5.5)
pahar de laborator care se
pstreaz n cuptor. n timpul
7.1.1.2. Se pun ntre 0,5 g i 1 g de sulfat decantrii, se acord mult atenie
de sodiu anhidru (5.4) ntr-o hrtie de untului topit n hrtia de filtru,
filtru pliat pentru a nu se transfera serul.
2) Smntn
7.1.1.3. Se filtreaz grsimea prin hrtia a) Proba analizat se aduce la o
de filtru care conine sulfat de sodiu temperatur de 20 C 2 C
anhidru, colectnd filtratul ntr-un pahar b) Proba se amestec sau se agit bine
de laborator care se pstreaz n cuptor c) Se dilueaz o cantitate adecvat
(5.5). n timpul decantrii, se acord din proba analizat pentru a se
mult atenie untului topit n hrtia de obine 100 ml de cantitate analizat
filtru, pentru a nu se transfera serul. cu o fraciune de mas a grsimii
de aproximativ 4 %
7.1.2. Smntn
7.1.2.1. Proba analizat se aduce la o d) Se procedeaz ca i n cazul
temperatur de 20 C 2 C laptelui crud i al laptelui
7.1.2.2. Proba se amestec sau se agit omogenizat (SM ISO 14156)
bine pentru a extrage grsimea din
7.1.2.3. Se dilueaz o cantitate adecvat smntn
din proba analizat pentru a se obine e) Se cntrete, cu o precizie de
100 ml de cantitate analizat cu o 1 mg, 1 g din grsimea extras,
fraciune de mas a grsimii de ntr-un balon cotat de 10 ml. Se
aproximativ 4 % adaug 1 ml din soluia indicat la
7.1.2.4. Se procedeaz ca i n cazul punctul 8, subpunctul 1). Se
laptelui crud i al laptelui omogenizat (a completeaz pn la 10 ml cu n-
se vedea ISO 14156 FIL 172:2001, 8.3) hexan i se omogenizeaz
pentru a extrage grsimea din smntn f) Se introduce 1 ml din soluia
7.1.2.5. Se cntrete, cu o precizie de indicat la subpunctul 1, lit. b) din
1 mg, 1 g din grsimea extras, ntr-un prezentul punct, ntr-un balon cotat
balon cotat de 10 ml (5.2). Se adaug de 10 ml i se dilueaz pn la
1 ml din soluia 7.2.2. Se completeaz 10 ml cu n-hexan
pn la 10 ml cu n-hexan (4.1) i se
omogenizeaz
7.1.2.6. Se introduce 1 ml din soluia
7.1.1.2 ntr-un balon cotat de 10 ml (5.2)
i se dilueaz pn la 10 ml cu n-hexan
(4.1)
Anexa V (art. 5) Determinarea Anexa nr. 5 Determinarea Compatibil - Ministerul Din momentul
coninutului de trigliceride ale coninutului de trigliceride ale Agriculturii i intrrii n vigoare
acidului enantic n unt, ulei de unt i acidului enantic n unt, ulei de unt i Industriei a actului naional
smntn prin analiza cromatografic smntn prin analiza cromatografic Alimentare armonizat
n faz gazoas a trigliceridelor, pct. 7. n faz gazoas a trigliceridelor, pct. 8.
Procedur Prepararea etaloanelor de calibrare
7.2. Prepararea etaloanelor de 1) Se dizolv 100 mg de trigliceride
calibrare ale acidului enantic n 10 ml de n-
7.2.1. Se dizolv 100 mg de trigliceride hexan
ale acidului enantic (4.3) n 10 ml de n- 2) Se dizolv 100 mg de trigliceride
hexan (4.1) ale acidului caproic n 10 ml de n-
7.2.2. Se dizolv 100 mg de trigliceride hexan
ale acidului caproic (4.2) n 10 ml de n- 3) Se introduce 1 ml din soluia
hexan (4.1) indicat la subpunctul 2) din
7.2.3. Se introduce 1 ml din soluia 7.2.2 prezentul punct, ntr-un balon cotat
ntr-un balon cotat de 10 ml (5.2). Se de 10 ml. Se completeaz pn la
completeaz pn la 10 ml cu n-hexan 10 ml cu n-hexan
(4.1) 4) Se introduce 1 ml din soluia
7.2.4. Se introduce 1 ml din soluia 7.2.1 indicat la subpunctul 1) din
i 1 ml din soluia 7.2.2 ntr-un balon prezentul punct i 1 ml din soluia
cotat de 10 ml (5.2). Se completeaz indicat la subpunctul 2) din
pn la 10 ml cu n-hexan (4.1) prezentul punct punctul 2, ntr-un
balon cotat de 10 ml. Se
7.2.5. Se introduce 1 ml din soluie 7.2.4 completeaz pn la 10 ml cu n-
ntr-un balon cotat de 10 ml (5.2) i se hexan
completeaz pn la 10 ml cu n-hexan 5) Se introduce 1 ml din soluia
indicat la subpunctul 4) din
(4.1)
prezentul punct ntr-un balon cotat
de 10 ml i se completeaz pn la
10 ml cu n-hexan
n faz gazoas a trigliceridelor, pct. 7. n faz gazoas a trigliceridelor, pct. 9.
Procedur Determinarea cromatografic
7.3. Determinarea cromatografic 1) Se injecteaz de dou ori 1 l din
7.3.1. Se injecteaz de dou ori 1 l din soluia etalon indicat la punctul 8,
soluia etalon 7.2.5 subpunctul 5)
7.3.2. Se injecteaz 1 l din fiecare 2) Se injecteaz 1 l din fiecare soluie
soluie de prob de prob
Not: n cazul n care se adopt sistemul Not: n cazul n care se adopt sistemul
de injectare n coloan, se aplic o de injectare n coloan, se aplic o
diluare mai mare att soluiei etalon, ct diluare mai mare att soluiei etalon, ct
i soluiei de prob. i soluiei de prob.
7.3.3. Operaia 8.3.1 se repet la fiecare 3) Operaia indicat la subpunctul 1)
3 probe n vederea ncadrrii probelor din prezentul punct se repet la
ntre injectrile etalon martor. fiecare 3 probe n vederea ncadrrii
Rezultatele se bazeaz pe media probelor ntre injectrile etalon
coeficienilor de rspuns din martor. Rezultatele se bazeaz pe
cromatogramele etalon. media coeficienilor de rspuns din
cromatogramele etalon.
n faz gazoas a trigliceridelor, pct. 8. n faz gazoas a trigliceridelor, pct.
Calcularea rezultatelor 10. Calcularea rezultatelor
Pentru fiecare cromatogram, se
Pentru fiecare cromatogram, se integreaz suprafaa vrfurilor asociate
integreaz suprafaa vrfurilor asociate cu trigliceridele acidului enantic i ale
cu trigliceridele acidului enantic i ale acidului caproic.
acidului caproic. Se urmeaz aceste instruciuni pentru
fiecare ciclu delimitat, respectiv pentru
Se urmeaz aceste instruciuni pentru un set de probe delimitate, etalonul
fiecare ciclu delimitat, respectiv pentru injectat de dou ori imediat dup acestea
un set de probe delimitate, etalonul este STD1, iar etalonul injectat de dou
injectat de dou ori imediat dup acestea ori imediat dup acestea este STD2.
este STD1, iar etalonul injectat de dou 1) Calibrare
ori imediat dup acestea este STD2. a) Se calculeaz coeficientul de
rspuns pentru fiecare duplicat al
STD1, Rf1(a) i Rf1(b)
8.1. Calibrare Rf1 (a) sau (b) = (Suprafaa vrfului
pentru trigliceridele acidului
8.1.1. Se calculeaz coeficientul de caproic/Suprafaa vrfului pentru
rspuns pentru fiecare duplicat al STD1, trigliceridele acidului enantic) 100
Rf1(a) i Rf1(b). Se calculeaz media coeficientului de
rspuns, Rf1
Rf1 (a) sau (b) = (Suprafaa vrfului Rf1 = [Rf1(a) + Rf1(b)] / 2
pentru trigliceridele acidului b) n mod similar, se calculeaz
caproic/Suprafaa vrfului pentru media coeficientului de rspuns
trigliceridele acidului enantic) 100 STD2, Rf2
c) Se calculeaz media coeficientului
Se calculeaz media coeficientului de de rspuns, Rf
rspuns, Rf1 Rf = (Rf1 + Rf2) /2
2) Probele analizate
Rf1 = [Rf1(a) + Rf1(b)] / 2 Pentru fiecare cromatogram a probei
obinut ntre STD1 i STD2, se
8.1.2. n mod similar, se calculeaz calculeaz coninutul de acid enantic, C
media coeficientului de rspuns STD2, (kg/ton):
Rf2 C = (Suprafaa vrfului pentru
trigliceridele acidului enantic Rf
8.1.3. Se calculeaz media coeficientului 100)/(Suprafaa vrfului pentru
de rspuns, Rf trigliceridele acidului caproic Wt
1 000)
Rf = (Rf1 + Rf2) /2 unde:
Wt = greutatea grsimii prelevate (g);
8.2. Probele analizate 100 = volumul de diluare pentru prob;
1 000 = coeficientul de transformare
Pentru fiecare cromatogram a probei (pentru g/g n kg/t).
obinut ntre STD1 i STD2, se Pentru probele de unt, se ine cont de
calculeaz coninutul de acid enantic, C coninutul de grsime al untului i se
(kg/ton): calculeaz o valoare a concentraiei
corectat, Cunt (kg/t de unt)
Cunt = Cgrsime F
C = (Suprafaa vrfului pentru unde F este coninutul de grsime al
trigliceridele acidului enantic Rf untului.
100)/(Suprafaa vrfului pentru
trigliceridele acidului caproic Wt
1 000)
unde:
Wt = greutatea grsimii prelevate (g);

100 = volumul de diluare pentru
prob;
1 000 = coeficientul de transformare
(pentru g/g n kg/t).
Pentru probele de unt, se ine cont de
coninutul de grsime al untului i se
calculeaz o valoare a concentraiei
corectat, Cunt (kg/t de unt)
Cunt = Cgrsime F
unde F este coninutul de grsime al

untului.
Anexa V (art. 5) Determinarea Anexa nr. 5 Determinarea Parial Primul alineat al Ministerul Din momentul
coninutului de trigliceride ale coninutului de trigliceride ale compatibil actului european nu se Agriculturii i intrrii n vigoare
acidului enantic n unt, ulei de unt i acidului enantic n unt, ulei de unt i prevede n actul Industriei a actului naional
smntn prin analiza cromatografic smntn prin analiza cromatografic naional. Acestea sunt Alimentare armonizat
n faz gazoas a trigliceridelor, pct. 9. n faz gazoas a trigliceridelor, pct. prevederi UE cu
Precizia 11. Precizia caracter opional.
Valorile pentru limita de repetabilitate i
Detaliile referitoare la testul realizat reproductibilitate sunt exprimate pentru
nivelul de probabilitate de 95 %, fiind
ntre laboratoare asupra untului, n posibil ca acestea s nu fie aplicabile n
conformitate cu ISO 5725-1 i ISO cazul altor intervale i matrice de
5725-2 privind precizia metodei se afl concentraie dect cele prezentate.
n (12). 1) Repetabilitate
Diferenele absolute dintre dou
Valorile pentru limita de repetabilitate i rezultate individuale ale unui singur test,
reproductibilitate sunt exprimate pentru obinute prin aceeai metod aplicat
nivelul de probabilitate de 95 %, fiind asupra unor materiale de testare identice,
posibil ca acestea s nu fie aplicabile n n acelai laborator, de ctre acelai
cazul altor intervale si matrice de operator, utilizndu-se acelai
concentraie dect cele prezentate. echipament, la un interval scurt de timp
nu vor fi mai mari de 0,35 kg/t, n nu
9.1. Repetabilitate mai mult de 5 % din cazuri.
2) Reproductibilitate
Diferenele absolute dintre dou Diferenele absolute dintre dou
rezultate individuale ale unui singur test, rezultate individuale ale unui singur test,
obinute prin aceeai metod aplicat obinute prin aceeai metod aplicat
asupra unor materiale de testare identice, asupra unor materiale de testare identice,
n acelai laborator, de ctre acelai n laboratoare diferite, de ctre operatori
operator, utilizndu-se acelai diferii, utilizndu-se echipamente
echipament, la un interval scurt de timp diferite nu vor fi mai mari de 0,66 kg/t,
nu vor fi mai mari de 0,35 kg/t, n nu n nu mai mult de 5 % din cazuri.
mai mult de 5 % din cazuri.
9.2. Reproductibilitate
Diferenele absolute dintre dou

rezultate individuale ale unui singur test,
obinute prin aceeai metod aplicat
asupra unor materiale de testare identice,
n laboratoare diferite, de ctre operatori
diferii, utilizndu-se echipamente
diferite nu vor fi mai mari de 0,66 kg/t,
n nu mai mult de 5 % din cazuri.
n faz gazoas a trigliceridelor, pct. n faz gazoas a trigliceridelor, pct.
10. Limitele de toleran: limite 12. Limitele de toleran: limite
inferioare (n cazul cantitilor inferioare (n cazul cantitilor
insuficiente) insuficiente)
10.1. Pentru a verifica marcarea corect 1) Pentru a verifica marcarea corect a
a produsului, trebuie prelevate trei probe produsului, trebuie prelevate trei
din produsul studiat. probe din produsul studiat.
10.2. Unt i unt concentrat 2) Unt i unt concentrat
10.2.1. Rata de ncorporare este de 11 kg a) Rata de ncorporare este de 11 kg
din trigliceridele acidului enantic cu o din trigliceridele acidului enantic
puritate de cel puin 95 %, respectiv cu o puritate de cel puin 95 %,
10,45 kg/t respectiv 10,45 kg/t
10.2.2. Rezultatele pentru cele trei probe b) Rezultatele pentru cele trei probe
obinute n urma analizei produsului se obinute n urma analizei
utilizeaz la verificarea ratei i a produsului se utilizeaz la
omogenitii de ncorporare a verificarea ratei i a omogenitii
marcatorilor, iar cel mai slab rezultat se de ncorporare a marcatorilor, iar
compar cu urmtoarele limite: cel mai slab rezultat se compar cu
- 9,51 kg/t (rat de ncorporare minim urmtoarele limite:
de 95 % pentru trigliceridele acidului - 9,51 kg/t (rat de ncorporare
enantic cu o puritate de 95 %, minim de 95 % pentru
trigliceridele acidului enantic cu
determinare separat);
o puritate de 95 %, determinare
- 6,89 kg/t (rat de ncorporare minim separat);
de 70 % pentru trigliceridele acidului - 6,89 kg/t (rat de ncorporare
enantic cu o puritate de 95 %, minim de 70 % pentru
determinare separat); trigliceridele acidului enantic cu
- concentraia marcatorului din proba cu o puritate de 95 %, determinare
rezultatul cel mai slab este utilizat prin separat);
interpolare, respectiv ntre 9,51 kg/t - concentraia marcatorului din
i 6,89 kg/t. proba cu rezultatul cel mai slab
10.3. Smntn este utilizat prin interpolare,
10.3.1. Rata de ncorporare este de 10 kg respectiv ntre 9,51 kg/t
de trigliceride ale acidului enantic, cu o i 6,89 kg/t.
puritate de cel puin 95 %, pe tona de 3) Smntn
grsimi din lapte, respectiv 9,5 kg/t a) Rata de ncorporare este de 10 kg
grsimi din lapte marcate. de trigliceride ale acidului enantic,
10.3.2. Rezultatele pentru cele trei probe cu o puritate de cel puin 95 %, pe
obinute n urma analizei produsului se tona de grsimi din lapte, respectiv
folosesc pentru verificarea ratei 9,5 kg/t grsimi din lapte marcate
omogenitii de ncorporare a b) Rezultatele pentru cele trei probe
marcatorilor, iar cel mai slab rezultat se obinute n urma analizei
compar cu urmtoarele limite: produsului se folosesc pentru
- 8,60 kg/t (rat de ncorporare minim verificarea ratei omogenitii de
de 95 % pentru trigliceridele acidului ncorporare a marcatorilor, iar cel
enantic cu o puritate de 95 %, mai slab rezultat se compar cu
determinare separat); urmtoarele limite:
- 6,23 kg/t (rat de ncorporare minim - 8,60 kg/t (rat de ncorporare
de 70 % pentru trigliceridele acidului minim de 95 % pentru
enantic cu o puritate de 95 %, trigliceridele acidului enantic cu
determinare separat); o puritate de 95 %, determinare
- concentraia marcatorului din proba cu separat);
rezultatul cel mai slab este utilizat prin - 6,23 kg/t (rat de ncorporare
interpolare, respectiv ntre 8,60 kg/t minim de 70 % pentru
i 6,23 kg/t. trigliceridele acidului enantic cu
o puritate de 95 %, determinare
separat);
- concentraia marcatorului din
proba cu rezultatul cel mai slab
este utilizat prin interpolare,
respectiv ntre 8,60 kg/t
i 6,23 kg/t.
n faz gazoas a trigliceridelor, pct. n faz gazoas a trigliceridelor, pct.
11. Limitele de toleran: limitele 13. Limitele de toleran: limitele
superioare (n cazul depirii cantitii superioare (n cazul depirii cantitii
cu peste 20 %) cu peste 20 %)
11.1. Pentru a verifica marcarea corect 1) Pentru a verifica marcarea corect a
a produsului, trebuie prelevate trei probe produsului, trebuie prelevate trei
din produsul studiat. probe din produsul studiat.
11.2. Unt i unt concentrat 2) Unt i unt concentrat
11.2.1. Rezultatele pentru cele trei probe Rezultatele pentru cele trei probe
obinute n urma analizei produsului se obinute n urma analizei produsului se
folosesc pentru verificarea ratei i folosesc pentru verificarea ratei i
omogenitii de ncorporare a omogenitii de ncorporare a
marcatorilor, iar media acestor rezultate marcatorilor, iar media acestor rezultate
se compar cu urmtoarele limite: se compar cu limita superioar de 12,
- Limita superioar este 12,96 kg/t. 96 kg/t.
11.3. Smntn 3) Smntn
11.3.1. Rezultatele pentru cele trei probe Rezultatele pentru cele trei probe
obinute n urma analizei produsului se obinute n urma analizei produsului se
folosesc pentru verificarea ratei i folosesc pentru verificarea ratei i
omogenitii de ncorporare a omogenitii de ncorporare a
marcatorilor, iar media acestor rezultate marcatorilor, iar media acestor rezultate
se compar cu urmtoarele limite: se compar cu limita superioar de
- Limita superioar este 11,82 kg/t. 11,82 kg/t.
Anexa V (art. 5) Determinarea - Incompatibil Prevederi UE - -

coninutului de trigliceride ale neaplicabile
acidului enantic n unt, ulei de unt i
n faz gazoas a trigliceridelor, pct.
12. Informaii suplimentare: analiza
statistic a rezultatelor privind
determinarea trienantatului n
grsimea din unt prin analiza
trigliceridelor
Au fost realizate patru studii de
colaborare pentru determinarea
coninutului de trienantat din probele de
unt urmrite.
La primul test circular au participat nou
laboratoare i nu au fost puse la
dispoziie specificaii cu privire la
metodele analitice care trebuie folosite:
La cel de-al doilea test circular au
participat zece laboratoare i au fost
aplicate patru metode diferite:
- determinarea heptonatului de metil
utiliznd n-nonan sau nonanoatul de
metil drept standard intern;
- determinarea trienantatului utiliznd
tricaproatul drept standard intern;
utiliznd o prob de calibrare/amestec;
utiliznd un amestec de calibrare.
n plus, dac au fost analizai esterii
metilici ai acizilor grai (FAME), au fost
folosite dou metode diferite de metilare
(De Francesco i Christopherson &
Glass).
Datorit rezultatelor obinute, pentru
realizarea celui de-al treilea test circular
au fost alese dou metode:
utiliznd n-nonan sau nonanoatul de
metil drept standard intern;
- determinarea trienantatului utiliznd
tricaproatul drept standard intern.
Rezultatele obinute de 7 laboratoare au
demonstrat c metoda FAME a produs o
variabilitate mai mare i, n consecin,
s-a decis s se utilizeze doar
determinarea trienantatului sub form de
trigliceride, folosindu-se metoda de
determinare a trienantatului prin
utilizarea tricaproatului drept standard
intern. n plus, analizarea trigliceridelor
a trebuit s se realizeze cu ajutorul
coloanei capilare.
n cel de-al patrulea test circular au fost
transmise patru probe (A, B, C, D), nou
laboratoare oferind rezultatele (tabelele
1-2).
Dou laboratoare (DE i UE) au analizat
probele utiliznd metoda FAME.
Din cauza numrului sczut de
laboratoare, calculul statistic a fost
efectuat att pentru setul complet de
date, inclusiv rezultatele aplicrii
metodei FAME (figurile 1-2), ct i
asupra datelor obinute din analiza TG.
Teste pentru valorile aberante:
- proba A. Testele Dixon, Cochran i
Grubbs la niveluri de 1 i 5 % au artat o
valoare aberant n cadrul analizei;
- proba B. Testul Grubbs la nivel de 5 %
a artat o valoare aberant n cadrul
analizei;
- proba C. Testele Dixon i Grubbs la
niveluri de 1 i 5 % au artat o valoarea
aberant n cadrul analizei;
- proba D. Testele Dixon i Grubbs la
niveluri de 1 i 5 % au artat o valoare
aberant n cadrul analizei
Valoarea aberant a fost exclus din
calcul.
Trebuie menionat faptul c valorile
obinute prin metoda FAME nu au fost
niciodat considerate aberante n urma
testelor aplicate.
Parametrii de precizie
Tabelele 1 i 2 prezint rezultatele
tuturor laboratoarelor i parametrii de
precizie calculai pentru un numr
acceptabil (8) de laboratoare, dar, din
nefericire, nu toate rezultatele sunt
obinute prin aceeai metod analitic.
Tabelele 3 i 4 prezint rezultatele care
sunt obinute doar prin metoda TG i
parametrii de precizie corespunztori.
Acceptarea acestor parametri este
condiionat de acceptarea numrului
sczut de laboratoare (6).
Figurile 2 i 3 prezint tendinele pentru
Sr i SR calculate pentru cele 4 probe ale
celor 2 seturi de date descrise mai sus.
Tabelul 5 prezint valorile pentru Sr i
SR mpreun cu valorile colective
aferente i parametrii globali r i R.
n final, a fost calculat diferena critic
pentru un nivel al probabilitii de 95 %.
[7]
Anexa VI (art. 5) Determinarea coninutului de vanilin n untul Agriculturii i intrrii n vigoare
coninutului de vanilin n untul concentrat, unt sau smntn prin Industriei a actului naional
concentrat, unt sau smntn prin cromatografie lichid de nalt Alimentare armonizat
performan, pct. 1. Obiectul i
cromatografie lichid de nalt
domeniul de aplicare
performan, pct. 1. Obiectul i Metoda implic o procedur de
domeniul de aplicare determinare cantitativ a vanilinei din
Metoda implic o procedur de
determinare cantitativ a vanilinei din
performan, pct. 2. Principiu
Extragerea unei cantiti cunoscute din
performan, pct. 2. Principiu prob cu ajutorul unui amestec de
izopropanol/etanol/acetonitril (1:1:2).
Extragerea unei cantiti cunoscute din Precipitarea majoritii grsimii prin
prob cu ajutorul unui amestec de rcire ntre 15 C i 20 C, urmat de
izopropanol/etanol/acetonitril (1:1:2). centrifugare.
Precipitarea majoritii grsimii prin Dup diluarea cu ap, determinarea
rcire ntre 15 C i 20 C, urmat de coninutului de vanilin prin
centrifugare. cromatografie lichid de nalt
performan (HPLC).
Dup diluarea cu ap, determinarea
coninutului de vanilin prin
performan (HPLC).

performan, pct. 3. Aparatur
1) Refrigerator cu funcionare n
performan, pct. 3. Aparatur intervalul de temperatur 15 C la
20 C
Aparatur obinuit de laborator, n 2) Seringi de unic folosin cu
special urmtoarele: capacitate de 2 ml
3) Membran filtrant cu pori de 0,45
3.1. Refrigerator cu funcionare n m, rezistent la o soluie coninnd
intervalul de temperatur 15 C la 5 % soluie de extragere
20 C 4) Sistem de cromatografie lichid
coninnd o pomp (cu debit de 1,0
ml/min), un injector (injectare
3.2. Seringi de unic folosin cu
automat sau manual a 20 l), un
capacitate de 2 ml detector UV (acionat la 306 nm,
0,01 scal complet), un
3.3. Membran filtrant cu pori de 0,45 nregistrator sau integrator i o
m, rezistent la o soluie coninnd 5 % coloan termostat care funcioneaz
soluie de extragere (4.4) la 25 C
5) Coloan analitic (aproximativ
3.4. Sistem de cromatografie lichid 250 mm 4,6 mm diametru interior)
umplut cu LiChrospher RP 18
coninnd o pomp (cu debit de 1,0
(Merck, 5 m) sau o coloan
ml/min), un injector (injectare automat echivalent
6) Coloan de control (aproximativ
sau manual a 20 l), un detector UV 20 mm 3 mm diametru interior)
(acionat la 306 nm, 0,01 scal umplut cu LiChrospher RP 18 (5-
complet), un nregistrator sau integrator 10 m) sau o coloan echivalent
7) Centrifug care opereaz la 2 000
i o coloan termostat care funcioneaz
rpm.
la 25 C
3.5. Coloan analitic (aproximativ

250 mm 4,6 mm diametru interior)
umplut cu LiChrospher RP 18 (Merck,
5 m) sau o coloan echivalent
3.6. Coloan de control (aproximativ

20 mm 3 mm diametru interior)
umplut cu LiChrospher RP 18 (5-
10 m) sau o coloan echivalent
3.7. Centrifug care opereaz la 2 000

rpm.

performan, pct. 4. Reactivi
Reactivii utilizai trebuie s fie de
performan, pct. 4 Reactivi calitate analitic recunoscut.
1) Izopropanol
Toi reactivii utilizai trebuie s fie de 2) Etanol 96 % (v/v)
calitate analitic recunoscut. 3) Acetonitril
4) Soluie de extragere
Se amestec izopropanol, etanol i
4.1. Izopropanol acetonitril n proporie de 1:1:2 (v/v).
5) Vanilin (4-hidroxi-3-
4.2. Etanol 96 % (v/v) metoxibenzaldehid) 98 %
a) Soluie stock de vanilin
4.3. Acetonitril (= 500 g/ml)
Se cntresc, cu o precizie de 0,1 mg,
aproximativ 50 mg (CM mg) de vanilin
4.4. Soluie de extragere
ntr-un balon cotat de 100 ml, se adaug
25 ml de soluie de extragere i se
Se amestec izopropanol (4.1), etanol completeaz cu ap.
(4.2) i acetonitril (4.3) n proporie de b) Soluie etalon de vanilin
1:1:2 (v/v). (= 10 g/ml)
Se pipeteaz 5 ml de soluie stock de
4.5. Vanilin (4-hidroxi-3- vanilin ntr-un balon cotat de 250 ml i
metoxibenzaldehid) 98 % se completeaz cu ap.
c) Metanol, calitate HPLC
d) Acid acetic, glacial
4.5.1. Soluie stock de vanilin
e) Ap, calitate HPLC
(= 500 g/ml) f) Faza mobil HPLC
Se amestec 300 ml de metanol cu
Se cntresc, cu o precizie de 0,1 mg, aproximativ 500 ml ap i 20 ml de acid
aproximativ 50 mg (CM mg) de vanilin acetic ntr-un balon cotat de 1 000 ml i
(4.5) ntr-un balon cotat de 100 ml, se se completeaz cu ap. Se filtreaz
adaug 25 ml de soluie de extragere printr-un filtru de 0,45 m.
(4.4) i se completeaz cu ap.
4.5.2. Soluie etalon de vanilin

(= 10 g/ml)
Se pipeteaz 5 ml de soluie stock de

vanilin (4.5.1) ntr-un balon cotat de
250 ml i se completeaz cu ap.
4.5.3. Metanol, calitate HPLC
4.5.4. Acid acetic, glacial
4.5.5. Ap, calitate HPLC
4.5.6. Faza mobil HPLC
Se amestec 300 ml de metanol (4.5.3)

cu aproximativ 500 ml ap (4.5.5)
i 20 ml de acid acetic (4.5.4) ntr-un
balon cotat de 1 000 ml i se
completeaz cu ap (4.5.5). Se filtreaz
printr-un filtru de 0,45 m (3.3).

performan, pct. 5. Procedur
1) Prepararea probei de analiz
performan, pct. 5. Procedur a) Unt
Se nclzete proba pn cnd ncepe s
5.1. Prepararea probei de analiz se topeasc. Se evit supranclzirea
5.1.1. Unt unor poriuni din prob la peste 30 C. n
Se nclzete proba pn cnd ncepe s orice caz, exist posibilitatea ca untul s
se topeasc. Se evit supranclzirea nu se separe n dou faze. Cnd proba
unor poriuni din prob la peste 30 C. n devine suficient de maleabil, se
omogenizeaz prin scuturare. Untul se
orice caz, exist posibilitatea ca untul s amestec timp de 15 s nainte de
nu se separe n dou faze. Cnd proba prelevarea unei probe. Se cntresc, cu o
devine suficient de maleabil, se precizie de 1 mg, aproximativ 5 g (SM
omogenizeaz prin scuturare. Untul se g) de unt ntr-un balon cotat de 100 ml.
amestec timp de 15 s nainte de b) Unt concentrat
prelevarea unei probe. Se cntresc, cu o Imediat dup prelevarea probei,
precizie de 1 mg, aproximativ 5 g (SM recipientul coninnd un concentrat se
g) de unt ntr-un balon cotat de 100 ml. introduce n cuptor la 40-50 C pn
5.1.2. Unt concentrat cnd se topete complet. Proba se
amestec prin turbionare sau agitare,
Imediat dup prelevarea probei, evitndu-se formarea de bule de aer din
recipientul coninnd un concentrat se cauza amestecrii prea puternice. Se
introduce n cuptor la 40-50 C pn cntresc, cu o precizie de 1 mg,
cnd se topete complet. Proba se aproximativ 4 g (SM g) de unt
amestec prin turbionare sau agitare, concentrat ntr-un balon cotat de 100 ml.
evitndu-se formarea de bule de aer din c) Smntn
cauza amestecrii prea puternice. Se Proba se nclzete n baie de ap sau
cntresc, cu o precizie de 1 mg, ntr-un incubator la o temperatur de 35-
aproximativ 4 g (SM g) de unt 40 C. Grsimea se distribuie omogen
concentrat ntr-un balon cotat de 100 ml. prin turbionare i, dup caz, prin
5.1.3. Smntn amestecare. Proba se rcete rapid la
Proba se nclzete n baie de ap sau 20 2 C. Proba trebuie s aib un
ntr-un incubator la o temperatur de 35- aspect omogen; n caz contrar, procedura
40 C. Grsimea se distribuie omogen trebuie repetat. Se cntresc, cu o
prin turbionare i, dup caz, prin precizie de 1 mg, aproximativ 10 g (SM
amestecare. Proba se rcete rapid la g) de smntn ntr-un balon cotat de
20 2 C. Proba trebuie s aib un 100 ml.
aspect omogen; n caz contrar, procedura 2) Prepararea soluiei de analiz
trebuie repetat. Se cntresc, cu o Se adaug aproximativ 75 ml de soluie
precizie de 1 mg, aproximativ 10 g (SM de extragere la proba prelevat (punctul
g) de smntn ntr-un balon cotat de 5, subpunctul 1, lit. a), b) sau c)), se
100 ml. agit sau se scutur cu putere timp de
5.2. Prepararea soluiei de analiz aproximativ 15 minute i se completeaz
Se adaug aproximativ 75 ml de soluie cu soluie de extragere. Se transfer
de extragere (4.4) la proba prelevat aproximativ 10 ml din acest extract ntr-
(5.1.1, 5.1.2 sau 5.1.3), se agit sau se o eprubet prevzut cu dop. Eprubeta se
scutur cu putere timp de aproximativ 15 introduce n refrigerator timp de
minute i se completeaz cu soluie de aproximativ 30 minute. Extractul rece se
extragere (4.4). Se transfer aproximativ centrifugheaz timp de 5 minute la
10 ml din acest extract ntr-o eprubet aproximativ 2 000 rpm i se decanteaz
prevzut cu dop. Eprubeta se introduce imediat. Soluia decantat se las s se
n refrigerator (3.1) timp de aproximativ rceasc la temperatura camerei. Se
30 minute. Extractul rece se pipeteaz 5 ml din soluia decantat ntr-
centrifugheaz timp de 5 minute la un balon cotat de 100 ml i se
aproximativ 2 000 rpm i se decanteaz completeaz cu ap. Se filtreaz o parte
imediat. Soluia decantat se las s se alicot printr-o membran microfiltrant
rceasc la temperatura camerei. Se cu ajutorul unei seringi. Filtratul este
pipeteaz 5 ml din soluia decantat ntr- gata pentru determinarea HPLC.
un balon cotat de 100 ml i se 3) Calibrare
completeaz cu ap. Se filtreaz o parte Se pipeteaz 5 ml de soluie etalon de
alicot printr-o membran microfiltrant vanilin ntr-un balon cotat de 100 ml.
(3.3) cu ajutorul unei seringi (3.2). Se adaug 5 ml de soluie de extragere i
Filtratul este gata pentru determinarea se completeaz cu ap pn la marcaj.
HPLC. Aceast soluie conine 0,5 g/ml de
5.3. Calibrare vanilin.
4) Determinarea prin HPLC
Se pipeteaz 5 ml de soluie etalon de Se las sistemul cromatografic s se
vanilin (4.5.2) ntr-un balon cotat de stabilizeze timp de aproximativ 30
100 ml. Se adaug 5 ml de soluie de minute. Se injecteaz soluia etalon
extragere (4.4) i se completeaz cu ap (subpunctul 3 din prezentul punct).
pn la marcaj. Aceast soluie conine Procedura se repet pn cnd diferena
0,5 g/ml de vanilin. dintre suprafeele vrfurilor sau dintre
5.4. Determinarea prin HPLC nlimile vrfurilor a dou injectri
succesive este sub 2 %. n condiiile
Se las sistemul cromatografic s se descrise timpul de retenie al vanilinei
stabilizeze timp de aproximativ 30 este de aproximativ 9 minute. Soluia
etalon (subpunctul 3 din prezentul punct)
minute. Se injecteaz soluia etalon se analizeaz n duplicat prin injectarea a
(5.3). Procedura se repet pn cnd 20 l. Se injecteaz 20 l din soluia de
diferena dintre suprafeele vrfurilor sau analiz (subpunctul 2 din prezentul
punct). Se determin suprafaa sau
dintre nlimile vrfurilor a dou
nlimea vrfului obinut pentru
injectri succesive este sub 2 %. n vanilin. Se repet injectarea soluiei
condiiile descrise timpul de retenie al etalon (subpunctul 3 din prezentul punct)
vanilinei este de aproximativ 9 minute. n duplicat, dup 10 injectri ale
Soluia etalon (5.3) se analizeaz n probelor analizate (subpunctul 2 din
duplicat prin injectarea a 20 l. Se prezentul punct).
injecteaz 20 l din soluia de analiz
(5.2). Se determin suprafaa sau
nlimea vrfului obinut pentru
vanilin. Se repet injectarea soluiei
etalon (5.3) n duplicat, dup 10 injectri
ale probelor analizate (5.2).

performan, pct. 6. Calcularea
rezultatelor
performan, pct. 6. Calcularea Se calculeaz suprafaa (sau nlimea)
rezultatelor medie a vrfurilor (AC) pentru vrfurile
vanilinei asociate injectrii duplicatelor
Se calculeaz suprafaa (sau nlimea) la nceputul i la sfritul fiecrui lot de
medie a vrfurilor (AC) pentru vrfurile soluie de analiz (n total patru
vanilinei asociate injectrii duplicatelor suprafee sau nlimi).
la nceputul i la sfritul fiecrui lot de Se calculeaz coeficientul de rspuns
(R):
soluie de analiz (n total patru
R=AC/CM
suprafee sau nlimi). unde CM este masa vanilinei n mg.
Coninutul (mg/kg) de vanilin (C) din
Se calculeaz coeficientul de rspuns prob se calculeaz cu ajutorul formulei:
(R): C=[(AS 20 0,96)/(SM R)]
unde:
AS - suprafaa vrfului sau nlimea
unde CM este masa vanilinei n mg pentru vrful vanilinei din proba de
(4.5.1). analiz
SM - masa probei de analiz exprimat
Coninutul (mg/kg) de vanilin (C) din n g (punctul 5, subpunctul 1, lit. a), b)
prob se calculeaz cu ajutorul formulei: sau c)).
Not: La analiza vanilinei din smntn,
concentraia marcatorului se exprim ca
unde: mg marcator/kg grsime din lapte.
Pentru aceasta se nmulete C cu 100/f.
AS= suprafaa vrfului sau nlimea f este coninutul de grsime al smntnii
n procente (m/m).
pentru vrful vanilinei din proba de
20 - coeficientul de diluare a probei
analiz etalon i a probei de analiz
0,96 - factorul de corecie pentru
SM= masa probei de analiz exprimat coninutul de grsime la prima diluare a
n g (5.1.1, 5.1.2 sau 5.1.3). probei de analiz
Not: n locul suprafeei vrfului se
Not: La analiza vanilinei din smntn, poate folosi nlimea vrfului (a se
concentraia marcatorului se exprim ca vedea punctul 8, subpunctul 3).
mg marcator/kg grsime din lapte.
Pentru aceasta se nmulete C cu 100/f.
f este coninutul de grsime al smntnii
n procente (m/m).
20= coeficientul de diluare a probei

etalon i a probei de analiz
0,96= factorul de corecie pentru

coninutul de grsime la prima diluare a
probei de analiz
Not: n locul suprafeei vrfului se

poate folosi nlimea vrfului (a se
vedea 8.3).

performan, pct. 7. Precizia metodei
1) Repetabilitate(r)
performan, pct. 7. Precizia metodei Diferena dintre rezultatele a dou
determinri efectuate n cel mai scurt
7.1. Repetabilitate (r) interval de timp posibil de un operator
care utilizeaz aceeai aparatur pe
Diferena dintre rezultatele a dou material de analiz identic nu trebuie s
determinri efectuate n cel mai scurt depeasc 16 mg/kg.
interval de timp posibil de un operator 2) Reproductibilitate
care utilizeaz aceeai aparatur pe Diferena dintre rezultatele a dou
determinri efectuate de operatori din
material de analiz identic nu trebuie s
laboratoare diferite care utilizeaz
depeasc 16 mg/kg. aparatur diferit pe material de analiz
identic nu trebuie s depeasc
7.2. Reproductibilitate 27 mg/kg.
Diferena dintre rezultatele a dou
aparatur diferit pe material de analiz
27 mg/kg.

performan, pct. 8. Limitele de
toleran
performan, pct. 8. Limitele de 1) Trebuie s se preleveze trei probe
toleran din produsul urmrit pentru a se
verifica omogenitatea
8.1. Trebuie s se preleveze trei probe 2) Marcator obinut fie din vanilie, fie
din produsul urmrit pentru a se verifica din vanilin sintetic
omogenitatea a) Rata de ncorporare pentru 4-
hidroxi-3-metoxibenzaldehid
8.2. Marcator obinut fie din vanilie, fie este de 250 g pe ton de unt
concentrat sau de unt. Pentru
din vanilin sintetic
smntna marcat, rata de
ncorporare este de 250 g pe ton
8.2.1. Rata de ncorporare pentru 4- de grsime din lapte.
hidroxi-3-metoxibenzaldehid este de b) Rezultatele pentru cele trei probe
250 g pe ton de unt concentrat sau de obinute n urma analizei
unt. Pentru smntna marcat, rata de produsului se utilizeaz la
ncorporare este de 250 g pe ton de verificarea ratei i a omogenitii
de ncorporare a marcatorilor, iar
grsime din lapte.
cel mai slab rezultat se compar
cu urmtoarele limite:
8.2.2. Rezultatele pentru cele trei probe - 220,8 mg/kg (95 % din rata
obinute n urma analizei produsului se minim de ncorporare);
utilizeaz la verificarea ratei i a - 158,3 mg/kg (70 % din rata
minim de ncorporare).
omogenitii de ncorporare a
Concentraia marcatorului din proba cu
marcatorilor, iar cel mai slab rezultat se rezultatul cel mai slab este utilizat prin
compar cu urmtoarele limite: interpolare ntre 220,8 mg/kg
i 158,3 mg/kg.
220,8 mg/kg (95 % din rata minim de 3) Marcator obinut numai din psti
ncorporare); de vanilie sau extracte integrale ale
158,3 mg/kg (70 % din rata minim de acesteia:
ncorporare). a) Rata de ncorporare pentru 4-
hidroxi-3-metoxibenzaldehid est
Concentraia marcatorului din proba cu de 100 g pe ton de unt
rezultatul cel mai slab este utilizat prin concentrat sau de unt. Pentru
interpolare ntre 220,8 mg/kg smntna marcat, rata de
ncorporare este de 100 g pe ton
i 158,3 mg/kg.
de grsime din lapte
b) Rezultatele pentru cele trei probe
8.3. Marcator obinut numai din psti obinute n urma analizei
de vanilie sau extracte integrale ale produsului se folosesc pentru
acesteia: verificarea ratei i a omogenitii
de ncorporare a marcatorilor, iar
8.3.1. Rata de ncorporare pentru 4- cel mai slab rezultat se compar
hidroxi-3-metoxibenzaldehid est de cu urmtoarele limite:
100 g pe ton de unt concentrat sau de - 78,3 mg/kg (95 % din rata
minim de ncorporare);
unt. Pentru smntna marcat, rata de
- 53,3 mg/kg (70 % din rata
ncorporare este de 100 g pe ton de minim de ncorporare).
grsime din lapte. Concentraia marcatorului din proba cu
rezultatul cel mai slab este utilizat prin
8.3.2. Rezultatele pentru cele trei probe interpolare ntre 78,3 mg/kg
obinute n urma analizei produsului se i 53,3 mg/kg.
folosesc pentru verificarea ratei i a
marcatorilor, iar cel mai slab rezultat se
compar cu urmtoarele limite:
78,3 mg/kg (95 % din rata minim de
ncorporare);
53,3 mg/kg (70 % din rata minim de
ncorporare).

interpolare ntre 78,3 mg/kg
i 53,3 mg/kg

performan, pct. 9. Note
1) Recuperarea vanilinei adugate la un
performan, pct. 9. Note nivel de 250 mg/kg ulei de unt
variaz de la 97,0 la 103,8.
9.1. Recuperarea vanilinei adugate la Coninutul mediu identificat a fost
un nivel de 250 mg/kg ulei de unt de 99,9 %, cu o deviaie standard de
variaz de la 97,0 la 103,8. Coninutul 2,7 %.
mediu identificat a fost de 99,9 %, cu o 2) Soluia etalon conine 5 % soluie de
deviaie standard de 2,7 %. extragere pentru a compensa
creterea suprafeei vrfului
9.2. Soluia etalon conine 5 % soluie de provocat de prezena a 5 % soluie
extragere pentru a compensa creterea de extragere n prob. Astfel, se
suprafeei vrfului provocat de prezena poate opera o clasificare n funcie
de nlimea vrfului.
a 5 % soluie de extragere n prob.
3) Analiza se bazeaz pe o curb
Astfel, se poate opera o clasificare n liniar de etalonare, cu intersecie cu
funcie de nlimea vrfului. punctul zero.
4) Folosindu-se soluii diluate adecvate
9.3. Analiza se bazeaz pe o curb de soluie etalon, se verific
liniar de etalonare, cu intersecie cu liniaritatea n momentul realizrii
punctul zero. primei analize, iar apoi la intervale
regulate i dup modificri sau
9.4. Folosindu-se soluii diluate adecvate reparaii la echipamentul HPLC.
Vanilina poate fi degradat n acid
de soluie etalon (4.5.2), se verific
vanilic, divanilin i ali compui
liniaritatea n momentul realizrii primei prin aciunea enzimelor intrinseci n
analize, iar apoi la intervale regulate i smntna nepasteurizat sau
dup modificri sau reparaii la produsele obinute din aceasta.
echipamentul HPLC. Vanilina poate fi
degradat n acid vanilic, divanilin i
ali compui prin aciunea enzimelor
intrinseci n smntna nepasteurizat sau
produsele obinute din aceasta.
Anexa nr. 7 Detectarea prin Compatibil - Ministerul Din momentul

Anexa VII (art. 5) Detectarea prin spectrometrie a etil esterului acidului Agriculturii i intrrii n vigoare
spectometrie a etil esterului acidului beta-apo-8'-carotenic n untul Industriei a actului naional
beta-apo-8'-carotenic n untul concentrat i n unt, pct. 1. Obiectul i Alimentare armonizat
concentrat i n unt, pct. 1. Obiectul i
domeniul de aplicare Aceast metod descrie o procedur de
determinare cantitativ a etil esterului
Aceast metod descrie o procedur de acidului beta-apo-8'-carotenic (ester apo-
determinare cantitativ a etil esterului carotenic) n untul concentrat i n unt.
acidului beta-apo-8'-carotenic (ester apo- Esterul apo-carotenic este suma tuturor
carotenic) n untul concentrat i n unt. substanelor prezente ntr-un extract din
Esterul apo-carotenic este suma tuturor probe prelevate n condiiile prevzute
substanelor prezente ntr-un extract din pentru aceast metod, care absorb
probe prelevate n condiiile prevzute lumin la 440 nm.
pentru aceast metod, care absorb
lumin la 440 nm.

beta-apo-8'-carotenic n untul concentrat i n unt, pct. 2. Principiu Alimentare armonizat
Grsimea din unt se dizolv n eter de
concentrat i n unt, pct. 2. Principiu
petrol i se msoar absorbana la
440 nm. Coninutul de ester apo-
Grsimea din unt se dizolv n eter de carotenic se determin prin raportare la
petrol i se msoar absorbana la un standard extern.
440 nm. Coninutul de ester apo-
carotenic se determin prin raportare la
un standard extern.

beta-apo-8'-carotenic n untul concentrat i n unt, pct. 3. Aparatur Alimentare armonizat
1) Pipete gradate, cu capacitate de
concentrat i n unt, pct. 3. Aparatur
0,25, 0,50, 0,75 i 1,0 ml
2) Spectrofotometru adecvat utilizrii
la 440 nm (i la 447-449 nm) i
3.1. Pipete gradate, cu capacitate de prevzut cu celule cu drum optic de
0,25, 0,50, 0,75 i 1,0 ml 1 cm
3) Baloane cotate, de 20 ml i de
3.2. Spectrofotometru adecvat utilizrii 100 ml
4) Balan analitic cu sensibilitate de
la 440 nm (i la 447-449 nm) i prevzut
0,1 mg, cu o capacitate de cntrire
cu celule cu drum optic de 1 cm avnd o precizie de 1 mg, cu o
capacitate de citire de 0,1 mg
3.3. Baloane cotate, de 20 ml i de 5) Cuptor, 45 C 1 C
100 ml 6) Filtre fr cenu cu filtrare rapid
3.4. Balan analitic cu sensibilitate de

0,1 mg, cu o capacitate de cntrire
avnd o precizie de 1 mg, cu o capacitate
de citire de 0,1 mg
3.5. Cuptor, 45 C 1 C
3.6. Filtre fr cenu cu filtrare rapid

beta-apo-8'-carotenic n untul concentrat i n unt, pct. 4. Reactivi Alimentare armonizat
Toi reactivii utilizai trebuie s fie de
concentrat i n unt, pct. 4. Reactivi
calitate analitic recunoscut
1) Suspensie de acid apo-carotenic
Toi reactivii utilizai trebuie s fie de (aproximativ 20 %)
calitate analitic recunoscut. a) Coninutul suspensiei se determin
astfel:
4.1. Suspensie de acid apo-carotenic Suspensia se nclzete ntre 45 C
(aproximativ 20 %) i 50 C i se omogenizeaz n
recipientul original nchis. Se cntresc
4.1.1. Coninutul suspensiei se determin aproximativ 400 mg ntr-un balon cotat
(100 ml), se dizolv n 20 ml cloroform
astfel:
i se completeaz volumul cu
ciclohexan. Se dilueaz 5,0 ml din
Suspensia se nclzete ntre 45 C aceast soluie cu 100 ml de ciclohexan
i 50 C i se omogenizeaz n (soluia A). Se dilueaz 5,0 ml de soluie
recipientul original nchis. Se cntresc A cu ciclohexan pn la 100 ml. Se
aproximativ 400 mg ntr-un balon cotat msoar absorbana la 447-449 nm (se
(100 ml), se dizolv n 20 ml cloroform msoar valoarea maxim fa de o
(4.4) i se completeaz volumul cu prob de ciclohexan ca prob martor,
folosindu-se celule cu drum optic de
ciclohexan (4.5). Se dilueaz 5,0 ml din
1 cm).
aceast soluie cu 100 ml de ciclohexan Coninutul de ester apo-carotenic P (%)
(soluia A). Se dilueaz 5,0 ml de soluie = (Absmax 40 000)/(Msusp
A cu ciclohexan pn la 100 ml. Se 2 550) sau se dezvolt: (Absmax /2 550)
msoar absorbana la 447-449 nm (se (100/5) (100/5) (100/Msusp)
msoar valoarea maxim fa de o Absmax = absorbana soluiei de msurare
prob de ciclohexan ca prob martor, la maximum
Msusp = masa suspensiei (g)
folosindu-se celule cu drum optic de 2 550 = valoarea de referin Abs (1 %,
1 cm). 1 cm)
P = Puritatea (coninutul) suspensiei (%)
Coninutul de ester apo-carotenic P (%) Not: Suspensia de ester apo-carotenic
= (Absmax 40 000)/(Msusp este sensibil la aer, cldur i lumin.
2 550) sau se dezvolt: (Absmax /2 550) Se poate pstra la loc rece timp de
(100/5) (100/5) (100/Msusp) aproximativ 12 luni, n recipientul
original nchis (sigilat sub azot). Dup
deschiderea recipientului, coninutul
Absmax= absorbana soluiei de msurare
trebuie utilizat ct de repede posibil.
la maximum
b) Soluia etalon de ester apo-
Msusp= masa suspensiei (g) carotenic, aproximativ 0,2 mg/ml
Se cntresc, cu o precizie de 1 mg,
2 550= valoarea de referin Abs (1 %, aproximativ 0,100 g de suspensie de
1 cm) ester apo-carotenic (W), se dizolv n
ligroin, se transfer cantitativ ntr-un
balon cotat cu capacitate de 100 ml i se
P= Puritatea (coninutul) suspensiei (%)
completeaz pn la marcaj cu ligroin.
Aceast soluie conine (W
Not: Suspensia de ester apo-carotenic
P)/10 mg/ml de ester apo-carotenic.
este sensibil la aer, cldur i lumin.
Not: Soluia trebuie pstrat la rece i la
Se poate pstra la loc rece timp de adpost de lumin. Soluia nefolosit se
aproximativ 12 luni, n recipientul arunc dup o lun.
original nchis (sigilat sub azot). Dup 2) Ligroin (40-60 C)
deschiderea recipientului, coninutul 3) Sulfat de sodiu anhidru, granulat,
trebuie utilizat ct de repede posibil. deshidratat n prealabil la 102 C
timp de 2 ore
4) Cloroform
4.1.2. Soluia etalon de ester apo-
5) Ciclohexan
carotenic, aproximativ 0,2 mg/ml
Se cntresc, cu o precizie de 1 mg,

aproximativ 0,100 g de suspensie de
ester apo-carotenic (4.1.1.) (W), se
dizolv n ligroin (4.2), se transfer
cantitativ ntr-un balon cotat cu
capacitate de 100 ml i se completeaz
pn la marcaj cu ligroin.
Aceast soluie conine (W

P)/10 mg/ml de ester apo-carotenic.
Not: Soluia trebuie pstrat la rece i
la adpost de lumin. Soluia nefolosit
se arunc dup o lun.
4.2. Ligroin (40-60 C)
4.3. Sulfat de sodiu anhidru, granulat,

deshidratat n prealabil la 102 C timp de
2 ore
4.4. Cloroform
4.5. Ciclohexan

beta-apo-8'-carotenic n untul concentrat i n unt, pct. 5. Procedur Alimentare armonizat
1) Prepararea probei de analiz
concentrat i n unt, pct. 5. Procedur
a) Unt concentrat
Proba se topete n cuptor la aproximativ
5.1. Prepararea probei de analiz 45 C
b) Unt
5.1.1. Unt concentrat Proba se topete n cuptor la aproximativ
45 C i se filtreaz o parte
Proba se topete n cuptor la aproximativ reprezentativ printr-un filtru care
45 C. conine aproximativ 10 g de sulfat de
sodiu anhidru ntr-un mediu protejat de
5.1.2. Unt lumina natural sau artificial puternic
i se pstreaz la 45 C. Se colecteaz o
Proba se topete n cuptor la aproximativ cantitate adecvat de grsime din unt
2) Determinare
45 C i se filtreaz o parte Se cntrete, cu o precizie de 1 mg,
reprezentativ printr-un filtru care aproximativ 1 g de unt concentrat [sau
conine aproximativ 10 g de sulfat de grsime extras din unt (subpunctul 1,
sodiu anhidru (4.3) ntr-un mediu lit. b) din prezentul punct), (M). Se
protejat de lumina natural sau artificial transfer cantitativ ntr-un balon cotat de
puternic i se pstreaz la 45 C. Se 20 ml (V), folosindu-se ligroin, se
colecteaz o cantitate adecvat de completeaz pn la marcaj i se
grsime din unt. amestec bine.
Se transfer o parte alicot ntr-o celul
5.2. Determinare de 1 cm i se msoar absorbana la
440 nm, fa de o prob martor de
Se cntrete, cu o precizie de 1 mg, ligroin. Concentraia de ester apo-
aproximativ 1 g de unt concentrat [sau carotenic n soluie se determin
grsime extras din unt (5.1.2)], (M). Se conform curbei de etalonare (C g/ml).
transfer cantitativ ntr-un balon cotat de 3) Calibrare
20 ml (V), folosindu-se ligroin (4.2), se Se pipeteaz 0, 0,25, 0,5, 0,75 i 1,0 ml
completeaz pn la marcaj i se de soluie etalon de ester apo-carotenic
amestec bine. n cinci baloane cotate de 100 ml. Se
dilueaz la volum cu ligroin i se
Se transfer o parte alicot ntr-o celul amestec.
de 1 cm i se msoar absorbana la Concentraiile aproximative ale soluiei
440 nm, fa de o prob martor de variaz ntre 0 i 2 g/ml i se calculeaz
ligroin. Concentraia de ester apo- cu precizie prin referire la concentraia
carotenic n soluie se determin soluiei etalon de ester apo-carotenic (W
conform curbei de etalonare (C g/ml). P)/10 mg/ml. Se msoar absorbana la
440 nm fa de o prob martor de
5.3. Calibrare ligroin.
Valorile absorbanei se reprezint pe axa
Se pipeteaz 0, 0,25, 0,5, 0,75 i 1,0 ml y, iar pe axa x se reprezint concentraia
de soluie etalon de ester apo-carotenic esterului apo-carotenic. Se calculeaz
(4.1.2) n cinci baloane cotate de 100 ml. ecuaia curbei de etalonare.
Se dilueaz la volum cu ligroin (4.2) i
se amestec.
Concentraiile aproximative ale soluiei

variaz ntre 0 i 2 g/ml i se calculeaz
cu precizie prin referire la concentraia
soluiei etalon (4.1.2) (W P)/10 mg/ml.
Se msoar absorbana la 440 nm fa de
o prob martor de ligroin (4.2).
Valorile absorbanei se reprezint pe axa

y, iar pe axa x se reprezint concentraia
esterului apo-carotenic. Se calculeaz
ecuaia curbei de etalonare.

beta-apo-8'-carotenic n untul concentrat i n unt, pct. 6. Calcularea Alimentare armonizat
rezultatelor
concentrat i n unt, pct. 6. Calcularea
Coninutul de ester apo-carotenic,
rezultatelor exprimat n mg/kg de produs, se
calculeaz dup cum urmeaz:
6.1. Coninutul de ester apo-carotenic, Unt concentrat: (C V)/M
exprimat n mg/kg de produs, se Unt: 0,82 (C V)M
calculeaz dup cum urmeaz: unde:
C - coninutul de ester apo-carotenic, n
Unt concentrat: (C V)/M g/ml, citit de pe curba de etalonare
(punctul 5, subpunctul 3);
Unt: 0,82 (C V)M V - volumul (ml) soluiei de analiz
M - masa (g) cantitii analizate (punctul
unde:
5, subpunctul 2);
0,82 - factorul de corecie pentru
C= coninutul de ester apo-carotenic, n coninutul de grsime al untului.
g/ml, citit de pe curba de etalonare
(5.3);
V= volumul (ml) soluiei de analiz
(5.2);
M= masa (g) cantitii analizate (5.2);
0,82= factorul de corecie pentru
coninutul de grsime al untului.
Anexa nr. 7 Detectarea prin Parial n actul naional nu Ministerul Din momentul
Anexa VII (art. 5) Detectarea prin spectrometrie a etil esterului acidului compatibil este punctul privind Agriculturii i intrrii n vigoare
spectometrie a etil esterului acidului beta-apo-8'-carotenic n untul Sursa datelor de Industriei a actului naional
beta-apo-8'-carotenic n untul concentrat i n unt, pct. 7. Precizia precizie. Acestea sunt Alimentare armonizat
metodei prevederi UE cu
concentrat i n unt, pct. 7. Precizia
1) Repetabilitate caracter opional.
metodei a) Analiza untului
7.1. Repetabilitate determinri efectuate n cel mai scurt
interval de timp posibil de un operator
7.1.1. Analiza untului care utilizeaz aceeai aparatur pe
Diferena dintre rezultatele a dou depeasc 1,4 mg/kg.
determinri efectuate n cel mai scurt b) Analiza untului concentrat
interval de timp posibil de un operator Diferena dintre rezultatele a dou
care utilizeaz aceeai aparatur pe determinri efectuate n cel mai scurt
material de analiz identic nu trebuie s interval de timp posibil de un operator
depeasc 1,4 mg/kg. care utilizeaz aceeai aparatur pe
7.1.2. Analiza untului concentrat depeasc 1,6 mg/kg.
Diferena dintre rezultatele a dou a) Analiza untului
determinri efectuate n cel mai scurt Diferena dintre rezultatele a dou
interval de timp posibil de un operator laboratoare diferite care utilizeaz
care utilizeaz aceeai aparatur pe aparatur diferit pe material de analiz
material de analiz identic nu trebuie s identic nu trebuie s depeasc
depeasc 1,6 mg/kg. 4,7 mg/kg.
b) Analiza untului concentrat
7.2. Reproductibilitate Diferena dintre rezultatele a dou
7.2.1. Analiza untului laboratoare diferite care utilizeaz
Diferena dintre rezultatele a dou identic nu trebuie s depeasc
determinri efectuate de operatori din 5,3 mg/kg.
4,7 mg/kg.
7.3. Analiza untului concentrat

5,3 mg/kg.
7.4. Sursa datelor de precizie
Datele de precizie au fost determinate

printr-un experiment realizat n 1995, n
cadrul cruia au participat 11 laboratoare
i s-au folosit 12 probe urmrite (ase
duplicate prob martor) pentru unt i 12
probe urmrite (ase duplicate prob
martor) pentru unt concentrat.

beta-apo-8'-carotenic n untul concentrat i n unt, pct. 8. Limitele Alimentare armonizat
de toleran
concentrat i n unt, pct. 8. Limitele de
1) Pentru a verifica marcarea corect a
toleran produsului, trebuie prelevate trei
probe din produsul studiat.
8.1. Pentru a verifica marcarea corect a 2) Unt
produsului, trebuie prelevate trei probe a) Rata de ncorporare pentru unt,
din produsul studiat. avnd n vedere absorbana de
fond, este de 22 mg/kg
8.2. Unt b) Rezultatele pentru cele trei probe
8.2.1. Rata de ncorporare pentru unt, obinute n urma analizei
avnd n vedere absorbana de fond, este produsului se utilizeaz la
de 22 mg/kg. verificarea ratei i a omogenitii
8.2.2. Rezultatele pentru cele trei probe de ncorporare a marcatorilor, iar
cel mai slab rezultat se compar cu
obinute n urma analizei produsului se
urmtoarele limite:
utilizeaz la verificarea ratei i a - 17,7 mg/kg (95 % din rata
omogenitii de ncorporare a minim de ncorporare);
marcatorilor, iar cel mai slab rezultat se - 12,2 mg/kg (70 % din rata
compar cu urmtoarele limite: minim de ncorporare).
17,7 mg/kg (95 % din rata minim de Concentraia marcatorului din proba cu
ncorporare); rezultatul cel mai slab este utilizat prin
12,2 mg/kg (70 % din rata minim de interpolare ntre 17,7 mg/kg
i 12,2 mg/kg.
ncorporare).
3) Unt concentrat
a) Rata de ncorporare pentru untul
interpolare ntre 17,7 mg/kg concentrat, avnd n vedere
i 12,2 mg/kg. absorbana de fond, este de
8.3. Unt concentrat 24 mg/kg.
8.3.1. Rata de ncorporare pentru untul b) Rezultatele pentru cele trei probe
concentrat, avnd n vedere absorbana obinute n urma analizei
de fond, este de 24 mg/kg. produsului se utilizeaz la
Rezultatele pentru cele trei probe verificarea ratei i a omogenitii
obinute n urma analizei produsului se de ncorporare a marcatorilor, iar
utilizeaz la verificarea ratei i a cel mai slab rezultat se compar cu
omogenitii de ncorporare a urmtoarele limite:
marcatorilor, iar cel mai slab rezultat se - 19,2 mg/kg (95 % din rata
compar cu urmtoarele limite: minim de ncorporare);
19,2 mg/kg (95 % din rata minim de - 13,2 mg/kg (70 % din rata
ncorporare); minim de ncorporare).
13,2 mg/kg (70 % din rata minim Concentraia marcatorului din proba cu
de ncorporare).
i 13,2 mg/kg.
i 13,2 mg/kg.
Anexa VIII (art. 5) Determinarea sitosterolului sau a stigmasterolului Agriculturii i intrrii n vigoare
sitosterolului sau a stigmasterolului din unt i unt concentrat prin Industriei a actului naional
din unt i unt concentrat prin cromatografia n faz gazoas cu Alimentare armonizat
coloan capilar, pct. 1. Obiectul i
cromatografia n faz gazoas cu
coloan capilar, pct. 1. Obiectul i Metoda implic o procedur care
domeniul de aplicare permite determinarea cantitativ a
sitosterolului i a stigmasterolului din
Metoda implic o procedur care unt i din untul concentrat. Coninutul de
permite determinarea cantitativ a sitosterol reprezint suma cantitilor de
sitosterolului i a stigmasterolului din -sitosterol i de 22-dihidro--sitosterol,
unt i din untul concentrat. Coninutul de ceilali sitosteroli fiind considerai
nesemnificativi.
sitosterol reprezint suma cantitilor de
-sitosterol i de 22-dihidro--sitosterol,
ceilali sitosteroli fiind considerai
nesemnificativi.

coloan capilar, pct. 2. Principiu
Untul sau untul concentrat este
coloan capilar, pct. 2. Principiu saponificat cu hidroxid de potasiu ntr-o
soluie de etanol, iar substanele
Untul sau untul concentrat este nesaponificabile sunt extrase cu ajutorul
saponificat cu hidroxid de potasiu ntr-o dietil eterului.
soluie de etanol, iar substanele Sterolii se transform n trimetil-silil-
nesaponificabile sunt extrase cu ajutorul eteri i sunt analizai prin cromatografie
dietil eterului. n faz de gaz cu coloan capilar prin
raportare la un etalon intern/betulina.
Sterolii se transform n trimetil-silil-
eteri i sunt analizai prin cromatografie
n faz de gaz cu coloan capilar prin
raportare la un etalon intern/betulina.

coloan capilar, pct. 3. Aparatur
1) Balon de saponificare de 150 ml,
coloan capilar, pct. 3. Aparatur dotat cu un refrigerator cu reflux cu
capete rodate
3.1. Balon de saponificare de 150 ml,
2) Conducte de decantare de 500 ml
dotat cu un refrigerator cu reflux cu 3) Baloane de 250 ml
capete rodate 4) Conducte de egalizare a presiunii, de
250 ml sau cu o capacitate similar,
3.2. Conducte de decantare de 500 ml pentru a colecta dietil eterul residual
5) Coloan de sticl de 350 mm
20 mm, prevzut cu un racord cu
3.3. Baloane de 250 ml
frit
6) Baie de ap sau izoterm
3.4. Conducte de egalizare a presiunii, 7) Eprubete de reacie de 2 ml
de 250 ml sau cu o capacitate similar, 8) Cromatograf cu gaz care poate fi
pentru a colecta dietil eterul residual utilizat cu coloan capilar, prevzut
cu un dispozitiv de scindare format
3.5. Coloan de sticl de 350 mm din urmtoarele:
20 mm, prevzut cu un racord cu frit a) etuv cu termostat pentru coloane,
care poate menine temperatura
3.6. Baie de ap sau izoterm dorit cu o precizie de 1 C;
b) injector termoreglabil;
c) detector cu ionizare n flacr i
3.7. Eprubete de reacie de 2 ml convertor-amplificator;
d) integrator-nregistrator care poate
3.8. Cromatograf cu gaz care poate fi fi utilizat mpreunc cu
utilizat cu coloan capilar, prevzut cu convertorul-amplificator.
un dispozitiv de scindare format din 9) Coloan capilar din sticl de siliciu
urmtoarele: acoperit n ntregime de BP1 sau de
o substan echivalent (sau orice
3.8.1. etuv cu termostat pentru coloane, alt coloan cu rezoluie cel puin
egal) n strat uniform cu grosimea
care poate menine temperatura dorit cu
de 0,25 m; coloana trebuie s poat
o precizie de 1 C; reduce derivaii trimetil-silil ai
lanosterolului i ai sitosterolului.
3.8.2. injector termoreglabil; Este recomandabil s se utilizeze o
coloan cu lungimea de 12 m i
diametrul intern de 0,2 mm.
3.8.3. detector cu ionizare n flacr i 10) Microsering cu ac din oel
convertor-amplificator; inoxidabil de 1 l pentru
cromatografie cu gaz.
3.8.4. integrator-nregistrator care poate
fi utilizat mpreunc cu convertorul-
amplificator (3.8.3).
3.9. Coloan capilar din sticl de siliciu

acoperit n ntregime de BP1 sau de o
substan echivalent (sau orice alt
coloan cu rezoluie cel puin egal) n
strat uniform cu grosimea de 0,25 m;
coloana trebuie s poat reduce derivaii
trimetil-silil ai lanosterolului i ai
sitosterolului. Este recomandabil s se
utilizeze o coloan cu lungimea de 12 m
i diametrul intern de 0,2 mm.
3.10. Microsering cu ac din oel

inoxidabil de 1 l pentru cromatografie
cu gaz.
Anexa nr. 8 Determinarea Parial Nota 1 nu este Ministerul Din momentul

Anexa VIII (art. 5) Determinarea sitosterolului sau a stigmasterolului compatibil prevzut n actul Agriculturii i intrrii n vigoare
sitosterolului sau a stigmasterolului din unt i unt concentrat prin naional. Aceasta este o Industriei a actului naional
din unt i unt concentrat prin cromatografia n faz gazoas cu prevedere UE cu Alimentare armonizat
coloan capilar, pct. 4. Reactivi caracter opional.
coloan capilar, pct. 4. Reactivi calitate analitic recunoscut. Apa
utilizat trebuie s fie ap distilat sau
Toi reactivii utilizai trebuie s fie de ap de o puritate cel puin echivalent.
calitate analitic recunoscut. Apa 1) Etanol, cu o puritate de cel puin
95 %
2) Hidroxid de potasiu, soluie 60 %,
ap de o puritate cel puin echivalent. prin dizolvarea a 600 g de hidroxid
de potasiu (minimum 85 %) n ap,
4.1. Etanol, cu o puritate de cel puin la care se adaug ap pn la 1 l
95 % 3) Betulin cu o puritate de cel puin
99 %
4.2. Hidroxid de potasiu, soluie 60 %, a) Soluii de betulin n eter dietilic
prin dizolvarea a 600 g de hidroxid de Concentraia soluiei de betulin utilizat
potasiu (minimum 85 %) n ap, la care pentru determinarea sitosterolului
trebuie s fie de 1,0 mg/ml.
se adaug ap pn la 1 l
Concentraia soluiei de betulin utilizat
pentru determinarea stigmasterolului
4.3. Betulin cu o puritate de cel puin trebuie s fie de 0,4 mg/ml.
99 % 4) Eter dietilic de puritate analitic
(fr peroxizi sau reziduuri).
4.3.1. Soluii de betulin n eter dietilic 5) Sulfat de sodiu anhidru, granulat,
(4.4) deshidratat n prealabil la 102 C
timp de 2 ore.
4.3.1.1. Concentraia soluiei de betulin 6) Reactiv de sililare (TRI-SIL) sau un
reactiv echivalent (Important: TRI-
utilizat pentru determinarea
SIL este inflamabil i toxic, coroziv
sitosterolului trebuie s fie de 1,0 mg/ml. i are un posibil potenial
cancerigen. Personalul de laborator
4.3.1.2. Concentraia soluiei de betulin trebuie s cunoasc normele de
utilizat pentru determinarea siguran aplicabile n cazul
stigmasterolului trebuie s fie de utilizrii TRI-SIL i trebuie s ia
0,4 mg/ml. toate msurile de precauie care se
impun).
4.4. Eter dietilic de puritate analitic 7) Lanosterol
(fr peroxizi sau reziduuri). 8) Sitosterol, cu puritate cunoscut,
mai mare sau egal cu 90 % (P)
4.5. Sulfat de sodiu anhidru, granulat, Soluia etalon de sitosterol: se prepar o
soluie cu o precizie de 0,001 mg/ml,
deshidratat n prealabil la 102 C timp de
coninnd aproximativ 0,5 mg/ml (W1)
2 ore. de sitosterol n eter dietilic
9) Stigmasterol, cu puritate cunoscut,
4.6. Reactiv de sililare, de exemplu, mai mare sau egal cu 90 % (P)
TRI-SIL (poate fi procurat de la Pierce Soluie etalon de stigmasterol: se prepar
Chemical Co., Categoria nr. 49001) sau o soluie cu o precizie de 0,001 mg/ml,
un reactiv echivalent (Important: TRI- coninnd aproximativ 0,2 mg/ml (W1)
SIL este inflamabil i toxic, coroziv i de stigmasterol n eter dietilic
10) Amestec pentru testul de rezoluie.
are un posibil potenial cancerigen.
Se prepar o soluie coninnd
Personalul de laborator trebuie s 0,05 mg/ml de lanosterol i 0,5 mg/ml de
cunoasc normele de siguran aplicabile sitosterol n eter dietilic.
n cazul utilizrii TRI-SIL i trebuie s ia
toate msurile de precauie care se
impun).
4.7. Lanosterol
4.8. Sitosterol, cu puritate cunoscut,

Nota 1: Puritatea materialelor etalon

utilizate pentru calibrare trebuie
determinat prin metoda de normalizare.
Se presupune c toi sterolii din prob
sunt reprezentai n cromatogram, c
suprafaa total a vrfurilor reprezint
100 % din compuii sterolilor i c
sterolii dau aceeai reacie la detector.
Liniaritatea sistemului trebuie validat
pentru nivelurile de concentraie luate n
calcul.
4.8.1. Soluie etalon de sitosterol: se

prepar o soluie cu o precizie de
0,001 mg/ml, coninnd aproximativ
0,5 mg/ml (W1) de sitosterol (4.8) n eter
dietilic (4.4)
4.9. Stigmasterol, cu puritate cunoscut,

4.9.1. Soluie etalon de stigmasterol: se

prepar o soluie cu o precizie de
0,001 mg/ml, coninnd aproximativ
0,2 mg/ml (W1) de stigmasterol (4.9) n
eter dietilic (4.4)
4.10. Amestec pentru testul de rezoluie.

Se prepar o soluie coninnd
0,05 mg/ml de lanosterol (4.7)
i 0,5 mg/ml de sitosterol (4.8) n eter
dietilic (4.4)
Anexa nr. 8 Determinarea Parial Prima fraz din Nota Ministerul Din momentul
Anexa VIII (art. 5) Determinarea sitosterolului sau a stigmasterolului compatibil 6 nu este prevzut n Agriculturii i intrrii n vigoare
sitosterolului sau a stigmasterolului din unt i unt concentrat prin actul naional. Aceasta Industriei a actului naional
din unt i unt concentrat prin cromatografia n faz gazoas cu este o prevedere UE cu Alimentare armonizat
coloan capilar, pct. 5. Prepararea caracter opional.
soluiilor etalon pentru cromatografie
coloan capilar, pct. 5. Metod Se adaug soluia etalon intern la soluia
etalon de sterol adecvat i, simultan, la
5.1. Prepararea soluiilor etalon pentru proba saponificat (punctul 6,
cromatografie subpunctul 2).
1) Soluia cromatografic etalon de
Se adaug soluia etalon intern (4.3.1) la sitosterol: se transfer 1 ml de
soluia etalon de sterol adecvat i, soluie etalon de sitosterol n fiecare
simultan, la proba saponificat (a se dintre cele dou eprubete de reacie
vedea 5.2.2). i se elimin dietil eterul sub flux de
azot. Se adaug 1 ml de soluie
5.1.1. Soluia cromatografic etalon de etalon intern i se elimin dietil
eterul sub flux de azot
sitosterol: se transfer 1 ml de soluie
2) Soluia cromatografic etalon de
etalon de sitosterol (4.8.1) n fiecare stigmasterol: se transfer 1 ml de
dintre cele dou eprubete de reacie (3.7) soluie etalon de stigmasterol n
i se elimin dietil eterul sub flux de fiecare dintre cele dou eprubete de
azot. Se adaug 1 ml de soluie etalon reacie i se elimin dietil eterul sub
intern (4.3.1.1) i se elimin dietil eterul flux de azot. Se adaug 1 ml de
soluie etalon intern i se elimin
sub flux de azot.
dietil eterul sub flux de azot.
Pct. 6. Prepararea substanelor
5.1.2. Soluia cromatografic etalon de nesaponificabile
stigmasterol: se transfer 1 ml de soluie 1) Se topete proba de unt la o
etalon de stigmasterol (4.9.1) n fiecare temperatur de maximum 35 C; se
dintre cele dou eprubete de reacie (3.7) amestec cu grij.
i se elimin dietil eterul sub flux de Se cntrete, cu o precizie de 1 mg,
azot. Se adaug 1 ml de soluie etalon aproximativ 1 g de unt (W2) sau de unt
concentrat (W2) ntr-un balon de 150 ml.
intern (4.3.1.2) i se elimin dietil eterul Se adaug 50 ml de etanol i 10 ml de
sub flux de azot. soluie de hidroxid de potasiu. Se
adapteaz refrigeratorul cu reflux i se
5.2. Prepararea substanelor aduce la aproximativ 75 C timp de 30
de minute. Se deconecteaz
nesaponificabile
refrigeratorul i se las balonul s se
rceasc la temperatura camerei.
5.2.1. Se topete proba de unt la o 2) Se adaug 1,0 ml de soluie etalon
temperatur de maximum 35 C; se intern n balon, n cazul n care se
amestec cu grij. determin sitosterolul, sau, n cazul
n care se determin stigmasterolul.
Se cntrete, cu o precizie de 1 mg, Se amestec bine. Se transfer
aproximativ 1 g de unt (W2) sau de unt cantitativ coninutul balonului ntr-o
concentrat (W2) ntr-un balon de 150 ml conduct de decantare de 500 ml, se
spal balonul cu 50 ml de ap, apoi
(3.1). Se adaug 50 ml de etanol (4.1)
cu 250 ml de eter dietilic. Se agit
i 10 ml de soluie de hidroxid de puternic conducta de decantare timp
potasiu (4.2). Se adapteaz refrigeratorul de 2 minute i se las fazele s se
cu reflux i se aduce la aproximativ separe. Se elimin faza apoas
75 C timp de 30 de minute. Se inferioar i se spal faza eteric
deconecteaz refrigeratorul i se las agitndu-se 4 pri alicote succesive
de 100 ml ap.
balonul s se rceasc la temperatura
Nota 2: Pentru a evita formarea unei
camerei. emulsii, este neaprat necesar ca primele
dou splri cu ap s se efectueze uor
5.2.2. Se adaug 1,0 ml de soluie etalon (10 rotaii). Pentru a treia splare, se
intern n balon (4.3.1.1), n cazul n care poate agita mai puternic timp de 30 de
se determin sitosterolul, sau (4.3.1.2), secunde. n cazul n care se formeaz o
n cazul n care se determin emulsie, aceasta poate fi eliminat prin
stigmasterolul. Se amestec bine. Se adugarea a 5 pn la 10 ml de etanol. n
cazul n care se adaug etanol, este
transfer cantitativ coninutul balonului
absolut necesar s se efectueze nc dou
ntr-o conduct de decantare de 500 ml
splri puternice cu ap.
(3.2), se spal balonul cu 50 ml de ap, 3) Se trece faza eteric limpede i
apoi cu 250 ml de eter dietilic (4.4). Se desaponificat pe o coloan de sticl
agit puternic conducta de decantare care conine 30 g de sulfat de sodiu
anhidru. Se colecteaz eterul ntr-un
timp de 2 minute i se las fazele s se
balon de 250 ml. Se adaug bile
separe. Se elimin faza apoas inferioar antiproiecie i se evapor pn la
i se spal faza eteric agitndu-se 4 uscare aproape complet ntr-o baie
pri alicote succesive de 100 ml ap. de ap sau ntr-o izoterm,
colectndu-se solvenii care trebuie
Nota 2: Pentru a evita formarea unei eliminai.
emulsii, este neaprat necesar ca primele Nota 3: n cazul n care anumite pri
dou splri cu ap s se efectueze uor din prob se evapor n uscat la o
temperatur prea ridicat, este posibil s
(10 rotaii). Pentru a treia splare, se
se piard cantiti de sterol.
poate agita mai puternic timp de 30 de Pct. 7. Prepararea trimetil-silil-
secunde. n cazul n care se formeaz o eterilor
emulsie, aceasta poate fi eliminat prin 1) Se transfer soluia de eter rmas n
adugarea a 5 pn la 10 ml de etanol. n balon ntr-o eprubet de reacie de
cazul n care se adaug etanol, este 2 ml cu ajutorul a 2 ml de dietil eter
absolut necesar s se efectueze nc dou i se elimin eterul sub flux de azot.
Se spal balonul cu dou pri
splri puternice cu ap.
alicote suplimentare de 2 ml de eter
dietilic, transferndu-se coninutul n
5.2.3. Se trece faza eteric limpede i eprubet i eliminndu-se eterul de
desaponificat pe o coloan de sticl fiecare dat sub flux de azot
(3.5) care conine 30 g de sulfat de sodiu 2) Se silileaz proba prin adugarea a
anhidru (4.5). Se colecteaz eterul ntr- 1 ml de TRI-SIL. Se astup eprubeta
un balon de 250 ml (3.3). Se adaug bile i se agit puternic pentru a produce
dizolvarea. n cazul n care proba nu
antiproiecie i se evapor pn la uscare
s-a dizolvat complet, se aduce la
aproape complet ntr-o baie de ap sau temperatura de 65-70 C. Se las s
ntr-o izoterm, colectndu-se solvenii stea cel puin 5 minute nainte de a
se injecta n cromatograful cu gaz.
care trebuie eliminai. Se silileaz etaloanele n acelai
mod ca i probele. Se silileaz
Nota 3: n cazul n care anumite pri amestecul pentru testul de rezoluie
din prob se evapor n uscat la o n acelai mod ca i probele.
Nota 4: Sililarea trebuie efectuat ntr-un
temperatur prea ridicat, este posibil s
mediu anhidru. Sililarea incomplet a
se piard cantiti de sterol. betulinei se recunoate prin obinerea
unui al doilea vrf apropiat de cel al
5.3. Prepararea trimetil-silil-eterilor betulinei.
Prezena etanolului n timpul sililrii va
5.3.1. Se transfer soluia de eter rmas interfera cu procesul de sililare. Acest
n balon ntr-o eprubet de reacie de fapt poate fi consecina unei splri
2 ml (3.7) cu ajutorul a 2 ml de dietil insuficiente n momentul extragerii. n
eter i se elimin eterul sub flux de azot. cazul n care aceast problem persist,
n etapa de extragere se va include o a
Se spal balonul cu dou pri alicote
cincea splare, cu agitare puternic timp
suplimentare de 2 ml de eter dietilic, de 30 de secunde.
transferndu-se coninutul n eprubet i Pct. 8. Alegerea condiiilor pentru
eliminndu-se eterul de fiecare dat sub analiza prin cromatografie cu gaz
flux de azot. Se instaleaz cromatograful cu gaz
conform instruciunilor productorului.
5.3.2. Se silileaz proba prin adugarea a Condiiile pentru procedur sunt:
1) temperatura coloanei: 265 C;
1 ml de TRI-SIL (4.6). Se astup
2) temperatura injectorului: 265 C;
eprubeta i se agit puternic pentru a 3) temperatura detectorului: 300 C;
produce dizolvarea. n cazul n care 4) debitul gazului vector: 0,6 ml/min;
proba nu s-a dizolvat complet, se aduce 5) presiunea hidrogenului: 84 kPa;
la temperatura de 65-70 C. Se las s 6) presiunea aerului: 155 kPa;
stea cel puin 5 minute nainte de a se 7) fracionarea probei: de la 10:1 la
injecta n cromatograful cu gaz. Se 50:1; raportul de fracionare
trebuie optimizat n funcie de
silileaz etaloanele n acelai mod ca i
instruciunile productorului i de
probele. Se silileaz amestecul pentru
liniaritatea rspunsului detectorului
testul de rezoluie (4.10) n acelai mod i validat ulterior n funcie de
ca i probele. intervalele de concentraii luate n
considerare.
Nota 4: Sililarea trebuie efectuat ntr-un Nota 5: Camera de vaporizare trebuie
curat regulat.
mediu anhidru. Sililarea incomplet a
8) cantitatea de substan injectat:
betulinei se recunoate prin obinerea 1 l de soluie TMSE.
unui al doilea vrf apropiat de cel al Se las sistemul s se echilibreze i se
betulinei. obine un raspuns stabil nainte de a se
efectua vreo analiz
Prezena etanolului n timpul sililrii va Aceste condiii pot fi modificate n
interfera cu procesul de sililare. Acest funcie de caracteristicile coloanei i ale
fapt poate fi consecina unei splri cromatografului cu gaz, pentru a se
obine cromatograme care s
insuficiente n momentul extragerii. n
ndeplineasc condiiile urmtoare:
cazul n care aceast problem persist, a) vrful sitosterolului trebuie s
n etapa de extragere se va include o a prezinte o rezoluie suficient fa
cincea splare, cu agitare puternic timp de lanosterol
de 30 de secunde. b) timpii relativi de retenie ai
sterolilor de mai jos trebuie s fie
5.4. Analiza prin cromatografie cu gaz de aproximativ:
5.4.1. Alegerea condiiilor pentru colesterol: 1,0;
procedur stigmasterol: 1,3;
sitosterol: 1,5;
Se instaleaz cromatograful cu gaz betulin: 2,5;
conform instruciunilor productorului. c) timpul de retenie al betulinei
Condiiile indicate pentru procedur sunt trebuie s fie de aproximativ 24
urmtoarele: minute.
temperatura coloanei: 265 C; Pct. 9. Protocolul de analiz
temperatura injectorului: 265 C; Se injecteaz 1 l de soluie etalon
temperatura detectorului: 300 C; sililat (stigmasterol sau sitosterol) i se
debitul gazului vector: 0,6 ml/min; ajusteaz parametrii de calibrare ai
presiunea hidrogenului: 84 kPa; integratorului.
presiunea aerului: 155 kPa; Se injecteaz din nou 1 l de soluie
fracionarea probei: de la 10:1 la etalon sililat pentru a se determina
50:1; raportul de fracionare trebuie coeficientul de rspuns fa de betulin.
optimizat n funcie de instruciunile Se injecteaz 1 l de soluie de prob
productorului i de liniaritatea sililat i se msoar suprafaa vrfurilor.
rspunsului detectorului i validat Fiecare serie de probe trebuie precedat
ulterior n funcie de intervalele de i urmat de o injectare de soluie etalon.
concentraii luate n considerare. n general, injectarea soluiei de prob se
poate efectua dup o serie de ase probe.
Nota 5: Curarea regulat a camerei de Nota 6: Integrarea vrfului sitosterolului
vaporizare este deosebit de important. trebuie s nglobeze suprafaa vrfului
cantitatea de substan injectat: 1 l 22- dihidro--sitosterolului
de soluie TMSE. (stigmastanol) care apare imediat dup
sitosterol n momentul evalurii
Se las sistemul s se echilibreze i se
sitosterolului total.
obine un rspuns suficient de stabil
nainte de a se efectua vreo analiz.
Aceste condiii pot fi modificate n
funcie de caracteristicile coloanei i ale
cromatografului cu gaz, pentru a se
obine cromatograme care s
ndeplineasc condiiile urmtoare:
vrful sitosterolului trebuie s
prezinte o rezoluie suficient fa de
lanosterol. Figura 1 prezint o
cromatogram tipic, cea care trebuie
obinut pentru un amestec sililat prin
testul de rezoluie (4.10);
timpii relativi de retenie ai sterolilor
de mai jos trebuie s fie de aproximativ:
colesterol: 1,0;
stigmasterol: 1,3;
sitosterol: 1,5;
betulin: 2,5;
timpul de retenie al betulinei trebuie
s fie de aproximativ 24 minute.
5.4.2. Protocolul de analiz
Se injecteaz 1 l de soluie etalon
sililat (stigmasterol sau sitosterol) i se
ajusteaz parametrii de calibrare ai
integratorului.
Se injecteaz din nou 1 l de soluie
etalon sililat pentru a se determina
coeficientul de rspuns fa de betulin.
Se injecteaz 1 l de soluie de prob
sililat i se msoar suprafaa vrfurilor.
Fiecare serie de probe trebuie precedat
i urmat de o injectare de soluie etalon.
n general, injectarea soluiei de prob se
poate efectua dup o serie de ase probe.
Nota 6: Integrarea vrfului
stigmasterolului trebuie s prezinte
curbele indicate la punctele 1, 2 i 3 din
figura 2b.
Integrarea vrfului sitosterolului trebuie

s nglobeze suprafaa vrfului 22-
dihidro--sitosterolului (stigmastanol)
care apare imediat dup sitosterol (a se
vedea figura 3b) n momentul evalurii
sitosterolului total.
coloan capilar, pct. 10. Calcularea
rezultatelor
coloan capilar, pct. 6. Calcularea Se determin suprafaa vrfurilor
rezultatelor sterolului i a vrfurilor betulinei n cele
dou etaloane, la nceputul i la finalul
6.1. Se determin suprafaa vrfurilor fiecrei serii, i se calculeaz R1:
sterolului i a vrfurilor betulinei n cele R1 - (suprafaa medie a vrfului
dou etaloane, la nceputul i la finalul sterolului n etalon)/(suprafaa medie a
fiecrei serii, i se calculeaz R1: vrfului betulinei n etalon)
Se determin suprafaa vrfului de sterol
(stigmasterol sau sitosterol) i a vrfului
R1=(suprafaa medie a vrfului sterolului
betulinei n prob i se calculeaz R2:
n etalon)/(suprafaa medie a vrfului R2 - (suprafaa vrfului sterolului n
betulinei n etalon) prob)/(suprafaa vrfului betulinei n
prob)
Se determin suprafaa vrfului de sterol W1- coninutul de sterol al etalonului
(stigmasterol sau sitosterol) i a vrfului (mg) din 1 ml de soluie etalon
betulinei n prob i se calculeaz R2: W2- masa probei (g)
P - puritatea sterolului etalon
Coninutul de sterol din prob (mg/kg) =
R2=(suprafaa vrfului sterolului n
[(R 2) / (R 1)] [(W 1) / (W 2)] P 10.
prob)/(suprafaa vrfului betulinei n
prob)
W1= coninutul de sterol al etalonului

(mg) din 1 ml de soluie etalon (4.8.1
sau 4.9.1)
W2= masa probei (g) (5.2.1)
P= puritatea sterolului etalon (4.8 sau

4.9)
Coninutul de sterol din prob (mg/kg) =

[(R 2) / (R 1)] [(W 1) / (W 2)] P 10.
Anexa nr. 8 Determinarea Parial Pct. 7.1.3. i 7.2.3. din Ministerul Din momentul
Anexa VIII (art. 5) Determinarea sitosterolului sau a stigmasterolului compatibil actul comunitar nu Agriculturii i intrrii n vigoare
sitosterolului sau a stigmasterolului din unt i unt concentrat prin sunt prevzute n actul Industriei a actului naional
din unt i unt concentrat prin cromatografia n faz gazoas cu naional. Aceasta este o Alimentare armonizat
coloan capilar, pct. 11. Precizia prevedere UE cu
metodei caracter opional.
coloan capilar, pct. 7. Precizia 1) Unt
metodei a) Repetabilitate
Stigmasterol
7.1. Unt Diferena dintre rezultatele a dou
7.1.1. Repetabilitate interval de timp posibil de un operator
7.1.1.1. Stigmasterol material de analiz identic nu trebuie s
depeasc 19,3 mg/kg.
Diferena dintre rezultatele a dou Sitosterol
determinri efectuate n cel mai scurt Diferena dintre rezultatele a dou
interval de timp posibil de un operator determinri efectuate n cel mai scurt
care utilizeaz aceeai aparatur pe interval de timp posibil de un operator
material de analiz identic nu trebuie s care utilizeaz aceeai aparatur pe
depeasc 19,3 mg/kg. material de analiz identic nu trebuie s
depeasc 23,0 mg/kg.
7.1.1.2. Sitosterol b) Reproductibilitate
Stigmasterol
Diferena dintre rezultatele a dou determinri efectuate de operatori din
determinri efectuate n cel mai scurt laboratoare diferite care utilizeaz
interval de timp posibil de un operator aparatur diferit pe material de analiz
care utilizeaz aceeai aparatur pe identic nu trebuie s depeasc
material de analiz identic nu trebuie s 31,9 mg/kg.
depeasc 23,0 mg/kg. Sitosterol
7.1.2. Reproductibilitate determinri efectuate de operatori din
7.1.2.1. Stigmasterol aparatur diferit pe material de analiz
identic nu trebuie s depeasc 8,7 %
Diferena dintre rezultatele a dou din valoarea medie a acestor determinri.
determinri efectuate de operatori din 2) Unt concentrat
laboratoare diferite care utilizeaz a) Repetabilitate
aparatur diferit pe material de analiz Stigmasterol
identic nu trebuie s depeasc Diferena dintre rezultatele a dou
31,9 mg/kg. determinri efectuate n cel mai scurt
7.1.2.2. Sitosterol care utilizeaz aceeai aparatur pe
Diferena dintre rezultatele a dou depeasc 10,2 mg/kg.
determinri efectuate de operatori din Sitosterol
laboratoare diferite care utilizeaz Diferena dintre rezultatele a dou
aparatur diferit pe material de analiz determinri efectuate n cel mai scurt
identic nu trebuie s depeasc 8,7 % interval de timp posibil de un operator
din valoarea medie a acestor care utilizeaz aceeai aparatur pe
determinri. material de analiz identic nu trebuie s
depeasc 3,6 % din valoarea medie a
7.1.3. Sursa datelor de precizie acestor determinri.
b) Reproductibilitate
Datele de precizie au fost determinate Stigmasterol
printr-un experiment realizat n 1992 n Diferena dintre rezultatele a dou
care au fost implicate opt laboratoare i laboratoare diferite care utilizeaz
ase probe (trei duplicate prob martor) aparatur diferit pe material de analiz
pentru stigmasterol i ase probe (trei identic nu trebuie s depeasc
duplicate prob martor) pentru sitosterol. 25,3 mg/kg.
Sitosterol
7.2. Unt concentrat Diferena dintre rezultatele a dou
7.2.1. Repetabilitate laboratoare diferite care utilizeaz
7.2.1.1. Stigmasterol identic nu trebuie s depeasc 8,9 %
din valoarea medie a acestor determinri.
depeasc 10,2 mg/kg.
7.2.1.2. Sitosterol

depeasc 3,6 % din valoarea medie a
acestor determinri.
7.2.2. Reproductibilitate
7.2.2.1. Stigmasterol
25,3 mg/kg.
7.2.2.2. Sitosterol

identic nu trebuie s depeasc 8,9 %
din valoarea medie a acestor
determinri.
7.2.3. Sursa datelor de precizie

printr-un experiment realizat n 1991 n
care au fost implicate opt laboratoare i
ase probe (trei duplicate prob martor)
pentru stigmasterol i ase probe (trei
duplicate prob martor) pentru sitosterol.
Anexa nr. 8 Determinarea Parial Ultimul alineat din Ministerul Din momentul
Anexa VIII (art. 5) Determinarea sitosterolului sau a stigmasterolului compatibil actul comunitar, ct si Agriculturii i intrrii n vigoare
sitosterolului sau a stigmasterolului din unt i unt concentrat prin figurile 1, 2a, 2b, 3a i Industriei a actului naional
din unt i unt concentrat prin cromatografia n faz gazoas cu 3b nu sunt prevzute n Alimentare armonizat
coloan capilar, pct. 12. Limite de actul naional. Aceasta
toleran este o prevedere UE cu
1) Pentru a verifica marcarea corect a caracter opional.
coloan capilar, pct. 8. Limite de produsului, trebuie prelevate trei
toleran probe din produsul studiat.
2) Unt
8.1. Pentru a verifica marcarea corect a a) Stigmasterol
Rata de ncorporare pentru stigmasterol
produsului, trebuie prelevate trei probe
este de 150 g de stigmasterol, cu o
din produsul studiat. puritate de cel puin 95 %, pe o ton de
unt, respectiv 142,5 mg/kg, sau de 170 g
8.2. Unt de stigmasterol, cu o puritate de cel
puin 85 %, pe o ton de unt, respectiv
8.2.1. Stigmasterol 144,5 mg/kg.
Rezultatele pentru cele trei probe
8.2.1.1. Rata de ncorporare pentru obinute n urma analizei produsului se
stigmasterol este de 150 g de utilizeaz la verificarea ratei i a
stigmasterol, cu o puritate de cel puin omogenitii de ncorporare a
95 %, pe o ton de unt, respectiv
142,5 mg/kg, sau de 170 g de - 115,8 mg/kg (rat de ncorporare
stigmasterol, cu o puritate de cel puin minim de 95 % pentru
85 %, pe o ton de unt, respectiv stigmasterol cu o puritate de
144,5 mg/kg. 95 %);
- 117,7 mg/kg (rat de ncorporare
8.2.1.2. Rezultatele pentru cele trei minim de 95 % pentru
stigmasterol cu o puritate de
probe obinute n urma analizei
85 %);
produsului se utilizeaz la verificarea - 80,1 mg/kg (rat de ncorporare
ratei i a omogenitii de ncorporare a minim de 70 % pentru
marcatorilor, iar cel mai slab rezultat se stigmasterol cu o puritate de
compar cu urmtoarele limite: 95 %);
- 81,5 mg/kg (rat de ncorporare
115,8 mg/kg (rat de ncorporare minim de 70 % pentru
minim de 95 % pentru stigmasterol cu o
puritate de 95 %); 85 %).
117,7 mg/kg (rat de ncorporare Concentraia marcatorului din proba cu
minim de 95 % pentru stigmasterol cu o rezultatul cel mai slab este utilizat prin
puritate de 85 %);
i 80,1 mg/kg sau ntre 117,7 mg/kg
80,1 mg/kg (rat de ncorporare i 81,5 mg/kg.
minim de 70 % pentru stigmasterol cu o b) Sitosterol
puritate de 95 %); Rata de ncorporare pentru sitosterol este
de 600 g de sitosterol, cu o puritate de
81,5 mg/kg (rat de ncorporare cel puin 90 %, pe o ton de unt,
minim de 70 % pentru stigmasterol cu o respectiv 540 mg/kg.
puritate de 85 %). Rezultatele pentru cele trei probe
Concentraia marcatorului din proba cu folosesc pentru verificarea ratei i
interpolare ntre 115,8 mg/kg compar cu urmtoarele limite:
i 80,1 mg/kg sau ntre 117,7 mg/kg - 482,6 mg/kg (rat de ncorporare
i 81,5 mg/kg. minim de 95 % pentru sitosterol
cu o puritate de 90 %);
8.2.2. Sitosterol - 347,6 mg/kg (rat de ncorporare
minim de 70 % pentru sitosterol
8.2.2.1. Rata de ncorporare pentru cu o puritate de 90 %).
sitosterol este de 600 g de sitosterol, cu o
puritate de cel puin 90 %, pe o ton de interpolare ntre 482,6 mg/kg
unt, respectiv 540 mg/kg. i 347,6 mg/kg.
3) Unt concentrate
8.2.2.2. Rezultatele pentru cele trei a) Stigmasterol
probe obinute n urma analizei Rata de ncorporare pentru stigmasterol
produsului se folosesc pentru verificarea este de 150 g de stigmasterol, cu o
ratei i omogenitii de ncorporare a puritate de cel puin 95 %, pe o ton de
unt concentrat, respectiv 142,5 mg/kg;
sau de 170 g de stigmasterol, cu o
compar cu urmtoarele limite: puritate de cel puin 85 %, pe o ton de
unt concentrat, respectiv 144,5 mg/kg.
482,6 mg/kg (rat de ncorporare Rezultatele pentru cele trei probe
minim de 95 % pentru sitosterol cu o obinute n urma analizei produsului se
utilizeaz la verificarea ratei i a
puritate de 90 %); omogenitii de ncorporare a
347,6 mg/kg (rat de ncorporare marcatorilor, iar cel mai slab rezultat se
minim de 70 % pentru sitosterol cu o compar cu urmtoarele limite:
puritate de 90 %). - 118,5 mg/kg (rat de ncorporare
minim de 95 % pentru
Concentraia marcatorului din proba cu stigmasterol cu o puritate de
rezultatul cel mai slab este utilizat prin 95 %);
interpolare ntre 482,6 mg/kg - 120,4 mg/kg (rat de ncorporare
i 347,6 mg/kg.
85 %);
8.3. Unt concentrat - 82,9 mg/kg (rat de ncorporare
8.3.1. Stigmasterol stigmasterol cu o puritate de
95 %);
8.3.1.1. Rata de ncorporare pentru - 84,3 mg/kg (rat de ncorporare
stigmasterol este de 150 g de minim de 70 % pentru
stigmasterol, cu o puritate de cel puin stigmasterol cu o puritate de
95 %, pe o ton de unt concentrat, 85 %).
respectiv 142,5 mg/kg; sau de 170 g de
stigmasterol, cu o puritate de cel puin interpolare ntre 118,5 mg/kg
85 %, pe o ton de unt concentrat, i 82,9 mg/kg sau ntre 120,4 mg/kg
respectiv 144,5 mg/kg. i 84,3 mg/kg.
b) Sitosterol
8.3.1.2. Rezultatele pentru cele trei Rata de ncorporare pentru sitosterol este
probe obinute n urma analizei de 600 g de sitosterol, cu o puritate de
cel puin 90 %, pe o ton de unt
produsului se utilizeaz la verificarea concentrat, respectiv 540 mg/kg.
ratei i a omogenitii de ncorporare aRezultatele pentru cele trei probe
utilizeaz la verificarea ratei i a
118,5 mg/kg (rat de ncorporare compar cu urmtoarele limite:
minim de 95 % pentru stigmasterol cu o - 480,9 mg/kg (rat de ncorporare
puritate de 95 %); minim de 95 % pentru sitosterol
120,4 mg/kg (rat de ncorporare cu o puritate de 90 %);
minim de 95 % pentru stigmasterol cu o - 345,9 mg/kg (rat de ncorporare
puritate de 85 %); minim de 70 % pentru sitosterol
cu o puritate de 90 %).
82,9 mg/kg (rat de ncorporare
minim de 70 % pentru stigmasterol cu o rezultatul cel mai slab este utilizat prin
puritate de 95 %); interpolare ntre 480,9 mg/kg
i 345,9 mg/kg.
minim de 70 % pentru stigmasterol cu o
puritate de 85 %).

i 82,9 mg/kg sau ntre 120,4 mg/kg
i 84,3 mg/kg.
8.3.2. Sitosterol
8.3.2.1. Rata de ncorporare pentru
sitosterol este de 600 g de sitosterol, cu o
puritate de cel puin 90 %, pe o ton de
unt concentrat, respectiv 540 mg/kg.
8.3.2.2. Rezultatele pentru cele trei
probe obinute n urma analizei
produsului se utilizeaz la verificarea
ratei i a omogenitii de ncorporare a
minim de 95 % pentru sitosterol cu o
puritate de 90 %);
minim de 70 % pentru sitosterol cu o
puritate de 90 %).
i 345,9 mg/kg.
Se prefer rezoluia complet, respectiv
vrful lanesterolului trebuie s revin la
linia de baz, nainte de a se ndrepta
ctre vrful sitosterolului, dei este
tolerat i o rezoluie incomplet.
Figura 2a Etalon stigmasterol
Figura 2b Prob de unt denaturat cu
stigmasterol
Not: Integrarea vrfului
stigmasterolului trebuie s includ toate
traseele cuprinse ntre punctele 1, 2 i 3.
Figura 3a Etalon sitosterol

Figura 3b Prob de unt denaturat cu
Anexa nr. 9 Metod de referin Compatibil - Ministerul Din momentul
Anexa IX (art. 6) Metod de referin pentru detectarea laptelui de vac i a Agriculturii i intrrii n vigoare
pentru detectarea laptelui de vac i a cazeinatului n brnzeturile produse Industriei a actului naional
cazeinatului n brnzeturile produse din lapte de oaie, lapte de capr sau Alimentare armonizat
lapte de bivoli sau din amestecuri de
din lapte de oaie, lapte de capr sau
lapte de oaie, capr i bivoli, pct. 1.
lapte de bivoli sau din amestecuri de Obiectul
lapte de oaie, capr i bivoli, pct. 1. Detectarea laptelui de vac i a cazeinei
Obiectul n brnzeturile produse din lapte de oaie,
lapte de capr, lapte de bivoli sau din
Detectarea laptelui de vac i a cazeinei amestecuri de lapte de oaie, capr i
n brnzeturile produse din lapte de oaie, bivoli prin focalizarea izoelectric a -
lapte de capr, lapte de bivoli sau din cazeinelor dup plasminoliz.
amestecuri de lapte de oaie, capr i
bivoli prin focalizarea izoelectric a -
cazeinelor dup plasminoliz.

lapte de bivoli sau din amestecuri de Domeniul de aplicare
lapte de oaie, capr i bivoli, pct. 2. Aceast metod poate fi folosit pentru
Domeniul de aplicare detectarea sensibil i specific a laptelui
de vac natural i tratat termic i a
Aceast metod poate fi folosit pentru cazeinatului n brnzeturile proaspete i
detectarea sensibil i specific a laptelui maturate produse din lapte de oaie, lapte
de vac natural i tratat termic i a de capr, lapte de bivoli sau din
amestecuri de lapte de oaie, capr i
cazeinatului n brnzeturile proaspete i
bivoli. Nu poate fi folosit pentru
maturate produse din lapte de oaie, lapte
detectarea falsificrii laptelui i a brnzei
de capr, lapte de bivoli sau din cu concentrate de proteine de zer de
amestecuri de lapte de oaie, capr i bovine tratate termic.
bivoli. Nu poate fi folosit pentru
detectarea falsificrii laptelui i a brnzei
cu concentrate de proteine de zer de
bovine tratate termic.

lapte de bivoli sau din amestecuri de Principiul metodei
lapte de oaie, capr i bivoli, pct. 3. 1) Izolarea cazeinei din brnz i din
Principiul metodei probele de referin
2) Dizolvarea cazeinelor izolate i
3.1. Izolarea cazeinei din brnz i din tratarea acestora prin clivare
probele de referin plasminic
3) Focalizarea izoelectric a cazeinelor
3.2. Dizolvarea cazeinelor izolate i tratate cu plasmin n prezena ureii
i colorarea proteinelor
tratarea acestora prin clivare plasminic
4) Evaluarea benzilor colorate de 2- i
(EC.3.4.21.7) 3-cazein (dovezi ale prezenei
laptelui de vac) prin compararea
3.3. Focalizarea izoelectric a cazeinelor benzilor obinute din prob cu
tratate cu plasmin n prezena ureii i benzile obinute pe acelai gel din
colorarea proteinelor probele de referin coninnd 0 %
i 1 % lapte de vac
3.4. Evaluarea benzilor colorate de 2- i
3-cazein (dovezi ale prezenei laptelui
de vac) prin compararea benzilor
obinute din prob cu benzile obinute pe
acelai gel din probele de referin
coninnd 0 % i 1 % lapte de vac.
Anexa nr. 9 Metod de referin Parial Pct. 4.8.1. din actul Ministerul Din momentul
Anexa IX (art. 6) Metod de referin pentru detectarea laptelui de vac i a compatibil comunitar nu este Agriculturii i intrrii n vigoare
pentru detectarea laptelui de vac i a cazeinatului n brnzeturile produse prevzut n actul Industriei a actului naional
cazeinatului n brnzeturile produse din lapte de oaie, lapte de capr sau naional. Aceasta este o Alimentare armonizat
lapte de bivoli sau din amestecuri de prevedere UE cu
lapte de oaie, capr i bivoli, pct. 4. caracter opional.
lapte de bivoli sau din amestecuri de Reactivi
lapte de oaie, capr i bivoli, pct. 4. n afara cazurilor n care se precizeaz
Reactivi altceva, produsele chimice utilizate
trebuie s fie de puritate analitic. Apa
n afara cazurilor n care se precizeaz folosit trebuie s fie dublu-distilat sau
altceva, produsele chimice utilizate de o puritate echivalent.
trebuie s fie de puritate analitic. Apa Not: Urmtoarele detalii se aplic
gelurilor de poliacrilamide cu coninut
folosit trebuie s fie dublu-distilat sau
de uree preparate n laborator, cu
de o puritate echivalent. dimensiunile de 265 125 0,25 mm.
n cazul n care se folosesc geluri de alte
Not: Urmtoarele detalii se aplic dimensiuni sau tipuri, poate fi necesar
gelurilor de poliacrilamide cu coninut modificarea condiiilor de separare.
de uree preparate n laborator, cu Focalizarea izoelectric
dimensiunile de 265 125 0,25 mm. 1) Reactivi pentru producerea gelurilor
n cazul n care se folosesc geluri de alte de poliacrilamide cu coninut de
uree
dimensiuni sau tipuri, poate fi necesar a) Soluie stock de gel
modificarea condiiilor de separare. Se dizolv n ap:
Focalizarea izoelectric 4,85 g acrilamid
4.1. Reactivi pentru producerea 0,15 g N, N'-metilen-bis-acrilamid

gelurilor de poliacrilamide cu coninut (BIS)
de uree
48,05 g uree
4.1.1. Soluie stock de gel
15,00 g glicerol (87 % m/m)
Se dizolv n ap:
i se completeaz cu ap pn la 100 ml,
4,85 g acrilamid apoi se pstreaz produsul obinut n
refrigerator, ntr-un recipient de sticl de
0,15 g N, N'-metilen-bis-acrilamid culoare maro.
Not: n locul cantitilor fixe de
(BIS)
acrilamide neurotoxice menionate mai
sus se poate folosi o soluie de
48,05 g uree acrilamid/BIS prefabricat disponibil
n comer. n cazul n care o asemenea
15,00 g glicerol (87 % m/m) soluie conine 30 % m/v acrilamid
i 0,8 % m/v BIS, cantitile de
i se completeaz cu ap pn la 100 ml, acrilamid i BIS din preparatul de mai
apoi se pstreaz produsul obinut n sus se nlocuiesc cu 16,2 ml de soluie.
refrigerator, ntr-un recipient de sticl de Termenul de valabilitate a soluiei
culoare maro. stock este de maximum 10 zile; n
cazul n care conductibilitatea acesteia
este mai mare de 5 S, se deionizeaz
Not: n locul cantitilor fixe de
substana prin agitare cu 2 g Amberlite
acrilamide neurotoxice menionate mai MB-3 timp de 30 minute, ulterior se
sus se poate folosi o soluie de filtreaz printr-o membran de 0,45 m.
acrilamid/BIS prefabricat disponibil b) Soluia de gel
n comer. n cazul n care o asemenea Se prepar o soluie de gel amestecnd
aditivii i amfoliii cu soluia stock de
soluie conine 30 % m/v acrilamid gel.
i 0,8 % m/v BIS, cantitile de
acrilamid i BIS din preparatul de mai 9,0 ml soluie stock
sus se nlocuiesc cu 16,2 ml de soluie.
24 mg -alanin
Termenul de valabilitate a soluiei
stock este de maximum 10 zile; n
500 l amfolit pH 3,5-9,5
cazul n care conductibilitatea acesteia
este mai mare de 5 S, se deionizeaz
250 l amfolit pH 5-7
substana prin agitare cu 2 g Amberlite
MB-3 timp de 30 minute, ulterior se 250 l amfolit pH 6-8
filtreaz printr-o membran de 0,45 m. Se amestec soluia de gel i se
degazeific timp de dou sau trei minute
4.1.2. Soluia de gel ntr-o baie ultrasonic sau sub vid.
Not: Soluia de gel se prepar imediat
Se prepar o soluie de gel amestecnd nainte de a o turna (punctul 6,
aditivii i amfoliii cu soluia stock de subpunctul 2)).
c) Soluii catalizator
gel (a se vedea 4.1.1).
N, N, N' N' tetrametiletilendiamin
(Temed)
9,0 ml soluie stock 40 % m/v persulfat de amoniu (PER):
Se dizolv 800 mg PER n ap i se
24 mg -alanin completeaz cu ap pn la 2 ml.
Not: A se folosi ntotdeauna soluie
500 l amfolit pH 3,5-9,5 ( 9 ) PER proaspt preparat.
2) Fluid de contact - kerosen sau
250 l amfolit pH 5-7 (9) parafin lichid
3) Soluie anodic
250 l amfolit pH 6-8 (9) . Se dizolv n ap 5,77 g acid fosforic
(85 % m/m) i se dilueaz pn la
100 ml.
Se amestec soluia de gel i se
4) Soluie catodic
Se dizolv n ap 2,00 g hidroxid de
degazeific timp de dou sau trei minute sodiu i se dilueaz pn la 100 ml.
ntr-o baie ultrasonic sau sub vid. Prepararea probei
5) Reactivi pentru izolarea proteinelor
Not: Soluia de gel se prepar imediat a) Se dilueaz acid acetic (25,0 ml
acid acetic cristalizabil completat
nainte de a o turna (a se vedea 6.2).
cu ap pn la 100 ml)
b) Diclorometan
4.1.3. Soluii catalizator c) Aceton
6) Soluie tampon de dizolvare a
4.1.3.1. N, N, N' N' proteinelor
tetrametiletilendiamin (Temed) Se dizolv n ap:
4.1.3.2. 40 % m/v persulfat de amoniu 5,75 g glicerol (87 % m/m)

(PER):
24,03 g uree
Se dizolv 800 mg PER n ap i se
completeaz cu ap pn la 2 ml. 250 mg ditiotreitol
Not: A se folosi ntotdeauna soluie i se completeaz cu ap pn la 50 ml.

PER proaspt preparat.
Not: Se pstreaz substana n
4.2. Fluid de contact refrigerator, termen de valabilitate:
maximum o sptmn.
7) Reactivi pentru clivarea plasminic
Kerosen sau parafin lichid
a cazeinelor
a) Soluie tampon de carbonat de
4.3. Soluie anodic amoniu
Se titreaz pn la pH 8 o soluie de
Se dizolv n ap 5,77 g acid fosforic hidrogencarbonat de amoniu 0,2 mol/l
(85 % m/m) i se dilueaz pn la (1,58 g/100 ml ap) coninnd acid
100 ml. etilendiaminotetraacetic 0,05 mol/l
(EDTA, 1,46 g/100 ml) cu o soluie de
carbonat de amoniu 0,2 mol/l
4.4. Soluie catodic (1,92 g/100 ml ap) coninnd 0,05 mol/l
EDTA.
Se dizolv n ap 2,00 g hidroxid de b) Plasmin bovin, cu activitate de
sodiu i se dilueaz pn la 100 ml. minimum 5 U/ml
c) Soluie de acid -aminocaproic
pentru inhibarea enzimelor
Prepararea probei
Se dizolv 2,624 g acid -aminocaproic
(acid 6-amino-n-hexanoic) n 100 ml de
4.5. Reactivi pentru izolarea proteinelor etanol 40 % (v/v).
8) Standarde
4.5.1. Se dilueaz acid acetic (25,0 ml a) Amestecuri de lapte nchegat de
acid acetic cristalizabil completat cu oaie i capr cu coninutul de 0 %,
ap pn la 100 ml) respectiv 1 % lapte de vac.
b) Prepararea probelor de referin
4.5.2. Diclorometan provizorii de laborator din lapte de
bivoli nchegat coninnd 0 %
i 1 % lapte de vac.
4.5.3. Aceton
Laptele degresat se prepar prin
centrifugarea laptelui crud de bivoli
4.6. Soluie tampon de dizolvare a sau de vac n vrac la 37 C (2 500 g,
proteinelor timp de 20 minute). Dup rcirea rapid
a tubului i a coninutului la 6-8 C,
Se dizolv n ap stratul superior de grsime se
ndeprteaz n totalitate. Pentru
5,75 g glicerol (87 % m/m) prepararea probei etalon 1 % se adaug
5,00 ml de lapte de vac degresat la
24,03 g uree 495 ml lapte de bivoli degresat ntr-un
vas de 1 l, se ajusteaz pH-ul la 6,4 prin
250 mg ditiotreitol adugarea de acid lactic diluat (10 %
m/v). Se ajusteaz temperatura la 35 C
i se adaug 100 l de cheag de viel, se
i se completeaz cu ap pn la 50 ml. amestec timp de 1 minut, apoi se
acoper vasul cu o folie de aluminiu i
Not: Se pstreaz substana n se las la 35 C timp de 1 or pentru a se
refrigerator, termen de valabilitate: putea forma coagulul. Dup formarea
maximum o sptmn. acestuia, laptele nchegat este liofilizat n
ntregime fr omogenizare prealabil i
fr a se extrage zerul. Dup liofilizare,
4.7. Reactivi pentru clivarea plasminic
produsul se zdrobete pn se obine o
a cazeinelor pulbere fin omogen. Pentru prepararea
probei etalon 0 %, se urmeaz aceeai
4.7.1. Soluie tampon de carbonat de procedur folosind lapte degresat de
amoniu bivoli veritabil. Probele trebuie
pstrate la 20 C.
Se titreaz pn la pH 8 o soluie de Not: naintea preparrii probelor etalon,
hidrogencarbonat de amoniu 0,2 mol/l se recomand verificarea puritii
(1,58 g/100 ml ap) coninnd acid laptelui de bivoli prin focalizarea
izoelectric a cazeinelor tratate cu
etilendiaminotetraacetic 0,05 mol/l
plasmin.
(EDTA, 1,46 g/100 ml) cu o soluie de Reactivi pentru colorarea proteinelor
carbonat de amoniu 0,2 mol/l 9) Fixativ
(1,92 g/100 ml ap) coninnd 0,05 mol/l Se dizolv n ap 150 g acid
EDTA. tricloroacetic i se completeaz cu ap
pn la 1 000 ml.
4.7.2. Plasmin bovin (EC. 3.4.21.7), 10) Soluie pentru decolorare
Se dilueaz n ap distilat pn la
cu activitate de minimum 5 U/ml
2 000 ml 500 ml metanol i 200 ml acid
acetic cristalizabil.
4.7.3. Soluie de acid -aminocaproic Not: Se prepar zilnic o soluie
pentru inhibarea enzimelor proaspt de decolorare; soluia poate fi
preparat prin amestecarea de volume
Se dizolv 2,624 g acid -aminocaproic egale de soluii stock metanol 50 %
(acid 6-amino-n-hexanoic) n 100 ml de (v/v) i acid acetic cristalizabil 20 %
etanol 40 % (v/v). (v/v).
11) Soluii pentru colorare
a) Soluie pentru colorare (soluie
4.8. Standarde stock 1)
Se dizolv 3,0 g Albastru Briliant de
4.8.1. De la Institutul pentru Materiale Coomassie G-250 n 1 000 ml metanol
i Msurtori de Referin al Comisiei, 90 % (v/v) folosind un agitator magnetic
(timp de aproximativ 45 minute), apoi se
B-2440 Geel, Belgia pot fi obinute
filtreaz prin dou filtre pliate de vitez
probe de referin certificate obinute medie.
din amestecuri de lapte nchegat de oaie b) Soluie pentru colorare (soluie
i capr coninnd 0 %, respectiv 1 % stock 2)
lapte de vac. Se dizolv 5,0 g sulfat de cupru
pentahidrat n 1 000 ml acid acetic 20 %
4.8.2. Prepararea probelor de referin (v/v).
provizorii de laborator din lapte de c) Soluie pentru colorare (soluie de
lucru)
bivoli nchegat coninnd 0 % i 1 %
Se amestec 125 ml din fiecare soluie
lapte de vac stock imediat nainte de colorare.
Not: Se recomand prepararea soluiei
Laptele degresat se prepar prin de colorare n ziua folosirii acesteia.
centrifugarea laptelui crud de bivoli
sau de vac n vrac la 37 C (2 500 g,
timp de 20 minute). Dup rcirea rapid
a tubului i a coninutului la 6-8 C,
stratul superior de grsime se
ndeprteaz n totalitate. Pentru
prepararea probei etalon 1 % se adaug
5,00 ml de lapte de vac degresat la
495 ml lapte de bivoli degresat ntr-un
vas de 1 l, se ajusteaz pH-ul la 6,4 prin
adugarea de acid lactic diluat (10 %
m/v). Se ajusteaz temperatura la 35 C
i se adaug 100 l de cheag de viel
(activitatea reninic 1: 10 000, c.
3 000 U/ml), se amestec timp de 1
minut, apoi se acoper vasul cu o folie
de aluminiu i se las la 35 C timp de 1
or pentru a se putea forma coagulul.
Dup formarea acestuia, laptele nchegat
este liofilizat n ntregime fr
omogenizare prealabil i fr a se
extrage zerul. Dup liofilizare, produsul
se zdrobete pn se obine o pulbere
fin omogen. Pentru prepararea probei
etalon 0 %, se urmeaz aceeai
procedur folosind lapte degresat de
bivoli veritabil. Probele trebuie
pstrate la 20 C.
Not: naintea preparrii probelor etalon,

se recomand verificarea puritii
laptelui de bivoli prin focalizarea
izoelectric a cazeinelor tratate cu
plasmin.
Reactivi pentru colorarea proteinelor
4.9. Fixativ
Se dizolv n ap 150 g acid

tricloroacetic i se completeaz cu ap
pn la 1 000 ml.
4.10. Soluie pentru decolorare
Se dilueaz n ap distilat pn la
2 000 ml 500 ml metanol i 200 ml acid
acetic cristalizabil.
Not: Se prepar zilnic o soluie

proaspt de decolorare; soluia poate fi
preparat prin amestecarea de volume
egale de soluii stock metanol 50 %
(v/v) i acid acetic cristalizabil 20 %
(v/v).
4.11. Soluii pentru colorare
4.11.1. Soluie pentru colorare (soluie

stock 1)
Se dizolv 3,0 g Albastru Briliant de

Coomassie G-250 (C.I. 42655) n
1 000 ml metanol 90 % (v/v) folosind un
agitator magnetic (timp de aproximativ
45 minute), apoi se filtreaz prin dou
filtre pliate de vitez medie.

stock 2)
Se dizolv 5,0 g sulfat de cupru

pentahidrat n 1 000 ml acid acetic 20 %
(v/v).

de lucru)
Se amestec 125 ml din fiecare soluie

stock (4.11.1, 4.11.2) imediat nainte
de colorare.
Not: Se recomand prepararea soluiei

de colorare n ziua folosirii acesteia.

lapte de bivoli sau din amestecuri de Aparatur
lapte de oaie, capr i bivoli, pct. 5. 1) Plci de sticl (265 125 4 mm);
Aparatur rol de cauciuc (lime 15 cm);
mas reglabil
5.1. Plci de sticl (265 125 4 mm); 2) Foaie susintoare de gel
rol de cauciuc (lime 15 cm); mas (265 125 mm)
reglabil 3) Foaie de acoperire
(280 125 mm). Se lipete o
bucat de band adeziv
(280 6 0,25 mm) pe fiecare
5.2. Foaie susintoare de gel latur lung (figura 1)
(265 125 mm) 4) Cuv de electrofocalizare cu plac
de rcire cu unitate de alimentare
5.3. Foaie de acoperire (280 125 mm). electric adecvat ( 2,5 kV) sau
cu aparat automat de electroforez
Se lipete o bucat de band adeziv
5) Criostat de circulaie controlat
(280 6 0,25 mm) pe fiecare latur termostatic la 12 0,5 C
lung (a se vedea figura 1) 6) Centrifug ajustabil la 3 000 g
7) Benzi de electrozi (lungime
5.4. Cuv de electrofocalizare cu plac 265 mm)
de rcire (de exemplu 265 125 mm) cu 8) Sticle picurtoare de plastic pentru
unitate de alimentare electric adecvat soluiile anodice i catodice
( 2,5 kV) sau cu aparat automat de 9) Aplicatoare de probe (10 5 mm,
vscoz sau hrtie de filtru cu
electroforez
absorbie redus a proteinelor)
10) Foarfeci, scalpele i pensete din
5.5. Criostat de circulaie controlat oel inoxidabil
termostatic la 12 0,5 C 11) Cuve din oel inoxidabil pentru
colorare i decolorare
5.6. Centrifug ajustabil la 3 000 g 12) Omogenizator ajustabil cu tij
(diametrul tijei 10 mm), vitez de
5.7. Benzi de electrozi (lungime rotaie 8 000-20 000 rpm
265 mm) 13) Agitator magnetic
14) Baie ultrasonic
15) Aparat de sudur a foliilor
5.8. Sticle picurtoare de plastic pentru
16) Micropipete de 25 l
soluiile anodice i catodice 17) Concentrator sub vid sau
liofilizator
5.9. Aplicatoare de probe (10 5 mm, 18) Baie de ap cu agitator, controlat
vscoz sau hrtie de filtru cu absorbie termostatic i ajustabil la 35
redus a proteinelor) i 40 1 C
19) Echipament de densitometrie cu
citire la = 634 nm
5.10. Foarfeci, scalpele i pensete din
oel inoxidabil
5.11. Cuve din oel inoxidabil pentru

colorare i decolorare (de exemplu, tvi
de 280 150 mm)
5.12. Omogenizator ajustabil cu tij

(diametrul tijei 10 mm), vitez de rotaie
8 000-20 000 rpm
5.13. Agitator magnetic
5.14. Baie ultrasonic
5.15. Aparat de sudur a foliilor
5.16. Micropipete de 25 l
5.17. Concentrator sub vid sau

liofilizator
5.18. Baie de ap cu agitator, controlat

termostatic i ajustabil la 35
i 40 1 C
5.19. Echipament de densitometrie cu

citire la = 634 nm
Anexa nr. 9 Metod de referin Parial Pct. 6.3.2. din actul Ministerul Din momentul
Anexa IX (art. 6) Metod de referin pentru detectarea laptelui de vac i a compatibil comunitar nu este Agriculturii i intrrii n vigoare
pentru detectarea laptelui de vac i a cazeinatului n brnzeturile produse prevzut n actul Industriei a actului naional
cazeinatului n brnzeturile produse din lapte de oaie, lapte de capr sau naional. Aceasta este o Alimentare armonizat
lapte de bivoli sau din amestecuri de prevedere UE cu
lapte de oaie, capr i bivoli, pct. 6. caracter opional.
lapte de bivoli sau din amestecuri de Procedur
lapte de oaie, capr i bivoli, pct. 6. 1) Prepararea probei
Procedur a) Izolarea cazeinelor
Se cntrete ntr-un tub de centrifug de
6.1. Prepararea probei 100 ml echivalentul a 5 g materie uscat
de brnz sau prob de referin, se
6.1.1. Izolarea cazeinelor adaug 60 ml ap distilat i se
omogenizeaz cu un omogenizator cu
Se cntrete ntr-un tub de centrifug de tij (8 000-10 000 rpm). Se ajusteaz la
100 ml echivalentul a 5 g materie uscat un pH de 4,6 cu o soluie de acid acetic
de brnz sau prob de referin, se diluat i se pune n centrifug (5 minute,
adaug 60 ml ap distilat i se 3 000 g). Se decanteaz grsimea i
omogenizeaz cu un omogenizator cu zerul, se omogenizeaz reziduul la
tij (8 000-10 000 rpm). Se ajusteaz la 20 000 rpm n 40 ml ap distilat
un pH de 4,6 cu o soluie de acid acetic ajustat la un pH de 4,5 cu soluie de
diluat (4.5.1) i se pune n centrifug (5 acid acetic diluat, se adaug 20 ml
minute, 3 000 g). Se decanteaz diclorometan, se omogenizeaz din nou
grsimea i zerul, se omogenizeaz i se pune n centrifug (5 minute,
reziduul la 20 000 rpm n 40 ml ap 3 000 g). Se ndeprteaz cu o spatul
distilat ajustat la un pH de 4,5 cu stratul de cazein care se afl ntre faza
soluie de acid acetic diluat (4.5.1), se apoas i cea organic (figura 2) i se
adaug 20 ml diclorometan (4.5.2), se elimin ambele faze. Se reomogenizeaz
omogenizeaz din nou i se pune n cazeina n 40 ml ap distilat i n 20 ml
centrifug (5 minute, 3 000 g). Se diclorometan, apoi se pune n centrifug.
ndeprteaz cu o spatul stratul de Se repet procedura pn cnd ambele
cazein care se afl ntre faza apoas i faze extrase sunt incolore (de dou sau
cea organic (a se vedea figura 2) i se trei ori). Se omogenizeaz reziduul de
protein cu 50 ml aceton i se filtreaz
elimin ambele faze. Se reomogenizeaz printr-o hrtie de filtru pliat de vitez
cazeina n 40 ml ap distilat (a se vedea medie. Se spal de fiecare dat reziduul
mai sus) i n 20 ml diclorometan de pe filtru cu cte dou porii separate
(4.5.2), apoi se pune n centrifug. Se de 25 ml aceton i se las s se usuce n
repet procedura pn cnd ambele faze aer sau sub jet de azot, apoi se
extrase sunt incolore (de dou sau trei transform n pulbere ntr-un mojar.
ori). Se omogenizeaz reziduul de Not: Cazeina izolat uscat trebuie
protein cu 50 ml aceton (4.5.3) i se pstrat la 20 C.
filtreaz printr-o hrtie de filtru pliat de b) Clivarea plasminic al -cazeinelor
vitez medie. Se spal de fiecare dat pentru intensificarea -cazeinelor
reziduul de pe filtru cu cte dou porii Se prepar o suspensie de 25 mg cazeine
separate de 25 ml aceton i se las s se isolate (subpunctul 1 din prezentul
usuce n aer sau sub jet de azot, apoi se punct) n 0,5 ml soluie tampon de
transform n pulbere ntr-un mojar. carbonat de amoniu i se omogenizeaz
timp de 20 minute folosind, de exemplu,
Not: Cazeina izolat uscat trebuie tratamentul ultrasonic. Se nclzete la
pstrat la 20 C. 40 C i se adaug 10 l plasmin, apoi
se amestec i se incubeaz timp de o
6.1.2. Clivarea plasminic al - or la 40 C, agitnd continuu. Pentru a
cazeinelor pentru intensificarea - inhiba enzimele se adaug 20 l soluie
cazeinelor de acid -aminocaproic, apoi se adaug
200 mg uree solid i 2 mg ditiotreitol.
Se prepar o suspensie de 25 mg cazeine Not: Pentru a obine o simetrie mai
izolate (6.1.1) n 0,5 ml soluie tampon mare a benzilor cazeinice focalizate se
de carbonat de amoniu (4.7.1) i se recomand liofilizarea soluiei dup
omogenizeaz timp de 20 minute adugarea acidului -aminocaproic i
folosind, de exemplu, tratamentul dizolvarea reziduurilor n 0,5 ml soluie
ultrasonic. Se nclzete la 40 C i se tampon pentru dizolvarea proteinelor.
adaug 10 l plasmin (4.7.2), apoi se 2) Prepararea gelurilor poliacrilamide
amestec i se incubeaz timp de o or la care conin uree
40 C, agitnd continuu. Pentru a inhiba Cu ajutorul ctorva picturi de ap se
enzimele se adaug 20 l soluie de acid ntinde foaia susintoare de gel pe o
plac de sticl, ndeprtndu-se surplusul
-aminocaproic (4.7.3), apoi se adaug de ap cu un erveel. Se ntinde n mod
200 mg uree solid i 2 mg ditiotreitol. similar foaia de acoperire cu spaiatoare
(0,25 mm) pe o alt plac de sticl. Se
Not: Pentru a obine o simetrie mai aeaz placa orizontal pe masa reglabil.
mare a benzilor cazeinice focalizate se Se adaug 10 l Temed la soluia de gel
recomand liofilizarea soluiei dup degazeificat pregtit, se amestec i se
adugarea acidului -aminocaproic i adaug 10 l soluie PER, se amestec
dizolvarea reziduurilor n 0,5 ml soluie bine i se toarn imediat amestecul ntr-
tampon pentru dizolvarea proteinelor un strat egal pe centrul foii de acoperire.
(4.6). Se pune o margine a plcii susintoare
de gel (cu faa foii ndreptat n jos) pe
6.2. Prepararea gelurilor poliacrilamide placa de acoperire i se coboar ncet,
care conin uree astfel nct ntre foi s se formeze un
strat subire de gel care s se ntind
Cu ajutorul ctorva picturi de ap se uniform i fr bule (figura 3). Se
ntinde foaia susintoare de gel (5.2) pe coboar cu grij pn la capt placa
o plac de sticl (5.1), ndeprtndu-se susintoare de gel, folosind o spatul
surplusul de ap cu un erveel. Se subire, apoi se aeaz nc trei plci de
ntinde n mod similar foaia de acoperire sticl deasupra, pentru a aciona ca
(5.3) cu spaiatoare (0,25 mm) pe o alt greutate. Dup ncheierea polimerizrii
plac de sticl. Se aaz placa orizontal (aproximativ 60 minute), se transfer
pe masa reglabil. gelul polimerizat mpreun cu foaia de
acoperire pe foaia susintoare de gel,
Se adaug 10 l Temed (4.1.3.1) la nclinnd plcile de sticl. Se cur cu
soluia de gel degazeificat pregtit grij spatele foii susintoare de gel
(4.1.2), se amestec i se adaug 10 l pentru a elimina reziduurile de gel i de
soluie PER (4.1.3.2), se amestec bine uree. Se sudeaz marginile sandviului
i se toarn imediat amestecul ntr-un de gel, astfel nct s se obin un tub i
strat egal pe centrul foii de acoperire. Se se pstreaz n refrigerator (timp de
pune o margine a plcii susintoare de maximum ase sptmni).
gel (cu faa foii ndreptat n jos) pe Not: Foaia de acoperire i spaiatoarele
placa de acoperire i se coboar ncet, pot fi refolosite. Gelul de poliacrilamid
poate fi tiat la dimensiuni mai mici,
astfel nct ntre foi s se formeze un aciune care este recomandat n cazul n
strat subire de gel care s se ntind care exist puine probe sau n cazul n
uniform i fr bule (figura 3). Se care se folosete un aparat automat de
coboar cu grij pn la capt placa electroforez (dou geluri format
susintoare de gel, folosind o spatul 4,5 5 cm).
subire, apoi se aaz nc trei plci de 3) Focalizarea izoelectric
sticl deasupra, pentru a aciona ca Se regleaz termostatul de rcire la
greutate. Dup ncheierea polimerizrii 12 C. Se terge cu kerosen spatele foii
(aproximativ 60 minute), se transfer susintoare de gel, apoi se picur cteva
gelul polimerizat mpreun cu foaia de picturi de kerosen pe centrul blocului
acoperire pe foaia susintoare de gel, de rcire. Se ruleaz apoi pe el
nclinnd plcile de sticl. Se cur cu sandviul de gel, cu partea susintoare
grij spatele foii susintoare de gel de gel ndreptat n jos, avnd grij s se
pentru a elimina reziduurile de gel i de evite formarea bulelor. Se terge excesul
uree. Se sudeaz marginile sandviului de kerosen i se ndeprteaz foaia de
de gel, astfel nct s se obin un tub i acoperire. Se mbib benzile de electrozi
se pstreaz n refrigerator (timp de n soluiile electrolitice, se taie dup
maximum ase sptmni). lungimea gelului i se plaseaz n poziia
prevzut (distana dintre electrozi de
Not: Foaia de acoperire i spaiatoarele 9,5 cm).
pot fi refolosite. Gelul de poliacrilamid Condiii pentru focalizarea izoelectric:
poate fi tiat la dimensiuni mai mici, Dimensiunile gelului
aciune care este recomandat n cazul n 265 125 0,25 mm
care exist puine probe sau n cazul n Etap
care se folosete un aparat automat de
electroforez (dou geluri format Timp
4,5 5 cm).
(min)
6.3. Focalizarea izoelectric

Tensiune
Se regleaz termostatul de rcire la

(V)
12 C. Se terge cu kerosen spatele foii
susintoare de gel, apoi se picur cteva Intensitate
picturi de kerosen (4.2) pe centrul
blocului de rcire. Se ruleaz apoi pe el (mA)
sandviul de gel, cu partea
susintoare de gel ndreptat n jos, Putere
avnd grij s se evite formarea bulelor.
Se terge excesul de kerosen i se (W)
ndeprteaz foaia de acoperire. Se

mbib benzile de electrozi n soluiile Voli or
electrolitice (4.3, 4.4), se taie dup
(Vh)
lungimea gelului i se plaseaz n poziia 1. Pre-focali-zare
prevzut (distana dintre electrozi de
9,5 cm). 0
Ma-ximum 2 500
Maxi-mum 15
Condiii pentru focalizarea izoelectric: Cons-tant 4
c. 300
2. Fo-
6.3.1. Dimensiunile gelului caliza-
rea probei
265 125 0,25 mm (1)
60
Etap maximum 2 500
Maxi-mum 15
Cons-tant 4
Timp c. 1 000
3. Fo-
caliza-
(min)
rea fi-
nal
60
Tensiune
maximum 2 500
Maxi-mum 5
(V) Maxi-mum 20
c. 3 000
Intensitate 40
Maxi-mum 2 500
(mA) Maxi-mum 6
Maxi-mum 20
c. 3 000
Putere 30
Maxi-mum 2 500
Maxi-mum 7
(W)
Maxi-mum 25
c. 3 000
(1) Aplicarea probei: Dup prefocalizare (etapa 1), se picur
Voli or
18 l din proba i din soluiile standard pe aplicatorii probei
(10 5 mm), se plaseaz aplicatorii pe gel la distan de
(Vh) 1 mm unul de cellalt i la 5 mm
1. Pre-focali-zare longitudinal fa de anod i se apas uor. Procedura de
30 focalizare se finalizeaz n condiiile specificate mai sus,
Ma-ximum 2 500 ndeprtnd cu grij aplicatorii probei dup 60 minute de
Maxi-mum 15 focalizare a probei.
Cons-tant 4
c. 300 Not: n cazul n care se modific
2. Fo-
caliza- grosimea sau limea gelurilor, atunci
rea probei intensitatea i puterea curentului trebuie
(1)
60 ajustate n consecin.
maximum 2 500 4) Colorarea proteinelor
Maxi-mum 15
Cons-tant 4
a) Fixarea proteinelor
c. 1 000 Se ndeprteaz benzile de electrozi
3. Fo- imediat dup stingerea aparatului i se
caliza-
rea fi- plaseaz imediat gelul ntr-o cuv de
nal colorare/decolorare umplut cu 200 ml
60
maximum 2 500
fixativ; se las acolo timp de 15 minute,
Maxi-mum 5 agitnd n continuu.
Maxi-mum 20 b) Splarea i colorarea plcii de gel
c. 3 000
Se scurge cu grij fixativul i se spal
40 placa de gel de dou ori, timp de cte 30
Maxi-mum 2 500
Maxi-mum 6 de secunde, cu 100 ml soluie
Maxi-mum 20 decolorant. Se decanteaz soluia
c. 3 000
decolorant i se umple cuva cu 250 ml
30 soluie colorant; se las 45 minute s se
Maxi-mum 2 500 coloreze, agitndu-se uor cuva.
Maxi-mum 7
Maxi-mum 25 c) Decolorarea plcii de gel
Se decanteaz soluia colorant, se spal
c. 3 000 placa de gel de dou ori, cu cte 100 ml
(1) Aplicarea probei: Dup prefocalizare (etapa 1), se picur
soluie decolorant, apoi se agit timp de
18 l din proba i din soluiile standard pe aplicatorii probei
15 minute cu 200 ml soluie decolorant
(10 5 mm), se plaseaz aplicatorii pe gel la distan de
1 mm unul de cellalt i la 5 mm longitudinal fa de anod i
i se repet pasul de decolorare de cel
se apas uor. Procedura de focalizare se finalizeaz n
puin dou-trei ori, pn cnd fundul
condiiile specificate mai sus, ndeprtnd cu grij aplicatorii
probei dup 60 minute de focalizar vasului este curat i incolor. Se cltete
a probei.
apoi cu ap distilat placa de gel (2 2
Not: n cazul n care se modific minute) i se usuc la aer (2-3 ore) sau
grosimea sau limea gelurilor, atunci cu un usctor de pr (10-15 minute).
intensitatea i puterea curentului trebuie Nota 1: Fixarea, splarea, colorarea i
ajustate n consecin (de exemplu, n decolorarea se efectueaz la 20 C. A nu
cazul n care se folosete un gel de se folosi temperaturi ridicate.
265 125 0,5 mm se dubleaz valorile Nota 2: n cazul n care se prefer
pentru intensitatea i puterea curentului colorarea mai sensibil cu argint, probele
electric). de cazein tratate cu plasmin trebuie
diluate la 5 mg/ml.
6.3.2. Exemplu de program de tensiune
pentru un aparat automat de
electroforez (2 geluri de 5,0 4,5 cm),
cu electrozi fr benzi i aplicai direct
pe gel
Etap Ten- Inten Pute- Temp Vol

siu- - re . i
ne sitat or
e
1. Pr 1 00 10,0 3,5 W 8 C 85
e- 0V mA Vh
foca-
lizar
e
2. Fo 250 5,0 m 2,5 W 8 C 30
- V A Vh
caliz
a-rea
prob
ei
3. Fo 1 20 10,0 3,5 W 8 C 80
- 0V mA Vh
caliz
a-re
4. Fo 1 50 5,0 m 7,0 W 8 C 570

- 0V A Vh
caliz
a-re
Se plaseaz aplicatorul probei la pasul 2

la 0 Vh.
Se ndeprteaz aplicatorul probei la

pasul 2 la 30 Vh.
6.4. Colorarea proteinelor
6.4.1. Fixarea proteinelor
Se ndeprteaz benzile de electrozi

imediat dup stingerea aparatului i se
plaseaz imediat gelul ntr-o cuv de
colorare/decolorare umplut cu 200 ml
fixativ (4.9); se las acolo timp de 15
minute, agitnd n continuu.
6.4.2. Splarea i colorarea plcii de gel
Se scurge cu grij fixativul i se spal

placa de gel de dou ori, timp de cte 30
de secunde, cu 100 ml soluie
decolorant (4.10). Se decanteaz soluia
decolorant i se umple cuva cu 250 ml
soluie colorant (4.11.3); se las 45
minute s se coloreze, agitndu-se uor
cuva.
6.4.3. Decolorarea plcii de gel
Se decanteaz soluia colorant, se spal

placa de gel de dou ori, cu cte 100 ml
soluie decolorant (4.10), apoi se agit
timp de 15 minute cu 200 ml soluie
decolorant i se repet pasul de
decolorare de cel puin dou-trei ori,
pn cnd fundul vasului este curat i
incolor. Se cltete apoi cu ap distilat
placa de gel (2 2 minute) i se usuc la
aer (2-3 ore) sau cu un usctor de pr
(10-15 minute).
Nota 1: Fixarea, splarea, colorarea i

decolorarea se efectueaz la 20 C. A nu
se folosi temperaturi ridicate.
Nota 2: n cazul n care se prefer

colorarea mai sensibil cu argint (de
exemplu, Silver Staining Kit, Protein,
Pharmacia Biotech, cod nr. 17-1150-01),
probele de cazein tratate cu plasmin
trebuie diluate la 5 mg/ml.

lapte de bivoli sau din amestecuri de Evaluare
lapte de oaie, capr i bivoli, pct. 7. Evaluarea este efectuat prin compararea
Evaluare benzilor de proteine ale probei
necunoscute cu probele de referin
Evaluarea este efectuat prin compararea efectuate pe acelai gel. Detectarea
benzilor de proteine ale probei laptelui de vac n brnzeturile din lapte
necunoscute cu probele de referin de oaie, lapte de capr i lapte de
efectuate pe acelai gel. Detectarea bivoli i n amestecurile de lapte de
laptelui de vac n brnzeturile din lapte oaie, capr i bivoli se face prin
de oaie, lapte de capr i lapte de intermediul 3- i 2-cazeinelor, ale cror
bivoli i n amestecurile de lapte de puncte izoelectrice se afl n intervalul
oaie, capr i bivoli se face prin pH 6,5-pH 7,5 (figurile 4a, 4b i 5).
intermediul 3- i 2-cazeinelor, ale cror Limita de detecie este mai mic de
puncte izoelectrice se afl n intervalul 0,5 %.
pH 6,5-pH 7,5 (figurile 4 a i 4 b, figura 1) Estimare vizual
Pentru evaluarea vizual a cantitii de
5). Limita de detecie este mai mic de lapte de vac se recomand ajustarea
0,5 %. concentraiilor probelor i a probelor
etalon pentru a obine acelai nivel de
7.1. Estimare vizual intensitate a 2- i 3-cazeinelor din
laptele de ovine, caprine i/sau bivolie
Pentru evaluarea vizual a cantitii de (a se vedea 2 E, G, B i 3 E, G, B
lapte de vac se recomand ajustarea din figurile 4 a i 4 b i din figura 5).
concentraiilor probelor i a probelor Dup aceasta, nivelul de lapte de vac
etalon pentru a obine acelai nivel de (mai mic dect, egal cu sau mai mare de
intensitate a 2- i 3-cazeinelor din 1 %) din proba necunoscut poate fi
laptele de ovine, caprine i/sau bivolie estimat direct, prin compararea
(a se vedea 2 E, G, B i 3 E, G, B intensitii 3- i 2-cazeinelor din laptele
din figurile 4 a i 4 b i din figura 5). de vac (a se vedea 3 C i 2 C din
Dup aceasta, nivelul de lapte de vac figurile 4 a, 4 b i 5) cu cea a probelor de
(mai mic dect, egal cu sau mai mare de referin de 0 % i 1 % (oaie, capr) sau
1 %) din proba necunoscut poate fi cu standardele provizorii de laborator
estimat direct, prin compararea (bivoli).
intensitii 3- i 2-cazeinelor din laptele 2) Estimare densitometric
de vac (a se vedea 3 C i 2 C din n cazul n care este disponibil, se
figurile 4 a i 4 b i din figura 5) cu cea a aplic densitometria pentru determinarea
probelor de referin de 0 % i 1 % raportului dintre suprafaa vrfurilor 2-
(oaie, capr) sau cu standardele i 3-cazeinelor din laptele de vac,
provizorii de laborator (bivoli). respectiv din laptele de oaie, capr i/sau
bivoli (figura 5). Aceast valoare se
7.2. Estimare densitometric compar cu raportul dintre suprafaa
vrfurilor 2- i 3-cazeinelor pentru
n cazul n care este disponibil, se proba de referin 1 % (oaie, capr) sau
aplic densitometria (5.19) pentru pentru standardul provizoriu de laborator
determinarea raportului dintre suprafaa (bivoli), analizate pe acelai gel.
vrfurilor 2- i 3-cazeinelor din laptele Not: Metoda funcioneaz
de vac, respectiv din laptele de oaie, corespunztor n cazul n care se obine
capr i/sau bivoli (a se vedea figura un semnal pozitiv clar pentru ambele
cazeine bovine 2- i 3- din proba de
5). Aceast valoare se compar cu referin 1 %, dar nu i din proba de
referin 0 %. Dac nu, procedura
raportul dintre suprafaa vrfurilor 2- i
3-cazeinelor pentru proba de referin trebuie mbuntit respectndu-se cu
1 % (oaie, capr) sau pentru standardul exactitate detaliile metodei.
provizoriu de laborator (bivoli), O prob este considerat pozitiv n
analizate pe acelai gel. cazul n care ambele cazeine bovine 2-
i 3- sau raportul suprafeei vrfurilor
Not: Metoda funcioneaz corespunztor sunt mai mari sau egale
corespunztor n cazul n care se obine cu nivelul din proba de referin 1 %.
un semnal pozitiv clar pentru ambele
cazeine bovine 2- i 3- din proba de
referin 1 %, dar nu i din proba de
referin 0 %. Dac nu, procedura
trebuie mbuntit respectndu-se cu
exactitate detaliile metodei.
O prob este considerat pozitiv n

cazul n care ambele cazeine bovine 2-
i 3- sau raportul suprafeei vrfurilor
corespunztor sunt mai mari sau egale
cu nivelul din proba de referin 1 %.
Anexa IX (art. 6) Metod de referin neaplicabile
pentru detectarea laptelui de vac i a
cazeinatului n brnzeturile produse
Referine
Addeo F., Moio L., Chianese L., Stingo
C., Resmini P., Berner I., Krause I., Di
Luccia A., Bocca A.: Use of plasmin to
increase the sensitivity of the detection
of bovine milk in ovine and/or caprine
cheese by gel isoelectric focusing of 2-
caseins. Milchwissenschaft 45, 708-
711 (1990).
2. Addeo F., Nicolai M.A., Chianese L.,

Moio L., Spagna Musso S., Bocca A.,
Del Giovine L.: A control method to
detect bovine milk in ewe and water
buffalo cheese using immunoblotting.
Milchwissenschaft 50, 83-85 (1995).
3. Krause I., Berner I., Klostermeyer

H.: Sensitive detection of cow milk in
ewe and goat milk and cheese by carrier
ampholyte and carrier
ampholyte/immobilized pH gradient
isoelectric focusing of -caseins using
plasmin as signal amplifier. in:
Electrophoresis-Forum 89 (B. J. Radola,
ed.) pp 389-393, Bode-Verlag, Mnchen
(1989).
4. Krause ., Belitz H.-D., Kaiser K.-P.:

Nachweis von Kuhmilch in Schaf and
Ziegenmilch bzw. -kse durch
isoelektrische Fokussierung in
harnstoffhaltigen Polyacrylamidgelen.
Z. Lebensm. Unters. Forsch. 174, 195-
199 (1982).
5. Radola B.J.: Ultrathin-layer

isoelectric focusing in 50-100 m
polyacrylamide gels on silanised glass
plates or polyester films.
Electrophoresis 1, 43-56 (1980).

lapte de bivoli sau din amestecuri de Aparatur, subpunctul 3)
lapte de oaie, capr i bivoli, Figura Figura 1. Schia foii de acoperire
1. Schia foii de acoperire
lapte de bivoli sau din amestecuri de Procedur, subpunctul 1), litera a)
lapte de oaie, capr i bivoli, Figura Figura 2. Strat de cazein plutind dup
2. Strat de cazein plutind dup centrifugare ntre faza apoas i faza
centrifugare ntre faza apoas i faza organic.
organic

lapte de bivoli sau din amestecuri de Procedur, subpunctul 2)
lapte de oaie, capr i bivoli, Figura Figura 3. Tehnic de pliere pentru
3. Tehnic de pliere pentru obinerea obinerea straturilor foarte fine de geluri
straturilor foarte fine de geluri poliacrilamide
poliacrilamide
a - band adeziv pentru spaiere

(0,25 mm);
b - foaie de acoperire;
c, e - plci de sticl;
a = band adeziv pentru spaiere d - soluie de gel;
(0,25 mm); b = foaie de acoperire (5.3); f - foaie susintoare de gel
c, e = plci de sticl (5.1); d = soluie de
gel (4.1.2); f = foaie susintoare de gel
(5.2)

lapte de oaie, capr i bivoli, Figura Figura 4a. Focalizare izoelectric a
4a. Focalizare izoelectric a cazeinelor cazeinelor tratate cu plasmin din brnz
tratate cu plasmin din brnz din din lapte de oaie i de capr care conine
lapte de oaie i de capr care conine diferite cantiti de lapte de vac.
diferite cantiti de lapte de vac
% CM = procentaj lapte de vac;
C = vac;
C = vac; E = oaie; G = capr. E = oaie;
Este ilustrat jumtatea de sus a gelului G = capr.

IEF.
Este ilustrat jumtatea de sus a gelului
IEF.

lapte de oaie, capr i bivoli, Figura Figura 4b. Focalizare izoelectric a
4b. Focalizare izoelectric a cazeinelor cazeinelor tratate cu plasmin din brnz
tratate cu plasmin din brnz din din amestec de lapte de oaie, capr i
bivoli care conine diferite cantiti de
lapte de vac.
amestec de lapte de oaie, capr i
bivoli care conine diferite cantiti
de lapte de vac
1 + = prob coninnd 1 % lapte de vac

i dopat cu cazein pur de lapte de vac
la mijlocul traiectului gelului.
1 + = prob coninnd 1 % lapte de vac C = vac;
i dopat cu cazein pur de lapte de vac
la mijlocul traiectului gelului. C = vac; E = oaie;
E = oaie; G = capr; B = bivoli.
G = capr;
Este ilustrat distana separatoare total
a gelului IEF. B = bivoli.
Este ilustrat distana separatoare total

a gelului IEF.
Figura 5. Suprapunerea densitogramelor
lapte de oaie, capr i bivoli, Figura probelor etalon (STD) i a probelor de
5. Suprapunerea densitogramelor brnz preparate din amestec de lapte de
probelor etalon (STD) i a probelor de oaie i de capr dup focalizarea
izoelectric
brnz preparate din amestec de lapte
de oaie i de capr dup focalizarea
izoelectric
a, b - probe etalon coninnd 0, respectiv

1 % lapte de vac;
c-g - probe de brnz coninnd 0, 1, 2, 3

a, b = probe etalon coninnd 0, i 7 % lapte de vac.
respectiv 1 % lapte de vac; c-g = probe
de brnz coninnd 0, 1, 2, 3 i 7 % C - vac;
lapte de vac. C = vac; E = oaie;
G = capr. E - oaie;
Jumtatea superioar a gelului IEF a fost G - capr.
scanat la = 634 nm.
Jumtatea superioar a gelului IEF a fost
scanat la = 634 nm.
Anexa X (art. 7) Metod de referin pentru detectarea bacteriilor Agriculturii i intrrii n vigoare
pentru detectarea bacteriilor coliforme din unt, lapte praf degresat, Industriei a actului naional
coliforme din unt, lapte praf degresat, cazein i cazeinai, pct. 1. Prepararea Alimentare armonizat
probelor
cazein i cazeinai, pct. 1. Prepararea
Standardul SM SR EN ISO 6887-5.
probelor
Standardul ISO 8261
Anexa nr. 10 Metod de referin Parial Ministerul Din momentul

Anexa X (art. 7) Metod de referin pentru detectarea bacteriilor compatibil Standardul ISO 4831 Agriculturii i intrrii n vigoare
pentru detectarea bacteriilor coliforme din unt, lapte praf degresat, este substituit cu Industriei a actului naional
coliforme din unt, lapte praf degresat, cazein i cazeinai, pct. 2. Procedur standardul naional SM Alimentare armonizat
ISO 4831.
cazein i cazeinai, pct. 2. Procedur
Standardul SM ISO 4831.
Standardul ISO 4831 Se inoculeaz probe de 1 g de unt sau de
0,1 g de lapte praf degresat sau
Se inoculeaz probe de 1 g de unt sau de cazein/cazeinai n mediul de cultur.
0,1 g de lapte praf degresat sau
cazein/cazeinai n mediul de cultur. Se inoculeaz trei tuburi pentru fiecare
prob.
Se inoculeaz trei tuburi pentru fiecare
prob.

Anexa X (art. 7) Metod de referin pentru detectarea bacteriilor Agriculturii i intrrii n vigoare
coliforme din unt, lapte praf degresat, Industriei a actului naional
cazein i cazeinai, pct. 3. Rezultate Alimentare armonizat
pentru detectarea bacteriilor
coliforme din unt, lapte praf degresat, n cazul n care cele 3 tuburi produc 3
cazein i cazeinai, pct. 3. Rezultate rezultate negative, rezultatul este
conform
n cazul n care cele 3 tuburi produc 3
rezultate negative, rezultatul este
sau 3 rezultate pozitive, rezultatul este
conform
neconform
sau 3 rezultate pozitive, rezultatul este
rezultate negative, analiza se repet (cu
neconform
dou tuburi)
1) n cazul n care cele 2 rezultate sunt
rezultate negative, analiza se repet (cu
negative, rezultatul este conform
dou tuburi)
2) n cazul n care cel puin 1 rezultat
n cazul n care cele 2 rezultate sunt este pozitiv, rezultatul este
negative, rezultatul este conform neconform
n cazul n care cel puin 1 rezultat

este pozitiv, rezultatul este neconform
Anexa nr. 11 Determinarea lactozei n Compatibil - Ministerul Din momentul

Anexa XI (art. 8) Determinarea furajele combinate, pct. 1. Obiectul i Agriculturii i intrrii n vigoare
lactozei n furajele combinate, pct. 1. domeniul de aplicare Industriei a actului naional
Obiectul i domeniul de aplicare Determinarea lactozei n furajele Alimentare armonizat
combinate.
Determinarea lactozei n furajele
combinate.
Anexa XI (art. 8) Determinarea furajele combinate, pct. 2. Referine Agriculturii i intrrii n vigoare
lactozei n furajele combinate, pct. 2. Industriei a actului naional
Referine Coninutul de lactoz se definete ca Alimentare armonizat
procent de mas determinat prin
procedura descris.
Coninutul de lactoz se definete ca
procent de mas determinat prin
procedura descris.

Anexa XI (art. 8) Determinarea furajele combinate, pct. 3. Definiie Agriculturii i intrrii n vigoare
lactozei n furajele combinate, pct. 3. Coninutul de lactoz anhidr se exprim Industriei a actului naional
Definiie n g per 100 g. Alimentare armonizat
Coninutul de lactoz anhidr se exprim

n g per 100 g.

Anexa XI (art. 8) Determinarea furajele combinate, pct. 4. Principiu Agriculturii i intrrii n vigoare
lactozei n furajele combinate, pct. 4. Furajul compus se reconstituie cu ap. Industriei a actului naional
Principiu Se adaug soluie Biggs la o parte Alimentare armonizat
alicot cntrit diluat pentru
precipitarea grsimii i a fraciunilor
Furajul compus se reconstituie cu ap.
componente ale proteinei furajului
Se adaug soluie Biggs la o parte combinat. Proba este filtrat (sau
alicot cntrit diluat pentru centrifugat) i filtratul (sau
precipitarea grsimii i a fraciunilor supernatantul) este injectat printr-o
componente ale proteinei furajului coloan HPLC de schimb de cationi n
combinat. Proba este filtrat (sau forma de plumb folosind ap de calitate
centrifugat) i filtratul (sau HPLC ca faz mobil. Lactoza eluat
este detectat cu un
supernatantul) este injectat printr-o
refractometru i diferenial.
coloan HPLC de schimb de cationi n
forma de plumb folosind ap de calitate
HPLC ca faz mobil. Lactoza eluat
este detectat cu un
refractometru i diferenial ( 10 ).

Anexa XI (art. 8) Determinarea furajele combinate, pct. 5. Reactivi Agriculturii i intrrii n vigoare
Reactivi 1) Generaliti Alimentare armonizat
Se folosesc numai reactivi de calitate

5.1. Generaliti
analitic recunoscut, cu excepia
cazurilor n care se precizeaz altceva, i
Se folosesc numai reactivi de calitate
ap de calitate HPLC degazat.
analitic recunoscut, cu excepia
cazurilor n care se precizeaz altceva, i
2) Lactoz
ap de calitate HPLC degazat.
Monohidratatul de D-Lactoz
5.2. Lactoz
[(C12H22)O11. H2O] poate prelua
umezeala suplimentar. nainte de
Monohidratatul de D-Lactoz
folosire, se msoar cantitatea real de
[(C12H22)O11. H2O] poate prelua
ap cu titratorul Karl-Fisher sau se
umezeala suplimentar. nainte de
elimin umezeala suplimentar plasnd
folosire, se msoar cantitatea real de
lactoza ntr-un cuptor la 105 C, timp de
ap cu titratorul Karl-Fisher sau se
8 ore.
elimin umezeala suplimentar plasnd
lactoza ntr-un cuptor la 105 C, timp de
3) Soluie concentrat Biggs/Szijarto
8 ore (lactoza nu-i pierde apa
cristalizat prin acest tratament).
Se dizolv 9,10 g dihidrat de acetat de
zinc [Zn(CH3COO)2.2H2O] i 5,46 g de
5.3. Soluie concentrat
Biggs/Szijarto ( 11 ) acid fosfotungstic monohidrat
(H3[P(W3O10)4.xH2O]) n aproximativ
Se dizolv 9,10 g dihidrat de acetat de 70 ml cu ap de calitate HPLC ntr-un
zinc [Zn(CH3COO)2.2H2O] i 5,46 g de balon cotat de 100 ml.
acid fosfotungstic monohidrat
Se adaug 5,81 ml acid acetic glacial
(H3[P(W3O10)4.xH2O]) n aproximativ
(CH3COOH). Se dilueaz pn la nivelul
70 ml cu ap de calitate HPLC ntr-un de 100 ml cu ap de calitate HPLC i se
balon cotat de 100 ml. amestec. Soluia poate fi depozitat la
temperatura camerei pentru o perioad
Se adaug 5,81 ml acid acetic glacial de 1 an.
(CH3COOH). Se dilueaz pn la nivelul
de 100 ml cu ap de calitate HPLC i se 4) Soluie diluat Biggs/Szijarto
amestec. Soluia poate fi depozitat la
Se dilueaz 25 ml de soluie concentrat
Biggs/Szijarto cu ap pn la nivelul de
de 1 an. 500 ml folosind un balon cotat. Soluia
poate fi depozitat la temperatura
5.4. Soluie diluat Biggs/Szijarto camerei pentru o perioad de 1 lun.
Se dilueaz 25 ml de soluie concentrat 5) Prepararea apei de calitate HPLC

Biggs/Szijarto (5.3) cu ap pn la
nivelul de 500 ml folosind un balon Se filtreaz ap ultra pur folosind
cotat. Soluia poate fi depozitat la sistemul de filtrare cu vid. Pentru a
mbunti performana pompei i pentru
a obine o linie de baz stabil, se
de 1 lun. degazific zilnic faza mobil optnd
pentru una dintre tehnicile disponibile,
5.5. Prepararea apei de calitate HPLC cum ar fi splarea cu heliu,
dezintegrarea, sistemul de degazificare
Se filtreaz ap ultra pur folosind n vid sau n linie.
sistemul de filtrare cu vid (6.9). Pentru a
Not: Pentru a prelungi viaa coloanei
mbunti performana pompei i pentru este esenial ca procentul de bioxid de
a obine o linie de baz stabil, se carbon al eluantului s fie ct mai mic
degazific zilnic faza mobil optnd posibil i s fie mpiedicat o
reabsorbie.
pentru una dintre tehnicile disponibile,
cum ar fi splarea cu heliu,
dezintegrarea, sistemul de degazificare
n vid sau n linie.
Not: Pentru a prelungi viaa coloanei

este esenial ca procentul de bioxid de
carbon al eluantului s fie ct mai mic
posibil i s fie mpiedicat o
reabsorbie.

Anexa XI (art. 8) Determinarea furajele combinate, pct. 6. Aparatur Agriculturii i intrrii n vigoare
Aparatur Aparatur obinuit de laborator i, n Alimentare armonizat
special, urmtoarele:
Aparatur obinuit de laborator i, n
1) Coloan de plastic pentru schimb
special, urmtoarele:
ioni HPLC
6.1. Coloan de plastic pentru schimb
Umplerea coloanei: copolimer
ioni HPLC
polistiren-divinilbenzen cu legtur ntre
catene 8 %, funcionalizat cu grupuri de
Umplerea coloanei: copolimer
schimb de cationi n form de plumb.
polistiren-divinilbenzen cu legtur ntre
catene 8 %, funcionalizat cu grupuri de
Dimensiunile coloanei: lungimea
schimb de cationi n form de plumb.
300 mm, diametrul interior aproximativ
Dimensiunile coloanei: lungimea
300 mm, diametrul interior aproximativ 8 mm.
8 mm.
Este posibil i utilizarea altor diametre,
Este posibil i utilizarea altor diametre, cu condiia ca debitul s fie reglat n
cu condiia ca debitul s fie reglat n mod corespunztor.
mod corespunztor.
2) Coloan de control
6.2. Coloan de control
Coloana de control este o combinaie
Coloana de control este o combinaie ntre un schimbtor de cationi separat
ntre un schimbtor de cationi separat (H+) i un schimbtor de anioni (CO3-),
+
(H ) i un schimbtor de anioni (CO3-), fiecare introdus n coloane de
fiecare introdus n coloane de aproximativ 30 mm 4,6 mm (L ID)
aproximativ 30 mm 4,6 mm (L ID) i conectat n serie sau sub forma unui
(de exemplu, coloane de microcontrol strat combinat constnd din AG 50W-
ntr-un suport de microcontrol) i X4, 400 ochiuri de sit (H+) i AG3-
conectat n serie sau sub forma unui strat X4A, 200-400 ochiuri de sit (OH-) n
combinat constnd din AG 50W-X4, raportul de 35:65 (m/m) umplute manual
400 ochiuri de sit (H+) i AG3-X4A, ntr-o coloan de aproximativ 20 9 mm
200-400 ochiuri de sit (OH-) n raportul (L ID).
de 35:65 (m/m) umplute manual ntr-o
coloan de aproximativ 20 9 mm (L 3) Cuptorul de coloan
ID).
Cuptor capabil s menin o temperatur
6.3. Cuptorul de coloan constant de 85 C 1 C.
Cuptor capabil s menin o temperatur 4) Pompa de HPLC

constant de 85 C 1 C.
Pomp capabil s genereze un debit
6.4. Pompa de HPLC constant (fluctuaii < 0,5 %) la 0,2-
1,0 m/min.
Pomp capabil s genereze un debit
constant (fluctuaii < 0,5 %) la 0,2- 5) Dispozitiv de injectare a HPLC
1,0 m/min.
Autosond capabil s injecteze 25 L i
6.5. Dispozitiv de injectare a HPLC avnd o repetabilitate < 0,5 %.
Autosond capabil s injecteze 25 L i Ca soluie alternativ poate fi folosit un

avnd o repetabilitate < 0,5 %. dispozitiv manual.
Ca soluie alternativ poate fi folosit un 6) Detector de HPLC

dispozitiv manual (cu aceleai cerine ca
la autosond). Detector de index refractant de mare
sensibilitate avnd un zgomot < 5.10-9 RI
6.6. Detector de HPLC uniti.
Detector de index refractant de mare 7) Integrator

sensibilitate avnd un zgomot < 5.10-9 RI
uniti. Software sau un integrator dedicat
pentru a realiza strngerea datelor,
6.7. Integrator procesarea i generarea suprafeei
vrfurilor i a nlimilor vrfurilor, care
Software sau un integrator dedicat pot fi transformate n concentraii de
pentru a realiza strngerea datelor, lactoz.
procesarea i generarea suprafeei
vrfurilor i a nlimilor vrfurilor, care 8) Unitate de purificare a apei
pot fi transformate n concentraii de
lactoz. Sistem capabil s furnizeze ap foarte
pur avnd o rezistivitate >14 M.cm.
6.8. Unitate de purificare a apei
9) Unitate de filtrare a solventului
Sistem capabil s furnizeze ap foarte
pur (tip 1) avnd o rezistivitate Sistem care asigur filtrarea apei
>14 M.cm. folosind un filtru cu membran filtrant
6.9. Unitate de filtrare a solventului cu diametrul porilor de 0,45 m.
Sistem care asigur filtrarea apei Not: Multe uniti de purificare a apei
folosind un filtru cu membran filtrant au o unitate de filtrare integrat de 0,45
cu diametrul porilor de 0,45 m. sau de 0,2 m. Se poate renuna la o
filtrare suplimentar dac aceast ap
Not: Multe uniti de purificare a apei este folosit direct.
(6.8) au o unitate de filtrare integrat de
0,45 sau de 0,2 m. Se poate renuna la o 10) Balan analitic
filtrare suplimentar dac aceast ap
este folosit direct. Balan avnd un afiaj de 0,1 mg.
6.10. Balan analitic 11) Baie de ap
Balan avnd un afiaj de 0,1 mg. Baie de ap capabil s menin o

temperatur de 40 C (0,5).
6.11. Baie de ap
12) Centrifug
Baie de ap capabil s menin o
temperatur de 40 C (0,5). Avnd o capacitate de generare de cel
puin 3 000 g pentru eprubete Eppendorf
6.12. Centrifug sau echivalente sau pentru tipuri mai
mari de eprubete.
Avnd o capacitate de generare de cel
puin 3 000 g pentru eprubete Eppendorf 13) Balon cotat de 50 mL
sau echivalente sau pentru tipuri mai
mari de eprubete. Capacitate de 50 mL, clasa A.
6.13. Balon cotat de 50 mL Not: Pot fi folosite i baloane de alt

capacitate innd cont de factorul volum.
Capacitate de 50 mL, clasa A.
Not: Pot fi folosite i baloane de alt 14) Balon cotat de 100 mL
capacitate innd cont de factorul volum.
6.14. Balon cotat de 100 mL
15) Pipet gradat
Pipet gradat de 10 mL.
6.15. Pipet gradat
Not: Ca soluie alternativ, se poate
Pipet gradat de 10 mL. folosi un picurtor manual cu o
capacitate de 5 mL, adugnd un volum
Not: Ca soluie alternativ, se poate dublu de 5 mL de reactiv (punctul 5,
folosi un picurtor manual cu o subpunctul 3).
capacitate de 5 mL, adugnd un volum
dublu de 5 mL de reactiv (5.3).
Anexa nr. 11 Determinarea lactozei n Parial Standardul ISO 707 Ministerul Din momentul
Anexa XI (art. 8) Determinarea furajele combinate, pct. 7. Prelevarea compatibil este substituit cu Agriculturii i intrrii n vigoare
lactozei n furajele combinate, pct. 7. probelor standardul naional SM Industriei a actului naional
Prelevarea probelor Este important ca laboratorul s SR EN 707. Alimentare armonizat
primeasc o prob prelevat conform Standardele FIL nu
SM SR EN 707 care s fie cu adevrat sunt aplicate pe
Este important ca laboratorul s
reprezentativ i care s nu fi fost teritoriul Republicii
primeasc o prob prelevat conform deteriorat n timpul transportului sau pe Moldova.
ISO 707/FIL 50 ( 12 ), care s fie cu durata depozitrii.
adevrat reprezentativ i care s nu fi
fost deteriorat n timpul transportului
sau pe durata depozitrii.

Anexa XI (art. 8) Determinarea furajele combinate, pct. 8. Prepararea Agriculturii i intrrii n vigoare
lactozei n furajele combinate, pct. 8. soluiei etalon de lactoz Industriei a actului naional
Alimentare armonizat
Prepararea soluiei etalon de lactoz 1) Etalon 1
8.1. Etalon 1 Se dizolv o cantitate cntrit exact (cu

indicaii de 0,1 mg) de aproximativ
Se dizolv o cantitate cntrit exact (cu 50 mg monohidrat de lactoz ntr-un
indicaii de 0,1 mg) de aproximativ balon cotat de 100 mL i se completeaz
50 mg monohidrat de lactoz (5.2) ntr- cu ap pn la marcaj.
un balon cotat de 100 mL (6.14) i se
completeaz cu ap pn la marcaj. 2) Etalon 2
8.2. Etalon 2 Se dizolv o cantitate cntrit exact (cu

indicaii de 0,1 mg) de aproximativ
Se dizolv o cantitate cntrit exact (cu 100 mg monohidrat de lactoz ntr-un
indicaii de 0,1 mg) de aproximativ balon cotat de 100 mL i se completeaz
100 mg monohidrat de lactoz (5.2) ntr- cu ap pn la marcaj.
un balon cotat de 100 mL (6.14) i se
completeaz cu ap pn la marcaj. Not: Soluiile etalon pot fi depozitate
pentru maximum 1 sptmn, la
Not: Soluiile etalon pot fi depozitate aproximativ 5 C.
pentru maximum 1 sptmn, la
aproximativ 5 C.
Anexa XI (art. 8) Determinarea furajele combinate, pct. 9. Prepararea Agriculturii i intrrii n vigoare
lactozei n furajele combinate, pct. 9. probei de analiz Industriei a actului naional
Prepararea probei de analiz Alimentare armonizat
1) Reconstituirea probei
9.1. Reconstituirea probei
Se cntresc aproximativ 5 g de lapte
praf ntr-un balon de 50 mL i se noteaz
Se cntresc aproximativ 5 g de lapte
greutatea cu o precizie de 1 mg [W1,
praf ntr-un balon de 50 mL (6.13) i se
(11)]. Se adaug 50 mL de ap i se
noteaz greutatea cu o precizie de 1 mg
noteaz creterea de greutate [W2, (11)]
[W1, (11)]. Se adaug 50 mL de ap i se
cu o precizie de 0,01 g. Se aaz balonul
noteaz creterea de greutate [W2, (11)]
nchis n baia de ap timp de 30 min. i
cu o precizie de 0,01 g. Se aaz balonul
se rstoarn de cteva ori n aceast
nchis n baia de ap (6.11) timp de
perioad. Apoi se las s se rceasc la
30 min. i se rstoarn de cteva ori n
temperatura camerei.
aceast perioad. Apoi se las s se
rceasc la temperatura camerei.
2) Tratarea probei
9.2. Tratarea probei
Se ia aproximativ 1 g din aceast soluie
i se pune ntr-un balon cotat de 50 mL,
Se ia aproximativ 1 g din aceast soluie
se noteaz greutatea cu o precizie de
i se pune ntr-un balon cotat de 50 mL
1 mg [W3 (11)], se adaug 20 mL de ap,
(6.13), se noteaz greutatea cu o precizie
dup care se adaug 10 mL de reactiv
de 1 mg [W3 (11)], se adaug 20 mL de
diluat Biggs/Szijarto, completai cu ap
ap, dup care se adaug 10 mL de
pn la marcaj. Balonul se rstoarn uor
reactiv diluat Biggs/Szijarto (5.4),
de 5 ori n timpul primelor 30 de minute.
completai cu ap pn la marcaj.
Balonul se rstoarn uor de 5 ori n
Dup 1 or, se ia o parte alicot i se
timpul primelor 30 de minute.
centrifugheaz la 3 000 g timp de
10 min. (poate fi folosit o g mai mare
Dup 1 or, se ia o parte alicot i se
ntr-o perioad de timp micorat n mod
centrifugheaz (6.12) la 3 000 g timp de
corespunztor). Se folosete o cot
10 min. (poate fi folosit o g mai mare
alicot de supernatant pentru analiza
ntr-o perioad de timp micorat n mod HPLC.
corespunztor). Se folosete o cot
alicot de supernatant pentru analiza
HPLC.

Anexa XI (art. 8) Determinarea furajele combinate, pct. 10. Agriculturii i intrrii n vigoare
lactozei n furajele combinate, pct. 10. Determinarea HPLC Industriei a actului naional
Determinarea HPLC Alimentare armonizat
1) Prepararea preliminar a HPLC
10.1. Prepararea preliminar a HPLC
a) Instalarea coloanei i a precoloanei
10.1.1. Instalarea coloanei i a
precoloanei Se intaleaz precoloana (punctul 6,
subpunctul 2) n afara cuptorului de
Se intaleaz precoloana (6.2) n coloan (punctul 6, subpunctul 3) i
afara cuptorului de coloan (6.3) i coloana (punctul 6, subpunctul 1) n
coloana (6.1) n cuptor. cuptor.
Not: n cazul n care cuptorul nu Not: n cazul n care cuptorul nu

conine evi pentru prenclzirea
conine evi pentru prenclzirea eluantului, este necesar ca eluantul s
eluantului, este necesar ca eluantul s treac prin aproximativ 15 cm de eav
treac prin aproximativ 15 cm de eav de oel inoxidabil n cuptor, nainte de a
de oel inoxidabil n cuptor, nainte de a intra n coloan (este absolut necesar ca
intra n coloan (este absolut necesar ca eluantul s se fi nclzit nainte de a intra
eluantul s se fi nclzit nainte de a intra n coloan, altfel va avea loc o cretere a
n coloan, altfel va avea loc o cretere a suprafeei vrfului).
suprafeei vrfului).
b) Detectorul i fluxul iniial
10.1.2. Detectorul i fluxul iniial
Pentru a obine o linie de baz stabil,
Pentru a obine o linie de baz stabil, detectorul de HPLC se pune n funciune
detectorul (6.6) se pune n funciune cu cu cel puin 24 de ore nainte de a ncepe
cel puin 24 de ore nainte de a ncepe analiza. Se stabilete temperatura
analiza. Se stabilete temperatura interioar a detectorului la 35 C. Se
interioar a detectorului la 35 C. Se stabilete debitul la 0,2 ml/min. (punctul
stabilete debitul la 0,2 ml/min. (6.4) 6, subpunctul 4) pentru cel puin
pentru cel puin 20 min., n timp ce 20 min., n timp ce cuptorul de coloan
cuptorul de coloan (6.3) este reglat la este reglat la temperatura camerei.
c) Cuptorul de coloan i debitul final
10.1.3. Cuptorul de coloan i debitul
final Se regleaz cuptorul de coloan la
85 C. Cnd se atinge aceast
Se regleaz cuptorul de coloan (6.3) la temperatur, se crete, dup 30 de
85 C. Cnd se atinge aceast minute, treptat, debitul de la 0,2 ml/min.
temperatur, se crete, dup 30 de la 0,6 ml/min. (punctul 6, subpunctul 4).
minute, treptat, debitul de la 0,2 ml/min. Se las sistemul s ajung n echilibru cu
la 0,6 ml/min. (6.4). Se las sistemul s acest debit i la 85 C, timp de 2 ore sau
ajung n echilibru cu acest debit i la pn se obine o linie de baz stabil.
85 C, timp de 2 ore sau pn se obine o
linie de baz stabil.
10.1.4. Integrarea d) Integrarea
Se aleg cu grij parametrii de colectare a Se aleg cu grij parametrii de colectare a
datelor i integrare (6.7), cum ar fi datelor i integrare (punctul 6,
estimarea datelor, sensibilitatea, subpunctul 7), cum ar fi estimarea
constanta de timp, limea vrfului i datelor, sensibilitatea, constanta de timp,
pragul. limea vrfului i pragul.
Timpul de retenie al lactozei este de Timpul de retenie al lactozei este de

aproximativ 11 minute. aproximativ 11 minute.
Not: Multe programe software de Not: Multe programe software de

strngere de date (6.7) permit o msurare strngere de date (punctul 6, subpunctul
uoar a numrului de plac teoretic. Se 7) permit o msurare uoar a numrului
msoar numrul de plac teoretic al de plac teoretic. Se msoar numrul de
etalonului 1 (8.1) n mod normal i se plac teoretic al etalonului 1 n mod
nlocuiete coloana (6.1) cnd numrul normal i se nlocuiete coloana (punctul
de plac este cu 25 % mai mic dect cel 6, subpunctul 1) cnd numrul de plac
al valorii iniiale a unei noi coloane. este cu 25 % mai mic dect cel al valorii
iniiale a unei noi coloane.
10.1.5. Testarea coloanei de control
e) Testarea coloanei de control
Se verific regulat (cel puin o dat la
fiecare ciclu de analiz) capacitatea Se verific regulat (cel puin o dat la
coloanei de control (6.2) de a elimina fiecare ciclu de analiz) capacitatea
srurile din prob prin injectarea a 25 L coloanei de control de a elimina srurile
de soluie 0,05 % de clorur de sodiu. din prob prin injectarea a 25 L de
De fiecare dat cnd apar vrfuri, soluie 0,05 % de clorur de sodiu. De
coloana de control trebuie schimbat. fiecare dat cnd apar vrfuri, coloana
de control trebuie schimbat.
10.2. Prelucrarea etaloanelor
Se injecteaz, la nceputul fiecrei serii 2) Prelucrarea etaloanelor
de analize, 25 L (6.5) din etalonul
1 (8.1) i apoi din etalonul 2 (8.2). Se injecteaz, la nceputul fiecrei serii
Aceast operaiune se repet la fiecare de analize, 25 L (punctul 6, subpunctul
10-20 de probe i, de asemenea, la 7) din etalonul 1 i apoi din etalonul 2.
sfritul ciclului. Aceast operaiune se repet la fiecare
10-20 de probe i, de asemenea, la
10.3. Prelucrarea probelor sfritul ciclului.
Se injecteaz 25 L de supernatant (9.2) 3) Prelucrarea probelor

din prob.
Se injecteaz 25 L de supernatant
(punctul 9, subpunctul 2) din prob.
Anexa XI (art. 8) Determinarea furajele combinate, pct. 11. Calcularea Agriculturii i intrrii n vigoare
lactozei n furajele combinate, pct. 11. i exprimarea rezltatelor Industriei a actului naional
Calcularea i exprimarea rezltatelor Alimentare armonizat
1) Calibrare
11.1. Calibrare
n mod normal, nlimile vrfurilor sunt
n mod normal, nlimile vrfurilor sunt folosite pentru a calcula rezultatele,
folosite pentru a calcula rezultatele, totui, dac semnalul conine prea mult
totui, dac semnalul conine prea mult zgomot, se poate folosi suprafaa
zgomot, se poate folosi suprafaa vrfului (cuantificarea n cazul nlimii
vrfului (cuantificarea n cazul nlimii vrfului este mai puin influenat de
vrfului este mai puin influenat de vrfurile componentelor n concentraie
vrfurile componentelor n concentraie mic i care sunt separate n parte, dar
mic i care sunt separate n parte, dar nu suficient, de vrful lactozei).
nu suficient, de vrful lactozei).
Cu ajutorul software-ului (6.7) trebuie s Cu ajutorul software-ului (punctul 6,
se calculeze o curb liniar de etalonare subpunctul 7) trebuie s se calculeze o
ce trece forat prin origine. Se verific curb liniar de etalonare ce trece forat
curba pentru a identifica posibila
neliniaritate [se pare c neliniaritatea prin origine. Se verific curba pentru a
este provocat foarte probabil de o identifica posibila neliniaritate
greeal n pregtirea etaloanelor 1 (8.1) (neliniaritatea poate fi provocat de o
sau 2 (8.2), de o integrarea greit i, greeal n pregtirea etaloanelor 1 sau
mai puin probabil, de o funcionare 2 , de o integrare greit i, mai puin
necorespunztoare a injectorului]. probabil, de o funcionare
necorespunztoare a injectorului).
Se folosesc ca date de introducere
concentraiile de lactoz calculate n Se folosesc ca date de introducere
mg/mL ale etaloanelor 1 (8.1) i 2 (8.2), concentraiile de lactoz calculate n
cum ar fi lactoza fr ap. mg/mL ale etaloanelor 1 i 2 , cum ar fi
nclinarea (RF) a liniei de calibrare este lactoza fr ap.
definit de raportul
suprafa/concentraie n mg/mL. nclinarea (RF) a liniei de calibrare este
11.2. Probe definit de raportul
suprafa/concentraie n mg/mL.
Rezultatul analizei este obinut n
g/100 g i este calculat folosind 2) Probe
software-ul (6.7) sau folosind
urmtoarea formul: Rezultatul analizei este obinut n
g/100 g i este calculat folosind
software-ul (punctul 6, subpunctul 7) sau
folosind urmtoarea formul:
unde:
C: concentraia lactozei n g/100 g lapte H x ( W 1+ W 2 ) x 50
C= x 0,1
praf; RF x W 1 x W 3
H: nlimea vrfului de lactoz al
probei;
unde:
RF: factorul de rspuns (sau nclinarea)
curbei de calibrare n mV/mg/mL; C - concentraia lactozei n g/100 g lapte
W1: greutatea probei de lapte praf n g
(9.1);
praf;
W2: greutatea apei adugat n g la proba
de lapte praf (9.1); H - nlimea vrfului de lactoz al
W3: greutatea probei din soluia probei;
reconstituit de lapte praf n g (9.2);
RF - factorul de rspuns (sau nclinarea)
50: volumul balonului cotat folosit n curbei de calibrare n mV/mg/mL;
(9.2);
0,1: conversia rezultatului n g/100 g. W1 - greutatea probei de lapte praf n g
W2 - greutatea apei adugat n g la proba

de lapte praf (punctul 9, subpunctul 1);
W3 - greutatea probei din soluia

reconstituit de lapte praf n g (punctul
9, subpunctul 2);
50 - volumul balonului cotat folosit n

0,1 - conversia rezultatului n g/100 g.

Anexa nr. 11 Determinarea lactozei n Parial Standardul ISO 5725 Ministerul Din momentul
Anexa XI (art. 8) Determinarea furajele combinate, pct. 12. Precizia compatibil este substituit cu Agriculturii i intrrii n vigoare
lactozei n furajele combinate, pct. 12. standardul naional SM Industriei a actului naional
Precizia Se poate ca valorile obinute prin aceast SR ISO 5725-1. Alimentare armonizat
prob interlaboratoare s nu fie
aplicabile la valorile i matricele de
Se poate ca valorile obinute prin aceast
concentraie altele dect cele date.
prob interlaboratoare s nu fie
Valorile pentru repetabilitate i
aplicabile la valorile i matricele de
reproductibilitate vor fi derivate din
concentraie altele dect cele date.
rezultatul unei probe interlaboratoare
Valorile pentru repetabilitate i
reproductibilitate vor fi derivate din realizate conform cu SM SR ISO 5725-
rezultatul unei probe interlaboratoare 1.
realizate conform cu ISO 5725 ( 13 ).
1) Repetabilitate
12.1. Repetabilitate
Diferena absolut dintre rezultatele a
Diferena absolut dintre rezultatele a dou probe individuale, obinute prin
dou probe individuale, obinute prin folosirea aceleiai metode pe material de
folosirea aceleiai metode pe material de prob identic n acelai laborator, cu
prob identic n acelai laborator, cu acelai operator, folosind aceeai
acelai operator, folosind aceeai aparatur, ntr-un interval scurt de timp,
aparatur, ntr-un interval scurt de timp, nu va depi, n peste 5 % din cazuri,
nu va depi, n peste 5 % din cazuri, xxx (care va fi determinat printr-o
xxx (care va fi determinat printr-o prob realizat n comun).
14
prob realizat n comun) ( ).
Diferena absolut ntre dou rezultate
Diferena absolut ntre dou rezultate de probe individuale, obinute folosind
de probe individuale, obinute folosind aceeai metod, pe material de prob
aceeai metod, pe material de prob identic, n laboratoare diferite, cu diferii
identic, n laboratoare diferite, cu diferii operatori, folosind aparatur diferit, nu
operatori, folosind aparatur diferit, nu va depi, n peste 5 % din cazuri,
va depi, n peste 5 % din cazuri, 0,5 g/100 g (care va fi determinat
0,5 g/100 g (care va fi determinat printr-o prob realizat n comun).
printr-o prob realizat n comun).
Anexa nr. 12 Detectarea zerului praf Compatibil - Ministerul Din momentul

Anexa XII (art. 9) Detectarea zerului din laptele praf degresat destinat Agriculturii i intrrii n vigoare
praf din laptele praf degresat destinat depozitrii publice prin determinarea Industriei a actului naional
depozitrii publice prin determinarea cromatografiei lichide de nalt Alimentare armonizat
performan a
cromatografiei lichide de nalt
cazeinomacropeptidelor (HPLC), pct.
performan a 1. Obiectul i domeniul de aplicare
cazeinomacropeptidelor (HPLC), pct. Aceast metod permite detectarea
1. Obiectul i domeniul de aplicare zerului nchegat din laptele praf degresat
destinat depozitrii publice prin
determinarea cazeinomacropeptidelor.
Aceast metod permite detectarea
zerului nchegat din laptele praf degresat
destinat depozitrii publice prin
determinarea cazeinomacropeptidelor.
Anexa nr. 12 Detectarea zerului praf Parial Standardul ISO 707 Ministerul Din momentul
Anexa XII (art. 9) Detectarea zerului din laptele praf degresat destinat compatibil Lapte i produse Agriculturii i intrrii n vigoare
praf din laptele praf degresat destinat depozitrii publice prin determinarea lactate Metode de Industriei a actului naional
depozitrii publice prin determinarea cromatografiei lichide de nalt prelevare a probelor Alimentare armonizat
performan a este substituit cu
cazeinomacropeptidelor (HPLC), pct. standardul naional SM
performan a 2. Referine SR EN ISO 707:2012
cazeinomacropeptidelor (HPLC), pct. Standardul SM SR EN ISO 707:2012 Lapte i produse
2. Referine Lapte i produse lactate. Ghid pentru lactate. Ghid pentru
eantionare. eantionare.
Standardul internaional ISO 707
Lapte i produse lactate Metode de
prelevare a probelor conform indicaiilor
din anexa I punctul 2 litera (c) ultimul
paragraf.

performan a
performan a 3. Definiie
cazeinomacropeptidelor (HPLC), pct. Coninutul de substane solide din zer
3. Definiie nchegat se definete ca procent de mas
determinat de coninutul de
cazeinomacropeptide prin procedura
Coninutul de substane solide din zer
descris.
nchegat se definete ca procent de mas
determinat de coninutul de
cazeinomacropeptide prin procedura
descris.

performan a
performan a 4. Principiu
4. Principiu 1) Reconstituirea laptelui praf degresat,
ndeprtarea grsimilor i
Reconstituirea laptelui praf degresat, proteinelor cu acid tricloroacetic,
ndeprtarea grsimilor i proteinelor cu urmat de centrifugare sau filtrare.
acid tricloroacetic, urmat de
2) Determinarea cantitii de
centrifugare sau filtrare. cazeinomacropeptide (CMP) din
supranatant prin cromatografie
Determinarea cantitii de lichid de nalt performan
cazeinomacropeptide (CMP) din (HPLC).
supranatant prin cromatografie lichid
de nalt performan (HPLC). 3) Evaluarea rezultatelor obinute
pentru probe fa de probe etalon
Evaluarea rezultatelor obinute pentru formate din lapte praf degresat cu
probe fa de probe etalon formate din sau fr adugarea unui procent
lapte praf degresat cu sau fr adugarea cunoscut de zer praf.
unui procent cunoscut de zer praf.

performan a
performan a 5. Reactivi
5. Reactivi Toi reactivii utilizai trebuie s fie de
calitate analitic recunoscut. Apa
Toi reactivii utilizai trebuie s fie de utilizat trebuie s fie ap distilat sau
calitate analitic recunoscut. Apa ap de o puritate cel puin echivalent.
ap de o puritate cel puin echivalent. 1) Soluie de acid tricloroacetic
5.1. Soluie de acid tricloroacetic
Se dizolv 240 g de acid tricloroacetic Se dizolv 240 g de acid tricloroacetic
(CCl3COOH) n ap i se completeaz (CCl3COOH) n ap i se completeaz
pn la 1 000 ml. Soluia trebuie s fie pn la 1 000 ml. Soluia trebuie s fie
limpede i incolor. limpede i incolor.
5.2. Soluie eluant, pH 6,0
Se dizolv 1,74 g de fosfat dipotasic 2) Soluie eluant, pH 6,0
(K2HPO4), 12,37 g de fosfat
monopotasic (KH2PO4) i 21,41 g de Se dizolv 1,74 g de fosfat dipotasic
sulfat de sodiu (Na2SO4) n aproximativ (K2HPO4), 12,37 g de fosfat
700 ml de ap. n cazul n care este monopotasic (KH2PO4) i 21,41 g de
necesar, se ajusteaz cu ajutorul unei sulfat de sodiu (Na2SO4) n aproximativ
soluii de acid fosforic sau hidroxid de 700 ml de ap. n cazul n care este
potasiu pn la obinerea unui pH de 6,0.
Se completeaz cu ap pn la 1 000 ml necesar, se ajusteaz cu ajutorul unei
i se omogenizeaz. soluii de acid fosforic sau hidroxid de
Not: Compoziia eluantului poate fi potasiu pn la obinerea unui pH de 6,0.
actualizat pentru a respecta certificatul
standardelor sau recomandrile Se completeaz cu ap pn la 1 000 ml
productorului de pe ambalajul coloanei. i se omogenizeaz.
Soluia eluant se filtreaz nainte de Not: Compoziia eluantului poate fi
folosire printr-o membran filtrant cu actualizat pentru a respecta certificatul
diametrul porilor de aproximativ standardelor sau recomandrile
0,45 m. productorului de pe ambalajul coloanei.
5.3. Solvent de splare
Se amestec un volum de acetonitril Soluia eluant se filtreaz nainte de
(CH3CN) cu nou volume de ap. folosire printr-o membran filtrant cu
Amestecul se filtreaz nainte de folosire diametrul porilor de aproximativ
printr-o membran filtrant cu pori cu 0,45 m.
diametrul de 0,45 m.
Not: Se poate folosi orice alt solvent de 3) Solvent de splare
splare cu efect bactericid care nu
afecteaz eficiena rezoluiei coloanelor. Se amestec un volum de acetonitril
5.4. Probele etalon (CH3CN) cu nou volume de ap.
5.4.1. Lapte praf degresat care Amestecul se filtreaz nainte de folosire
ndeplinete cerinele prezentei rezoluii printr-o membran filtrant cu pori cu
(respectiv [0]). diametrul de 0,45 m.
5.4.2. Acelai lapte praf degresat
modificat cu 5 % (m/m) zer nchegat Not: Se poate folosi orice alt solvent de
praf cu compoziie standard (respectiv splare cu efect bactericid care nu
[5]). afecteaz eficiena rezoluiei coloanelor.
4) Probele etalon
a) Lapte praf degresat care

ndeplinete cerinele prezentei
rezoluii (respectiv [0]).
b) Acelai lapte praf degresat

modificat cu 5 % (m/m) zer
nchegat praf cu compoziie
standard (respectiv [5]).

performan a
performan a 6. Aparatur
6. Aparatur 1) Balan analitic
6.1. Balan analitic 2) Centrifug opional cu o for de

centrifugare de 2 200 g, prevzut
6.2. Centrifug opional cu o for de cu tuburi astupate sau acoperite
centrifugare de 2 200 g, prevzut cu pentru centrifugare cu o capacitate
de aproximativ 50 ml
tuburi astupate sau acoperite pentru
centrifugare cu o capacitate de 3) Agitator mecanic
aproximativ 50 ml.
4) Agitator magnetic
6.3. Agitator mecanic
5) Coloane de sticl cu diametrul de
6.4. Agitator magnetic aproximativ 7 cm
6.5. Coloane de sticl cu diametrul de 6) Filtre de hrtie cu filtrare medie cu
aproximativ 7 cm diametrul de aproximativ 12,5 cm
6.6. Filtre de hrtie cu filtrare medie cu 7) Dispozitiv de sticl pentru filtrare

prevzut cu membran filtrant cu
diametrul de aproximativ 12,5 cm
diametrul porilor de aproximativ
0,45 m
6.7. Dispozitiv de sticl pentru filtrare
prevzut cu membran filtrant cu 8) Pipete gradate de 10 ml sau un
diametrul porilor de aproximativ sistem prin care pot trece 10,0 ml n
0,45 m dou minute
6.8. Pipete gradate de 10 ml (ISO 648, 9) Sistem prin care pot trece 20,0 ml de
clasa A sau ISO/R 835) sau un sistem ap la aproximativ 50 C
prin care pot trece 10,0 ml n dou
10) Baie termostat de ap, reglat la
minute 25 0,5 C
6.9. Sistem prin care pot trece 20,0 ml de 11) Echipament pentru HPLC format
ap la aproximativ 50 C din:
6.10. Baie termostat de ap, reglat la a) Pomp

25 0,5 C
b) Injector, manual sau automat, cu o
6.11. Echipament pentru HPLC format capacitate de 15-30 l
din:
c) Dou coloane TSK 2 000-SW n
serie (lungime de 30 cm, diametru
6.11.1. Pomp intern de 0,75 cm) sau coloane
echivalente i o precoloan
6.11.2. Injector, manual sau automat, cu (3 cm 0,3 cm) umplute cu I 125
o capacitate de 15-30 l sau cu un material cu eficien
6.11.3. Dou coloane TSK 2 000-SW n echivalent
serie (lungime de 30 cm, diametru intern
de 0,75 cm) sau coloane echivalente (de d) Cuptor cu coloan termostat, reglat
exemplu, TSK 2 000-SWxl unic, Agilent la 35 1 C
Technologies Zorbax GF 250 unic) i o e) Detector UV cu lungime de und
precoloan (3 cm 0,3 cm) umplute cu I variabil care permite realizarea de
125 sau cu un material cu eficien msurtori la 205 nm cu o
echivalent sensibilitate de 0,008 A
6.11.4. Cuptor cu coloan termostat, f) Integrator cu ajutorul cruia se

reglat la 35 1 C poate realiza integrarea la linia de
baz
6.11.5. Detector UV cu lungime de und
Not: Se poate lucra cu coloanele aflate
variabil care permite realizarea de la temperatura camerei, dar puterea lor
msurtori la 205 nm cu o sensibilitate de rezoluie este puin mai mic. n acest
de 0,008 A caz, temperatura nu trebui s varieze cu
mai mult de 5 C n nici o serie de
6.11.6. Integrator cu ajutorul cruia se analize.
poate realiza integrarea la linia de baz
Not: Se poate lucra cu coloanele aflate

la temperatura camerei, dar puterea lor
de rezoluie este puin mai mic. n
acest caz, temperatura nu trebui s
varieze cu mai mult de 5 C n nicio
serie de analize.
Anexa nr. 12 Detectarea zerului praf Parial Standardul ISO 707 Ministerul Din momentul
Anexa XII (art. 9) Detectarea zerului din laptele praf degresat destinat compatibil este substituit cu Agriculturii i intrrii n vigoare
depozitrii publice prin determinarea standardul naional SM Industriei a actului naional
praf din laptele praf degresat destinat cromatografiei lichide de nalt SR EN ISO 707. A Alimentare armonizat
depozitrii publice prin determinarea performan a doua fraz din pct. 7.1.
cromatografiei lichide de nalt cazeinomacropeptidelor (HPLC), pct. a actului comunitar nu
7. Prelevarea probelor este inclus n actul
performan a
naional, deoarece, n
cazeinomacropeptidelor (HPLC), pct. 1) Probele se preleveaz conform prezent, pe teritoriul
7. Prelevarea probelor procedurii descrise de standardul Republicii Moldova nu
SM SR EN ISO 707. exist alte metode de
7.1. Probele se preleveaz conform prelevare a probelor
procedurii descrise de standardul 2) Probele se depoziteaz n condiii n dect cea indicat mai
internaional ISO 707. Cu toate acestea, care nu poate surveni nici o sus.
statele membre pot folosi i alt metod deteriorare sau modificare a
compoziiei.
de prelevare a probelor, cu condiia ca
aceasta s respecte principiile
standardului menionat anterior.
7.2. Probele se depoziteaz n condiii n

care nu poate surveni nicio deteriorare
sau modificare a compoziiei.

performan a
performan a 8. Procedur
8. Procedur
8.1. Prepararea probei de analiz
Se transfer laptele praf ntr-un recipient 1) Prepararea probei de analiz
cu o capacitate aproximativ tripl fa de
volumul laptelui praf, prevzut cu un Se transfer laptele praf ntr-un recipient
capac etan la aer. Recipientul se nchide cu o capacitate aproximativ tripl fa de
imediat. Laptele praf se amestec bine volumul laptelui praf, prevzut cu un
prin rsturnri repetate ale recipientului. capac etan la aer. Recipientul se nchide
8.2. Cantitatea analizat imediat. Laptele praf se amestec bine
prin rsturnri repetate ale recipientului.
Se cntresc 2,000 0,001 g din proba
analizat ntr-un tub de centrifugare (6.2) 2) Cantitatea analizat
sau ntr-un balon astupat adecvat
(50 ml). Se cntresc 2,000 0,001 g din proba
8.3. ndeprtarea grsimii i a analizat ntr-un tub de centrifugare sau
proteinelor ntr-un balon astupat adecvat (50 ml).
8.3.1. Se adaug 20,0 ml de ap cald
(50 C) la cantitatea analizat. Se 3) ndeprtarea grsimii i a proteinelor
dizolv laptele praf agitndu-se cteva
minute cu ajutorul unui agitator mecanic a) Se adaug 20,0 ml de ap cald
(6.3) Tubul se introduce n baia de ap (50 C) la cantitatea analizat. Se
(6.10) i se las s se echilibreze la dizolv laptele praf agitndu-se
25 C. cteva minute cu ajutorul unui
8.3.2. Se adaug 10,0 ml de soluie de agitator mecanic. Tubul se
acid tricloroacetic (5.1) la aproximativ introduce n baia de ap i se las
25 C timp de dou minute, s se echilibreze la 25 C.
amestecndu-se puternic cu ajutorul unui
agitator magnetic (6.4). Tubul se b) Se adaug 10,0 ml de soluie de
introduce ntr-o baie de ap (6.10) i se acid tricloroacetic la aproximativ
las timp de 60 de minute. 25 C timp de dou minute,
8.3. 3. Se centrifugheaz (6.2) timp de amestecndu-se puternic cu
10 minute la 2 200 g sau se filtreaz ajutorul unui agitator magnetic.
printr-o hrtie (6.6), eliminndu-se Tubul se introduce ntr-o baie de
primii 5 ml de filtrat.
8.4. Determinarea cromatografic
8.4.1. Se injecteaz 15-30 l de ap i se las timp de 60 de minute.
supernatant sau filtrat (8.3.3) msurat cu
precizie n aparatul HPLC (6.11) c) Se centrifugheaz timp de 10
funcionnd la un debit de 1,0 ml de minute la 2 200 g sau se filtreaz
soluie eluant (5.2) pe minut. printr-o hrtie, eliminndu-se
Nota 1: Se poate folosi un alt debit n primii 5 ml de filtrat.
funcie de diametrul intern al coloanelor
utilizate sau de instruciunile 4) Determinarea cromatografic
productorului coloanei.
Nota 2: Soluia eluant (5.2) se menine a) Se injecteaz 15-30 l de
la 85 C pe parcursul ntregii analize supernatant sau filtrat msurat cu
cromatografice pentru ca eluantul s se precizie n aparatul HPLC
menin degazat i pentru a mpiedica funcionnd la un debit de 1,0 ml
dezvoltarea bacteriilor. Se poate recurge de soluie eluant pe minut.
la orice msur de precauie cu efect
similar. Nota 1: Se poate folosi un alt debit n
Nota 3: Coloanele se cltesc cu ap la funcie de diametrul intern al coloanelor
fiecare ntrerupere. Soluia nu se las utilizate sau de instruciunile
niciodat n coloane (5.2). productorului coloanei.
nainte de orice ntrerupere care dureaz
mai mult de 24 de ore, coloanele se Nota 2: Soluia eluant se menine la
cltesc cu ap i se spal cu soluie (5.3) 85 C pe parcursul ntregii analize
timp de cel puin trei ore la un debit de cromatografice pentru ca eluantul s se
0,2 ml pe minut. menin degazat i pentru a mpiedica
8.4.2. Rezultatele analizei dezvoltarea bacteriilor. Se poate recurge
cromatografice a probei etalon [E] se la orice msur de precauie cu efect
obin sub forma unei cromatograme n similar.
care fiecare vrf se identific dup
timpul de retenie RT dup cum Nota 3: Coloanele se cltesc cu ap la
urmeaz: fiecare ntrerupere. Soluia nu se las
niciodat n coloane.
Vr- Al doilea vrf al
ful cromatogramei cu un RT de nainte de orice ntrerupere care dureaz
II aproximativ 12,5 minute. mai mult de 24 de ore, coloanele se
cltesc cu ap i se spal cu soluie timp
Vr- Al treilea vrf al de cel puin trei ore la un debit de 0,2 ml
ful cromatogramei, corespunznd pe minut.
III CMP, cu un RT de 15,5
minute. b) Rezultatele analizei cromatografice
Alegerea coloanei (coloanelor) poate a probei etalon [E] se obin sub
afecta timpii de retenie ai fiecrui vrf, forma unei cromatograme n care
n mod considerabil. fiecare vrf se identific dup
Integratorul (6.11.6) calculeaz automat timpul de retenie RT dup cum
suprafaa A a fiecrui vrf. urmeaz:
AII: suprafaa vrfului II

Vr- Al doilea vrf al
AIII: suprafaa vrfului III ful cromatogramei cu un RT de
Este esenial s se examineze aspectul II aproximativ 12,5 minute.
fiecrei cromatograme nainte de
realizarea interpretrii cantitative pentru Vr- Al treilea vrf al
a se detecta orice eventuale anomalii ful cromatogramei, corespunznd
datorate fie funcionrii III CMP, cu un RT de 15,5 minute.
necorespunztoare a aparatului sau a
coloanelor, fie originii sau naturii probei Alegerea coloanei (coloanelor) poate
analizate. afecta timpii de retenie ai fiecrui vrf,
n cazul n care exist dubii, analiza se n mod considerabil.
repet.
8.5. Calibrare Integratorul calculeaz automat
8.5.1. Probelor etalon (5.4) li se aplic suprafaa A a fiecrui vrf.
exact procedura descris de la punctul
8.2 la punctul 8.4.2.
Se folosesc soluii proaspt preparate, AII: suprafaa vrfului II
ntruct CMP se degradeaz ntr-un
mediu 8 % tricloroacetic. Pierderea este
estimat la 0,2 % pe or la 30 C. AIII: suprafaa vrfului III
8.5.2. nainte de determinarea
cromatografic a probelor, coloanele Este esenial s se examineze aspectul
trebuie condiionate prin injectarea fiecrei cromatograme nainte de
repetat a probei etalon (5.4.2) n soluie realizarea interpretrii cantitative pentru
(8.5.1), pn cnd suprafaa vrfului i a se detecta orice eventuale anomalii
timpul de retenie al a cestuia pentru datorate fie funcionrii
CMP sunt constante. necorespunztoare a aparatului sau a
8.5.3. Se determin coeficientul de coloanelor, fie originii sau naturii probei
rspuns R prin injectarea aceluiai analizate.
volum de filtrai (8.5.1) folosit i n
probe. n cazul n care exist dubii, analiza se
repet.
5) Calibrare
a) Probelor etalon li se aplic exact

procedura descris de la,
subpunctul 2 din prezentul punct la
subpunctul 4, litera b) din
prezentul punct.
Se folosesc soluii proaspt preparate,

ntruct CMP se degradeaz ntr-un
mediu 8 % tricloroacetic. Pierderea este
estimat la 0,2 % pe or la 30 C.
b) nainte de determinarea
cromatografic a probelor,
coloanele trebuie condiionate prin
injectarea repetat a probei etalon
n soluie (litera a) din prezentul
subpunct), pn cnd suprafaa
vrfului i timpul de retenie al
acestuia pentru CMP sunt
constante.
Se determin coeficientul de rspuns R

prin injectarea aceluiai volum de filtrai
(litera a) din prezentul subpunct) folosit
i n probe.
performan a
performan a 9. Exprimarea rezultatelor
9. Exprimarea rezultatelor 1) Metoda de calcul i formule
9.1. Metoda de calcul i formule a) Calcularea factorilor de rspuns R:

9.1.1. Calcularea factorilor de rspuns
R: unde:
unde: Vrful II: RII = 100/(AII[0])
RII= Vrful II: RII -II[0])
RII = 100/(A
coeficienii coeficienii de rspuns pentru vrfurile
de rspuns pentru vrfurile II; II;
AII [0] = suprafeele vrfurilor II pentru
proba etalon [0] obinute la 8.5.3. AII [0] - suprafeele vrfurilor II
unde: pentru proba etalon [0] obinute la
RIII= Vrful III: RIII = W/(AIII[5]punctul 8, subpunctul 5, litera c).
AIII[0])
coeficientul de rspuns pentru vrful III;
AIII [0] i AIII [5] = suprafeele vrfului
III pentru probele etalon [0] i, respectiv,
[5] obinute la 8.5.3; unde: Vrful III: RIII = W/(AIII[5] AIII[0])
W= cantitatea de zer din proba etalon
[5], respectiv 5. RIII - coeficientul de rspuns pentru
9.1.2. Calcularea suprafeei relative a vrful III;
vrfurilor probei [E] AIII [0] i AIII [5] - suprafeele vrfului
SII[E] = RII AII[E]
III pentru probele etalon [0] i, respectiv,
SIII[E] = RIII AIII[E]
SIV[E] = RIV AIV[E] [5] obinute la punctul 8, subpunctul 5,
unde: litera c);
SII [E], SIII [E], SIV [E] = suprafeele
relative ale vrfurilor II, III i, respectiv, W - cantitatea de zer din proba etalon
IV din proba [E]; [5], respectiv 5.
AII [E], AIII [E] = suprafeele vrfurilor II
i, respectiv, IV din proba [E] obinute la b) Calcularea suprafeei relative a
8.4.2; vrfurilor probei [E]
RII, RIII= coeficienii de rspuns calculai
la 9.1.1. SII[E] = RII AII[E]
9.1.3. Calcularea timpului relativ de
retenie al vrfului III pentru proba [E]: SIII[E] = RIII AIII[E]
RRTIII[E] = (RTIII[E])/(RTIII[5]) SIV[E] = RIV AIV[E]
unde: unde:
RRTIII [E] = timpul relativ de retenie al SII [E], SIII [E], SIV [E] - suprafeele
vrfului III pentru proba [E];
RTIII [E] = timpul relativ de retenie al relative ale vrfurilor II, III i, respectiv,
vrfului III din proba [E] obinut la IV din proba [E];
8.4.2; AII [E], AIII [E] - suprafeele vrfurilor
RTIII [5] = timpul relativ de retenie al II i, respectiv, IV din proba [E] obinute
vrfului III din proba de control [5] la punctul 8, subpunctul 4), litera b);
obinut la 8.5.3.
9.1.4. Experimentele au demonstrat c RII, RIII - coeficienii de rspuns
exist o relaie liniar ntre timpul relativ calculai la litera a) din prezentul
de retenie al vrfului III, respectiv
RRTIII [E] i procentul de zer praf de
pn la 10 % adugat. subpunct.
RRTIII [E] este < 1,000 n cazul n care
coninutul de zer este > 5 %; c) Calcularea timpului relativ de
RRTIII [E] este 1,000 n cazul n care retenie al vrfului III pentru proba
[E]: RRTIII[E] = (RTIII[E])/
coninutul de zer este 5 %.
(RTIII[5])
Nesigurana permis pentru valorile
RRTIII este de 0,002.
unde:
n mod normal, valoarea RRTIII [0]
deviaz puin de la 1,034. n funcie de
RRTIII [E] - timpul relativ de retenie al
starea coloanelor, valoarea se poate
apropia de 1,000, dar este ntotdeauna vrfului III pentru proba [E];
mai mare de aceast valoare. RTIII [E] - timpul relativ de retenie al
9.2. Calcularea procentului de zer vrfului III din proba [E] obinut la
nchegat praf din prob: punctul 8, subpunctul 4, litera b);
W = SIII[E] [1, 3 + (SIII[0] 0, 9)]
unde: RTIII [5] - timpul relativ de retenie al
W= procentul m/m de zer nchegat n vrfului III din proba de control [5]
proba [E]; obinut la punctul 8, subpunctul 5, litera
SIII [E] = suprafaa relativ a vrfului III c).
al probei analizate [E] obinut ca la
9.1.2; d) Exist o relaie liniar ntre timpul
1,3= reprezint suprafaa medie relativ relativ de retenie al vrfului III,
a vrfului III exprimat n grame de zer respectiv RRTIII [E] i procentul de
nchegat pe 100 g determinat pentru zer praf de pn la 10 % adugat.
lapte praf degresat nemodificat cu
diferite origini. Aceast valoare a fost - RRTIII [E] este < 1,000 n cazul n
obinut experimental; care coninutul de zer este > 5 %;
SIII [0] = reprezint suprafaa relativ a
vrfului III egal cu RIII AIII [0]. Aceste - RRTIII [E] este 1,000 n cazul n
valori au fost obinute la 9.1.1 i, care coninutul de zer este 5 %.
respectiv, 8.5.3;
(SIII [0] 0,9) = reprezint corecia care
trebui adus suprafeei relative 1,3 cnd Nesigurana permis pentru valorile
SIII [0] nu are valoarea 0,9. n mod RRTIII este de 0,002.
experimental, suprafaa medie relativ a n mod normal, valoarea RRTIII [0]
vrfului III al probei martor [0] este de deviaz puin de la 1,034. n funcie de
0,9. starea coloanelor, valoarea se poate
9.3. Precizia metodei apropia de 1,000, dar este ntotdeauna
9.3.1. Repetabilitate mai mare de aceast valoare.
determinri efectuate simultan sau n cel 2) Calcularea procentului de zer
mai scurt interval de timp posibil de nchegat praf din prob:
acelai operator care utilizeaz aceeai
aparatur pe material de analiz identic W = SIII[E] [1, 3 + (SIII[0] 0, 9)]
nu trebuie s depeasc 0,2 % m/m.
9.3.2. Reproductibilitate unde:
Diferena dintre dou rezultate separate W - procentul m/m de zer nchegat n
i independente, obinute de doi proba [E];
operatori care lucreaz n laboratoare SIII [E] - suprafaa relativ a vrfului III
diferite cu material de analiz identic nu al probei analizate [E] obinut ca la
trebuie s depeasc 0,4 % m/m. subpunctul 1, litera b) din prezentul
9.4. Interpretare punct;
9.4.1. Se presupune c zerul este absent
1,3 - reprezint suprafaa medie relativ
n cazul n care suprafaa relativ a
vrfului III, SIII[E] exprimat n grame a vrfului III exprimat n grame de zer
de zer nchegat pe o sut de grame de nchegat pe 100 g determinat pentru
produs este 2,0 + (SIII[0] 0,9), unde lapte praf degresat nemodificat cu
2,0= valoarea maxim permis a diferite origini. Aceast valoare a fost
suprafeei relative a vrfului III avndu- obinut experimental;
se n vedere suprafaa relativ a vrfului S [0] - reprezint suprafaa relativ a
III
III, respectiv 1,3, nesigurana datorat
vrfului III egal cu RIII AIII [0]. Aceste
variaiilor compoziiei laptelui praf
degresat i reproductibilitatea metodei valori au fost obinute la subpunctul 1,
(9.3.2); litera a) din prezentul punct i, respectiv,
(SIII [0] 0,9) = corecia care trebuie punctual 8, subpunctul 5, litera c);
adus cnd suprafaa SIII [0] nu este 0,9
(a se vedea punctul 9.2). (SIII [0] 0,9) - reprezint corecia care
9.4.2. n cazul n care suprafaa relativ trebui adus suprafeei relative 1,3 cnd
a vrfului III, SIII[E] este > 2,0 + (SIII[0] SIII [0] nu are valoarea 0,9. n mod
0,9) i suprafaa relativ a vrfului II, experimental, suprafaa medie relativ a
SII[E] 160, se determin coninutul de vrfului III al probei martor [0] este de
zer nchegat conform indicaiilor de la 0,9.
punctul 9.2.
9.4.3. n cazul n care suprafaa relativ 3) Precizia metodei
a vrfului III, SIII[E] este > 2,0 + (SIII[0]
0,9) i suprafaa relativ a vrfului II, a) Repetabilitate
SII[E] 160, se determin coninutul
total de proteine (P%); apoi se Diferena dintre rezultatele a dou
examineaz graficele 1 i 2. determinri efectuate simultan sau n cel
9.4.3.1. Datele obinute n urma analizei mai scurt interval de timp posibil de
probelor de lapte praf degresat acelai operator care utilizeaz aceeai
nemodificat cu un coninut total de aparatur pe material de analiz identic
proteine ridicat sunt reprezentate n nu trebuie s depeasc 0,2 % m/m.
graficele 1 i 2.
Linia continu reprezint regresia b) Reproductibilitate
liniar, ai crei coeficieni se calculeaz
prin metoda ptratului celui mai mic. Diferena dintre dou rezultate separate
i independente, obinute de doi
Linia dreapt punctat marcheaz limita operatori care lucreaz n laboratoare
superioar a suprafeei relative a vrfului diferite cu material de analiz identic nu
III, cu probabilitatea ca aceasta s nu fie trebuie s depeasc 0,4 % m/m.
depit n 90 % din cazuri. Pct. 10. Interpretare
Ecuaiile liniilor drepte punctate de pe
graficele 1 i 2 sunt: 1) Se presupune c zerul este absent n
SIII = 0,376 P % 10,7 (graficul 1) cazul n care suprafaa relativ a
SIII = 0,0123 SII [E] + 0,93 (graficul 2) vrfului III, SIII[E] exprimat n
i, respectiv, unde: grame de zer nchegat pe o sut de
SIII= suprafaa relativ a vrfului III
calculat fie pe baza coninutului total de grame de produs este 2,0 + (SIII[0]
proteine, fie pe baza suprafeei relative a 0,9), unde
vrfului SII[E];
P %= coninutul total de proteine 2,0 - valoarea maxim permis a
exprimat ca procent de mas; suprafeei relative a vrfului III avndu-
se n vedere suprafaa relativ a vrfului
(SII [E] = suprafaa relativ pentru III, respectiv 1,3, nesigurana datorat
prob calculat la punctul 9.1.2. variaiilor compoziiei laptelui praf
degresat i reproductibilitatea metodei
Pe baza acestor ecuaii rezult (punctul 9, subpunctul 3, litera b));
graficele din figura 1.3, menionate la
9.2. (SIII [0] 0,9) - corecia care trebuie
Diferena (T1 i T2) dintre adus cnd suprafaa SIII [0] nu este 0,9
suprafaa relativ SIII[E] (punctul 9, subpunctul 2).
determinat i suprafaa relativ
SIII se calculeaz dup cum 2) n cazul n care suprafaa relativ a
urmeaz: T1 = SIII[E] [(0,376 vrfului III, SIII[E] este > 2,0 +
P % 10,7) + (SIII[0] 0,9)]T2 = (SIII[0] 0,9) i suprafaa relativ a
SIII[E] [(0,0123 SII[E] + 0,93) + vrfului II, SII[E] 160, se
(SIII[0] 0,9)] determin coninutul de zer nchegat
9.4.3.2. conform indicaiilor de la punctul 9,
n cazul au valoarea zero subpunctul 2.
n care T1 sau mai mic, nu
3) n cazul n care suprafaa relativ a
i/sau T2 se poate
vrfului III, SIII[E] este > 2,0 +
determina (SIII[0] 0,9) i suprafaa relativ a
prezena zerului vrfului II, SII[E] 160, se
nchegat. determin coninutul total de
n cazul au o valoare mai proteine (P%); apoi se examineaz
n care mare de zero, graficele 1 i 2.
T1 i T2 zerul nchegat este
prezent.
Coninutul de zer nchegat se calculeaz
cu ajutorul formulei: W = T2 + 0,91
unde:
0,91 este distana pe axa vertical
ntre linia dreapt continu i linia
dreapt punctat.
a) Linia continu reprezint regresia

liniar, ai crei coeficieni se
calculeaz prin metoda ptratului
celui mai mic.
Linia dreapt punctat marcheaz limita

superioar a suprafeei relative a vrfului
III, cu probabilitatea ca aceasta s nu fie
depit n 90 % din cazuri.
Ecuaiile liniilor drepte punctate de pe

graficele 1 i 2 sunt:
SIII = 0,376 P % 10,7 (graficul 1)
SIII = 0,0123 SII [E] + 0,93 (graficul 2)

i, respectiv, unde:
SIII - suprafaa relativ a vrfului III
calculat fie pe baza coninutului total de
proteine, fie pe baza suprafeei relative a
vrfului SII[E];
P % - coninutul total de proteine
exprimat ca procent de mas;
SII [E] - suprafaa relativ pentru prob
calculat la punctul 9, subpunctul 1,
litera b).
Diferena (T1 i T2) dintre suprafaa

relativ SIII[E] determinat i suprafaa
relativ SIII se calculeaz dup cum
urmeaz: T1 = SIII[E] [(0,376 P %
10,7) + (SIII[0] 0,9)]T2 = SIII[E]
[(0,0123 SII[E] + 0,93) + (SIII[0] 0,9)]
b) n cazul n care T1 i/sau T2 au

valoarea zero sau mai mic, nu se
poate determina prezena zerului
nchegat.
n cazul n care T1 i T2 au o valoare mai

mare de zero, zerul nchegat este
prezent.
Coninutul de zer nchegat se calculeaz

cu ajutorul formulei: W = T2+0,91
unde:
0,91 este distana pe axa vertical ntre

linia dreapt continu i linia dreapt
punctat.
Anexa XIII (art. 9) Determinarea neaplicabile
substanelor solide din zer nchegat n
laptele praf degresat i n amestecurile
menionate n regulamentul (CE)
nr. 2799/1999, pct. 1. Scop
Detectarea substanelor solide din zer

nchegat adugate n:
(a) laptele praf degresat, dup cum este

definit la articolul 2 din Regulamentul
(CE) nr. 2799/1999; i
(b) amestecuri, dup cum sunt definite la

articolul 4 din Regulamentul (CE)
nr. 2799/1999.
Anexa XIII (art. 9) Determinarea substanelor solide din zer nchegat n compatibil este substituit cu Agriculturii i intrrii n vigoare
laptele praf degresat i n standardul naional SM Industriei a actului naional
substanelor solide din zer nchegat n amestecurile ce conin lapte praf SR EN ISO 707 Alimentare armonizat
laptele praf degresat i n amestecurile degresat i, dup caz, grsime,
menionate n regulamentul (CE) vitamine, sruri minerale, zaharoz,
ageni anticoagulani i/sau ageni
nr. 2799/1999, pct. 2. Referine
fluidizani i ali ageni fluidizani, n
special antioxidani i emulsificatori,
Standardul internaional ISO 707 pct. 1. Referine
Standardul SM SR EN ISO 707.

Anexa XIII (art. 9) Determinarea substanelor solide din zer nchegat n Agriculturii i intrrii n vigoare
substanelor solide din zer nchegat n laptele praf degresat i n Industriei a actului naional
laptele praf degresat i n amestecurile amestecurile ce conin lapte praf Alimentare armonizat
degresat i, dup caz, grsime,
vitamine, sruri minerale, zaharoz,
nr. 2799/1999, pct. 3. Definiie ageni anticoagulani i/sau ageni
Coninutul de substane solide din zer special antioxidani i emulsificatori,
nchegat se definete ca procent de mas pct. 2. Definiie
determinat de coninutul de Coninutul de substane solide din zer
cazeinomacropeptide prin procedura nchegat procentul de mas determinat
descris. de coninutul de cazeinomacropeptide
prin procedura descris.

ageni anticoagulani i/sau ageni
nr. 2799/1999, pct. 4. Principiu fluidizani i ali ageni fluidizani, n
Coninutul de cazeinomacropeptide se pct. 3. Principiu
determin conform anexei XII. Probele Coninutul de cazeinomacropeptide se
determin conform anexei nr. 12.
pentru care se obin rezultate pozitive se
Probele pentru care se obin rezultate
analizeaz pentru detectarea pozitive se analizeaz pentru detectarea
cazeinomacropeptidelor A prin cazeinomacropeptidelor A prin
procedura de cromatografie lichid de procedura de cromatografie lichid de
nalt performan n faz inversat nalt performan n faz inversat
(procedura HPLC). Ca soluie (procedura HPLC). Ca soluie
alternativ, probele sunt analizate direct alternativ, probele sunt analizate direct
prin procedura HPLC n faz invers.
prin procedura HPLC n faz invers.
Evaluarea rezultatelor se face prin
Evaluarea rezultatelor se face prin referire la probe etalon formate din lapte
referire la probe etalon formate din lapte praf degresat care conin sau nu conin
praf degresat care conin sau nu conin un procent cunoscut de zer praf.
un procent cunoscut de zer praf. Rezultatele mai mari de 1 % (m/m)
Rezultatele mai mari de 1 % (m/m) indic prezena substanelor solide din
indic prezena substanelor solide din zer nchegat.
zer nchegat.

nr. 2799/1999, pct. 5. Reactivi ageni anticoagulani i/sau ageni
calitate analitic recunoscut. Apa pct. 4. Reactivi
ap de o puritate cel puin echivalent. calitate analitic recunoscut. Apa
Acetonitrilul trebuie s fie de calitate utilizat trebuie s fie ap distilat sau
spectroscopic sau de calitate HPLC. ap de o puritate cel puin echivalent.
Acetonitrilul trebuie s fie de calitate
Reactivii necesari pentru aceast spectroscopic sau de calitate HPLC.
procedur sunt descrii n anexa XII la Reactivii necesari pentru aceast
prezentul regulament. procedur sunt descrii n anexa nr. 12 la
prezentele Cerine.
Reactivi pentru HPLC n faz inversat Reactivi pentru HPLC n faz inversat.
1) Soluie de acid tricloroacetic
5.1. Soluie de acid tricloroacetic Se dizolv 240 g de acid tricloroacetic
Se dizolv 240 g de acid tricloroacetic (CCl3COOH) n ap i se completeaz
(CCl3COOH) n ap i se completeaz pn la 1 000 ml. Soluia trebuie s fie
pn la 1 000 ml. Soluia trebuie s fie limpede i incolor.
limpede i incolor. 2) Eluanii A i B
5.2. Eluanii A i B Eluantul A: Se introduc ntr-un balon
Eluantul A: Se introduc ntr-un balon cotat de 1 000 ml 150 ml acetonitril
cotat de 1 000 ml 150 ml acetonitril (CH3CN), 20 ml izopropanol
(CH3CN), 20 ml izopropanol (CH3CHOHCH3) i 1,00 ml de acid
(CH3CHOHCH3) i 1,00 ml de acid trifloroacetic (TFA, CF3COOH). Se
trifloroacetic (TFA, CF3COOH). Se completeaz cu ap pn la 1 000 ml.
completeaz cu ap pn la 1 000 ml. Eluantul B: Se introduc ntr-un balon
cotat de 1 000 ml 550 ml acetonitril,
Eluantul B: Se introduc ntr-un balon
20 ml izopropanol i 1,00 ml TFA. Se
cotat de 1 000 ml 550 ml acetonitril,
completeaz cu ap pn la 1 000 ml.
20 ml izopropanol i 1,00 ml TFA. Se
Soluia eluant se filtreaz nainte de
completeaz cu ap pn la 1 000 ml.
folosire printr-o membran filtrant cu
Soluia eluant se filtreaz nainte de
pori cu diametrul de 0,45 m.
folosire printr-o membran filtrant cu
3) Conservarea coloanei
pori cu diametrul de 0,45 m.
5.3. Conservarea coloanei Dup analize, coloana se cltete cu
eluantul B (cu un gradient), iar apoi se
Dup analize, coloana se cltete cu
eluantul B (cu un gradient), iar apoi se cltete cu acetonitril (cu un gradient
timp de 30 de minute). Coloana se
cltete cu acetonitril (cu un gradient
pstreaz n acetonitril.
timp de 30 de minute). Coloana se
4) Probele etalon
pstreaz n acetonitril.
a) Lapte praf degresat care
5.4. Probele etalon
ndeplinete cerinele pentru
5.4.1. Lapte praf degresat care
depozitare public (respectiv, [0]).
ndeplinete cerinele pentru depozitare
b) Acelai lapte praf degresat
public (respectiv, [0]).
modificat cu 5 % (m/m) zer nchegat
praf cu compoziie standard (respectiv
c) Acelai lapte praf degresat
[5]).
modificat cu 50 % (m/m) zer nchegat
praf cu compoziie standard (respectiv
[50]) ( 15 ).
nr. 2799/1999, pct. 6. Aparatur ageni anticoagulani i/sau ageni
Aparatura necesar pentru procedura special antioxidani i emulsificatori,
descris este cea descris n anexa XII la pct. 5. Aparatur
prezentul regulament. Aparatura necesar pentru procedura
6.1. Balan analitic descris este cea descris n anexa nr. 12
la prezentele Cerine.
6.2. Centrifug opional cu o for de 1) Balan analitic
centrifugare de 2 200 g, prevzut cu 2) Centrifug opional cu o for de
centrifugare de 2 200 g, prevzut
tuburi astupate sau acoperite pentru
cu tuburi astupate sau acoperite
centrifugare cu o capacitate de
pentru centrifugare cu o capacitate
aproximativ 50 ml
de aproximativ 50 ml
6.3. Agitator mecanic 3) Agitator mecanic
6.4. Agitator magnetic 4) Agitator magnetic
5) Coloane de sticl cu diametrul de
6.5. Coloane de sticl cu diametrul de aproximativ 7 cm
aproximativ 7 cm 6) Filtre de hrtie cu filtrare medie cu
6.6. Filtre de hrtie cu filtrare medie cu diametrul de aproximativ 12,5 cm
diametrul de aproximativ 12,5 cm 7) Dispozitiv de sticl pentru filtrare
prevzut cu membran filtrant cu
6.7. Dispozitiv de sticl pentru filtrare diametrul porilor de aproximativ
prevzut cu membran filtrant cu 0,45 m
diametrul porilor de aproximativ 8) Pipete gradate de 10 ml, sau un
0,45 m sistem prin care pot trece 10,0 ml n
6.8. Pipete gradate de 10 ml (ISO 648, dou minute
clasa A, sau ISO/R 835), sau un sistem 9) Sistem prin care pot trece 20,0 ml de
prin care pot trece 10,0 ml n dou ap la aproximativ 50 C
minute. 10) Baie termostat de ap, reglat la
25 0,5 C
6.9. Sistem prin care pot trece 20,0 ml de
11) Echipament pentru HPLC format
ap la aproximativ 50 C
din:
6.10. Baie termostat de ap, reglat la a) Sistem binar de pompare reglabil
25 0,5 C b) Injector, manual sau automat, cu o
6.11. Echipament pentru HPLC format capacitate de 100 l
din: c) Coloan Agilent Technologies
Zorbax 300 SB-C3 (lungime
6.11.1. Sistem binar de pompare reglabil 25 cm, diametru intern 0,46 cm)
6.11.2. Injector, manual sau automat, cu sau o coloan n faz inversat cu
o capacitate de 100 l pori mari pe baz de silice
echivalent
6.11.3. Coloan Agilent Technologies d) Cuptor cu coloan termostat, reglat
Zorbax 300 SB-C3 (lungime 25 cm,
la 35 1 C
diametru intern 0,46 cm) sau o coloan
e) Detector UV cu lungime de und
n faz inversat cu pori mari pe baz de
variabil care permite realizarea de
silice echivalent
msurtori la 210 nm (n cazul n
6.11.4. Cuptor cu coloan termostat, care este necesar se poate folosi o
reglat la 35 1 C lungime de und mai mare, de
6.11.5. Detector UV cu lungime de und pn la 220 nm) cu o sensibilitate
variabil care permite realizarea de de 0,02
msurtori la 210 nm (n cazul n care f) Integrator cu ajutorul cruia se
este necesar se poate folosi o lungime de poate realiza integrarea la linia de
und mai mare, de pn la 220 nm) cu o baz comun sau la linia de baz
sensibilitate de 0,02 Not: Se poate lucra cu coloana la
temperatura camerei, cu condiia ca
6.11.6. Integrator cu ajutorul cruia se temperatura s nu varieze cu mai mult de
poate realiza integrarea la linia de baz 1 C; n caz contrar, se nregistreaz o
comun sau la linia de baz variaie mult prea mare a timpului de
Not: Se poate lucra cu coloana la retenie al CMPA.
temperatura camerei, cu condiia ca
temperatura s nu varieze cu mai mult de
1 C; n caz contrar, se nregistreaz o
variaie mult prea mare a timpului de
retenie al CMPA.
Anexa XIII (art. 9) Determinarea substanelor solide din zer nchegat n compatibil este substituit cu Agriculturii i intrrii n vigoare
substanelor solide din zer nchegat n laptele praf degresat i n standardul naional SM Industriei a actului naional
laptele praf degresat i n amestecurile amestecurile ce conin lapte praf SR EN ISO 707. Alimentare armonizat
degresat i, dup caz, grsime, A doua fraz din pct.
vitamine, sruri minerale, zaharoz, 7.1. nu se prevede n
nr. 2799/1999, pct. 7. Prelevarea ageni anticoagulani i/sau ageni actul naional. Acestea
probelor fluidizani i ali ageni fluidizani, n sunt prevederi UE
special antioxidani i emulsificatori, neaplicabile.
7.1. Probele se preleveaz conform pct. 6. Prelevarea probelor
procedurii descrise de standardul 1) Probele se preleveaz conform
internaional ISO 707. Cu toate acestea, procedurii descrise de standardul
SM SR EN ISO 707.
statele membre pot folosi i alt metod
2) Probele se depoziteaz n condiii n
de prelevare a probelor, cu condiia ca care nu poate surveni nici o
aceasta s respecte principiile deteriorare sau modificare a
standardului menionat anterior. compoziiei.
7.2. Probele se depoziteaz n condiii n

care nu poate surveni nicio deteriorare
sau modificare a compoziiei.

nr. 2799/1999, pct. 8. Procedur ageni anticoagulani i/sau ageni
8.1. Prepararea probei de analiz special antioxidani i emulsificatori,
Se transfer laptele praf ntr-un recipient pct. 7. Procedur
cu o capacitate aproximativ tripl fa de 1) Prepararea probei de analiz
volumul laptelui praf, prevzut cu un Se transfer laptele praf ntr-un recipient
capac etan la aer. Recipientul se nchide cu o capacitate aproximativ tripl fa de
imediat. Laptele praf se amestec bine volumul laptelui praf, prevzut cu un
prin rsturnri repetate ale recipientului. capac etan la aer. Recipientul se nchide
8.2. Cantitatea analizat imediat. Laptele praf se amestec bine
prin rsturnri repetate ale recipientului.
Se cntresc 2,00 0,001 g din proba 2) Cantitatea analizat
analizat ntr-un tub de centrifugare (6.2) Se cntresc 2,00 0,001 g din proba
analizat ntr-un tub de centrifugare sau
sau ntr-un balon astupat adecvat
(50 ml). ntr-un balon astupat adecvat (50 ml).
Not: n cazul amestecurilor, se Not: n cazul amestecurilor, se
cntrete o anumit cantitate din proba cntrete o anumit cantitate din proba
analizat, astfel nct s rezulte o analizat, astfel nct s rezulte o
cantitate de prob degresat de 2,00 g. cantitate de prob degresat de 2,00 g.
3) ndeprtarea grsimii i a proteinelor
8.3. ndeprtarea grsimii i a
a) Se adaug 20,0 ml de ap cald
proteinelor (50 C) la cantitatea analizat. Se
dizolv laptele praf agitndu-se
8.3.1. Se adaug 20,0 ml de ap cald cinci minute sau 30 de minute n
(50 C) la cantitatea analizat. Se cazul zarei acide cu ajutorul unui
dizolv laptele praf agitndu-se cinci agitator mecanic. Tubul se
minute sau 30 de minute n cazul zarei introduce n baia de ap i se las
s se echilibreze la 25 C.
acide cu ajutorul unui agitator mecanic
b) Se adaug constant 10,0 ml de
(6.3). Tubul se introduce n baia de ap soluie de acid tricloroacetic la
(6.10) i se las s se echilibreze la aproximativ 25 C timp de peste
25 C. dou minute, amestecndu-se
puternic cu ajutorul unui agitator
8.3.2. Se adaug constant 10,0 ml de magnetic. Tubul se introduce ntr-o
soluie de acid tricloroacetic la baie de ap i se las timp de 60 de
aproximativ 25 C (5.1) timp de peste minute.
c) Se centrifugheaz 2 200 g timp de
dou minute, amestecndu-se puternic
10 minute sau se filtreaz prin
cu ajutorul unui agitator magnetic (6.4). hrtie, eliminndu-se primii 5 ml
Tubul se introduce ntr-o baie de ap de filtrat.
(6.10) i se las timp de 60 de minute. 4) Determinarea cromatografic
a) Se efectueaz analiza HPLC
8.3.3. Se centrifugheaz (6.2) 2 200 g conform descrierii din anexa nr.
timp de 10 minute sau se filtreaz prin 12. n cazul n care se obine un
hrtie (6.6), eliminndu-se primii 5 ml rezultat negativ, proba analizat nu
conine solide din zer nchegat n
de filtrat. cantiti detectabile. n cazul n
care rezultatul este pozitiv, se alic
8.4. Determinarea cromatografic procedura HPLC n faz inversat
descris mai jos. Ca soluie
8.4.1. Se efectueaz analiza HPLC alternativ, se poate aplica direct
metoda HPLC n faz inversat.
conform descrierii din anexa XII. n
Prezena zarei acide praf poate
cazul n care se obine un rezultat provoca apariia unor rezultate fals
negativ, proba analizat nu conine pozitive folosind metoda descris
solide din zer nchegat n cantiti n anexa nr. 12. Metoda HPLC n
detectabile. n cazul n care rezultatul faz invers exclude aceast
este pozitiv, se alic procedura HPLC n posibilitate.
faz inversat descris mai jos. Ca b) nainte de realizarea analizei
HPLC n faz invers se
soluie alternativ, se poate aplica direct
optimizeaz condiiile de gradient.
metoda HPLC n faz inversat. Pentru sistemele reglabile cu un
Prezena zarei acide praf poate provoca volum mort de aproximativ 6 ml
apariia unor rezultate fals pozitive (volum de la punctul n care
folosind metoda descris n anexa XII. solvenii se ntlnesc pn la bucla
Metoda HPLC n faz invers exclude injectorului inclusiv) timpul de
aceast posibilitate. retenie de 26 2 minute pentru
CMPA este optim. Pentru sistemele
reglabile cu un volum mort mai
8.4.2. nainte de realizarea analizei mic (de exemplu, 2 ml) timpul
HPLC n faz invers se optimizeaz optim de retenie este de 22 de
condiiile de gradient. Pentru sistemele minute.
reglabile cu un volum mort de Se recolteaz soluii de prob etalon cu
aproximativ 6 ml (volum de la punctul n i fr 50 % zer nchegat.
care solvenii se ntlnesc pn la bucla Se injecteaz 100 l de supranatant sau
injectorului inclusiv) timpul de retenie de filtrat n sistemul HPLC care
de 26 2 minute pentru CMPA este funcioneaz n condiiile de gradient de
explorare din tabelul 1.
Tabelul 1. Condiii de gradient de
optim. Pentru sistemele reglabile cu un explorare pentru optimizarea
volum mort mai mic (de exemplu, 2 ml) cromatografiei
timpul optim de retenie este de 22 de Timp Flux % % Cur-
minute. (min) (ml/ A B b
min)
Se recolteaz soluii de prob etalon Iniial 1,0 90 10 *
(5.4) cu i fr 50 % zer nchegat. 27 1,0 60 40 lin
32 1,0 10 90 lin
Se injecteaz 100 l de supranatant sau
de filtrat (8.3.3) n sistemul HPLC care 37 1,0 10 90 lin
funcioneaz n condiiile de gradient de 42 1,0 90 10 lin
explorare din tabelul 1. Compararea celor dou cromatograme
trebuie s indice poziia vrfului CMPA.
Cu ajutorul formulei de mai jos se poate
Tabelul 1. Condiii de gradient de calcula compoziia iniial a solventului
explorare pentru optimizarea care se folosete pentru gradientul
cromatografiei normal % B = 10 2,5 + [13,5 +
Timp Flux % % Cur- (RTcmpA 26) / 6] 30 / 27 % B = 7,5 +
(min) (ml/ A B b (13,5 + (RTcmpA 26) / 6) 1,11
min) unde:
RTcmpA - timpul de retenie al CMPA la
Iniial 1,0 90 10 * gradientul de explorare
27 1,0 60 40 lin 10 - % B iniial al gradientului de
32 1,0 10 90 lin explorare
37 1,0 10 90 lin 2,5 - % B n punctul de mijloc minus %
42 1,0 90 10 lin B iniial la gradientul normal
13,5 - timpul corespunztor punctului de
Compararea celor dou cromatograme
mijloc
trebuie s indice poziia vrfului CMPA.
26 - timpul necesar de retenie pentru
Cu ajutorul formulei de mai jos se poate
CMPA
calcula compoziia iniial a solventului
6 - raportul pantelor gradienilor de
care se folosete pentru gradientul
normal (a se vedea 8.4.3) % B = 10 2,5 explorare i normal
+ [13,5 + (RTcmpA 26) / 6] 30 / 27 % 30 - % B iniial minus % B la 27 minute
B = 7,5 + (13,5 + (RTcmpA 26) / la gradientul de explorare
6) 1,11 27 - timpul de rulare al gradientului de
unde: explorare.
RTcmpA: timpul de retenie al c) Prelevarea soluiilor din probele
CMPA la gradientul de explorare analizate
10: % B iniial al gradientului de Se injecteaz 100 l de supernatant sau
explorare filtrat (subpunctul 3, litera c) din
2,5: % B n punctul de mijloc prezentul punct) msurat cu precizie n
minus % B iniial la gradientul aparatul HPLC funcionnd la un debit
normal de 1,0 ml de soluie eluant pe minut.
13,5: timpul corespunztor Compoziia eluantului la nceputul
punctului de mijloc analizei se obine ca la punctul 6.4.2. n
26: timpul necesar de retenie mod normal este de aproximativ
pentru CMPA A:B = 76:24. Imediat dup injectare se
6: raportul pantelor gradienilor pornete un gradient liniar, rezultatul
de explorare i normal fiind un procent al B cu 5 % mai mare
30: % B iniial minus % B la 27 peste 27 minute. Apoi se pornete un
minute la gradientul de explorare gradient liniar, datorit cruia, dup cinci
27: timpul de rulare al minute, compoziia eluantului este de
gradientului de explorare. 90 % B. Compoziia se menine timp de
8.4.3. Prelevarea soluiilor din probele cinci minute, dup care compoziia se
analizate modific n cinci minute, ia un gradient
liniar, ajungnd la compoziia iniial. n
Se injecteaz 100 l de supernatant sau funcie de volumul intern al sistemului
filtrat (8.3.3) msurat cu precizie n de pompare, urmtoarea injectare se
aparatul HPLC funcionnd la un debit poate face la 15 minute dup ce se
de 1,0 ml de soluie eluant (5.2) pe ajunge la condiiile iniiale.
minut. Nota 1: Timpul de retenie al
Compoziia eluantului la nceputul CMPA trebuie s fie de 26 2 minute.
analizei se obine ca la punctul 8.4.2. n Acesta se poate obine prin modificarea
mod normal este de aproximativ condiiilor iniiale i finale ale primului
gradient. Cu toate acestea, diferena la
A:B = 76:24 (5.2). Imediat dup
injectare se pornete un gradient liniar, nivelul % B n condiiile iniiale i finale
rezultatul fiind un procent al B cu 5 % ale primului gradient trebuie s se
menin la 5 % B.
mai mare peste 27 minute. Apoi se
Nota 2: Eluanii trebuie degazai
pornete un gradient liniar, datorit
cruia, dup cinci minute, compoziia suficient i trebuie, de asemenea, s se
eluantului este de 90 % B. Compoziia menin degazai. Acest lucru este
se menine timp de cinci minute, dup esenial pentru buna funcionare a
sistemului de pompare reglabil. Deviaia
care compoziia se modific n cinci
minute, via un gradient liniar, ajungnd standard a timpului de retenie al
vrfului CMPA trebuie s fie sub 0,1
la compoziia iniial. n funcie de
volumul intern al sistemului de pompare, minute (n = 10).
urmtoarea injectare se poate face la 15 Nota 3: Dup fiecare cinci probe se
minute dup ce se ajunge la condiiile injecteaz proba de referin i se
folosete pentru calcularea noului
iniiale.
coeficient de rspuns R (punctul 8,
Nota 1: Timpul de retenie al
CMPA trebuie s fie de 26 2 minute. subpunctul 1, litera a)).
Acesta se poate obine prin modificarea d) Rezultatele analizei cromatografice
a probei analizate (E) se obin sub
condiiilor iniiale i finale ale primului
forma unei cromatograme n care
gradient. Cu toate acestea, diferena la
vrful CMPA este identificat pe
nivelul % B n condiiile iniiale i finale
baza timpului su de retenie de
ale primului gradient trebuie s se
aproximativ 26 minute.
menin la 5 % B.
Integratorul calculeaz automat
Nota 2: Eluanii trebuie degazai
suficient i trebuie, de asemenea, s se nlimea vrfului H pentru vrful
CMPA. Se verific poziia liniei de baz
menin degazai. Acest lucru este
n fiecare cromatogram. n cazul n care
esenial pentru buna funcionare a
sistemului de pompare reglabil. Deviaia poziia liniei de baz este incorect,
analiza sau integrarea se repet.
standard a timpului de retenie al
Not: n cazul n care vrful CMPA este
vrfului CMPA trebuie s fie sub 0,1
minute (n = 10). suficient de bine separat de alte vrfuri,
se folosete alocarea liniei de baz tip
Nota 3: Dup fiecare cinci probe se
baz la baz sau, dac nu, se folosesc
injecteaz proba de referin (5) i se
folosete pentru calcularea noului perpendiculare trase pe o linie de baz
coeficient de rspuns R (9.1.1). comun, care s aib punctul de plecare
8.4.4. Rezultatele analizei lng vrful CMPA. Se folosete pentru
cromatografice a probei analizate (E) se etalon i pentru probe acelai tip de
obin sub forma unei cromatograme n integrare i, n cazul liniei de baz
care vrful CMPA este identificat pe baza comune, se verific consistena pentru
timpului su de retenie de aproximativ probe i etalon.
26 minute. Este extrem de important s se
Integratorul (6.11.6) calculeaz automat examineze aspectul fiecrei
nlimea vrfului H pentru vrful cromatograme nainte de interpretarea
CMPA. Se verific poziia liniei de baz cantitativ pentru a se detecta orice
n fiecare cromatogram. n cazul n care eventuale anomalii datorate fie
poziia liniei de baz este incorect, funcionrii necorespunztoare a
analiza sau integrarea se repet. aparatului sau a coloanelor, fie originii
Not: n cazul n care vrful CMPA este sau naturii probei analizate. n cazul n
suficient de bine separat de alte vrfuri, care exist dubii, analiza se repet.
se folosete alocarea liniei de baz tip 5) Calibrare
baz la baz sau, dac nu, se folosesc a) Se aplic cu exactitate procedura
perpendiculare trase pe o linie de baz descris de la punctul 7,
comun, care s aib punctul de plecare subpunctul 2) la punctul 7,
lng vrful CMPA (deci nu la subpunctul 4, liteda d) folosindu-se
t = 0 min.!). Se folosete pentru etalon i probele etalon. Se folosesc soluii
pentru probe acelai tip de integrare i, proaspt preparate, ntruct CMP
n cazul liniei de baz comune, se se degradeaz ntr-un mediu 8 %
verific consistena pentru probe i tricloroacetic la temperatura
etalon. camerei. La 4 C soluia este
Este extrem de important s se stabil timp de 24 ore. Pentru
examineze aspectul fiecrei seriile lungi de analize este de
cromatograme nainte de interpretarea preferabil ca n injectorul automat
cantitativ pentru a se detecta orice s se foloseasc o tav rcit
eventuale anomalii datorate fie pentru probe.
funcionrii necorespunztoare a Not: Punctul 7, subpunctul 4, litera b)
aparatului sau a coloanelor, fie originii se poate omite n cazul n care se
sau naturii probei analizate. n cazul n cunoate % B n condiiile iniiale din
care exist dubii, analiza se repet. analizele efectuate anterior.
8.5. Calibrare b) nainte de determinarea
8.5.1. Se aplic cu exactitate procedura cromatografic a probei se
descris de la punctul 8.2 la punctul injecteaz 100 l din proba etalon
8.4.4 folosindu-se probele etalon (5.4.1- care nu conine zer nchegat [0].
5.4.2). Se folosesc soluii proaspt Pe cromatogram nu trebuie s apar un
preparate, ntruct CMP se degradeaz vrf pentru timpul de retenie al vrfului
ntr-un mediu 8 % tricloroacetic la CMPA.
temperatura camerei. La 4 C soluia Se determin coeficientul de rspuns R
este stabil timp de 24 ore. Pentru seriile prin injectarea aceluiai volum de filtrate
lungi de analize este de preferabil ca n (litera a) din prezentul subpunct) folosit
injectorul automat s se foloseasc o i n probe.
tav rcit pentru probe.
Not: 8.4.2. se poate omite n cazul n
care se cunoate % B n condiiile
iniiale din analizele efectuate anterior.
Cromatograma probei de referin [5]
trebuie s fie similar cu cea din figura
1. n aceast figur, vrful CMPA este
precedat de dou vrfuri mici. Este
extrem de important s se obin o
separare similar.
8.5.2. nainte de determinarea
cromatografic a probei. se injecteaz
100 l din proba etalon care nu conine
zer nchegat [0] (5.4.1).
Pe cromatogram nu trebuie s apar un
vrf pentru timpul de retenie al vrfului
CMPA.
8.5.3. Se determin coeficientul de
rspuns R prin injectarea aceluiai
volum de filtrat (8.5.1) folosit i n
probe.
Anexa nr. 13 Determinarea Parial Prevederile de la pct. Ministerul Din momentul

Anexa XIII (art. 9) Determinarea substanelor solide din zer nchegat n compatibil 9.4. nu sunt prevzute Agriculturii i intrrii n vigoare
substanelor solide din zer nchegat n laptele praf degresat i n n actul naional. Industriei a actului naional
laptele praf degresat i n amestecurile amestecurile ce conin lapte praf Acestea sunt prevederi Alimentare armonizat
degresat i, dup caz, grsime, UE neaplicabile
nr. 2799/1999, pct. 9. Exprimarea ageni anticoagulani i/sau ageni
rezultatelor fluidizani i ali ageni fluidizani, n
9.1. Metoda de calcul i formula pct. 8. Exprimarea rezultatelor
9.1.1. Calcularea coeficientului de 1) Metoda de calcul i formula
rspuns R: Calcularea coeficientului de rspuns R:
Vrful CMPA: R = W/H Vrful CMPA: R = W/H
unde: unde:
R - coeficientul de rspuns al vrfului
R= coeficientul de rspuns al vrfului CMPA;
CMPA; H - nlimea vrfului CMPA;
H= nlimea vrfului CMPA; W - cantitatea de zer din proba etalon.
2) Calcularea procentului de zer
W= cantitatea de zer din proba etalon nchegat praf din prob
[5]. W(E) = R H(E)
9.2. Calcularea procentului de zer unde:
nchegat praf din prob W(E) - procentul (m/m) de zer nchegat
W(E) = R H(E) n proba (E);
R - coeficientul de rspuns al vrfului
unde:
CMPA (subpunctul 1, litera a));
W(E) = procentul (m/m) de zer nchegat H(E) - nlimea vrfului CMPA al
n proba (E); probei (E).
R= coeficientul de rspuns al vrfului n cazul n care W(E) este mai mare de
1 % i diferena dintre timpul de retenie
CMPA (9.1.1);
i cel al probei etalon este mai mic de
H(E) = nlimea vrfului CMPA al 0,2 minute, atunci sunt prezente
probei (E). substane solide din zer nchegat.
n cazul n care W(E) este mai mare de 3) Precizia metodei
1 % i diferena dintre timpul de retenie a) Repetabilitate
i cel al probei etalon [5] este mai mic de Diferena dintre rezultatele a dou
0,2 minute, atunci sunt prezente determinri efectuate simultan sau n cel
substane solide din zer nchegat. mai scurt interval de timp posibil de
9.3. Precizia metodei acelai operator care utilizeaz aceeai
9.3.1. Repetabilitate aparatur pe material de analiz identic
nu trebuie s depeasc 0,2 % m/m.
Diferena dintre rezultatele a dou b) Reproductibilitate
determinri efectuate simultan sau n cel Nedeterminat.
mai scurt interval de timp posibil de c) Liniaritate
acelai operator care utilizeaz aceeai De la 0 la 16 % zer nchegat se obine o
aparatur pe material de analiz identic relaie de liniaritate cu un coeficient de
nu trebuie s depeasc 0,2 % m/m. corelare > 0,99.
9.3.2. Reproductibilitate
Nedeterminat.
9.3.3. Liniaritate
De la 0 la 16 % zer nchegat se obine o
relaie de liniaritate cu un coeficient de
corelare > 0,99.
9.4. Interpretare
Limita de 1 % se stabilete n
conformitate cu prevederile de la
punctele 9.2 i 9.4.1 din anexa XIX la
Regulamentul (CEE) nr. 214/2001 i
include incertitudinea datorat
reproductibilitii.
Tabelul 1. Ni-4.6 standard
Anexa nr. 14 Lapte praf degresat: Compatibil - Ministerul Din momentul

Anexa XIV (art. 10) Lapte praf determinarea cantitativ a Agriculturii i intrrii n vigoare
degresat: determinarea cantitativ a fosfatidilserinei i a Industriei a actului naional
fosfatidilserinei i a fosfatidiletanolaminei, pct. 1. Obiectul Alimentare armonizat
i domeniul de aplicare
fosfatidiletanolaminei, pct. 1. Obiectul
Metod: HPLC n faz invers.
i domeniul de aplicare Aceast metod descrie o procedur de
determinare cantitativ a fosfatidilserinei
Metod HPLC n faz invers (PS) i a fosfatidiletanolaminei (PE) din
laptele praf degresat (SMP) i este
Aceast metod descrie o procedur de adecvat pentru determinarea
determinare cantitativ a fosfatidilserinei substanelor solide din zar din SMP.
(PS) i a fosfatidiletanolaminei (PE) din
laptele praf degresat (SMP) i este
adecvat pentru determinarea
substanelor solide din zar din SMP.

fosfatidilserinei i a Industriei a actului naional
fosfatidiletanolaminei, pct. 2. Definiie Alimentare armonizat
degresat: determinarea cantitativ a Coninutul de PS + PE - fraciunea de
fosfatidilserinei i a mas a substanei determinate prin
fosfatidiletanolaminei, pct. 2. Definiie procedura descris n prezenta anex.
Rezultatul se exprim n miligrame de
dipalmitoil fosfatidiletanolamin
Coninutul de PS + PE: fraciunea de
(PEDP) n 100 g praf.
mas a substanei determinate prin
procedura descris n prezenta anex.
Rezultatul se exprim n miligrame de
dipalmitoil fosfatidiletanolamin
(PEDP) n 100 g praf.

fosfatidilserinei i a fosfatidiletanolaminei, pct. 3. Alimentare armonizat
Principiul metodei
fosfatidiletanolaminei, pct. 3.
Extragerea aminofosfolipidelor cu
Principiul metodei metanol din lapte praf reconstituit.
Determinare PS i PE ca derivai ai o-
Extragerea aminofosfolipidelor cu ftaldialdehidei (OPA) prin HPLC n faz
metanol din lapte praf reconstituit. invers (RP) i prin detectare prin
Determinare PS i PE ca derivai ai o- fluorescen. Cuantificarea coninutului
ftaldialdehidei (OPA) prin HPLC n faz de PS i PE din proba analizat prin
invers (RP) i prin detectare prin referire la o prob etalon coninnd o
cantitate cunoscut de PEDP.
fluorescen. Cuantificarea coninutului
de PS i PE din proba analizat prin
referire la o prob etalon coninnd o
cantitate cunoscut de PEDP.
fosfatidilserinei i a fosfatidiletanolaminei, pct. 4. Reactivi Alimentare armonizat
fosfatidiletanolaminei, pct. 4. Reactivi
calitate analitic recunoscut. Apa
Toi reactivii utilizai trebuie s fie de ap de o puritate cel puin echivalent,
calitate analitic recunoscut. Apa cu excepia cazurilor n care se
utilizat trebuie s fie ap distilat sau precizeaz altceva.
ap de o puritate cel puin echivalent, 1) Material etalon: PEDP, cu o puritate
cu excepia cazurilor n care se de cel puin 99 %
precizeaz altceva. Not: Materialul etalon se depoziteaz la
4.1. Material etalon: PEDP, cu o 18 C.
puritate de cel puin 99 % 2) Reactivi pentru prepararea probei
Not: Materialul etalon se depoziteaz la etalon i a probei de analiz
18 C. a) Metanol de calitate HPLC
4.2. Reactivi pentru prepararea probei b) Cloroform de calitate HPLC
etalon i a probei de analiz c) Monoclorhidrat de triptamin
4.2.1. Metanol de calitate HPLC 3) Reactivi pentru derivarea o-
4.2.2. Cloroform de calitate HPLC ftaldialdehidei
4.2.3. Monoclorhidrat de triptamin a) Hidroxid de sodiu, soluie de ap
4.3. Reactivi pentru derivarea o- 12 M
ftaldialdehidei b) Acid boric, soluie de ap 0,4 M
4.3.1. Hidroxid de sodiu, soluie de ap ajustat cu hidroxid de sodiu pn
12 M la un pH de 10,0
4.3.2. Acid boric, soluie de ap 0,4 M c) 2-mercaptetanol
ajustat cu hidroxid de sodiu pn la un d) o-ftaldialdehid (OPA)
pH de 10,0 (4.3.1) 4) Solveni de eluare HPLC
4.3.3. 2-mercaptetanol a) La prepararea solvenilor de eluare
4.3.4. o-ftaldialdehid (OPA) se folosesc reactivi de calitate
4.4. Solveni de eluare HPLC HPLC
4.4.1. La prepararea solvenilor de eluare b) Ap de calitate HPLC
se folosesc reactivi de calitate HPLC.
4.4.2. Ap de calitate HPLC c) Metanol cu puritate fluorimetric
4.4.3. Metanol cu puritate fluorimetric testat
testat d) Tetrahidrofuran
4.4.4. Tetrahidrofuran e) Fosfat monosodic
4.4.5. Fosfat monosodic f) Acetat de sodium
4.4.6. Acetat de sodiu g) Acid acetic
4.4.7. Acid acetic

Aparatur
1) Balan analitic cu o capacitate de
Aparatur cntrire avnd o precizie de 1 mg,
cu o capacitate de citire de 0,1 mg
5.1. Balan analitic cu o capacitate de 2) Pahare de laborator cu capacitate de
cntrire avnd o precizie de 1 mg, cu o 25 i 100 ml
capacitate de citire de 0,1 mg 3) Pipete cu o capacitate de 1 i 10 ml
4) Agitator magnetic
5.2. Pahare de laborator cu capacitate de 5) Pipete gradate cu o capacitate de
25 i 100 ml 0,2, 0,5 i 5 ml
6) Baloane cotate cu capacitate de 10,
50 i 100 ml
5.3. Pipete cu o capacitate de 1 i 10 ml
7) Seringi cu capacitate de 20 i 100 l
8) Baie ultrasonic
5.4. Agitator magnetic 9) Centrifug care poate opera la
27 000 g
5.5. Pipete gradate cu o capacitate de 10) Fiole de sticl cu capacitate de
0,2, 0,5 i 5 ml aproximativ 5 ml
11) Cilindru gradat cu capacitate de
25 ml
5.6. Baloane cotate cu capacitate de 10, 12) Aparat de msurare a pH-ului cu o
50 i 100 ml precizie de 0,1 uniti pH
13) Echipament HPLC
5.7. Seringi cu capacitate de 20 i 100 l a) Sistem de pompare reglabil care
poate funciona la 1,0 ml/min. la
200 bari
5.8. Baie ultrasonic
b) Aparat de prelevare automat de
probe cu posibilitate de derivare
5.9. Centrifug care poate opera la c) nclzitor de coloan care poate
27 000 g menine coloana la o temperatur
de 30 C 1 C
5.10. Fiole de sticl cu capacitate de d) Detector de fluorescen care poate
aproximativ 5 ml opera la o lungime de und de
excitare de 330 nm i la o lungime
5.11. Cilindru gradat cu capacitate de de und de emisie 440 nm
25 ml e) Integrator sau software de
procesare de date care poate
msura suprafaa vrfului
5.12. Aparat de msurare a pH-ului cu o f) Licrosfer 100 coloan
precizie de 0,1 uniti pH (250 4,6 mm) sau o coloan
echivalent umplut cu
5.13. Echipament HPLC octadecilsilan (C 18) cu particule
de 5 m
5.13.1. Sistem de pompare reglabil care
poate funciona la 1,0 ml/min. la 200
bari
5.13.2. Aparat de prelevare automat de

probe cu posibilitate de derivare
5.13.3. nclzitor de coloan care poate

menine coloana la o temperatur de
30 C 1 C
5.13.4. Detector de fluorescen care

poate opera la o lungime de und de
excitare de 330 nm i la o lungime de
und de emisie 440 nm
5.13.5. Integrator sau software de

procesare de date care poate msura
suprafaa vrfului
5.13.6. Licrosfer 100 coloan

(250 4,6 mm) sau o coloan
echivalent umplut cu octadecilsilan (C
18) cu particule de 5 m
Anexa nr. 14 Lapte praf degresat: Parial Standardul ISO 707 Ministerul Din momentul
Anexa XIV (art. 10) Lapte praf determinarea cantitativ a compatibil este substituit cu Agriculturii i intrrii n vigoare
degresat: determinarea cantitativ a fosfatidilserinei i a standardul naional SM Industriei a actului naional
fosfatidilserinei i a fosfatidiletanolaminei, pct. 6. SR EN ISO 707. Alimentare armonizat
Prelevarea probelor
Prelevarea probelor se realizeaz
Prelevarea probelor conform standardului SM SR EN ISO
707.
Prelevarea probelor se realizeaz
conform standardului ISO 707.
Procedur
1) Prepararea soluiei etalon intern
Procedur a) Se cntresc 30,0 0,1 mg de
monoclorhidrat de triptamin ntr-
7.1. Prepararea soluiei etalon intern un balon cotat de 100 ml i se
completeaz cu metanol pn la
7.1.1. Se cntresc 30,0 0,1 mg de marcaj.
monoclorhidrat de triptamin (4.2.3) b) Se pipeteaz 1 ml din aceast
ntr-un balon cotat de 100 ml (5.6) i se soluie ntr-un balon cotat de 10 ml
completeaz cu metanol (4.2.1) pn la i se completeaz cu metanol pn
la marcaj pentru a se obine o
marcaj.
concentraie de triptamin de
0,15 mM.
7.1.2. Se pipeteaz 1 ml (5.3) din aceast 2) Prepararea soluiei din proba de
soluie ntr-un balon cotat de 10 ml (5.6) analiz
i se completeaz cu metanol (4.2.1) a) Se cntresc 1,000 0,001 g din
pn la marcaj pentru a se obine o proba de SMP ntr-un pahar de
concentraie de triptamin de 0,15 mM. laborator de 25 ml. Se adaug cu o
pipet 10 ml de ap distilat cu
temperatura de 40 C 1 C i se
7.2. Prepararea soluiei din proba de
amestec cu un agitator magnetic
analiz timp de 30 de minute pentru a se
dizolva toate cocoloaele.
7.2.1. Se cntresc 1,000 0,001 g din b) Se pipeteaz 0,2 ml din laptele
proba de SMP ntr-un pahar de laborator reconstituit ntr-un balon cotat de
de 25 ml (5.2). Se adaug cu o pipet 10 ml, se adaug 100 l din soluia
(5.3) 10 ml de ap distilat cu de triptamin de 0,15 mM cu
temperatura de 40 C 1 C i se ajutorul unei seringi i se
completeaz la volum cu metanol.
amestec cu un agitator magnetic (5.4)
Se amestec cu grij prin
timp de 30 de minute pentru a se dizolva rsturnare i se sonicheaz timp de
toate cocoloaele. 15 minute.
c) Se centrifugheaz la 27 000 g g
7.2.2. Se pipeteaz 0,2 ml (5.5) din timp de 10 minute i se colecteaz
supranatantul ntr-o fiol de sticl.
laptele reconstituit ntr-un balon cotat de
Not: Soluia prob se depoziteaz la
10 ml (5.6), se adaug 100 l din soluia 4 C pn la finalizarea analizei HPLC.
de triptamin de 0,15 mM (7.1) cu 3) Prepararea soluiei etalon extern
ajutorul unei seringi (5.7) i se a) Se cntresc 55,4 g de PEDP ntr-
completeaz la volum cu metanol un balon cotat de 50 ml i se
(4.2.1). Se amestec cu grij prin adaug aproximativ 25 ml de
rsturnare i se sonicheaz (5.8) timp de cloroform cu ajutorul unui cilindru
gradat. Se nclzete balonul
15 minute.
astupat la 50 C 1 C i se
amestec cu atenie pn cnd se
7.2.3. Se centrifugheaz (5.9) la dizolv PEDP. Balonul se rcete
27 000 g g timp de 10 minute i se la 20 C i se completeaz la
colecteaz supranatantul ntr-o fiol de volum cu metanol i amestec prin
sticl (5.10). rsturnare.
b) Se pipeteaz 1 ml din aceast
Not: Soluia prob se depoziteaz la soluie ntr-un balon cotat de
100 ml i se completeaz la volum
4 C pn la finalizarea analizei HPLC.
cu metanol. Se pipeteaz 1 ml din
aceast soluie ntr-un balon cotat
7.3. Prepararea soluiei etalon extern de 10 ml i se adaug 100 l de
soluie de triptamin de 0,15 mM
7.3.1. Se cntresc 55,4 g de PEDP (4.1) (subpunctul 1) din prezentul punct)
ntr-un balon cotat de 50 ml (5.6) i se i se completeaz la volum cu
adaug aproximativ 25 ml de cloroform metanol. Se amestec prin
(4.2.2) cu ajutorul unui cilindru gradat rsturnare.
(5.11). Se nclzete balonul astupat la Not: Soluia prob de referin se
depoziteaz la 4 C pn la finalizarea
50 C 1 C i se amestec cu atenie
analizei HPLC.
pn cnd se dizolv PEDP. Balonul se 4) Prepararea reactivului de derivare
rcete la 20 C i se completeaz la Se cntresc 25,0 0,1 mg de OPA ntr-
volum cu metanol (4.2.1) i amestec un balon cotat de 10 ml i se adaug
0,5 ml de metanol i se amestec cu
prin rsturnare.
atenie pentru ca OPA s se dizolve. Se
completeaz pn la marcaj cu soluie de
7.3.2. Se pipeteaz 1 ml (5.3) din aceast acid boric i se adaug 20 l de 2-
soluie ntr-un balon cotat de 100 ml mercaptetanol cu o sering.
(5.6) i se completeaz la volum cu Not: Reactivul de derivare se
metanol (4.2.1). Se pipeteaz 1 ml (5.3) depoziteaz la 4 C ntr-o fiol brun,
din aceast soluie ntr-un balon cotat de rmnnd stabil timp de o sptmn.
10 ml (5.6) i se adaug 100 l (5.7) de 5) Determinarea prin HPLC
a) Solveni de eluare
soluie de triptamin de 0,15 mM (7.1) i
Solventul A: Soluie 0,3 mM de fosfat
se completeaz la volum cu metanol monosodic i 3 mM de soluie de acetat
(4.2.1). Se amestec prin rsturnare. de sodiu (ajustat cu acid acetic la un pH
de 6,5 0,1):metanol:
Not: Soluia prob de referin se tetrahidrofuran = 558:440:2 (v/v/v).
depoziteaz la 4 C pn la finalizarea Solventul B: metanol.
analizei HPLC. b) Gradient de eluare recomandat:
7.4. Prepararea reactivului de derivare Timp Sol- Sol- Debit

(min) ven- ven- (ml/
Se cntresc 25,0 0,1 mg de OPA
tul A tul B
(4.3.4) ntr-un balon cotat de 10 ml (5.6)
(%) (%) min)
i se adaug 0,5 ml (5.5) de metanol
(4.2.1) i se amestec cu atenie pentru
ca OPA s se dizolve. Se completeaz Iniial 40 60 0
pn la marcaj cu soluie de acid boric
(4.3.2) i se adaug 20 l de 2- 0,1 40 60 0,1
mercaptetanol (4.3.3) cu o sering (5.7).
Not: Reactivul de derivare se 5,0 40 60 0,1
depoziteaz la 4 C ntr-o fiol brun,
rmnnd stabil timp de o sptmn. 6,0 40 60 1,0
7.5. Determinarea prin HPLC
7.5.1. Solveni de eluare (4.4) 6,5 40 60 1,0
Solventul A: Soluie 0,3 mM de fosfat
monosodic i 3 mM de soluie de acetat 9,0 36 64 1,0
de sodiu (ajustat cu acid acetic la un pH
de 6,5 10,0 20 80 1,0
0,1):metanol:tetrahidrofuran = 558:44
0:2 (v/v/v) 11,5 16 84 1,0
Solventul B: metanol. 12,0 16 84 1,0
7.5.2. Gradient de eluare recomandat:
16,0 10 90 1,0
Timp Sol- Sol- Debit
(min) ven- ven- (ml/ 19,0 0 100 1,0
tul A tul B
(%) (%) min) 20,0 0 100 1,0
Iniial 40 60 0 21,0 40 60 1,0
0,1 40 60 0,1 29,0 40 60 1,0
5,0 40 60 0,1 30,0 40 60 0

Not: Este posibil s fie nevoie de o
uoar modificare a gradientului de
6,0 40 60 1,0
eluare pentru a se obine rezoluia din
figura 1.
6,5 40 60 1,0 Temperatura coloanei: 30 C.
c) Volumul injectat: 50 l reactiv de
9,0 36 64 1,0 derivare i 50 l soluie prob
d) Echilibrarea coloanei
10,0 20 80 1,0 Sistemul se pornete n fiecare zi, se
cltete coloana cu solvent B 100 %
11,5 16 84 1,0 timp de 15 minute, apoi se regleaz la
A:B = 40:60 i se echilibreaz la
12,0 16 84 1,0 1 ml/min. timp de 15 minute. Se
lucreaz cu o prob martor injectndu-se
methanol.
16,0 10 90 1,0
Not: nainte de o depozitare pe termen
lung coloana se cltete cu metanol:
19,0 0 100 1,0 cloroform = 80:20 (v/v) timp de 30 de
minute.
20,0 0 100 1,0 e) Se determin coninutul de
PS + PE din proba analizat
21,0 40 60 1,0 f) Se realizeaz secvena de analize
cromatografice lsndu-se un timp
29,0 40 60 1,0 constant ntre seriile de analize
pentru a se obine timpi de reinere
constani. Soluia etalon extern se
30,0 40 60 0
injecteaz la fiecare 5-10 soluii
Not: Este posibil s fie nevoie de o
prob pentru a se calcula
uoar modificare a gradientului de
coeficientul de rspuns
eluare pentru a se obine rezoluia din
Not: Coloana se cur prin cltire cu
figura 1.
solvent B 100 % (litera a) din prezentul
Temperatura coloanei: 30 C. subpunct) timp de cel puin 30 de minute
7.5.3. Volumul injectat: 50 l reactiv de la fiecare 20-25 de serii.
derivare i 50 l soluie prob 6) Modul de integrare
a) Vrful PEDP
7.5.4. Echilibrarea coloanei PEDP este eluat ca un singur vrf (figura
Sistemul se pornete n fiecare zi, se 1). Se determin suprafaa vrfului prin
cltete coloana cu solvent B 100 % integrare la linia de baz.
timp de 15 minute, apoi se regleaz la b) Vrful triptaminei
A:B = 40:60 i se echilibreaz la Triptamina este eluat ca un singur vrf
1 ml/min. timp de 15 minute. Se (figura 1). Suprafaa vrfului se
lucreaz cu o prob martor injectndu-se determin prin integrare la linia de baz.
c) Grupurile de vrfuri ale PS i PE
metanol (4.2.1).
n condiiile descrise (figura 1), PS
Not: nainte de o depozitare pe termen elueaz sub forma a dou vrfuri
lung coloana se cltete cu metanol: principale parial fr rezoluie,
cloroform = 80:20 (v/v) timp de 30 de precedate de un vrf minor. PE elueaz
minute. sub forma a trei vrfuri principale parial
7.5.5. Se determin coninutul de fr rezoluie. Se determin ntreaga
PS + PE din proba analizat suprafa a fiecrei aglomerri de
vrfuri, stabilindu-se linia de baz ca n
7.5.6. Se realizeaz secvena de analize figura 1.
cromatografice lsndu-se un timp
constant ntre seriile de analize pentru a
se obine timpi de reinere constani.
Soluia etalon extern (7.3) se injecteaz
la fiecare 5-10 soluii prob pentru a se
calcula coeficientul de rspuns.
Not: Coloana se cur prin cltire cu
solvent B 100 % (7.5.1) timp de cel
puin 30 de minute la fiecare 20-25 de
serii.
7.6. Modul de integrare
7.6.1. Vrful PEDP
PEDP este eluat ca un singur vrf. Se
determin suprafaa vrfului prin
integrare la linia de baz.
7.6.2. Vrful triptaminei
Triptamina este eluat ca un singur vrf
(figura 1). Se determin suprafaa
vrfului prin integrare la linia de baz.
7.6.3. Grupurile de vrfuri ale PS i PE
n condiiile descrise (figura 1), PS
elueaz sub forma a dou vrfuri
principale parial fr rezoluie,
precedate de un vrf minor. PE elueaz
sub forma a trei vrfuri principale parial
fr rezoluie. Se determin ntreaga
suprafa a fiecrei aglomerri de
vrfuri, stabilindu-se linia de baz ca n
figura 1.

Calcularea i exprimarea rezultatelor
Coninutul de PS i PE din proba
Calcularea i exprimarea rezultatelor analizat se calculeaz dup cum
urmeaz:
Coninutul de PS i PE din proba C = 55,36 [(A2)/(A1)] [(T1)/(T2)]
analizat se calculeaz dup cum
urmeaz: C = 55,36 [(A2)/(A1)] unde:
[(T1)/(T2)]
unde: C - coninutul de PS sau PE (mg/100 g
C = coninutul de PS sau PE (mg/100 g praf) din proba analizat;
praf) din proba analizat;
A1 - suprafaa vrfului PEDP din soluia
A1= suprafaa vrfului PEDP din soluia
etalon din prob (punctul 7, subpunctul
etalon din prob (7.3);
3);
A2= suprafaa vrfului PS sau PE din
soluia din prob (7.2);
A2 - suprafaa vrfului PS sau PE din
T1= suprafaa vrfului triptaminei din soluia din prob (punctul 7, subpunctul
soluia etalon din prob (7.3); 2);
T2= suprafaa vrfului triptaminei din
soluia din prob (7.2).
T1 - suprafaa vrfului triptaminei din
soluia etalon din prob (punctul 7,
subpunctul 3);
T2 - suprafaa vrfului triptaminei din

soluia din prob (punctul 7, subpunctul
2).
Anexa nr. 14 Lapte praf degresat: Parial Prevederile stipulate n Ministerul Din momentul
Anexa XIV (art. 10) Lapte praf determinarea cantitativ a compatibil Not nu sunt Agriculturii i intrrii n vigoare
degresat: determinarea cantitativ a fosfatidilserinei i a prevzute n actul Industriei a actului naional
fosfatidilserinei i a fosfatidiletanolaminei, pct. 9. Precizia naional. Standardele Alimentare armonizat
metodei FIL nu sunt aplicate pe
fosfatidiletanolaminei, pct. 9. Precizia
1) Repetabilitate teritoriul Republicii
metodei Derivaia standard relativ a Moldova.
repetabilitii, care exprim variabilitatea
Not: Valorile repetabilitii au fost rezultatelor independente de analiz
calculate conform standardului obinute de acelai operator care
internaional FIL ( 16 ). Limita folosete aceeai aparatur n aceleai
orientativ de reproductibilitate a fost condiii i probe de analiz identice ntr-
calculat conform procedurii definite n un interval scurt de timp, nu trebuie s
anexa III(b) la prezentul document. depeasc relativ 2 %. n cazul n care
se obin dou determinri n aceste
9.1. Repetabilitate condiii, diferena relativ dintre cele
dou rezultate nu trebuie s fie mai mare
Derivaia standard relativ a de 6 % din media aritmetic a
repetabilitii, care exprim rezultatelor.
variabilitatea rezultatelor independente 2) Reproductibilitate
de analiz obinute de acelai operator n cazul n care se realizeaz dou
care folosete aceeai aparatur n determinri de ctre operatori din
aceleai condiii i probe de analiz laboratoare diferite care folosesc
identice ntr-un interval scurt de timp, nu aparatur diferit n condiii diferite i
trebuie s depeasc relativ 2 %. n aceeai prob de analiz, diferena
relativ dintre cele dou rezultate nu
cazul n care se obin dou determinri trebuie s fie mai mare de 11 % din
n aceste condiii, diferena relativ media aritmetic a rezultatelor.
dintre cele dou rezultate nu trebuie s
fie mai mare de 6 % din media
aritmetic a rezultatelor.
n cazul n care se realizeaz dou

determinri de ctre operatori din
laboratoare diferite care folosesc
aparatur diferit n condiii diferite i
aceeai prob de analiz, diferena
relativ dintre cele dou rezultate nu
trebuie s fie mai mare de 11 % din
media aritmetic a rezultatelor.
Anexa XIV (art. 10) Lapte praf neaplicabile
degresat: determinarea cantitativ a
fosfatidilserinei i a
Referine
10.1. Resmini P., Pellegrino L.,

Hogenboom J.A., Sadini V., Rampilli M.,
Detection of buttermilk solids in
skimmilk powder by HPLC
quantification of aminophospholipids.
Sci. Tecn. Latt.-Cas., 39,395 (1988).
Procedur, subpunctul 6), litera c)
fosfatidiletanolaminei, Figura 1.
Figura 1. Model HPLC al derivailor
Model HPLC al derivailor OPA ai OPA ai fosfatidilserinei (PS) i ai
fosfatidilserinei (PS) i ai fosfatidiletanolamidei (PE) n extractul
fosfatidiletanolamidei (PE) n de metanol al laptelui praf reconstituit.
extractul de metanol al laptelui praf
reconstituit
Anexa nr. 15 Detectarea reziduurilor Parial Standardul ISO/TS Ministerul Din momentul
Anexa XV (art. 11) Detectarea antimicrobiotice n laptele praf compatibil 26844:2006 a fost Agriculturii i intrrii n vigoare
reziduurilor antimicrobiotice n degresat substituit cu standardul Industriei a actului naional
laptele praf degresat naional SM ISO/TS Alimentare armonizat
Se folosete un test de selecie al unui 26844:2015.
Standardele FIL nu
Se folosete un test de selecie al unui inhibitor microbian n care se
folosete Geobacillus sunt aplicate pe
inhibitor microbian n care se teritoriul Republicii
folosete Geobacillus stearothermophilus var. calidolactis ca
Moldova.
stearothermophilus var. calidolactis AT microorganism de test i care este
CC 10149 (identic cu tulpina C953) ca suficient de sensibil pentru a detecta
microorganism de test i care este 4 g benzilpenicilin per kg de lapte
suficient de sensibil pentru a detecta i 100 g sulfamidin per kg de lapte.
4 g benzilpenicilin per kg de lapte Sunt disponibile i se pot folosi kituri
i 100 g sulfamidin per kg de lapte. comerciale pentru analize n cazul n
Sunt disponibile i se pot folosi kituri care acestea au sensibilitatea necesar la
comerciale pentru analize n cazul n benzilpenicilin i sulfamidin.
care acestea au sensibilitatea necesar la
benzilpenicilin i sulfamidin. Pentru analiz, se folosete lapte praf
degresat reconstituit (1 g praf +9 ml ap
Pentru analiz, se folosete lapte praf distilat). Testul se realizeaz n
degresat reconstituit (1 g praf +9 ml ap conformitate cu standardul SM ISO/TS
distilat). Testul se realizeaz n 26844:2015 sau n conformitate cu
conformitate cu ISO/TS 26844:2006 instruciunile productorului kitului
Lapte i produse lactate Determinarea pentru analize.
reziduurilor antimicrobiotice Test de
difuzie n eprubet FIL Buletinul Rezultatele pozitive se interpreteaz
nr. 258/1991, seciunea 1, capitolul 2 sau dup cum urmeaz:
n conformitate cu instruciunile
productorului kitului pentru 1. Prezena -lactamilor poate fi
analize ( 17 ). confirmat prin repetarea
analizei, adugndu-se
Rezultatele pozitive se interpreteaz penicilinaz n sistemul de
dup cum urmeaz: analiz:
1. Prezena -lactamilor poate fi Rezultat negativ: Substana inhibitoare

confirmat prin repetarea analizei, este un antibiotic -lactam.
adugndu-se penicilinaz n sistemul de
analiz ( 18 ): Rezultatul pozitiv rmne: Substana
inhibitoare nu poate fi identificat prin
Rezultat negativ: Substana inhibitoare aceast procedur, se continu cu 2.
este un antibiotic -lactam.
2. Prezena sulfamidelor poate fi
Rezultatul pozitiv rmne: Substana confirmat prin repetarea
inhibitoare nu poate fi identificat prin analizei, adugndu-se acid p-
aceast procedur, se continu cu 2. aminobenzoic n sistemul de
analiz:
2. Prezena sulfamidelor poate fi
confirmat prin repetarea analizei, Rezultat negativ: Substana inhibitoare
adugndu-se acid p-aminobenzoic n este o sulfamid.
sistemul de analiz:
Rezultatul pozitiv rmne: Substana
Rezultat negativ: Substana inhibitoare inhibitoare nu poate fi identificat prin
este o sulfamid. aceast procedur, se continu cu 3.
Rezultatul pozitiv rmne: Substana 3. Prezena combinaiei dintre -

inhibitoare nu poate fi identificat prin lactam i sulfamid poate fi
aceast procedur, se continu cu 3. confirmat prin repetarea
analizei, adugndu-se
3. Prezena combinaiei dintre -lactam penicinilaz + acid p-
i sulfamid poate fi confirmat prin aminobenzoic n sistemul de
repetarea analizei, adugndu-se analiz:
penicinilaz + acid p-aminobenzoic n
sistemul de analiz: Rezultat negativ: Substanele inhibitoare
sunt un antibiotic -lactam i o
Rezultat negativ: Substanele inhibitoare sulfamid.
sunt un antibiotic -lactam i o
sulfamid. Rezultat pozitiv: Substana inhibitoare
nu poate fi identificat prin aceast
Rezultat pozitiv: Substana inhibitoare nu procedur.
poate fi identificat prin aceast
procedur.
Anexa nr. 16 Determinarea cantitativ Compatibil - Ministerul Din momentul

Anexa XVI (art. 12) Determinarea a laptelui praf degresat n furajele Agriculturii i intrrii n vigoare
cantitativ a laptelui praf degresat n combinate prin coagularea enzimatic Industriei a actului naional
furajele combinate prin coagularea a para-cazeinei, pct. 1. Scopul Alimentare armonizat
Determinarea cantitativ a laptelui praf
enzimatic a para-cazeinei, pct. 1.
degresat n furajele combinate prin
Scopul coagularea enzimatic a para-cazeinei.
Determinarea cantitativ a laptelui praf

degresat n furajele combinate prin
coagularea enzimatic a para-cazeinei.

furajele combinate prin coagularea a para-cazeinei, pct. 2. Obiectul Alimentare armonizat
Aceast metod se aplic furajelor
combinate coninnd cel puin 10 %
Obiectul lapte praf degresat; prezena unor
cantiti mari de zar i/sau de anumite
Aceast metod se aplic furajelor proteine care nu provin din lapte pot
combinate coninnd cel puin 10 % duce la apariia unor interferene.
lapte praf degresat; prezena unor
cantiti mari de zar i/sau de anumite
proteine care nu provin din lapte pot
duce la apariia unor interferene.
Anexa nr. 16 Determinarea cantitativ Parial Standardul ISO 8968- Ministerul Din momentul
Anexa XVI (art. 12) Determinarea a laptelui praf degresat n furajele compatibil 2:2001 este substituit Agriculturii i intrrii n vigoare
cantitativ a laptelui praf degresat n combinate prin coagularea enzimatic cu standardul naional Industriei a actului naional
furajele combinate prin coagularea a para-cazeinei, pct. 3. Principiul SM EN ISO 8968- Alimentare armonizat
metodei 1:2014.
Standardele FIL nu se
Principiul metodei 1) Dizolvarea cazeinei coninute n aplic pe teritoriul
furajele combinate prin extragere cu Republicii Moldova.
3.1. Dizolvarea cazeinei coninute n
soluie de citrat de sodiu.
furajele combinate prin extragere cu
soluie de citrat de sodiu. 2) Ajustarea concentraiei de ioni de
calciu la nivelul necesar pentru
3.2. Ajustarea concentraiei de ioni de
precipitarea para-cazeinei se
calciu la nivelul necesar pentru
realizeaz prin adugarea de cheag.
precipitarea para-cazeinei se realizeaz
prin adugarea de cheag. Coninutul de azot al precipitatului de
para-cazein se determin prin metoda
3.3. Coninutul de azot al precipitatului Kjeldahl, aa cum este descris n
de para-cazein se determin prin standardul SM EN ISO 8968-1:2014;
metoda Kjeldahl, aa cum este descris cantitatea de lapte praf degresat se
n standardul ISO 8968-2:2001FIL 20- calculeaz pe baza unui coninut minim
2:2001; cantitatea de lapte praf degresat de cazein de 27,5 % (punctul 8).
se calculeaz pe baza unui coninut
minim de cazein de 27,5 % (a se vedea
8.1).
a para-cazeinei, pct. 4. Reactivi SM EN ISO 8968- Alimentare armonizat
furajele combinate prin coagularea 1:2014.
enzimatic a para-cazeinei, pct. 4. Toi reactivii utilizai trebuie s fie Standardele FIL nu
Reactivi de calitate analitic recunoscut. Apa sunt aplicate pe
utilizat trebuie s fie ap distilat sau teritoriul Republicii
Moldova.
Toi reactivii utilizai trebuie s fie de ap de o puritate cel puin echivalent.
calitate analitic recunoscut. Apa Cu excepia cheagului, toi reactivii i
utilizat trebuie s fie ap distilat sau toate soluiile trebuie s nu conin
ap de o puritate cel puin echivalent. substane azotate.
Cu excepia cheagului (4.5), toi reactivii
i toate soluiile trebuie s nu conin
substane azotate. 1) Citrat trisodic (soluie 1 % m/v)
4.1. Citrat trisodic (soluie 1 % m/v) 2) Clorur de calciu (aproximativ 5 M

4.2. Clorur de calciu (aproximativ 5 M de soluie)
de soluie)
Se dizolv 75 g de CaCl2 2 H2O n Se dizolv 75 g de CaCl2 2 H2O n
100 ml de ap distilat prin scuturare (se 100 ml de ap distilat prin scuturare (se
acord atenie reaciei exotermice). acord atenie reaciei exotermice).
Soluia se las peste noapte i apoi se Soluia se las peste noapte i apoi se
filtreaz. Soluia se pstreaz n filtreaz. Soluia se pstreaz n
refrigerator.
refrigerator.
4.3. Hidroxid de sodiu 0,1 N
4.4. Acid clorhidric 0,1 N 3) Hidroxid de sodiu 0,1 N
4.5. Cheag lichid de viel (trie de
4) Acid clorhidric 0,1 N
aproximativ 100 IMCU/ml n
conformitate cu standardul ISO
11815/FIL 157) Se pstreaz n 5) Cheag lichid de viel (trie de
refrigerator la 4-6 C. aproximativ 100 IMCU/ml). Se
pstreaz n refrigerator la 4-6 C.
4.6. Reactivii pentru determinarea
cantitativ a azotului n conformitate cu
metoda Kjeldahl descris n ISO 8968-
2:2001FIL 20-2:2001 6) Reactivii pentru determinarea
cantitativ a azotului n conformitate
cu metoda Kjeldahl descris n
standardul SM EN ISO 8968-1:2014

furajele combinate prin coagularea a para-cazeinei, pct. 5. Aparatur Alimentare armonizat
Aparatur obinuit de laborator,
Aparatur
cuprinznd:
Aparatur obinuit de laborator,
1) Mojar sau omogenizator
cuprinznd:
5.1. Mojar sau omogenizator 2) Balan analitic cu o capacitate de
5.2. Balan analitic cu o capacitate de cntrire avnd o precizie de 1 mg,
cntrire avnd o precizie de 1 mg, cu o cu o capacitate de citire de 0,1 mg
capacitate de citire de 0,1 mg
5.3. Centrifug de mas (500 g sau 3) Centrifug de mas (500 g sau
2 000-3 000 rpm) cu tuburi de 50 ml i 2 000-3 000 rpm) cu tuburi de 50 ml
2 000 g i 2 000 g
5.4. Agitator magnetic (10-15 mm) cu
minimagnei 4) Agitator magnetic (10-15 mm) cu
5.5. Pahare de laborator de 150-200 ml minimagnei
5.6. Baloane de 250 i 500 ml 5) Pahare de laborator de 150-200 ml

5.7. Conducte de sticl cu diametru de
60-80 mm
5.8. Filtre fr cenu cu filtrare rapid
cu diametrul de 150 mm (Whatman 6) Baloane de 250 i 500 ml
N 41 sau echivalent)
7) Conducte de sticl cu diametru de
5.9. Pipete cu diverse volume nominale
60-80 mm
5.10. Baie de ap cu termostat la 37 C
1 C 8) Filtre fr cenu cu filtrare rapid
5.11. Aparat de msurare a pH-ului cu o cu diametrul de 150 mm
precizie de 0,1 uniti
5.12. Termometre cu o precizie de 1 C 9) Pipete cu diverse volume nominale
10) Baie de ap cu termostat la 37 C

1 C
11) Aparat de msurare a pH-ului cu o

precizie de 0,1 uniti
12) Termometre cu o precizie de 1 C
furajele combinate prin coagularea a para-cazeinei, pct. 6. Procedur SM EN ISO 8968- Alimentare armonizat
1:2014.
1) Prepararea probei Standardele FIL nu
Procedur sunt aplicate pe
Se zdrobesc n mojar sau se teritoriul Republicii
6.1. Prepararea probei Moldova.
omogenizeaz n rni 10-20 g din
Se zdrobesc n mojar sau se prob pentru a se obine un amestec
omogenizeaz n rni 10-20 g din
prob pentru a se obine un amestec
omogen. omogen.
6.2. Dizolvarea laptelui praf i
separarea reziduului insolubil 2) Dizolvarea laptelui praf i separarea
6.2.1. Se cntresc 1,000 0,002 g de reziduului insolubil
furaje combinate bine omogenizate (6.1)
direct ntr-un tub de centrifugare de a) Se cntresc 1,000 0,002 g de
50 ml. Se adaug 30 ml de soluie de furaje combinate bine omogenizate
citrat trisodic (4.1) nclzit n prealabil la direct ntr-un tub de centrifugare
45 C 2 C. Se amestec timp de cel
de 50 ml. Se adaug 30 ml de
puin cinci minute cu ajutorul unui
agitator magnetic sau prin scuturare soluie de citrat trisodic nclzit n
puternic cu mna. prealabil la 45 C 2 C. Se
6.2.2. Se centrifugheaz la 500 g (2 000- amestec timp de cel puin cinci
3 000 rpm) timp de 10 minute i se minute cu ajutorul unui agitator
decanteaz cu atenie supranatantul apos magnetic sau prin scuturare
limpede ntr-un pahar de laborator de puternic cu mna.
150-200 ml, pentru a nu se pierde
material.
b) Se centrifugheaz la 500 g (2 000-
6.2.3. Se realizeaz nc dou extrageri
de reziduu prin aceeai procedur i se 3 000 rpm) timp de 10 minute i se
adaug extractele la primul. decanteaz cu atenie supranatantul
6.2.4. n cazul n care se formeaz un apos limpede ntr-un pahar de
strat de ulei la suprafa, se rcete n laborator de 150-200 ml, pentru a
refrigerator pn cnd grsimile se nu se pierde material.
solidific i se ndeprteaz stratul solid
cu o spatul.
c) Se realizeaz nc dou extrageri
6.3. Coagularea cazeinei cu enzime din
cheag de reziduu prin aceeai procedur
6.3.1. Se amestec continuu i se adaug i se adaug extractele la primul.
prin picurare 2 ml de clorur de calciu
(4.2) la ntregul extract apos d) n cazul n care se formeaz un
(aproximativ 100 ml). Se ajusteaz pH- strat de ulei la suprafa, se rcete
ul la 6,4-6,5 cu soluii de NaOH (4.3)
sau de HCl (4.4). Se introduce n baia de n refrigerator pn cnd grsimile
ap controlat prin termostat la 37 C se solidific i se ndeprteaz
1 C timp de 15-20 minute pentru a se stratul solid cu o spatul.
obine un echilibru salin. Acesta este
indicat de o uoar tulburare.
3) Coagularea cazeinei cu enzime din
6.3.2. Lichidul se transfer ntr-un tub de
centrifugare i se centrifugheaz la cheag
2 000 g timp de 10 minute pentru a se
ndeprta substanele precipitate. Se a) Se amestec continuu i se adaug
transfer supranatantul, fr a se spla prin picurare 2 ml de clorur de
sedimentul, n alt tub de centrifugare. calciu la ntregul extract apos
6.3.3. Supranatantul se aduce din nou la (aproximativ 100 ml). Se ajusteaz
temperatura de 37 C 1 C. n timp ce pH-ul la 6,4-6,5 cu soluii de
se amestec extractul, se adaug prin
NaOH sau de HCl. Se introduce n
picurare 0,5 ml de cheag lichid (4.5).
Coagularea se produce n dou minute. baia de ap controlat prin
6.3.4. Proba se introduce din nou n baia termostat la 37 C 1 C timp de
de ap i se las la o temperatur de 15-20 minute pentru a se obine un
37 C 1 C timp de 15 minute. Proba echilibru salin. Acesta este indicat
se scoate din baie, iar coagulul se sparge de o uoar tulburare.
prin amestecare. Se centrifugheaz la
2 000 g timp de 10 minute. Se filtreaz b) Lichidul se transfer ntr-un tub de
supranatantul printr-o hrtie de filtru
adecvat (5.8) i se pstreaz hrtia de centrifugare i se centrifugheaz la
filtru. Precipitatul se cltete n tubul de 2 000 g timp de 10 minute pentru a
centrifugare cu 50 ml de ap la se ndeprta substanele
aproximativ 35 C, amestecndu-se precipitate. Se transfer
precipitatul. supranatantul, fr a se spla
Se centrifugheaz din nou la 2 000 g sedimentul, n alt tub de
timp de 10 minute. Supranatantul se
centrifugare.
filtreaz prin hrtia de filtru pstrat.
6.4. Determinarea azotului din cazein
c) Supranatantul se aduce din nou la
6.4.1. Dup cltire, precipitatul se
transfer cantitativ n hrtia de filtru temperatura de 37 C 1 C. n
rmas de la 6.3.4 cu ajutorul apei timp ce se amestec extractul, se
distilate. Hrtia de filtru uscat se adaug prin picurare 0,5 ml de
transfer n balonul Kjeldhal. Se
cheag lichid. Coagularea se
determin azotul prin metoda Kjeldahl n
conformitate cu standardul ISO 8968- produce n dou minute.
2:2001FIL 20-2:2001.
d) Proba se introduce din nou n baia
de ap i se las la o temperatur
de 37 C 1 C timp de 15 minute.
Proba se scoate din baie, iar
coagulul se sparge prin amestecare.
Se centrifugheaz la 2 000 g timp
de 10 minute. Se filtreaz
supranatantul printr-o hrtie de
filtru adecvat i se pstreaz
hrtia de filtru. Precipitatul se
cltete n tubul de centrifugare cu
50 ml de ap la aproximativ 35 C,
amestecndu-se precipitatul.
Se centrifugheaz din nou la 2 000 g

timp de 10 minute. Supranatantul se
filtreaz prin hrtia de filtru pstrat.
4) Determinarea azotului din cazein
Dup cltire, precipitatul se transfer

cantitativ n hrtia de filtru rmas de la
punctul 6, subpunctul 3, litera d) cu
ajutorul apei distilate. Hrtia de filtru
uscat se transfer n balonul Kjeldhal.
Se determin azotul prin metoda
Kjeldahl n conformitate cu standardul
SM EN ISO 8968-1:2014.
furajele combinate prin coagularea a para-cazeinei, pct. 7. Test cu prob SM EN ISO 8968- Alimentare armonizat
martor 1:2014.
enzimatic a para-cazeinei, pct. 7. Test
Standardele IDF nu
cu prob martor 1) Se efectueaz cte un test cu prob sunt aplicate pe
martor supus la mineralizare prin teritoriul Republicii
7.1. n mod regulat se efectueaz cte un Moldova.
metoda Kjeldhal n conformitate cu
test cu prob martor supus la
standardul SM EN ISO 8968-
mineralizare prin metoda Kjeldhal n
1:2014, folosindu-se o hrtie de
conformitate cu standardul ISO 8968-
filtru fr cenu umezit cu un
2:2001IDF 20-2:2001, folosindu-se o
amestec de 90 ml de soluie de citrat
hrtie de filtru fr cenu (5.8) umezit
de sodiu, 2 ml soluie de clorur de
cu un amestec de 90 ml (4.1) de soluie
calciu, 0,5 ml de cheag lichid i
de citrat de sodiu, 2 ml soluie de clorur
splat cu 3 15 ml de ap distilat.
de calciu (4.2), 0,5 ml de cheag lichid
(4.5) i splat cu 3 15 ml de ap 2) Volumul de acid folosit pentru testul
distilat. cu prob martor se ia din volumul de
acid folosit pentru titrarea probei.
7.2. Volumul de acid folosit pentru testul
cu prob martor se ia din volumul de
acid (4.4) folosit pentru titrarea probei.
furajele combinate prin coagularea a para-cazeinei, pct. 8. Exprimarea Alimentare armonizat
rezultatelor
Exprimarea rezultatelor Procentul de lapte praf concentrat din
furajul combinat se calculeaz cu
8.1. Procentul de lapte praf concentrat
ajutorul formulei de mai jos:
din furajul combinat se calculeaz cu
ajutorul formulei de mai jos: N x 6,38
( x 100)2,81
27,5
%SMP=
0,908
unde:
unde:
N - procentul de azot din para-cazein;
N este procentul de azot din para-
cazein; 27,5 - coeficientul de transformare a
cazeinei determinate n procentul de
27,5 este coeficientul de transformare a lapte praf degresat;
cazeinei determinate n procentul de
lapte praf degresat; 2,81 i 0,908 - coeficienii de corecie
obinui prin analiza regresiei.
2,81 i 0,908 sunt coeficienii de corecie
obinui prin analiza regresiei.

a para-cazeinei, pct. 9. Precizia Alimentare armonizat
furajele combinate prin coagularea metodei
Precizia metodei 1) Repetabilitate
9.1. Repetabilitate Analiza probelor martor pentru aceeai

prob realizat de acelai operator n
n cel puin 95 % din cazurile studiate, acelai laborator trebuie s dea rezultate
analiza probelor martor pentru aceeai echivalente cu cele pentru o cantitate nu
prob realizat de acelai operator n mai mare de 2,3 g de lapte praf degresat
acelai laborator trebuie s dea rezultate n 100 g de furaj combinat.
echivalente cu cele pentru o cantitate nu
mai mare de 2,3 g de lapte praf degresat
n 100 g de furaj combinat. 2) Reproductibilitate
9.2. Reproductibilitate n cel puin 95 % din cazurile studiate,

analiza probelor martor pentru aceeai
n cel puin 95 % din cazurile studiate, prob realizat de dou laboratoare
analiza probelor martor pentru aceeai trebuie s dea rezultate echivalente cu
cele pentru o cantitate nu mai mare de
prob realizat de dou laboratoare 6,5 g de lapte praf degresat n 100 g de
trebuie s dea rezultate echivalente cu furaj combinat.
cele pentru o cantitate nu mai mare de
6,5 g de lapte praf degresat n 100 g de
furaj combinat.

furajele combinate prin coagularea a para-cazeinei, pct. 10. Observaii Alimentare armonizat
1) Adugarea unor procente mari de
Observaii
proteine care nu provin din lapte i
10.1. Adugarea unor procente mari de n special de proteine din soia care
proteine care nu provin din lapte i n sunt nclzite mpreun cu laptele
special de proteine din soia care sunt praf degresat poate genera rezultate
nclzite mpreun cu laptele praf prea mari din cauza coprecipitrii cu
degresat poate genera rezultate prea mari para-cazeina din lapte.
din cauza coprecipitrii cu para-cazeina
din lapte. 2) Adugarea de zar poate duce la
obinerea unor cifre mai mici din
10.2. Adugarea de zar poate duce la cauza faptului c se determin
obinerea unor cifre mai mici din cauza numai cantitatea fr grsime.
faptului c se determin numai cantitatea Adugare de zar acid poate genera
fr grsime. Adugare de zar acid rezultate considerabil mai mici din
poate genera rezultate considerabil mai cauza dizolvrii incomplete n
mici din cauza dizolvrii incomplete n soluia de citrat.
soluia de citrat.
3) Adugarea de 0,5 % sau mai mult
10.3. Adugarea de 0,5 % sau mai mult lecitin poate, de asemenea, genera
lecitin poate, de asemenea, genera rezultate cu valori mici.
rezultate cu valori mici.
4) ncorporarea de lapte praf degresat
10.4. ncorporarea de lapte praf degresat tratat la temperaturi nalte poate
tratat la temperaturi nalte poate genera genera obinerea de valori prea mari
obinerea de valori prea mari din cauza din cauza coprecipitrii anumitor
coprecipitrii anumitor proteine cu para- proteine cu para-cazeina din lapte.
cazeina din lapte.
Anexa nr. 17 Detectarea amidonului Compatibil - Ministerul Din momentul

Anexa XVII (art. 13) Detectarea din laptele praf degresat, lapte praf Agriculturii i intrrii n vigoare
amidonului din laptele praf degresat, denaturat i furaje combinate, pct.1. Industriei a actului naional
Obiectul Alimentare armonizat
lapte praf denaturat i furaje Prin aceast metod se detecteaz
combinate, pct. 1. Obiectul amidonul utilizat ca marcator n lapte
praf denaturat.
Prin aceast metod se detecteaz Limita de detectare a metodei este de
aproximativ 0,05 g de amidon n 100 g
amidonul utilizat ca marcator n lapte
de prob.
praf denaturat.
Limita de detectare a metodei este de

aproximativ 0,05 g de amidon n 100 g
de prob.

amidonului din laptele praf degresat, denaturat i furaje combinate, pct. 2. Industriei a actului naional
lapte praf denaturat i furaje Principiu Alimentare armonizat
Reacia se bazeaz pe cea folosit n
combinate, pct. 2. Principiu
iodometrie:
1) fixarea iodului liber din soluie
Reacia se bazeaz pe cea folosit n apoas de ctre coloizi;
iodometrie: 2) absorbia de ctre miceliile de
amidon i prin colorare.
fixarea iodului liber din soluie
apoas de ctre coloizi;
absorbia de ctre miceliile de amidon

i prin colorare.

lapte praf denaturat i furaje Reactivi Alimentare armonizat
Soluie de iod
combinate, pct. 3. Reactivi 1) iod - 1,0 g;
2) iodur de potasiu - 2,0 g;
3.1. Soluie de iod: 3) ap distilat - 100 ml.
Se dizolv 1,0 g de iod i 2,0 g de iodur
iod: 1,0 g; de potasiu n ap, ntr-un balon cotat de
100 ml cu un singur marcaj. Se dilueaz
cu ap pn la marcajul de 100 ml.
iodur de potasiu: 2,0 g;
ap distilat: 100 ml.
Se dizolv 1,0 g de iod i 2,0 g de

iodur de potasiu n ap, ntr-un balon
cotat de 100 ml cu un singur marcaj. Se
dilueaz cu ap pn la marcajul de
100 ml.

lapte praf denaturat i furaje Aparatur Alimentare armonizat
1) Balan analitic
combinate, pct. 4. Aparatur
2) Baie de ap care fierbe
3) Eprubete, 25 mm 200 mm
4.1. Balan analitic
4.2. Baie de ap care fierbe
4.3. Eprubete, 25 mm 200 mm

denaturat i furaje combinate, pct. 5. Industriei a actului naional
amidonului din laptele praf degresat, Procedur Alimentare armonizat
lapte praf denaturat i furaje Se cntrete 1,0 g din prob cu o
combinate, pct. 5. Procedur precizie de 0,1 g i se transfer ntr-o
eprubet.
Se adaug 20 ml de ap distilat i se
Se cntrete 1,0 g din prob cu o
amestec pentru a se dispersa proba.
precizie de 0,1 g i se transfer ntr-o Se introduce n baia de ap i se las
eprubet (4.3). timp de 5 minute.
Se scoate din baia de ap i se rcete la
Se adaug 20 ml de ap distilat i se temperatura camerei.
amestec pentru a se dispersa proba. Se adaug 0,5 ml de soluie de iod i se
amestec, observndu-se culoarea
Se introduce n baia de ap (4.2) i se rezultat.
las timp de 5 minute.
Se scoate din baia de ap i se rcete la

Se adaug 0,5 ml de soluie de iod (3.1)

i se amestec, observndu-se culoarea
rezultat.

lapte praf denaturat i furaje Exprimarea rezultatelor Alimentare armonizat
Culoarea albastr indic prezena
combinate, pct. 6. Exprimarea
amidonului natural n prob.
rezultatelor n cazul n care proba conine amidon
modificat, poate rezulta o alt culoare
Culoarea albastr indic prezena dect albastru.
amidonului natural n prob.
n cazul n care proba conine amidon

modificat, poate rezulta o alt culoare
dect albastru.

lapte praf denaturat i furaje Observaii Alimentare armonizat
Culoarea, intensitatea culorii i aspectul
combinate, pct. 7. Observaii
observat la microscop al amidonului
variaz n funcie de originea amidonului
Culoarea, intensitatea culorii i aspectul natural (de exemplu, porumb sau cartof)
observat la microscop al amidonului i de tipul de amidon modificat din
variaz n funcie de originea amidonului prob.
natural (de exemplu, porumb sau cartof) n prezena amidonului modificat
i de tipul de amidon modificat din culoarea rezultat este violet, rou sau
prob. maro, n funcie de amploarea
modificrii din structura cristalin a
n prezena amidonului modificat amidonului natural.
culoarea rezultat este violet, rou sau
maro, n funcie de amploarea
modificrii din structura cristalin a
amidonului natural.

Anexa XVIII (art. 14) Determinarea coninutului umed n smntna Agriculturii i intrrii n vigoare
coninutului umed n smntna deshidratat, pct. 1. Obiectul Industriei a actului naional
deshidratat, pct. 1. Obiectul Prezenta anex precizeaz o metod de Alimentare armonizat
determinare a coninutului umed n
smntna deshidratat.
Prezenta anex precizeaz o metod de
determinare a coninutului umed n
smntna deshidratat.

coninutului umed n smntna deshidratat, pct. 2. Termeni i Industriei a actului naional
deshidratat, pct. 2. Termeni i definiii Alimentare armonizat
Coninut umed: pierderea de mas
definiii
prezentele Cerine.
n sensul prezentei anexe, se aplic Acesta este exprimat ca procent de mas.
urmtoarea definiie.
Coninut umed: pierderea de mas

prezentul standard internaional.
Acesta este exprimat ca procent de mas.

coninutului umed n smntna deshidratat, pct. 3. Principiu Industriei a actului naional
deshidratat, pct. 3. Principiu Uscarea unei cantiti analizate la 102 Alimentare armonizat
2 C pn se obine o mas constant i
cntrirea n vederea determinrii
Uscarea unei cantiti analizate la 102
pierderii de mas.
2 C pn se obine o mas constant i
cntrirea n vederea determinrii
pierderii de mas.
coninutului umed n smntna deshidratat, pct. 4. Aparatur Industriei a actului naional
deshidratat, pct. 4. Aparatur Aparatur obinuit de laborator, n Alimentare armonizat
special urmtoarele:
1) Balan analitic cu o capacitate de
Aparatur obinuit de laborator, n
cntrire avnd o precizie de 1 mg,
special urmtoarele: cu o capacitate de citire de 0,1 mg.
2) Cuptor de uscare, bine ventilat, care
4.1. Balan analitic cu o capacitate de poate fi meninut prin termostat la
cntrire avnd o precizie de 1 mg, cu o 102 2 C n ntregul spaiu de
capacitate de citire de 0,1 mg lucru.
3) Desicator, prevzut cu silicagel
4.2. Cuptor de uscare, bine ventilat, care proaspt uscat cu indicator
poate fi meninut prin termostat la 102 higroscopic sau un alt desicant
eficace.
2 C n ntregul spaiu de lucru.
4) Vase cu fundul plat, avnd o
adncime de aproximativ 25 mm, cu
4.3. Desicator, prevzut cu silicagel diametru de aproximativ 50 mm,
proaspt uscat cu indicator higroscopic confecionate dintr-un material
sau un alt desicant eficace. adecvat (de exemplu, sticl, oel
inoxidabil, nichel sau aluminiu),
4.4. Vase cu fundul plat, avnd o prevzute cu capace potrivite i uor
adncime de aproximativ 25 mm, cu de desfcut.
5) Sticle cu dopuri etane, pentru
diametru de aproximativ 50 mm,
amestecarea probelor de laborator.
confecionate dintr-un material adecvat
(de exemplu, sticl, oel inoxidabil,
nichel sau aluminiu), prevzute cu
capace potrivite i uor de desfcut.
4.5. Sticle cu dopuri etane, pentru

amestecarea probelor de laborator
Anexa XVIII (art. 14) Determinarea coninutului umed n smntna compatibil este substituit cu Agriculturii i intrrii n vigoare
coninutului umed n smntna deshidratat, pct. 5. Prelevarea standardul naional SM Industriei a actului naional
deshidratat, pct. 5. Prelevarea probelor SR EN ISO 707. Alimentare armonizat
Proba primit n laborator nu trebuie s Standardele FIL nu se
probelor
fie deteriorat sau modificat n timpul aplic pe teritoriul
transportului sau pe durata depozitrii. Republicii Moldova.
Este important ca laboratorul s Prelevarea probelor nu face parte din
primeasc o prob care s fie cu adevrat metoda specificat n prezentele Cerine.
reprezentativ i care s nu fi fost n standardul SM SR EN ISO 707 este
deteriorat sau modificat n timpul prezentat metoda recomandat de
transportului sau pe durata depozitrii. prelevare a probelor.
Probele se depoziteaz n condiii n care
Prelevarea probelor nu face parte din nu poate surveni nici o deteriorare sau
modificare a compoziiei.
metoda specificat n prezentul standard
internaional. n ISO 707FIL 50 este
prezentat metoda recomandat de
prelevare a probelor.
Probele se depoziteaz n condiii n care

nu poate surveni nicio deteriorare sau
modificare a compoziiei.

coninutului umed n smntna deshidratat, pct. 6. Prepararea Industriei a actului naional
deshidratat, pct. 6. Prepararea probei de analiz Alimentare armonizat
Se amestec proba cu grij prin
probei de analiz
scuturarea i rsturnarea repetat a
recipientului (n cazul n care este
Se amestec proba cu grij prin necesar, dup transferarea tuturor
scuturarea i rsturnarea repetat a probelor de analiz ntr-un recipient
recipientului (n cazul n care este etan cu o capacitate suficient care s
necesar, dup transferarea tuturor permit realizarea acestei operaii).
probelor de analiz ntr-un recipient n cazul n care nu se obine
etan cu o capacitate suficient care s omogenizarea complet prin aceast
permit realizarea acestei operaii). procedur, se iau cantitile analizate
(pentru dou determinri separate) din
n cazul n care nu se obine proba pregtit la dou puncte situate ct
omogenizarea complet prin aceast mai departe posibil unul de cellalt.
procedur, se iau cantitile analizate
(pentru dou determinri separate) din
proba pregtit la dou puncte situate ct
mai departe posibil unul de cellalt.

coninutului umed n smntna deshidratat, pct. 7. Procedur Industriei a actului naional
deshidratat, pct. 7. Procedur 1) Prepararea vasului Alimentare armonizat
a) Se nclzesc un vas neacoperit i
capacul acestuia n cuptor, reglat la
7.1. Prepararea vasului
102 2 C, timp de cel puin o or.
7.1.1. Se nclzesc un vas neacoperit i
b) Se aaz capacul pe vas i se
capacul acestuia (4.4) n cuptor (4.2),
transfer vasul acoperit n
reglat la 102 2 C, timp de cel puin o
desicator; se las s se rceasc la
or.
temperatura slii de balane i se
7.1.2. Se aaz capacul pe vas i se
cntrete cu o precizie de 1 mg,
transfer vasul acoperit n desicator
nregistrnd greutatea la 0,1 mg.
(4.3); se las s se rceasc la
2) Cantitatea analizat
temperatura slii de balane i se
Se transfer aproximativ 1-3 g din proba
pregtit n vas, se acoper cu capacul i
se cntrete cu o precizie de 1 mg,
7.2. Cantitatea analizat
Se transfer aproximativ 1-3 g din proba nregistrnd greutatea la 0,1 mg.
3) Determinare
pregtit (6) n vas, se acoper cu
capacul i se cntrete cu o precizie de a) Se descoper vasul i se aaz
mpreun cu capacul acestuia n
1 mg, nregistrnd greutatea la 0,1 mg.
cuptor, reglat la 102 2 C, timp
7.3. Determinare
de dou ore.
7.3.1. Se descoper vasul i se aaz
b) Se reaaz capacul i se transfer
mpreun cu capacul acestuia n cuptor
vasul acoperit n desicator; se las
(4.2), reglat la 102 2 C, timp de dou
s se rceasc la temperatura slii
ore.
de balane i se cntrete cu o
7.3.2. Se reaaz capacul i se transfer
precizie de 1 mg, nregistrnd
vasul acoperit n desicator; se las s se
greutatea la 0,1 mg.
rceasc la temperatura slii de balane
c) Se descoper vasul i se nclzete
i se cntrete cu o precizie de 1 mg,
din nou, mpreun cu capacul, n
cuptor, timp de o or. Se repet
7.3.3. Se descoper vasul i se nclzete
apoi operaia de la litera b) din
din nou, mpreun cu capacul, n cuptor,
prezentul subpunct.
timp de o or. Se repet apoi operaia
d) Se repet procedura de nclzire i
7.3.2.
cntrire pn cnd masa scade cu
7.3.4. Se repet procedura de nclzire i
1 mg sau mai puin sau crete ntre
cntrire pn cnd masa scade cu 1 mg
dou cntriri succesive.
sau mai puin sau crete ntre dou
Se folosete pentru calcule cea mai mic
cntriri succesive.
Se folosete pentru calcule cea mai mic mas nregistrat.
mas nregistrat.
coninutului umed n smntna deshidratat, pct. 8. Calcularea i Industriei a actului naional
deshidratat, pct. 8. Calcularea i exprimarea rezultatelor Alimentare armonizat
Coninutul umed, exprimat n g/100 g,
exprimarea rezultatelor
este egal cu:
m1m2
8.1. Calcularea x 100
m1m0
unde:
Coninutul umed, exprimat n g/100 g, m0 - masa vasului i a capacului
este egal cu: exprimat n grame (punctul 7,
subpunctul 1, litera b));
m1 - masa vasului, a capacului i a
cantitii analizate exprimat n grame
nainte de uscare (punctul 7, subpunctul
2);
unde:
m1 - masa vasului, a capacului i a
m0 masa vasului i a capacului exprimat
dup uscare (punctul 7, subpunctul 3,
n grame (7.1.2);
litera d)).
Rezultatul se raporteaz cu dou
m1 este masa vasului, a capacului i a
zecimale.
nainte de uscare (7.2);
m1 este masa vasului, a capacului i a

dup uscare (7.3.4).
Rezultatul se raporteaz cu dou

zecimale.
Anexa nr. 18 Determinarea Parial Prevederile din Not Ministerul Din momentul
Anexa XVIII (art. 14) Determinarea coninutului umed n smntna compatibil sunt prevederi UE Agriculturii i intrrii n vigoare
coninutului umed n smntna deshidratat, pct. 9. Precizia neaplicabile Industriei a actului naional
deshidratat, pct. 9. Precizia 1) Repetabilitate Alimentare armonizat
Diferena absolut dintre rezultatele
a dou determinri separate, obinute
Not: Valorile pentru repetabilitate i
prin aceeai metod cu material de
reproductibilitate se obin din rezultatele
analiz identic, n acelai laborator, de
unui test inter-laboratoare (a se vedea
ctre acelai operator, folosind aceeai
Steiger, G. Buletinul FIL nr. 285/1993,
aparatur, ntr-un interval scurt de timp,
va depi n nu mai mult de 5 % din
p. 21-28) realizat n conformitate cu cazuri 0,20 g de coninut umed per 100 g
standardul FIL 135B:1991 Lapte i de produs.
produse lactate Caracteristicile de 2) Reproductibilitate
precizie ale metodei de analiz Diferena absolut dintre rezultatele a
Prezentare general a procedurii de dou determinri separate, obinute prin
studiu n colaborare. aceeai metod cu material de analiz
identic, n laboratoare diferite, de ctre
9.1. Repetabilitate operatori diferii, folosind aparatur
diferit, va depi n nu mai mult de 5 %
Diferena absolut dintre rezultatele a din cazuri 0,40 g de coninut umed per
dou determinri separate, obinute prin 100 g de produs.
aceeai metod cu material de analiz
identic, n acelai laborator, de ctre
acelai operator, folosind aceeai
aparatur, ntr-un interval scurt de timp,
va depi n nu mai mult de 5 % din
cazuri 0,20 g de coninut umed per 100 g
de produs.
Diferena absolut dintre rezultatele a

dou determinri separate, obinute prin
operatori diferii, folosind aparatur
diferit, va depi n nu mai mult de 5 %
din cazuri 0,40 g de coninut umed per
100 g de produs.

deshidratat, pct. 10. Raportul de Industriei a actului naional
coninutului umed n smntna analiz Alimentare armonizat
deshidratat, pct. 10. Raportul de Raportul de analiz specific:
analiz 1) toate informaiile necesare pentru
identificarea complet a probei;
2) metoda de prelevare a probelor, dac
Raportul de analiz specific:
aceasta este cunoscut;
3) metoda de analiz folosit n
toate informaiile necesare pentru conformitate cu prezentul standard
identificarea complet a probei; internaional;
4) toate detaliile de funcionare care nu
metoda de prelevare a probelor, dac sunt specificate n prezentul
aceasta este cunoscut; standard internaional sau sunt
considerate opionale, alturi de
metoda de analiz folosit n detalii asupra oricror incidente care
conformitate cu prezentul standard ar fi putut influena rezultatul
(rezultatele);
internaional;
rezultatul (rezultatele) de analiz
obinut(e) i, n cazul n care
toate detaliile de funcionare care nu repetabilitatea a fost verificat, rezultatul
sunt specificate n prezentul standard final obinut menionat anterior.
internaional sau sunt considerate
opionale, alturi de detalii asupra
oricror incidente care ar fi putut
influena rezultatul (rezultatele);
rezultatul (rezultatele) de analiz

obinut(e) i, n cazul n care
repetabilitatea a fost verificat, rezultatul
final obinut menionat anterior.
Anexa nr. 19 Determinarea umiditii Compatibil - Ministerul Din momentul
Anexa XIX (art. 15) Determinarea n zara praf acid, pct. 1. Obiectul Agriculturii i intrrii n vigoare
umiditii n zara praf acid, pct. 1. Determinarea coninutului de umiditate Industriei a actului naional
Obiectul din zara praf acid destinat iniial Alimentare armonizat
furajelor.
Determinarea coninutului de umiditate
din zara praf acid destinat iniial
furajelor.

Anexa XIX (art. 15) Determinarea n zara praf acid, pct. 2. Principiu Agriculturii i intrrii n vigoare
umiditii n zara praf acid, pct. 2. Proba se usuc n vid. Pierderea de mas Industriei a actului naional
Principiu se determin prin cntrire. Alimentare armonizat
Proba se usuc n vid. Pierderea de mas

se determin prin cntrire.

Anexa XIX (art. 15) Determinarea n zara praf acid, pct. 3. Aparatur Agriculturii i intrrii n vigoare
umiditii n zara praf acid, pct. 3. 1) Balan analitic cu o capacitate de Industriei a actului naional
Aparatur cntrire avnd o precizie de 1 mg, Alimentare armonizat
cu o capacitate de citire de 0,1 mg.
2) Vase din metal care nu se corodeaz
3.1. Balan analitic cu o capacitate de
sau de sticl cu capace etane la aer;
cntrire avnd o precizie de 1 mg, cu o o suprafa de lucru care s permit
capacitate de citire de 0,1 mg ntinderea probei la aproximativ
0,3 g/cm2.
3.2. Vase din metal care nu se corodeaz 3) Cuptor electric reglabil cu vid
sau de sticl cu capace etane la aer; o prevzut cu pomp de ulei i cu un
suprafa de lucru care s permit mecanism de introducere a aerului
ntinderea probei la aproximativ uscat fierbinte printr-un turn
coninnd, de exemplu, oxid de
calciu sau sulfat de calciu (coninnd
0,3 g/cm2 indicator de umiditate).
4) Desicator cu agent de uscare
3.3. Cuptor electric reglabil cu vid eficient.
prevzut cu pomp de ulei i cu un 5) Cuptor de uscare ventilat cu
temperatura controlat de un
mecanism de introducere a aerului uscat
termostat la 102 2 C
fierbinte printr-un turn coninnd, de
exemplu, oxid de calciu sau sulfat de
calciu (coninnd indicator de
umiditate).
3.4. Desicator cu agent de uscare

efficient
3.5. Cuptor de uscare ventilat cu

temperatura controlat de un termostat la
102 2 C

Anexa XIX (art. 15) Determinarea n zara praf acid, pct. 4. Procedur Agriculturii i intrrii n vigoare
umiditii n zara praf acid, pct. 4. Se nclzesc un vas i capacul acestuia n Industriei a actului naional
Procedur cuptor timp de cel puin o or. Se aaz Alimentare armonizat
capacul pe recipient i se transfer
imediat n desicator; se las s se
Se nclzesc un vas (3.2) i capacul
rceasc la temperatura camerei i se
acestuia n cuptor (3.5) timp de cel puin
o or. Se aaz capacul pe recipient i se
nregistrnd masa la 0,1 mg.
transfer imediat n desicator (3.4); se
Se descoper vasul, se transfer
las s se rceasc la temperatura
aproximativ 5 g din prob n vas i se
camerei i se cntrete cu o precizie de
1 mg, nregistrnd masa la 0,1 mg.
nregistrnd masa la 0,1 mg. Se aaz
vasul mpreun cu capacul n cuptorul cu
Se descoper vasul, se transfer vid prenclzit la 83 C. Pentru a
aproximativ 5 g din prob n vas i se mpiedica scderea temperaturii din
cntrete cu o precizie de 1 mg, cuptor la o valoare inacceptabil, vasul
nregistrnd masa la 0,1 mg. Se aaz se introduce n cuptor ct mai rapid
vasul mpreun cu capacul n cuptorul cu posibil.
vid (3.3) prenclzit la 83 C. Pentru a Se mrete presiunea pn la 100 Torr
mpiedica scderea temperaturii din (13,3 kPa) i se las s se usuce la o
cuptor la o valoare inacceptabil, vasul mas constant (timp de aproximativ
se introduce n cuptor ct mai rapid patru ore) la aceast presiune ntr-un
posibil. curent de aer fierbinte i uscat.
Timpul de uscare se calculeaz din
Se mrete presiunea pn la 100 Torr momentul n care temperatura cuptorului
(13,3 kPa) i se las s se usuce la o revine la 83 C. Presiunea cuptorului se
mas constant (timp de aproximativ reduce cu grij pn la nivelul presiunii
patru ore) la aceast presiune ntr-un atmosferice. Se deschide cuptorul, vasul
curent de aer fierbinte i uscat. se acoper imediat cu capacul, se scoate
vasul din cuptor i se las s se rceasc
Timpul de uscare se calculeaz din n desicator timp de 30-45 minute i se
momentul n care temperatura cuptorului cntrete cu o precizie de 1 mg,
revine la 83 C. Presiunea cuptorului se nregistrnd masa la 0,1 mg. Se usuc
reduce cu grij pn la nivelul presiunii timp de nc 30 de minute n cuptorul cu
atmosferice. Se deschide cuptorul, vasul vid la 83 C i se cntrete din nou. Se
se acoper imediat cu capacul, se scoate repet procedura de nclzire i cntrire
vasul din cuptor i se las s se rceasc pn cnd masa vasului i a capacului
n desicator (3.4) timp de 30-45 minute scade cu 1 mg sau mai puin sau crete
i se cntrete cu o precizie de 1 mg, ntre dou cntriri succesive. Se
nregistrnd masa la 0,1 mg. Se usuc folosete pentru calcule cea mai mic
timp de nc 30 de minute n cuptorul cu mas nregistrat.
vid (3.3) la 83 C i se cntrete din
nou. Se repet procedura de nclzire i
cntrire pn cnd masa vasului i a
capacului scade cu 1 mg sau mai puin
sau crete ntre dou cntriri succesive.
Se folosete pentru calcule cea mai mic
mas nregistrat.

Anexa XIX (art. 15) Determinarea n zara praf acid, pct. 5. Calcularea Agriculturii i intrrii n vigoare
umiditii n zara praf acid, pct. 5. % Umiditate = (m1 m2) / (m1 m0) Industriei a actului naional
Calcularea 100 % Alimentare armonizat
unde:
m0 - masa vasului i a capacului;
% Umiditate = (m1 m2) / (m1 m0)
m1 - masa recipientului, a capacului i a
100 %
cantitii analizate nainte de uscare;
unde: m2 - masa recipientului, a capacului i a
m0 este masa vasului i a capacului; cantitii analizate dup uscare.
Rezultatele se nregistreaz cu o precizie
m1 este masa recipientului, a capacului i de 0,1 g/100 g.
a cantitii analizate nainte de uscare;
m2 este masa recipientului, a capacului i
a cantitii analizate dup uscare.
Rezultatele se nregistreaz cu o precizie
de 0,1 g/100 g.
Anexa nr. 19 Determinarea umiditii Parial Prevederile pct. 6.3. Ministerul Din momentul
Anexa XIX (art. 15) Determinarea n zara praf acid, pct. 6. Precizia compatibil din actul comunitar Agriculturii i intrrii n vigoare
umiditii n zara praf acid, pct. 6. 1) Limita de repetabilitate sunt prevederi UE Industriei a actului naional
Precizia Diferena absolut dintre rezultatele a neaplicabile Alimentare armonizat
6.1. Limita de repetabilitate
identic, n acelai laborator, de ctre
acelai operator, folosind aceeai
Diferena absolut dintre rezultatele a aparatur, ntr-un interval scurt de timp,
dou determinri separate, obinute prin va depi, n nu mai mult de 5 % din
aceeai metod cu material de analiz cazuri, 0,4 g de ap/100 g de zar praf.
identic, n acelai laborator, de ctre 2) Limita de reproductibilitate
acelai operator, folosind aceeai Diferena absolut dintre rezultatele a
aparatur, ntr-un interval scurt de timp, dou determinri separate, obinute prin
va depi, n nu mai mult de 5 % din aceeai metod cu material de analiz
cazuri, 0,4 g de ap/100 g de zar praf. identic, n laboratoare diferite, de ctre
6.2. Limita de reproductibilitate diferit, va depi, n nu mai mult de
5 % din cazuri, 0,6 g de ap/100 g de
Diferena absolut dintre rezultatele a zar praf acid.
diferit, va depi, n nu mai mult de
5 % din cazuri, 0,6 g de ap/100 g de
zar praf acid.
6.3. Sursa datelor de precizie

printr-un experiment realizat n 1995, n
cadrul cruia au participat opt
laboratoare i s-au folosit 12 probe (ase
duplicate prob martor).
Anexa nr. 20 Metoda de referin Compatibil - Ministerul Din momentul

Anexa XX (art. 16) Metoda de pentru determinarea puritii Agriculturii i intrrii n vigoare
referin pentru determinarea grsimilor din lapte prin analiza Industriei a actului naional
puritii grsimilor din lapte prin cromatografic n faz gazoas a Alimentare armonizat
trigliceridelor, pct. 1. Obiectul i
analiza cromatografic n faz domeniul de aplicare
gazoas a trigliceridelor, pct. 1. Prezentele Cerine descriu o metod de
Obiectul i domeniul de aplicare referin pentru determinarea puritii
grsimii din lapte utiliznd analiza
cromatografic n faz gazoas a
Prezentul standard descrie o metod de
trigliceridelor. Pot fi detectate att
referin pentru determinarea puritii grsimile vegetale, ct i cele animale,
grsimii din lapte utiliznd analiza cum ar fi seul de vit i untura.
cromatografic n faz gazoas a Cu ajutorul anumitor formule pentru
trigliceridelor. Pot fi detectate att trigliceride se poate determina
grsimile vegetale, ct i cele animale, integritatea grsimilor din lapte. n
cum ar fi seul de vit i untura. principiu, metoda descris se aplic
laptelui de vac n vrac sau produselor
derivate din acesta, indiferent de
Cu ajutorul anumitor formule pentru
condiiile de hrnire, reproducere sau
trigliceride se poate determina lactaie. Rezultatele fals pozitive pot s
integritatea grsimilor din lapte. n apar doar n cazul hrnirii excesive cu
principiu, metoda descris se aplic uleiuri vegetale pure, cum ar fi uleiul de
laptelui de vac n vrac sau produselor rapi. De asemenea, produsele de lapte
derivate din acesta, indiferent de obinute de la fiecare vac n parte pot
condiiile de hrnire, reproducere sau produce rezultate fals pozitive.
Metoda este aplicabil n special
lactaie. Rezultatele fals pozitive pot s grsimilor extrase din produsele de lapte
apar doar n cazul hrnirii excesive cu care ar trebui s conin grsimi pure din
uleiuri vegetale pure, cum ar fi uleiul de lapte a cror compoziie este
rapi. De asemenea, produsele de lapte nemodificat, cum ar fi untul, smntna,
obinute de la fiecare vac n parte pot laptele i laptele praf. Tratamentul
produce rezultate fals pozitive. tehnologic al grsimilor din lapte, cum
ar fi eliminarea colesterolului sau
fracionarea, poate produce rezultate fals
Metoda este aplicabil n special
pozitive. Acest lucru se aplic i n cazul
grsimilor extrase din produsele de lapte grsimii din lapte obinut din laptele
degresat sau zar. Metoda nu este
care ar trebui s conin grsimi pure din ntotdeauna aplicabil pentru grsimea
lapte a cror compoziie este extras din brnz, deoarece procesul de
nemodificat, cum ar fi untul, smntna, maturare poate afecta compoziia
grsimii att de mult nct se obin
laptele i laptele praf. Tratamentul
rezultate fals positive.
tehnologic al grsimilor din lapte, cum Nota 1: Acidul butiric (n-butanoic) (C )
4
ar fi eliminarea colesterolului sau apare exclusiv n grsimile din lapte i
fracionarea, poate produce rezultate fals permite realizarea estimrii cantitative a
pozitive. Acest lucru se aplic i n cazul cantitilor mici pn la cele medii de
grsimii din lapte obinut din laptele grsimi din lapte n grsimile vegetale i
degresat sau zar. Metoda nu este animale. Totui, datorit variaiilor mari
ale C4 n procente aproximative ale
ntotdeauna aplicabil pentru grsimea
intervalului fraciunii de mas de 3,1 %
extras din brnz, deoarece procesul de i 3,8 %, este dificil de furnizat
maturare poate afecta compoziia informaii calitative i cantitative
grsimii att de mult nct se obin referitoare la fraciunile de mas de pn
rezultate fals pozitive. la 20 % ale grsimilor strine din
grsimile pure din lapte.
Nota 1: Acidul butiric (n-butanoic) (C4) Nota 2: Practic, rezultatele cantitative nu
apare exclusiv n grsimile din lapte i pot fi obinute din coninutul de steroli al
grsimilor vegetale, deoarece acestea
permite realizarea estimrii cantitative a
depind de condiiile de producie i de
cantitilor mici pn la cele medii de prelucrare. Mai mult, determinarea
grsimi din lapte n grsimile vegetale i calitativ a grsimilor vegetale cu
animale. Totui, datorit variaiilor mari ajutorul sterolilor este ambigu.
ale C4 n procente aproximative ale
intervalului fraciunii de mas de 3,1 %
i 3,8 %, este dificil de furnizat
informaii calitative i cantitative
referitoare la fraciunile de mas de pn
la 20 % ale grsimilor strine din
grsimile pure din lapte [1].
Nota 2: Practic, rezultatele cantitative nu

pot fi obinute din coninutul de steroli al
grsimilor vegetale, deoarece acestea
depind de condiiile de producie i de
prelucrare. Mai mult, determinarea
calitativ a grsimilor vegetale cu
ajutorul sterolilor este ambigu.

trigliceridelor, pct. 2. Definiie
analiza cromatografic n faz
Puritatea grsimii din lapte: absena
gazoas a trigliceridelor, pct. 2. grsimilor vegetale sau animale
Definiie determinate cu ajutorul procedurii
specificate n prezentele Cerine.
Puritatea grsimii din lapte: absena Not: Puritatea este determinat cu
grsimilor vegetale sau animale ajutorul valorilor S care sunt obinute
determinate cu ajutorul procedurii din compoziia trigliceridelor.
specificate n prezentul standard. Fraciunile de mas ale trigliceridelor
sunt exprimate procentual.
Not: Puritatea este determinat cu
ajutorul valorilor S care sunt obinute din
compoziia trigliceridelor. Fraciunile de
mas ale trigliceridelor sunt exprimate
procentual.
Anexa nr. 20 Metoda de referin Parial Nota 1 nu este Ministerul Din momentul
Anexa XX (art. 16) Metoda de pentru determinarea puritii compatibil prevzut n actul Agriculturii i intrrii n vigoare
referin pentru determinarea grsimilor din lapte prin analiza naional. Aceasta este Industriei a actului naional
puritii grsimilor din lapte prin cromatografic n faz gazoas a prevedere UE Alimentare armonizat
trigliceridelor, pct. 3. Principiul neaplicabil.
metodei
gazoas a trigliceridelor, pct. 3. Grsimea extras din lapte sau produse
Principiul metodei de lapte este analizat prin gaz-
cromatografie cu ajutorul unei coloane
Grsimea extras din lapte sau produse umplute sau al unei coloane capilare
de lapte este analizat prin gaz- scurte n scopul determinrii
cromatografie cu ajutorul unei coloane trigliceridelor (TG) care sunt separate
umplute sau al unei coloane capilare prin numrul total de atomi de carbon.
Prin introducerea fraciunii de mas a
scurte n scopul determinrii
moleculelor de grsime de diferite
trigliceridelor (TG) care sunt separate dimensiuni (C24 pn la C54, utiliznd
prin numrul total de atomi de carbon. doar numere pare pentru atomii de C),
Prin introducerea fraciunii de mas a exprimat procentual, n formule
moleculelor de grsime de diferite adecvate pentru trigliceride, se pot
dimensiuni (C24 pn la C54, utiliznd calcula valorile S. Prezena grsimilor
doar numere pare pentru atomii de C), strine este detectat dac
valorile S depesc limitele stabilite
exprimat procentual, n formule
pentru grsimile pure din lapte.
adecvate pentru trigliceride, se pot Nota 1: Valoarea S este suma tuturor
calcula valorile S. Prezena grsimilor fraciunilor de mas a TG, nmulit cu
strine este detectat dac coeficienii respectivi definii.
valorile S depesc limitele stabilite
pentru grsimile pure din lapte.
Nota 1: Oportunitatea i echivalena att

pentru coloanele umplute, ct i pentru
coloanele capilare au fost demonstrate
anterio r[2-4].
Nota 2: Valoarea S este suma tuturor

fraciunilor de mas a TG, nmulit cu
coeficienii respectivi definii.

trigliceridelor, pct. 4. Reactivi
1) Gaz vector: azot sau, ca alternativ,
gazoas a trigliceridelor, pct. 4. heliu sau hidrogen, avnd toate o
Reactivi puritate de cel puin 99,995 %.
2) Grsimi standard pentru
Toi reactivii utilizai trebuie s fie de standardizarea unei grsimi standard
calitate analitic recunoscut. din lapte n conformitate cu punctul
4.1. Gaz vector: azot sau, ca alternativ, 7, subpunctul 3, litera c).
heliu sau hidrogen, avnd toate o a) Trigliceride etalon saturate; n
puritate de cel puin 99,995 %. comer sunt disponibile produse
adecvate.
4.2. Grsimi standard pentru b) Colesterol etalon.
standardizarea unei grsimi standard din 3) Metanol (CH3OH), fr ap.
lapte n conformitate cu clauza 7.7.3. 4) n-hexan (CH3(CH2)4CH3).
4.2.1. Trigliceride etalon saturate; n 5) n-heptan (CH3(CH2)5CH3).
comer sunt disponibile produse 6) Alte gaze: hidrogen, puritate de cel
adecvate. puin 99,995 %, fr impuriti
organice (CnHm < 1 l/l); aer sintetic,
4.2.2. Colesterol etalon. fr impuriti organice
4.3. Metanol (CH3OH), fr ap. (CnHm < 1 l/l).
7) Sulfat de sodiu anhidru (Na2SO4).
4.4. n-hexan (CH3(CH2)4CH3).
4.5. n-heptan (CH3(CH2)5CH3).
4.6. Alte gaze: hidrogen, puritate de cel
puin 99,995 %, fr impuriti organice
(CnHm < 1 l/l); aer sintetic, fr
impuriti organice (CnHm < 1 l/l).
4.7. Sulfat de sodiu anhidru (Na2SO4).

trigliceridelor, pct. 5. Aparatur
1) Gaz-cromatograf pentru temperatur
gazoas a trigliceridelor, pct. 5. nalt
Aparatur Gaz-cromatograful de temperatur nalt
trebuie s fie adecvat pentru temperaturi
Aparatur obinuit de laborator, n de cel puin 400 C i s fie prevzut cu
special urmtoarele: detector cu ionizare n flacr. Pereii
5.1. Gaz-cromatograf pentru despritori utilizai pentru injector
temperatur nalt trebuie s reziste la temperaturi nalte i
Gaz-cromatograful de temperatur nalt trebuie s prezinte un grad foarte sczut
trebuie s fie adecvat pentru temperaturi de curgere. Pentru gaz-cromatograful
de cel puin 400 C i s fie prevzut cu (GC) cu coloane capilare, se folosete un
detector cu ionizare n flacr injector pentru coloane. ntotdeauna se
(FID, flame ionization detector). Pereii utilizeaz garnituri de grafit pentru a
despritori utilizai pentru injector conecta att coloanele, ct i injectorul
trebuie s reziste la temperaturi nalte i i/sau racordurile detectorului (acolo
trebuie s prezinte un grad foarte sczut unde este cazul).
de curgere. Pentru gaz-cromatograful 2) Coloana de cromatografie
(GC) cu coloane capilare, se folosete un a) Coloan umplut
injector pentru coloane. ntotdeauna se Se utilizeaz o coloan de sticl cu
utilizeaz garnituri de grafit pentru a diametru intern de 2 mm i lungime de
conecta att coloanele, ct i injectorul 500 mm, umplut cu OV-1 3 % n faz
i/sau racordurile detectorului (acolo staionar la 125 m pn la 150 m
unde este cazul). (100 pn la 120 ochiuri de sit) Gas
5.2. Coloana de cromatografie ChromQ. Prepararea, silanizarea,
5.2.1. Coloan umplut umplerea i condiionarea coloanei
Se utilizeaz o coloan de sticl cu umplute sunt descrise n Instruciunea
diametru intern de 2 mm i lungime de nr.1.
500 mm, umplut cu OV-1 3 % n faz Ca o alternativ, se poate utiliza o
staionar la 125 m pn la 150 m coloan capilar.
(100 pn la 120 ochiuri de sit) Gas b) Coloan capilar
ChromQ ( 19 ). Prepararea, silanizarea, Se utilizeaz o coloan capilar scurt,
umplerea i condiionarea coloanei de exemplu, de lungime de 5 m cu o faz
umplute sunt descrise n anexa A. staionar nepolar care poate rezista la
temperaturi de 400 C sau peste.
Ca o alternativ, se poate utiliza o
Coloana se condiioneaz prin efectuarea
coloan capilar (5.2.2).
a 20 de analize pentru o soluie de
5.2.2. Coloan capilar
Se utilizeaz o coloan capilar scurt, grsime din lapte (punctul 8) n decurs
de exemplu, de lungime de 5 m cu o faz de 2 pn la 3 zile cu ajutorul indicaiilor
staionar nepolar care poate rezista la date la punctul 9, subpunctul 4, litera b) .
Apoi, coeficienii de rspuns (punctual
temperaturi de 400 C sau peste ( 20 ).
Coloana se condiioneaz prin efectuarea 9, subpunctul 3) se vor apropia de
valoarea 1, dar vor fi mai mici de 1,20.
a 20 de analize pentru o soluie de
Not: Se pot utiliza coloane cu
grsime din lapte (7.2) n decurs de 2
pn la 3 zile cu ajutorul indicaiilor date dimensiuni diferite i cu faze diferite
n seciunea 7.3.4.2. Apoi, coeficienii de nepolare, rezistente la temperaturi nalte,
att timp ct performana acestora
rspuns (7.3.3) se vor apropia de
valoarea 1, dar vor fi mai mici de 1,20. corespunde cu prezentele Cerine.
3) Coloan Extrelut cu capacitatea de
Not: Se pot utiliza coloane cu
dimensiuni diferite i cu faze diferite 1 ml pn la 3 ml cu gel de siliciu,
necesar extraciei grsimii din lapte
nepolare, rezistente la temperaturi nalte,
n conformitate cu punctul 7,
att timp ct performana acestora
corespunde cu prezentul standard. A se subpunctul 3.
vedea, de asemenea, 7.3.4.2. 4) Garnituri de grafit, rezistente la
5.3. Coloan Extrelut, avnd capacitatea temperaturi de cel puin 400 C, care
de 1 ml pn la 3 ml cu gel de siliciu, sunt folosite pentru a conecta att
necesar extraciei grsimii din lapte coloanele GC, ct i injectorul i/sau
doar n conformitate cu 7.1.3. racordurile detectorului.
5.4. Garnituri de grafit, rezistente la 5) Baie de ap, care s menin o
temperaturi de cel puin 400 C, care temperatur de 50 C 2 C.
sunt folosite pentru a conecta att 6) Cuptor care funcioneaz la
coloanele GC, ct i injectorul i/sau 50 C 2 C i 100 C 2 C.
racordurile detectorului. 7) Micropipet.
5.5. Baie de ap, care s menin o 8) Pipet gradat, avnd capacitatea de
temperatur de 50 C 2 C. 5 ml.
5.6. Cuptor care funcioneaz la 9) Balon cu fund rotund, avnd
50 C 2 C i 100 C 2 C. capacitatea de 50 ml.
5.7. Micropipet. 10) Balon Erlenmeyer, cu volum
5.8. Pipet gradat, avnd capacitatea de nominal de 250 ml.
5 ml. 11) Plnie.
5.9. Balon cu fund rotund, avnd 12) Filtru de hrtie cu pori fini.
capacitatea de 50 ml. 13) Evaporator rotativ.
5.10. Balon Erlenmeyer, cu volum 14) Fiole, cu volum nominal de 1 ml,
nominal de 250 ml. prevzute cu capac de aluminiu
5.11. Plnie. acoperit cu politetrafluoroetilen,
5.12. Filtru de hrtie cu pori fini. care se ataeaz sau se nurubeaz.
5.13. Evaporator rotativ. 15) Sering de injectare al crei piston
5.14. Fiole, cu volum nominal de 1 ml, nu trebuie s ajung la vrful acului
prevzute cu capac de aluminiu acoperit (GC cu coloan umplut).
cu politetrafluoroetilen, care se ataeaz Not: Cu aceste seringi se obine o
sau se nurubeaz. repetabilitate mai mare a rezultatelor.
5.15. Sering de injectare al crei piston 16) Balan analitic, cu care se pot
nu trebuie s ajung la vrful acului (GC cntri greuti pn la aproximativ
cu coloan umplut). 1 mg, cu capacitate de citire de
Not: Cu aceste seringi se obine o 0,1 mg.
repetabilitate mai mare a rezultatelor.
5.16. Balan analitic, cu care se pot
cntri greuti pn la aproximativ
1 mg, cu capacitate de citire de 0,1 mg.
Anexa nr. 20 Metoda de referin Parial Cuvntul Ministerul Din momentul

Anexa XX (art. 16) Metoda de pentru determinarea puritii compatibil semnificativ nu este Agriculturii i intrrii n vigoare
referin pentru determinarea grsimilor din lapte prin analiza transpus n actul Industriei a actului naional
puritii grsimilor din lapte prin cromatografic n faz gazoas a naional, deoarece Alimentare armonizat
trigliceridelor, pct. 6. Prelevarea creaz o situaie
probelor imprecis.
gazoas a trigliceridelor, pct. 6. O prob trebuie trimis la laborator. n Sintagma Prelevarea
Prelevarea probelor timpul transportului sau al depozitrii, probelor nu face parte
aceasta nu trebuie s fie deteriorat sau din metoda specificat
O prob semnificativ ar trebui trimis modificat. n prezentul standard
la laborator. n timpul transportului sau Prelevarea probelor se efectueaz internaional
al depozitrii nu ar trebui s fie conform SM SR EN ISO 707. considerm inutil,
deteriorat sau modificat. deoarece mai jos se
face referin la
Prelevarea probelor nu face parte din standardul necesar.
metoda specificat n prezentul standard Standardul ISO 707
internaional. n ISO 707 FIL 50 [5] este este substituit cu
prezentat o metod recomandat de standardul naional SM
prelevare a probelor. SR EN ISO 707.
Standardele FIL nu se
aplic pe teritoriul
Republicii Moldova.
Anexa nr. 20 Metoda de referin Parial Standardele ISO 2450 Ministerul Din momentul
Anexa XX (art. 16) Metoda de pentru determinarea puritii compatibil i ISO 7328 se Agriculturii i intrrii n vigoare
referin pentru determinarea grsimilor din lapte prin analiza substituie cu Industriei a actului naional
puritii grsimilor din lapte prin cromatografic n faz gazoas a standardele naionale Alimentare armonizat
trigliceridelor, pct. 7. Prepararea SM EN ISO
analiza cromatografic n faz probelor de analiz 2450:2014 i,
gazoas a trigliceridelor, pct. 7. Pentru prepararea probelor de analiz se respective SM EN ISO
Procedur folosete una dintre urmtoarele trei 7328.
metode de extracie a grsimii din lapte. Standardele FIL i
1) Izolarea din unt sau ulei de unt CRM nu se aplic pe
7.1. Prepararea probelor de analiz
Se topesc 50 g pn la 100 g din proba teritoriul Republicii
Pentru prepararea probelor de analiz se de analizat la 50 C, utiliznd o baie de Moldova.
folosete una dintre urmtoarele trei ap sau un cuptor. Se pun 0,5 pn la
metode de extracie a grsimii din lapte. 1,0 g de sulfat de sodiu ntr-un filtru de
7.1.1. Izolarea din unt sau ulei de unt hrtie pliat. Prenclzii un balon
Se topesc 50 g pn la 100 g din proba Erlenmeyer de 250 ml i o plnie cu
de analizat la 50 C, utiliznd o baie de filtrul de hrtie introdus n cuptorul
ap (5.5) sau un cuptor (5.6). Se pun 0,5 reglat la 50 C. Stratul de grsime din
pn la 1,0 g de sulfat de sodiu (4.7) proba topit se filtreaz, n timp ce
ntr-un filtru de hrtie pliat (5.12). balonul prenclzit, plnia i dispozitivul
Prenclzii un balon Erlenmeyer de de filtrare introdus se menin n cuptor.
250 ml (5.10) i o plnie (5.11) cu filtrul Trebuie acordat atenia
de hrtie introdus n cuptorul (5.6) reglat corespunztoare, astfel nct serul s nu
la 50 C. Stratul de grsime din proba fie transferat.
topit se filtreaz, n timp ce balonul Poate fi folosit o cantitate mai mic din
prenclzit, plnia i dispozitivul de proba analizat doar n cazurile n care
filtrare introdus se menin n cuptor. este disponibil o cantitate limitat de
Trebuie acordat atenia prob, iar procedura trebuie adaptat n
corespunztoare, astfel nct serul s nu consecin. Cu toate acestea,
fie transferat. manipularea unei cantiti mai mici de
prob implic un risc mai mare de
Poate fi folosit o cantitate mai mic din obinere a unei mostre nereprezentative.
proba analizat doar n cazurile n care Nota 1: Untul poate fi obinut din
este disponibil o cantitate limitat de smntn prin agitarea i splarea
prob, iar procedura trebuie adaptat n temeinic a granulelor de unt rezultate.
consecin. Cu toate acestea, Nota 2: Grsimea din lapte obinut prin
manipularea unei cantiti mai mici de utilizarea procedurii descrise n
prezentul punct nu va conine aproape
prob implic un risc mai mare de
deloc fosfolipide.
obinere a unei mostre nereprezentative.
2) Extracia conform metodei
Nota 1: Untul poate fi obinut din
gravimetrice Rse-Gottlieb
smntn prin agitarea i splarea
Fraciunea grsimilor se extrage din
temeinic a granulelor de unt rezultate.
proba de analiz prin utilizarea metodei
Nota 2: Grsimea din lapte obinut prin
gravimetrice descris n unul dintre
utilizarea procedurii descrise la 7.1.1 nu
standardele ISO 1211, SM EN ISO
va conine aproape deloc fosfolipide.
2450:2014 sau SM EN ISO 7328.
7.1.2. Extracia conform metodei
Not: Dac n grsimea din lapte sunt
gravimetrice Rse-Gottlieb
prezente fosfolipide, se va obine un vrf
Fraciunea grsimilor se extrage din de colesterol cu aproape 0,1 % mai
proba de analiz prin utilizarea metodei mare. Influena asupra compoziiei TG
gravimetrice descris n unul dintre standardizate la 100 %, inclusiv
standardele ISO 1211 FIL 001D, colesterolul, este deci neglijabil
ISO 2450FIL 016C sau 3) Extracia din lapte utiliznd coloane
ISO 7328FIL 116A. cu silicagel
Not: Dac n grsimea din lapte sunt Se adaug cu ajutorul
prezente fosfolipide, se va obine un vrf micropipetei 0,7 ml din proba de analiz
de colesterol cu aproape 0,1 % mai la o temperatur de 20 C ntr-o coloan
mare. Influena asupra compoziiei TG Extrelut de 1 ml pn la 3ml. Se las s
standardizate la 100 %, inclusiv se distribuie uniform pe silicagel timp de
colesterolul, este deci neglijabil. aproximativ 5 min.
7.1.3. Extracia din lapte utiliznd Pentru denaturarea complexelor protein-
coloane cu silicagel lipidice, se adaug n coloana Extrelut
Se adaug cu ajutorul micropipetei 1,5 ml de metanol, cu ajutorul pipetei
(5.7) 0,7 ml din proba de analiz la o gradate. n consecin, fraciunea
temperatur de 20 C ntr-o coloan grsimilor se extrage din proba de
Extrelut (5.3) de 1 ml pn la 3ml. Se analiz cu 20 ml de n-hexan. n-Hexanul
las s se distribuie uniform pe silicagel se adaug treptat n cantiti mici.
timp de aproximativ 5 min. Solventul drenat se colecteaz ntr-un
Pentru denaturarea complexelor protein- balon cu fund rotund de 50 ml, care a
lipidice, se adaug n coloana Extrelut fost uscat n prealabil, pn la obinerea
1,5 ml de metanol (4.3), cu ajutorul unei mase constante cunoscute, cntrit
pipetei gradate. n consecin, fraciunea cu o precizie de 1 mg, nregistrnd masa
grsimilor se extrage din proba de la 0,1 mg.
analiz cu 20 ml de n-hexan (4.4). n- Dup extracie, coloana se las s se
Hexanul se adaug treptat n cantiti scurg pn la golire. Solvenii din
mici. Solventul drenat se colecteaz ntr- eluant se distileaz ntr-un evaporator
un balon cu fund rotund de 50 ml (5.9), rotativ cu baia de ap reglat la o
care a fost uscat n prealabil, pn la temperatur ntre 40 C i 50 C. Dup
obinerea unei mase constante distilarea solvenilor, se usuc i se
cunoscute, cntrit cu o precizie de cntrete n continuare balonul cu fund
1 mg, nregistrnd masa la 0,1 mg. rotund i coninutul acestuia cu o
precizie de 1 mg nregistrnd masa la
Dup extracie, coloana se las s se
0,1 mg. Se determin masa grsimii
scurg pn la golire. Solvenii din
rezultat prin scderea din masa obinut
eluant se distileaz ntr-un evaporator
rotativ (5.13) cu baia de ap reglat la o a masei balonului uscat cu fund rotund.
temperatur ntre 40 C i 50 C. Dup Not: Extracia grsimilor prin metodele
Gerber, Weibull-Berntrop sau Schmid-
distilarea solvenilor, se usuc i se
cntrete n continuare balonul cu fund Bonzynski-Ratzlaff sau izolarea
grsimilor din lapte cu ajutorul
rotund i coninutul acestuia cu o
detergenilor (metoda BDI) nu sunt
precizie de 1 mg nregistrnd masa la
adecvate pentru analiza TG, deoarece
0,1 mg. Se determin masa grsimii
rezultat prin scderea din masa obinut cantiti semnificative de gliceride
a masei balonului uscat cu fund rotund. pariale sau de fosfolipide pot trece n
Not: Extracia grsimilor prin metodele faz gras. n consecin, aplicarea
Gerber, Weibull-Berntrop sau Schmid- prezentelor Cerine este limitat la
anumite produse, n particular la brnz.
Bonzynski-Ratzlaff sau izolarea
Pct. 8. Prepararea soluiei de prob
grsimilor din lapte cu ajutorul
Pentru gaz-cromatografia cu coloan
detergenilor (metoda BDI) nu sunt
umplut, se prepar o soluie de grsime
adecvate pentru analiza TG, deoarece
(punctul 7) de 5 % (frace de volum)
cantiti semnificative de gliceride
pariale sau de fosfolipide pot trece n n n-hexan sau n-heptan. n funcie de
dimensiunile coloanei, se folosete o
faz gras. n consecin, aplicarea
prezentului standard internaional este concentraie de 1 % (0,53 mm, tub
limitat la anumite produse, n particular deschis de diametru mare) sau mai mic
la brnz. n cazul injectrii coloanei cu o coloan
7.2. Prepararea soluiei de prob capilar.
Pentru gaz-cromatografia cu coloan n funcie de coloana utilizat i de masa
umplut, se prepar o soluie de grsime grsimilor obinute la punctul 7,
(obinut conform 7.1) de 5 % (fracie de subpunctul 3, se determin cantitatea de
volum) n n-hexan (4.4) sau n-heptan solvent care trebuie adugat la proba de
(4.5). n funcie de dimensiunile analiz din balon pe baza cntririi cu o
coloanei, se folosete o concentraie de precizie de 1 mg i a nregistrrii masei
1 % (0,53 mm, tub deschis de diametru la 0,1 mg. Cantitatea rmas se dizolv
mare) sau mai mic n cazul injectrii complet.
coloanei cu o coloan capilar. Se transfer aproximativ 1 ml din soluia
n funcie de coloana utilizat i de masa de prob ntr-o fiol.
grsimilor obinute la 7.1.3, se determin Pct. 9. Determinarea cromatografic a
cantitatea de solvent (4.4 sau 4.5) care trigliceridelor
trebuie adugat la proba de analiz din 1) Deviaia liniei de baz
balon pe baza cntririi cu o precizie de Pentru a reduce creterea liniei de baz,
1 mg i a nregistrrii masei la 0,1 mg. coloana trebuie condiionat dup cum
Cantitatea rmas se dizolv complet. este specificat la punctul 5, subpunctul
2, litera b) (coloana capilar) sau n
Se transfer aproximativ 1 ml din soluia Instruciunea nr. 1 (coloana umplut).
de prob ntr-o fiol (5.14). Not: Din cauza temperaturii nalte a
7.3. Determinarea cromatografic a coloanei, analiza TG este n mod
trigliceridelor particular sensibil la creteri ale liniei
7.3.1. Deviaia liniei de baz de baz pentru valorile mari ale
Pentru a reduce creterea liniei de baz, numrului de atomi de carbon.
coloana trebuie condiionat dup cum 2) Tehnica injectrii
este specificat la punctul 5.2.2 (coloana a) Coloana umplut
capilar) sau n anexa A.4 (coloana Pentru evitarea efectelor de discriminare,
umplut). se aplic tehnica injectrii fierbini n
Not: Din cauza temperaturii nalte a scopul mbuntirii cuantificrii
coloanei, analiza TG este n mod componentelor trigliceridice cu punct
particular sensibil la creteri ale liniei nalt de fierbere. Se umple acul cu aer
de baz pentru valorile mari ale prin tragerea soluiei grase n sering.
numrului de atomi de carbon. Acul se introduce n injector. naintea
7.3.2. Tehnica injectrii injectrii, acul se nclzete timp de
7.3.2.1. Coloana umplut aproximativ 3 s. Apoi, coninutul seringii
Pentru evitarea efectelor de discriminare, se injecteaz rapid.
b) Coloan capilar
se aplic tehnica injectrii fierbini n
Cnd se folosete injectarea la rece n
scopul mbuntirii cuantificrii
coloan, se introduce acul seringii i se
componentelor trigliceridice cu punct
nalt de fierbere. Se umple acul cu aer injecteaz imediat. Timpul de retenie al
prin tragerea soluiei grase n sering. acului n orificiul de injectare trebuie s
Acul se introduce n injector. naintea fie n aa fel nct s se poat evita
curbele ample ale vrfului solventului.
injectrii, acul se nclzete timp de
aproximativ 3 s. Apoi, coninutul seringii Not: n mod normal, timpul optim de
retenie este de aproximativ 3 s.
se injecteaz rapid.
3) Calibrare
7.3.2.2. Coloan umplut
a) Generaliti
Cnd se folosete injectarea la rece n Pentru calibrarea probelor analizate se
coloan (7.3.4.2), se introduce acul realizeaz dou pn la trei analize ale
seringii i se injecteaz imediat. Timpul grsimilor standardizate din lapte la
de retenie al acului n orificiul de nceputul fiecrei zile. Se folosete
injectare trebuie s fie n aa fel nct s ultima analiz a grsimilor standardizate
se poat evita curbele ample ale vrfului din lapte pentru determinarea
solventului. coeficienilor de rspuns (fraciunea de
Not: n mod normal, timpul optim de mas/fraciunea de arie) ai TG i ai
retenie este de aproximativ 3 s. colesterolului care se aplic urmtoarelor
7.3.3. Calibrare probe de analiz (punctul 11, subpunctul
7.3.3.1. Generaliti 1):
Pentru calibrarea probelor analizate se w x A Si
R F Si = Si
realizeaz dou pn la trei analize ale w Si x A Si (1)
grsimilor standardizate din lapte la
nceputul fiecrei zile. Se folosete unde:
ultima analiz a grsimilor standardizate w si - fraciunea de mas, exprimat
din lapte pentru determinarea procentual, pentru fiecare dintre TG sau
pentru colesterolul din grsimea
coeficienilor de rspuns (fraciunea de
standardizat din lapte;
mas/fraciunea de arie) ai TG i ai
A si - valoarea numeric a ariei de vrf
colesterolului care se aplic
pentru fiecare TG sau pentru colesterolul
urmtoarelor probe de analiz (a se
din grsimea standardizat din lapte.
vedea 9.1):
Se utilizeaz fie litera b), fie litera c) din
prezentul subpunct pentru a obine
(1) grsimi standardizate din lapte care au o
compoziie cunoscut de TG.
unde: b) Grsimi comerciale standard din
w si este fraciunea de mas, exprimat lapte
procentual, pentru fiecare dintre TG sau Cea mai bun metod de determinare a
pentru colesterolul din grsimea coeficientului de rspuns pentru fiecare
standardizat din lapte; compus al probei de analiz o reprezint
utilizarea grsimilor standardizate din
A si este valoarea numeric a ariei de lapte care au o compoziie de TG
vrf pentru fiecare TG sau pentru certificat.
colesterolul din grsimea standardizat c) Grsimi standard din lapte obinute
din lapte. n laborator
Se prepar aproximativ 1 g din
amestecul de grsimi standard (punctul
Se utilizeaz fie punctul 7.3.3.2, fie 4, subpunctul 2, care conine cel puin
punctul 7.3.3.3 pentru a obine grsimi trigliceridele saturate C24, C30, C36, C42,
standardizate din lapte care au o C48 i C54, precum i colesterol; n plus,
compoziie cunoscut de TG. de preferin, C50 i C52) prin cntrire cu
7.3.3.2. Grsimi comerciale standard o precizie de 1 mg, nregistrnd masa la
din lapte 0,1 mg, pentru a obine o compoziie
relativ a TG asemntoare cu grsimile
Cea mai bun metod de determinare a
din lapte.
coeficientului de rspuns pentru fiecare
Se analizeaz n mod repetat o soluie de
compus al probei de analiz o reprezint
amestec de grsimi standard n n-hexan
utilizarea grsimilor standardizate din
sau n-heptan, conform subpunctului 4
lapte care au o compoziie de TG
din prezentul punct. Pstrnd aceeai
certificat.
Not: Un standard adecvat este desfurare secvenional, se analizeaz
CRM 519 (grsime anhidr din lapte), repetat compoziia aproximativ a
care se poate obine de la Institutul grsimilor din lapte.
pentru Materiale de Referin i Din amestecul de grsimi standard, se
21
Msurtori (IRMM), Geel, Belgia ( ). determin coeficienii de rspuns ai TG.
7.3.3.3. Grsimi standard din lapte Coeficienii de rspuns parial ai TG,
obinute n laborator care nu exist n amestec, se pot calcula
Se prepar aproximativ 1 g din prin interpolare matematic. Coeficienii
amestecul de grsimi standard (a se de rspuns obinui se aplic grsimilor
vedea punctul 4.2, care conine cel puin din lapte pentru a obine o compoziie
trigliceridele saturate C24, C30, C36, C42, standardizat. Grsimile standardizate
C48 i C54, precum i colesterol; n plus, din lapte, astfel obinute, au un termen
de preferin, C50 i C52) prin cntrire cu de valabilitate de mai muli ani, n
o precizie de 1 mg, nregistrnd masa la condiii de depozitare cu azot i la o
0,1 mg, pentru a obine o compoziie temperatur maxim de 18 C.
relativ a TG asemntoare cu grsimile 4) Condiii de cromatografie
din lapte. Not: Utilizarea coloanelor umplute sau
Se analizeaz n mod repetat o soluie de a coloanelor capilare are ca rezultat o
amestec de grsimi standard n n-hexan rezoluie asemntoare cu figura 1.
(4.4) sau n-heptan (4.5), conform Descompunerea trigliceridelor cu numr
punctului 7.3.4. Pstrnd aceeai par de atomi de C nu se observ n mod
desfurare secvenional, se analizeaz obinuit i trebuie evitat.
repetat compoziia aproximativ a a) Coloana umplut
grsimilor din lapte. Programul de temperatur - temperatura
Din amestecul de grsimi standard, se iniial a cuptorului se fixeaz la 210 C.
determin coeficienii de rspuns ai TG. Aceast temperatur se menine timp de
1 min. Apoi temperatura se mrete cu
Coeficienii de rspuns parial ai TG,
care nu exist n amestec, se pot calcula 6 C/min. pn ajunge la 350 C.
prin interpolare matematic. Coeficienii Aceast temperatur (final) se menine
de rspuns obinui se aplic grsimilor timp de 5 min.
din lapte pentru a obine o compoziie Temperaturile pentru detector i injector
standardizat. Grsimile standardizate - ambele temperaturi se fixeaz la
din lapte, astfel obinute, au un termen 370 C.
Gazul vector - se utilizeaz azotul cu un
de valabilitate de mai muli ani, n
debit constant de aproximativ
condiii de depozitare cu azot i la o
40 ml/min. Debitul exact al gazului
temperatur maxim de 18 C.
vector se ajusteaz, astfel nct C54 este
7.3.4. Condiii de cromatografie
Not: n general, utilizarea coloanelor eluat la o temperatur de 341 C.
umplute sau a coloanelor capilare are ca Durata analizei - 29,3 min.
Volumul injectat - se injecteaz 0,5 l
rezultat o rezoluie asemntoare cu
figura 1. Descompunerea trigliceridelor din soluia de prob de 5 % (fraciune de
volum).
cu numr par de atomi de C nu se
Dac nu se desfoar nici o analiz a
observ n mod obinuit i trebuie
TG, se menine temperatura iniial a
evitat.
cuptorului, se menin temperaturile
7.3.4.1. Coloana umplut
detectorului i injectorului i se menine
(a) Programul de temperatur:
rata de flux a gazului vector la un nivel
temperatura iniial a cuptorului se
fixeaz la 210 C. Aceast temperatur constant, de asemenea i n timpul
nopii, n weekend sau n timpul
se menine timp de 1 min. Apoi
concediilor. Acest lucru asigur
temperatura se mrete cu 6 C/min.
performana optim a coloanei.
pn ajunge la 350 C. Aceast
b) Coloan capilar
temperatur (final) se menine timp de
Programul de temperatur - temperatura
5 min.
iniial a cuptorului se fixeaz la 80 C.
(b) Temperaturile pentru detector i
injector: ambele temperaturi se fixeaz Aceast temperatur se menine timp de
0,5 min. Apoi temperatura se mrete cu
la 370 C.
(c) Gazul vector: se utilizeaz azotul cu 50 C/min. pn la 190 C i, apoi, cu
6 C/min. pn la 350 C. Aceast
un debit constant de aproximativ
temperatur (final) se menine timp de
40 ml/min. Debitul exact al gazului
vector se ajusteaz, astfel nct C54 este 5 min.
Temperatura detectorului - se fixeaz la
eluat la o temperatur de 341 C.
370 C.
(d) Durata analizei: 29,3 min.
(e) Volumul injectat: se injecteaz 0,5 l Gazul vector - se utilizeaz azotul la un
din soluia de prob de 5 % (fraciune de debit constant de aproximativ 3 ml/min.
Durata analizei - 34,4 min.
volum).
Volumul injectat - se injecteaz 0,5 l
din soluia de prob de 1 % (fraciune
Dac nu se desfoar nicio analiz a
de volum).
TG, se menine temperatura iniial a
Aceste setri se menin i n timpul
cuptorului stabilit la litera (a), se
perioadei de standby, pentru a se asigura
menin temperaturile detectorului i
performane optime (litera a) din
injectorului stabilite la litera (b) i se
prezentul subpunct).
menine rata de flux a gazului vector
stabilit la litera (c) la un nivel constant, Setrile analitice prezentate la prezentul
subpunct sunt adecvate pentru utilizarea
de asemenea i n timpul nopii, n
weekend sau n timpul concediilor. Acest unei coloane cu diametru interior larg
(0,53 mm ID). Dac se utilizeaz o
lucru asigur performana optim a
coloan cu alte dimensiuni sau alt faz,
coloanei.
trebuie aplicate condiii diferite.
7.3.4.2. Coloan capilar
(a) Programul de temperatur:
temperatura iniial a cuptorului se
fixeaz la 80 C. Aceast temperatur se
menine timp de 0,5 min. Apoi
temperatura se mrete cu 50 C/min.
pn la 190 C i, apoi, cu 6 C/min.
pn la 350 C. Aceast temperatur
(final) se menine timp de 5 min.
(b) Temperatura detectorului: se fixeaz
la 370 C.
(c) Gazul vector: se utilizeaz azotul la
un debit constant de aproximativ
3 ml/min.
(d) Durata analizei: 34,4 min.
(e) Volumul injectat: se injecteaz 0,5 l
din soluia de prob de 1 % (fraciune de
volum).
Aceste setri se menin i n timpul
perioadei de standby, pentru a se asigura
performane optime (a se vedea punctul
7.3.4.1).
Setrile analitice prezentate la punctul
7.3.4.2 sunt adecvate pentru utilizarea
unei coloane cu diametru interior larg
(0,53 mm ID) astfel cum se menioneaz
la punctul 5.2.2. Dac se utilizeaz o
coloan cu alte dimensiuni sau alt faz,
trebuie aplicate condiii diferite.
trigliceridelor, pct. 10. Integrarea,
evaluarea i controlul performanei
gazoas a trigliceridelor, pct. 8. analitice
Integrarea, evaluarea i controlul Se evalueaz vrfurile de pe
performanei analitice cromatogram cu un sistem de integrare
cu care se poate trasa o linie de baz i
Se evalueaz vrfurile de pe cu care se poate realiza o reintegrare. n
cromatogram cu un sistem de integrare figura 1 este prezentat o cromatogram
cu care se poate trasa o linie de baz i integrat corect, n timp ce n figura 2
cu care se poate realiza o reintegrare. n este prezentat o eroare sporadic la
figura 1 este prezentat o cromatogram sfritul liniei de baz dup C54 care
integrat corect, n timp ce n figura 2 influeneaz procentajul tuturor
este prezentat o eroare sporadic la trigliceridelor. Vrfurile eluate dup
sfritul liniei de baz dup C54 care C54 se exclud din evaluare. Trigliceridele
influeneaz procentajul tuturor cu numr acil-C impar (2n + 1) se
trigliceridelor. n orice caz, vrfurile combin cu trigliceridele anterioare cu
eluate dup C54 se exclud din evaluare. numr par (2n). Nu se iau n considerare
coninutul mic de C56. Aria procentelor
Trigliceridele cu numr acil-C impar trigliceridelor rmase, inclusiv
(2n + 1) se combin cu trigliceridele colesterolul, se nmulete cu coeficienii
de rspuns corespunztori ai grsimii
anterioare cu numr par (2n). Nu se iau standard din lapte (de la ultima
n considerare coninutul mic de C56. calibrare) i se normalizeaz global la
Aria procentelor trigliceridelor rmase, 100 conform punctului 11, subpunctul
inclusiv colesterolul, se nmulete cu 1).
coeficienii de rspuns corespunztori ai Figura 1. Exemplu de cromatogram
grsimii standard din lapte (de la ultima trigliceridic a grsimii din lapte, cu
calibrare) i se normalizeaz global la linia de baz trasat correct
100 conform punctului 9.1.
Figura 1 Exemplu de cromatogram

trigliceridic a grsimii din lapte, cu
linia de baz trasat corect
Figura 2. Exemplu de cromatogram
linia de baz trasat incorect
Figura 2 Exemplu de cromatogram

Pentru controlarea condiiilor de
linia de baz trasat incorect
msurare, se compar coeficienii de
variaie, CV, exprimai procentual pentru
diferite trigliceride prezentate n
tabelul 1 i care se bazeaz pe 19 analize
consecutive pentru aceeai prob de
grsime din lapte.
Dac valorile CV sunt semnificativ
mai mari dect valorile date n tabelul 1,
Pentru controlarea condiiilor de condiiile de cromatografie nu sunt
adecvate.
Tabelul 1. Coeficienii de variaie pentru
msurare, se compar coeficienii de coninutul de trigliceride (19 analize
variaie, CV, exprimai procentual pentru consecutive)
diferite trigliceride prezentate n Triglicerid CV %
tabelul 1 i care se bazeaz pe 19 analize C24 10,00
consecutive pentru aceeai prob de C26 2,69
grsime din lapte. C28 3,03
C30 1,76
Dac valorile CV sunt semnificativ mai C32 1,03
mari dect valorile date n tabelul 1, C34 0,79
condiiile de cromatografie nu sunt C36 0,25
adecvate. C38 0,42
C40 0,20
Not: Valorile prezentate n tabelul 1 nu C42 0,26
sunt obligatorii, dar sunt orientative C44 0,34
pentru controlul calitii. C46 0,37
C48 0,53
Cu toate acestea, n cazul n care se
C50 0,38
accept valori mai mari ale CV, trebuie
C 0,54
s se respecte limitele de repetabilitate i 52
C54 0,60
de reproductibilitate din clauza 10.
Not: Valorile prezentate n tabelul 1
Tabelul 1 Coeficienii de variaie nu sunt obligatorii, dar sunt orientative
pentru coninutul de trigliceride (19 pentru controlul calitii.
analize consecutive) Cu toate acestea, n cazul n care se
accept valori mai mari ale CV, trebuie
Triglicerid CV % s se respecte limitele de repetabilitate i
C24 10,00 de reproductibilitate din clauza 12.
C26 2,69
C28 3,03
C30 1,76
C32 1,03
C34 0,79
C36 0,25
C38 0,42
C40 0,20
C42 0,26
C44 0,34
C46 0,37
C48 0,53
C50 0,38
C52 0,54
C54 0,60
trigliceridelor, pct. 11. Calcularea i
exprimarea rezultatelor
gazoas a trigliceridelor, pct. 9. 1) Compoziia de trigliceride
Calcularea i exprimarea rezultatelor a) Calcularea
Se calculeaz fraciunea de mas pentru
9.1. Compoziia de trigliceride fiecare TG (pentru i = C24, C26, C28, C30,
9.1.1. Calcularea C32, C34, C36, C38, C40, C42, C44, C46, C48,
Se calculeaz fraciunea de mas pentru C50, C52, i C54) i pentru colesterol, wi ,
fiecare TG (pentru i = C24, C26, C28, C30, exprimat ca procent, din coninutul total
C32, C34, C36, C38, C40, C42, C44, C46, C48, de TG al probei de analiz prin utilizarea
C50, C52, i C54) i pentru colesterol, wi , formulei urmtoare:
exprimat ca procent, din coninutul total A
de TG al probei de analiz prin utilizarea
formulei urmtoare: 1 x RF Si
(2)

A xRF
w 1= 1 Si
(2)
unde: unde:
Ai este valoarea numeric a ariei vrfului Ai - valoarea numeric a ariei vrfului
pentru fiecare dintre TG din proba de
pentru fiecare dintre TG din proba de
analiz;
analiz;
RF si - coeficientul de rspuns pentru
RF si este coeficientul de rspuns pentru fiecare TG determinat prin calibrare
fiecare TG determinat prin calibrare (punctul 9, subpunctul 3).
(7.3.3). b) Exprimarea rezultatelor analizei
9.1.2. Exprimarea rezultatelor analizei Rezultatele se exprim cu dou
Rezultatele se exprim cu dou zecimale.
zecimale. 2) Valorile S
9.2. Valorile S a) Calcularea
Valorile S, exprimate procentual, se
9.2.1. Calcularea calculeaz prin
9.2.1.1. Valorile S, exprimate procentual, introducerea wi (subpunctul 1, litera a)
se calculeaz prin introducerea wi (9.1.1) din prezentul punct) calculat pentru
calculat pentru procentul adecvat de TG procentul adecvat de TG n formulele de
n formulele de la (3) la (7). Se folosesc la (3) la (7). Se folosesc toate formulele,
toate formulele, indiferent de tipul indiferent de tipul suspectat de grsime
suspectat de grsime strin. strin.
Ulei de soia, de floarea-soarelui, de
9.2.1.2. Ulei de soia, de floarea-soarelui, msline, de rapi, de in, de germeni de
de msline, de rapi, de in, de germeni ru, de germeni de porumb, din semine
de ru, de germeni de porumb, din de bumbac i de pete
semine de bumbac i de pete S = 2,098 3 w C30 + 0,728 8 w C34 +
S = 2,098 3 w C30 + 0,728 8 w C34 + 0,692 7 w C36 + 0,635 3 w C38 + 3,745
0,692 7 w C36 + 0,635 3 w C38 + 3,745 2 2 w C40 1,292 9 w C42 + 1,354 4
w C40 1,292 9 w C42 + 1,354 4 w C44 + 1,701 3 w C46 + 2,528 3 w C50
w C44 + 1,701 3 w C46 + 2,528 3 (3)
w C50(3) Grsime de palmier i grsime din
smburi de palmier
9.2.1.3. Grsime de palmier i grsime
S = 3,745 3 w C32 + 1,113 4 w C36 +
din smburi de palmier
1,364 8 w C38 + 2,154 4 w C42 + 0,427
S = 3,745 3 w C32 + 1,113 4 w C36 + 3 w C44 + 0,580 9 w C46 + 1,292 6
1,364 8 w C38 + 2,154 4 w C42 + 0,427 3 w C48 + 1,030 6 w C50 + 0,995 3
wC52 + 1,239 6 w C54 (4)
w C44 + 0,580 9 w C46 + 1,292 6
w C48 + 1,030 6 w C50 + 0,995 3 wC52 + Ulei de palmier i seu de vit
S = 3,664 4 w C28 + 5,229 7 w C30
1,239 6 w C54 (4)
12,507 3 w C32 + 4,428 5 w C34 0,201
9.2.1.4. Ulei de palmier i seu de vit 0 w C36 + 1,279 1 w C38 + 6,743 3
S = 3,664 4 w C28 + 5,229 7 w C30 w C40 4,271 4 w C42 + 6,373 9
12,507 3 w C32 + 4,428 5 w C34 0,201 wC46 (5)
0 w C36 + 1,279 1 w C38 + 6,743 3 Untur
w C40 4,271 4 w C42 + 6,373 9 S = 6,512 5 w C26 + 1,205 2 w C32 +
wC46 (5) 1,733 6 w C34 + 1,755 7 w C36 + 2,232
5 w C42 + 2,800 6 w C46 + 2,543 2
9.2.1.5. Untur w C52 + 0,989 2 w C54 (6)
S = 6,512 5 w C26 + 1,205 2 w C32 + Total
1,733 6 w C34 + 1,755 7 w C36 + 2,232 5 S = 2,757 5 w C26 + 6,407 7 w C28 +
w C42 + 2,800 6 w C46 + 2,543 2 5,543 7 w C30 15,324 7 w C32 + 6,260
w C52 + 0,989 2 w C54 (6) 0 w C34 + 8,010 8 w C40 5,033 6
w C42 + 0,635 6 w C44 + 6,017 1
9.2.1.6. Total wC46 (7)
S = 2,757 5 w C26 + 6,407 7 w C28 + b) Exprimarea rezultatelor analizei
5,543 7 w C30 15,324 7 w C32 + 6,260 Rezultatele se exprim cu dou
0 w C34 + 8,010 8 w C40 5,033 6 zecimale.
w C42 + 0,635 6 w C44 + 6,017 1 3) Detectarea grsimilor strine
wC46 (7) Se compar cele 5 valori S obinute la
9.2.2. Exprimarea rezultatelor analizei subpunctul 2, litera a) din prezentul
punct cu limitele S corespunztoare
Rezultatele se exprim cu dou
prezentate n tabelul 2.
zecimale.
Tabelul 2. Limitele S pentru grsimile
9.3. Detectarea grsimilor strine
pure din lapte
Se compar cele 5 valori S obinute la
Grsimea strin For- Limi-
punctul 9.2.1 cu
limitele S corespunztoare prezentate n mu- tele
tabelul 2. l S (1)
Proba de analiz se consider grsime
pur din lapte dac toate cele 5 Ulei de soia, de (3) 98,05
valori S sunt cuprinse ntre limitele floarea-soarelui, de 101,95
menionate n tabelul 2. Cu toate acestea, msline, de rapi,
dac o valoare Seste n afara limitelor
de in, de germeni de
corespunztoare, se consider c proba
conine grsime strin. ru, de germeni de
porumb, din semine
Cu toate c fiecare formul de la (3) la
de bumbac i de
(6) este mai sensibil pentru anumite
grsimi strine dect formula total (7) pete
(a se vedea tabelul B1), un rezultat Grsime de palmier (4) 99,42
pozitiv obinut doar cu o singur formul i grsime din 100,58
de la (3) la (6) nu permite tragerea unor smburi de palmier
concluzii cu privire la tipul de grsime Ulei de palmier i (5) 95,90
strin. seu de vit 104,10
Anexa B prezint o modalitate de calcul Untur (6) 97,96
al coninutului de grsime vegetal sau 102,04
animal n grsimea impur din lapte. Total (7) 95,68
Acest procedeu nu este validat, fiind 104,32
doar orientativ. (1) Calculat pentru un nivel de
ncredere de 99 %, astfel nct adugarea
Tabelul 2 Limitele S pentru grsimile de grsimi strine este indicat doar dac
pure din lapte limitele de detectare ale formulei
respective sunt depite (tabelul 1).
Grsimea strin For- Limite- Proba de analiz se consider grsime
mul le S (1) pur din lapte dac toate cele 5
Ulei de soia, de (3) 98,05 valori S sunt cuprinse ntre limitele
floarea-soarelui, de 101,95 menionate n tabelul 2. Cu toate acestea,
msline, de rapi, de dac o valoare S este n afara limitelor
in, de germeni de ru, corespunztoare, se consider c proba
de germeni de conine grsime strin.
porumb, din semine
Cu toate c fiecare formul de la (3) la
de bumbac i de pete
(6) este mai sensibil pentru anumite
Grsime de palmier i (4) 99,42
grsime din smburi 100,58 grsimi strine dect formula total (7)
de palmier (tabelul 1), un rezultat pozitiv obinut
Ulei de palmier i seu (5) 95,90 doar cu o singur formul de la (3) la (6)
de vit 104,10 nu permite tragerea unor concluzii cu
Untur (6) 97,96 privire la tipul de grsime strin.
102,04 Instruciunea nr. 2 prezint o modalitate
Total (7) 95,68
de calcul al coninutului de grsime
104,32
vegetal sau animal n grsimea impur
(1) Calculat pentru un nivel de din lapte. Acest procedeu nu este validat,
ncredere de 99 %, astfel nct adugarea fiind doar orientativ.
de grsimi strine este indicat doar dac
limitele de detectare ale formulei
respective sunt depite (a se vedea
tabelul B.1).
trigliceridelor, pct. 12. Precizia
1) Analiz interlaboratoare
gazoas a trigliceridelor, pct. 10. Valorile pentru repetabilitate i
Precizia reproductibilitate sunt determinate pe
baza formulelor de la (3) la (7),
10.1. Analiz interlaboratoare utilizndu-se grsimi pure din lapte,
fiind posibil ca acestea s nu fie
Valorile pentru repetabilitate i aplicabile n cazul altor matrice dect
reproductibilitate sunt determinate pe cele prezentate.
baza formulelor de la (3) la (7), 2) Repetabilitate
utilizndu-se grsimi pure din lapte, Diferena absolut dintre dou rezultate
fiind posibil ca acestea s nu fie individuale ale unui singur test, obinute
aplicabile n cazul altor matrice dect cu aceeai metod aplicat asupra unor
cele prezentate. materiale de testare identice, n acelai
laborator, de ctre acelai operator,
utilizndu-se acelai echipament, la un
10.2. Repetabilitate interval scurt de timp, nu va depi
limitele din tabelul 3 n peste 5 % din
Diferena absolut dintre dou rezultate cazuri.
individuale ale unui singur test, obinute Tabelul 3. Limitele de repetabilitate, r,
cu aceeai metod aplicat asupra unor pentru formulele de la (3) la (7)
materiale de testare identice, n acelai Grsimea strin For- r %
laborator, de ctre acelai operator, mul
utilizndu-se acelai echipament, la un Ulei de soia, de floarea- (3) 0,67
interval scurt de timp, nu va depi soarelui, de msline, de
limitele din tabelul 3 n peste 5 % din rapi, de in, de
cazuri. germeni de ru, de
germeni de porumb, din
Tabelul 3. Limitele de repetabilitate, r, semine de bumbac i
pentru formulele de la (3) la (7) de pete
Grsimea strin For- r % grsime din smburi de
mul palmier
Ulei de soia, de floarea- (3) 0,67 Ulei de palmier i seu (5) 1,20
soarelui, de msline, de de vit
rapi, de in, de Untur (6) 0,58
germeni de ru, de Total (7) 1,49
germeni de porumb, din 3) Reproductibilitate
semine de bumbac i Diferena absolut dintre dou rezultate
de pete ale unui singur test, obinute cu aceeai
Grsime de palmier i (4) 0,12 metod aplicat asupra unor materiale de
grsime din smburi de testare identice, n laboratoare diferite,
palmier de ctre operatori diferii, utilizndu-se
Ulei de palmier i seu (5) 1,20 un echipament diferit, nu va depi
de vit limitele din tabelul 4 n peste 5 % din
Untur (6) 0,58 cazuri.
Total (7) 1,49 Tabelul 4. Limitele de reproductibilitate,
R, pentru formulele de la (3) la (7)
Grsimea strin For- R %
Diferena absolut dintre dou rezultate mul
ale unui singur test, obinute cu aceeai Ulei de soia, de floarea- (3) 1,08
metod aplicat asupra unor materiale de soarelui, de msline, de
testare identice, n laboratoare diferite, rapi, de in, de
de ctre operatori diferii, utilizndu-se germeni de ru, de
un echipament diferit, nu va depi germeni de porumb, din
limitele din tabelul 4 n peste 5 % din semine de bumbac i
cazuri. de pete
Tabelul 4 Limitele de reproductibilitate, grsime din smburi de
R, pentru formulele de la (3) la (7) palmier
Ulei de palmier i seu (5) 1,81
Grsimea strin For- R % de vit
mul Untur (6) 0,60
Ulei de soia, de floarea- (3) 1,08 Total (7) 2,07
soarelui, de msline, de
rapi, de in, de
germeni de ru, de
germeni de porumb, din
semine de bumbac i
de pete
grsime din smburi de
palmier
Ulei de palmier i seu (5) 1,81
de vit
Untur (6) 0,60
Total (7) 2,07
trigliceridelor, pct. 13. Incertitudinea
de msurare
gazoas a trigliceridelor, pct. 11. Incertitudinea extins pentru
Incertitudinea de msurare valoarea S se poate calcula cu ajutorul
repetabilitii, r, i a
Incertitudinea extins pentru reproductibilitii, R.
valoarea S se poate calcula cu ajutorul
repetabilitii, r, i a Introducerea incertitudinii extinse (pe
reproductibilitii, R. baza probelor martor) ntre limitele S din
tabelul 2 are ca rezultat extinderea
Introducerea incertitudinii extinse (pe limitelor S prezentate n tabelul 5.
baza probelor martor) ntre limitele S din
tabelul 2 are ca rezultat extinderea Tabelul 5. Limitele S extinse pentru
limitelor S prezentate n tabelul 5. grsimile pure din lapte, inclusiv
incertitudinea extins
Tabelul 5 Limitele S extinse pentru
grsimile pure din lapte, inclusiv Grsimea strin For-
incertitudinea extins mul Limi-
tele S
Grsimea strin For-
mul Limi-
extinse
tele S Ulei de soia, de (3) 97,36
floarea-soarelui, de 102,64
extinse msline, de rapi,
Ulei de soia, de (3) 97,36 de in, de germeni
floarea-soarelui, de 102,64 de ru, de germeni
msline, de rapi, de porumb, din
de in, de germeni semine de bumbac
de ru, de germeni i de pete
de porumb, din Grsime de (4) 99,14
semine de bumbac palmier i grsime 100,86
i de pete din smburi de
Grsime de (4) 99,14 palmier
palmier i grsime 100,86 Ulei de palmier i (5) 94,77
din smburi de seu de vit 105,23
palmier Untur (6) 97,65
Ulei de palmier i (5) 94,77 102,35
seu de vit 105,23 Total (7) 94,42
Untur (6) 97,65 105,58
102,35
Total (7) 94,42
105,58
trigliceridelor, pct. 14. Raportul de
analiz
gazoas a trigliceridelor, pct. 12. Raportul de analiz specific:
Raportul de analiz 1) toate informaiile necesare pentru
identificarea complet a probei;
Raportul de analiz specific: 2) metoda utilizat pentru prelevarea
probelor, dac se cunoate;
toate informaiile necesare pentru 3) metoda de analiz utilizat, n
identificarea complet a probei; conformitate cu prezentul standard
internaional;
metoda utilizat pentru prelevarea 4) toate detaliile operaionale care nu
sunt specificate n prezentul
probelor, dac se cunoate;
standard internaional sau care sunt
considerate opionale, mpreun cu
metoda de analiz utilizat, n detaliile referitoare la orice incident
conformitate cu prezentul standard care ar putea influena rezultatul
(rezultatele) testului;
internaional; 5) rezultatul (rezultatele) testului care a
fost obinut i, dac repetabilitatea a
toate detaliile operaionale care nu fost verificat, rezultatul final
sunt specificate n prezentul standard stabilit care a fost obinut.
internaional sau care sunt considerate
opionale, mpreun cu detaliile
referitoare la orice incident care ar putea
influena rezultatul (rezultatele) testului;
rezultatul (rezultatele) testului care a

fost obinut i, dac repetabilitatea a fost
verificat, rezultatul final stabilit care a
fost obinut.
Instruciunea nr. 1 Prepararea Parial Prevederile din Not Ministerul Din momentul
Anexa A Prepararea coloanei coloanei umplute, pct. 1. Reactivi i compatibil sunt prevederi UE cu Agriculturii i intrrii n vigoare
umplute, pct. A1. Reactivi i echipament caracter opional Industriei a actului naional
echipament 1) Toluen (C6H5CH3). Alimentare armonizat
2) Soluie de
dimetildiclorsilan [Si(CH3)2Cl2]
A.1.1 Toluen (C6H5CH3).
Se dizolv 50 ml de dimetildiclorsilan n
283 ml de toluen
A.1.2 Soluie de 3) Soluie de unt de cocos, cu o
dimetildiclorsilan [Si(CH3)2Cl2] fraciune de mas de 5 % unt de
Se dizolv 50 ml de dimetildiclorsilan n cocos n n-hexan sau n-heptan
283 ml de toluen (A1.1.1). 4) Faz staionar, 3-% OV-1 la
A.1.3 Soluie de unt de cocos, cu o 125 m pn la 150 m (100 pn la
fraciune de mas de 5 % unt de cocos n 120 ochiuri de sit) Gas ChromQ
n-hexan (4.4) sau n-heptan (4.5). 5) Coloan de sticl, avnd un
A.1.4 Faz staionar, 3-% OV-1 la diametru intern de 2 mm i o
125 m pn la 150 m (100 pn la 120 lungime de 500 mm, n form de U
6) Echipament pentru umplerea
ochiuri de sit) Gas ChromQ ( 22 )
coloanei
Not: Indicaia pentru granule a fost a) Coloan de umplere, cu capac care
convertit n micrometri n conformitate se nurubeaz, prevzut cu un
cu BS 410 (toate prile)[6]. marcaj pn la care se poate umple
A.1.5 Coloan de sticl, avnd un cu cantitatea necesar de faz
diametru intern de 2 mm i o lungime de staionar.
500 mm, n form de U b) Sit fin, cu dimensiunea
ochiurilor de sit de aproximativ
A.1.6 Echipament pentru umplerea
100 m, cu capac care se
coloanei. nurubeaz pentru etaneizarea
A.1.6.1 Coloan de umplere, cu capac coloanei de sticl.
care se nurubeaz, prevzut cu un c) Vat de sticl silanizat,
marcaj pn la care se poate umple cu dezactivat.
cantitatea necesar de faz staionar. d) Vibrator, pentru distribuia
A.1.6.2 Sit fin, cu dimensiunea uniform a fazei staionare n
ochiurilor de sit de aproximativ timpul umplerii.
e) Dispozitive de silanizare, pentru
100 m, cu capac care se nurubeaz
silanizarea suprafeei de sticl a
pentru etaneizarea coloanei de sticl, coloanei.
conform figurii A.3. f) Vas Woulff.
A.1.6.3 Vat de sticl silanizat, g) Pomp de aspiraie a apei.
dezactivat.
A.1.6.4 Vibrator, pentru distribuia
uniform a fazei staionare n timpul
umplerii.
A.1.6.5 Dispozitive de silanizare, pentru
silanizarea suprafeei de sticl a
coloanei.
A.1.6.6 Vas Woulff.
A.1.6.7 Pomp de aspiraie a apei.
Instruciunea nr. 1 Prepararea Compatibil - Ministerul Din momentul

Anexa A Prepararea coloanei coloanei umplute, pct. 2. Silanizarea Agriculturii i intrrii n vigoare
umplute, pct. A2. Silanizarea (dezactivarea suprafeei de sticl) Industriei a actului naional
(dezactivarea suprafeei de sticl) Dup conectarea vasului Woulff la Alimentare armonizat
pompa de aspiraie a apei, se introduce
tubul 2 (figura 3) n soluia de
Dup conectarea vasului Woulff
dimetilclorsilan. Se umple coloana cu
(A.1.6.6) la pompa de aspiraie a apei aceast soluie prin nchiderea
(A.1.6.7), se introduce tubul 2 (a se robinetului. Se deschide robinetul din
vedea figura A.1) n soluia de nou i apoi se ndeprteaz cele dou
dimetilclorsilan (A.1.2). Se umple tuburi. Se fixeaz coloana pe stativ. Se
coloana (A.1.5) cu aceast soluie prin umple complet cu soluia de
nchiderea robinetului. Se deschide dimetildiclorsilan cu ajutorul unei
pipete.
robinetul din nou i apoi se ndeprteaz
Figura 3. Dispozitivul de silanizare
cele dou tuburi. Se fixeaz coloana pe
stativ. Se umple complet cu soluia de
dimetildiclorsilan (A.1.2) cu ajutorul
unei pipete.
Figura A.1 Dispozitivul de silanizare
Legend
1 - tub 1
2 - tub 2
3 - pomp de aspiraie
4 - robinet
5 - coloan de sticl
6 - dimetildiclorsilan i toluen
Se las coloana n poziie vertical ntre
20 i 30 min. Apoi se nlocuiete vasul
Woulff cu un balon de filtrare. Se golete
coloana prin conectarea acesteia la
pompa de aspiraie a apei (figura 4). Se
cltete repetat coloana golit cu 75 ml
de toluen i 50 ml metanol prin
introducerea tubului 2 n solvent.
Coloana cltit se usuc n cuptor la
Legend
100 C timp de aproximativ 30 min.
Figura 4. Dispozitivul de cltire
1 tub 1
2 tub 2
3 pomp de aspiraie
4 robinet
Legend
5 coloan de sticl 1 - tub 1
2 - tub 2
6 dimetildiclorsilan i toluen 3 - pomp de aspiraie a apei
4 - balon de filtrare
Se las coloana n poziie vertical ntre 5 - coloan de sticl
20 i 30 min. Apoi se nlocuiete vasul 6 - agent de cltire
Woulff cu un balon de filtrare. Se golete
coloana prin conectarea acesteia la
pompa de aspiraie a apei (A.1.6.7) (a se
vedea figura A.2). Se cltete repetat
coloana golit cu 75 ml de toluen (A.1.1)
i 50 ml metanol (4.3) prin introducerea
tubului 2 n solvent. Coloana cltit se
usuc n cuptor (5.6) la 100 C timp de
aproximativ 30 min.
Figura A.2 Dispozitivul de cltire
Legend
1 tub 1
2 tub 2
3 pomp de aspiraie a apei
4 balon de filtrare
5 coloan de sticl
6 agent de cltire
Anexa A Prepararea coloanei coloanei umplute, pct. 3. Umplerea Agriculturii i intrrii n vigoare
umplute, pct. A3. Umplerea Coloana se umple cu ajutorul Industriei a actului naional
dispozitivului reprezentat n figura 5. Alimentare armonizat
Coloana se umple cu ajutorul Coloana de umplere se umple cu faz
staionar pn la marcaj. Captul
dispozitivului reprezentat n figura A.3.
inferior al coloanei de sticl se sigileaz
Coloana de umplere (1.6.1) se umple cu cu un dop de vat comprimat de sticl
faz staionar (A.1.4) pn la marcaj. silanizat cu o lungime de aproximativ
Captul inferior al coloanei de sticl se 1 cm. Captul coloanei de sticl se
sigileaz cu un dop de vat comprimat nchide cu o sit fin.
de sticl silanizat (A.1.6.3) cu o Figura 5.Umplerea coloanei de sticl
lungime de aproximativ 1 cm. Captul
coloanei de sticl se nchide cu o sit
fin (A.1.6.2).
Figura A.3 Umplerea coloanei de sticl
Legend
1 - orificiu de ptrundere a azotului
2 - coloana de umplere care trebuie
umplut cu OV-1 pn la marcaj
3 - coloana de sticl care trebuie umplut
4 - capac care se nurubeaz, cu filtru,
prin care fibrele de sticl i faza
staionar sunt comprimate.
Coloana se umple cu faza staionar sub
presiune (300 kPa i debit de azot).
Legend Pentru a se obine o umplere uniform,
continu i ferm, n timpul umplerii se
1 orificiu de ptrundere a azotului deplaseaz vibratorul n sus i n jos pe
coloana de sticl. Dup umplere, la
2 coloana de umplere care trebuie captul cellalt al coloanei umplute se
ataeaz un dop solid de vat de sticl
umplut cu OV-1 pn la marcaj
silanizat. Capetele care ies n exterior
se taie. Dopul se mpinge n interiorul
3 coloana de sticl care trebuie umplut coloanei cu civa milimetri cu ajutorul
unei spatule.
4 capac care se nurubeaz, cu filtru,
prin care fibrele de sticl i faza
staionar sunt comprimate.
Coloana se umple cu faza staionar sub

presiune (300 kPa i debit de azot).
Pentru a se obine o umplere uniform,
continu i ferm, n timpul umplerii se
deplaseaz vibratorul n sus i n jos pe
coloana de sticl. Dup umplere, la
captul cellalt al coloanei umplute se
ataeaz un dop solid de vat de sticl
silanizat (A.1.6.3). Capetele care ies n
exterior se taie. Dopul se mpinge n
interiorul coloanei cu civa milimetri cu
ajutorul unei spatule.

Anexa A Prepararea coloanei coloanei umplute, pct. 4. Agriculturii i intrrii n vigoare
umplute, pct. A4 Condiionarea Condiionarea Industriei a actului naional
Pentru a se evita contaminarea, n timpul Alimentare armonizat
Pentru a se evita contaminarea, n timpul etapelor de la (a) la (c), captul din spate
etapelor de la (a) la (c), captul din spate al coloanei nu se conecteaz la detector.
al coloanei nu se conecteaz la detector. Coloana umplut se condiioneaz dup
cum urmeaz:
Coloana umplut (A.3) se condiioneaz
1) coloana se spal cu azot timp de
dup cum urmeaz: 15 min, la un debit de 40 ml/min. i
o temperatur a cuptorului GC de
(a) coloana se spal cu azot timp de 50 C;
15 min, la un debit de 40 ml/min. i o 2) coloana se nclzete cu 1 C/min.
temperatur a cuptorului GC de 50 C; pn la 355 C, cu un debit al
azotului de 10 ml/min;
(b) coloana se nclzete cu 1 C/min. 3) coloana se menine la 355 C, timp
pn la 355 C, cu un debit al azotului de 12 h pn la 15 h;
4) se injecteaz de dou ori 1 l de
de 10 ml/min;
soluie de unt de cocos, utilizndu-se
programul de temperatur al
(c) coloana se menine la 355 C, timp coloanei umplute prezentat la
de 12 h pn la 15 h; punctul 9, subpunctul 4, litera a);
Not: Untul de cocos este format
(d) se injecteaz de dou ori 1 l de aproape n ntregime din trigliceride
soluie de unt de cocos (A.1.3), C50 pn la C54 cu punct ridicat de
utilizndu-se programul de temperatur fierbere, reducndu-se eforturile
condiionrii coloanei n conformitate cu
al coloanei umplute prezentat la punctul
coeficienii de rspuns respectiv.
7.3.4.1; 5) se injecteaz de 20 de ori 0,5 l de
soluie de grsimi din lapte timp de
Not: Untul de cocos este format 2 pn la 3 zile conform punctului
aproape n ntregime din trigliceride 8, utiliznd indicaiile pentru
C50 pn la C54 cu punct ridicat de coloana umplut prezentate la
fierbere, reducndu-se eforturile punctul 9, subpunctul 4, litera a).
condiionrii coloanei n conformitate cu Pentru probele de analiz se utilizeaz
doar coloane cu coeficieni de rspuns
coeficienii de rspuns respectivi.
aproape de 1. Coeficienii de rspuns nu
(e) se injecteaz de 20 de ori 0,5 l de trebuie s depeasc 1,20.
soluie de grsimi din lapte timp de 2
pn la 3 zile conform punctului 7.2,
utiliznd indicaiile pentru coloana
umplut prezentate la punctul 7.3.4.1.
Pentru probele de analiz se

utilizeaz doar coloane cu coeficieni de
rspuns aproape de 1. Coeficienii de
rspuns nu trebuie s depeasc 1,20.
Instruciunea nr. 2 Cuantificarea Compatibil - Ministerul Din momentul

Anexa B Cuantificarea coninutului de coninutului de grsimi strine, pct. 1. Agriculturii i intrrii n vigoare
grsimi strine, pct. B1. Generaliti Generaliti Industriei a actului naional
Tabelul 1 prezint limitele de detectare Alimentare armonizat
Tabelul B.1 prezint limitele de detectare pentru diferite grsimi strine calculate
pentru un interval de ncredere de 99 %.
pentru diferite grsimi strine calculate
Coloana din mijloc indic limitele de
pentru un interval de ncredere de 99 %. detectare pentru cele mai bune formule
Coloana din mijloc indic limitele de de la (3) la (6).
detectare pentru cele mai bune formule Limitele de detectare a formulei totale
de la (3) la (6). (7), indicate de coloana din extrema
dreapt, sunt ceva mai mari. n principiu,
Limitele de detectare a formulei totale formula (7) este necesar doar pentru
(7), indicate de coloana din extrema cuantificarea grsimilor strine.
dreapt, sunt ceva mai mari. n principiu, Cu ajutorul tuturor formulelor pot fi
formula (7) este necesar doar pentru detectate, de asemenea, combinaii ale
cuantificarea grsimilor strine. diferitelor tipuri de grsimi strine.
Diferena de compoziie a TG dintre
Cu ajutorul tuturor formulelor pot fi probele individuale ale unui tip de
grsime strin nu influeneaz
detectate, de asemenea, combinaii ale semnificativ limitele de detectare.
diferitelor tipuri de grsimi strine. Dac se folosesc ambele formule
Diferena de compoziie a TG dintre individuale i ecuaia total, se aplic
probele individuale ale unui tip de limitele de detectare ale ecuaiilor
grsime strin nu influeneaz individuale. Cu toate acestea, n anumite
semnificativ limitele de detectare. cazuri, valoarea S pentru formula total
este necesar pentru cuantificare.
Dac se folosesc ambele formule Tabelul 6. Limitele de detectare cu o
individuale i ecuaia total, se aplic precizie de 99 % pentru grsimile strine
limitele de detectare ale ecuaiilor adugate n grsimile din lapte
individuale. Cu toate acestea, n anumite exprimate procentual
cazuri (B.2), valoarea S pentru formula Grsime Formul Formul
total este necesar pentru cuantificare. strin indivi- total %
dual %
Tabelul B.1 Limitele de detectare cu o Ulei de soia 2,1 4,4
precizie de 99 % pentru grsimile strine
Ulei de 2,3 4,8
adugate n grsimile din lapte
floarea-
exprimate procentual
soarelui
Ulei de 2,4 4,7
Grsime Formul Formul msline
strin indivi- total % Ulei de cocos 3,5 4,3
dual % Ulei de 4,4 4,7
Ulei de soia 2,1 4,4
palmier
Ulei de 2,3 4,8 Ulei de 4,6 5,9
floarea- smburi de
soarelui palmier
Ulei de 2,4 4,7 Ulei de rapi 2,0 4,4
msline Ulei de in 2,0 4,0
Ulei de cocos 3,5 4,3 Ulei de 2,7 6,4
Ulei de 4,4 4,7 germeni de
palmier gru
Ulei de 4,6 5,9 Ulei de 2,2 4,5
smburi de germeni de
palmier porumb
Ulei de rapi 2,0 4,4 Ulei din 3,3 4,4
Ulei de in 2,0 4,0 semine de
Ulei de 2,7 6,4 bumbac
germeni de Untur 2,7 4,7
gru Seu de vit 5,2 5,4
Ulei de 2,2 4,5 Ulei de pete 5,4 6,1
germeni de hidrogenat
porumb
Ulei din 3,3 4,4
semine de
bumbac
Untur 2,7 4,7
Seu de vit 5,2 5,4
Ulei de pete 5,4 6,1
hidrogenat
grsimi strine, pct. B2. Calculare Calculare Industriei a actului naional
Determinarea cantitativ a grsimii Alimentare armonizat
Determinarea cantitativ a grsimii strine se realizeaz doar dac cel puin
strine se realizeaz doar dac cel puin una dintre limitele S (tabelul 2 sau
una dintre limitele S (tabelul 2 sau tabelul 5) este depit. Pentru a se
tabelul 5) este depit. Pentru a se obine informaii cantitative, se
obine informaii cantitative, se calculeaz fraciunea de mas a grsimii
calculeaz fraciunea de mas a grsimii strine sau fraciunea de mas a
strine sau fraciunea de mas a amestecului de grsimi strine din proba
amestecului de grsimi strine din proba de analiz, w f, exprimat procentual, cu
de analiz, w f, exprimat procentual, cu ajutorul formulei urmtoare:
ajutorul formulei urmtoare: (100S)
wf =100
(100Sf ) (8)
unde:
S - rezultatul obinut prin introducerea
unde: datelor despre TG din grsimea din
S este rezultatul obinut prin lapte, la care s-a adugat o grsime
introducerea datelor despre TG din strin sau un amestec de grsimi
grsimea din lapte, la care s-a adugat o strine, n una dintre formulele de la (3)
grsime strin sau un amestec de la (7);
grsimi strine, n una dintre formulele S f - o constant care depinde de tipul de
de la (3) la (7); grsime strin adugat.
Dac nu se cunoate tipul de grsime
S f este o constant care depinde de tipul strin adugat la grsimea din lapte, se
de grsime strin adugat. utilizeaz o valoarea general
Dac nu se cunoate tipul de grsime pentru S f de 7,46 (tabelul 7). Se
strin adugat la grsimea din lapte, se utilizeaz ntotdeauna valoarea S
utilizeaz o valoarea general obinut din formula (7), chiar dac
pentru S f de 7,46 (tabelul B.2). Se limitele S pentru aceasta nu sunt
utilizeaz ntotdeauna valoarea S depite, spre deosebire de limitele altei
obinut din formula (7), chiar dac
limitele S pentru aceasta nu sunt formule.
depite, spre deosebire de limitele altei Dac se cunosc grsimile strine,
formule. valorile individuale Sf ale acestora
Dac se cunosc grsimile strine, (tabelul 7) se introduc n formula (8).
valorile individuale S f ale acestora Pentru a se calcula valoarea S, se alege
(tabelul B.2) se introduc n formul formula relevant pentru grsimea
(B.1). Pentru a se calcula valoarea S, se strin din formulele de la (3) la (6).
alege formula relevant pentru grsimea Tabelul 7. Valorile Sf pentru diferitele
strin din formulele de la (3) la (6). grsimi strine
Tabelul B.2 Valorile S f pentru diferitele Grsimea strin Sf
grsimi strine Necunoscut 7,46
Grsimea strin Sf Ulei de soia 8,18
Necunoscut 7,46 Ulei de floarea-soarelui 9,43
Ulei de soia 8,18 Ulei de msline 12,75
Ulei de floarea-soarelui 9,43
Ulei de cocos 118,13
Ulei de msline 12,75
Ulei de palmier 7,55
Ulei de cocos 118,13 Ulei de smburi de 112,32
Ulei de palmier 7,55 palmier
Ulei de smburi de 112,32 Ulei de rapi 3,30
palmier Ulei de in 4,44
Ulei de rapi 3,30 Ulei de germeni de 27,45
Ulei de in 4,44 gru
Ulei de germeni de 27,45 Ulei de germeni de 9,29
gru porumb
Ulei de germeni de 9,29 Ulei din semine de 41,18
porumb bumbac
Ulei din semine de 41,18 Untur 177,55
bumbac Seu de vit 17,56
Untur 177,55
Seu de vit 17,56 Ulei de pete 64,12
Ulei de pete 64,12
grsimi strine, pct. B3. Exprimarea Exprimarea rezultatelor analizei Industriei a actului naional
rezultatelor analizei Rezultatele analizei se exprim cu dou Alimentare armonizat
zecimale.
Rezultatele analizei se exprim cu dou
zecimale.
Anexa B Cuantificarea coninutului de neaplicabile
grsimi strine, Bibliografie
1. Molkentin, J., Precht, D.

Representative determination of the
butyric acid content in European milk
fats. Milchwissenschaft, 52, 1987,
pp. 82-85
2. Precht, D., Molkentin, J. Quantitative

triglyceride analysis using short
capillary columns. Chrompack News, 4,
1993, pp. 16-17
3. Molkentin, J., Precht, D. Comparison

of packed and capillary columns for
quantitative gas chromatography of
triglycerides in milk
fat. Chromatographia, 39, 1994,
pp. 265-270
4. Molkentin, J., Precht, D. Equivalence

of packed and capillary GC columns
with respect to suitability for foreign fat
detection in butter using the triglyceride
formula method. Chromatographia, 52,
2000, pp. 791-797
5. ISO 707IDF 50, Milk and milk

products Guidance on sampling
6. BS 410:1988, Test sieves Technical

requirements and testing
7. Precht, D. Control of milk fat purity

by gas chromatographic triglyceride
analysis. Kieler Milchwirtsch.
Forschungsber., 43, 1991, pp. 219-242
8. Precht, D. Detection of adulterated

milk fat by fatty acid and triglyceride
analyses. Fat Sci. Technol., 93, 1991,
pp. 538-544
9. DIN 10336:1994, Nachweis und

Bestimmung von Fremdfetten in
Milchfett anhand einer
gaschromatographischen
Triglyceridanalyse [Detection and
determination of foreign fats in milk fat
using a gas chromatographic triglyceride
analysis]
10. Comisia Comunitilor Europene:

Consideration of results from the first,
second, third, fourth, fifth and sixth EEC
collaborative trial: Determination of
triglycerides in milk fat; Doc.
No VI/2644/91, VI/8.11.91, VI/1919/92,
VI 3842/92, VI/5317/92, VI/4604/93
11. Molkentin, J. Detection of foreign fat

in milk fat from different continents by
triacylglycerol analysis. Eur. J. Lipid
Sci. Technol., 109, 2007, pp. 505-510
Anexa nr. 21 Procedura aplicabil Parial Sintagma laborator Ministerul Din momentul
Anexa XXI (art. 18) Procedura cnd rezultatele unei analize sunt compatibil aprobat de autoritatea Agriculturii i intrrii n vigoare
aplicabil cnd rezultatele unei contestate (analiz chimic), pct. 1. competent este Industriei a actului naional
analize sunt contestate (analiz La cererea productorului, se poate substituit cu sintagma Alimentare armonizat
realiza o analiz suplimentar prin laborator acreditat.
chimic), pct. 1.
metoda relevant n alt laborator
acreditat, cu condiia s fie disponibile
La cererea productorului, se poate probe martor sigilate din produs care s
realiza o analiz suplimentar prin fi fost depozitate n siguran de
metoda relevant n alt laborator aprobat autoritatea competent. Cererea se face
de autoritatea competent, cu condiia s n termen de 7 apte zile lucrtoare de la
notificarea rezultatelor primei analize.
fie disponibile probe martor sigilate din Analiza este efectuat n termen de 21 de
produs care s fi fost depozitate zile lucrtoare de la primirea cererii.
corespunztor de autoritatea competent. Autoritatea competent trimite aceste
probe unui al doilea laborator, la cererea
Cererea se face n termen de 7 apte zile
i pe cheltuiala productorului. Cel de-al
lucrtoare de la notificarea rezultatelor doilea laborator trebuie s aib
primei analize. Analiza este efectuat n competene dovedite n realizarea
termen de 21 de zile lucrtoare de la analizelor n cauz.
primirea cererii. Autoritatea competent
trimite aceste probe unui al doilea
laborator, la cererea i pe cheltuiala
productorului. Laboratorul trebuie s
fie autorizat n vederea efecturii de
analize oficiale i trebuie s aib
competene dovedite n realizarea
analizelor n cauz.
Anexa nr. 21 Procedura aplicabil Compatibil - Ministerul Din momentul

Anexa XXI (art. 18) Procedura cnd rezultatele unei analize sunt Agriculturii i intrrii n vigoare
aplicabil cnd rezultatele unei contestate (analiz chimic), pct. 2. Industriei a actului naional
analize sunt contestate (analiz Incertitudinile extinse (k = 2) pentru Alimentare armonizat
valoarea medie 1 pentru msurtorile n1
chimic), pct. 2.
repetate n laboratorul 1 i pentru
valoarea medie 2 pentru msurtorile n2
Incertitudinile extinse (k = 2) pentru repetate n laboratorul 2 sunt
valoarea medie pentru msurtorile
repetate n laboratorul 1 i pentru
valoarea medie pentru msurtorile
repetate n laboratorul 2 sunt
analize sunt contestate (analiz 1 1 Alimentare armonizat
1 1
chimic), pct. 3. n1 n2
2 2
R r () i respectiv 2 2
R r ()
U =2
1
U =2
2
unde:
r - deviaia standard a repetabilitii, iar
i respectiv R - deviaia standard a
reproductibilitii pentru metoda
relevant.
Dac rezultatul y al msurtorii n
unde laboratoare este calculat folosind o
este deviaia standard a formul de tipul
repetabilitii, iar y = x1 + x2, y = x1 - x2, y = x1 x2 or y =
x1 / x2,
este deviaia standard a n astfel de cazuri trebuie urmate
reproductibilitii pentru metoda modalitile obinuite de combinare a
relevant. Dac rezultatul y al deviaiilor standard pentru a obine
msurtorii n laboratoare este calculat incertitudinea.
folosind o formul de tipul
,
,
or
,
n astfel de cazuri trebuie urmate
modalitile obinuite de combinare a
deviaiilor standard pentru a obine
incertitudinea.
analize sunt contestate (analiz Pentru a verifica dac rezultatele celor Alimentare armonizat
dou laboratoare corespund cu deviaia
chimic), pct. 4.
standard R a reproductibilitii metodei,
se calculeaz incertitudinea extins a
Pentru a verifica dac rezultatele celor diferenei 1- 2.
dou laboratoare corespund cu deviaia
standard a reproductibilitii
metodei, se calculeaz incertitudinea
extins a diferenei .
analize sunt contestate (analiz 1 Alimentare armonizat
2
chimic), pct. 5. n1
1
2R 2r ( ) . Dac
n2
U =U 2 + U 2 =2
1 2 1 1
Dac valoarea absolut a diferenei

valoarea absolut a diferenei dintre
dintre valorile medii , valorile medii | 1- 2|, obinute de
obinute de laborator, nu este mai mare laborator, nu este mai mare dect
U
dect incertitudinea , incertitudinea 1
, | 1- 2 |
2
U
, rezultatele 1 2
,
celor dou laboratoare corespund cu rezultatele celor dou laboratoare
deviaia standard a reproductibilitii, corespund cu deviaia standard r a
iar media aritmetic a valorilor medii reproductibilitii, iar media aritmetic a
obinute de cele dou laboratoare, valorilor medii obinute de cele dou
y 1 y 2
laboratoare, 2 , este raportat
, este raportat drept
rezultat final. n acest caz, incertitudinea drept rezultat final. n acest caz,
extins este incertitudinea extins este
1
2
n1
Lotul este respins pentru c nu respect 1
2R 2r ( ) .
limita legal superioar UL n cazul n n2
1
care ; U y = U 2 +U 2 =
2 1 1
n caz contrar, lotul este acceptat ca

respectnd UL. Lotul este respins pentru c nu respect
Lotul este respins pentru c nu respect limita legal superioar UL n cazul n
limita legal inferioar LL n cazul n Uy
care - >UL;
care ; n caz contrar, lotul este acceptat ca
n caz contrar, lotul este acceptat ca respectnd UL.
respectnd LL. Lotul este respins pentru c nu respect
Dac valoarea absolut a diferenei limita legal inferioar LL n cazul n
Uy
dintre valorile medii , care - <LL;
obinute de laborator, este mai mare n caz contrar, lotul este acceptat ca
respectnd LL.
dect incertitudinea , Dac valoarea absolut a diferenei
, dintre valorile medii| 1- 2 |, obinute de
laborator, este mai mare dect
rezultatele celor dou laboratoare nu U
respect deviaia standard a incertitudinea , | 1- 2 | >
1 2
reproductibilitii. U
,1 2
rezultatele celor dou laboratoare nu
n cazul n care a doua analiz o
respect deviaia standard a
confirm pe prima, lotul este respins ca
reproductibilitii.
fiind neconform. n caz contrar, lotul
n cazul n care a doua analiz o
este acceptat ca fiind conform.
confirm pe prima, lotul este respins ca
Rezultatele finale trebuie notificate de
fiind neconform. n caz contrar, lotul
ctre autoritatea competent
este acceptat ca fiind conform.
productorului, ct mai curnd posibil.
Rezultatele finale trebuie notificate de
Costurile celei de-a doua analize sunt
ctre autoritatea competent
suportate de productor, n cazul n care
productorului, ct mai curnd posibil.
lotul este respins.
Costurile celei de-a doua analize sunt
suportate de productor, n cazul n care
lotul este respins.
Anexa XXII Tabel de coresponden neaplicabile
Regulamentul (CE) Prezentul

nr. 213/2001 regulament
Articolul 1 Articolul 1
Articolul 3
Articolul 4
Articolul 5
Articolul 8
Articolul 14
Articolul 17
Articolul 19
Articolul 20
Articolul 21
Avnd n vedere volumul mare, acestea nu pot fi incluse n tabel.
[1] Anexa I (art. 1), Partea A

Regulamentul Produsul Parametrul Limita (1) Metoda de referin Not
Comisiei
Regulamentul (CE) Unt fr sare Grsime Min. 82 % m/m ISO 17189:2003FIL 194:2003
nr. 2771/1999 Ap Pn la 16 % m/m ISO 3727-1:2001FIL 80-1:2001
Depozitare public SNF Pn la 2 % m/m ISO 3727-2:2001FIL 80-2:2001
Acizi grai liberi 1,2 mmol/100 g grsime ISO 1740:2004FIL 6:2004
PV (max.) 0,3 mechiv. oxigen/1 000 g ISO 3976:2006FIL 74:2006 Nota 1
grsime
Bacterii coliforme Nedetectabile n 1 g Anexa X Nota 3
Grsime care nu provine Nedetectabil prin analiza Anexa XX
din lapte trigliceridelor
Marcatori de steroli Nedetectabili, -sitosterol Anexa VIII
40 mg/kg
Ali marcatori:
vanilin Nedetectabil Anexa VI
etil esterul acidului 6 mg/kg Anexa VII

carotenic
trigliceride ale Nedetectabile Anexa V

acidului enantic
Caracteristici de Cel puin 4 din 5 puncte Anexa IV

sensibilitate pentru A, F i C
Caracteristici de Cel puin 4 din 5 puncte Anexa IV

sensibilitate pentru A, F i C
Dispersia apei Cel puin 4 puncte ISO 7586:1985FIL 112A:1989
Regulamentul Unt fr sare Grsime Min. 82 % m/m ISO 17189:2003FIL

(CE) 194:2003
nr. 2771/1999
Depozitare privat Ap Pn la 16 % m/m ISO 3727-1:2001FIL 80-
1:2001
SNF Pn la 2 % m/m ISO 3727-2:2001FIL 80-

2:2001
Regulamentul Unt srat Grsime Min. 80 % m/m ISO 17189:2003FIL

(CE) 194:2003
nr. 2771/1999 Ap Pn la 16 % m/m ISO 3727-1:2001FIL 80-
Depozitare privat 1:2001
SNF (cu excepia Pn la 2 % m/m ISO 3727-2:2001FIL 80-

srii) 2:2001
Sare Pn la 2 % m/m ISO 15648:2004FIL

179:2004

(CE) 194:2003
nr. 1898/2005
capitolul II Grsime care nu Anexa XX
provine din lapte
Ap Pn la 16 % m/m ISO 3727-1 2001FIL 80-

1:2001

2:2001
Marcatori:
steroli A se vedea anexa VIII Anexa VIII
vanilin A se vedea anexa VI Anexa VI
etil esterul A se vedea anexa VII Anexa VII

acidului
carotenic
trigliceride ale A se vedea anexa V Anexa V
acidului enantic

(CE) 194:2003
nr. 1898/2005
provine din lapte
Ap Pn la 16 % m/m ISO 3727-1:2001FIL 80-

1:2001

srii) 2:2001

179:2004
Marcatori:

acidului carotenic

acidului enantic
Regulamentul Unt concentrat Grsime Min. 99,8 % m/m FIL 24:1964
(CE)
nr. 1898/2005 Ap i SNF Pn la 0,2 % m/m ISO 5536:2002FIL 23:2002
capitolul II (umiditate)
FIL 24:1964 (SNF)
Acizi grai liberi 1,2 mmol/100 g ISO 1740:2004FIL 6:2004

grsime
PV (max.) 0,5 mechiv. ISO 3976:2006FIL 74:2006 Nota 1

oxigen/1 000 g
grsime
Grsime care nu Absent Anexa XX

provine din lapte
Arom Proaspt
Miros Fr mirosuri strine
Altele Absena agenilor de

neutralizare, a
antioxidanilor i
conservanilor
Marcatori:


acidului carotenic

acidului enantic
Regulamentul Smntn Grsime Minimum 35 % m/m ISO 2450:1999FIL 16

(CE) C:1987
nr. 1898/2005
provine din lapte
Marcatori:
steroli A se vedea anexa VIII Nota 2
etil esterul A se vedea anexa VII Nota 2

acidului carotenic

acidului enantic
Regulamentul Unt concentrat Grsime Min. 96 % m/m Nota 2

(CE)
nr. 1898/2005 Grsime care nu Anexa XX
capitolul III provine din lapte
SNF Pn la 2 % m/m Nota 2
Marcatori:
stigmasterol 15 g/100 kg de unt Anexa VIII

(95 % m/m) concentrat
stigmasterol 17 g/100 kg de unt Anexa VIII

(85 % m/m) concentrat
trigliceride ale 10,34 kg/100 t de unt Anexa V

acidului enantic concentrat
etil ester al etil esterul acidului Nota 2

acidului butiric i butiric
stigmasterol
stigmasterol:
anexa VIII
etil esterul etil esterul acidului Nota 2

acidului butiric i butiric
trigliceridele acidului
enantic trigliceride ale
acidului enantic:
anexa V
lecitin (E 322) Pn la 0,5 % m/m Nota 2
NaC1 Pn la 0,75 % m/m ISO 15648:2004FIL

179:2004
Acizi grai liberi 1,2 mmol/100 g ISO 1740:2004FIL 6:2004
grsime
PV (max.) Pn la 0,5 mechiv. ISO 3976:2006FIL 74:2006 Nota 1

oxigen/1 000 g
grsime
Arom Proaspt
Altele Absena agenilor de

neutralizare, a
antioxidanilor i a
conservanilor

(CE) 194:2003
nr. 1898/2005
capitolul IV Ap Pn la 16 % m/m ISO 3727-1:2001FIL 80-
1:2001

2:2001

(CE) 194:2003
nr. 1898/2005
capitolul IV Ap Pn la 16 % m/m ISO 3727-1:2001FIL 80-
1:2001
srii) 2:2001

179:2004
Articolul 9 i titlul II Brnz Lapte de vac < 1 % m/m Anexa IX

din Regulamentul (CE) produs din
nr. 1255/1999 lapte de oaie
i/sau capr
Regulamentul Anexa I Ap Pn la 12,00 % m/m ISO 5550:2006FIL 78:2006

(CEE) nr. 2921/90 Cazein acid
Grsime Pn la 1,75 % m/m ISO 5543:2004FIL

127:2004
Aciditate liber Pn la 0,30 ml soluie ISO 5547:1978FIL 91:1979

0,1 N NaOH/g

(CEE) nr. 2921/90 Cazein cheag

127:2004
Cenu Min. 7,50 % m/m ISO 5545:1978FIL 90:1979

(CEE) nr. 2921/90 Cazeinai
Proteine ale laptelui Min. 88,00 % m/m ISO 5549:1978FIL 92:1979
Grsime i cenu Pn la 6,00 % m/m ISO 5543:2004FIL

127:2004
Cenu insolubil ISO 5544:1978FIL 89:1979
Cenu ISO 5545:1978FIL 90:1979
Regulamentul Anexa II Ap Pn la 10,00 % m/m ISO 5550:2006FIL 78:2006

(CEE) nr. 2921/90 Cazein acid

127:2004
Aciditate liber Pn la 0,20 ml soluie ISO 5547:1978FIL 91:1979

0,1 N NaOH/g
TBC (max.) 30 000/ g ISO 4833:2003 Nota 3
Bacterii coliforme Absente n 0,1 g Anexa X Nota 3
Therm. (max.) 5 000/ g ISO 4833:2003 Notele

3 i 4

(CEE) nr. 2921/90 Cazein cheag

127:2004
Cenu Min. 7,50 % m/m ISO 5545:1978FIL 90:1979
TBC (max.) 30 000/ g ISO 4833:2003 Nota 3

3 i 4

Grsime i cenu Pn la 6,00 % m/m ISO 5543:2004FIL

127:2004
ISO 5544:1978FIL 89:1979

sau
ISO 5545:1978FIL 90:1979
TBC (max.) 30 000/ g ISO 4833:2003 Nota 3
Therm. (max.) 5 000/g ISO 4833:2003 Notele

3 i 4
Regulamentul Anexa III Ap Pn la 6,00 % m/m ISO 5550:2006FIL 78:2006


127:2004
Lactoz Pn la 1,00 % m/m ISO 5548:2004FIL

106:2004
Cenu Pn la 6,50 % m/m ISO 5544:1978FIL 89:1979

sau ISO 5545:1978FIL
90:1979
TBC (max.) 30 000/g ISO 4833:2003 Nota 3

3 i 4
Regulamentul Furaje Ap (zar acid Pn la 5 % m/m Anexa XIX

(CE) combinate i praf)
nr. 2799/1999 lapte praf degresat
(SMP) (folosite n
furaje) Proteine 31,4 % m/m (min.) din ISO 8968-123:2001FIL 20-
materia uscat 123:2001
negras
Ap (SMP) Pn la 5 % m/m ISO 5537:2004FIL 26:2004

Grsimi (SMP) Pn la 11 % m/m ISO 1736:2000FIL 9C:1987
Zer nchegat (SMP) Absent Anexa XIII Nota 6
Amidon (SMP) Absent Anexa XVII
Ap (amestecuri) Pn la 5 % din ISO 5537:2004FIL 26:2004

materia negras
Grsime Directiva 84/4/CEE a

(amestecuri) Comisiei (JO L 15,
18.1.1984, p. 29)
Zer nchegat Absent Anexa XIII

(amestecuri)
Coninutul SMP (din Min. 50 % m/m Anexa XVI

produsul final)
Grsime (din Min. 2,5 % m/m sau Directiva 84/4/CEE a Nota 7

produsul final) 5 % m/m Comisiei (JO L 15,
18.1.1984, p. 29)
Amidon (din Min. 2 % m/m Anexa XVII Nota 8

produsul final)
Cupru (din produsul 25 ppm Directiva 78/633/CEE a

final) Comisiei (JO L 206,
26.7.1987, p. 43)
Regulamentul SPM (spray) Grsime Pn la 1,0 % m/m ISO 1736:2000FIL 9C:1987
(CE) nr. 214/2001
Proteine 31,4 % (2) m/m (min.) ISO 8968-1/2:2001FIL 20-
din materia uscat 1/2:2001
negras
Ap Pn la 3,5 % m/m ISO 5537:2004FIL 26:2004
Aciditate Pn la 19,5 ml, 0,1 N ISO 6091:1980FIL 86:1981

NaOH, 10 g substane
solide negrase
Lactai Pn la 150 mg/100 g ISO 8069:2005FIL 69:2005

substane solide negrase
Fosfataz Negativ ISO 11816-1:2006FIL 155-

1:2006
Indicele Pn la 0,5 ml la 24 C ISO 8156:2005FIL

insolubilitii 129:2005
Particule arse Disc A sau B (15,0 mg) ADPI (1990)
TBC 40 000/ g ISO 4833:2003 Nota 3
Bacterii coliforme Negativ/ 0,1 g Anexa X Nota 3
Zar Negativ Anexa XIV
Zer nchegat Negativ Anexa XII

Zer acid Negativ Nota 2
Ageni antimicrobieni Anexa XV
(1) Fr a se aduce atingere cerinelor regulamentului n cauz.
(2) De la 1 septembrie 2009 coninutul minim de proteine va fi de 34 %.
[2] Anexa nr. 1, Lista metodelor de referin, Partea A

Produsul Parametrul Limita(1) Metoda de referin Not
Unt fr sare Grsime, min. 82 % m/m SM SR EN ISO 17189:2012
Ap, max. 16 % m/m SM SR EN ISO 3727-1:2012
SNF, max. 2 % m/m SM SR EN ISO 3727-2:2012
Acizi grai liberi 1,2 mmol/100 g grsime SM ISO 1740:2015
PV, max. 0,3 mechiv. oxigen/1000 g grsime SM ISO 3976:2015 Nota 1
Bacterii coliforme Nedetectabile n 1 g Anexa nr. 10 Nota 4
Grsime care nu provine din lapte Nedetectabil prin analiza trigliceridelor Anexa nr. 20
Marcatori de steroli Nedetectabili, -sitosterol 40 mg/kg Anexa nr. 8
Ali marcatori:
- vanilin Nedetectabil Anexa nr. 6
- etil esterul acidului carotenic 6 mg/kg Anexa nr. 7
- trigliceride ale acidului enantic
Nedetectabile Anexa nr. 5
Caracteristici de sensibilitate Cel puin 4 din 5 puncte pentru A, F i C Anexa nr. 4

Dispersia apei Cel puin 4 puncte Nota 2
Unt srat Grsime, min. 80 % m/m SM SR EN ISO 17189:2012
Grsime care nu provine din lapte Anexa nr. 20
Ap, max. 16 % m/m SM SR EN ISO 3727-1:2012
SNF (cu excepia srii), max. 2 % m/m SM SR EN ISO 3727-2:2012
Sare, max. 2 % m/m SM ISO 15648:2015
Marcatori:
- steroli A se vedea anexa nr. 8 Anexa nr. 8
- vanilin A se vedea anexa nr. 6 Anexa nr. 6
- etil esterul acidului carotenic A se vedea anexa nr. 7 Anexa nr. 7
A se vedea anexa nr. 5 Anexa nr. 5
Unt concentrat Grsime, min. 99,8 % m/m SM ISO 8851-3:2015

utilizat pentru Ap i SNF, max. 0,2 % m/m SM ISO 8851-1:2015 (ap)
fabricarea SM ISO 8851-2:2015 (SNF)
produselor de Acizi grai liberi 1,2 mmol/100 g grsime SM ISO 1740:2015
patiserie, ngheatei PV, max 0,5 mechiv. oxigen/1000 g grsime SM ISO 3976:2015 Nota 1
Grsime care nu provine din lapte Absent Anexa nr. 20
i altor produse
Arom
alimentare
Miros Proaspt
Altele Fr mirosuri strine
Absena agenilor de neutralizare, a
antioxidanilor i conservanilor
Marcatori:
- steroli A se vedea anexa nr. 8 Anexa nr. 8
- etil esterul acidului carotenic A se vedea anexa nr. 7 Anexa nr. 7
Unt concentrat Grsime, min. 96 % m/m SM ISO 8851-3:2015

destinat consumului Grsime care nu provine din lapte Anexa nr. 20
direct SNF, max. 2 % m/m SM SR EN ISO 3727-2:2012
Marcatori:
- stigmasterol (95 % m/m) 15 g/100 kg de unt concentrat Anexa nr. 8
- stigmasterol (85 % m/m) 17 g/100 kg de unt concentrat Anexa nr. 8
- trigliceride ale acidului enantic 10,34 g/100 t de unt concentrat Anexa nr. 5
- etil ester al acidului butiric i
stigmasterol
- etil esterul acidului butiric Nota 2
- etil esterul acidului butiric i
- anexa nr. 8 (stigmasterol)
trigliceridele acidului enantic - etil esterul acidului butiric Nota 2
- anexa nr. 5 (trigliceride ale
acidului enantic)
lecitin (E 322), max. 0,5 % m/m Nota 2
NaCl, max. 0,75 % m/m SM ISO 15648:2015
Acizi grai liberi 1,2 mmol/100 g grsime SM ISO 1740:2015
PV, max 0,5 mechiv. oxigen/1000 g grsime SM ISO 3976:2015 Nota 1
Arom Proaspt
Altele Absena agenilor de neutralizare, a
antioxidanilor i a conservanilor
Smntn Grsime, min. 35 % m/m SM EN ISO 2450:2014
Grsime care nu provine din lapte Anexa nr. 20
Marcatori:
- steroli A se vedea anexa nr. 8 Nota 2
- etil esterul acidului carotenic A se vedea anexa nr. 7 Nota 2
Brnz produs din Lapte de vac < 1 % m/m Anexa nr. 9

lapte de oaie i/sau
capr
Cazein acid Ap, max. 12,00 % m/m SM ISO 5550:2015
Grsime, max. 1,75 % m/m SM ISO 5543:2015
Aciditate liber, max. 0,30 ml soluie 0,1 N NaOH/g SM SR ISO 5547:2012
TBC, max. 30000/g SM EN ISO 4833-1:2014 Nota 3
SM EN ISO 4833-2:2014
Bacterii coliforme Absente n 0,1 g Anexa nr. 10 Nota 3
Therm., max. 5000/g SM EN ISO 4833-1:2014 Notele 3
SM EN ISO 4833-2:2014 i 4
Cazein cheag Ap, max. 12,00 % m/m SM ISO 5550:2015
Cenu, min. 7,50 % m/m SM SR ISO 5545:2012
SM EN ISO 4833-2:2014
SM EN ISO 4833-2:2014 i 4
Cazeinai Ap, max. 6,00 % m/m SM ISO 5550:2015
Proteine ale laptelui, min 88,00 % m/m SM SR ISO 5549:2012
Cenu, max. 6,50 % m/m SM ISO 5544:2015
SM SR ISO 5545:2012
Cenu insolubil SM ISO 5544:2015
Lactoz, max. 1,00 % m/m SM ISO 5548:2015
SM EN ISO 4833-2:2014
SM EN ISO 4833-2:2014 i 4
Furaje combinate i Ap (zar acid praf), max. 5 % m/m Anexa nr. 19
lapte praf degresat Proteine, min. 31,4 % m/m din materia uscat negras SM EN ISO 8968-1:2014
(SMP) (folosite n SM EN ISO 8968-3:2014
furaje) Ap (SMP), max. 5 % m/m SM EN ISO 5537:2014
Grsimi (SMP), max. 11 % m/m SM SR EN ISO 1736:2012
Zer nchegat (SMP) Absent Anexa nr. 13
Amidon (SMP) Absent Anexa nr. 17
Ap (amestecuri), max. 5 % din materia negras SM EN ISO 5537:2014
Grsime (amestecuri) SM SR ISO 6492:2012
Zer nchegat (amestecuri) Absent Anexa nr. 13
Coninutul SMP (din produsul final), 50 % m/m Anexa nr. 16
min
Grsime (din produsul final), min. 2,5 % m/m sau 5 % m/m SM SR ISO 6492:2012
Amidon (din produsul final), min. 2 % m/m Anexa nr. 17
Cupru (din produsul final) 25 ppm SM SR EN ISO 6869:2012
SPM (spray) Grsime, max. 1,0 % m/m SM SR EN ISO 1736:2012
Proteine, min. 34 m/m din materia uscat negras SM EN ISO 8968-1:2014
Ap, max. 3,5 % m/m SM EN ISO 5537:2014

Aciditate, max. 19,5 ml, 0,1 N NaOH, 10 g substane SM ISO 6091:2014
solide negrase
Lactai, max. 150 mg/100 g substane solide negrase SM EN ISO 8069:2014
Fosfataz Negativ SM EN ISO 11816-1:2014
Indicele insolubilitii, max. 0,5 ml la 240C SM STB ISO 8156:2015
Particule arse Disc A sau B (15,0 mg) Nota 2
TBC 40000/g SM EN ISO 4833-1:2014 Nota 3
SM EN ISO 4833-2:2014
Bacterii coliforme Negativ/0,1 g Anexa nr. 10 Nota 3
Zar Negativ Anexa nr. 14
Zer nchegat Negativ Anexa nr. 12
Zer acid Negativ Nota 2
Ageni antimicrobieni Anexa nr. 15
(1) Fr a se aduce atingere cerinelor prezentelor Cerine.
Not: Limitele stabilite n coloana a treia a tabelului sunt aplicate n cazul efecturii interveniilor de ctre autoritile competente pe piaa intern a
produselor lactate.
[3] Anexa I (art. 1), Partea B
Metodele de referin enumerate n partea B pot fi folosite pentru analiza produselor din domeniul reglementat de oricare dintre
regulamentele enumerate n coloana 1.
Regulamentul Produsul Codul Parametrul Limita Metoda de Not
Comisiei NC referin
Regulamentul Lapte i smntn din 0401 Grsime ( 6 % Limitele sunt cele ISO 1211:2001FIL
(CEE) lapte, neconcentrate, m/m) specificate n 1D:1996
nr. 2658/87 fr adaos de zahr sau descrierea codului
Regulamentul ali ndulcitori NC pentru produsul
(CE) respectiv,
nr. 2535/2001 specificate mai apoi,
Regulamentul dup caz, n
(CE) Regulamentul (CEE)
nr. 1282/2006 nr. 3846/87 al
Comisiei (JO L 366,
24.12.1987, p. 1),
partea 9 din
nomenclatura
pentru export sau
Regulamentul (CE)
nr. 2535/2001
(JO L 341,
22.12.2001, p. 29)
Grsime (> 6 % ISO 2450:1999FIL
m/m) 16C:1987
Lapte i smntn din 0402 Grsime (form ISO 1737:1999FIL
lapte, concentrate sau lichid) 13C:1987
cu adaos de zahr sau Grsime (form ISO 1736:2000FIL
ali ndulcitori solid) 9C:1987
Proteine ISO 8968-
123:2001FIL 20-
123:2001
Sucroz (coninut ISO 2911:2004 FIL
normal) 35:2004
Sucroz (coninut Nota 2
sczut)
Solide (SCM) ISO 6734:1989FIL
15B:1991
Solide (EMC) ISO 6731:1989FIL
21B:1987
Ap (lapte praf) ISO 5537:2004FIL
26:2004
Ap (smntn Anexa XVIII
praf)
Lapte acru, lapte 0403 Grsime ISO 1211:2001FIL
sau smntn 1D:1996
fermentate sau ISO 1736:2000FIL
acrite, concentrate
sau 9C:1987
neconcentrate, cu ISO 2450:1999FIL
adaos de zahr 16 C:1987
sau ali ndulcitori ISO 7208:1999FIL
22B:1987
ISO 8262-
3:2005FIL 124-
3:2005
Proteine ISO 8968-
123:2001FIL 20-
123:2001
Sucroz (coninut ISO 2911:2004FIL
normal) 35:2004
sczut)
Ap (zar acid Anexa XIX
praf)
Ap (zar dulce ISO 5537:2004FIL
praf) 26:2004
Solide (alte Metode aprobate
produse) de autoritatea
competent
Zer, chiar 0404 Grsime ISO 1736:2000FIL
concentrat sau cu 9C:1987
adaos de zahr ISO 2450:1999FIL
sau de ali 16C:1987
ndulcitori; produse ISO 7208:1999FIL
obinute din compui 22B:1987
naturali ai laptelui
Proteine ISO 8968-
123:2001FIL 20-
123:2001
Sucroz (coninut ISO 2911:2004FIL
normal) 35:2004
sczut)
0404 90 Proteine ISO
8968 1/2 2001FIL
20-1/2:2001
Ap FIL 21B:1987
Solide ISO 6734:1989FIL
15B:1991
(Produse ISO 6731:1989FIL
concentrate) 21B:1987
Unt i alte grsimi 0405 Grsime (n cazul ISO 17189:2003FIL
care provin din lapte; n care 85 % 194:2003
past din lapte pentru m/m)
tartine Unt Ap ISO 3727-
1:2001FIL 80-
1:2001
SNF ISO 3727-
2:2001FIL 80-
2:2001
NaCl ISO 15648:2004FIL
179:2004
Grsime (n cazul FIL 24:1964
n care > 99 %
m/m)
Ulei de unt Ap (n cazul n ISO 5536:2002FIL
care grsimea < 23:2002
99 % m/m)
Brnz i ca 0406 Grsime ISO 1735:2004FIL
5:2004
Solide ISO 5534:2004FIL
4:2004
Solide (Urd) ISO 2920:2004FIL
58:2004
NaCl ISO 5943:2006FIL
88:2006
Lactoz ISO 5765-
1/2:2002FIL 79-
1/2:2002
Regulamentul Furaje combinate 2309 Lactoz Anexa XI
(CEE)
nr. 2658/87
Observaii la lista metodelor de referin ale Uniunii Europene:

Nota 1: Izolarea grsimii din lapte conform ISO 1740:1991 (la adpost de lumin).
Nota 2: Nu s-a stabilit nicio metod de referin. Metode aprobate de autoritatea competent.
Nota 3: Proba este preparat conform ISO 8261:2001FIL 122:2001.
Nota 4: Incubare timp de 48 de ore la temperatur de 55 C, acordndu-se atenie prevenirii uscrii mediului de cultur.
Nota 5: % m/m SNF = % m/m solide % m/m grsime.
Nota 6: Directiva 84/4/CEE a Comisiei.
Nota 7: Regulamentul (CE) nr. 2799/1999 al Comisiei (JO L 340, 31.12.1999, p. 3-27).
Nota 8: Directiva 78/633/CEE a Comisiei.
[4] Anexa nr. 1, Metodele de referin enumerate n partea B pot fi folosite pentru analiza laptelui i produselor lactate, Partea B
Produsul Codul NC Parametrul Limita Metoda de referin Not
Lapte i smntn din lapte, 0401 Grsime ( 6 % m/m) Limitele sunt cele SM EN ISO 1211:2015
neconcentrate, fr adaos de specificate n
zahr sau ali ndulcitori descrierea codului NC
pentru produsul
respectiv
Grsime (> 6 % m/m) SM EN ISO 2450:2014
Lapte i smntn din lapte, 0402 Grsime (form lichid) SM EN ISO 1737:2015
concentrate sau cu adaos de Grsime (form solid) SM SR EN ISO 1736:2012
zahr sau ali ndulcitori Proteine SM EN ISO 8968-1:2014
SM EN ISO 8968-3:2014
Sucroz (coninut normal) SM ISO 2911:2015
Sucroz (coninut sczut) Nota 2
Solide (SCM) SM ISO 6734:2015
Solide (EMC) SM ISO 6731:2014
Ap (lapte praf) SM EN ISO 5537:2014
Ap (smntn praf) Anexa nr. 18
Lapte acru, lapte i smntn 0403 Grsime SM EN ISO 1211:2015
covsite, iaurt, chefir i alte SM SR EN ISO 1736:2012
sortimente de lapte i SM EN ISO 2450:2014
smntn fermentate sau SM EN ISO 7208:2014
acrite, chiar concentrate, SM SR ISO 8262-3:2012
sau cu adaos de zahr sau Proteine SM EN ISO 8968-1:2014
ali ndulcitori, sau SM EN ISO 8968-3:2014
aromatizate, sau cu adaos Sucroz (coninut normal) SM ISO 2911:2015
de fructe, nuci sau cacao Sucroz (coninut sczut) Nota 2
Ap (zar acid praf) Anexa nr. 19
Ap (zar dulce praf) SM EN ISO 5537:2014
Solide (alte produse) Nota 2
Zer, chiar concentrat sau cu 0404 Grsime SM SR EN ISO 1736:2012
adaos de zahr sau de ali SM EN ISO 2450:2014
ndulcitori; produse SM EN ISO 7208:2014
obinute din compui Proteine SM EN ISO 8968-1:2014
naturali ai laptelui, chiar cu SM EN ISO 8968-3:2014
adaos de zahr sau ali Sucroz (coninut normal) SM ISO 2911:2015
ndulcitori, nedenumite i Sucroz (coninut sczut) Nota 2
0404 90 Proteine SM EN ISO 8968-1:2014
necuprinse n alt parte
Ap Nota 2
Solide SM ISO 6734:2015
(Produse concentrate) SM ISO 6731:2014
Unt i alte grsimi care 0405 Grsime (n cazul n care 85 SM SR EN ISO 17189:2012
provin din lapte; past din % m/m)
lapte pentru tartine Unt Ap SM SR EN ISO 3727-1:2012
SNF SM SR EN ISO 3727-2:2012
NaCl SM ISO 15648:2015
Grsime (n cazul n care > 99 SM SR EN ISO 17189:2012
% m/m)
Ulei de unt Ap (n cazul n care < 99 % SM EN ISO 5536:2014
m/m)
Brnz i ca 0406 Grsime SM EN ISO 1735:2014
Solide SM SR EN ISO 5534:2014
Solide (Urd) SM ISO 2920:2015
NaCl SM SR EN ISO 5943:2012
Lactoz SM ISO 5765-1:2015
SM ISO 5765-2:2015
Preparate de tipul celor 2309 Lactoz Anexa 21
folosite pentru hrana
animalelor
Observaii la lista metodelor de referin:
Nota 1: Izolarea grsimii din lapte conform SM ISO 1740:2015 (la adpost de lumin).
Nota 2: Nu s-a stabilita nici o metod de referin.
Nota 3: Proba este preparat conform SM SR EN ISO 6887-5:2014.
Nota 4: Incubate timp de 48 de ore la temperatura de 550C, acordndu-se atenie prevenirii uscrii mediului de cultur.
Nota 5: % m/m SNF = % m/m solide - % m/m grsime.
[5]Anexa IV (art. 4) Evaluarea senzorial a untului, Tabelul 1 Punctajul pentru unt
Consisten Arom + miros

Aspect
Puncte Nr. (1) Observaii Puncte Nr. (2) Observaii Puncte Nr. (3) Observaii
(clas de (clas de
calitate) calitate)
5 Foarte bine 5 Foarte bine 5 Foarte bine
tipul ideal tipul ideal tipul ideal
cea mai bun calitate cea mai bun calitate cea mai bun calitate
(substan uscat egal) (bine tartinabil) (cea mai fin arom

absolut pur)
4 Bine (2) 4 Bine (2) 4 Bine (2)
nu exist defecte evidente 17 tare nu exist defecte evidente
18 moale
3 Acceptabil (mici defecte) 3 Acceptabil (mici defecte) 3 Acceptabil (mici defecte)
1 nelegat (necompact), umed 14 dezemulsionat, friabil, 21 impur

sfrmicios
2 neuniform, n dou culori 22 arome strine
pstos, de consistena
3 cu dungi 15 aluatului, gras 25 acid
4 pestri, marmorat lipicios 27 arom de copt, arom de

ars
5 cu aspect granulat 16 tare
arom de furaj
6 separare a uleiurilor 17 moale 33
aspru, amar
7 supracolorat 18 34
suprasrat
8 textur slab, deschis 35
2 Slab (defecte evidente) 2 Slab (defecte evidente) 2 Slab (defecte evidente)
1 nelegat (necompact), umed 14 dezemulsionat, friabil, 21 neclar

sfrmicios
3 cu dungi 22 arome strine
pstos, de consistena
4 pestri, marmorat 15 aluatului, gras 23 vechi
5 cu aspect granulat lipicios 25 acid
6 separare a uleiurilor 16 tare 32 miros oxidat, miros

metalic
10 materii strine 17 moale
arom de furaj
11 mucegit 18 33
aspru, amar
12 sare nedizolvat 34
suprasrat
35
mucegit
36
miros de substane
38 chimice
1 Foarte slab (defecte mari) 1 Foarte slab (defecte mari) 1 Foarte slab (defecte mari)
1 nelegat (necompact), umed 14 dezemulsionat, friabil, 22 arome strine

sfrmicios
3 cu dungi 24 brnzos, miros de brnz
pstos, de consistena lactic
4 pestri, marmorat 15 aluatului, gras
acid
5 cu aspect granulat lipicios 25
spumos
6 separare a uleiurilor 16 tare 26
miros de mucegai
7 supracolorat 17 moale 28 rnced
9 granulat 18 29 uleios, cu gust de pete
10 materii strine 30 cu aspect/gust de seu
11 mucegit 31 miros oxidat, miros

metalic
12 sare nedizolvat 32
aspru, amar
suprasrat
34
mucegit, putred
35
cu aspect de mal
36
miros de substane
37 chimice
38
(1) Tabelul 2.
(2) Defectele menionate la bun reprezint numai deviaii foarte mici de la tipul ideal.
[6] Anexa nr. 4 Evaluarea senzorial a untului, pct. 8. Evaluarea valorii fiecrei caracteristici, subpunctul 2)
Tabelul 1. Punctajul pentru unt
Aspect Consisten Arom+miros
Puncte Nr. Observaii Puncte Nr. Observaii Puncte Nr. Observaii

(1) (clas de (1) (clas de (1)
calitate) calitate)
5 Foarte bine 5 Foarte bine 5 Foarte bine
tipul ideal tipul ideal tipul ideal
cea mai bun calitate cea mai bun calitate cea mai bun calitate
(substan uscat egal) (bine tartinabil) (cea mai fin arom absolute
pur)
4 Bine (2) 4 Bine (2) 4 Bine (2)
nu exist defecte evidente 16 tare nu exist defecte evidente
17 moale
3 Acceptabil (mici defecte) 3 Acceptabil (mici defecte) 3 Acceptabil (mici defecte)
1 nelegat (necompact), umed 13 dezemulsionat, friabil, 19 impur

sfrmicios
2 neuniform, n dou culori 20 arome strine
pstos, de consistena aluatului,
3 cu dungi 14 gras 23 acid
4 pestri, marmorat lipicios 25 arom de copt, arom de ars

5 cu aspect granulat 15 tare 31 arom de furaj
6 separare a uleiurilor 16 moale 32 aspru, amar
7 supracolorat 17 33 suprasrat
8 textur slab, deschis
2 Slab (defecte evidente) 2 Slab (defecte evidente) 2 Slab (defecte evidente)
1 nelegat (necompact), 13 dezemulsionat, friabil, 19 impur

sfrmicios
umed 20 arome strine
pstos, de consistena aluatului,
3 cu dungi 14 gras 21 vechi
4 pestri, marmorat lipicios 23 acid
5 cu aspect granulat 15 tare 30 miros oxidat, miros metalic
6 separare a uleiurilor 16 moale 31 arom de furaj
7 supracolorat 17 32 aspru, amar
9 granulat 33 suprasrat
10 materii strine 34 mucegit, putred
11 mucegit 36 miros de substane chimice
12 sare nedizolvat
1 Foarte slab (defecte mari) 1 Foarte slab (defecte mari) 1 Foarte slab (defecte mari)
dezemulsionat, friabil,
1 nelegat (necompact), 13 sfrmicios 20 arome strine
umed pstos, de consistena aluatului, 22 brnzos, miros de brnz lactic

gras
3 cu dungi 14 23 acid
lipicios
4 pestri, marmorat 24 spumos
tare
5 cu aspect granulat 15 26 miros de mucegai
moale
6 separare a uleiurilor 16 27 rnced
7 supracolorat 17 28 uleios, cu gust de pete
9 granulat 29 cu aspect/gust de seu
10 materii strine 30 miros oxidat, miros metalic
11 mucegit 32 aspru, amar
12 sare nedizolvat 33 suprasrat
34 mucegit, putred
35 cu aspect de mal
36 miros de substane chimice
(1) Punctul 10.

(2) Defectele menionate la bun reprezint numai deviaii foarte mici de la tipul ideal.
[7] Tabelul 1. Rezultatele statistice ale metodelor TG + FAME*

Proba A R1 R2 Medie Nr. de laboratoare reinute dup eliminarea valorilor aberante 8
RENNES FR1 11,0 11,1 11,1 Nr. de valori aberante 1
Valori aberante D
RIKILT NL 11,2 11,2 11,2
Valoare medie 11,3
ZPLA DE* 11,6 11,8 11,7 Valoare real 11,0
0,09
ADAS GB 11,4 11,2 11,3 Deviaia standard a repetabilitii (Sr)
0,80
Deviaia standard relativ a repetabilitii (RSDr %)
CNEVA FR2 11,4 11,4 11,4 0,26
Repetabilitate r (95 %)
2,24
LODI IT 11,1 11,3 11,2 Repetabilitatea relativ r %
0,23
Deviaia standard a reproductibilitii (SR) 2,04
EELA FI 11,3 11,2 11,3
Deviaia standard relativ a reproductibilitii (RSDR %) 0,84
ISPRA UE* 11,0 11,0 11,0 Reproductibilitate R (95 %) 5,71
Reproductibilitatea relativ R %
D.V.F.A. DK 13,3 11,8 12,6
Proba B R1 R2 Medie Nr. de laboratoare reinute dup eliminarea valorilor aberante 8

Valori aberante DK
RIKILT NL 13,5 13,3 13,4
Valoare medie 13,4
ZPLA DE* 14,0 13,8 13,9 Valoare real 13,5
0,14
ADAS GB 13,4 13,5 13,5 Deviaia standard a repetabilitii (Sr)
1,04
Deviaia standard relativ a repetabilitii (RSDr %)
CNEVA FR2 13,3 13,4 13,4 0,40
Repetabilitate r (95 %)
2,91
LODI IT 13,9 13,5 13,7 Repetabilitatea relativ r %
0,35
EELA FI 13,4 13,2 13,3
ISPRA UE* 13,2 13,3 13,3 Reproductibilitate R (95 %) 7,31
D.V.F.A. DK 14,1 14,8 14,5 Reproductibilitatea relativ R %
Tabelul 2. Rezultatele statistice ale metodelor TG + FAME*

Proba C R1 R2 Medie Nr. de laboratoare reinute dup eliminarea valorilor aberante 8
RIKILT NL 9,2 9,3 9,3 Valori aberante DK
ZPLA DE* 9,2 9,4 9,3 Valoare medie 9,3
ADAS GB 9,5 9,3 9,4 Valoare real 9,3
CNEVA FR2 9,4 9,4 9,4 Deviaia standard a repetabilitii (Sr) 0,14
LODI IT 9,2 9,5 9,4 Deviaia standard relativ a repetabilitii (RSDr %) 1,50
EELA FI 9,4 9,6 9,5 Repetabilitate r (95 %) 0,40
ISPRA UE* 9,4 9,3 9,4 Repetabilitatea relativ r % 4,20
D.V.F.A. DK 10,7 10,9 10,8 Deviaia standard a reproductibilitii (SR) 0,17
Reproductibilitate R (95 %) 0,47
Reproductibilitatea relativ R % 5,10
Proba D R1 R2 Medie Nr. de laboratoare reinute dup eliminarea valorilor aberante 8
RENNES R1 1,6 1,6 1,6 Nr. de valori aberante 1
ZPLA DE* 2,3 2,3 2,3 Valoare medie 2,1
ISPRA UE* 2,3 2,3 2,3 Repetabilitatea relativ r % 10,67
D.V.F.A. DK 3,4 2,9 3,2 Deviaia standard a reproductibilitii (SR) 0,24
Tabelul 3. Rezultatele statistice ale metodelor TG + FAME*

Proba A R1 R2 Medie Nr. de laboratoare reinute dup eliminarea valorilor aberante 6
RIKILT NL 11,2 11,2 11,2 Valori aberante D
ADAS GB 11,4 11,2 11,3 Valoare medie 11,2
CNEVA FR2 11,4 11,4 11,4 Valoare real 11,0
LODI IT 11,1 11,3 11,2 Deviaia standard a repetabilitii (Sr) 0,09
EELA FI 11,3 11,2 11,3 Deviaia standard relativ a repetabilitii (RSDr %) 0,80
D.V.F.A. DK 13,3 11,8 12,6 Repetabilitate r (95 %) 0,25
Repetabilitatea relativ r % 2,24
Proba B R1 R2 Medie Nr. de laboratoare reinute dup eliminarea valorilor aberante 6
Tabelul 4. Rezultatele statistice ale metodei TG

Proba C R1 R2 Medie Nr. de laboratoare reinute dup eliminarea valorilor aberante 6
Proba D R1 R2 Medie Nr. de laboratoare reinute dup eliminarea valorilor aberante 6
Valoare medie 2,1
D.V.F.A. DK 3,4 2,9 3,2 Repetabilitatea relativ r % 12,01
Tabelul 5. Repetabilitate i reproductibilitate (cu FAME)

Nr. de laboratoare Valoare maxim Repetabilitate Reproductibilitate
excepional Sr (95 %) SR (95 %)
Proba A 8 1 0,09 0,23
Proba B 8 1 0,14 0,35
Proba C 8 1 0,14 0,17
Proba D 8 1 0,08 0,24
Valoare colectiv 0,116 0,256
R R
Valoare colectiv* 2,8 0,324 0,716
CrD95 = 0,40
Puritate minim declarat pentru trienantat = 95 %
Limit minim declarat pentru trienantat n grsimea din unt = 11 kg/t
Lundu-se n considerare diferena critic pentru un nivel de probabilitate de 95 %, media celor dou rezultate nu este mai mic dect:
10,05 kg/t, n cazul n care se ncorporeaz trienantat cu o puritate de 95 %.
Repetabilitate i reproductibilitate (fr FAME)

Nr. de laboratoare Valoare maxim Repetabilitate Reproductibilitate
excepional Sr (95 %) SR (95 %)
Proba A 6 1 0,09 0,13
Proba B 6 1 0,15 0,33
Proba C 6 1 0,15 0,19
Proba D 6 1 0,09 0,25
Valoare colectiv 0,124 0,237
r R
Valoare colectiv* 2,8 0,347 0,663
CrD95 = 0,36
Puritate minim declarat pentru trienantat = 95 %
Limit minim declarat pentru trienantat n grsimea din unt = 11 kg/t
Lundu-se n considerare diferena critic pentru un nivel de probabilitate de 95 %, media celor dou rezultate nu este mai mic dect:
10,09 kg/t, n cazul n care se ncorporeaz trienantat cu o puritate de 95 %.

Figura 1 ( 8 )
Rezultate experimentale: Proba A
Rezultate experimentale: Proba B

Rezultate experimentale: Proba C
Rezultate experimentale: Proba D

Figura 2. Deviaia standard a repetabilitii i a reproductibilitii la diferite niveluri (TG + FAME)
Figura 3. Deviaia standard a repetabilitii i a reproductibilitii la diferite niveluri (TG)
Figura 4. Exemplu folosind un injector n coloan

Tabelul de Concordanta

Încărcat de

Informații document

Titlu original

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Tabelul de Concordanta

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Tabelul de concordan

Statele membre informeaz Comisia cu

Capitolul II. Dispoziii generale. Pct. Compatibil - Ministerul Din momentul

Capitolul II. Dispoziii generale. Pct. Compatibil - Ministerul Din momentul

Capitolul II. Dispoziii generale. Pct. Compatibil - Ministerul Din momentul

Capitolul II. Dispoziii generale. Pct. Compatibil - Ministerul Din momentul

Capitolul II. Dispoziii generale. Pct. Compatibil - Ministerul Din momentul

Capitolul II. Dispoziii generale. Pct. Compatibil - Ministerul Din momentul

n cazul n care niciuna dintre cerinele

Capitolul II. Dispoziii generale. Pct. Compatibil - Ministerul Din momentul

Capitolul II. Dispoziii generale. Pct. Compatibil - Ministerul Din momentul

Capitolul II. Dispoziii generale. Pct. Compatibil - Ministerul Din momentul

Capitolul II. Dispoziii generale. Pct. Compatibil - Ministerul Din momentul

Capitolul II. Dispoziii generale. Pct. Compatibil - Ministerul Din momentul

Trimiterile la regulamentul abrogat se

n Hotrrea Guvernului. Pct. 2. Parial Conform prevederilor Ministerul Din momentul

A se consulta actualul standard

Anexa nr. 4 Evaluarea senzorial a Compatibil - Ministerul Din momentul

Clasificare nseamn clasificarea

Documente de control: documentele

Camera trebuie dotat cu un sistem

- subiecii nu au voie s fumeze, s

Anexa nr. 4 Evaluarea senzorial a Compatibil - Ministerul Din momentul

A se consulta partea 7 Nomenclator i

- n cazurile n care nu se obine

FIL 99C:1997 Evaluarea senzorial a

ISO/DIS 22935 FIL 99 Standardul

ISO 8586-1 Analiza senzorial

ISO 8589 Analiza senzorial Orientri

FIL 112A:1989 Untul Determinarea

Anexa nr. 4 Evaluarea senzorial a Compatibil - Ministerul Din momentul

Anexa nr. 5 Determinarea Compatibil - Ministerul Din momentul

Anexa nr. 5 Determinarea Compatibil - Ministerul Din momentul

Not: S-a constatat de asemenea c

4.3. Trigliceride etalon ale acidului

4.4. Sulfat de sodiu, anhidru (Na2SO4)

Anexa nr. 5 Determinarea Parial Actul naional cu Ministerul Din momentul

5.7.2.1. Exemplu de condiii aplicabile

- cantitatea din proba injectat: 1 l.

5.7.2.2. Exemplu de condiii aplicabile

5.8. Sering pentru injectare, cu

Prelevarea probelor nu face parte din

Wt = greutatea grsimii prelevate (g);

unde F este coninutul de grsime al

Diferenele absolute dintre dou

Anexa V (art. 5) Determinarea - Incompatibil Prevederi UE - -

Anexa nr. 6 Determinarea Compatibil - Ministerul Din momentul

3.5. Coloan analitic (aproximativ

3.6. Coloan de control (aproximativ

3.7. Centrifug care opereaz la 2 000

Anexa nr. 6 Determinarea Compatibil - Ministerul Din momentul

4.5.2. Soluie etalon de vanilin

Se pipeteaz 5 ml de soluie stock de

4.5.3. Metanol, calitate HPLC

4.5.4. Acid acetic, glacial

4.5.5. Ap, calitate HPLC

4.5.6. Faza mobil HPLC

Se amestec 300 ml de metanol (4.5.3)

Anexa nr. 6 Determinarea Compatibil - Ministerul Din momentul

Anexa nr. 6 Determinarea Compatibil - Ministerul Din momentul

20= coeficientul de diluare a probei

0,96= factorul de corecie pentru

Not: n locul suprafeei vrfului se