2/4/2016

Metode imunochimice

EIA Enzyme Immunoassay

ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay
FEIA Fluoro Enzyme Immunoassay
RIA Radio Immunoassay
CLIA Chemiluminescence Immunoassay
ECLIA Electrochemiluminescence Immunoassay
MEIA Microparticle Enzyme Assay
CMIA Chemiluminescence Microparticle Assay

Catalina Pisoschi curs rezidenti medicina de laborator 2014

Metodele imunochimice folosite intens n chimia clinic

- specifice i sensibile, versatile
- bazate pe interacia puternic, nalt
specific, dintre antigen i anticorp:

Ag + Ac = AgAc

Antigene molecule cu masa > 1000 Da capabile s induc sinteza Ac

Haptene molecule cu masa molec. mic care nu induc producerea Ac;
- Ac sunt obinui utiliznd derivai hapten - proteine
(de ex., BSA etc)

Catalina Pisoschi curs rezidenti medicina de laborator 2014

1
 2/4/2016

Complexul AgAc poate fi detectat prin precipitare

Pentru cuantificare n soluie - se adaug trasori variai:
- radioactivi radioimmunoassay
- enzime enzyme immunoassay
- fluoresceni fluorescent assay
- chemiluminesceni chemiluminescent assay

Cuantificarea analit n prob msurarea semnalului

trasorului legat de Ac sau Ag i interpolare rezultat n curba de
etalonare

Substraturi diferite

Detectare semnal - diferit

spectrofotometrie
- fluorescen
- radioactivitate
- chemiluminiscen

Catalina Pisoschi curs rezidenti medicina de laborator 2014

Metode imunochimice: - sistem omogen/sistem heterogen

- competitive/necompetitive
- directe/indirecte/sandwich

Sistem omogen reacia Ag-Ac se produce n soluie

- nu se separ trasorul legat de fracia liber
- folosit dac semnalul trasorului se modific
dup legare

Sistem heterogen Ac/Ag pe faz solid (plac, tub, microsfere)

- separare ntre fracia de trasor liber i legat
- mai precise

Catalina Pisoschi curs rezidenti medicina de laborator 2014

2
 2/4/2016

Metode competitive Ag de dozat i un derivat marcat (Ag*) intr n

competiie pentru un nr. limitat de molecule Ac
- fracia de trasor legat la Ac e invers proporional
cu concentraia Ag

[Ac] < [Ag] + [Ag*]

Catalina Pisoschi curs rezidenti medicina de laborator 2014

Metode necompetitive - captura Ag de un exces de Ac specific

- cuantificare cu trasor, Ac*
- cantit. de trasor e proporional cu Ag
- pentru molecule capabile s lege doi Ac

Catalina Pisoschi curs rezidenti medicina de laborator 2014

3
 2/4/2016

Metoda necomp. directa Ag de dozat se leag de plac

- se adaug Ac primar conjugat cu trasor (enzima)

Metoda necomp. indirecta Ag de dozat se leag de plac

- se adaug Ac primar
- se adaug Ac secundar marcat cu trasor (enzima)

Catalina Pisoschi curs rezidenti medicina de laborator 2014

Catalina Pisoschi curs rezidenti medicina de laborator 2014

4
 2/4/2016

Metode necompetitive sandwich Ac de captur imobilizat

- Ac* trasor legat de o enzim
- [Ac*] > [Ag]
- [Ac] > [Ag]

Catalina Pisoschi curs rezidenti medicina de laborator 2014

Catalina Pisoschi curs rezidenti medicina de laborator 2014

5
 2/4/2016

Catalina Pisoschi curs rezidenti medicina de laborator 2014

Detecia - diferit
EIA/ELISA - spectrofotometric

Catalina Pisoschi curs rezidenti medicina de laborator 2014

6
 2/4/2016

EIA/ELISA - fluorescen

Catalina Pisoschi curs rezidenti medicina de laborator 2014

RIA analiz radioimun

Catalina Pisoschi curs rezidenti medicina de laborator 2014

7
 2/4/2016

Chemiluminiscena - o enzim convertete substratul la un produs

de reacie ce emite fotoni (n loc s apar o culoare vizibil) sbst.
este excitat prin oxidare, formeaz intermediari care emit fotoni la
revenirea n stare fundamental

Catalina Pisoschi curs rezidenti medicina de laborator 2014

Chemiluminiscena variant a ELISA standard

Catalina Pisoschi curs rezidenti medicina de laborator 2014

8
 2/4/2016

In prezena H2O2, peroxidaza catalizeaz oxidarea unei hidrazide ciclice (ex. luminol) la
un produs de reacie excitat, care emite fotoni la revenirea n stare fundamental

Catalina Pisoschi curs rezidenti medicina de laborator 2014

Detecia prin chemiluminiscen

Catalina Pisoschi curs rezidenti medicina de laborator 2014

9
 2/4/2016

Electrochemiluminiscena Elecsys Roche

- Bazat pe utilizarea unui complex ruteniu-tripropilamin
- Reacia de chemiluminicen pentru detectarea complexului Ag-Ac este iniiat de
aplicarea unui voltaj probei reacie controlat, performan superioar

Catalina Pisoschi curs rezidenti medicina de laborator 2014

Tipuri de ECLIA:
Competitiv pentru antigene analit foarte mici T3, T4, cortizol
Sandwich pentru analii mari FSH, LH, TSH
Bridging detectare anticorpi n prob IgG, IgA, IgM

Catalina Pisoschi curs rezidenti medicina de laborator 2014

10
 2/4/2016

Microparticle enyzme immunoassay (MEIA)

Catalina Pisoschi curs rezidenti medicina de laborator 2014

Nanoparticle enyzme immunoassay

Catalina Pisoschi curs rezidenti medicina de laborator 2014

11
 2/4/2016

Catalina Pisoschi curs rezidenti medicina de laborator 2014

12