Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Metode spectrometrice
1
1/28/2016
Aplicaiile metodei:
- analiza oligoelementelor din lichide biologice
2
1/28/2016
3
1/28/2016
4
1/28/2016
5
1/28/2016
Metode enzimatice
cupleaz reacia parametrului cu reacii enzimatice ce permit cuantificarea
colorimetric sau n UV
Colorimetric
H2O2 + amestec cromogen = chinonimin + H2O
culoare roie
H3C OH
NH2 H3C N O
POD
2H2O2 + N +
N + 4H2O
N O N O
H3C H3C
C6H5 C6H5
Ex. Dozarea glucozei serice
CH2OH COOH
H O OH H O
H GOD
+ O2 H O + H2O 2
OH H OH H
OH OH
H
H OH H OH
gluconolacton
POD
H2O2 + CRGH2 H O + CRG
2 2
Metode enzimatice
Spectrofotometric
SH2 + NAD+(NADP+) = S + NADH, H+ (NADPH, H+)
substrat substrat
redus oxidat
GlDH
6
1/28/2016
Turbidimetria i nefelometria
Trecerea unui fascicul luminos de intensitate I0 prin cuv cu particule solide
(precipitat, suspensii, emulsii) e nsoit de difuzie (mprtiere radiaie)
Det. intensitii fasc. transmis pe direcia fasciculului incident turbidimetrie
Det. intensitii luminii difuzate, Id, ntr-un unghi de 900 sau 450 fa de
direcia fasciculului incident nefelometrie
La det. nefelometrice, Id depinde de numrul de particule i de volum
Pentru particule mici, de form sferic, Id este dat de legea lui Rayleigh:
Id = I0 k Nv2/4
unde: N numr particule din unitatea de volum; v volum particul;
k constant dependent de indicele de refracie al particulelor
Dac particulele au volum constant - pentru o , Id ~ N, deci Id ~ concentraia
Aplicaiile metodei:
- analiza proteine, vitamine, aminoacizi, medicamente, toxice, produi de peroxidare
7
1/28/2016
Aplicaiile metodei:
- analiza proteine, vitamine, medicamente,
substane toxice
Metode cromatografice
M. cromatografice metode de separare bazate pe diferena de
partiie ntre o faz mobil i o faz
staionar
Faza staionar ntr-o coloan sau pe o plac suport
Faza mobil un gaz sau un lichid
8
1/28/2016
Cromatografia de afinitate
Reacia Atg-Atc-complex
9
1/28/2016
Gel filtrare
10
1/28/2016
Gaz cromatografie
11
1/28/2016
Sample
Metode electroforetice
Electroforeza - migrare particule ncrcate n cmp electric spre electrodul opus
ca sarcin electric
Dac o sarcin electric Q este forat s migreze ntr-un mediu vscos (lichid sau gel)
sub aciunea unui cmp electric E, fora motrice care acioneaz asupra particulei n
micare cu vitez constant este egal cu rezistena la frecare f pe care particula o
ntmpin la deplasarea ei prin mediul electroforetic: f=QE
n soluie - rezistena la frecare f=6rv - legea lui Stokes
unde: r - raza particulei considerat sferic, v - viteza de migrare a acesteia,
- vscozitatea mediului.
n geluri - rezistena la frecare depinde de densitatea gelului, mrimea i forma
particulei etc.
QE=6rv, de unde v= QE/ 6r
Mobilitatea electroforetic m - d parcurs de particul n timpul t sub influena
gradientului de potenial E: m=d/tE sau m=v/E
m depinde de: mrime, form, conc., sarcin electric, grad de hidratare i
disociere a particulei ce migreaz, vscozitate, pH, temperatur, trie ionic mediu,
trie cmp de migrare aplicat, timp de migrare
Relaia dintre m, viteza de migrare, tria cmpului, pH, tria ionic sunt valabile
att pentru electroforeza n curgere liber ct i pentru cea de zon
12
1/28/2016
Electroforegrama serului
13
1/28/2016
Metode electrometrice
Folosesc electrochimia n scopuri analitice
Fac legtura ntre mrimea semnalului (tensiune, curent) provenit dintr-o celul
electrochimic i activitatea sau conc. unor specii chimice particulare din celul
Tehnicile electrometrice fundamentale: poteniometrice; voltametrice; coulometrice;
amperometrice
Metode poteniometrice - msurare diferen de potenial dintre doi electrozi imersai n
soluie, n condiiile unui curent zero - electrozi i soluie - celul electrochimic
Fiecare electrod din celula electrochimic - caracterizat de o reacie de semicelul
cu un potenial corespunztor
Prin celul nu trece curent n timpul msurrii potenialului, nu are loc nici o reacie
electrochimic net - metod de echilibru
Tehnicile poteniometrice permit msurtori precise ale activitii, concentraiilor sau
coeficienilor de activitate ale multor specii chimice
Concentraia efectiv a speciilor depinde de interaciile stabilite cu alte specii i poate
fi mai mic, egal sau mai mare dect concentraia molar actual a speciilor
Concentraia efectiv - activitatea speciilor, legat de conc. molar printr coeficient
de activitate a1, dat de relaia: a1 = C1
unde: a1 este activitatea speciei ionice;
= coeficientul de activitate; C1 = concentraia molar a speciei.
Metodele cel mai des utilizate n aplicaii de laborator clinic
14
1/28/2016
Electrozi ion-selectivi
- generarea i msurarea unei tensiuni care s depind de concentraia ionului
- principiu asemntor cu cel pentru determinarea pH-ului
- electrodul ion-selectiv - format dintr-o membran (sticl, gel) cu prop. de schimbtor
de ioni, care se afl n echilibru cu o soluie electrolitic specific pentru un ion
- ionii din soluia de analizat n care este introdus electrodul determin o diferen de
potenial a crei mrime este proporional cu conc. ionului cf. relatiei Nernst
Sisteme automatizate
15
1/28/2016
PIPETARE
PIPETAREPROBA
PROBA IN
CUVA
PIPETARE REACTIVI
MONITORIZAREA ABSORBTIEI
16
1/28/2016
17
1/28/2016
18
1/28/2016
19
1/28/2016
Compartiment de reactivi
20
1/28/2016
21
1/28/2016
nregistrarea rezultatelor
- imprimare
- transmitere de la analizor la sistemul de management al
informaiei din laborator
- validare
- evaluarea probelor n afara intervalului
22
1/28/2016
23