METODA SPECTROFOTOMETRIC DE ANALIZ

Spectrofotometria este o ramur a spectroscopiei care se ocup cu msurarea cantitativ a proprietilor

de reflexie sau de transmisie ale unui material (substan) n funcie de lungimea de und. Termenul de
spectrofotometrie este specific msurtorilor n care este utilizat radiaia electromagnetic din spectrul
infrarou (IR), vizibil (VIS) i ultraviolet (UV), ea fcnd astfel parte din spectroscopia electromagnetic.
n practic, metoda se bazeaz pe proprietatea de absorbie sau de transmisie a compuilor chimici la
diverse lungimi de und. Astfel, spectrofotometria este folosit att ca metod calitativ pentru
identificarea prezenei unei substane ntr-o soluie, ct i cantitativ pentru identificarea concentraiei
unei substane dintr-o soluie. De asemenea, metoda poate fi utilizat pentru determinarea constantei de
echilibru a unei soluii.
ntr-o reacie chimic, echilibrul chimic este starea n care ambii reactani i produi sunt prezeni n
concentraii care nu mai manifest tendina de modificare n timp. De obicei, aceast stare se atinge cnd
reacia direct are loc cu aceeai rat ca i reacia invers. Ratele de conversie a reaciei directe i a celei
inverse sunt diferite de zero dar, fiind egale, nu exist modificri nete ale concentraiilor reactantului i
produsului. Acest proces se numete echilibru dinamic. Din punct de vedere spectrofotometric,
determinarea concentraiilor reactanilor i produilor ntr-o astfel de situaie, presupune msurarea
luminii transmise de ctre soluie.
Orice compus chimic absoarbe, transmite sau reflect lumin (radiaie electromagnetic) n cadrul unui
interval de lungimi de und. Aparatele destinate acestor msurtori se numesc spectrofotometre.
Spectrofotometrul este un instrument capabil s msoare cu precizie cantitatea de fotoni (intensitatea
luminii) absorbit de trecerea lor printr-o prob (soluie). Astfel, se poate determina indirect i cantitatea
de substan (concentraia). n funcie de spectrul lungimilor de und pe care le emite sursa de lumin,
spectrofotometria are dou variante:
-

UV/VIS utilizeaz lungimi de und cuprinse ntre 185 400 nm (UV) i 400 750 nm (VIS).
IR utilizeaz lungimi de und cuprinse ntre 750 nm 1000 m.

Spectrofotometria UV/VIS este utilizat cel mai frecvent n chimia analitic pentru determinarea
cantitativ:
-

A soluiilor ce conin cationi ai metalelor tranziionale, majoritatea fiind colorate (absorb radiaii
electromagnetice din spectrul vizibil) datorit electronilor de pe orbitalii de tip d care pot fi uor
excitai fiind astfel determinai s execut tranziii cuantice. Culoarea soluiilor ce conin astfel de
cationi poate fi ns afectat de prezena unor anioni sau liganzi1. De ex. soluia de CuSO4 de
culoare albastr deschis poate fi intensificat cu ajutorul amoniacului care poate s schimbe
maximul de absorbie.
A compuilor organici, n special aceia care manifest un nalt grad de conjugare (sisteme cu orbitali
p n care alterneaz legturi simple cu cele multiple i care, n general, scad energia total a
moleculei, crescndu-i astfel stabilitatea). De ex. ADN, ARN i proteinele absorb radiaia
electromagnetic mai ales din spectrul UV i foarte rar din cel vizibil. Pentru aceste determinri, ca
solvent, se folosete de cele mai multe ori etanolul pentru c absoarbe mult mai puin dect apa n

n chimia coordinativ, ligandul este reprezentat de un ion sau o molecul (grup funcional) care se leag la un atom
metalic central formnd astfel un complex coordinativ. Legtura dintre metal i ligand, de regul, implic cedarea
formal a uneia sau a mai multor perechi de electroni ai ligandului. De aceea, natura legturii ligand-metal tranziional
poate s varieze ntre o covalen i o legtur ionic.

aproape toate lungimile de und. n cazul acestor determinri, mai trebuie inut cont de polaritatea
solventului i de pH, acestea putnd afecta absorbia radiaiei electromagnetice caracteristice unui
anumit compus organic.
A complexelor de tip donor-acceptor de electroni2 care sunt colorate suficient de intens pentru a
putea fi astfel identificate cantitativ.

Spectrofotometria IR se bazeaz pe absorbia lungimilor de und din intervalul infrarou, absorbia

fcndu-se n concordan cu caracteristicile structurii chimice. n acest caz absorbia radiaiei are loc la
frecvenele de rezonan, cele care se potrivesc cu energia de tranziie a unei legturi sau a vibraiei unui
grup din cadrul unei molecule. n general o molecul cu n atomi are 3n-6 moduri normale de vibraie3. O
molecul liniar are 3n-5 moduri normale deoarece rotirea n jurul axei sale moleculare nu poate fi
detectat. Din considerentele menionate, spectrofotometria IR se mparte n trei variante.
-

800 2500 nm (IR apropiat, NIR near-infrared). n acest caz, radiaiile electromagnetice pot induce
excitaii sub form de vibraii armonice4 sau nuanate i astfel se pot face msurtori cantitative ale
unor grupuri funcionale organice, n special O-H, N-H i C=O.
2500 nm 25 m (IR de mijloc, mid-infrared). n acest caz, tehnica permite studierea vibraiilor
fundamentale i a rotaiilor-vibraiilor asociate acestor structuri. Aceste analize fiind reunite sub
termenul generic de spectroscopie de vibraie vizeaz identificarea unor molecule organice sau
organometalice.
25 m 1000 m. Aceste radiaii electromagnetice sunt folosite n cadrul spectroscopiei de rotaie,
acest lucru putnd s implice ntreaga molecul.

Spectrofotometria n IR este pretenioas i dificil deoarece, practic, aproape orice obiect emite n spectrul
IR sub form de radiaie termic, iar cuvele trebuie s fie fabricate din sruri care nu absorb foarte mult n
acest domeniu.
Principiul metodei
n spectrofotometria VIS, absorbia sau transmisia unei anumite substane poate fi determinat prin
observarea culorii. O prob care absoarbe toate lungimile de und din spectrul vizibil apare de culoare
neagr, sau dac le transmite pe toate n egal msur apare de culoare alb. Dac soluia absoarbe lumin
roie (aprox. 700nm) apare de culoare verde (culoarea complementar).
n practic spectrofotometrul VIS este compus dintr-o surs de lumin ce emite n spectrul vizibil, un sistem
de lentile cu rol de colimator optic, un monocromator, o cuv n care este pus proba de analizat i un
detector fotoelectric (vezi fig.)

Un complex donor-acceptor de electroni reprezint o asociere de molecule sau a unor pri diferite ale unei
molecule foarte mari n care o parte a sarcinii electrice este transferat ntre entitile moleculare, iar atracia
electrostatic rezultat se manifest ca o for stabilizatoare pentru complexul molecular.
3
Prin modul normal de vibraie a unui sistem oscilant se nelege un mod de micare n care toate prile sistemului se
mic sinusoidal cu aceeai frecven avnd ntre ele o relaie n faz fix. Micarea descris de modul normal se
numete rezonan.
4
Armonica unei unde reprezint o frecven din componena unui semnal care este un multiplu ntreg al frecvenei
fundamentale. Frecvena fundamental sau fundamentala este definit ca cea mai joas frecven a unei forme de
und periodic. De ex. dac frecvena fundamental este f armonicele vor avea frecvenele 2f, 3f, 4f etc. Astfel, toate
armonicele au proprietatea de a fi periodice la frecvena fundamental, prin urmare, suma armonicelor este i ea
periodic la acea frecven. Frecvenele armonice sunt egal delimitate de lungimea frecvenei fundamentale i pot fi
gsite prin adugarea repetat a acestei frecvene.

Principiul spectrofotometriei UV/VIS se bazeaz pe legea Lambert-Beer. Aceast lege prevede c cantitatea
de lumin absorbit de o soluie este expresia unei funcii exponeniale a concentraiei i a lungimii de
und n raport cu acea soluie.
Calibrarea metodei pentru o anumit substan implic dou etape distincte:
1. Se determin maximul de absorbie al substanei respective fcnd un scanning a lungimilor de
und n concordan cu culoarea acesteia. Dac substana este incolor, se identific o reacie de
culoare specific acesteia i se analizeaz produsul colorat.
2. Se determin relaia dintre concentraia substanei luat n analiz (sau a produsului rezultat dac e
vorba de o reacie de culoare) i absorbie. Aceast determinare se face la lungimea de und ce
corespunde maximului de absorbie determinat la etapa 1.

OBSERVAII
Identificarea lungimii de und ce manifest absorbie maxim trebuie realizat pe o prob a crei
concentraie nu determin la aceast lungime de und o absorbie mai mare de 1.
Valorile convenabile pentru absorbie sunt situate ntre 0,1 i 1. Peste aceast valoare efectul de umbrire al
particulelor poate modifica corectitudinea rezultatelor. Aceast situaie implic concentraii prea mari n
care particulele componente ale soluiei, fiind prea apropiate, se pot afla una n spatele celeilalte i nu
contribuie la absorbie. De aceea, pentru o substan oarecare, identificarea acestei concentraii se face
prin ncercri.