Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
2
absorbţie cu maxime clare analiza calitativă nu este atât de reprezentativă ca cea cantitativă, în acest
domeniu aplicaţia de bază fiind analiza cantitativă. La analiza cantitativă se foloseşte fotometrarea
radiaţiei absorbite la o anumită lungime de undă ce se găseşte în zona maximului de absorbţie ca atare
pentru analiza cantitativă se foloseşte fotometrarea radiaţiei absorbite la o anumită lungime de undă ce
se găseşte în zona maximului de absorbţie deci pentru analiza cantitativă se foloseşte termenul de
fotometrie.
Fotometria şi spectrofotometria măsoară instrumental lumina transmisă de o soluţie
colorată , (care absoarbe lumina pe acel domeniu), lucrând cu o sursă de lumină
monocromatică. Când lumina incidentă este filtrată, prin filtre optice, având un spectru mai
larg, avem de a face cu o fotometrie iar când domeniul filtrat este mai îngust (utilizând
monocromatoare) vorbim de spectrofotometrie. În ultima variantă, este posibilă fixarea mai
precisă a lungimii de undă la care se lucrează. Cu ambele variante se poate chiar trasa un
spectru de absorbţie, adică o curbă, obţinută prin măsurarea semnalului în funcţie de lungimea
de undă a radiaţiei incidente
Fotometria este o metodă utilizată în cadrul analizelor cantitative la substanţele lichide. Ea
cuprinde domeniul ultraviolet şi vizibil. Fotometria permite determinarea concentraţiilor atât a
substanţelor anorganice cât şi a substanţelor organice. Dacă o cuvă paralelipipedică transparentă
este umplută cu o soluţie şi iradiată cu lumină atunci o parte din lumină este absorbită de
particulele din soluţie (absorbţie), o parte este lăsată să treacă (transmisie) şi o mică parte este
împrăştiată (fig. 1).
3
Fig.2. Caracteristicile maximului de absorbţie Fig.3. Spectrul de absorbţie al benzenului în soluţie
4
înregistrează spectrul substanţei de analizat (distribuţia intensităţii de absorbţie fotometrică în funcţie
de lungimea de undă) din domeniul ultraviolet până în domeniul infraroşu , se indetifică pe spectru
specia chimică de interes şi se extrapolează pe abscisă valoarea maximă a peak-ului.
Alegerea grosimii de strat. Pentru a realiza o grosime de strat constantă sunt folosite cuve
paralelipipedice din sticlă optică specială în care se introduce substanţa de analizat. Cu cât este mai
lung drumul parcurs de lumină prin cuvă cu atât mai multe entităţi atomice sau moleculare ale
speciilor vor fi atinse de acesta şi cu atât mai mare este cantitatea de lumină absorbită. Absorbţia
creşte exponenţial cu drumul parcurs de lumină. Grosimea stratului este dată de dimensiunea
interioară a cuvei.
Analiza chimică cantitativă
Analiza chimică cantitativă în spectrofotometria de absorbţie se bazează pe legea
Lambert-Beer. Se utilizează o curbă de calibrare (etalonare): A = f(C), trasată pentru probe de
concentraţii cunoscute, în aceleaşi condiţii cu cele de analizat, evident lucrându-se cu aceeaşi
celulă şi la o lungime de undă cât mai riguros monocromatică. Se alege un domeniu de
concentraţii, pe care se pregătesc 5-8 probe cunoscute şi, după trasarea dependenţei A = f(C),
grafic (fig 5) sau analitic, se poate trece la analiza cantitativă. Domeniul pe care curba de
etalonare este perfect liniară nu este foarte larg (de cel mult o decadă de concentraţii). De aceea
metoda nu poate funcţiona decât strict pe domeniul pentru care a fost trasată şi, cel mai corect, pe
porţiunea de la jumătatea dreptei. Se fac mai multe citiri. Cu cât eroarea la determinarea absorbanţei
este mai mică cu atât eroarea de determinare a concentraţiei va fi mai coborâtă. Panta curbei este
decisivă în mărimea erorii. Dacă aceasta este foarte mică, eroarea la determinarea concentraţiei va
creşte. De aceea, soluţiile foarte colorate duc automat la erori, datorită aplatizării curbei la concentraţii
ridicate şi ca urmare conţinuturile nu pot fi determinate exact, recurgându-se la diluări. Dacă diluţia
este prea mare apare o creştere a erorii tocmai datorită diluării, mai precis datorită limitelor
determinărilor exacte ale volumelor, lucru ce trebuie avut în vedere. În concluzie, concentraţiile
soluţiilor măsurate trebuie să fie relativ joase.
Mai trebuie ţinut cont de următoarele reguli, pentru respectarea legii lui Lambert-Beer şi
totodată pentru obţinerea de rezultate analitice corecte:
- soluţiile trebuie să fie limpezi (fără suspensii) şi să nu fie fluorescente;
- în soluţiile supuse măsurătorilor nu trebuie să se petreacă transformări fotochimice sau
reacţii cu oxigenul din aer;
- substanţa de analizat nu trebuie să dea asociaţii, cu compoziţii variabile, cu solventul;
- punctele trebuie să se situeze cât mai riguros pe aceeaşi dreaptă şi prelungirea dreptei să
treacă cât mai aproape punctul de coordonate (0,0);
- absorbanţa măsurată pentru proba necunoscută, Ax, trebuie, pe cât posibil, să se situeze pe
porţiunea din mijloc a domeniului punctelor de etalonare.
Se mai poate utiliza legea lui Lambert-Beer şi pentru determinarea concentraţiei a două
specii diferite, de exemplu M şi N, din aceeaşi soluţie. În mod obişnuit se utilizează două lungimi
de undă diferite, λ1 şi λ2 dar pentru oricare dintre acestea: Atotal λ = AMλ + ANλ.
Deci, măsurând la λ1 absorbanţa amestecului, notată Aλ1 şi la λ2, absorbanţa Aλ2, se obţine:
Aλ1 = εMλ1CM1 + εNλ1CNl respectiv, Aλ2 = εAλ2CMl + εBλ2CNl
adică un sistem de două ecuaţii cu două necunoscute - concentraţiile CM şi CN. Prin rezolvarea
algebrică a sistemului de ecuaţii apărut, se pot obţine valorile acestora, deci se pot calcula
concentraţiile necunoscute.
5
Analiza chimică calitativă
Se bazează pe compararea spectrelor de absorbţie ale substanţelor sau materialelor în domeniul
UV-VIS, adică 180-1100 nm cu spectre cunoscute.
Acest procedeu permite identificarea unui anumit număr de specii chimice, dar numai
pentru acele substanţe care absorb în acest domeniu.
Când nu este posibilă analiza unor specii chimice, direct, din cauza lipsei culorii acestora, se
pot provoca reacţii care dau compuşi coloraţi, prin apariţia unor grupări cromofore, pe baza cărora se
pot analiza anumite substanţe în prezenţa altora, realizându-se astfel, pe cale chimică, o selectivitate
metodei.
Dacă un anumit compus nu absoarbe în domeniul vizibil, dar în urma unei reacţii chimice, se
introduce în moleculă o grupare cromoforă, în noua substanţă, această grupare va absorbi lumina, în
vizibil sau UV şi va putea fi analizată cantitativ. Această reacţie este o reacţie de culoare. Când
reacţia de culoare este ea însăşi una selectivă reacţia poate servi şi la identificarea calitativă a
compusului incolor.
Fig. 5.1. Aspectul punctului izobestic în cazul unui indicator acid-bazic [2]
Punctul izobestic, sau de egală absorbanţă (fig. 5.1) este punctul de intersecţie a unei
familii de curbe de absorbţie ale aceleiaşi substanţe, în condiţii fizice sau de mediu diferite (de
exemplu la mai multe valori ale pH-uri diferite) şi semnalează existenţa a două specii chimice
diferite, aflate în echilibru chimic una cu cealaltă - indiferent de tipul reacţiei chimice ce are loc.
Numărul de puncte izobestice reprezintă numărul de specii chimice, aflate în echilibru între ele,
fiecare absorbind lumina la lungimi de undă diferite. Lungimea de undă izobestică este valoarea
λ pentru care coeficientul molar de extincţie, ε, este egal pentru ambele componente şi fie M,
respectiv N, aceste componente. Algebric, acest lucru se reflecta în expresia absorbanţei la
lungimea de undă respectivă (λ):
Aλ = ε([M] + [N])l, unde l este lungimea celulei; cum concentraţia lor globală este aceeaşi, fiind
dată de suma: C = [M] + [N] = const., absorbanţa la punctul izobestic (λ), va fi: Aλ = ε·l·C, adică
tot o constantă.
Legea Lambert – Beer
Legea de bază folosită în analizele sau determinările spectrofotometrice, care descrie
fenomenul de absorbţie, a fost găsită experimental şi fundamentată teoretic de către Bouguer (1729),
constituind o legătură între cantitatea de lumină absorbită şi proprietăţiile soluţiei pe care o străbate.
Să considerăm o radiaţie incidentă monocromatică, I , care cade pe o celulă conţinând proba, cu
o
lungimea b, iar C fiind concentraţia substanţei ce absoarbe lumina. Conform schiţei din fig. 6,
intensitatea finală, I, este mai mică decât cea iniţială, I , în urma absorbţiei luminii, la trecerea
o
prin celulă.
6
Fig.6. Absorbţia luminii în cazul legii Lambert-Beer Fig. 7 Forma exponentiala a legii Lambert Beer
Dacă lungimea b provoacă o reducere cu un anumit procent a intensităţii iniţiale, Io, de
exemplu cu 50%, un nou strat de lungime b, egală cu primul, va acţiona, conform legii Lamber- Beer,
în acelaşi mod, adică va diminua tot la jumătate noua radiaţie incidentă. Se observă pe diagrama din
fig. 7 că graficul punctelor corespunzătoare dimensiunilor celulei 1b, 2b, 3b, … se distribuie pe o
curbă exponenţială.
Enunţul Legii Lambert-Beer
Intensitatea fasciculului luminos care străbate un mediu absorbant scade exponenţial cu
concentraţia mediului respectiv precum şi cu grosimea stratului străbătut.
-kb
Expresia matematicǎ: I = I ·e
0
I0 Ia I (1)
I0 – intensitatea radiaţiei incidente, Ia – intensitatea radiaţiei absorbite, I – intensitatea radiaţiei
transmise, unde k este o constantă , b dimensiunea celulei
Prin convenţie, se numeşte Indicele de transmitantă – transmitanţa unui strat cu grosimea
de 1 cm
I
T
I0 (2)
7
Din examinarea ecuaţiei precedente se poate observa că, dacă b=1cm şi C=1mol/L, atunci avem
ε = A. Aşadar, coeficientul molar de extincţie reprezintă absorbanţa unei soluţii de concentraţie 1
mol/L dacă lungimea celulei cu probă este 1 cm.
Transmitanţa e o mǎrime adimensionalǎ, cu valori cuprinse între 0 şi 100 şi se exprimǎ de obicei în
procente T (%).
Absorbanţa variazǎ de la 0 la ∞.
Această lege este valabilă în tot domeniul spectral, deci şi în vizibil şi în UV, pentru orice lungime de
undă, pentru orice mediu omogen.
Relaţiile de mai sus reprezintă expresia matematică a legii Lambert Beer. Absorbanţa este
aditivă, motiv pentru care mai multe straturi din aceeaşi substanţă cu aceeaşi concentraţie, suprapuse
dau o absorbţie totală egală cu suma absorbanţelor parţiale.
O aplicaţie importantă a legii Lambert-Beer o constitue determinarea concentraţiei
anumitor specii chimice dintr-un amestec lichid, solid sau gazos de substanţe. Pentru a putea
individualiza această determinare este nevoie de separarea informativă a acelei specii chimice din
amestec prin considerarea numai a valorii absorbanţei specifice corespunzătoare lungimii de undă la
care acea specie are absorbţie maximă. În acest scop este necesar ca radiaţia incidentă folosită pentru
iradiere să fie monocromatică cu lungimea de undă corespunzătoare absorbanţei maxime a acelei
specii chimice iar legea Lambert – Beer are următoarea expresie:
A = εmol cmol b (8)
- coeficientul molar de absorbţie ε reprezintă raportul dintre absorbanţa A şi produsul dintre
cocnentraţia molară cmol, moli/l a soluţiei şi grosimea (b) a stratului de soluţie străbătut de radiaţie:
A
mol (9)
cmol b
Coeficientul molar de absorbţie (ε) reprezintă o constantă a substanţei absorbante, el
caracterizează sensibilitatea unei reacţii de culoare şi limitele de concentraţii între care este posibilă
dozarea substanţei prin fotometrie. Mărimea acestui coeficient variază în limite largi. Legea Lambeert
– Beer este valabilă la toate tipurile de spectroscopie de absorbţie atomică şi moleculară.
Pentru determinarea concentraţiei pe cale fotometrică pentru a avea determinare matematică
trebuie să existe doar două variabile în expresia legii Lambert Beer; una dependentă (concentraţia – c)
şi una independentă (absorbanţa – A) sau grosimea de strat – b ceilalţi parametrii din relaţie trebuie să
fie constanţi. Pentru rezoluţie şi sensibilitate ridicată se foloseşte o radiaţie luminoasă cu o bandă
spectrală îngustă a cărei lungime de undă trebuie să se plaseze în zona maximului de absorbţie a
speciei de analizat. În cazul în care maximul de absorbţie spectrală nu este cunoscut el se determină
din reprezentarea grafică a absorbţiei la diferite lungimi de undă.
Determinarea concentraţiei prin comparaţie cu un etalon de concentraţie cunoscută. Cea
mai simplă metodă de determinare a concentraţiei pe cale fotometrică este aceea de a compara
absorbanţa (A) a unei soluţii de concentraţie cunoscută a substanţei de analizat cu absorbanţa
(Ax) a unei soluţii de concentraţie necunoscută a aceleiaşi substanţe. Absorbanţele molare sunt
identice fiind aceeaşi substanţă aceasta va trebui să aibă aceeaşi grosime, deci se vor folosi cuve
identice. Expresia matematică a celor două extincţii este:
A = εmol b C (10)
A x = εmol b Cx (11)
unde:
εmol - coeficientul de extincţie molară pentru soluţia de concentraţie cunoscută, respectiv de
concentraţie necunoscută;
b – grosimea probei din cuvă
C – concentraţia cunoscută a probei de referinţă
Cx – concentraţia necunoscută a probei analizată
Prin împărţirea celor două ecuaţii se obţine:
A mol b C
(12)
Ax mol b Cx
- Absorbanţa datorată culorii proprii a probei (A culoare proprie) (este vorba de altă
culoare decât culoarea absorbită pentru care se determină dependenţa dintre
concentraţie şi extincţie);
- Absorbanţa datorată reactivilor (Areactiv) (în cazul în care substanţa de analizat nu
prezintă absorbţie specifică se poate provoca o transformare chimică sau enzimatică
8
a substanţei de analizat într-un produs colorat a cărui intensitate de absorbţie este
proporţională cu concentraţia).
Absorbanţa datorată culorii proprii a probei şi absorbanţa datorată reactivilor
denaturează valoarea reală a absorbanţei speciilor chimice de analizat sau a produsului de
reacţie ca atare la măsurări de mare acurateţe aceste absorbante se scad din valoarea absorbanţei
globale măsurate, de aceea se numeşte şi absorbanţă de compensare , se poate scrie astfel:
Amăsurat = Aprobă + Aculoare proprie + Areactiv
pana aici
Absorbanţa finală va cuprinde absorbanţa probei măsurate dar şi cele două absorbanţe nedorite
de compensare. În figură sunt comparate absorbţiile finale măsurate pentru două substanţe identice cu
concentraţie identică (absorbţia finală măsurată ar trebui să fie aceeaşi pentru ambele probe), probe
obţinute în condiţii diferite ceea ce duce la valori diferite pentru absorbţia finală datorată valorilor
diferite pentru absorbţiile de compensare.
Spectrofotometrul UV-VIS
Spectrofotometrul este un aparat spectral conceput pentru a masura extinctia l E sau transmisia
l t radiatiilor optice de diferite lungimi de unda prin diverse probe.
La modul cel mai general, un spectrofotometru este alcatuit dintr-o sursa de radiatii, o fanta
de intrare reglabila care modifica fluxul de lumina care vine de la sursa, un element dispersiv (prisma
sau retea dar mai des se foloseste o retea), mai multe oglinzi care asigura directionarea fasciculului de
lumina, departament probelor si elementul de masura (un fotodetector si un amplificator).
Adaugând diverse accesorii, spectrometrele pot efectua si alte tipuri de masuratori cum ar fi cele de
reflexie difuza, de fluorescenta etc. Alte accesorii permit automatizarea diferitelor operatii cum ar fi
baleierea repetitiva, schimbarea automata a probelor, citirea extinctiilor cu un computer etc.
Spectrofotometrele pot fi cu doua fascicule sau cu un singur fascicul. La cele cu doua
fascicule, radiatia optica cade pe o oglinda rotitoare care o directioneaza alternativ, catre proba de
masurat, sau catre proba de referinta. Cele doua fascicule converg catre un fotodetector. Aranjamentul
de mai sus este convenabil pentru solutii, deoarece, daca proba este plasta într-un solvent, o cantitate
practic egala de solvent poate fi plasata pe traiectoria de referinta asa încât extinctia eventuala a
solventului se anuleaza si instrumentul masoara numai extinctia probei. De asemenea, prin asezarea
unei cuve identice cu cea în care este plasata proba, pe traiectoria de referinta, nu va mai trebui sa
masuram pierderile prin reflexie pe suprafetele cuvei. Mici corectii, legate de modificarea indicelui de
refractie al solutiei fata de cel al solventului, care modifica reflexia pe fetele interne ale cuvelor sau
modificari ale grosimii solventului în cele doua cuve, prin prezenta substantei absorbante într-una din
ele, ar mai trebui luate în consideratie, dar ele sunt de obicei foarte mici si se neglijeaza.
Schema de principiu a unui spectrofotometru de absorbţie este redatǎ în figura 7
Schematic, un spectrometru de absorbţie este redat în figura 1:
÷ sursa de radiaţie (S), ÷ monocromatorul (M), ÷ cuveta cu probă (P), ÷ detectorul (D), ÷
amplificatorul (A),
÷ înregistratorul (I).
Un spectrofotometru este format dintr-o sursă de lumina 1, un sistem optic pentru producerea
luminii monocromatice, compus din lentile 2, un sistem de fante 3, un sistem monocromator 4 cu reţea
9
de difracţie sau cu prismă, spaţiu pentru cuve cu soluţie de referinţă şi cuve pentru soluţie de analizat
5, un detector de radiaţie luminoasă 6, un amplificator 7 şi un sistem de afişare 8.
10
Figura 8. Montaj simplu pentru o măsurare fotometrică
Fig. 9 Schema colorimetrului Dubosque Fig. 10 Spectrele de absorbţie ale substanţelor pure x
şi y şi spectrul de
absorbţie a amesteului x şi y la aceleaşi concentraţii
11
Dacă se determină absorbanţa celor două substanţe şi absorbanţa amestecului lor se obţin
spectrele din figura 10 cu linie continuă sunt reprezentate spectrele de absorbţie ale celor două
substanţe pure în soluţie, iar cu linie punctată spectrul de absorbţie al amestecului celor două
substanţe.
Se vor face măsurători pentru a determina concentraţia la două substanţe. Se aleg două lungimi
de undă pentru măsurare, una la care are loc maximul absorbţiei pentru substanţa x λ1 şi cealaltă la
care are loc maximul de absorbţie pentru substanţa y λ2. Se scrie:
A1 Ax1 Ay1 x1 b cx y1 b c y (19)
A2 Ax 2 Ay 2 x 2 b cx y 2 b c y (20)
unde
A1 şi A2 – absorbanţele amestecului la lungimile de undă λ1 şi λ2
Ax1 , Ay1 – absorbanţele substanţelor x şi y la lungimea de undă λ1
Ax2 , Ay2 – absorbanţele substanţelor x şi y la lungimea de undă λ2
ε x1, ε y1 – coeficienţii de absorbanţă molari ai substanţelor x şi y la lungimea de undă λ1
ε x2, ε y2 – coeficienţii de absorbanţă molari ai substanţelor x şi y la lungimea de undă λ2
Cunoscându-se concentraţiile molare ale celor două soluţii pure prin citirea absorbţiilor celor
două soluţii la lungimile de undă λ1 λ2 se determină extincţiile lor molare. Din sistemul de ecuaţii (22)
, (23) singurele necunoscute sunt c x şi cy care se pot calcula prin găsirea soluţiei sistemului. Dacă
spectrul substanţei x nu se suprapune peste al substanţei y la lungimea de undă λ2, concentraţia
substanţei y poate fi determinată dintr-o singură citire a absorbţiei acesteia la lungimea de undă λ2.
Concentraţia substanţei x poate fi calculată din absorbţia amestecului la lungimea de undă λ1 din care
se scade absorbţia susbtanţei y la aceeaşi lungime de undă, aşa cum rezultă din ecuaţiile sistemului.
Când concentraţia unei substanţe va fi mult mai mare la ambele lungimi de undă, astfel încât
determinarea concentraţiei celei de-a doua substanţe se va face cu erori. Există aparatele moderne care
pe baza programelor determină concentraţia substanţelor din amestec.
12