1) Defiitie spectrofotometrie

Spectrofotometria reprezinta o ramură a opticii care se ocupă cu

determinarea intensității radiațiilor monocromatice care constituie spectrul unei radiații
compuse. Acesta metoda este foarte utilizata in
fizica,chimie, biochimie, biologie moleculara cat si in multe ramuri industriale.

2) Utilizari spectrofotometrie

În practică, metoda se bazează pe proprietatea de absorbție sau de transmisie a compușilor

chimici la diverse lungimi de undă. Astfel, spectrofotometria este folosită ca :
- metodă calitativă => identificarea prezenței unei substanțe într-o soluție,
-metoda cantitativă => identificarea concentrației unei substanțe dintr-o soluție.
-pentru determinarea constantei de echilibru a unei soluții

. In functie de domeniile spectrale in care are locabsorbtia luminii se disting :

spectrofotometria in ultraviolet
(185– 400 nm),
spectrofotometria in vizibil
(400– 800nm),
spectrofotometria in infrarosu
(peste 800 nm)

Aparat: spectrofotometru + clasificare

Component spectrofotometru

…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….

Instrument optic care serveşte la obţinerea spectrelor de emisie sau de absorbţie ale substanţelor, cu
ajutorul căruia se determină atât lungimile de undă ale liniilor spectrale, cât şi intensităţile acestor linii
prin comparare cu liniile unui spectru cunoscut.

Spectrofotometria reprezinta o ramură a opticii care se ocupă cu determinarea

intensității radiațiilor monocromatice care constituie spectrul unei radiații compuse

Spectrofotometria de absorbtie este o metoda de spectroscopie optica care are la

baza proprietatea substantelor de a absorbi selectiv radiatiile electromagnetice.
Acesta metoda este foarte utilizata in
fizica,chimie, biochimie, biologie moleculara cat si in multe ramuri industrial. Ea p
ermite caracterizarea chimica, structurala,determinarea puritatii si concentratia
diferitelor substante sau solutii.
Orice compus chimic absoarbe, transmite sau reflectă lumină (radiație electromagnetică) în
cadrul unui interval de lungimi de undă. Aparatele destinate acestor măsurători se numesc
spectrofotometre.

Spectrofotometrul este un instrument capabil să măsoare cu precizie cantitatea de fotoni

(intensitatea luminii) absorbită de trecerea lor printr-o probă (soluție). Astfel, se poate determina
indirect și cantitatea de substanță (concentrația). În funcție de spectrul lungimilor de undă pe care
le emite sursa de lumină, spectrofotometria are două variante: – UV/VIS utilizează lungimi de
undă cuprinse între 185 – 400 nm (UV) și 400 – 750 nm (VIS). – IR utilizează lungimi de undă
cuprinse între 750 nm – 1000 µm.

Spectrofotometria UV/VIS este utilizată cel mai frecvent în chimia analitică

pentru determinarea cantitativă:

1) A soluțiilor ce conțin cationi ai metalelor tranziționale, majoritatea fiind colorate (absorb

radiații electromagnetice din spectrul vizibil) datorită electronilor de pe orbitalii de tip d care pot
fi ușor excitați fiind astfel determinați să execută tranziții cuantice. Culoarea soluțiilor ce conțin
astfel de cationi poate fi însă afectată de prezența unor anioni sau liganzi. De ex. soluția de
CuSO4 de culoare albastră deschis poate fi intensificată cu ajutorul amoniacului care poate să
schimbe maximul de absorbție.

2) A compușilor organici, în special aceia care manifestă un înalt grad de conjugare (sisteme cu
orbitali p în care alternează legături simple cu cele multiple și care, în general, scad energia totală
a moleculei, crescându-i astfel stabilitatea). De ex. ADN, ARN și proteinele absorb radiația
electromagnetică mai ales din spectrul UV și foarte rar din cel vizibil. Pentru aceste determinări,
ca solvent, se folosește de cele mai multe ori etanolul pentru că absoarbe mult mai puțin decât
apa

Cu ajutorul unoroglinzi mobile din monocromator se

schimbă în salturi foarte mici frecvenţa
luminii selectate din
radiaţia totală a sursei. De fiecare dată se măsoară absorbţia, transmisia sau extinţia şi se
calculeazăvaloarea coeficientului de extinţie E. Reprezentând grafic variaţia lui E în
funcţie de frecvenţă saulungimea de undă se obţine o spectrogramă (un spectru

Exista doua clase mari de dispozitive: cu fascicul unic si cu fascicul dublu. Un

spectrofotometru cu fascicul dublu compara intensitatea luminii intre doua cai de lumina, o cale care
contine o mostra de referinta si alta cale care contine proba de testare. Un spectrofotometru cu
un singur fasciculmasoara intensitatea relativa a fasciculului de lumina inainte si dupa ce a fost introdusa
o proba de test.

Tipuri de fotometre:

1)Fotometre cu un singur fascicul: aceste fotometre au un singur fascicul luminos care trece pe
rand prin cuva cu solutia de referinta si prin cuva cu solutia de analizt si
masoara intensitatea relativa a fasciculului de lumina inainte si dupa ce a fost introdusa o proba de test.

2)Fotometre cu doua fascicule: la acest tip de aparate cuva cu solutia de referinta si cuva cu
solutia de analizat sunt iradiate paralel.
Un spectrofotometru este format din urmatoarele componente principale: sursa de radiatii
(lampa cufilament de wolfram domeniul Vis, sau lampa de hidrogen sau deuteriu pentru
domeniul UV), monocromatorul(prisma din cuartz pentru UV sau sticla pentru Vis), suportul
pentru cuve si cuvele (din cuartz pentru UV sau
sticla pentru Vis), detector, fotomultiplicator, inregistrator si computer.