Sunteți pe pagina 1din 30

Cercetarea criminalistic a microurmelor

8 Tehnici cromatografice......................................................................................................................1
8.1 Cromatografia n strat subire (thin layer chromatography, TLC).............................................4
8.1.1 !orbeni folosii n TLC....................................................................................................4
8.1." #ecanismul separ$rii...........................................................................................................%
8.1.& Cromatopl$ci pentru tehnica TLC 'i aplicarea probelor.....................................................8
8.1.4 (e)*oltarea cromatogramei 'i !etecia (locali)area) analiilor pe cromatoplac$................+
8.1., Caracteristici ale cromatopl$cilor !in TLC.......................................................................1-
8.1.,.1 .actorul !e ratar!are (retenie, /f).............................................................................1-
8.1.,." .actorul !e capacitate.................................................................................................1-
8.1.,.& 0n$limea unui taler cromatografic.............................................................................11
8.1.% plicaii ale cromatografiei n strat subire.......................................................................11
8." Cromatografia ionic$ (1C)........................................................................................................1"
8.".1 2chimb$torii !e ioni..........................................................................................................1"
8."." 3recursori polimerici ai r$'inilor schimb$toare !e ioni.....................................................1&
8.".& #ecanisme !e separare......................................................................................................1&
8.".4 Con!uctometria 4 mi5loc mo!ern !e !etecie n cromatografia ionic$..............................1,
8.".4.1 3rincipiul !etectorilor con!uctometrici !e supresie...................................................1,
8.".4." 2upresorul electrochimic............................................................................................1%
8.".4.& .uncionarea autosupresorului n anali)a anionilor....................................................1+
8.".4.4 .uncionarea autosupresorului n anali)a cationilor......................................................."-
8.& Cromatografia !e lichi!e.........................................................................................................."1
8.&.1 Cromatografia !e lichi!e pe coloan$ clasic$ (CL)............................................................"1
8.&." Cromatografia !e lichi!e pe coloan$ instrumental$.............................................................."1
8.&.& Clasificare..........................................................................................................................""
8.&.4 paratura utili)at$ n cromatografia !e lichi!e................................................................."&
8.&., .a)e mobile 'i staionare, polaritate.................................................................................."4
8.4 Cromatografia !e ga)e..............................................................................................................",
8.4.1 specte teoretice...............................................................................................................",
8.4." 2istemul ga) cromatografic..............................................................................................."%
8.4.& .a)a mobil$ folosit$ n cromatografia !e ga)...................................................................."6
8.4.4 .a)e staionare folosit$ n cromatografia !e ga)..............................................................."6
8.4., (etectori folosii n cromatografia !e ga)........................................................................."+
8.4.% plicaii ale cromatografiei !e ga)...................................................................................."+
8 Tehnici cromatografice
Chimia reprezint instrumentul major folosit n investigarea sistemelor chimice. Prin mijloacele sale
va permite obinerea informaiilor referitoare la materie, incluznd compoziia, structura,
proprietile fizice i reactivitatea acesteia. epararea amestecurilor !comple"e# n componente
este aplicat n toate domeniile chimiei, precum i n tiinele nrudite cu aceasta. $n prezent
tehnicile moderne de separare, cum ar fi cromatografia i electroforeza, sunt folosite n domenii n
care principalii compui studiai sunt de natur !bio#organic, cromatografia fiind folosit mai ales
n chimia organic, iar electroforeza n biochimie i biotehnologie. epararea eficient a
compuilor chimici similari este posibil doar prin folosirea unor pai repetai de separare i care,
n acord cu distribuia lui Craig, sunt potrivii n termeni practici numai pentru etapele preparative.
%otanistul rus &i'hail emanovich (s)ett este considerat *printele+ cromatografiei, prin
studiul fenomenului de absorbie n coloane cu umplutur, dezvoltat n jurul anilor ,-... /a acea
perioad, folosind o coloan mpachetat, cercettorul a reuit s separe e"tracte din pigmenii
frunzelor, precum clorofila i "antofil spirilo"antina. $ntr0o lucrare scris n limba rus, cercettorul
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU ,
Cercetarea criminalistic a microurmelor
descrie paii e"perimentali parcuri la separarea *carotenului+ !zon galben roie#, a "antofilului
!zon galben# !carotinoida o"igenat la C4.# i a clorofilului !zon verde# pe o coloan umplut cu
inulin !C56,.780637, o polizaharid solubil, alctuit din grupri fructoz, ce apare n diferite
plante ca rezerv de hran#, folosind ligroin ca solvent !un amestec de hidrocarburi cu p.f. 9.0,3.
:C#. 7bservarea unor zone colorate pe coloan l0a condus pe cercettorul rus la ideea de a
denumi tehnica dezvoltat prin cuvntul cromatografie !grecescul *chroma+ pentru culoare i
*graphein+ pentru scriere#. $n ,-.5, (s)ett a prezentat o descriere amnunit a metodei
cromatografice dar ceea ce a uimit ulterior cercettorii din domeniul cromatografie a fost, ;n
special, contrastul ntre simplitatea aparaturii folosite i rezultatele obinute.
<n pas important ce a introdus cromatografia ntr0o perioad de dezvoltare e"traordinar a fost
nregistrat n ,-=, cnd >uhn !laureat al premiului 2obel n ,-=?# i /ederer au separat n scop
preparativ carotenul din morcovi !morcovi roii# n dou hidrocarburi alfa i beta caroten !C4.685#,
prin absorbie pe coloane umplut cu o"id de aluminiu. @proape n aceeai perioad, Ainterstein a
separat pe o coloan cu umplutur de CaC7= !cu diametru de 9 cm# dou "antofile, viola"antina
!pigment "antofilic de culoare portocalie care protejeaz plantele de eventualele distrugeri foto0
o"idative# i luteina !carotenoid natural cu aciune antio"idant#.
$n orice caz, istoric vorbind, evoluiile nregistrate n domeniul cromatografiei pot fi enumerate
dup cum urmeazB
,-.= (s)ettB Cenomenul de adsorbie n coloan cu umplutur
,-=, >uhn, /ederer AintersteinB Primele separri semnificative din punct de vedere preparativ
,-=9 (iseliusB Dlectroforeza soluiilor libere ntr0un tub
,-=? Ezmailov, hraibeeB Cromatografia n strat subire !thin laFer chromatographF, (/C#
,-4, &artin, FngeB Cromatografia de repartiie !liGuid chromatographF, /C#
,-44 Consden, Hordon, &artinB Cromatografia pe hrtie !planar chromatographF, PC#
,-4? (iseliusB Dlectroforeza
,-4- pedding, (omp'insB Cromatografie de schimb ionic !ionic e"change chromatographF, EDC#
,-83 Iames, &artinB Cromatografia de gaze !gas chromatographF, HC#
,-89 HalaFB Cromatografia de gaze cu coloane capilare !capilar gaz chromatographF, CHC#
,-8- Parath, CladinB Hel cromatografia 0 gel filtrarea
,-55 PielB Cromatografia de lichide de nalt performan !high performance !pressure# liGuid
chromatographF, 6P/C#
,-5- >lesperB Cromatografia de fluide supercritice !supercritical fluid chromatographF, CC#
,-?, 2a'aga)aB Cromatografia electrocinetic
%azele teoretice riguroase i progresul nregistrat n domeniul electronicii au permis elaborarea
unor procedee de nalt performan n instalaii automate de reglare, msurare, nregistrare a
semnalelor i prelucrare a datelor iar n tehnica cromatografic, aceste evoluii au permis
ndeplinirea unei mai veche dorine a chimitilor analiti, aceea de a realiza un aparat care s
permit o programare n urma creia dup introducerea probei de analizat, aparatul s furnizeze
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU 3
Cercetarea criminalistic a microurmelor
ntr0un timp foarte scurt rezultatul e"act al ntregii analize.
Cromatografia include o variat i important grup de metode ce permit separarea unor
compui asemntori din amestecuri comple"e. Cromatografia a evoluat progresiv de la o metoda
de separare i purificare de laborator la o tehnica de separare i analiza chimic cu o arie de
aplicare universal. @naliza chimic cromatografic este un domeniu recent al analizei
instrumentale care include metode de separare i analiz a componenilor unui amestec comple"
dintr0o prob. $n toate variantele, separarea precede analiza i se realizeaz prin repetarea, de un
numr mare de ori, a echilibrului de distribuie ntre o faza staionar !aflat de obicei ntr0un tub
numit coloan# i o faza mobil care se deplaseaz prin golurile primei faze.
Principiul cromatografiei se bazeaz pe trecerea constituienilor de separat prin cele dou faze
nemiscibile, faza staionar i faza mobil. Pentru aceasta proba este dizolvat n faza mobil,
care poate fi un lichid, gaz sau faz supercritic, i ulterior transportat de0a lungul fazei staionare
care poate fi ntr0o coloan sau pe o suprafa solid.
Cuncie de felul n care se dezvolt cromatograma se face distincie ntre cromatogramele
interne i cromatogramele e"terne. $n cromatogramele interne diferii constitueni ai probei se
deplaseaz pe distane diferite n acelai interval de timp iar la sfritul separrii acetia nc se
afl n stratul de separare ceea ce nseamn c, de fapt, acetia sunt detectai direct n stratul de
separare. @cest tip de cromatografie este folosit n tehnicile planare precum cromatografia pe
hrtie i cromatografia n strat subire. $n aceste situaii faza staionar este situat pe un suport
planar i faza mobil se deplaseaz de0a lungul fazei staionare prin fore capilare sau prin
influena gravitaiei. Cromatogramele e"terne se obin n cromatografia pe coloan. $n acest caz
toi constituenii traverseaz aceeai rut prin stratul de separare i, datorit interaciilor specifice
cu faza staionar, apar la sfritul coloanei la timpi diferii.
Caza mobil, denumit i eluent, poate provoca migrarea cu viteze diferite a unui numr mare
de componeni ai unui amestec de separat de0a lungul coloanei. @mestecul supus separrii poate
fi introdus sub form de soluie la nceputul coloanei, folosindu0se un dispozitiv de introducere a
probei !de e"emplu o micro0sering#, i se afl iniial fi"at ntr0o zon ngust de la nceputul
coloanei.
plai de eluent, o parte din componenii probei migreaz apoi prin coloan cu viteze diferite.
@cest lucru se datoreaz interaciunilor fizice specifice, dintre moleculele probei i faza staionar
!nu orice molecul poate migra pe orice faz staionar#. Dfectul, este numit retenie i aceasta
provoac o aa0numit migrare difereniat cnd moleculele migreaz n grupuri, n fiecare grup
e"istnd doar molecule de acelai fel. @ceasta face posibil sesizarea componenilor, pe rnd, la
prsirea coloanei, de ctre un instrument, n grupurile respective 0 denumite uneori zone.
Enstrumentul amintit este un analizor fizico0chimic, sensibil la mai muli !n mod ideal la oricare#
dintre componenii ce ies din coloan i care este plasat n eluent, imediat dup ieirea din
coloan. @cest analizor, denumit detector este capabil s dea un semnal proporional cu masa sau
cu concentraia soluiei de component n faza mobil. 1ispozitivul sesizeaz trecerea fiecreia din
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU =
Cercetarea criminalistic a microurmelor
substanele ce formeaz iniial proba iar prin reprezentarea grafic a semnalului detectorului n
funcie de timp se va obine cromatograma.
8.1 Cromatografia n strat su!"ire #thin la$er chromatogra%h$& TLC'
@cest tip de cromatografie are drept scop separarea i concentrarea cantitilor mici de substan
din amestecuri comple"e. %azele tehniciii (/C au fost puse de Ezmailov i chreider !,-=-# care
au folosit e"tracte de plante medicinale, iar ca suport @l37=. Jece ani mai trziu &ainhard i 6all au
folosit aceast tehnic pentru separarea unor ioni anorganici folosind ca adsorbant alumina, ca
liant amidonul iar ca suport solid lamele de microscop. &ai trziu >elles !,-8,# folosete ca suport
silicagelul, iar ca liant ipsosul. Cromatografia n strat subire este mai rapid, are o rezoluie mai
bun i este mai sensibil dect cromatografia pe hrtie.
$n termeni teoretici, tipurile de faze staionare i mobile, aplicaiile cromatografiei pe hrtie i
cromatografiei n strat subire sunt aproape identice. (ehnica (/C adeseori este folosit ca mijloc
de determinare a condiiilor optime pentru efectuarea separrilor prin tehnica cromatografiei de
lichide pe coloan. @vantajele utilizrii acestei tehnici sunt constituite din viteza mare i costurile
sczute pentru efectuarea unor e"perimente e"ploratorii. <nii cercettori susin ideea c tehnica
(/C ar trebui s precead analiza pe coloan.
(ehnica (/C a devenit o metod de rutin n industriua farmaceutic mai ales n scopul
monitorizrii puritii produilor. Ki0a gsit aplicaii i n laboratoarele clinice dar i n laboratoarele
biologice i biochimice. 1eoarece particulele fazei staionare sunt similare celor folosite n
cromatografia de adsorbie, de partiie cu faze normale sau inversate, de schimb ionic i de
e"cluziune pe baza mrimii, tehnica (/C se consider c se aseamn foarte mult cu tehnica
cromatografiei de lichide de nalt performan. Chiar i fazele mobile se aseamn cu cele
folosite n cromatografia de lichide.
8.1.1 A(or!en"i folosi"i n TLC
@dsorbenii folosii n tehnica (/C trebuie s ndeplineasc o serie de condiii cum ar fiB
nu reacioneze cu substana de separat, cu solvenii sau cu reactivii folosii pentru
vizualizarea spoturilor.
fie rezisteni la temperaturi nalte.
aib o supraf activ i specific.
aib o granulaie ct mai fin i un numr mare de pori cu diametru mic i controlat !de
aceeai dimensiune#. Cu ct dimensiunea porilor este mai mic cu att viteza de deplasare
este mai mic.
Ca adsorbeni se folosesc geluri de silice cum ar fi silicagel H care este un silicagel cu liant
!ipsos#, silicagel cu indicator de fluorescen, adsorbeni anorganici de tipul aluminei !@l37=#.
@lumina, funcie de modul de preparare i activare se poate gsi n formeleB
a) care este o form activ utilizat n (/C
b) care este o form compact, reactiv care se obine din alumin nclzit la ,...
o
C.
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU 4
Cercetarea criminalistic a microurmelor
0a studiat structura poroas a @l37= i s0a constatat c posed un sistem regulat de micropori
cilindrici cu diametru de 3,9 LM la care se adaug micropori neregulai cu diametru normal mai
mare. @l37= conine cantiti diferite de ap fie sub form grupelor 76 superficiale sau ca ap
adsorbit. 0a presupus c interaciile la suprafaa aluminei sunt n general de natura
electrostatic. Centrele active de pe suprafaa aluminei sunt centre acide, bazice sau cu transfer
de sarcin.
1up natura gruprlor funcionale superficiale pe care le prezint alumina e"ist trei tipuri de
faz staionarB
@l
76
@l
76
7 a# @lumin acid
@l
@l 7
7
b# @lumin neutr obinut prin dehidro"ilare
@l
7
0
2a
N
@l
7
0
2a
N
7
c# @lumin bazic
@ctivitatea de adsorbie a aluminei poate fi controlat prin modificarea coninutului de ap. Prin
nclzire la =5.
o
C timp de 8 h alumina este total lipsit de ap !gradul E de acionare e"primat n
procente de .O#. 6itratnd aceasta la diverse temperaturi i cu un anumit coninut de ap se
poate obine alumin grad EE !=O grade de activiFtate#, alumin grad EEE !5O#, grad EP !,.O# i grad
P !,8O#.
ilicagelul e adsorbentul cu cea mai larg utilizare. Dste produsul de policondensare a cidului
orto0silicic. Pe suprafaa silicagelului n afara grupelor silanolice tip 76 se pot forma i alte grupri,
prin dehidro"ilare.
i
76
7
i
76
i
7
i
7
a# legturi silo"anice obinute prin
dehidro"ilarea unei anumite cantiti din
aceste grupri.
i
7
7
i
7
6 6
7
6 6
b# grupe silanolice hidratate ce pot apare
ntr0o anumit proporie chiar dup uscare.
e prefer aceast form pentru compuii
polari deoarece are suprafa de contact
mare.
i 76
i 7
0
N 6
N
i
76
7 i
76
i 6
=
C
C6
=
C6
=
6
2 i
C6
=
C6
=
C6
=
N i
7
7 i
7
i i 6
=
C
C6
=
C6
=
C6
=
C6
=
6
=
C
i
7
7 i
7
i
6
=
C C6
=
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU 8
Cercetarea criminalistic a microurmelor
Hruprile silanolice se pot manifesta i ca schimbtori de ioni. Constanta de disociere, >Q,.
,.
, comparativ
cu a fenolilor. Pentru remedierea acestor deficiene s0au propus mai multe metode dintre care blocarea
centrilor de adsorbie cu Pd sau @g, adsorbia continu a unor compui puernic adsorbabili care s reduc
dispersia fr a afecta selectivitatea, silanizarea suprafeelor !tratarea cu he"ametilen disilo"an sau dimetil
diclor silan#.
i 7
6
i 7
6
i 7
6
i 7
6
i i
i i
7
7
c# la temperaturi mai mari de 4..
o
C se
poate produce o sintetizare a particulelor
adiacente conducnd la micorarea
suprafeei specifice.
Pe lng modificarea polaritii se poate modifica i suprafaa specific. Piteza de distribuie va
fi lent. <nii autori au artat c e"ist = tipuri fundamentale de grupri 76 superficialeB
a# grupe 76 legate
b# grupe 76 reactive
c# grupe 76 libere
(ria relativ ca centre de adsorbie a acestor grupe 76 este n ordinea aRbRc. ilicagelul are
o structur poroas. &rind p60ul soluiei de gel ntre 4 0,. se obin diferite soluii avnd suprafee
specifice cuprinse ntre 3..0?.. m
3
Sg. &oleculele adsorbite joac rol de donori de e0 stabilind
legtura de 6.
Crbunii pot avea suprafa nepolar !grafitul coloidal#. uprafaa polar etse obinut prin
supunerea crbunelui la un proces redo". $n acest caz se va comporta ca un o"id metalic.
uporturile de natur organic includB celuloza, celuloza modificat, derivai de celuloz.
@dsorbenii cel mai des folosii sunt cei modificai chimic sau cei specifici !se prepar n
prezena compusului respectiv i apoi se e"trage din suport cu soluii saline#. Cei de nalt
eficien pot fiB
a) (otal poroi cu diametrul particulei de 8 m. @u o sensibilitate i selectivitate ridicate.
b# Cu miez compact cu suprafa cu porozitate controlat. Confer o suprafa de contact mai
mare, o sensibilitate i selectivitate mai mari.
8.1.) *ecanismul se%arrii
&ecanismul separrii prin (/C se bazeaz n principiu pe distribuirea componenilor unui amestec
comple" ntre dou faze dintre care o faz staionar !fs# solid sau lichid i alta o faz mobil !fm#
care strbate faza staionar. Cuncie de natura fazei staionare se ntlnescB
(/C de adsorbie !faza staionar i faza mobil /#
(/C de repartiie !faza staionar / i faza mobil /#
(/C de schimb ionic.
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU 5
Cercetarea criminalistic a microurmelor
Componenii amestecului sunt antrenai de faza mobil i trecui peste faza staionar. Piteza
de migrare va fi diferit i va depinde de modul n care componenii se distribuie n cele dou faze
!viteza de migrare a componentului sau eluentului#. 1ac unul din componenii amestecului este
mai puternic adsorbit de faza staionar el va rmne mai mult timp mobilizat n aceast faz, deci
va rmne mult n urma frontului de solvent. 1ac componentul migreaz mai repede acest
comportament este un indiciu c moleculele lui sunt mai strns legate de faza mobil i la echilibru
aceasta conine un numr mai mare din moleculele solutului dect faza staionar. <n rol important
n separare l joac mrimea suprafeei adsorbentului, separarea fiind cu att mai bun cu ct
suprafaa specific e mai mare. $n cromatografia n strat subire granulaia adsorbentului e fin,
mai mic de 5. Lm, adsorbentul este ntins sub forma unei pelicule subiri i omogene !grosime de
34. T 38. Lm#, care are ca efect micorarea accentuat a spaiilor interstiiale neeficace i deci
conduce la creterea eficienei metodei.
Procedeul de adsorbie n faza staionar din faza mobil poate fi descris de izotermele de
adsorbie. $n cazul separrii a 3 compui @ i %, din care @ este mai puternic reinut de faza
staionar i % mai puternic reinut de faza mobil, sunt posibile n urma separrii situaiile
prezentate n +igura 8.1.
Concentratia in faza mobila !C
&
#
@
%
C
& C

@
%
@
%
+igura 8.1.aB Ezoterme de distribuie liniare
ideale.

Concentratia in faza mobila !C
&
#
@
%
C
& C

@
%
@
%
+igura 8.1.!B Ezoterme de distribuie neliniare
neideale !fenomene nsoite di difuzia
zonelor#.


Concentratia in faza mobila !C
&
#
@
%
C
& C

@
%
@
%
+igura 8.1.cB Ezoterme de distribuie neliniare
neideale !fenomene nsoite di difuzia
zonelor#.
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU 9
Cercetarea criminalistic a microurmelor
(ratarea riguros matematic a acestor procese nu e posibil dac pe lng procesul de
repartiie0adsorbie are loc procesul secundar de transport de mas, difuziune, adsorbie0desorbie,
fenomene care se influeneaz i se condiioneaz reciproc.
a# izoterma liniar idealB este o linie dreapt mai mult sau mai puin nclinat, dup cum
componentul mai mult sau mai puin reinut de faza staionar. Dchilibrul se stabilete
instantaneu, fenomenul de difuzie lipsete iar forma zonelor de separare a celor doi
componeni e perfect determinat i simetric. Concentraia componenilor substanelor n
interiorul fiecrei zone e repartizat uniform.
b# izoterma adsorbiei neideale este apro"imativ liniar. Dchilibru de adsorbie se stabilete relativ
ncet. ubstanele difuzeaz i ca atare petele cromatografice au margini difuze. Uepartizarea
substanelor n interiorul petei e neuniform.
c# izoterme curbe concave sau conve"eB substanele difer mult, petele apar cu cozi i e"ist
condiii necorespunztoare pentru separare. Pot apare aceste situaii din cauza faptului c
adsorbanii sau solvenii de migrare nu au fost bine alei sau datorit faptului ca nivelul
concentraiilor celor dou substane e mult prea mare i depete capacitatea de adsorbie a
fazei staionare. Uepartizarea componenilor de0a lungul cromatogramei se face funcie de
solubilitatea solutului n cele dou faze lichide i va depinde de o serie de factori structurali i
polaritate. Caza mobil d legturi intermoleculare !legturi de hidrogen# dac n cealalt faz
e"ist substane care conine grupri capabile s formeze astfel de legturi !grupri 76#.
D"emple de adsorbeni ce posed aceste legturi includ silicagelul i alumina !valorile Uf cresc
odat cu creterea triei legturii de hidrogen ntre substan i solvent i valorile Uf scad
odat cu creterea energiei legturii de hidrogen ntre substane i adsorbent #. &ai pot apare
legturi polare, multipolare, legturi donor0acceptor.
8.1., Cromato%lci %entru tehnica TLC -i a%licarea %ro!elor
(ehnica (/C const n obinerea unui strat subire de adsorbent pe o plac de sticl sau alt suport.
1imensiunile sunt diferite. Plcile pot fi i achiziionate. &rimile acestor plci variaz de la 8V3.,
,.V3. i 3.V3.. Plcile comerciale pot fi convenionale i de nalt performan. /a plcile
convenionale grosimea stratului este de 3.. T 38. Lm cu dimensiuni ale particulelor de 3. m. /a
plcile de nalt performan grosimea stratului este de ,.. Lm cu dimensiuni ale particulelor de 8
m sau chiar mai mici. Cromatoplcile de nalt performan dau separri mai bune n timp mai
scurt. 7 plac convenional poate da pn la 3... talere pe o distan de ,3 cm ntr0un timp de
38 minute. Pentru cromatoplcile de nalt performan se pot obine pn la 4... talere pe o
distan de = cm ntr0un timp de pn la ,. minute. 1ezavantajul cromatoplcilor de nalt
performan sufer de dezavantajul de a avea capaciti reduse ale probelor.
@plicarea probelor n tehnica (/C este cel mai critic aspect. Pe cromatoplci se traseaz o linie
de start imaginar la circa 3 cm de unul din capete. oluia de analizat !de concentraie .,., T
.,,O# se aplic cu o micropipet !, T ,. Ll sau , 0 ,. Lg#. 1iametrul petei aplicate nu trebuie s
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU ?
Cercetarea criminalistic a microurmelor
depeasc = mm n diametru !pentru a obine eficiena cea mai bun la separare#. Pentru
depunerea succesiv a unei soluii diluate este necesar uscarea petei de fiecare dat, pentru a
obine zone nguste concentrate. @plicarea manual se realizeaz prin folosirea unei capilare sau
a unei seringi hipodermice. D"ist i sisteme automate care cresc precizia i acurateea la
aplicarea probei !'oog#. Colosirea capilarelor din platin0iridiu permite aplicarea unor spoturi cu
volume de ,.. T 3.. n/ !>ellner#.
8.1.. /e01oltarea cromatogramei -i (etec"ia #locali0area' anali"ilor %e cromato%lac
Pentru separri se folosesc cromatoplaci activate. @ctivarea cromatoplcilor se face nainte de
utilizare prin introducerea n etuv la o temperatur n jur de ,..
.
C, timp de 48 minute T , or.
1up pregtirea probelor placa se usuc i se supune migrrii n camere cromatografice speciale,
nchise etan. /inia de start de pe plac trebuie s fie cu cel puin .,98 T , cm deasupra nivelului
lichidului din camera cromatografic nchis etan i saturat n vapori n mediul de deasupra
solventului. e las s se irige placa !frontul solventului s ajung la 3 cm de partea superioar#,
se ndeprteaz cromatoplaca din camera cromatografic, se usuc i se identific substanele
separate.
Pentru localizarea spoturilor !vizualizare# dup realizarea separrii se pot folosi att reactivi
anorganici ct i organici. &etodele cel mai des aplicate implic spraF0ere cu o soluie de iod sau
acid sulfuric, ambele reacionnd cu o serie de compui organici. e poate folosi i ninhidrina. 7
alt metod de detecie const n ncorporarea unui material fluorescent n faza staionar. 1up
dezvoltarea cromatogramei, cromatoplaca se e"amineaz sub lumin <P. Componenii probei
atenueaz fluorescena astfel c toat cromatoplaca are fluorescen cu e"cepia spoturilor unde
e"ist analiii separai.
&etodele de localizare a spoturilor pot fi sistematizate n orice caz dup cum urmeazB
a# folosirea caracteristicilor de luminiscen a analitului !fenomenul de fluorescen pentru
compui organici i fenomenul de fosforescen pentru compui anorganici#
b# impregnarea stratului fazei staionare cu o substan indicatoare fluorescent !ca substane
indicatori se pot folosi derivaii de piren, fluoresceina, morina sau rodamina %#
c# spraF0ere cu un o"idant pouternic nespecific !627=, >&n74, 6374#. @par spoturi negre la
o"idarea compFilor organici
d# spraF0ere cu soluii de reactivi specifici !ninhidrina pentru a vizualiza gruparea 263 !+igura
8.)#, clorura de Ce!EEE# pentru fenoli, ftalatul de anilin pentru zaharurile reductoare, sau
reactivi de formare a complecilor pentru vizualizarea ionilor metalici.
C
C
7
7
C
76
76
ninhidrina
U026
3
C
C
C
7
7
2
7
7
produs albastru colorat
+igura 8.)B Cormarea produsului
colorat n albastru din reacia dintre
ninhidrin i gruprile 263.
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU -
Cercetarea criminalistic a microurmelor
8.1.2 Caracteristici ale cromato%lcilor (in TLC
8.1.2.1 +actorul (e ratar(are #reten"ie& Rf'
Cactorul de retardare, Uf se determin prin raportul dintre distana parcurs de analit de la linia de
baz i distana parcurs de solvent de la linia de baz.
&
U
f
d
d
U =
1eoarece spoturile nu sunt simetrice, distana se msoar pn la poziia de intensitate ma"im
!+igura 8.,#.
/inia de start
Crontul solventului
Proba 3
Proba ,
A
A
@ A
%
d
U
d
&
U
f
W d
U
Sd
&
+igura 8.,3 Cromatogram obinut prin tehnica (/C.
8.1.2.) +actorul (e ca%acitate
Cactorii dU !distana parcurs de analit de la linia de start# i d& !distana parcurs de solvent de la
linia de start# pot fi raportai la tU !timpul necesar solventului s parcurg o anumit distan# i t&
!timpul necesar solutuluiSanalitului s parcurg o anumit distan#.
(impul petrecut de analitSsolut n faza mobil este egal cu distana parcurs mprit la viteza
liniar a solventului, u.
u
d
t
U
&
=
olutul nu ajunge la acest punct pn cnd faza mobil nu parcurge distana d&.
u
d
t
&
U
=
Cactorul de capacitate se noteaz cu 'X i este dat de relaiaB
U
U &
d
d d
'

=
Cactorul de capacitate poate fi e"primat i prin intermediul factorilor Uf.
f
f
&
U
&
U
U
U ,
d
d
d
d
,
'

=

=
Cactorii de capacitate astfel obinui pot fi folosii pentru dezvolatrea cromatografiei pe coloan.
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU ,.
Cercetarea criminalistic a microurmelor
8.1.2., 4nl"imea unui taler cromatografic
$nlimi ale talerelor pot fi obinute pentru anumite tipuri de cromatoplci din tehnica (/C. 2umrul
de talere teoretice se poate calcula cu relaia
3
U
A
d
,5 2

=
$nlimea unui taler se calculeaz cu relaiaB
2
d
6
U
=
unde dU i A sunt cele definite n +igura 8.,.
8.1.5 A%lica"ii ale cromatografiei n strat su!"ire
(ehnica (/C se folosete att la determinri calitative !Uf T metoda comparrii valorilor Uf# ct i
determinri cantitative !prin metode gravimetrice, volumetrice sau spectrofotometrice n PEJ i <P#.
1atele de la o singur cromatogram, n mod uzual, nu furnizeaz informaii suficiente pentru a
permite identificarea unor specii prezente ntr0un amestec din cauza variabilitii factorului Uf cu
mrimea probei, numrul de talere i condiiile de la migrare.
Cei mai importani factori care determin mrimea factorului Uf includ grosimea fazei
staionare, umiditatea fazelor mobil i staionar, temperatura, gradul de saturare a camerei
cromatografice n vaporii fazei mobile, mrimea probei. @ceste variabile nu pot fi controlate dar pot
fi parial ameliorate prin folosirea unui factor de retenie relativ !Urel# determinat pentru analitul i n
raport cu o substan standard, stB
f!st#
f!i#
rel
U
U
standard substanta o de parcursa distanta
analit de parcursa distanta
U = =
Pentru identificarea spoturilor evideniate la dezvoltarea cromatogramei se poate folosi metoda
comparrii factorului Uf cu acela al unor substane pure !standarde#.
Edentificarea se poate realiza i prin tehnica prelevrii e"acte a spotului evideniat pentru un
analit. Prelevarea se poate realiza cu o spatul, aducerea componentei prelevate ntr0o eprubet,
dizolvarea analitului cu un solvent potrivit, separarea de faza staionar insolubil prin centrifugare
i analiz prin spectrometrie de mas, rezonan magnetic nuclear sau spectroscopie n
infrarou.
Comparativ cu tehnica cromatografiei de lichide de nalt performan, tehnica (/C are cteva
puncte slabe cum ar fiB
a# Piteza solventului nu este constant, poate fi modificat prin mrimea particulelor fazei
staionare i tipul solventului folosit. cderea vitezei de migrare poate duce la lrgirea
spoturilor.
b# Compoziia solventului se poate modifica n timpul separrii datorit unor echilibre induse de
faza staionar. @cest fapt conduce la factori de capacitate care sunt greu de reprodus i
implicit la separri nereproductibile.
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU ,,
Cercetarea criminalistic a microurmelor
8.) Cromatografia ionic #IC'
@naliza amestecurile de anioni, cationi sau compui polari a impus necesitatea utilizrii
cromatografiei ionice, lucru dificil sau imposibil de realizat eficient prin celelalte variante ale
cromatografiei de lichide. @ceasta variant a cromatografiei de lichide de nalt presiune se
bazeaz pe utilizarea coloanelor cu schimbtori de ioni respectiv a materialelor rezistente la
agresivitatea acizilor, bazelor sau srurilor T substane a caror soluii apoase servesc drept elueni.
1intre toate elementele unui sistem cromatografic faza staionar reprezint elementul cheie
deoarece determin mecanismul de separare care este operativ. &ecanismul de separare, n
schimb, dicteaz alegerea fazei mobile i adeseori care metode de detecie ar putea fi aplicate n
mod corespunztor. Pentru a nelege importana fazei staionare n procesul cromatografic este
necesar s se cunoasc unele aspecte privind compoziia sa i, n acelai timp, este util s se
cunoasc cum se prepar o faz staionar.
8.).1 Schim!torii (e ioni
chimbtorii de ioni reprezint cea mai utilizat faz staionar n cromatografia de ioni. <n
schimbator de ioni cuprinde n compoziia sa urmtoarele trei elemente importanteB o matrice
insolubil care poate fi de natur organic sau anorganic, locaii ionice fi"e care sunt fie ataate,
fie parte integrant din matricea insolubil i, n asociere cu aceste locaii fi"e, o cantitate
echivalent de ioni de sarcin opus, fa de cei din locaiile fi"e.
Hruprile ataate mai sunt cunoscute i sub denumirea de grupri funcionale iar ionii asociai
mai sunt numii i contraioni. Contraionii sunt mobili n interiorul schimbtorului de ioni i dein
proprietatea important c au capacitatea de a fi nlocuii cu ali ioni de aceeai sarcin atunci
cnd sunt plasai ntr0o soluie care conine asemenea ioni. @ceast ultim proprietate este cea
care furnizeaz acestor materiale numele lor.
Pe lng aceast proprietate fundamental, schimbtorii de ioni, pentru a putea fi utilizai n
cromatografia ionic, ar trebui s prezinte i urmtoarele proprietiB
,. Proprietatea de a schimba ionii rapid.
3. tabilitate chimic ridicat ntr0un domeniu larg de p6.
=. Uezisten mecanic ridicat i rezisten la ocuri osmotice.
4. Uezisten la deformare atunci cnd sunt mpachetate n coloana i supuse la curgerea fazei
mobile.
1rept matrice pe care se ancoreaz locaiile ionice ale schimbtorilor de ioni se utilizeaz o
gam larg de materiale. $n cromatografia ionic modern cele mai utilizate materiale includ silicea
i o serie de polimeri organici care au la baz stirenul. D"celenta stabilitate chimic a rinilor
schimbtoare de ioni de tip organic le furnizeaz un avantaj clar n faa celor pe baz de silice cu
sensibilitate ridicat la variaii de p6.
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU ,3
Cercetarea criminalistic a microurmelor
8.).) 6recursori %olimerici ai r-inilor schim!toare (e ioni
$n cromatografia ionic faza staionar este o rin polimeric interlegat !+igura 8..#, de obicei
de forma divinil benzen interlegat cu polistiren, cu grupri funcionale ionice ataate covalent.
Uinile schimbtoare de ioni pot fi mprite n patru categoriiB schimbtori cationici puternic acizi,
schimbtori cationici slab acizi, schimbtori anionici puternic bazici, schimbtori anionici slab
bazici.
stiren
divinil benzen
+igura 8..3 tructuri ale stirenului, divinil0benzenului i un copolimer modificat de stiren0divinil0benzen pentru
a fi folosit ca rin schimbtoare de ioni. ite0ul pentru schimb este de obicei n poziia para i nu este
neaprat necesar s fie legat la toate unitile de stiren. U0 poate fi T7=
0
6
N
, C77
0
6
N
, 026=
N
76
0
sau T
2!C6=#=
N
76
0
.
Cel mai uzual mod de preparare a unei rini schimbtoare de ioni este acela n care mai nti
se prepar un polimer neutru pe baz de stiren, pentru ca mai apoi acesta s fie modificat chimic
pentru a introduce gruprile cu funciuni ionice. $n mod alternativ, monomerii care conin funciunea
ionic necesar pot fi polimerizai printr0o interlegtur potrivit pentru a obine un schimbtor de
ioni, dar materialele obinute pe aceast cale nu sunt utilizate n mod obinuit n cromatografia
ionic. D"ist dou ci principale pentru obinerea precursorilor polistirenici folosii n cadrul
majoritii rinilor schimbtoare de ioni. 1in prima se obin produi ce sunt cunoscui drept
polimeri de tip gel, iar din cea de0a doua cale se obin materiale macroporoase. 1iferena
structural dintre cele dou tipuri de polimeri are implicaii importante n privina schimbtorului de
ioni, n special n ceea ce perivete viteza de schimb ionic, mai ales atunci cnd acetia au
dimensiuni mari.
8.)., *ecanisme (e se%arare
chimbtorii de ioni sunt materiale solide 0 derivai ai unor polimeri reticulai !poroi#, obinui prin
legarea de catenele hidrocarbonate, ramificate, ale unor grupe funcionale aa cum sunt
reprezentate schematizat n Ta!elul 8.1. Hranulele de rin se solvateaz cu apa tinznd spre
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU ,=
/ocaie pentru
schimb ionic
Enterlegtur
Cercetarea criminalistic a microurmelor
un volum0 limit ma"im. Prin spaiile dintre catenele unui cationit pot ptrunde prin difuziune n faza
lichid doar molecule neutre sau cationi, anionii fiind e"clui.
Ptrunderea n granule a ionilor de semn contrar este ngreunat i de Yefectul 1onnan+ de
membran, care apare pe suprafaa granulei i provoac o selectivitate a acesteia la ptrunderea
ionului, n funcie de dimensiunile acestuia. <n alt mecanism util n cazul substanelor neionice sau
a celor ionice dar cu gruparea ionic identic dar cu geometria moleculei diferit T este difuzia prin
granule. @nalog stau lucrurile ntr0un anionit, cu deosebirea c de ast dat sunt e"clui cationii.
Ta!el 8.13 (ipuri de schimbtori de ioni.
(ip Hrupare funcional D"emple
chimbtori cationici puternic acizi @cid sulfonic 07=
0
0C63C637=
0
chimbtori cationici slab acizi @cid carbo"ilic 0C77
0
0C63C77
0
chimbtori anionici puternic bazici @mine cuaternare 0C632!C6=#=
N
0C63C632!C63C6=#=
N
chimbtori anionici slab bazici @mine 026=
N
0C63C6326!C63C6=#3
N
1e e"emplu, prin introducerea unui amestec de 2a
N
i >
N
pe o coloana umplut cu un cationit
acetia vor fi fi"ai pe rin, elibernd o cantitate echivalent de ioni hidroniu.
U06 N 2a
N

U02a N 6
N
U06 N >
N

U0> N 6
N
Pompnd un eluent prin coloana, !6Cl diluat#, ionii 6
N
din acid, fiind n concentraie mai mare,
vor deplasa ionii fi"ai, prin echilibre ionice similare spre o poriune inferioar iar acetia se vor
putea fi"a din nou, puin mai jos, pe alte centre de schimb din coloan.
U02a N 6
N

U06 N 2a
N
U0> N 6
N

U06 N >
N
Uepetarea procesului duce la migrarea ionilor prin coloan, ns, datorit afinitii sporite a
gruprilor funcionale tip 07=
0
pentru >
N
fa de 2a
N
, primul grup de ioni !sau prima zona# care va
iei din coloan va fi cel format din ionii de sodiu i abia dup un timp va iesi grupul coninnd ionii
de potasiu, asigurnd separarea celor doi ioni. imilar sunt separate i amestecuri mai complicate,
uneori fiind necesare coloane mai lungi.
1eoarece creterea diametrului granulelor conduce la apariia unor zone mai largi i separri
mai de durat, iar granulele se deformeaza mecanic n timp, rina se aplic sub form de pelicul
subire pe un miez de sticl sferic, eficacitatea separrii i fiabilitatea coloanelor crescnd foarte
mult. Cazele mobile n EC sunt simple T de obicei soluii apoase diluate de acizi sau baze. <neori
poate fi necesar adugarea de metanol pentru a facilita dizolvarea moleculelor puin ionizate n
ap. Pentru separarea cationilor se utilizeaz ca faze staionare cationii !schimbtori de cationi# i
drept elueni, soluii de acizi, iar pentru separarea bazelor se folosesc anionii !schimbtori de
anioni# i ca elueni soluii de baze, de e"emplu, o soluie de bicarbonat de sodiu.
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU ,4
Cercetarea criminalistic a microurmelor
8.).. Con(uctometria 7 mi8loc mo(ern (e (etec"ie n cromatografia ionic
&onitorizarea conductivitii prezint o serie de caracteristici care ofer acestei proprieti
posibilitatea s fie folosit ca mijloc de detecie. Conductivitatea este o proprietate universal a
soluiilor ionice, reprezentnd de fapt proprietate proporional cu concentraia componenilor.
1eoarece fazele mobile folosite n cromatografia cu schimbtori de ioni sunt ionice !de aceea
de multe ori aceste faze prezint o conductivitate ridicat# detectorul de conductivitate folosit n
aceast metod este un detector al unei proprieti comune. $n acest tip de detecie,
conductivitatea de fond a eluentului folosit n cromatografia cu schimb ionic este intensificat, dar
celula de conductivitate este transformat dintr0un detector al unei proprieti comune ntr0un
detector de proprietate al unui solut.
@cest fundament teoretic a fost e"ploatat i desvrit prin adugarea unei a doua coloane de
schimb ionic ntre separator i celula de conductivitate care transport ionii eluentului, sau care
modific conductivitatea acestora la valori mai mici, n timp ce conductivitatea eluailor este
intensificat. Procedura a devenit cunoscut sub numele de supresia eluentului i a fost raportat
pentru prima dat n anul ,-98 de ctre mall i colaboratorii si. &ai trziu, a aprut posibilitatea
cuplrii directe a coloanei schimbtoare de ioni cu detectorul de conductivitate i metoda a fost
cunoscut sub numele de cromatografia ionic cu o singur coloan. Zinnd cont de aceast
procedur de lucru, detectorii conductometrici pot fi inclui n dou mari categorii tip detectori
conductometrici cu supresie i detectori conductometrici fr supresie.
8.)...1 6rinci%iul (etectorilor con(uctometrici (e su%resie
1etectorii conductometrici se utilizeaz cu precdere n cromatografia pe schimbtori de ioni i
sunt sensibili la ioni anorganici sau organici inclusiv acizi organici. unt detectori specifici i sunt
suficient de sensibili !8.. pg T , ng#. 1etectorii conductometrici sunt sisteme caracterizate de
sensibilitate ridicat, stabilitate, fle"ibilitate, acuratee i reproductibilitate, i de capacitate mare de
a furniza date de ncredere. 1etectorii conductometrici ofer posibilitatea unei cuantificri a
anionilor, cationilor, metalelor i acizilor organici aflai n diferite probe, n concentraii mai mici de
ordinul prilor per bilion !ppb#. 2oile micro0procesoare, bazate pe circuite electrice, mbuntesc
sensibilitatea deteciei analitului prin reducerea zgomotului de fond.
1e obicei, la ieirea din coloana cromatografic ionii nu pot fi detectai suficient de sensibil pe
cale conductometric n mod direct, deoarece au concentraii coborte i sunt coninui n eluentul
format dintr0un electrolit cu o concentraie comparabil sau chiar mai mare. Pentru mbuntirea
performanelor s0a recurs la supresorul ionic care a fost realizat pentru prima dat n ,-98 de un
grup de cercettori americani !6. mall i colab.#. Eniial sistemul a constat dintr0o coloan0
supresor, plasat n continuarea celei de separare, cu rolul de a transforma eluentul !un acid sau o
baz tare# n ap.
1e e"emplu, pentru eluent acid !acidul clorhidric# coloana supresor este umplut cu o rin
schimbtoare de anioni cu formula general U076, caracterizat de capacitate de schimb mare.
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU ,8
Cercetarea criminalistic a microurmelor
Coloana de separare poate fi redat ca U6 i coloana de supresie ca U76. Dluentul care conine
acid clorhidric diluat de e"emplu, la ieirea din coloana de separare va ptrunde n coloana
supresor unde se va petrece reaciaB
U076 N !6
N
N Cl
0
# [ U0Cl N 637
Ueacie prin care acidul utilizat drept eluent este trecut n ap care este un neelectrolit.
$ntre timp, srurile se transform n hidro"izii corespunztoriB
U076 N !2a
N
N Cl
0
# [ U0Cl N !2a
N
N 76
0
#
U076 N !>
N
N Cl
0
# [ U0Cl N !>
N
N 76
0
#
@pa fiind practic neionizat va permite detecia sensibil a hidro"izilor total ionizai ce au aprut
din zonele formate iniial din cele dou sruri. 1eoarece i eluentul este format din ioni care
conduc curentul, nainte de supresor semnalul va fi mai slab.
1ac se urmrete separarea a doi anioni, de e"emplu Cl
0
i %r
0
, eluentul ar putea fi, nu un
acid ci o baz diluat, de e"emplu 2a76, sau 2a6C7=. $n acest caz separarea se va realiza pe
coloane de anionii i eluentul ar fi de e"emplu 2a76. /a ieirea din coloana de separare avem n
eluentul folosit zonele separate ale srurilor anionilor supui analizei, adic 2aCl i 2a%r.
upresorul utilizat n acest caz va fi format dintr0o rin de forma U06 n e"ces pe care se va
petrece reaciaB
U06 N !2a
N
N 76
0
# [ U02a N 637
8.)...) Su%resorul electrochimic
$n prezent, supresorul electrochimic !sau autosupresorul# din cromatografele ionice recente a
nlocuit coloana cu schimbtori de ioni cu membrane schimbtoare de ioni. $n plus, procesul de
schimb ionic n cromatografele moderne este accelerat prin electrodializ. $n acest fel s0a mrit
viteza procesului i s0a micorat volumul mort. &ai mult, a crescut durata de funcionare a
detectorului.
$n aceste tipuri de detectori, n general, celula detectorului este localizat ntr0o incint special
de reglare a temperaturii, care are rolul de a izola celula detectorului de fluctuaiile e"terne de
temperatur. <n schimbtor de cldur unic, nclzete faza mobil i proba nainte ca acestea s
ajung n celula detectorului. @ceste dou trsturi furnizeaz stabilitatea liniei de baz !se elimin
influena curentului indus de temperatur care este ntlnit la alte tipuri de detectoare#.
$n +igura 8.2 se prezint schematic, procesul de mbuntire a raportului semnal0zgomot
pentru un sistem de analiz formal. $n acest e"emplu, sistemul de supresie cu autoregenerare,
nlocuiete ionii de sodiu !i ali cationi# din eluent i i transport odat cu ionii hidroniu din apa
folosit ca regenerant. Eonii hidroniu se combin cu ionii hidro"id rezultai din eluent i formeaz
apa, care are o conductivitatea mult mai mic dect a hidro"idului de sodiu folosit ca eluent.
Conductivitatea analitului este intensificat deoarece anionii analitului se asociaz cu ionii hidroniu
care sunt mult mai conductivi.
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU ,5
Cercetarea criminalistic a microurmelor

Ueziduuri
6
3
7
6C, 6Cl, 6
3
7
4
, n 6
3
7
2aC, 2aCl, 2a
3
7
4
, n 6
3
7
Coloana
analitic
istem de
supresie cu
regenerare
Dluent !2a76# Prob !C
0
, Cl
0
, 7
4
30

C
0

Cl
0

7
4
30
L
eparare prin supresie
C
0

Cl
0

7
4
30

eparare fr supresie
(imp
L
(imp
Eonii
interfereni
+igura 8.23 Ueprezentarea schematic a procesului de mbuntirea a raportului semnal0zgomot
@ceste procese convertesc n mod efectiv un detector de conductivitate dintr0un detector al
unei proprieti comune, ntr0un detector de proprietate specific capabil s detecteze concentraii
e"trem de joase !ppb# ale ionilor cu specificitate deosebit. Pentru sistemele de supresie cu auto
regenerare se cunosc dou tipuri de sistemeB sisteme anionice de supresie cu auto0regenerare
!analiza anionilor# i sisteme cationice de supresie cu auto0regenerare !analiza cationilor#. $n
funcie de sistemul de operare, supresorii pot fi inclui n trei categoriiB supresori care opereaz n
modul ciclic, supresori care opereaz n modul e"tern i supresori n modul chimic.
Chimismul din sistemul de supresie cu auto0regenerare anionic este ilustrat n +igura 8.5.
D"emplul este dat pentru situaia n care ca eluent se folosete hidro"idul de sodiu, dar n calitate
de eluent pot fi folosite i amestecurile carbonatSbicarbonat de sodiu sau acid boricStetraborat. $n
acest sistem, apa este folosit ca agent de regenerare care sufer procesul de electroliz cu
formare de o"igen n stare gazoas i ioni de hidroniu n camera anodic, i cu formare de
hidrogen gazos i ioni hidro"il n camera catodic. Eonii hidro"il formai la catod sunt nlturai din
camera eluentului printr0un proces de e"cluziune. &embranele schimbtoare de cationi permit
transportul ionilor hidroniu de la camera anodic n camera eluentului unde se produce
neutralizarea hidro"idului din eluent, n timp ce ionii de sodiu din eluent sunt transportai de0a
lungul membranei n camera catodului, meninnd bilanul de sarcini. Uezultatul acestui proces este
mbuntirea semnificativ a raportului semnal0zgomot datorit a trei factoriB
,# conductivitatea de fond a eluentului descrete dup cum eluentul este supus procesului de
supresie la o conductivitate medie, mai mic n valoare, corespunztoare apei\
3# conductivitatea analitului crete prin asocierea cu ionii hidroniu din camera eluentului, i
=# contorizarea picurilor corespunztoare interferenilor este nlturat.
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU ,9
Cercetarea criminalistic a microurmelor

@nalit
2a
N
76
0
eluent
@nod
0 N
&embran schimbtoare
de cationi
&embran
schimbtoare de cationi
6
3
7 6
3
7
@nalit i 6
3
7
6
3
7
6
3
7
6
N
N 76
0
W6
3
7
6
3
7 i 7
3

6
N
N 7
3

6
N
2a
N

76
0

pre detector
6
3
N 76
0

2a
N
76
0
i 6
3

Ueziduuri Ueziduuri
Catod
+igura 8.53 @utosupresia ntr0un sistem de supresie cu auto0regenerare anionic.
Chimismul sistemului de supresie cu auto0regenerare cationic este prezentat n +igura 8.9. Ki
n aceste sisteme, ca agent de regenerare se folosete apa care sufer procesul de electroliz cu
formare de hidrogen n stare gazoas i ioni hidro"il n camera catodic i o"igen gazos i ioni
hidroniu n camera anodic. Eonii hidroniu generai la anod sunt nlturai din camera eluentului prin
acelai proces de e"cluziune ntlnit i n cazul celuilalt tip de sistem. &embranele schimbtoare de
anioni permit ionilor hidro"il s fie transportai din camera catodului n camera eluentului cu
neutralizarea ionilor hidroniu n eluent, n timp ce ali ioni ai eluentului !&@
0
# sunt transportai de0a
lungul membranei n camera anodic cu meninerea bilanului de sarcin. Uspunsul va fi puternic
mbuntit prin asocierea cationilor analitului cu ionii hidro"il caracterizai de conductiviti ridicate
ca valoare.
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU ,?
Cercetarea criminalistic a microurmelor

@nalit
2a
N
76
0
eluent
@nod
Catod
0 N
&embran schimbtoare de
anioni
&embran schimbtoare de
anioni
6
3
7 6
3
7
@nalit i 6
3
7
6
3
7
6
3
7
&@
0

6
N
&@
0
i 7
3

6
N
N 7
3

6
N

76
0

pre detector
6
3
N 76
0

6
3
7

i 6
3

Ueziduuri Ueziduuri
6
N
N 76
0
W6
3
7
&@
0
6
N
+igura 8.9B @utosupresia ntr0un sistem de supresie cu auto0regenerare cationic.
8.)..., +unc"ionarea autosu%resorului n anali0a anionilor
Procesele de supresie i de regenerare electrochimic n timpul analizei anionilor i, respectiv, a
cationilor pot fi redate difereniat dup cum urmeaz.
Pentru analiza anionilor, celulele de regenerare electrochimic i supresie sunt umplute cu
rini puternic schimbtoare de cationi n forma hidrogen. $n timpul supresiei, conductivitatea nalt
a fazei mobile este convertit la conductivitatea joas a apei prin schimbul ionic al ionilor de sodiu
din faza mobil cu ionii de hidrogen din rina schimbtoare de cationi. $n acelai timp
conductivitatea joas a anionilor analitului este convertit la conductivitatea ridicat a acizilor lor
!+igura 8.8#. emnalul de fond va fi redus iar semnalul analitului va fi intensificat, i astfel detecia
va fi mbuntit.
$n timpul regenerrii electrochimice, efluentul de la detector sufer electroliz atunci cnd un
curent este aplicat prin celul. Eonii hidroniu i o"igenul gazos sunt generai la sistemul de intrare al
celulei !anodul#, n timp ce ionii hidro"il i hidrogenul gazos sunt generai la sistemul de ieire al
celulei !+igura 8.:#. $n acest proces ionii de hidrogen sunt transportai prin intermediul efluentului
de la detector de0a lungul rinii schimbtoare de cationi n forma sodiu, i convertesc rina
napoi la forma hidrogen.
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU ,-
Cercetarea criminalistic a microurmelor

Caza mobil
2a76 N Uina07
=
0
6
N
W Uina07
=
0
2a
N
N 6
3
7
@naliii
2a] N Uina07
=
0
6
N
W Uina07
=
0
2a
N
N 6]
] W %r
0
, Cl
0
, 27
=
0
, C6
=
7
3
0
, C6
=
7
=
0
, etc
pre
detector
1e la
coloan
Celula *@Y 0 upresie
Uina07
=
0
2a
N
Uina07
=
0
6
N

+igura 8.83 Principiul funcionrii supresorului la analiza anionilor.

Uina07
=
0
2a
N
N 6
N
W Uina07
=
0
6
N
N 2a
N

1e la
detector
pre
reziduuri
Celula *%Y 0 Uegenerare
36
3
7 N 3e
0
W 376
0
N 6
3
36
3
7 W 46
N
N 7
3
N4e
0

+igura 8.:3 Procesul de regenerare a autosupresorului la analiza anionilor.
8.).... +unc"ionarea autosu%resorului n anali0a cationilor
Pentru analiza cationilor, celulele de regenerare electrochimic i cele de supresie sunt umplute cu
rini puternic schimbtoare de anioni n forma hidro"il !+igura 8.1;#.

Caza mobil
6Cl N Uina02U
=
N
76
0
W Uina02U
=
N
Cl
0
N 6
3
7
@naliii
&Cl N Uina02U
=
N
76
0
W Uina02U
=
N
Cl
0
N &76
& W >
N
, 2a
N
, Ca
3N
, etc
pre
detector
1e la
coloan
Celula *@Y 0 upresie
Uina02U
=
N
Cl
0
Uina02U
=
N
76
0

+igura 8.1;3 Principiul funcionrii supresorului la analiza cationilor.
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU 3.
Cercetarea criminalistic a microurmelor
$n timpul supresiei, conductivitatea nalt a fazei mobile este convertit la conductivitatea joas
a apei prin schimbul ionic al ionilor de clorur !de e"emplu# din faza mobil cu ionii de hidro"id din
rina schimbtoare de anioni. $n acelai timp conductivitatea joas a cationilor analitului este
convertit la conductivitatea ridicat a hidro"izilor lor. emnalul de fond va fi redus iar semnalul
analitului va fi intensificat, i astfel detecia va fi mbuntit.
$n timpul regenerrii electrochimice, efluentul de la detector sufer electroliz atunci cnd un
curent este aplicat prin celul !+igura 8.11#. Polaritatea celulei este inversat, comparativ cu
analiza anionilor, i catodul este localizat la intrarea n celul. Eonii hidro"il i hidrogenul gazos sunt
generai la sistemul de intrare al celulei !catodul#, n timp ce ionii hidroniu i o"igenul gazos sunt
generai la sistemul de ieire al celulei. $n acest proces ionii hidro"il sunt transportai prin
intermediul efluentului de la detector de0a lungul rinii schimbtoare de anioni n forma clorur, i
convertesc rina napoi la forma hidrogen.

Uina02U
=
N
Cl
0
N 76
0
W Uina02U
=
N
76
0
N Cl
0

1e la
detector
pre
reziduuri
Celula *%Y 0 Uegenerare
36
3
7 N 3e
0
W 376
0
N 6
3
36
3
7 W 46
N
N 7
3
N4e
0

+igura 8.113 Procesul de regenerare a autosupresorului la analiza cationilor.
8., Cromatografia (e lichi(e
Cromatografia de lichide include cromatografia planar i pe coloan. Cromatografia de lichide pe
coloan, poate fi clasic i de nalt performan !6P/C#.
8.,.1 Cromatografia (e lichi(e %e coloan clasic #CL'
Dste o tehnic care se caracterizeaz prinB
a# folosirea coloanelor scurte cu diametrele relativ mari, umplute cu particule mai mari dect ?.
de micrometri\
b# operarea la presiune atmosferic sau mai mic\
c# analiza fraciunilor individuale, colectat de la baza coloanei.
&etoda este insuficient n cazul probelor de mare comple"itate i prezint o mare durat de
e"ecuie. e poate aplica n scopuri analitice i preparative.
8.,.) Cromatografia (e lichi(e %e coloan instrumental
Ueprezint tehnic ce se caracterizeaz prinB
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU 3,
Cercetarea criminalistic a microurmelor
a# folosirea coloanelor lungi i nguste umplute cu particule mici\
b# separri de nalt eficien realizate ntr0un timp scurt\
c# operarea la presiune ridicat\
d# detecia continu a componen ilor separati cu posibilitate de automatizare a procesului de
separare\
e# precizia determinrilor cantitative\
f# capacitatea de a separa specii nevolatile sau instabile termic.
Cromatografia de lichide pe coloan de nalt performan !6P/C#B necesit crearea unor condiii
optime de transport a fazei lichide sub presiune\ necesit asigurarea atingerii rapide a echilibrelor
de distribuie i a deteciei optime pentru componenii separai.
8.,., Clasificare
&etodele cromatografiei de lichide sunt complementare i principalele metode utilizate n
cromatografia de lichide precum i ntreptrunderea acestora n vederea utilizrii lor n practic
sunt prezentate n +igura 8.1).
(ehnica cromatografiei de lichide poate cuprinde prin urmare tehnici precumB
0 cromatografia de adsorbie !cromatografia /0 bazat pe mecanisme de adsorbie#\
0 cromatografia prin schimb ionic !CE sau EC bazat pe mecanisme de schimb#\
0 cromatografia de e"cludere difuzie !cromatografia prin penetraie prin gel i filtrare pe gel#\
0 cromatografia de repartiie !cromatografia /0/ bazat pe mecanisme de repartiie#\
0 alte metode includ cromatografia de afinitate sau schimb de liganzi i cromatografia perechilor
ionice.
@dsorbtie
Partitie
chimb ionic
Partitie
normala
Partitie cu faze
inversate
Permeatie prin gel Ciltrare prin gel
D"cluziune
,.
3
,.
=
,.
4
,.
8
,.
5
Polari neionici
2epolari
Eonici
Ensolubili in apa olubili in apa
Cresterea polaritatii
+igura 8.1)B @plicaiile cromatografiei de lichide.
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU 33
Cercetarea criminalistic a microurmelor
&etodele cromatografiei de lichide pot fi utilizate funcie de scopul urmritB
4 Pentru moleculele cu greutate molecular mare se folosete cromatografia de e"cludere T
difuzie\
4 Pentru compuii ionici cu greutatemolecular mic se folosee n mod curent CE.
4 Pentru speciile neionice, dar puin polare se folosete cromatografia de repartiie.
4 Cromatografia de adsorbie este aleas pentru specii nepolare izomere structural sau compui
ce aparin unor clase cum ar fi separarea hidrocarburilor alifatice, aromatice, alcoolilor inferiori.
8.,.. A%aratura utili0at n cromatografia (e lichi(e
1up cum se observ n +igura 8.1, sistemul cromatografului de lichide este compus din 4
componente de baz.
Re0er1oare fa0
mo!il
<al1
%arti"ionare
sol1ent
6om%
/etector
C
o
l
o
a
n

6re7coloan
Amorti0are
%ulsuri
In8ector&
ti% =5 ci>
+igura 8.1,3 Prezentarea schematica a unui
cromatograf de lichide !6P/C# modern.
,. coloana cromatografic n care se desfoar procesul de separare al componenilor.
3. dispozitive de introducere a probei care poate fi dependent de tipul de analiz efectuatB calitativ
sau cantitativ.
=. sistem de alimentare cu faz mobil care con ine circuitul de solvent care transport faza
mobil prin coloana cromatografic. @cest sistem de alimentare includeB
a. rezervoare cu faz mobil de aceeai polaritate sau polariti diferite\
b. dispozitive de reglare a vitezei de curgere\
c. dispozitive de monitorizare a presiunii debitului\
d. dispozitiv de purificare\
e. precoloane de amestecare aezate n faa coloanei cromatografice.
4. detectori cu sau fr sistem de nregistrare !reprezint sistemul de identificare i dozare a
componenilor din amestec#.
istemul este astfel construit nct s permit transmiterea fazei mobile corespunztoare
pentru o eluie continu sau o eluie n gradient. Caza mobil curge printr0o camer de
preamestecare plasat ntre pomp i rezervoare pentru a compensa schimbrile fcute n faz.
Pompa pulseaz faza mobil din camera de amestecare n coloana cromatografic i apoi o
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU 3=
Cercetarea criminalistic a microurmelor
mpinge spre detector. Piteza de curgere a fazei mobile trebuie s se menin constant i
reproductibil. Componenii situai n coloan ajung direct la detector care transform diferena
unor proprieti dintre componeni i faza mobil n semnal electric, semnal care este amplificat i
nregistrat sub forma unor cromatograme care se analizeaz calitativ i cantitativ.
$n cromatografia de lichide se folosesc coloane confecionate din metale !@l, Cu#, oel
ino"idabil, materiale plastice de o anumit duritate. 1iametrul poate varia ntre 3 T ,. cm.
/ungimea coloanei este de la 3. pn la ,.. cm. <neori este nevoie s se lege n serie mai multe
coloane pentru a asigura eficiena presiunii de separare.
$n 6P/C coloanele trebuie s reziste la presiuni ridicate, ceea ce impune entaiezri la capete
prin racorduri corespunztoare. 1imensiunile coloanei variaz n funcie de granulaia umpluturii.
1iametrul n 6P/C poate fi de la , la 4 cm i lungimea ntre ,. T 38 cm.
1etectorii folosii n cromatografia de lichide asigur detecia componenilor analizai dar ridic
probleme mai grele. Condiiile care se impun pentru detectori includB
4 s prezinte sensibilitate ridicat !,.
0,,
T ,.
0,=
g component m/
0,
#\
4 s dea rspuns liniar n funcie de concentraie\
4 s prezinte vitez mare de rspuns i s semnaleze prezena tuturor componenilor\
4 s fie nedestructiv\
4 s nu fie influenat de modificarea compoziiei fazei mobile\ deoarece nici un detector nu
ndeplinete aceste condiii, se recomand utilizarea simultan a mai multor detectori.
e pot folosi detectori refractometri !bazai pe unghiuri de refracie#, indicatori fotometrici,
indicatori bazai pe msurarea cldurii de absorbie i bazai pe msurarea conductibilitii termice.
8.,.2 +a0e mo!ile -i sta"ionare& %olaritate
Caza mobil poate fi un singur solvent de compoziie constant n coloana cromatografic
!cromatografia izocratic# sau un amestec de solveni de polaritate diferit n cromatografia cu
gradieni.
Condiiile pe care faza mobil trebuie s le ndeplineasc includB
4 s prezinte puritate nalt\
4 vscozitate sczut\
4 punct de fierbere ntre 3. T 8.
.
C\
4 reactivitate chimic sczut\
4 compatibilitate cu detectorii utilizai\
4 inflamabilitatea i to"icitatea ridicat s fie strict monitorizate.
$n cromatografia de lichide trebuie s se in seama de polaritatea celor = componeni care
particip n procesul de separareB solut[ faz mobil [ faz staionar. Polaritatea solutului i a
fazei mobile se aleg apropiate i net diferite de a fazei staionare.
a# polariti asemntoare pentru !solut, faz staionar# i diferite de ale fazei mobileB viteze mici
de deplasare, timp mare de separare.
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU 34
Cercetarea criminalistic a microurmelor
b# polariti asemntoare pentru !solut, faz mobil# i diferite de ale fazei staionareB timp foarte
scurt de separare.
n cazul cromatografiei cu faze normale
Caza staionar este polar !silicai sau particule de silicagel sau lichide polare precum etilen
glicol# iar faza mobil este relativ nepolar !he"anul, izopropil eterul#.
1ac se consider un amestec de analii @, %, C, polaritatea compuilor @ ^ % ^ C, cu creterea
polaritii fazei mobile, timpul de reinere se micoreaz i ordinea de eluie esteB C ^ % ^ @. 1e
fapt componentul cel mai puin polar iese primul din coloan.
n cazul cromatografiei cu faze inverse
Caza staionar este nepolar !hidrocarburi, coloane C? i C,?# i faza mobil este polar. 1ac
se consider amestecul de analii @, %, C, polaritatea compuilor @ ^ % ^ C, ordinea de eluie esteB
@ ^ % ^ C.
8.. Cromatografia (e ga0e
8...1 As%ecte teoretice
%aza separrilor cromatografice n faz gazoas o constituie distribuie componenilor ntre dou
faze. Cuncie de natura fazei staionare !f# se ntlnescB
4 cromatografia H !CH, cromatografia gaz0solid# cnd faz staionar este un solid
!separarea este bazat pe mecanismul de adsorbie#\
4 cromatografia H/ !CH/, cromatografia gaz0lichid# cnd faza staionar este un lichid depus
pe un suport inert !separarea este bazat pe un mecanism de repartiie#.
Principiile cromatografiei n faz gazoas includB
0 reinerea specific a componenilor pe coloan are loc datorit presiunilor diferite de vapori
ale componenilor de analizat\
0 desorbia componenilor din faza staionar n faza mobil are loc cu att mai rapid cu ct
volatilitatea lor este mai mare.
@vantajele cromatografiei de gaze fa de a altor metode de separare includB
0 vscozitatea redus a fazei mobile permite folosirea coloanelor lungi, ridicnd astfel
eficiena procesului de separare,
0 vscozitatea redus a fazei mobile conduce la stabilirea rapid a echilibrelor de distribuie,
0 atingerea rapid a echilibrelor are ca efect o rezisten mic la transferul de mas ceea ce
face posibil o vitez mare de flu",
0 timpul de analiz este foarte scurt, aparatura relativ simpl se preteaz la analize calitative,
cantitative, pe lng separarea componenilor,
0 se aplic n domenii variate i la o gam larg de produse e"ceptnd produii labili din
punct de vedere termic i cei nevolatili.
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU 38
Cercetarea criminalistic a microurmelor
8...) Sistemul ga0 cromatografic
chema de principiu a unui cromatograf de gaze este prezentat n +igura 8.1..
Coloan
Se%tum ?loc in8ector ?locul (etector
+a0a
mo!il
/e!it7metru
Control (e!it
Regulator %resiune
Cu%tor
+igura 8.1.3 chema de principiu a unui
cromatograf de gaze.
Componentele majore ale instrumentului cuprindB
0 butelia ce conine gazul purttor !faza mobil# sub presiune !,8. atm#
0 reductor de presiune i sistem pentru reglarea i msurarea debitului
0 bloc injector !sistemul de injecie#
0 coloana cromatografic0reprezint sediul proceselor de separare\ poate fi confecionat din
metal, sticl, poate fi dreapt, sau forma literei < sau sub form de spiral
0 cuptor !sistemul de termostatare a coloanei sau programare a rampelor de temperatur#
0 blocul detector cu amplificator amplific semnalul dat de detector
Hazul purttor !eluentul# este eliberat dintr0o butelie ce ine gazul sub presiune. <lterior este
trecut printr0o serie de dispozitive de purificare, de reglare de presiune i de msurare a ei.
Dluentul ajunge apoi n dispozitivul de introducere a probei, pe care o preia i o transport n
evaporator !probele sunt vaporizate# i apoi n coloana cromatografic. 1ispozitivele pentru
introducerea probei constau n microseringi i valve de injecie. Palvele de injecie au avantajul c
asigur trecerea continu a gazului purttor !fazei mobile# prin coloan. Cantitatea de prob
injectat variaz de la cteva g la cteva mg.
Coloana este partea cea mai important a unui cromatograf i reprezint sediul procesului de
separare, componenii sunt introdui simultan, parcurg coloana cu viteze diferite !timpi diferii# i o
prsesc separat. Coloana de separare este confecionat din tuburi metalice !Cu, @l, oel
ino"idabil#, tuburi de sticl sau, mai nou, coloane capilare. 1up alte criterii de clasificare coloanele
din gaz cromatografie se mpart n coloane umplute i coloane tubulare deschise sau coloane
capilare. /ungimea coloanelor umplute poate fi de pn la civa cm n timp ce lungimea
coloanelor capilare poate ajunge pn la 8. m.
Componenii separai de coloan ajung la detector, acesta transformnd diferena unei
proprieti dintre eluent i component n semnal electric. @cest semnal este amplificat i nregistrat
sub form unei cromatograme, care se interpreteaz din punct de vedere calitativ !identificarea
componenilor# i cantitativ !determinarea lor#.
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU 35
Cercetarea criminalistic a microurmelor
8..., +a0a mo!il folosit n cromatografia (e ga0
Dluentul sau gazul purttor are rolul de a antrena i de a transporta componentele amestecului de0
a lungul coloanei cromatografice. @cesta trebuie s ndeplineasc o serie de caracteristici precumB
0 s fie inert !s nu reacioneze cu componenii probei sau cu faza staionar
0 s efectueze separarea fr s afecteze viteza de desfurare a analizei
0 alegerea gazului purttor se face n funcie de sensibilitatea detectorului, n funcie de
eficiena separrii i de posibilitile de interaciune cu solutul sau faza staionar\ de
e"emplu la detectorul de conductivitate termic se aleg ca elueni gaze care au o
conductivitate termic mult diferit de a componenilor ce se separ
0 deoarece impuritile din faza mobil pot induce modificri asupra fazei staionare, ntre
sistemul de alimentare cu gaz i instrument, se folosesc de obicei filtre sub forma sitelor
moleculare
0 pentru a se obine rezultate reproductibile debitul fazei mobile n timpul analizei trebuie
meninut constant.
8.... +a0e sta"ionare folosit n cromatografia (e ga0
Cazele staionare folosite n cromatografia de gaz pot fiB polare !polietilenglicoli#, nepolare
!cauciucuri siliconice#, intermediare, cu puni de hidrogen sau specifice !separarea amestecurilor
racemice#. Cazele staionare sunt lichide sau solide.
Fazele staionare solide au rolul de a furniza un suport pentru faza mobil. Caza staionar solid
trebuieB s fie poroas, s fie inert i s nu recioneze cu componenii probei, s prezinte !la
suport# suprafee mari, s aib rezisten mecanic i termic ridicat.
uportul solid este format din particule mici, sferice i uniforme. Prima umplutur utilizat
pentru o coloan cromatografic a fost constituit din pmnturi diatomice provenite din scheletele
unor plante monocelulare. Chromosorb P, A, H reprezint faze staionare prelucrate n flu" de
2a3C7= dup calcinare.
7 problem des ntlnit n HC a constituit0o adsorbia fizic a speciilor de analii polari sau
polarizabili, precum alcooli sau hidrocarburi aromatice, la suprafaa silicailor umpluturii coloanei
sau a pereilor coloanei. @dsorbia rezult n picuri deformate. 0a artat c adsorbia este o
consecin a gruprilor silanolice care se formeaz pe suprafaa silicailor prin reacie cu
umiditatea. 7 suprafa de silice hidrolizat apare n forma
i
76
7
i
76
7
i
7
76
Hruparea i76 de la suprafaa suportului are afinitate foarte ridicat pentru molecule organice
polare i tind s le rein prin adsorbie. &aterialele suport pot fi dezactivate prin silanizare cu
dimetilclororsilan !1&C#.
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU 39
Cercetarea criminalistic a microurmelor
i 76 N i Cl
C6
=
C6
=
Cl i 7 i
C6
=
C6
=
Cl
N 6Cl
1up splare cu alcool, al doilea Cl este nlocuit de o grupare meto"i.
i 7 i
C6
=
C6
=
Cl i 7 i
C6
=
C6
=
7C6
=
N C6
=
76
N 6Cl
uprafeele silanizate nc mai pot prezenta adsorbie rezidual care deriv din impuritile
o"izilor metalici din elementele diatomice. Empuritile pot fi nlturate prin splare cu acid.
Fazele staionare lichide se realizeaz folosind un lichid ales n funcie de natura amestecului
care trebuie separat. e pot folosi fazeB solide, lichide, nepolare, polare. Proprietile fazelor lichide
imobilizate ntr0o coloan gaz0lichid cromatografic includB ,# volatilitate sczut !ideal, punctul de
fierbere al lichidului ar trebui s fie cu cel puin ,..
o
C mai mare dect temperatura ma"im de
operare a coloanei#, 3# stabilitate termic, =# nereactivitate chimic.
Cazele staionare lichide sunt formate din lichide nevolatile avnd o compoziie chimic foarte
variat !peste ,.. de tipuri#. Pentru a se putea lega chimic numrul acestora a fost restrns la cele
care pot, prin sinteza, s formeze un film grefat pe partea intern a coloanei, preferai fiind
polisilo"anii i polietilenglicolii fiecare ntr0o varietate care sa permit modificarea polaritii
acestora.
Pentru a avea un timp rezonabil de reziden n coloan, o specie trebuie s prezinte un
anumit grad de compatibilitate !solubilitate# cu faza staionar. Polaritatea este efectul cmpului
electric n imediata vecintate a unei molecule i este msurat de momentul de dipol al speciei.
Cazele staionare polare conin grupri funcionale precum TC2, 0C7, i T76. Cazele staionare tip
hidrocarburi i dialchil silo"anii sunt nepolare n timp ce fazele poliesterice sunt foarte polare.
@naliii polari includ alcooli, acizi, amine, speciile de polaritate medie includ eterii, cetonele i
aldehidele. 6idrocarburile saturate sunt nepolare. $n general polaritatea fazei staionare trebuie s
se potriveasc cu cea a componenilor probei. Cnd potrivirea este bun, ordinea eluiei este
determinat de punctele de fierbere ale eluenilor.
&aterialul de plecare n obinerea fazelor staionare este polidimetilsilo"anului a crui structur
esteB
i U
U
U
7 i
U
U
7
i
U
U n
Parte din polidimetilsilo"ani au gruparea U de tip TC6= i conduc la un lichid relativ nepolar. $n
alte cazuri, o parte din gruprile metil sunt nlocuite de grupri funcionale precum fenil !0C568#,
cianopropil !0C=65C2# i trifluoropropil !0C=65CC=#, ceea ce duce la creterea polaritii lichidelor.
Carbo)a" este un polietilen glicol cu structura 670C630C630!70C630C63#n076 cu utilizri ;n
separarea speciilor polare.
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU 3?
Cercetarea criminalistic a microurmelor
8...2 /etectori folosi"i n cromatografia (e ga0
e clasific nB
0 universaliB dau rspuns pentru un numr foarte mare de componeni
0 specificiB sunt aplicabili doar la anumii componeni cu anumite grupri funcionale.
Cei mai importani detectori suntB
0 detectori de conductibilitate termic 0 catarometru
0 detectori de ionizare n flacr
0 detectori de ionizare cu radiaii !detector cu captur de e
0
utilizai n analiza pesticidelor#.
Catarometrul este un detector universal, sensibilitate ,.
08
g componentSs !ceilali detectori pot
atinge sensibilitate de pn la ,.
0,8
g componentSs#. Dste nespecific, nedestructiv i se poate cupla
cu alte instrumente cum ar fi spectrometrele de mas sau spectrofotometrele utilizate n infrarou.
Principiul de funcionare se bazeaz pe msurarea diferenei de conductibilitate termic dintre
component i eluent. <n fir metalic nclzit pierde cldura cu o vitez dependent de natura lui i a
gazului ce l nconjoar. Catarometru se compune din 3 celule de conductibilitate !una de msur
i una una de referin# i 3 rezistene !una fi" i una variabil# legate n punte Ainstone. $n celule
sunt montate fire de Pt sau A. Prin cele 3 celule circul iniial doar gazul purttor !eluentul#. e
aplic un curent continuu de civa voli ce alimenteaz puntea. Cele 3 fire sunt nclzite la o
temperatur mai ridicat cu circa ?.
o
C fa de pereii detectorului. Pentru aceasta este necesar un
curent de cteva sute de miliamperi. Cele dou rezistene fiind egale, instrumentul de msur va
indica linia de zero. $n momentul n care din coloan iese un component !analit# el va prelua de la
fir o alt cantitate de cldur. Puntea se dezechilibreaz. Circuitul electronic este astfel conceput
nct s marcheze reechilibrarea punii, apoi printr0un semnal electric este amplificat i apoi
nregistrat sub forma unei cromatograme. Cele mai utilizate faze mobile n cazul catarometrului
sunt gazele cu mase mici cum ar fi hidrogenul i heliul.
Detectorii de ionizare au la baz un principiu de funcionare care se bazeaz pe creterea
curentului produs cnd substanele eluate care i traverseaz sunt ionizate. @ceti detectori sunt
ideali pentru coloanele capilare i satisfctoare pentru coloanele cu umplutur. unt detectori
foarte sensibili, volumul mort este foarte mic, rspunsul fiind aproape instantaneu. unt suficient
de stabili la fluctuaiile de vitez ale flu"ului de gaz i la fluctuaiile de temperatur. 1au un rspuns
liniar n funcie de concentraie.
8...5 A%lica"ii ale cromatografiei (e ga0
<tilizat n separarea i analiza hidrocarburilor, acizilor i a esterilor, n aplicaii biomedicale.
Cuplat cu spectrometria de mas gaz cromatografia este utilizat n diagnosticarea i evoluia
tratamentelor unor boli. e pot separa metabolii biologici volatili din urin, ser, plasm, fluid
cerebro spinal. &etoda poate fi utilizat i n studiul unor medicamente n plasm, urin, saliv, n
omogenat de ficat, n esuturi. Dste utilizat i n studiul unor eseneB de e"empluB cromatograma
poate fi asimilat cu amprenta buchetului unor vinuri, a componenilor unor parfumuri, esena de
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU 3-
Cercetarea criminalistic a microurmelor
ceai, cafea. Cromatografia gaz solid i0a gsit o mare aplicabilitate n separarea gazelor
permanente, a hidrocarburilor cu mas molecular mic, a izotopilor precum i a unor compui
foarte polari.
/ector 1r. Cecilia ARSENE 2otie curs ,,0,3
Conf. 1r. Romeo Iulian OLARIU =.