MINISTERUL EDUCAŢIEI ŞI TINERETULUI

AL REPUBLICII MOLDOVA
OLIMPIADA REPUBLICANĂ DE BIOLOGIE, 14 – 17 martie 2008

PROBA PRACTICĂ
Stimaţi participanţi!
Proba practică la Biologie se va desfăşura în 4 laboratoare şi va dura 240 minute. Citiţi cu
atenţie itemurile şi rezolvaţi sarcinile puse. Numărul de puncte este indicat lângă fiecare item.
Numărul maximal de puncte pentru proba practică este de 200.
SUCCES!

Laboratorul 1. ANATOMIA, MORFOLOGIA ŞI SISTEMATICA PLANTELOR

1. Studiaţi ierbarul, indicaţi forma frunzelor şi determinaţi la care plante aparţin aceste
frunze. Alegeţi răspunsurile corecte din variantele propuse.
Completaţi tabelul, folosind literele respective. (30 p.)

Variantele răspunsurilor:
Forma frunzelor: palmatcompusă (a); lanceolată (b); trilobată (c); solziformă (x);
penatcompusă (f); palmatlobată (g); lineară (h); aciculară (i); reniformă (j); romboidală (k);
alungitovoidă (l); rotundobovoidă (m); 2-3 penatsectată (n); scutiformă (o); rotundcordată (p);
penatlobată (r); alungitretrovoidă (t).

Denumirea plantelor: molid (A); mierea ursului (B); trifoi (C); pin (D); arţar (E); popâlnic (F);
plop (G); salcie (H); talpa gâştei (K); fag (L); tei (M); stejar (N); popivnic (O); vişin (P); rogoz
(R); păpădie (S); traista ciobanului (T); gutui (V); scumpie (W); pelin (X); coada
şoarecelui (Y); viţa de vie (Z).

Tabelul 1

Numărul 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
frunzei
ierbarizate
Forma frunzei

Denumirea
plantei
2. Studiaţi preparatul propus la microscop. Completaţi tabelul (21 p.)

Desenaţi preparatul Explicaţi desenul, numind organele şi Numiţi preparatul

ţesuturile desenate
9p. 9p. 3p.
 Laboratorul 2. BIOCHIMIA ŞI BIOLOGIA MOLECULARĂ

Experienţa N1.
Identificarea aminoacizilor prin metoda cromatografiei pe hîrtie.
Aveţi la dispoziţie o soluţie, care conţine un amestec de trei aminoacizi diferiţi. Sarcina D-
ră este de a identifica care aminoacizi se conţin în soluţia dată, utilizând metoda cromatografiei
pe hîrtie.
Principiul: Aminoacizii pot fi separaţi din amestec şi identificaţi datorită diferenţei de
solubilitate în apă şi solvenţi organici.
La efectuarea cromatografiei pe hîrtie se utilizează hîrtie cromatografică specială. Apa se
adsoarbe pe hîrtia cromatografică, constituind faza staţionară, iar solventul organic (butanolul)
migrează de-a lungul ei, constituind faza mobilă. Concomitent cu butanolul migrează şi
aminoacizii. Viteza migrării aminoacizilor pe hîrtie este direct proporţională cu gradul de
solubilitate în butanol. În dependenţă de distanţa parcursă de aminoacid în raport cu distanţa
totală parcursă de solvent se calculează coeficientul de repartiţie (Rf) a aminoacidului, care este o
mărime constantă, specifică pentru fiecare aminoacid în condiţii standard:
Aminoacidul Rf Aminoacidul Rf
Cisteină 0,1 Alanină 0,45
Arginină 0,15 Metionină 0,5
Serină 0,2 Valină 0,55
Glicină 0,3 Fenilalanină 0,6
Treonină 0,4 Leucină 0,7

Modul de lucru:
1. La o distanţă de aproximativ 1 cm de la marginea de jos a benzii de hârtie cromatografică
trasaţi linia de start (folosind rigla şi creionul).
2. Pe linia de start a benzii de hârtie cromatografică cu ajutorul unui capilar aplicaţi o picătură
mică (diametru nu mai mare de 5 mm) de amestec de aminoacizi.
3. După uscare la aer (fixare) banda se introduce în vasul cu amestecul de apă-butanol în aşa
măsură încât lichidul să umecteze marginea de jos a benzii, dar să nu ajungă până la linia de
start (2—3 mm). Cu ajutorul dopului banda se fixează vertical fără ca să se atingă de pereţii
vasului şi se lasă pentru 40 min la temperatura camerei.
Atenţie!!! În acest timp efectuaţi experienţa N2.
4. La expirarea timpului banda se scoate din vas.
5. Folosind rigla şi creionul, marcaţi frontul solventului.
6. Uscaţi banda cromatografică deasupra unui reşou electric (la temperatura de 70—100°C).
7. Apoi banda se trece prin soluţie de ninhidrină de 0,1% şi din nou se usucă la temperatura de
100°C. Pe cromatogramă apar pete violete localizate la diferite distanţe de linia de start.
8. Cu ajutorul riglei se măsoară următoarele distante:
1) de la linia de start până la centrul fiecărei pete (a1; a2; a3);
2) de la linia de start până la frontul solventului (b).
9. Calculaţi coeficientul de repartiţie (Rf) pentru fiecare aminoacid, care este egal cu raportul
dintre distanta parcursă de aminoacid (a) şi distanţa parcursă de solvent (b): Rf = a/b
10. Utilizând tabelul de mai sus, unde sunt indicaţi coeficienţii de repartiţie pentru unii
aminoacizi, stabiliţi, care aminoacizi sunt prezenţi în soluţia examinată.
11. Complectaţi următorul tabel: 30p
Distanţa de la linia de start Distanţa de la linia de Coeficientul de Aminoacidul prezent
până la centrul fiecărei pete start până la frontul repartiţie în soluţia examinată
(a), cm solventului (b), cm (R f = a/b)
a1 = ____ Rf (1) = _____ 1. ____________
a2 = ____ b = _____ Rf (2) = _____ 2. ____________
a3 = ____ Rf (3) = _____ 3. ____________
Exerciţiul 2

Întroducere. La Universitatea Agrară de Stat din Moldova în colaborare cu Institutul de

Fitotehnie „Porumbeni” pe baza metodelor de biotehnologii moderne este creată colecţia de linii
somaclonale de porumb, care au fost obţinute pe baza liniilor originale larg răspândite în
ameliorarea porumbului. În cadrul experienţelor de câmp şi testării liniilor din această colecţie
amelioratorii Republicii Moldova au selecţionat o grupă de somacloane, care a fost creată pe
baza liniei originale BC27D4. Cu scopul protecţiei drepturilor de autor în acelaşi timp savanţii
R.Moldova în colaborare cu laboratorul „Genomul vegetal” a Centrului de Bioinginerie a
Academiei de Ştiinţe din Rusia, au efectuat paşaportizarea genomului a acestor linii somaclonale
la nivelul proteic şi două tipuri de ADN-markeri după următoarele metode:
1) metoda markerilor proteinei de rezervă a endospermului de porumb (zeina);
2) RAPD-analiza – tehnica de amplificare a ADN-ului genomic utilizând un primer*
incidental (întâmplător) pe baza PCR-ului (reacţiei în lanţ cu polimeraza);
3) ISSR-analiza - tehnica de identificare a genomului pe baza PCR-ului, în care sunt
utilizate în calitate de primeri* fragmente simple de succesiune nucleotidice repetate în
tandem
Fiecare din aceste metode sunt elaborate pe baza folosirii unei din cele mai principale
caracteristici a proteinelor şi ADN-ului – polimorfismului, studierea cărora se efectuează
datorită metodei electroforetice (EF).

*Primer – o secvenţă scurtă de ARN sau un segment monocatenar de ADN, care funcţionează în
calitate de punct de creştere în polimerizare

Sarcina:
Sunt prezentate rezultatele de modelare computerizată a spectrelor electroforetice a liniilor
somaclonale de porumb, care au fost create pe baza liniei originale BC27D4:
Fig.1: markarea electroforetică după proteina de rezervă a porumbului (zeina);
Fig.2: markarea electroforetică după RAPD-analiza ADN-ului;
Fig.3: markarea electroforetică după ISSR-analiza ADN-ului.
Faceţi cunoştinţă cu structura tabelelor 1, 2, 3, care au fost elaborate cu scopul efectuării
analizei comparative a paşapoartelor electroforetice a fiecărei liniei somaclonale de porumb
(C5; C15; C51; C54; C55; C56; şi C57) paralel cu linia originală BC27D4.
În rubrica B (tabelele 1, 2, 3) sunt prezentate caracteristicele cantitative a spectrelor
electroforetice: numărul total a formelor moleculare (FM) a proteinei (tabelul 1) şi formelor
moleculare (FM) a ADN-ului (tabelele 2 şi 3).
În rubrica C (tabelele 1, 2, 3) sunt prezentate caracteristicele cantitative a formelor
moleculare din spectrul electroforetic a fiecărei liniei somaclonale studiate, care sunt similare
cu formele moleculare din spectrele electroforetice a liniei originale.
În rubrica D (tabelele 1, 2, 3) snt prezentate caracteristicele cantitative a formelor
moleculare noi din spectrul electroforetic a fiecărei liniei somaclonale studiate, care
suplimentează în acest spectru EF formele moleculare similare cu spectrul electoforetic a
liniei originale.
Familiarizaţi cu protocolul de lucru prezentat.
În corespundere cu prima (I) parte a protocolului de lucru efectuaţi calculele necesare şi
includeţi-le în tabelele 1, 2 şi 3.
În corespundere cu partea a doua (II) a protocolului de lucru analizaţi calculele obţinute,
formulaţi concluziile şi includeţi-le în tabelele 4, 5 şi 6.
PROTOCOLUL DE LUCRU
Partea I. Efectuarea calculelor

1.Calculaţi pentru fiecare linie somaclonală procentul (%) formelor moleculare, care sunt
similare cu formele moleculare din spectrele electroforetice a liniei originale (E somaclon) după
următoarea formulă:
Esomaclon ,% = 100 x Csomaclon / Boriginal

Rezultatele obţinute includeţile în rubrica E a tabelelor 1, 2, 3.

2. Calculaţi pentru fiecare linie somaclonală procentul (%) de forme moleculare noi în
spectrul electroforetic a somaclonului corespunzător (Fsomaclon) după formula:

Fsomaclon, % = 100 x Dsomaclon / Bsomaclon

Rezultatele obţinute includeţi în rubrica F a tabelelor 1, 2, 3.

3. Întocmiţi rândurile min / max / medie în rubricile B, E, F în fiecare tabel de lucru 1, 2, 3.

Partea II. Analiza rezultatelor obţinute şi formularea concluziilor

1. Prin utilizarea datelor calculate, care sunt prezentate în rubrica B a tabelelor 1, 2, 3 –

întocmiţi tabelul 4, rândurile 1, 2, 3, 4. În rândul 5 a acestui tabel indicaţi metoda, care s-a
evidenţiat după gradul maximal de polimorfism proteic sau a ADN-ului (6 puncte).

2. Prin utilizarea datelor calculate, care sunt prezentate în rubrica E a tabelelor 1, 2, 3 –

întocmiţi tabelul 5, rândurile 1, 2, 3, 4. În rândul 5 a acestui tabel indicaţi metoda, care este cea
mai acceptabilă pentru identificarea asemănării (potrivirei) genetice a liniilor somaclonale de
porumb cu linia originală (6 puncte).

3. Prin utilizarea datelor calculate, care sunt prezentate în rubrica F a tabelelor 1, 2, 3 –

întocmiţi tabelul 6, rândurile 1, 2, 3, 4. În rândul 5 a acestui tabel indicaţi metoda, care este cea
mai acceptabilă pentru identificarea la nivelul proteic şi molecular a abaterilor în genomul
liniilor somaclonale de porumb de la genomul liniei originale BC27D4 (6 puncte).
 TABELE
pentru efectuarea calculelor după spectrele electroforetice, care sunt prezentate pe fig. 1, 2, 3.

Tabelul 1. Gradul de asemânare şi deosebire intre profilurile proteice a liniilor somaclonale de porumb şi
linia lor originală BC27D4 (după numărul total a formelor moleculare a proteinei – FMP).
Numărul FMP Numărul FMP (în % de la linia-
Somaclonul Numărul orginală)
total a Similar cu Similar cu
FMP FMP noi FMP noi
a liniei-originale a liniei-originale
A B C D E F
Linia- 12 12 0 100 0
originală
С 5 13 8 5
С 15 13 9 4
С 51 11 8 3
С 54 12 8 4
С 55 8 5 3
С 56 9 4 5
С 57 13 9 4
min
max
media

Tabelul 2. Gradul de asemânare şi deosebire intre RAPD-profilurile liniilor somaclonale de porumb şi

linia lor originală BC27D4 (după numărul total a formelor moleculare a ADNului – FM-ADN).
Numărul FM-ADN Numărul FM-ADN
Somaclonul Numărul (în % de la linia-orginală)
total a Similar cu Similar cu
FM-ADN FM-ADN a noi FM-ADN noi
liniei-originale a liniei-originale
A B C D E F
Linia- 27 27 0 100 0
originală
С 5 23 17 6
С 15 27 19 8
С 51 29 20 9
С 54 28 20 8
С 55 30 22 8
С 56 31 22 9
С 57 27 20 7
min
max
media

Tabelul 1. Gradul de asemânare şi deosebire intre ISSR-profilurile liniilor somaclonale de porumb şi

linia lor originală BC27D4 (după numărul total a formelor moleculare a ADNului – FM-ADN).
Numărul FM-ADN Numărul FM-ADN
Somaclonul Numărul (în % de la linia-orginală)
total a Similar cu Similar cu
FM-ADN FM-ADN a noi FM-ADN noi
liniei-originale a liniei-originale
A B C D E F
Linia- 26 26 0 100 0
originală
С 5 22 16 6
С 15 23 16 7
С 51 19 13 6
С 54 18 11 7
С 55 21 15 6
С 56 18 13 5
С 57 27 19 8
min
max
media
 TABELE
pentru formularea concluziilor

Tabelul 4. Compararea eficacităţii ametodelor de identificare a genomului după

caracteristicele electroforetice cantitative a formelor moleculare proteice sau de ADN la
variantele somaclonale a porumbului şi linia lor originală.

Metoda Analiza Analiza electroforetică a AND-ului

electroforetică
a proteinelor
RAPD- analiza ISSR-analiza

Somaclone
1.
Linia-originală
2.
min
3.
max
4.
medie
5. Indicaţi metoda,
care este cea mai
sensibilă pentru
evidenţierea
polimorfismului
maximal a
proteinelor sau a
ADN-ului
Tabelul 5. Compararea eficacităţii metodelor de identificare a genomului la nivel proteic
şi molecular pentru a stabili asemănările maximale intre liniile somaclonale de porumb şi linia lor originală.

Metoda Analiza Analiza electroforetică a AND-ului

electrofo- (în %)
retică
a RAPD- analiza ISSR-analiza
proteine-
Somaclone lor
(în %)
1. Linia-originală
2.
min
3.
max
4.
medie
5. Indicaţi metoda cea mai
acceptabilă pentru
evaluarea
asemănărilor.

Tabelul 6. Compararea eficacităţii metodelor de identificare a genomului la nivel proteic

şi molecular pentru a stabili abaterile maximale intre liniile somaclonale de porumb şi linia
lor originală.
Metoda Analiza Analiza electroforetică a AND-ului
electrofo- (în %)
retică
a RAPD- analiza ISSR-analiza
proteine-
Somaclone lor
(în %)
1. Linia-originală
2.
min
3.
max
4.
medie
5. Indicaţi metoda cea mai
acceptabilă pentru
evaluarea abaterilor.

Laboratorul 3. ANATOMIA, MORFOLOGIA ŞI SISTEMATICA ANIMALELOR

1. Mai jos este dată succesiunea circuitului sângelui la o grupa de animale, dar nu este dat într-o
ordine corectă. În spaţiile rezervate numerotaţi ordinea în care are loc. Deoarece succesiunea
reprezintă un ciclu care se repetă, numărul 1 este dat pentru a avea un start (14 p.).

____ Prin capilare oxigenul pătrunde în celule şi deşeurile celulare trec în sânge.
____ Sângele bogat în oxigen trece în vena pulmonară.
____ Atriul drept se contractă împingând sângele în ventriculul drept.
____ Vena coronară duce sângele înapoi în atriul drept.
____ Sângele obţine o cantitate de oxigen proaspăt, iar bioxidul de carbon este înlăturat din sânge.
____ Sângele bogat în oxigen se mişcă din aortă în alte artere şi apoi în vase mai mici, numite
capilare.
____ Vena pulmonară duce sângele către atriul stâng al inimii.
____ Artera pulmonară duce sângele spre plămâni.
____ Ventriculul stâng se contractă.
__1_ Sângele sărac în oxigen se întoarce în atriul drept al inimii.
____ Sângele bogat în oxigen pătrunde în aortă.
____ Ventriculul drept se contractă, împingând sângele în artera pulmonară.
____ Sângele se mişcă din capilare în vena coronară.
____ Atriul stâng se contractă, împingând sângele în ventriculul stâng.

2. Analizaţi preparatul nr. 1 la microscop. Completaţi spaţiile de mai jos ( 10 p.).

Preparatul reprezintă ___________________________________________________________________
Numărul de straturi ____________________________________________________________________
Tipurile de celule pe straturi _____________________________________________________________
______________________________________________________________
______________________________________________________________
______________________________________________________________
______________________________________________________________
 ______________________________________________________________
Poziţia sistematică: - încrengătura ____________________
- clasa _________________________
- genul ________________________

3. Utilizând anexa, determinaţi grupa sistematică din care fac parte animalele din preparatele nr. 2,
nr. 3 şi nr. 4 (26 p.).

Preparatul nr.2 Preparatul nr.3 Preparatul nr.4

Laboratorul 4. ECOLOGIE

1. Studiaţi figura care ilustrează schema circuitului azotului în natură. Înscrieţi în locurile
rezervate cifrele din faţa procesului care are loc la etapa descrise mai jos (21 p.).
1) plancton;
2) resturi de plante şi animale;
3) asimilaţie;
4) urină;
5) peşti marini;
6) acţiuni vulcanice;
7) nitriţi;
8) animale terestre;
9) nitraţi;
10) reziduuri organice şi aminoacizi;
11) fixarea azotului;
12) plante terestre (sinteza aminoacizilor);
13) denitrificare;
14) apă provenita de la ploaie sau topirea
zăpezii;
15) lumină;
16) amonificare;
17) azot atmosferic;
18) pierderi cu sedimente de adâncime;
19) păsări de litoral;
20) nitrificare;
21) amoniac sau amoniu
2. Cercetaţi microecosistemul şi răspundeţi la întrebările propuse ( 29 p.).
a) determinaţi organismele din probele nr. 1 şi nr. 2 extrase din microecosistem;

Proba nr.1 ________________________________;

Proba nr.2 ______________________________;

b) Care organisme sunt producători? __________________________

c) Care organisme sunt ierbivore? ____________________________

d) Care organisme sunt carnivore? ____________________________

e) Identificaţi câteva lanţuri trofice prezente în microecosistem

___________________________________________________________________________
__
___________________________________________________________________________
__
___________________________________________________________________________
__

f) Ce nivel trofic lipseşte în ecosistemul dat?

_____________________________________________________________________________

g) Care nivel trofic în microescositemul dat posedă cea mai mare biomasa?

_____________________________________________________________________________

h) Care nivel trofic din microecosistem posedă cea mai micîă biomasa?

_____________________________________________________________________________

i) Numeşte descompunătorii şi explică rolul lor

_____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
_

k) Un lanţ trofic implică transfer de energie. Este acest proces un circuit? Explică.

__________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
_

l) Unde este depozitată cea mai mare cantitate de energie în ecosistem?

_____________________________________________________________________________
 MINISTERUL EDUCAŢIEI ŞI TINERETULUI
AL REPUBLICII MOLDOVA
OLIMPIADA REPUBLICANĂ DE BIOLOGIE, 14 – 17 martie 2008

Уважаемые участники!
Практическая часть по Биологии будет проходить в четырех лабораториях и будет
длится 240 минут. Внимательно прочьтите условия и решите поставленные задачи.
Количество баллов указано для каждой работы. Максимальное колличество баллов равно
200.
ЖЕЛАЕМ УДАЧИ!

Лаборатория1. АНАТОМИЯ, МОРФОЛОГИЯ И СИСТЕМАТИКА РАСТЕНИЙ

1. Изучите гербарий, укажите форму листьев и определите, какому растению они

принадлежат. Выберите правильные ответы из предложенных вариантов. Заполните
таблицу, используя соответствующие буквы. (30 п.)

Варианты ответов:
Форма листьев: пальчатосложный (a); ланцетный (b); тройчатолопастный (c);
чешуйчатый (x); перистосложный (f); пальчатолопастной (g); линейный (h); игольчатый
(i); почковидный (j); ромбический (k); продалговатояйцевидный (l);
округлообратнояйцевидный (m); 2-3 перисторассеченный (n); щитовидный (o);
округлосердцевидный (p); перистолопастный (r); продолговатообратнояйцевидный (t).

Названия растений: Ель (A); медуница (B); клевер (C); сосна (D); клен (E); печеночница
(F); тополь (G); ива (H); пустырник (K); бук (L); липа (M); дуб (N); копытень (O); вишня
(P); осока (R); одуванчик (S); пастушья сумка (T); айва (V); скумпия (W); полынь (X);
тысячелистник (Y); виноград (Z).

Таблица 1

Номер листа 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
на гербарии

Форма листа

Название
растения
Задание 2. Изучите при помощи микроскопа препарат. Заполните таблицу 2. (21 п.)

Нарисуйте препарат Обьясните рисунок, назвав нарисованные Назовите препарат

органы и ткани
9п. 9п. 3п.
 Лаборатория 2. БИОХИМИЯ И МОЛЕКУЛЯРНАЯ БИОЛОГИЯ

Опыт №1.
Хроматографическое разделение аминокислот на бумаге.
В вашем распоряжении находится раствор, содержащий смесь трех разных
аминокислот. Ваша задача заключается в том, чтобы определить, какие аминокислоты
содержаться в растворе, используя метод хроматографии на бумаге.
Принцип метода.
Аминокислоты можно выделить из смеси и идентифицировать благодаря их
различной растворимости в воде и в органических растворителях.
При проведении хроматографии на бумаге используется специальная
хроматографическая бумага. Вода адсорбируется хроматографической бумагой,
представляя собой стационарную фазу, а органический растворитель (бутанол) мигрирует
вдоль нее, представляя собой мобильную фазу. Вместе с бутанолом мигрируют и
аминокислоты. Скорость миграции аминокислот на бумаге прямо пропорциональна
степени их растворимости в бутаноле. В зависимости от расстояния, которое преодолела
аминокислота по сравнению с общим расстоянием, пройденным растворителем, можно
рассчитать коэффициент распределения (Rf) данной аминокислоты, который является
величиной постоянной, характерной для каждой аминокислоты в стандартных условиях:

Аминокислота Rf Аминокислота Rf
Цистеин 0,1 Аланин 0,45
Аргинин 0,15 Метионин 0,5
Серин 0,2 Валин 0,55
Глицин 0,3 Фенилаланин 0,6
Треонин 0,4 Лейцин 0,7

Ход работы:
1. На расстоянии примерно 1 см от нижнего края полоски хроматографической бумаги
при помощи линейки и карандаша проведите линию старта.
2. На стартовую линию при помощи капилляра нанесите каплю исследуемого раствора
смеси аминокислот (диаметр пятна не более 5 мм.).
3. После высушивания на воздухе (фиксации) приготовленную бумажную полоску
опустите в сосуд, содержащий смесь вода-бутанол таким образом, чтобы она
погрузилась в жидкость (не смачивая пятно) на 2-3 мм. С помощью пробки закрепите
полоску так, чтобы она висела вертикально, не касаясь стенок. Время экспозиции для
разделения аминокислот при комнатной температуре 40 минут.

Внимание!!! Используйте это время для выполнения опыта № 2.

4. По истечении времени полоску вынимают из сосуда.

5. Отметьте карандашом фронт растворителя.
6. Полоску хроматографической бумаги высушивают над электрической плитой при 70-
100оС.
7. Затем полоску обрабатывают 0,1% раствором нингидрина и вновь сушат при t=100 оС.
В местах, где присутствует аминокислота, появляются синие или фиолетовые пятна.
8. При помощи линейки измеряют следующие расстояния:
1. от линии старта до центра каждого пятна (a1; a2; a3);
2. от линии старта до фронта растворителя (b).
9. Рассчитайте коэффициент распределения (Rf) для каждой аминокислоты согласно
уравнению: Rf = a/b , где а – расстояние пройденное аминокислотой, b – расстояние от
линии старта до фронта растворителя (расстояние пройденное расстворителем)
10. Используя приведенную выше таблицу, где указаны коэффициенты
распределения некоторых аминокислот, определите, какие аминокислоты содержались
в исследуемом растворе.
11. Заполните таблицу: 30 баллов

Расстояние от линии Расстояние от линии Коэффициент Аминокислота

старта до центра старта до фронта распределения (Rf = содержащееся в
каждого пятна (a), см растворителя (b), см a/b) исследуемом
растворе
a1 = ____ Rf (1) = _____ 1. ____________
a2 = ____ b = _____ Rf (2) = _____ 2. ____________
a3 = ____ Rf (3) = _____ 3. ____________

Опыт 2.
Вступление. В Государственном Аграрном Университете Республики Молдова в
содружестве с Институтом Растениеводства Республики Молдова методами
нетрадиционной биотехнологии на базе перспективных селекционных линий кукурузы
создана коллекция сомаклональных линий. В результате полевых испытаний и проверок
селекционерами Республики была отобрана в качестве наиболее перспективного
селекционного материала группа сомаклонов, созданная на основе линии-оригинала
BC27D4. Помимо полевых испытаний для сомаклонов отобранной группы линии-
оригинала BC27D4, с целью защиты авторских прав, в содружестве с лабораторией
генома растений Центра «Биоинженерия» Российской Академии Наук, была проведена
паспортизация генома этих сомаклональных линий на уровне белковых и двух типов ДНК-
маркеров следующими методами:
1) метод маркирования запасного белка кукурузы – зеина;
2) RAPD-анализ – техника амплификакции матрицы ДНК с помощью
произвольно выбранных праймеров* на основе полимеразной цепной реакции
(ПЦР);
3) ISSR-анализ - техника генотипирования на основе ПЦР, использующая в
качестве праймеров* простые повторяющиеся нуклеотидные
последовательности.
Каждый из этих методов основан на одной из ключевых характеристик белка и ДНК –
полиморфизма, оценка которого проводится методом электрофореза (ЭФ).

*Праймер - короткий олигонуклеид, осуществляющий ренатурацию (отжиг) шаблона

однонитевой ДНК, обеспечивая удвоение этой структуры, из которой ДНК-полимераза
будет синтезировать новую нить ДНК для того, чтобы продуцировать двухцепочечную
молекулу.

Задание:

Представлены результаты компьютерного моделирования ЭФ-спектров

сомаклональных линий кукурузы, созданных на основе линии-оригинала BC27D4:

-рис.1 - запасного белка кукурузы – зеина,

-рис.2 -ДНК-маркирования методом RAPD-анализа
-рис.3-ДНК-маркирования методом ISSR-анализа
сомаклональных линий кукурузы, созданных на основе линии-оригинала BC27D4.
 Ознакомьтесь со структурой рабочих таблиц 1, 2, 3, составленных для проведения анализа-
сопоставления представленных электрофоретических паспортов сомаклональных линий
кукурузы (С5, С15, С51, С54, С55, С56 и С57) с линией-оригиналом BC27D4.
В графе В (таблицы 1, 2. 3) приведены количественные характеристики общих ЭФ-спектров
молекулярных форм (МФ) белка (табл.1) и МФ ДНК (табл. 2 и табл.3).
В графе С (таблицы 1, 2, 3) приведена количественная характеристика МФ ЭФ-спектра
каждой из изученных сомаклональных линий, сходных с МФ ЭФ-спектра линии-оригинала.
В графе D (таблицы 1, 2, 3) приведена количественная характеристика новых МФ,
дополняющих в ЭФ-спектре каждой анализируемой сомаклональной линии молекулярные формы,
сходные с линией-оригиналом.

Ознакомьтесь с предлагаемым протоколом работы.

В соответствии с I-ой частью рабочего протокола проведите необходимые расчеты и занесите

их в таблицы 1, 2 и 3.

В соответствии со II -ой частью рабочего протокола II проанализируйте полученные расчеты,

сформулируйте выводы и занесите их в таблицы 4, 5 и 6.

ПРОТОКОЛ РАБОТЫ

Часть I. Проведение расчетов:

1. Рассчитайте для каждой сомаклональной линии %МФ, сходных с компонентами спектра

линии-оригинала (Есомаклона) по формуле:

Есомаклона%= 100х Ссомаклона / Bоригинала

Полученные результаты внесите в графу Е таблиц 1, 2, 3;

2. Рассчитайте для каждой сомаклональной линии % новых МФ в спектре соответствующего

сомаклона (Fсомаклона) по формуле:

Fсомаклона % = 100х Dсомаклона / Bсомаклона

Полученные результаты внесите в графу F таблиц 1, 2, 3;

3. Заполните строки min/max/среднее в графах В, Е, F по каждой из рабочих таблиц 1,2,3

Часть II. Анализ полученных результатов

и формулировка выводов

1. Используя расчетные данные, приведенные в графе В таблиц 1, 2, 3, заполните таблицу 4,

строки 1, 2, 3, 4. В 5-ой строке этой таблицы укажите метод, выделившийся по наибольшей
степени полиморфизма белка или ДНК
(оценка 6 баллов).
 2. Используя расчетные данные, приведенные в графе Е таблиц 1, 2, 3, заполните таблицу 5,
строки 1, 2, 3, 4. В 5-ой строке этой таблицы укажите метод, наиболее приемлемый для
выявления генетического сходства сомаклональной линии кукурузы с исходной линией-
оригиналом (оценка 6 баллов).

3. Используя расчетные данные, приведенные в графе F таблиц 1, 2, 3, заполните таблицу 6,

строки 1, 2, 3, 4. В 5-ой строке этой таблицы укажите метод, наиболее приемлемый для
выявления отклонения генома сомаклональной линии кукурузы от генома линии-оригинала
(оценка 6 баллов).

ТАБЛИЦЫ
для проведения расчетов по элетрофоретическим спектрам, представленных на рисунках 1,
2, 3.

Таблица 1. Степень сходства и различия между белковыми профилями сомаклональных вариантов

кукурузы и их линии-оригинала BC27D4 (по общему количеству молекулярных форм белка =
МФ).

Количество МФБ Количество МФБ

Сомаклон Общее (в % от оригинальной
количест линиеи)
во МФБ Сходные с новые Сходство с МФБ новые
МФБ линии-
линии- оригинала
оригинала
A B C D E F
Линия- 12 12 0 100 0
ориг.
С5 13 8 5
С 15 13 9 4
С 51 11 8 3
С 54 12 8 4
С 55 8 5 3
С 56 9 4 5
С 57 13 9 4
Мин
Мах
Среднее

Таблица 2. Степень сходства и различия между RAPD-профилями сомаклональных вариантов

кукурузы и их линии-оригинала BC27D4 (по общему количеству молекулярных форм ДНК =
МФ-ДНК).

Количество МФ-ДНК Количество МФ-ДНК

Сомаклон Общее (в % от оригинальной
линиеи)
 количест Сходные новые Сходство с МФ- новые
во с МФ-ДНК ДНК
МФ- линии- линии-
ДНК оригинала оригинала
A B C D E F
Линия- 27 27 0 100 0
ориг.
С5 23 17 6
С 15 27 19 8
С 51 29 20 9
С 54 28 20 8
С 55 30 22 8
С 56 31 22 9
С 57 27 20 7
Мин
Мах
Среднее

Таблица 3. Степень сходства и различия между ISSR-профилями сомаклональных вариантов

кукурузы и их линии-оригинала BC27D4 (по общему количеству молекулярных форм ДНК =
МФ-ДНК).

Количество МФ-ДНК Количество МФ-ДНК

Сомаклон Общее (в % от оригинальной
количест линиеи)
во Сходные с новые Сходство с МФ- новые
МФ- МФ-ДНК ДНК
ДНК линии- линии-
оригинала оригинала
A B C D E F
Линия-ориг. 26 26 0 100 0
С5 22 16 6
С 15 23 16 7
С 51 19 13 6
С 54 18 11 7
С 55 21 15 6
С 56 18 13 5
С 57 27 19 8
Мин
Мах
Среднее

ТАБЛИЦЫ
для формулировки выводов

Taблица 4. Сопоставление эффективности методов оценки генома по количественным

характеристикам электрофоретических молекулярных форм белка и ДНК сомаклонов кукурузы и
их линии-оригинала.
Метод ЭФ-анализ ЭФ-анализ ДНК
белков
RAPD- анализ ISSR-анализ

Сомаклон
1. Линия-оригинал
2.
min
3.
max
4.
Среднее
5. Указать метод,
выделившийся по
наибольшему
полиморфизму
белка или ДНК

Taблица 5. Сопоставление эффективности методов оценки генома для выявления наибольшего

генетического сходства сомаклонов кукурузы с исходной линией-оригиналом.

Метод ЭФ-анализ ЭФ-анализ ДНК ( в %)

белков
( в %) RAPD- анализ ISSR-анализ

Сомаклон
1. Линия-оригинал
2.
min
3.
max
4.
Среднее
5. Указать метод, наиболее
приемлемый для
проводимой оценки

Taблица 6. Сопоставление эффективности методов для выявления наибольшего отклонения

генома сомаклональной линии кукурузы от генома линии-оригинала.
Метод ЭФ-анализ ЭФ-анализ ДНК ( в %)
белков
( в %) RAPD- анализ ISSR-анализ

Сомаклон

1. Линия-оригинал
2.
min
3.
max
4.
Среднее
5. Указать метод, наиболее
приемлемый для
проводимой оценки
 Laboratorul 3. ANATOMIA, MORFOLOGIA ŞI SISTEMATICA ANIMALELOR

1. Ниже представленно кровообращения одной группы животных, но не отмечена

правильная последовательность этапов. В отведенных местах укажите правильную
последовательность. Поскольку процесс проходит по кругу и повторяется, в схеме
отмечена цифра 1 для указания начала процесса. (14 б.).

____ Через капиляры кислород проникает в клетки а клеточные отходы поступают в кровь
____ Кровь, насыщенная кислородом, проходит в легочную вену
____ Правое предсердие сокращается, проталкивая кровь в правый желудочек
____ Коронарная вена переносит обратно кровь в правое предсердие
____ Кровь получает свежую порцию кислорода, а углекислый газ выносится из крови
____ Кровь насыщенная кислородом переносится из аорты в другие артерии а затем в капиляры
____ Легочная вена переносит кровь к левому предсердию
____ Легочная артерия переносит кровь к легким
____ Левый желудочек сокращается
__1_ Бедная кислородом кровь возвращается в правое предсердие
____ Насыщенная кислородом кровь поступает в аорту
____ Правый желудочек сокращается, проталкивая кровь в легочную артерию
____ Кровь передвигается из капиляров в коронарную вену
____ Левое предсердие сокращается, проталкивая кровь в левый желудочек

2. Проанализируйте с помощью микроскопа препарат №. 1. Заполните пробелы. ( 10 б.).

Препарат представляет ________________________________________________________________
Количество слоев ____________________________________________________________________
Типы клеток в слоях_____ _____________________________________________________________
______________________________________________________________
______________________________________________________________
______________________________________________________________
______________________________________________________________
______________________________________________________________
Систематическое положение: - тип____________________
- класс _________________________
- род ________________________

3. Используя приложение, определите систематическую группу к которым относятся

препараты № 2, № 3 и № 4 (26 б.).

Препарат № 2 Препарат № 3 Препарат № 4

 Laboratorul 4. ECOLOGIE

1. Проанализируйте рисунок, на котором представлен круговорот азота в природе.

Используя представленные варианты, впишите необходимые цифры, которые
характеризуют соответствующие этапы. (21 б.).

1) планктон; 20) нитрификация;

2) останки растений и животных; 21) амиак или амоний
3) ассимиляция;
4) мочя;
5) морские рыбы;
6) вулканические действия;
7) нитриты;
8) животные суши;
9) нитраты;
10) органические остатки и аминокислоты;
11) фиксация азота;
12) растения суши (синтез аминокислот);
13) денитрификация;
14) дождевая вода или вода после таяния
снега;
15) свет;
16) амонификация;
17) атмосферный азот;
18) потери в виде отложений;
19) прибрежные птицы;
2. Проанализируйте микроэкосистемуи ответьте на поставленные вопросы ( 29 б.).
a) определите организмы в прбах № 1 и № 2 , выделенные из микроэкосистемы;

Проба №1 ________________________________;

Проба №.2 ______________________________;

b) Какие организмы являются продуцентами? __________________________

c) Какие организмы являются травоядными? ____________________________

d) Какие организмы являются плотоядными? ____________________________

e) Выделите несколько трофических связей в микроэкосистеме

___________________________________________________________________________
__
___________________________________________________________________________
__
___________________________________________________________________________
__

f) Какой трофический уровень отсутствует в данной микроэкосистеме?

_____________________________________________________________________________

g) Какой трофический уровень данной микроэкосистемы обладает наибольшей биомассой?

_____________________________________________________________________________

h) Какой трофический уровень данной микроэкосистемы обладает наименьшей биомассой?

_____________________________________________________________________________

i) Назовите разлагателей и объясните их роль.

_____________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
_

k) Цепь питания нуждается в переносе энергии. Является ли этот процесс цепью? Объясни.

__________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
_

l) Где запасается наибольшее количество энергии в экосистеме?

_____________________________________________________________________________