Biologie celulara si moleculara

Semestrul II
LUCRARE PRACTICA 1

ORGANITELE SINTEZEI CELULARE - RIBOZOMII

Organitele implicate n sinteza i secreia celular sunt ribozomii, reticulul endoplasmic (neted i
granular) i aparatul Golgi.

Fig. 1 Ribozomi schematic i microscopie electronic

Generaliti
organite lipsite de membran (nemembranare) sintetizate la nivelul nucleolului i exportate prin
porii nucleari
dimensiuni: submicroscopice
form: ovalar sau elipsoidal
greutate molecular: 4,2 milioane daltoni (n comparaie, o protein de mrime medie are 40 kD)
60% din mas e reprezentat de ARNr (ARNr este cel mai abundent ARN din celul)
numr: o celul conine milioane de ribozomi
Fig. 2 Ribozom reprezentare schematic

structur: format din 2 subuniti subunitatea mic (conine 33 proteine i 1 molecul ARNr) i
subunitatea mare (conine 49 proteine i 3 molecule de ARNr); subunitile ribozomale se unesc ca
s formeze un ribozom funcional doar cnd se leag de o molecul de ARNm
proteinele ribozomale sunt in general proteine mici (10-30 kD); ntre acestea nu exist legturi i
(cu o excepie) exist o singur copie a fiecrei proteine per ribozom
1

Biologie celulara si moleculara

Semestrul II

ribozomii au un locus de legtur cu ARNm i 3 locusuri pentru ARNt: locusul P (ARNtpolipeptidil) leag ANRt cu polipeptidul nascend; locusul A (ARNt-aminoacil) leag ARNt cu
urmtorul aminoacid ce va fi adugat; locusul E (exit) prin care ARNt este eliberat din ribozom
decodarea ARNm i sinteza polipeptidului are loc n cavitatea dintre subuniti; suprafaa acestei
caviti este, n general, lipsit de proteine, prin urmare legarea ARNm, a ARNt i creerea legturii
peptidice este realizat n principal de ARN; ARNt este mutat secvenial prin cele trei locusuri (A, P
i E); lanul polipeptidic i face apariia n citosol printr-un tunel ce trece prin miezul de ARNr a
subunitii mari
prezena: n citoplasma tuturor tipurilor celulare sub form liber sau ataati de membrana REG i
de faa citoplasmatic a nveliului nuclear
funcie: sinteza proteinelor (translaia), facilitnd cuplarea ARNm cu ARNt
eficiena: ntr-o secund ribozomul eucariot adaug 2 AA la un lan polipeptidic, iar ribozomii
bacterieni lucreaz cu o vitez de aprox. 20 AA pe secund
ribozomii eucariotelor i ai
procariotelor sunt similari, dar
cu unele diferene: ribozomii
eucariotelor sunt mai mari;
anumite antibiotice (tetraciclina
i
streptomicina)
inhib
ribozomii procariotelor dar nu
i cei ai eucariotelor
Polisomii sau poliribozomii
sunt formaiuni constituite
dintr-o molecul de ARNm pe
care se fixeaz mai muli
ribozomi. Poliribozomii liberi
sintetizeaz
proteine
de
structur, iar cei ataai de
membrana REG sintetizeaz
proteine de export.
Fig. 3 Poliribozomii - schem i ME
Microscopie optic
datorit dimensiunilor mici, sub puterea de rezoluie a M.O., ribozomii nu pot fi observai. n
celulele n care au loc intense procese de proteino-genez (celule foliculare din ovar) ribozomii
formeaz zone intens bazofile n citoplasm (coloraie HE)
tehnica Brachet: ribozomii se coloreaz n rou, datorit prezenei ARN-ului
Microscopie electronic
apar sub forma unor granule ovalare sau elipsoidale cu diametrul vertical de 20-30 nm, cel
transversal de 16-17 nm i coeficient de sedimentare la eucariote de 80 S (Svedberg)
tehnica colorrii negative pune n eviden un an care mparte acest organit n dou subuniti
inegale ca dimensiuni i cu structur morfologic i biochimic diferit (o subunitate mic, de 40 S,
i o subunitate mare, de 60 S)
2

Biologie celulara si moleculara

Semestrul II

Fig. 4 A) Ribozomi liberi i polizomi; B) Ribozomi liberi i ribozomi ataai REG

Sinteza proteic (Translaia)
Sinteza biochimic a proteinelor este denumit translaie, ntruct procesul presupune translaia
(traducerea) secvenelor de nucleotide a ARNm n secvene de aminoacizi (AA) a unui lan
polipeptidic. Translaia ARN-ului mesager necesit aciunile a ARNt (ARN de transfer) legat de
AA, ribozomi i numeroase proteine solubile. De notat c ARNm-ul eucariotelor, spre deosebire
fa de cel al procariotelor, este monocistronic, posednd informaia necesar pentru sinteza unei
singure proteine.
Sinteza unui polipeptid implica 3 etape:
1. Iniierea:
a. iniiat de codonul start al ARNm (ntotdeauna AUG)
b. ARNm, ARNt iniiator (ntotdeauna ARNt-Metionin) i unirea subunitilor ribozomale
c. necesit factori iniiatori i hidroliza GTP
d. ARNt iniiator este mutat pe locusul P, iar locusurile A i E rmn vacante
e. sinteza polipeptidului ncepe la captul amino-terminal, de aceea primul AA este cel aminoterminal (NH2)
2. Elongaia
a. Recunoaterea codon-ului:
i. ARNt intr n locusul A
ii. Necesit factori de elongaie i hidroliza GTP
b. Formarea legturii peptidice
i. Catalizat de ctre ribozom (enzima ribozim)
ii. Leag i transfer polipeptidul legat de ARNt din locusul P la ARNt din locusul A (peptidiltransferaza)
c. Translocarea
i. ARNt din locusul A este translocat n locusul P; ARNt din locusul P lipsit de AA este translocat pe
locusul E i iese din ribozom
ii. ARNm este plimbat prin ribozom ntr-o singur direcie
iii. Energia este asigurat de ctre hidroliza GTP
3. Terminarea
a. Are loc cand se ajunge la codonul stop (UAA, UAG sau UGA)
b. Factorul de eliberare se leag de codonul stop, adugnd o molecul de ap in loc de AA
Ribozomii i antibioticele

Biologie celulara si moleculara

Semestrul II

Pentru a fi eficient, din punct de vedere clinic, un antibiotic trebuie s inhibe creterea sau s
omoare bacteriile, fr s fie toxic pentru celulele umane. Astfel, penicilina inhib sinteza peretelui
celular bacterian, iar alte antibiotice inhib diferite etape ale sintezei proteice.
Ribozomii mitocondriilor din eucariote se aseamn cu cei aparinnd procariotelor, n ceea ce
privete sensibilitatea fa de inhibitori (antibiotice). Prin urmare, unele antibiotice pot avea un efect
duntor asupra mitocondriilor umane.