Curs 10 Transcrierea ADN

http://www.netterimages.com/images/vpv/000/000/007/7346-0550x0475.
jpg
TRANSCRIEREA ADN TRANSCRIEREA ADN
An introduction to genetic analysis, 8th edition, 2008
Transcrierea la procariote i eucariote
Metode experimentale de urmrire a sintezei ARN
Eliot Volkin i Lawrence Astrachan (1957) urmresc sinteza ARNm n celulele de
E.coli infectate cu fag T2. Pentru marcarea ARN s-a utilizat U marcat radioactiv.
Dup infectare, n bacterie ncepe o sintez intens de ARN, dar acesta dispare
dup o perioad scurt de timp.
Particulariti ale structurii ARN
Subunitile structurale ale ARN sunt
ribonucleozidele trifosfat alctuite din:
- grupare fosfat
- pentoz (riboza)
- baz azotat (A, G, C i U)
ARN sunt de obicei molecule mici
monocatenare, iar ADN n general sunt
molecule foarte mari dublu catenare.
Moleculele de ARN au o stabilitate redus
fa de cele ADN.
Legarea bazelor azotate de pentoz are loc prin intermediul C1 al ribozei i N1 n
cazul bazelor pirimidinice i N9 n cazul bazelor purinice.
Principalele clase de ARN:
- ARN informaional
- ARN funcional
ARN informaional este ARNm
care servete ca matri la sinteza
polipeptidelor, deci este produsul
de transcriere al genelor ce
codific polipeptide.
ARN funcional nu este tradus i
ndeplinete n celul anumite funcii.
Principalele tipuri de ARN funcional sunt
ARNt i ARNr, care sunt i cele mai
abundente n celul.
Principalele tipuri de ARN funcional:
-ARNt sunt molecule mici de ARN care transport aminoacizii la locul sintezei
polipeptidelor
-ARNr sunt molecule mai mari de ARN care fac parte din componena ribosomilor i
particip la sinteza polipeptidelor
-ARNnm (nuclear mic) care particip la procesarea ARNm primar n nucleu
-ARNnom (nucleolar mic) care particip la procesarea moleculelor de ARNr
-ARNi (de interferen) care sunt molecule mici ce particip la reglarea post-transcriere
a exprimrii genelor
Componentele principale necesare transcrierii:
- matria ADN
- substratul necesar sintezei ARN ribonucleozidele trifosfat
- complexul enzimatic de transcriere care const din proteine necesare pentru
recunoaterea genelor i pentru sinteza ARN. Enzima cu rol cheie n transcriere
responsabil pentru sinteza ARN este ARN polimeraza.
Din cele dou catene ADN ambele pot servi ca matri pentru transcriere, dar
pentru o singur gen doar o singur caten va servi ca matri, deci o gen nu va
fi transcris de pe amblele catene. Transcrierea va incepe la captul 3 al matriei.
Experimentul lui Marmur i col. (1963) a demonstrat c doar una din cele dou catene
este transcris.
Genetics a conceptual approach, second edition, 2002
Catena ADN care servete ca matri pentru sinteza ARN este numit caten
matri, iar catena care nu este transcris se numete caten codificatoare.
Catena matri este complementar cu ARN transcris (n locul T este prezent U).
Catena conductoare este identic cu ARN transcris (n locul T este prezent U).
Pe o singur molecul de ADN poate fi iniiat
sinteza a mai multe molecule de ARN.
Transcrierea genelor pentru ARNr n
nucleul celulelor de Triturus
viridescens. Imagine realizat de Miller,
Hamkalo i Thomas n 1970.
Sinteza ARN are loc n direcia 53
Sinteza ARN poate porni de la zero, nu necesit amors (primer). Ribonucleozidele trifosfat
sunt adugate la captul 3 al moleculei de ARN. Catenele ADN sunt separate doar la locul
transcrierii, dup care se spiralizeaz din nou.
Procesul de transcriere poate fi mprit:
- iniiere, complexul proteic de transcriere recunoate secvenele specifice numite
promotor i se ataeaz la acestea iniiind transcrierea
- elongare ARN polimeraza se deplaseaz de-a lungul moleculei de ADN, desface cele 2
catene i sintetizeaz ARN pe baz de complementaritate n direcia 53.
- terminare ARN polimeraza recunoate secvenele semnal de terminare, oprete
sinteza i se desprinde de ADN.
Iniiere
Elongare
Terminare
TRANSCRIEREA ADN LA PROCARIOTE TRANSCRIEREA ADN LA PROCARIOTE
INI INI IEREA IEREA
Promotor este o regiune din secvena de ADN care se afl n amonte de gen i face
parte din elementele reglatoare ale genei.
Primul nucleotid transcris este notat cu +1, nucleotidele n amonte vor fi notate cu semnul
(minus).
Promotorul de la procariote conine 2 secvene consens: -10 i -35. Secvena consens -10
mai este numit i secvena Pribnow.
TRANSCRIEREA ADN LA PROCARIOTE TRANSCRIEREA ADN LA PROCARIOTE
INI INI IEREA IEREA
ARN polimeraza de E.coli const din 5 subuniti: 2 subuniti , o subunitate i i
una . Complexul enzimatic fr factorul poate iniia transcrierea, dar n acest caz
pot fi transcrise orice secvene de ADN. Subunitatea 70 de la E.coli este responsabil
pentru identificarea promotorului i separarea celor 2 catene ADN n regiunea -10.
La E.coli se ntlnesc mai multe tipuri de factori , care recunosc diferite secvene ale
promotorilor. Astfel subunitile din nucleul enzimatic (2 subuniti , o subunitate i
) prin asocierea cu diferii factori pot iniia transcrierea tuturor genelor bacteriene.
ELONGAREA ELONGAREA
Molecular Biology, second edition, 2002
Substratul pentru sinteza ARN sunt ribonucleozidele trifosfat
Captul C-terminal al subunitii
intr n contact cu elementele
reglatoare din amonte (up element).
ARN polimeraza poate ncepe
sinteza de la zero, iar primul
nucleotid adugat de la care va
porni enzima sinteza este de
obicei A.
ELONGAREA ELONGAREA
n timpul transcrierii doar 8-9 nucleotide sunt n contact cu ARN polimeraza.
ARN polimeraza are proprietatea de a elimina erorile (nucleotide ncorporate greit n
timpul sintezei) prin 2 mecanisme: editare pirofosforolitic i editare hidrolitic.
Editarea pirofosforolitic presupune eliminarea nucleozidului ncorporat greit prin
introducerea unei gruprii PPi.
Editarea hidrolitic are loc prin clivarea legturilor fosfoesterice la unul sau mai multe
nucleotide ncorporate deja.
Erorile introduse n timpul
transcrierii sunt mai frecvente
dect n cazul replicrii.
TERMINAREA TERMINAREA
Terminarea transcrierii este bazat pe
existena unor secvene specifice. La
procariote terminarea este de 2 tipuri:
- Rho dependent
- Rho independent
Mecanismul Rho independent de
terminare se bazeaz pe existena unor
secvene repetitive inversate care vor
forma o poriune dublu catenar i o
bucl datorit prezenei unei poriuni
care nu prezint complementaritate cu
regiunea vecin. Regiunea cu secvenele
inversate este urmat de o secven
format din U.
TERMINAREA TERMINAREA
PNAS March 28, 2006 vol. 103 no. 13 4870-4875
Terminarea Rho dependent necesit factorul Rho care este o
protein i un situs numit rut (Rho utilization) alctuit din
aproximativ 40 de nucleotide bogat n C. Factorul Rho se leag la
situsul rut i determin separarea ARN polimerazei de la locul sintezei.
LA EUCARIOTE LA EUCARIOTE
Transcrierea la eucariote prezint cteva diferene importante fa de cea de la
procariote:
1. la eucariote exist 3 tipuri de ARN polimeraze I, II i III.
1. ARN polimeraza I transcrie doar genele pentru ARNr (cu excepia ARNr
5S)
2. ARN polimeraza II transcrie genele codificatoare de polipeptide, deci
sintetizeaz ARNm
3. ARN polimeraza III sintetizeaz molecule mici de ARN: ARNr 5S, ARNt,
ARNnm (nuclear mic)
2. Iniierea transcrierii necesit factori generali de transcriere (FGT)
3. ARNm primar sintetizat n nucleu necesit procesare nainte de a fi exportat n
citoplasm
4. Matria pentru transcriere (ADN) la eucariote este mpachetat n cromatin,
care n unele cazuri poate mpiedica accesul ARN polimerazei la matri.
Transcrierea la eucariote necesit
existena unui promotor. Promotorii de
la eucariote conin secvena numit
TATA (numit i TATA box). Regiunea
TATA este bogat n AT (sunt mai uor
de separat ).
Iniierea necesit ataarea unor factori
de iniiere numii Factori Generali de
Transcriere (FGT). Factorii de transcriere
specifici pentru ARN polimeraza II sunt
notai cu TFII (Factori de Transcriere
pentru ARN polimeraza II). Factorii de
transcriere nu sunt implicai n sinteza
direct a ARN, ci doar n recunoaterea
promotorilor i atragerea ARN
polimerazei la locul sintezei.
Evenimentele de modificare a ARNm
primar au loc n acelai timp cu
transcrierea:
1. Adugarea CAP la captul 5
2. Procesarea ARN (eliminarea
intronilor)
3. Poliadenilarea ARN la captul 3'
Captul carboxi-terminal al subunitii
numit CTD (domeniu carboxi-terminal). CTD
conine o secven de 7 aminoacizi care se
repet de cteva ori. Aceast regiune servete
la fixarea proteinelor necesare pentru
modificarea ARN.
Modern Genetic Analysis, 1999
Structura genelor la eucariote i modificarea ARNm primar.
Genele eucariotelor sunt organizate n introni i exoni. Intronii sunt secvene din
gene care se transcriu, dar nu se traduc. Exonii sunt secvene codificatoare ale unei
gene, deci care se i transcriu i traduc.
Promotor
Secvena
netradus 5'
Exon 1
Secvena
netradus 3'
Secvena transcris
START
STOP
Exon 2 Exon 3
Intron 1 Intron 2
Structura general a genelor eucariote
Intronii din genele ce codific polipeptide conin la captul 5 GU, iar la 3 AG. n
interiorul intronului se afl un punct numit punct de ramificare (branch point).
Molecular biology of the gene, 6th edition, 2008
Proteinele implicate n procesarea
ARN (eliminarea intronilor) sunt
ribonucleoproteine (snRNP) care
sunt proteine asociate cu molecule
de ARN.
Cele mai importante snRNP sunt U1,
U2, U4, U5 i U6.
La captul 5 al intronului se leag
U1, iar la punctul de ramificare U2,
ulterior U4, U5 i U6 se altur
complexului.
Conexiunile dintre ribonucleoproteine sunt
bazate pe complementaritatea dintre
moleculele de ARN. U1 disociaz de la
complex i este nlocuit cu U6. Dup
disocierea U4 din complex are loc formarea
lasoului (captul 5 este clivat i legat la
punctul de ramificare).
Dup formarea lasoului, este clivat captul
3 al intronului, iar extremitile exonilor
sunt ligate.
n procesarea ARN au loc 2 reacii de
trans-esterificare:
1. Prima reacie are loc ntre captul
5 al intronului i punctul de
ramificare
2. A doua reacie are loc ntre
capetele 5 i 3 ale exonilor vecini
Intronii de tip I i II sunt capabili de autoprocesare, intronii nucleari (care necesit
splisosom) sunt cei care necesit complexe proteice pentru procesare.
n 1981 Tom Cech demonstreaz c ARNr de la Tetrahymena poate singur s elimine
un intron de 413 nt fr prezena oricrei proteine.
Procesarea alternativ fenomenul prin care exonii unei gene sunt recombinai
rezultnd diferite isoforme ale aceleiai proteine, astfel o singur gen poate codifica mai
multe polipeptide.
ARNm primar i transcriptul
genei pentru -tropomiozin
este procesat alternativ n
diferite tipuri de celule.
Modificarea ARNm adugarea CAP la captul 5 al ARNm
La captul 5 al ARNm este adugat o
7-metilguanin, iar la urmtoarele
nucleotide n poziia C2 este adugat o
grupare metil.
Modificarea ARNm primar la captul 3 - adugarea cozii poli-A, proces numit
poliadenilare. ARNm este clivat la 11-30 nucleotide n aval de o secven consens
(semnal pentru poliadenilare). Poli-A polimeraza (PAP) este enzima responsabil de
sinteza cozii poli-A (150-200 nt).
Secvena poli-A nu este razultatul transcrierii genei, secvena pentru coada poli-A
nu exist n secvena genei.
ARNi (ARN de interferen) sunt
molecule mici monocatenare de
ARN care au funcia de reglare a
exprimrii genelor.
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/b/be/SiRNA_and_RNAI_german.png/682px-SiRNA_and_RNAI_german.png
(RNA-induced
silencing complex)
ARNi contribuie la protecia
celulelor contra transpunerii
elementelor genetice mobile i a
infectrii cu virusuri.
Inactivarea genei necesare pentru sinteza
pigmentului la plante transgenice de
petunie transformate cu gena pentru
pigment.
SUMAR SUMAR
1. Transcrierea ADN este procesul de transcriere a succesiunii de nucleotide ntr-o
molecul de ADN n una de ARN. Transcrierea este procesul prin care se sintetizeaz
moleculele de ARN.
2. Principalele diferene ntre ADN i ARN sunt: nucleotidele din ADN conin
dezoxiriboz, iar nucleotidele din ARN riboz, moleculele de ADN sunt dublu
catenare i foarte mari, iar ARN sunt, de obicei, molecule monocatenare mici, ADN
conine baza primidinic T, iar ARN conine U, ARN spre deosebire de ADN poate avea
funcii catalitice (ribozime).
3. ARN rezultat n urma transcrierii poate fi mprit n 2 categorii: informaional i
funcional. ARN informaional este ARNm care codific un polipeptid. ARN
funcional nu este tradus i ndeplinete anumite funcii n celul (ARNr, ARNt, ARNn
etc). ARNr i ARNt sunt tipurile de ARN funcional care predomin (95%) n celul, iar
ARNm alctuiete doar cteva procente.
4. Transcrierea la procariote are loc n citoplasm i este cuplat cu traducerea, la
captul 5 al ARNm ncepe traducerea iar la captul 3 continu sinteza ARN.
5. Transcrierea la eucariote este separat de traducere, transcrierea are loc n nucleu,
iar traducerea n citoplasm. ARN sintetizat n nucleu va fi modificat nainte de
exportarea n citoplasm.
SUMAR SUMAR
6. Procesul de transcriere poate fi mprit n 3 etape: iniiere, elongare i terminare.
7. Iniierea transcrierii necesit nite regiuni specifice recunoscute de ctre proteine
implicate n iniere numite promotori. Promotorii conin secvene consens
conservate, astfel la procariote aceste secvene sunt -35 i -10 (Pribnow). ARN
polimeraza de E.coli este alctuit din 2 subuniti , o subunitate , una i
subunitatea . Subunitatea are rol n depistarea promotorilor i separarea
catenelor n regiunea -10.
8. Enzima cu rol cheie n sinteza ARN este ARN polimeraza, care va sintetiza ARN n
direca 53. ARN polimeraza, spre deosebire de ADN polimerz, nu are nevoie de o
amors de la care s porneasc sinteza, ea poate porni sinteza de la zero, iar primul
nucleotid adugat este A.
9. Terminarea transcrierii la procariote poate fi Rho dependent i Rho independent.
Terminarea Rho independent are la baz formarea unei structuri secundare a
ARN, datorit prezenei unor secvene inversate care vor forma o poriune dublu
catenar i o bucl. Aceast structur este urmat de o poriune format din U care
va contribui la desprinderea ARN polimerazei. Terminarea Rho dependent
presupune ataarea unei proteine Rho la un situs specific rut care va cauza
desprinderea ARN polimerazei de la locul sintezei.
10. Eucariotele spre deosebire de procariote au 3 ARN polimeraze: ARN polimeraza I
(transcrie genele pentru ARNr), ARN polimeraza II (transcrie genele pentru ARNm),
ARN polimeraza III (transcrie genele pentru ARN de dimensiuni mici: ARNr 5S, ARN
nuclear mic etc)
SUMAR SUMAR
11. Promotorii de la eucariote conin secvena consens numit TATA box recunoscut de
proteina ce leag TATA (TATA binding protein). Pentru iniierea transcrierii la
eucariote sunt necesari factori generali de transcriere (FGT), care se leag la nivelul
promotorului i fixeaz ARN polimeraza pentru iniierea transcrierii.
12. Captul carboxil al subunitii al ARN polimerazei (CTD) de la eucariote are rol n
modificarea ARNm primar. La acest capt se fixeaz proteinele care modific ARNm
primar.
13. ARNm primar din nucleul eucariotelor va fi modificat la ambele capete i procesat. La
captul 5 este adugat o 7-metil guanin, iar la urmtoarele cateva nucleotide n
poziia C2 este adugat cte o grupare metil. Aceast modificare la captul 5 poart
denumirea de CAP.
14. La captul 3, ARNm va fi clivat n aval de o secven semnal, iar poli-A polimeraza
(PAP) va aduga o coad de poli-A (150-200 nt). Coada poli-A i CAP contribuie la
stabilitatea moleculei de ARNm.
15. Genele de la eucariote prezint deosebiri structurale fa de genele procariotelor prin
prezena intronilor. Intronii sunt regiuni ale genelor care se transcriu, dar nu se
traduc. Exonii sunt secvenele codificatoare dintr-o gen. n general, genele
procariotelor nu conin introni (cu unele excepii). Intronii sunt eliminai prin
procesarea ARN de ctre ribonucleoproteine specifice.
16. Procesarea alternativ este fenomenul de rearanjare a exonilor ntr-o molecul de
ARNm n diferite celule. Atsfel, o singur gena poate genera mai multe isoforme ale
unei proteine.
!
Transcrierea la procariote i eucariote
Modificrile ARN primar n nucleul celulelor eucariote
Procesarea ARN i procesarea alternativ
ARNi
http://www.foxtaur.com/fuzzy/thinking.gif

Curs 10 Transcrierea ADN

Încărcat de

Informații document

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Curs 10 Transcrierea ADN

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

http://www.netterimages.com/images/vpv/000/000/007/7346-0550x0475.

S-ar putea să vă placă și