Sunteți pe pagina 1din 39

1

EXPRESIA
GENIC
2
Date generale
dou procese corelate funcional:
transcripia i translaia;
necesit:
un sistem de transfer al informaiei genetice
din nucleul celulei n citoplasm;
un cod genetic.
3
Date generale
R
e
p
l
i
c
a
r
e

ARNm
Transcripie
ADN
Translaie
PROTEINE
Expresia genic este supus unui control riguros care regleaz:
tipul de celul n care are loc sinteza proteinei,
momentul,
cantitatea si ritmul

4
Date generale
Transfer general:
ADN ADN = replicare;
ADN ARN
m
= transcripie
ARN
m
proteine = translaie;
Transfer special:
ARN ARN - replicarea unor virusuri;
ARN ADN (transcripia invers) celule
infectate cu retrovirusuri.

5
Date generale
Transferul informaiei ADN proteine :

transcripia formare ARN mesager precursor;
formarea ARNm matur;
transportul ARNm din nucleu la ribosomi;
translaia sinteza proteine;
procesarea post-translaional;
6
Transcripia

1. Diferene ADN ARN

2. Formarea ARNm precursor

3. Maturarea ARNm

7
Transcripia
1. Diferene ADN ARN
componenta glucidic pentoza - este
riboza, n loc de deoxiriboz;
n ARN, timina din ADN este nlocuit de
uracil, astfel cele patru baze azotate ale
unei molecule de ARN sunt: adenina,
guanina, citozina i uracilul;
moleculele de ARN sunt monocatenare.

8
ARN = polimer de ribonucleotide:
[P R N]n
ARN ADN:
riboz,
uracil n loc de timin,
micropolimer,
monocatenar.
ARN:
codant = ARNm
necodant ( gene ARN) cu roluri multiple: - n translaie (ARNr i
ARNt);
- n reglare (ARNmi; ARNsi; ARNa);
- n procesarea altor molecule ARNsn),
- parazit (retrovirusuri; retrotranspozoni)
9
Transcripia
2. Mecanismul transcripiei
copierea unui segment limitat din molecula de
ADN.
transcripia se face pe o singur caten a
moleculei de ADN..
catena transcris are ntotdeauna o polaritate 3'
5'.
catena transcris = matri pentru ARNm (TA,
GC, CG, AU).
molecula de ARNm polaritate i secven
nucleotidic identic cu catena de ADN
netranscris.
catena netranscris = caten sens,
catena transcris = caten antisens.

10
5'...ATGTTACGACGT... 3' catena "sens"
3'...TACAATGCTGCA... 5 catena "antisens"
(transcris)
Transcripie

5'...AUGUUACGACGU... 3' ARNm
11
U.M.F IAI
FORMAREA ARNm PRECURSOR
Expresia genic presupune mai
nti decondensarea regiunii
din ADN care conine gena /
genele ce vor fi transcrise
prin:
acetilarea histonelor din
nucleozomi ce reduce
condensarea filamentului cu
nucleozomi;
repoziionarea nucleozomilor.
Ambele mecanisme sunt
implicate n REGLAREA
expresiei genelor
12
Transcripia
3. Formarea preARNm
Iniierea transcripiei - regiunea promotor
a genei, prin fixarea factorilor proteici de
transcripie.
gene cu exprimare specific tisular
fixare TBP (TATA-binding protein) n
regiunea TATA a promotorului atragerea
altor factori proteici complex ADN-
proteine fixare ARN-polimeraz II la
aproximativ 25 pb n aval de situsul TATA
13
Transcripia
3. Formarea preARNm
fixarea ARN-polimerazei II fixare ADN-helicaz
scindare legturi de hidrogen.
creterea catenei de ARNm n direcia 5 3
formare de legturi esterice ntre riboza i acidul
fosforic.
copiere exoni + introni transcript primar sau
preARNm.
n momentul n care ARNpol ntlnete situsul de
terminare a transcripiei AATAAA (aval de ultimul
exon) se semnaleaz clivarea 3 a transcriptului
primar;
ARNm precursor va fi secionat (de nite
nucleaze) n dreptul situsului de poliadenilare la
18-20 pb n aval (zon bogat n pb GC)

14
Transcripia
3. Maturarea preARNm
n regiunea 5 a moleculei este adugat un
rest de 7-metilguanin rezisten la
aciunea ribonucleazelor din citoplasm;
o ribonucleaz secioneaz preARNm la
11-30 de nucleotide n aval de situsul
AAUAAA fixare poliA-polimeraza
ataarea mai multor nucleotide cu adenin
(50-250) "coad poliadenilic
stabilizare preARNm n timpul
transportului din nucleu n citoplasm
15
Transcripia
3. Maturarea preARNm
Matisare
secionarea capetelor intronilor + eliminarea
intronilor racordarea exonilor;
la nivelul spliceosomilor (organite citoplasmatice)
- ribonucleoproteine mici de tipul snRNA fixare
pe balizele dinucleotidice ale intronilor: GU i
AG;
Secionare enzimatic;
Excludere introni;
Racordare exoni.

16
TRANSCRIPIA INVERS
ADN ARN

transcripie invers

T. Invers = transcrierea unei molecule de ARN
monocatenar ntr-o caten de ADNc, care va deveni apoi
bicatenar (prin sinteza unei catene complementare).
Realizat de ctre transcriptaza invers / revers
transcriptaz (H. Temin i D. Baltimore, Pr. Nobel, 1975).

Utilizat de: virusurile ARN; retrotransposoni, telomeraz
precum i n tehnologiile ADN, pentru obinerea de gene
U.M.F IAI
17
Translaia

1. Aparatul de translaie

2. Codul genetic

3. Etapele translaiei
18
Aparatul de translaie
1. ARNm matur

2. Ribosomii

3. ARN transfer

4. Proteine

5. Surse energetice
19
Aparatul de translaie
1. ARNm matur
2 zone netranslate laterale
1 regiune central translat

5UTR Secvena translat 3UTR
7-CH
3
-G AUGUAA---AAAAA
20
Aparatul de translaie
2. Ribosomi

(Palade, Pr. Nobel, 1974) = platformele de asamblare
a AA n Pr;
complexe macromoleculare (ARNr + proteine)
asamblare la debutul translaiei
subunitate mic (30S) + subunitate mare (50S)
ribosom activ (70S):
situs de fixare ARNm;
situs aminoacil
situs peptidil
situs de ieire
21
Aparatul de translaie
3. ARNt
40 de tipuri,
80 de nucleotide,
dou funcii:
fixare specific aminoacid
recunoate codonul corespunztor aminoacidului
dou situsuri funcionale: aminoacil i
anticodon
22
Aparatul de translaie

4. proteine
Factori reglatori:
factori de iniiere specifici (IF initiation factor),
factori de elongaie (EF elongation factor)
factori de eliberare (RF release factor).
Enzime:
aminoacil-ARNt-sintetaze,
peptidil transferaza
translocaza ,
23
Aparatul de translaie

5. Surse energetice

acidul adenozin-trifosforic (ATP)

acidul guanozin-trifosforic (GTP)
24
Codul genetic

sistem de coresponden ntre o
anumit succesiune de nucleotide din
structura unei molecule de ARNm i un
anumit aminoacid din structura peptidei
sintetizat pe baza informaiei genetice
a moleculei de ARNm
25
Codul genetic
Proprieti:
triplet;
fr echivoc
degenerat
are o serie de codoni speciali:
AUG;
UAA, UAG, UGA
lipsit de semne de punctuaie
nesuperpozabil
universal
26
U.M.F IAI
Cunoaterea codului genetic
nelegerea mecanismelor mutaiilor
Substituia unui nucleotid
AUG UGU AAA CCA
Met cis lys pro
MUTAIE SILENTIOAS
(silent m.)
MUTAIE CU SENS GRESIT
(missens m.)
MUTATIE NONSENS
(nonsens m.)
AUG UGC AAA CCA
Met cis lys pro
AUG UGG AAA CCA
Met trp lys pro
AUG UGA AAA CCA
Met Stop ................
Inseria sau deleia unui nucleotid
AUG UUU AAA GUU UCG
Met Phe Lys Val Ser
Mutaii frameshift
(mutaii cu decalarea cadrului)
AUG UUU GAA AGU UUC G
MetPhe Glu Ser Phe
AUG UUU AA G UUU CGA
Met Phe Lys Leu Arg
27
Mecanismul translaiei
Iniiere
aminoacil-ARNt-sintetaza + ATP
activarea complexelor aminoacid-ARNt;
fixarea complex metionil-ARNt la
subunitatea mic a ribosomului (40S);
deplasare spre captul 3 al ARNm
codonul iniiator AUG
ataare subunitate mare ribosom (60S)
situsuri funcionale: aminoacil, peptidil i
de ieire
28
Mecanismul translaiei
Elongaie
fixarea n situsul peptidil, a complexului
aminoacid
2
-ARNt;
Peptidiltransferaza transfer metionin pe
aminoacid
2
formare dipeptid ataat la
situsul peptidil;
Translocaza deplasare ribosom activ trei
nucleotide, n direcia 53:
Dipeptid situs aminoacil;
Situs peptidil liber fixare aminoacid
3
Repetare ciclu de elongaie
29
Mecanismul translaiei
ncheiere
situs peptidil codon stop fixare
factor de eliberare ;
desprindere complexul peptidil-ARNt
trecere n citoplasm dezasamblare
eliberare peptid;
Dezasamblare ribosom 40S + 60S
Distrugere ARNm

30
U.M.F IAI
AMPLIFICAREA SINTEZEI DE PROTEINE
O celul poate produce cantiti mari dintr-o anumit protein pe
baza informaiei unei singure gene.
Un plasmocit 2000 molecule identice de anticorpi pe secund
Explicaiile amplificrii:
Prin transcripie se pot produce copii multiple a unui ARNm;
Fiecare ARNm poate fixa zeci de ribozomi copii multiple protein
Aceste procese presupun o reciclare rapid a materialelor folosite:
ARN, ribozomi, enzime etc
31
Reglare expresie genic
Proces complex > niveluri de reglare:
Reglare global:
semnalizarea localizat dependent de poziia celulei,
amprentarea genetic,
recombinrile somatice
competiia pentru activator/inhibitor
Reglare transcripional;
Reglare posttranscripional:
Uniti transcripionale multigenice;
Matisarea i poliadenilarea alternativ;
Modificarea secvenei nucleotidice a ARNm;
Reglare translaional
Reglare posttranslaional:
Modificri chimice posttranslaionale;
Clivarea posttranslaional a peptidelor
32
U.M.F IAI
REGLAREA EXPRESIEI GENELOR
Toate celulele corpului posed aceeai informaie
genetic (rezult prin mitoze succesive din zigot).
Expresia genelor este ns diferit, datorit unor
mecanisme complexe de reglare a expresiei genice.
Unele gene (constitutive) exprimate continuu, n toate tipurile
celulare produc proteine permanent necesare metabolismului
celular.
Alte gene (autorizate) au o expresie limitat la anumite esuturi
specifice difereniere celular.
Expresia genelor autorizate s se exprime poate fi limitat temporal
(stadii diferite ale dezvoltrii) i adaptat la stimulii extracelulari
(ex).
Multe alte gene sunt complet i permanent inactivate.
33
U.M.F IAI
REGLAREA PRE-TRASNCRIPIONAL
(EPIGENETIC)
A EXPRESIEI GENELOR
Vizeaz expresia spaial a anumitor gene n anumite
esuturi i tipuri celulare:
selecia unor gene n celulele embrionare nedifereniate i
meninerea expresiei lor la celulele descendente (difereniate).

Se realizeaz prin modificarea configuraiei cromatinei
(despiralizare) care permite accesul ARN pol + factorilor
de transcripie la promotorul genelor transcripie.
34
U.M.F IAI
Modificrile conformaiei cromatinei
NU intereseaz secvena de
nucleotide (informaia genetic) i
se numesc modificri epigenetice:
Acetilarea histonelor
decondensarea cromatinei
expresie genic;
Dezacetilarea histonelor
condensarea cromatinei represie
genic;
Metilarea ADN condensarea
cromatinei represie genic; ex.
Amprentarea genomic una din
genele alele de pe o pereche de
cromozomi omologi este represat
Inactivarea unui cromozom X
35
U.M.F IAI
REGLAREA TRASNCRIPIONAL
A EXPRESIEI GENELOR
Vizeaz reglarea activitii ARN polimerazei II
(transcriptaza).

Se realizeaz prin interaciunea
unor FACTORI DE TRANSCRIPIE
cu anumite SECVENE ALE PROMOTORULUI
determin transcripia anumitor gene n anumite
esuturi, ntr-un anumit moment i cu o anumit
intensitate.
36
U.M.F IAI
REGLAREA POST-TRASNCRIPIONAL
A EXPRESIEI GENELOR
Vizeaz moleculele de ARN sintetizate prin
transcripie.
Mai multe mecanisme din care importante sunt:
Matisarea alternativ o gen produce mai multe
molecule de ARNm diferite (prin selecia exonilor) mai
multe proteine diferite; de ex, calcitonina i neuropeptidul
nrudit cu calcitonina (v. cursul precedent);
Interferena ARN (RNAi) A. Fire i C.Mello Pr. Nobel
2006
37
U.M.F IAI
INTERFERENA ARN
ARNi mecanismul prin care se inhib expresia
genic cu ajutorul unor molecule mici de ARN
complementar intei:
Genomul ARN al unor virusuri (HIV, polio, hepatita C etc)
sau ARNm produs de genele virale
Gene din genomul ADN al celulei.
Rolul cheie n acest proces l au:
ARNsi (small interfering RNA) acioneaz n citoplasm
unde recunosc i cliveaz enzimatic moleculele de ARN
int (virale);
ARNmi (microRNAs) produs prin transcripia unor gene
ADN reglatorii acioneaz n nucleu i prin metilare
blocheaz transcripia altor gene (n special n procesul de
difereniere celular)
38
U.M.F IAI
MODIFICRILE POST-TRANSLAIONALE ALE
PROTEINELOR
Determin funcia proteinelor
Dup sintez se produc:
Configuraia spaial,
tridimensional specific;
Modificri reversibile: fosforilarea
serinei sau acetilarea lyzinei;
Modificri permanente:
Structurale: puni disulfidice;
clivare enzimatic a unui
precursor inactiv (pro-hormon;
pro-ferment);
Adiia unor grupri funcionale;
ex., glicozilare, adugare de lipide
etc
Adugarea altor proteine
39
U.M.F IAI
REGLAREA EXPRESIEI GENICE: CONCLUZII
Proces foarte complex care se realizeaza in fiecare
etapa a fluxului informational:
ADNARNmPROTEINA
Regleaza expresia anumitor gene in anumite tesuturi;
Genele autorizate se exprima in anumite momente
ale dezvoltarii si in anumite etape ale ciclului celular ,
cu o anumita intensitate, determinata de stimulii
extracelulari