Universitatea de Medicina si Farmacie Targu-Mures Referat la disciplina : TEHNICI IMUNOENZIMATICE

TIPURI DE ELISA-comparatie

ELISA necompetitiva sandwich Ag trebuie sa prezinte 2 epitopi (identici sau diferiti) Ac primar (Ac1): Imobilizat in faza solida in godeurile placii Nemarcat enzimatic Ac secundar (Ac2): Marcat enzimatic 1. Se pipeteaza proba (cu Ag) in godeurile cu Ac1 fixat 2. Se incubeaza complexe Ag-Ac1 3. Se spala excesul de Ag (Ag liber) 4. Se pipeteaza Ac2 (marcat enzimatic) 5. Se incubeaza complexe Ac1-AgAc2 6. Se spala excesul de Ac2 (Ac2 liber) 7. Se adauga substratul colorarea mediului de reactie ~ cantitatea de Ag din proba 8. Se citeste la spectrofotometru

ELISA competititiva ELISA indirecta (dozarea Ac) Ac primar (Ac1): Specific pentru Ag de determinat Nemarcat enzimatic Ac secundar (Ac2): Specific pentru Fc al Ac1 Marcat enzymatic Dozarea Ac Ag fixat in godeuri, specific Ac de determinat Ac primar (Ac1): =Ac de determinat Nemarcat enzimatic Ac secundar (Ac2): Specific pentru Fc al Ac1 Marcat enzimatic 1. Se pipeteaza proba (cu Ac1) in godeurile cu Ag fixat 2. Se incubeaza complexe Ag-Ac1 fixe 3. Se spala Ac1 liber 4. Se pipeteaza Ac2 5. Se incubeaza complexe Ag-Ac1Ac2 fixe 6. Se spala Ac2 liber 7. Se adauga substratul colorarea mediului de reactie ~ cantitatea de Ac1 din proba 8. Se citeste la spectrofotometru

1. Se amesteca proba (cu Ag) cu o cantitate cunoscuta de Ac1, in solutie 2. Se pipeteaza amestecul in godeurile cu Ag fixat 3. 2 situatii: Exces de Ag Exces de Ac1 Exces de Ag: -Solutie (cu Ag) + Ac1 Ag-Ac1 + Ag libere -Se pipeteaza amestecul in godeuri (cu Ag fixat) nu se formeaza complexe AgAc1 fixe -Se spala Ag-Ac1 libere si Ag libere -Se pipeteaza Ac2 in godeuri nu se formeaza complexe Ag-Ac1 - Ac2

fixe -Se spala Ac2 liber (tot Ac2, de fapt) -Se adauga substratul nu apare nicio reactie incolor Exces de Ac1 : -Solutie (cu Ag) + Ac1 Ag-Ac1 + Ac1 liberi -Se pipeteaza amestecul in godeuri (cu Ag fixat) complexe Ag-Ac1 fixe -Se spala Ag-Ac1 libere -Se pipeteaza Ac2 in godeuri complexe AgAc1-Ac2 fixe -Se spala Ac2 liber -Se adauga substratul colorarea mediului de reactie i.p. cantitatea de Ag din proba -Se citeste la spectrofotometru

ELISA SANDWICH imagine schematica reprezentativa:

ELISA INDIRECTA imagine schematica reprezentativa:

ELISA COMPETITIVA imagine schematica reprezentativa:

Bibliografie si surse informative: www.wikipedia.com Cursul de tehnici imunoenzimatice predate de catre Conf.Dr.Nagy Elod