VERIFICAREA CALITATII MEDIILOR DE CULTURA

Pentru fieacare lot de medii gata turnate, se verifica urmatorii parametrii fizici: culoare,
consistenta, omogenitate.
Controlul calitatii mediilor de cultura presupune obligator verificarea urmatorilor parametri:
sterilitate, eficienta nutritiva si abilitatea de a produce reactii biochimice specifice in cazul
mediilor selective si diferentiale.
Frecventa investigarii parametrilor mai sus mentionati difera dupa cum urmeaza:
-contolul sterilitatii se realizeza la achizitia fiecarui lot de mediii de cultura gata preparate;
-contolul eficientei nutritive si al abilitatii de a produce reactiile biochimice specifice se
efectueaza, o data la deschidere lotului de mediu.

1.CONTROLUL STERILITATII MEDIULUI

Pentru fiecare lot de mediu achizitionat sau preparat in laborator (o placa / un tub = 1UM),
imediat dupa deschidere, un numar de placi vor fi incubate la 35-37 °C si citite dupa 24 si
48 ore pentru evidentierea eventualilor contaminati. In functie de dimensiunea lotului,
numarul de placi/tuburi verificate va fi urmatorul:
-2 pentru un lot de 5-15 UM;
- 3 pentru 16-25 UM;
- 5 pentru 26-150 UM.
Absenta cresterii bacteriene la terminarea intervalului de incubare, confirma sterilitatea
mediului. Prezenta unei cresteri bacteriene in pe cel putin o placa la loturile de pana la 15
UM, pe cel putin doua placi pe loturile de peste 15 UM va duce la respingerea lotului.
Placile folosite pentru controlul sterilitatii nu vor mai fi folosite ulterior in scop diagnostic.

2.CONTROLUL EFICIENTEI NUTRITIVE

Controlul capacitatii nutritive a mediului gata turnat, presupune verificarea capacitatii

acestuia de a asigura o crestere optima a microorganismelor tinta. In acest scop, se
inoculeaza o concentratie minima standard de microorganisme tinta si se verifica
capacitatea de recuperare a mediului.
Tulpinile de control folosite pentru aceasta sunt tulpini de referinta achizitionate din colectii
autentificate bine caracterizate din punct de vedere biochimic, morfologic, serologic.

Tehnica de lucru:
-se insamanteaza tulpina de control pe panta de agar cu incubare 18-24 ore la 35-37°C;
-se suspensioneaza apoi cultura obtinuta in apa peptonata 0,1%;
-se aduce suspensia de lucru la un gradient de turbiditate echivalent etalonului nefelometric
0,5 MacFarland, corespnzator unei concentratii de 1,5x10 8 UFC/ml;
din suspensia de lucru se realizeaza un numar de 5 dilutii decimale successive in apa
peptonata 0,1%;
-se ia din ultima eprubeta cu ultima dilutie cate o cantitate de 0,1 ml ce va contine 1,5x10 2
UFC/ml si se etaleza pe doua placi Petri cu mediul de testat;
-se incubeaza 24-48 ore la 35-37°C;
-se citesc numarul de colonii crescute pe fiecare placa si se face media pentru cele doua
placi testate.
Interpretarea testului:
-se considera corespunzator mediul de testat, daca apare crestere microbiana de peste 50
UFC / ml pentru tulpina de control. O recuperare sub acesta limita implica calitati
nesatisfacatoare a mediului testat si nu il recomanda pentru izolarea patogenilor bacterieni
tinta.

Atentionari speciale

*Pentru suspensionarea tulpinilor de pe geloza inclinata se evita folosirea ca diluent a apei

distillate sau a serului fiziologic izoton, deoarece acestea pot avea efect letal pentru
microorganisme.
*Toti diluentii vor fi adusi la temperatura camerei inainte folosire pentru a evita inhibarea
microorganismelor prin soc termic.
*Pentru inocularea placilor se vor folosi aceleasi anse calibrate. Este mai important a
folosi mereu aceeasi ansa decat faptul ca ansa este calibrata.
*Laboratorul va intocmi si o fisa cu toate tulpinile de control pozitiv si negativ utilizate
pentru verificarea fiecarui tip de mediu de cultura utilizat in laborator.