Sunteți pe pagina 1din 10

Activitatea antimicrobiana in vitro

Se determina activitatea antimicrobiana in vitro pentru cunoasterea : cunoasterea sensibilitatii/rezistentei unei tulpini bacteriene la substantele antimicrobiene concentratiilor de substanta antimicrobiana in lichide organice si tesuturi Determinarea sensibilitatii la antibiotice se poate efectua prin Metoda difuzimetrica Metoda dilutiilor Metoda Etest Metode auromate CMI-concentratia minima inhibitorie reprezinta cea mai mica concentratie de substanta antibimicrobiana care inhiba dezvoltarea unei culturi microbiene CMB- concentratie minima bactericida- reprezinta cea mai mica concentratie de substanta antibimicrobiana care dostruge o cultura microbiena.

Antibiograma metoda difuzimetrica (K Bauer)

Mediul Muller Hinton Agar Mediul Muller Hinton Agar cu 5% sange, pentru Steptococcus spp., Streptococcus pneumoniae Haemophylus Test Medium pentru Haemophylus spp. Grosimea mediului n placi este critic: trebuie s fie de 4 mm. se efectueaz un inocul concentrat 0,5 pe scala Mc Farland. n eprubeta special
pentru densitometru se repartizeaz aprox. 3 ml soluie salin izoton steril. Cu ansa 1

se prelev 5 colonii bine individualizate din cultura de 18- 24 ore a bacteriei de cercetat. Se transfer coloniile n eprubet omogeniznd cu grij masa bacterian pentru a obine o suspensie bacterian ct mai omogen. Concentratia bacterian se etaloneaz la densitometru la citirea 0,5. Se ajusteaz adugnd dup caz fie soluie salin fie mas bacterian. Din momentul etalonrii plcile trebuie inoculate n interval de 15 min.

se imerseaz tamponul n suspensia bacterian etalonat a bacteriei de testat. Se scurge


excesul de lichid prin rotirea ferm a tamponului pe pereii eprubetei. Se descarc tamponul pe toat suprafaa plcii n striuri paralele succesiv n 3 direcii rotind placa cu cte 600. n final se parcurge cu vrful tamponului toat circumferina mediului. n acest mod inoculul este dispesat uniform.

Sau se descarca inoculul pe suprafata placii, se roteste usor placa astfel inact sa se
inunde intreaga suprafat, se indeparteaza excesul de lichis

placa nsmanat se las 3-5 min (niciodat mai mult de 15 min) pentru adsorbia
inoculului.

se depun discurile de antibiotice la distane de minimum 15 mm de marginea plcii i


30 mm ntre centrele a dou discuri vecine folosind o pens sau un dispenser automat. Pe o plac cu diametrul de 9 cm pot fi dispuse 5 discuri iar pe o plac cu diametrul de 15cm cel mult 12 discuri. Preseaz ferm cu pensa fiecare disc n parte pe suprafaa mediului.

se incubeaz imediat plcile la 350 C pentru 16-18 ore incubrea prelungita pana la 24 ore pentru :
oxacilina, vancomicina - staphylococcus spp vancomicina - enterococcus spp. Streptococcus spp Se msoar cu rigla gradat n mm. diametrul zonelor de inhibitie complet, n lumin reflectat. n cazul mediilor transparente se msoar pe spatele plcilor, iar n cazul mediilor cu snge pe suprafaa agarului. Se evit la msurare zonele eventual afectate de apropierea marginii plcii sau

Citirea si interpretarea rezultatelor

interaciunea ntre dou discuri. Se vizeaz inhibiia complet, fcnd abstracie de hemoliz pe mediile cu snge i de coloniile periferice, fine, vizibile doar la o scrutare atent prin lup a zonei. Coloniile mari din zona de inhibiie trebuie identificate i retestate: pot fi variante rezistente sau contaminani. Se vizeaz creterea masiv fcnd abstracie de vlul invaziv format de Proteus i de creterea pulverulent n zonele sulfamidei i trimetoprimului. Diametrele zonelor de inhibiie se raporteaz la tabelul interpretativ oferit de CLSI/2009, transformndu- se n categorii de sensibilitate (sensibil, intermediar, rezistent).

dispenser pt antibiograma

E-TEST

Kirby-Bauer sensitivity plate to test the effectiveness of various antibiotics on the bacterial culture.

All images on this site are protected under U.S. copyright law. For licensing, contact us at 603.673.0999

Modul de desfasurare a lucrarii practice studentii primesc manuscrisul cu Activitatea antimicrobiana in vitro Lp se desfasoara interactiv Fiecare student masoara diametrele antibiogarmelor, noteaza in caiet si stabileste folosind standardul CLSI/2009, S,I,R Fiecare student prinde imaginea la microscop si examineaza frotiuri

Bibliografie Bacteriologie Medicala, Olga Dorobat, editura UTM, 2006 Clinical Microbiology Procedures Handbook, Henry D. Isenberg, American Society for Microbiology, 2004 Koneman's Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology , Washington C Winn, Stephen D. Allen, Gail L. Woods, William M. Janda, Paul C. Schreckenberger , editura Lippincott Williams & Wilkins, 2005 Manual of Clinical Microbiology , Patrick R. Murray , Ellen Jo Baron , Michael A. Pfaller , Fred C. Tenover , Robert H. Yolken, editura ASM, 2007 Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing.M 100, S19 CLSI /2009 editata

10