Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Mure LP4
ANTIBIOGRAMA
Antibiograma: testarea sensibilit ii in vitro a microorganismelor fa de antibiotice (TSA testarea susceptibilit ii fa de antibiotice)
Antibiotice substane cu efect antibacterian produse de diferite microorganisme substane semisintetice, sintetice (chimioterapeutice)
Clasificarea antibioticelor dup compoziie 1. antibiotice -lactamice peniciline penicilina peniciline cu spectru larg (ampicilina, amoxicilina) peniciline antistafilococice (oxacilina) peniciline antipseudomonazice (piperacilina, ticarcilina) cefalosporine (gen I-IV) gen I cefazolin, cefalotin. gen II cefuroxim gen III ceftazidim, ceftriaxon, cefotaxim, gen IV cefpirom, cefepim cefamicine (cefoxitin) monobactame (aztreonam) carbapeneme (ertapenem, imipenem, meropenem) combinaii -lactamine + inhibitori de lactamaz (amoxicilina+acid clavulanic, ampicilina+sulbactam, piperacilina+tazobactam, ticarcilina+clavulanat) 2. macrolide, lincosamide eritromicina, claritromicina, azitromicina clindamicina 3. fluorochinolone norfloxacin, ciprofloxacin, ofloxacin, levofloxacin, moxifloxacin
4. tetracicline tetraciclina, doxiciclina, minociclina 5. glicilcicline tigeciclina 6. aminoglicozide kanamicina, gentamicina, amikacina, netilmicina 7. glicopeptide vancomicina, teicoplanin 7. oxazolidinone linezolid 8. fenicoli cloramfenicol 9. Sulfonamide trimetoprim-sulfametoxazol
Indicaiile efecturii antibiogramei: - n cazul tuturor bacteriilor semnificative clinic a cror susceptibilitate nu este predictibil (condiie: existena standardizrii privind specia, antibioticul de testat) Necesitatea efecturii antibiogramei se decide de ctre medicul microbiolog n funcie de: felul produsului din care s-a izolat germenul, specia bacterian
Cnd relevana unui izolat este incert, medicul microbiolog se consult cu medicul curant i se ia o decizie n comun pe baza datelor clinice. Metode: metode calitative o metoda difuzimetric metode cantitative o determinarea CMI (concentraia minim inhibitorie)
A. Metode calitative
Metoda difuzimetric Kirby-Bauer Se testeaz sensibilitatea unei tulpini bacteriene izolate n cultur pur i identificate. Este metoda utilizat de rutin pentru testarea susceptibilit ii izolatelor clinice. Fiind o metod calitativ , nu permite cuantificarea nivelului de rezisten, rezultatele fiind exprimate n sensibil, intermediar sau rezistent: sensibil tulpina este sensibil fa de antibioticul testat la o concentraie realizabil de c tre antibiotic n ser bacteriilor sensibile nu dispun de mecanisme de rezisten
intermediar rspunsul terapeutic n cazul acestor izolate poate fi mai slab dect n cazul izolatelor sensibile aceast categorie reprezint totodat o zon de tampon care, n caz de erori tehnice minore necontrolate, previne crearea unor discrepane majore n interpretare n caz de sensibilitate intermediar antibioticul poate fi utilizat clinic n anumite situa ii: o n infec ii urinare - acele antibiotice, care se concentreaz n urin (realizeaz concentraii mai mari n urin dect n ser) o cnd pot fi administrate doze crescute ( -lactamine)
rezistent bacteriile rezistente nu pot fi inhibate de antibiotic la concentraia seric realizabil prin administrare uzual pot fi detectate mecanisme de rezisten specifice
n efectuarea i interpretarea antibiogramelor calitative se urmresc standarde internaionale. n prezent standardul acceptat n cele mai multe ri (inclusiv Romnia) este cel american, elaborat de CLSI (Clinical Laboratory Standards Institute). Este n curs de elaborare un standard european de ctre EUCAST (European Committee on Antibiotic Susceptibility Testing), care va avea n vedere caracterisiticile tulpinilor circulante i al infec iilor mai importante n Europa.
Realizarea antibiogramei conform standardului CLSI 1. Prepararea inoculului: se suspensioneaz 2-3 colonii izolate n ser fiziologic turbiditatea suspensiei se controleaz nefelometric sau comparnd cu tuburi etalon (conin suspensii de particule latex/sulfat de Ba avnd turbiditate determinat); se ajusteaz la 0.5 McFarland (1,5x108 CFU/ml). 2. ns mnare: se alege un mediu corespunztor speciei bacteriene testate Mueller-Hinton pentru majoritatea bacteriilor Mueller-Hinton cu snge pentru pretenioi (de ex. streptococi) medii speciale (pentru Haemophilus spp . neisserii)
se introduce un tampon n suspensia bacterian, se stoarce pentru ndeprtarea excesului de lichid se terge uniform toat suprafaa mediului de 3x 3. Depunerea microcomprimatelor de antibiotice
se aleg antibioticele care trebuie testate in funcie de specia bacterian testat si n funcie de localizarea infeciei (anexa 1)
se depun discurile de antibiotic la l .5 cm distan de marginea cutiei Petri si la 3 cm distan unul fa de cel lalt (pot fi depuse max. 12 discuri)
n funcie de specia bacterian : n atmosfera obinuit sau in atmosfer de CO2 (de ex. streptococi, neisserii.) 35C 16-18 ore (n cazul germenilor pretenioi pn la 20-24 de ore) 24 de ore n cazul testrii vancomicinei 5. Citire
apare o cultur bacterian confluent, n jurul microcomprimatelor apar zone de inhibi ie (lipsa creterii bacteriene)
se citesc diametrele zonelor de inhibi ie se compar diametrele citite cu diametre standard in funcie de antibiotic, cantitatea de antibiotic din comprimat, specia bacterian testat
Tabel: Exemple de diametre standard, conform standardelor CLSI (Clinical Laboratory Standards Institute USA).
Antibiotic
Sensibil 19 mm 17 mm
sinergism -
antagonism
6. Interpretarea antibiogramelor: rezultatul se raporteaz : sensibil (S), intermediar sensibil (IS) sau rezistent (R) la antibioticul testat fiecare rezultat de antibiogram se interpreteaz! nu se comunic diametrele citite (metod calitativ) 5
Variabilele care influeneaz rezultatele: - compoziia mediului (coninut de cationi, timidin) pH (optim: 7,2-7,4) grosimea gelozei (standard: 4 mm) inoculul - 0,5 McFarland microcomprimate (valabilitate, coninut, condiii de pstrare) timpul, temperatura de incubare citirea diametrelor (lumin refractat/reflectat, colonii izolate, prezena unui v l, margini crenelate) Control de calitate - microcomprimatele
B. Metode cantitative
- permit stabilirea concentraiei minime inhibitorii (CMI) a unui antibiotic CMI: cantitatea cea mai mic de antibiotic care inhib complet multiplicarea unei bacterii Este recomandat testarea cantitativ n urmtoarele situa ii: cazuri clinice grave (septicemii, endocardite, meningite) rezultate incerte cu metoda difuzimetric / sensibilitate nedeterminat situaii speciale (de ex. testarea sensibilit ii pneumococului la penicilin printr-o metod cantitativ cnd diametrul zonei de inhibiie la oxacilin este sub 20 mm) CMI obinut se raporteaz la punctele de ruptur superior i inferior date de CLSI Exemplu: Puncte de ruptur CMI n ug/ml pentru ampicilin: Specii bacteriene Stafilococi Enterococi Enterobacterii Sensibil 0,25 8 8 16 Intermediar sensibil Rezistent 0,5 16 32
Metoda diluiilor (macro/microdiluie) - se realizeaz diluii succesive din antibioticul de testat n mediu de cultur lichid se adaug cantit i fixe din cultura bacterian cercetat incubare 18 ore 35C se urmrete apari ia culturii n mediul lichid 6
CMI: cea mai mic concentraie de antibiotic care nu permite creterea germenilor (cultur limpede)
CMI
concentraia maxim
Metoda diluiilor n agar - se realizeaz diluii succesive din antibioticul testat n geloz Mueller-Hinton se nsmneaz cultur bacterian n spoturi citire: CMI - concentraia cea mai mic care inhib complet creterea sau apare maximum o colonie E-teste - pe suprafaa mediului de cultur solid i nsmnat se aplic f ii din plastic impregnate cu antibiotic n concentraie crescnd - la un capt concentraia este minim, la cel lalt este maxim; gradaiile sunt notate pe fie; incubare apar zone de inhibi ie de form elipsoidal , n dreptul intersectrii cu f ia de plastic se citete CMI
CMI
Izolatul bacterian
Se efectuez antibiogram pentru fiecare izolat bacterian considerat agentul etiologic al unei infec ii. n cazul unor specii bacteriene nu exist rezisten in vivo recunoscut fa de anumite clase antibacteriene, de aceea testarea in vitro nu are sens. De exemplu: Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae sunt sensibile fa de penicilin Staphylococcus saprophyticus izolat din infec ii urinare este sensibil la toate antibioticele utilizate n tratamentul infec iilor urinare Metoda difuzimetric (metod calitativ, antibiograma obinuit) nu este adecvat testrii susceptibilit ii unor specii bacteriene, rezultatele obinute prin aceast metod fiind neinterpretabile. De exemplu: germeni anaerobi, streptococi grup viridans, bacili Gram pozitivi (Corynebacterium spp., Bacillus spp.), Campylobacter spp., pseudomonade (specii de pseudomonas altele dect P. aeruginosa)
2. SELECTAREA ANTIBIOTICELOR TESTATE Se testeaz seturi de antibiotice specifice pentru: diferite grupuri de germeni: Staphylococcus spp, Enterococcus spp, Streptococcus
spp.enterobacterii, Acinetobacter, Pseudomonas aeruginosa, etc. izolate provenite de la pacien i spitaliza i sau din ambulator n tabelele de mai jos antibioticele grupate n acela i box reprezint grupe de antibiotice
cu efecte similare i nu este nevoie de testarea fiecruia n parte, pentru c rezultatele testrii in vitro sunt similare iar eficacitatea clinic comparabil dac apare sau ntre dou antibiotice, nseamn c cele dou antibiotice au un spectru
de activitate identic, rezistena/sensibilitatea fa de acestea este ncruci at astfel din fiecare box se alege un singur antibiotic pentru testare iar rezultatele se pot
extrapola pentru restul antibioticelor din boxul respectiv Grupele de antibiotic testate/raportate Grup A: antibiotice testate i raportate de rutin, de prim intenie Grup B: antibiotice importante clinic, care se testeaz de rutin dar se rezultatele se
raporteaz selectiv. Se raporteaz dac o tulpina este rezistent fa de aceea i clas de antibiotic din grup A. o izolatul provine din produs patologic special (de ex. sensibilitatea fa de cefalosporine de generaia a III-a a izolatelor din LCR, etc) o infec ia este polimicrobian o infec ia se extinde la mai multe situsuri o alergie la antibiotice o eec terapeutic la tratament cu antibiotic grup A o raportare ctre SPCIN, scop epidemiologic Grup C: antibiotice suplimentare sau alternative, o tulpini nosocomiale o alergii o scop epidemiologic Grup U: antibiotice testate n infec ii urinare Grup O (other): antibiotice utilizabile n terapie dar care nu se testeaz de rutin
3. ALEGEREA ANTIBIOTICULUI CORESPUNZTOR PENTRU TRATAMENT PE BAZA REZULTATULUI ANTIBIOGRAMEI se alege antibioticul fa de care tulpina este sensibil, eventual intermediar sensibil n funcie de localizarea infec iei (antibioticul s realizeze concentraii adecvate la locul
infec iei) n funcie de farmacocinetica, farmacodinamica antibioticului, administrare, dozare n funcie de compliana pacientului n funcie de costuri
Atenie: Urmtoarele antibiotice nu se raporteaz n cazul izolatelor obinute din lichid cefalorahidian, deoarece pot fi ineficiente in vivo: antibiotice cu administrare per oral cefalosporine de gen I, II (excepie cefuroxime sodium) clindamicin macrolide tetracicline fluoroquinolone
10
Tabel 1. Antibiotice propuse spre testare difuzimetric de c tre CLSI (interpretare n text) pentru enterobacterii (E. coli, Klebsiella spp., Enterobacter spp., Serratia spp., Proteus spp., Salmonella spp., Shigella spp., Citrobacter spp., Yersinia spp. etc)1
Enterobacteriig
Grup A (testare, raportare primar) Grup B (testare primar, raportare selectiv) Ampicilin a Cefazolin a Cefalotin Gentamicin Amikacin Amoxicilinaclavulanat ampicilin-sulbactam Piperacilintazobactam Ticarcilina-clavulanat Cefuroxim Cefepime Cefotaxim sau g, h, i ceftriaxon g Ciprofloxacin g Levofloxacin Ertapenem Meropenem Imipenem Piperacilin Ticarcilin Trimethoprimg sulfamethoxazol Aztreonam Ceftazidim
g, h, i g, r
Germenii sensibili la tetraciclin sunt sensibile i la minociclin. Unele izolate rezistente sau
doxiciclin,
numai ampicilina, o quinolon i trimethoprim-sulfamethoxazol. Pentru izolatele extraintestinale de Salmonella se testeaz n plus cloramfenicolul i o cefalosporin de genera ia a III-a.
h
(beta-lactamaz cu spectru extins) sunt rezistente in vivo fa de peniciline, cefalosporine, aztreonam chiar dac arat sensibilitate in vitro.
r
ampicilin i amoxicilin
Chloramphenicol Tetraciclin
c b,g
Norfloxacin Ofloxacin
Nitrofurantoin
11
Tabel 2. Antibiotice propuse spre testare difuzimetric de c tre CLSI (interpretare n text) pentru Pseudomonas aeruginosa1
Pseudomonas aeruginosa
Grup A (testare, raportare primar) Ceftazidim Gentamicin Piperacilina Grup B (testare primar, raportare selectiv) Amikacin
j
Pseudomonadele (alte specii de Pseudomonas dect aeruginosa) pot fi testate numai prin metoda diluiilor (antibiograma cantitativ, determinarea concentraiei minime inhibitorii).
Cefepime
Ciprofloxacin Levofloxacin
Imipenem Meropenem Piperacilina/tazobactam Grup C (testare suplimental, raportare selectiv) Grup U (testare suplimentar pentru izolate urinare Norfloxacin Ofloxacin
12
Tabel 3. Antibiotice propuse spre testare difuzimetric de c tre CLSI (interpretare n text) pentru specii de stafilococ1 Staphylococcus spp.
Grup A (testare, raportare primar) Oxacilin a (cefoxitin) Penicilin a Clindamicin b Trimethoprimsulfamethoxazol (cotrimoxazol) Grup B (testare primar, raportare selectiv) Azithromicin b sau claritromicin b sau eritromicin b Linezolid Vancomicin Tetraciclin c Doxiciclina Grup C (testare suplimental, raportare selectiv) Chloramphenicol Gentamicin Rifampicin d Ciprofloxacin sau levofloxacin sau ofloxacin Moxifloxacin
b
stafilococi meticilino-sensibili, MSSA) sunt rezistente la penicilinele penicilinele nafcilin), penicilinazo-labile penicilinazo-stabile combinaii i sensibile fa de -
(meticilin,
oxacilin, de
-lactamin/inhibitori
lactamaz, cefeme active pe stafilococi, carbapeneme. rezisteni fa de oxacilin (=stafilococ meticilinorezistent, MRSA) sunt rezistente fa de toate lactaminele, combinaii de -lactamine/inhibitori de lactamaz. Nu se recomand testarea de rutin a sensibilit ii fa de alte peniciline, cefalosporine, combinaii de lactamine/inhibitori de -lactamaz, carbapeneme pentru c sensibilitatea/rezistena fa de acestea se prezice folosind penicilina i oxacilina (cefoxitina).
b
doxiciclin, minociclin. Unele izolate rezistente sau intermediar sensibile la tetraciclin pot fi sensibile la doxiciclin sau minociclin.
d
13
Tabel 4. Antibiotice propuse spre testare difuzimetric de c tre CLSI (interpretare n text) pentru specii de enterococi1
a
Enterococcus spp.
Grup A (testare, raportare primar) Grup B (testare primar, raportare selectiv) Grup C (testare suplimental, raportare selectiv) Penicilin e Ampicilin
Atenie:
cazul
enterococilor
cefalosporinele,
Germenii sensibili la tetraciclin sunt sensibile i la minociclin. Unele izolate rezistente sau
doxiciclin,
Gentamicin (screening rezisten de nivel nalt) Streptomicin (screening rezisten de nivel nalt) Ciprofloxacin
Rifampicina nu se utilizeaz n monoterapie! Nu se raporteaz pentru izolatele urinare Penicilina, ampicilina se utilizeaz pentru prezicerea
sensibilitat ii fa de ampicilin, amoxicilin, ampicilinsulbactam, amoxicilin-clavulanat, piperacilin, piperacilin-tazobactam pentru tulpinile neproductoare de lactamaz. La izolatele din hemoculturi, LCR este indicat
efectuarea testului de producere a -lactamazei. Se recomand combinaii de penicilin sau amoxicilin plus aminoglicozid pentru tratamentul infec iilor grave (de ex. endocardit).
f
Dac vancomicina se utilizeaz n tratamentul unei infec ii grave (de ex. endocardit) cauzat de
14
Tabel 5. Antibioticele propuse spre testare difuzimetric de c tre CLSI (interpretare n text) pentru Acinetobacter spp, Stenotrophomonas, Burkholderia cepacia
Burkholderia
a
Non-
Trimethoprimsulfamethoxazol (cotrimoxazol)
Enterobacteriaceae-le se testeaz numai prin metoda dilu iilor (antibiograma cantitativ, determinarea
Levofloxacin
concentraiei minime inhibitorii). P. aeruginosa, Acinetobacter spp, Burkholderia cepacia, Stenotrophomonas maltophilia pot fi testate difuzimetric numai pentru antibioticele ce figureaz n tabel
b
Pot fi indicate n
terapie i alte antibiotice, ns nu exist suficiente date pentru a putea stabili diametrele standard aplicabile
15
Tabel 6. Antibioticele propuse spre testare difuzimetric de c tre CLSI (interpretare n text) pentru Haemophilus spp. Haemophilus spp.a
Grup A (testare, raportare primar) Grup B (testare primar, raportare selectiv) Ampicilin a, d Trimethoprimsulfamethoxazol
a
Cefotaxim a sau ceftazidime sau ceftriaxon a Cefuroxime sodium (parenteral) Cloramfenicol Meropenem
a,e b a a
cefaclorul, cefpodoximul, cefuroxim- axetil, sunt antibiotice orale utilizabile n infec ii ale c ilor respiratorii cauzate de Haemophilus spp. Rezultatele testrii in vitro nu sunt ntotdeauna folosibile n managementul pacienilor. Testarea acestor antibiotice poate fi efectuat cu scop epidemiologic, de supraveghere.
c
Grup C
doxiciclin, minociclin . Unele izolate rezistente sau intermediar sensibile la tetraciclin pot fi sensibile la doxiciclin sau minociclin.
d
prezicerea activit ii amoxicilinei. Majoritatea izolatelor de Haemophilus influenzae rezistente la ampicilin produc lactamaze de tip TEM. Testul -lactamazei directe asigur detectarea rapid a rezistenei fa de ampicilin, amoxicilin.
e
bacterian, meningit cauzat de H. influenzae (tulpini productoare sau neproductoare de lactamaze) asociat cu bacteriemie
16
Tabel 7. Antibioticele propuse spre testare difuzimetric de c tre CLSI (interpretare n text) pentru Neisseria spp. Neisseria gonorrhoeae
Grup A (testare, raportare primar) Grup B (testare primar, raportare selectiv) Grup C Cefotaxime sau ceftriaxon
rezisten la penicilin. Tulpinile cu rezisten mediat cromosomial pot fi detectate numai utiliznd alte metode, ca de exemplu metoda difuzimetric sau determinarea concentraiei minime inhibitorii.
17
Tabel 8. Antibioticele propuse spre testare difuzimetric de c tre CLSI (interpretare n text) pentru Streptococcus pneumoniae
a
Streptococcus pneumoniae f
Grup A (testare, raportare primar) Eritromicin a, d Penicilin (cu disc de oxacilin) b Trimethoprimsulfamethoxazol Clindamicin Levofloxacin Moxifloxacin Ofloxacin Tetraciclin
c b
trebuie testate prin metod cantitativ (determinarea concentraiei minime inhibitorii) i raportate de rutin n cazul izolatelor din LCR. Aceste izolate trebuie testate i fa de vancomicin de asemenea preferabil prin metod cantitativ . Pentru izolatele obinute din alte produse poate fi utilizat testul screening cu oxacilin. n cazul n care diametrul zonei de inhibi ie este 20 mm, tulpina poate fi raportat sensibil fa de -lactamine. Dac diametrul este mai mic sau egal cu 19 mm, trebuie determinat concentraia minim inhibitorie a penicilinei, cefotaximului i ceftriaxonului.
c
Vancomicin Grup C
Cloramfenicol d
Nu se raporteaz pentru izolatele din urin. Rifampicina nu se folosete n monoterapie Amoxicilina, amoxicilina-acid claculanic, cefepim, cefotaxim, ceftriaxon, cefuroxim,
imipenemul i meropenemul pot fi utilizate n infec ii pneumococice. Testare sensibilit ii fa de acestea nu standardizat prin metoda difuzimetric, este necesar determinarea concentraiei minime inhibitorii ale acestor antibiotice.
18
Tabel 9. Antibioticele propuse spre testare difuzimetric de c tre CLSI (interpretare n text) pentru streptococi, altele dect Streptococcus pneumonia
Sensibilitatea,
rezistena
fa
de
claritromicin, discul de
fi determinate utiliznd
Nu se raporteaz pentru izolatele din urin. Pentru profilaxia intrapartum a streptococului de grup B
se recomand penicilina sau ampicilina. Femeilor cu risc sczut pentru reacie anafilactic se recomand cefazolin, celor cu risc crescut clindamicin sau eritromicin.
fa de
clindamicin i/sau eritromicin. n caz de alergie sever fa de penicilin (risc la reac ie anafilactic crescut), trebuie testat sensibilitatea fa de eritromicin, clindamicin.
d
cefotaxim sau
obinuit sterile (de ex. LCR) se testeaz prin metod cantitativ se determin concentraia minim inhibitorie.
e
cazul speciilor Streptococcus pyogenes i Streptococcus agalactiae, pentru c nu exist tulpini rezistente fa de aceste antibiotice. Criteriile interpretative (diametrele) sunt definite pentru cercetri farmaceutice, epidemiologie sau monitorizarea apari iei rezistenei. Orice tulpin identificat ca i rezistent trebuie trimis unui laborator de referin pentru confirmare.
19