Reactia de Imunofluorescenta (RIF)
Aplicatii DIAGNOSTIC RAPID IN
Infectiile herpetice Infectiile respiratorii (Gripa) Rabie
Reactia de Imunofluorescenta directa
test specific, reproductibil, ieftin de detectie a antigenelor virale
ID PP
Amprenta se va usca bine:
pp. amprentat direct pe lama
Imersie in acetona la 2-8C timp de 10 minute
si uscare.
Reactivii trebuie sa fie la [Link] Incubare cu anticorp fluorescent (30 min la 37 C) Spalare Citire la MO in lumina UV
Anticorpi monoclonali indreptati impotriva unor epitopi specifici de la nivelul anvelopei marcati cu FLUOROCROMI (fluoresceina sau rhodamina)
ID PP
Subfamilia
DIAGNOSTIC IN INFECTIA CU HERPESVIRUSURI Sediul latentei Herpesvirusuri umane
Herpes simplex 1
(HSV1-facial) -HH1
Alfaherpesvirinae
Neuroni
Herpes simplex 2
(HSV2-genital) - HH2
Virus varicelozosterian (VZV) - HH3
Betaherpesvirinae
senzitivi din rdcina posterioar a nervilor spinali i nucleii senzitivi ai nervilor cranieni
Virus
(CMV) -HHV5
citomegalic Limfocitul
T,
Virus Herpetic uman 6 - HHV6 Virus Herpetic uman 7- HHV7
monocite, organe solide (plamni, rinichi) +/- epiteliul glandelor salivare
Gamaherpesvirinae
Virus Epstein Barr
(EBV) - HHV4
HHV8 (asociat sarcomului Kaposi)
Limfocitul
endoteliu capilar
B,
Diagnostic in infectia cu ALPHAHERPESVIRUSURI orientare clinica leziuni veziculare
HERPES SIMPLEX 1 (HSV1) HERPES SIMPLEX 2 (HSV2)
VARICELO-ZOSTERIAN (VZV)
PRODUSE PATOLOGICE
Lichid vezicular Tampon conjunctival Tampoane vaginale, lavajul cervicovaginal, tampon uretral Recoltare recomandata in cazul leziunilor active (50% sanse de izolare virala)
Directii de diagnostic
Izolare virala dg de electie - ECP sincitial cu incluzii intranucleare corpii Cowdry A Diagnostic direct =
PCR- pt evidentierea AND viral Imunofluorescenta directa
Diagnostic indirect - valoarea testelor serologice
Sincitiu = celule balonizate, multinucleate Incluzii acidofile = corpii Cowdry A
RIF
PCR-metoda mai sensibila de confirmare a dg. de infectie cu HSV
util mai ales in: - detectia infectiei in excretia asimptomatica - evaluarea riscului transmiterii HSV in cupluri discordante - eficienta supresiei replicarii virale in terapia antivirala (encefalita herpetica)
Serologia singura nu este considerata ca dg de confirmare ci se alatura testelor de dg. direct.
Diagnostic in infectia cu BETAHERPESVIRUSURI CMV
Directii de diagnostic
Izolare virala pe culturi de fibroblaste diploide umane. Replicare lenta , ECP apare dupa 14-20 zile (citomegalie si incluzii intranucleare tipice in ochi de bufnita). Spin enhanced (shell vial) culture permite detectia rapida a antigenelor virale timpurii prin RIF. Pt detalii - vezi articol CMV neonatal de pe grup (pp: urina, lavaj bronhoalveolar; LCR, biopsii tisulare; sange pe anticoagulant) IF directa pentru detectia atigenelor pp65 din fractia limfocitara PCR pentru ADN CMV din sange pe anticoagulant, lichid amniotic ELISA de captura pentru anticorpi anti CMV IgM; ELISA cantitativa pentru evidentierea seroconversiei in anticorpi anti CMV IgG pe probe pereche de ser.
ECP CMV
Diagnostic serologic al infectiei cu CMV la gravide
PRIMA TESTARE
Diagnostic in infectia cu GAMAHERPESVIRUSURI EBV
EBV
ELISA si IF anticorpi anti capsidari IgM (anti VCA, anti EA) anticorpi anti nucleari (anti EBNA) (pp=ser) PCR pentru ADN EBV (pp=biopsie tisulara, snge integral)
Viroze ale tractului respirator
contagiozitate mare, transmitere aeriana, caracter pasager al imunitatii (IgA) Forma clinic Etiologie viral comun Etiologie viral rar
Guturai, Rhinofaringite
Rhino, coronavirusuri
Enterovirusuri (Cox)
Laringotraheobronsite
VRS, V. paragripale
Adeno-, v. rujeolic
Bronsite
V. gripale
V. paragripale
Pneumonii
V. gripale, SARS
V.
gripei aviare, Micoplasme
DIAGNOSTIC IN GRIPA
ORIENTARE CLINICA
FEBRA ASTENIE CEFALEE MIALGII TUSE NEPRODUCTIVA FARINGITA RINITA
DIAGNOSTICUL DE CERTITUDINE = diagnosticul virusologic
OMS-anual pe glob: 5-15% din totalul populatiei -infectii gripale, 3-5 milioane cazuri de infectii severe, 250.000 - 500.000 decese
Directii de diagnostic
IZOLARE OGE/ c.c. si demonstrarea prezentei virusului prin RHA; identificarea virusului prin RHAI
PRODUSE PATOLOGICE
DETECTIE RAPIDA
antigene RIF acid nucleic viral RT-PCR
EXSUDAT NASO-FARINGIAN ASPIRAT NASO-FARINGIAN ASPIRAT TRAHEOBRONSIC
DIAGNOSTIC SEROLOGIC - in studii epidemiologice
Izolare virala
diagnostic de electie
1. pe ou de gaina embrionat de 9-11 zile, inoculat intraamniotic sau intraalantoidian 2. culturi de celule epiteliale
VIRUSURILE GRIPALE SUNT NON-CITOPATOGENE DEMONSTRAREA PREZENTEI VIRUSULUI - REACTIA DE HEMAGLUTINARE
DEMONSTRAREA PREZENTEI VIRUSULUI REACTIA DE HEMAGLUTINARE
UHA
Etape: Ag. viral - dilutii binare suspensie de hematii
HA - hemaglutinina NA - neuraminidaza
Se incubeaza la temperatura camerei - 60 minute helicoidala Nucleocapsida
ARNss Martorul reactiei contine suspensie hematii anvelopa Rol RHA: Demonstrarea prezentei virusului hemaglutinant transcriptaza Titrarea antigenului hemaglutinant inaintea reactiei de hemagutino-inhibare
Matrice Identificarea virusului - REACTIA DE HEMAGLUTINO-INHIBARE
RIF
Detection of respiratory syncytial virus antigens in cells from nasopharyngeal secretions. Indirect immunofluorescence [M. Battaglia, L. Balducci. 1980 - Rapid diagnosis of respiratory syncytial virus infections by immunofluorescence on cell smears from nasopharyngeal secretions. Bollettino dell'Istituto Sieroterapico Milanese 59:121-125].
DIAGNOSTICUL INFECTIEI CU V. RABIC Encefalita rabica
Produse patologice
Saliva
Amprente dermice, corneene,
Biopsie cerebrala LCR
Directii de diagnostic
1. IZOLARE VIRALA Culturi celulare Animal de laborator 2. DETECTIA DIRECTA PCR IF 3. SEROLOGIE
ECP V RABICCorpii Babes Negri incluzii intracitoplasmatice intraneuronal
