Reactia de Imunofluorescenta (RIF)

Aplicatii DIAGNOSTIC RAPID IN

Infectiile herpetice Infectiile respiratorii (Gripa) Rabie

Reactia de Imunofluorescenta directa

test specific, reproductibil, ieftin de detectie a antigenelor virale

ID PP

Amprenta se va usca bine:

pp. amprentat direct pe lama

Imersie in acetona la 2-8C timp de 10 minute

si uscare.

Reactivii trebuie sa fie la temp.camerei Incubare cu anticorp fluorescent (30 min la 37 C) Spalare Citire la MO in lumina UV
Anticorpi monoclonali indreptati impotriva unor epitopi specifici de la nivelul anvelopei marcati cu FLUOROCROMI (fluoresceina sau rhodamina)

ID PP

Subfamilia

DIAGNOSTIC IN INFECTIA CU HERPESVIRUSURI Sediul latentei Herpesvirusuri umane

Herpes simplex 1
(HSV1-facial) -HH1

Alfaherpesvirinae

Neuroni

Herpes simplex 2
(HSV2-genital) - HH2

Virus varicelozosterian (VZV) - HH3

Betaherpesvirinae

senzitivi din rdcina posterioar a nervilor spinali i nucleii senzitivi ai nervilor cranieni

Virus
(CMV) -HHV5

citomegalic Limfocitul

T,

Virus Herpetic uman 6 - HHV6 Virus Herpetic uman 7- HHV7

monocite, organe solide (plamni, rinichi) +/- epiteliul glandelor salivare

Gamaherpesvirinae

Virus Epstein Barr

(EBV) - HHV4
HHV8 (asociat sarcomului Kaposi)

Limfocitul
endoteliu capilar

B,

Diagnostic in infectia cu ALPHAHERPESVIRUSURI orientare clinica leziuni veziculare

HERPES SIMPLEX 1 (HSV1) HERPES SIMPLEX 2 (HSV2)
VARICELO-ZOSTERIAN (VZV)

PRODUSE PATOLOGICE
Lichid vezicular Tampon conjunctival Tampoane vaginale, lavajul cervicovaginal, tampon uretral Recoltare recomandata in cazul leziunilor active (50% sanse de izolare virala)

Directii de diagnostic
Izolare virala dg de electie - ECP sincitial cu incluzii intranucleare corpii Cowdry A Diagnostic direct =
PCR- pt evidentierea AND viral Imunofluorescenta directa

Diagnostic indirect - valoarea testelor serologice

Sincitiu = celule balonizate, multinucleate Incluzii acidofile = corpii Cowdry A

RIF

PCR-metoda mai sensibila de confirmare a dg. de infectie cu HSV

util mai ales in: - detectia infectiei in excretia asimptomatica - evaluarea riscului transmiterii HSV in cupluri discordante - eficienta supresiei replicarii virale in terapia antivirala (encefalita herpetica)

Serologia singura nu este considerata ca dg de confirmare ci se alatura testelor de dg. direct.

Diagnostic in infectia cu BETAHERPESVIRUSURI CMV

Directii de diagnostic
Izolare virala pe culturi de fibroblaste diploide umane. Replicare lenta , ECP apare dupa 14-20 zile (citomegalie si incluzii intranucleare tipice in ochi de bufnita). Spin enhanced (shell vial) culture permite detectia rapida a antigenelor virale timpurii prin RIF. Pt detalii - vezi articol CMV neonatal de pe grup (pp: urina, lavaj bronhoalveolar; LCR, biopsii tisulare; sange pe anticoagulant) IF directa pentru detectia atigenelor pp65 din fractia limfocitara PCR pentru ADN CMV din sange pe anticoagulant, lichid amniotic ELISA de captura pentru anticorpi anti CMV IgM; ELISA cantitativa pentru evidentierea seroconversiei in anticorpi anti CMV IgG pe probe pereche de ser.

ECP CMV

Diagnostic serologic al infectiei cu CMV la gravide

PRIMA TESTARE

Diagnostic in infectia cu GAMAHERPESVIRUSURI EBV

EBV
ELISA si IF anticorpi anti capsidari IgM (anti VCA, anti EA) anticorpi anti nucleari (anti EBNA) (pp=ser) PCR pentru ADN EBV (pp=biopsie tisulara, snge integral)

Viroze ale tractului respirator

contagiozitate mare, transmitere aeriana, caracter pasager al imunitatii (IgA) Forma clinic Etiologie viral comun Etiologie viral rar

Guturai, Rhinofaringite

Rhino, coronavirusuri

Enterovirusuri (Cox)

Laringotraheobronsite

VRS, V. paragripale

Adeno-, v. rujeolic

Bronsite

V. gripale

V. paragripale

Pneumonii

V. gripale, SARS

V.

gripei aviare, Micoplasme

DIAGNOSTIC IN GRIPA
ORIENTARE CLINICA
FEBRA ASTENIE CEFALEE MIALGII TUSE NEPRODUCTIVA FARINGITA RINITA

DIAGNOSTICUL DE CERTITUDINE = diagnosticul virusologic

OMS-anual pe glob: 5-15% din totalul populatiei -infectii gripale, 3-5 milioane cazuri de infectii severe, 250.000 - 500.000 decese

Directii de diagnostic
IZOLARE OGE/ c.c. si demonstrarea prezentei virusului prin RHA; identificarea virusului prin RHAI
PRODUSE PATOLOGICE

DETECTIE RAPIDA
antigene RIF acid nucleic viral RT-PCR

EXSUDAT NASO-FARINGIAN ASPIRAT NASO-FARINGIAN ASPIRAT TRAHEOBRONSIC

DIAGNOSTIC SEROLOGIC - in studii epidemiologice

Izolare virala
diagnostic de electie

1. pe ou de gaina embrionat de 9-11 zile, inoculat intraamniotic sau intraalantoidian 2. culturi de celule epiteliale

VIRUSURILE GRIPALE SUNT NON-CITOPATOGENE DEMONSTRAREA PREZENTEI VIRUSULUI - REACTIA DE HEMAGLUTINARE

DEMONSTRAREA PREZENTEI VIRUSULUI REACTIA DE HEMAGLUTINARE

UHA

Etape: Ag. viral - dilutii binare suspensie de hematii

HA - hemaglutinina NA - neuraminidaza

Se incubeaza la temperatura camerei - 60 minute helicoidala Nucleocapsida

ARNss Martorul reactiei contine suspensie hematii anvelopa Rol RHA: Demonstrarea prezentei virusului hemaglutinant transcriptaza Titrarea antigenului hemaglutinant inaintea reactiei de hemagutino-inhibare
Matrice Identificarea virusului - REACTIA DE HEMAGLUTINO-INHIBARE

RIF

Detection of respiratory syncytial virus antigens in cells from nasopharyngeal secretions. Indirect immunofluorescence [M. Battaglia, L. Balducci. 1980 - Rapid diagnosis of respiratory syncytial virus infections by immunofluorescence on cell smears from nasopharyngeal secretions. Bollettino dell'Istituto Sieroterapico Milanese 59:121-125].

DIAGNOSTICUL INFECTIEI CU V. RABIC Encefalita rabica

Produse patologice
Saliva
Amprente dermice, corneene,

Biopsie cerebrala LCR

Directii de diagnostic
1. IZOLARE VIRALA Culturi celulare Animal de laborator 2. DETECTIA DIRECTA PCR IF 3. SEROLOGIE

ECP V RABICCorpii Babes Negri incluzii intracitoplasmatice intraneuronal