Curs V. Aciunea factorilor fIzico-chimici asupra bacteriilor 1. Importana problemei 2. Terminologie 3.

Factori fizici: Temperatura Umiditatea Ultrasunetele Radiaiile ionizante i neionizante Filtrarea 4. Factori chimiei: Antiseptice - Dezinfectante 1. Importana problemei

Microbiologia sistemic se ocup cu studiul microorganismelor i al interrelaiilor lor cu alte organisme vii, din perspectiv ecologic. n acest context, este important cunoaterea factorilor fizico-chimici care influeneaz procesele vitale ale bacteriilor, pentru ca acetia s poat fi utilizai n aa fel nct microorganismele s fie utilizate n beneficiul speciei umane sau s fie inhibate, atunci cnd multimplicarea lor amenin sntatea /sau viaa gazdei umane. Principalele domenii n care este utilizat aciunea factorilor fizici i chimiei asupra bacteriilor sunt: Controlul creterii bacteriene, important n medicin i n majoritatea activitilor umane Cultivarea i conservarea bacteriilor; microbiologie medical, industrial, a mediului etc. Interes epidemiologic, pentru a controla modalitatea de supravieuire i transmitere a microorganismelor care pot produce boli la om 2. Terminologie Controlul creterii reprezint prevenirea dezvoltrii microorganismelor, care poate fi realizat prin distrugerea microorganismelor sau prin inhibarea creterii bacteriene. Sufixul - cid se refer la un agent care omoar microorganismul, iar sufixul - static, la un agent care inhib cresterea microorganismului , fr a-l omor. Ex. bactericid, fungistatic, larvicid etc. Sterilizarea reprezint omorrea sau ndeprtarea microorganismelor patogene sau nepatogene, forme vegetative sau spori, de pe o suprafa sau dintr-un mediu lichid sau solid. Atributul de septic acordat unui obiect semnific faptul c acesta este contaminat cu microbi sau infectat, n timp ce acela de aseptic c obiectul este lipsit de microbi patogeni sau nepatogeni.

Prin asepsie nelegem un ansamblu de metode prin care evitm contaminarea mediului ambiant sau meninem "sterilitatea" esuturilor, mediilor de cultur, medicamentelor injectabile etc. Dezinfecia este distrugerea formelor vegetative microbiene, numai uneori i sporii, din medii sau de pe suprafee. Aceasta poate fi realizat cu ajutorul dezinfectantelor sau al unor factori fizici. Antisepsia este ndepartarea sau distrugerea formelor vegetative microbiene de pe tegumente, mucoase sau din plgi i se realizeaza cu ajutorul antisepticelor.

3. Factori fizici: a. ndeprtarea mecanic a murdriei i resturilor organice: n Ghidul Organizaiei Mondiale a Sntii intitulat "Prevenirea infeciilor de spital" (Prevention of Hospital acquired infections 2nd Edition WHO/CDS/CSRlEPHl2002.12), cap. 5.3.1., se arat: "Curatenia ordinara inlatura 90% din microorganismele prezente in "murdaria vizibila". n capitolul V - Prevenirea infeciilor nosocomiale, se arat de asemenea ct de important este splarea minilor pentru prevenirea acestor infecii Curenia i splatul minilor acioneaz n mare parte mecanic, prin nlturarea fizic a murdriei i resturilor organice, i numai n mod secundar prin dezinfecie i/sau antiseptizare. Fig.1 - Splarea minilor - Etape principale

b. Temperatura Temperatura letal pentru un anumit microorganisme variaz dup: specie, timpul de aciune, natura mediului n care se gsete bacteria: pH, potential redox, substane nutritive etc. 2

Sterilizarea se poate realiza utiliznd temperaturi ridicate sub form de cldur uscat, sau de cldur umed. Cldura uscata acioneaz prin oxidarea sau carbonizarea structurilor bacteriene. Exemple de utilizare a cldurii uscate n laboratorul de microbiologie, pentru realizarea sterilizrii sunt: nclzirea la rou a ansei bacteriene; Sterilizarea cu aer cald, cu ajutorul pu~inelului (etuv, cuptor cu aer cald). Temperatura necesar este de 180 e, timp de 60 de minute. Se sterilizeaz n acest fel materiale care suport temperaturi ridicate, cum sunt: sticla, porelanul, metalul, pulberile inerte i termostabile Fig. 2. Pupinelul (etuv, cuptor cu a~r cald)

Cldura umed acioneaz prin coagularea proteinelor i degradarea enzimelor. Pentru reducerea numrului de bacterii, se pot utiliza o serie de procedee de expunere la temperatur umed, care ns NU STERILIZEAZ: Fierbere timp de 30 minute - distruge forme vegetative de bacterii, fungi, virusuri, dar nu i spori; eficiena fierberii este crescut dac se adaug carbonat de sodiu n concentraie de 1-2%. Pasteurizare - procedeu constnd n nclzirea la temperaturi moderate, pentru reducerea numrului de microorganisme. Se utilizeaz, de exemplu n cazul laptelui sau berii aplicnd temperaturi i timpi de expunere care s omoare potenialii patogeni: stafilococi, streptococi, Brucella abortus, Mycobacterium tuberculosis. Metoda uzual const n expunere la 56-65 o e, timp de 30 minute. Pasteurizarea medie se face la 65 - 75 o e timp de 15 minute, iar cea nalt la 85-90oe, timp de 2-3 minute. Pentru sterilizare se pot utiliza: Tyndalizarea, care este un procedeu constnd n ncalzirea n mai multe zile succesive la temperaturi subletale: 56-100 e, timp de 30-60 minute,

3 pn la 8 zile succesiv), care utilizat pentru un numr suficient de zile POATE STERILIZA, avnd ca principiu trecerea formelor sporale m forme vegetative, prin nclzire repetat, cu posibilitatea de distrugere a acestor forme vegetative la urmtoarea nclzire. Sterilizarea n autoclav (autoclavarea), echipament cu ajutorul cruia se poate expune materialul la presiuni de abur i temperature ridicate: Autoclavarea obinuit se face la 1210 C, timp de 15-20 minute, corespunztor cu presiunea de 1210 C Pentru zaharuri, care se pot caramelize, avnd efecte inhibitorii asupra bacteriilor, se utilizeaz temperatura de 1150 C timp de 30 minute, corespunztor presiunii de 0,5 atmosfere Pentru material puternic contaminat i pentru material care este utilizat pentru producia de preparate administrabile la om, n care nu trebuie s avem nici o form de microorganime, inclusiv prioni, se recomand o temperatur de 1340 C, timp de 2 ore, corespunztor la 2 atmosfere Este obligatorie realizarea controlului sterilizrii, prin metode fizice, chimice i biologice: Metode fizice - msurarea temperaturii, presiunii, cu ajutorul termometrului, manometrului, cu realizarea i pstrarea nregistrrilor Metode chimice - introducerea n autoclav, n timpul sterilizrii, a unor substane care i schimb consistena, culoarea etc., odat cu atingerea temperaturii dorite; un exemplu este floarea de sulf, care se topete, alte substane care i schimb culoarea pot fi impregnate pe benzi sau buline care se lipesc pe pachetele cu materiale i sunt pstrate ca martori ai procesului Metode biologice - utilizeaz suspensii cu spori bacterieni, care trebuie s fie distrui; este singura metod care atest i durata atingerii temperaturii dorite: Bacillus stearothermophilus (autoclav) Bacillus subtilis (etuva)

Fig. 3 - Autoclav

Temperatura joas este utilizat pentru reducerea multiplicrii bacteriene i/sau conservarea bacteriilor: Refrigerarea la O - 800 C nu este bactericida, dar majoritatea microorganismelor nu se multiplica sau se multiplica foarte puin la temperatura de 00 C, Refrigerarea este util pentru prevenirea multiplicrii n probe biologice; bacteriile psichrofile sau prochrotrofe sunt responsabile de alterarea alimentelor refrigerate - Ex. Lysteria monocytogenes nghearea acioneaz diferit dup durata procesului s temperature de ngheare: Congelarea: o la temperaturi superioare celei de -21. .. 300 C - se obin efecte bactericide, prin formare de cristale de gheat i hiperconcentrarea salin, cu denaturarea proteinelor; congelare brusc, la _700 C - se obine conservarea bacteriilor prin solidificarea n mas a apei, fr aparitia cristalelor de ghea Liofilizarea - este congelarea brusc, concomitent cu o desicarea (deshidratare n vid), in mediu protector; se poate conserva pe timp indelungat

Fig. 5. Congelatoare

Fig. 6. Liofilizator

material frozen ...--as .shell in flask