COLAGENE

Datorit biocompatibilitii i biodegradabilitii excelente, structurii bine definite, caracteristicilor biologice i modului n care interacioneaz cu organismul, colagenul reprezint unul dintre cele mai utilizate biomateriale. Extras sub form de soluie apoas sau gel, colagenul fibrilar tip I poate fi modelat n diferite forme: dispozitive medicale, implanturi artificiale, suporturi pentru cedarea medicamentelor i schelete (scaffold) pentru regenerare tisular, cu rol important n prezent n medicin. Colagenul este principala protein structural din cele mai multe esuturi conjunctive moi, laxe, semirigide i rigide (piele, oase, tendon, membrane bazale etc.), care asigur n principal integritate structural esuturilor. Biosinteza sa este un proces complex, avnd loc n dou etape: intra- i extracelular: Aceasta ncepe n fibroblaste i se termin cu agregarea fibrilelor n fibre componente ale matricei extracelulare (MEC). Polimer natural, colagenul este constituit din 20 de aminoacizi, aranjai n secvene caracteristice, ce formeaz o structur conformaional foarte complex, organizat pe patru nivele, numite structuri primar, secundar, teriar i cuaternar. Pn n prezent au fost descoperite 29 tipuri de colagen. Peste 90% din colagen n organism, cu toate acestea, este de tip I Boli legate de colagen apar cel mai frecvent la defecte genetice sau deficienelor nutriionale care afecteaz biosintezei, adunare, modificarea postranslational, secreia sau alte procese implicate n producia de colagen normal. Molecula de colagen tip I (tropocolagen) este un heterotrimer alctuit din trei lanuri polipeptidice (dou identice 1 i unul diferit 2) rsucite mpreun de la dreapta spre stnga n jurul unei axe comune, formnd helixul triplu. Formarea acestuia necesit prezena Gly n fiecare a treia poziie a lanului, aceasta fiind singurul aminoacid ce poate intra n poziiile interne ale helixului triplu datorit volumului mic, determinat de singurul su atom de hidrogen. Formarea helixului triplu este favorizat, de asemenea, de prezena Pro i Hyp n poziiile X i Y care, datorit rigiditii inelelor pirolidinice, impun restricii privind rotaia lanurilor. Conformaia de helix triplu este stabilizat prin legturi de hidrogen ntre lanurile constituente, cu participarea grupelor hidroxil ale Hyp i a moleculelor de ap, precum i prin alte tipuri de fore: Van der Waals, hidrofobe, covalente. Sursa principal de colagen fibrilar tip I este pielea animal, esut conjunctiv dens. Pentru a fi utilizat ca biomaterial, colagenul extras trebuie s aib structur ct mai apropiat de cea nativ, de helix triplu, caracteristic moleculei de colagen Extragerea colagenului se face prin diferite tehnologii, cea mai veche fiind fierberea esuturilor n ap, care ns denatureaz colagenul i conduce la binecunoscuta gelatin. Totui, pentru utilizarea ca biomaterial, colagenul trebuie obinut n stare nedenaturat. Tehnologiile de extragere a colagenului se mpart n dou grupe: n stare denaturat TECD cnd cca 90% din molecule sunt n stare denaturat; n stare nedenaturat TECN cnd cca 70% din molecule sunt n stare nedenaturat (cu pstrarea structurii elicoidale).

Tehnologiile de extracie a colagenului n stare nedenaturat permit obinerea colagenului sub form de suspensii de fibre past de colagen, gel fibrilar i soluii coloidale. Colagenul nedenaturat se poate izola i purifica prin dou tehnologii, n funcie de nivelul structural dorit: n stare molecular i fibrilar. Acestea permit extragerea colagenului tip I din piele de bovin n mediu apos cu pstrarea structurii triplu helicoidale a moleculelor, respectiv microfibrilelor i fibrilelor. Cele mai utilizate extracte colagenice care stau la baza obinerii biomaterialelor sunt gelurile i soluiile de colagen tip I. Gelul este definit ca un sistem cu proprieti intermediare ntre ale unui lichid i ale unui solid. Astfel, gel poate fi un fluid puin viscos, dar i un material foarte viscos. La pH-ul izoelectric gelul de colagen separ fibrile i fibre, devenind dispersie. Efectele pozitive ale colagenului asupra regenerrii tisulare i interaciunea sa cu celulele sunt principalele cauze ale interesului mrit n ceea ce privete tratamentele locale ale esuturilor afectate sau formarea de esuturi noi ca, de exemplu, oase, piele sau nervi, utiliznd scaffold-uri pe baz de colagen. Cercetri recente au ca subiect dezvoltarea de sisteme de cedare a unor medicamente, factori de cretere, proteine, hormoni, enzime etc. Majoritatea dispozitivelor utilizate n cedarea local a medicamentelor au suport polimeric, vehiculele ideale pentru cedare fiind polimerii biodegradabili. Colagenul este un suport adecvat pentru cedarea medicamentelor, oferind i avantajul de a fi biomaterial natural, cu proprieti hemostatice i de vindecare a rnilor. Sistemele de cedare a medicamentelor cu aplicaie local se mpart n transdermice i topice. Termenul sistem de cedare transdermic include, n general, toate formulrile medicamentoase aplicabile local destinate cedrii substanei active n circulaia sanguin. Sistemele de cedare topic sunt utilizate pentru a produce efecte localizate la suprafaa pielii sau mucoasei prin cedarea medicamentului cu aciune farmacologic (aciune topic). Moleculele substanei active penetreaz stratul cornos, difuznd ctre esutul int din vecintatea locului de aplicare, producnd astfel efectul terapeutic. Cedarea localizat a agenilor antimicrobieni eficieni i netoxici poate reduce contaminarea i mbunti vindecarea rnii. Din acest motiv cercetarea n vederea obinerii unor noi sisteme de cedare a medicamentelor este n continu dezvoltare. Cedarea controlat a medicamentelor reprezint o nou cale de tratare a esuturilor afectate. Termenul se refer la capacitatea sistemului de a menine o perioad lung de timp concentraia dorit a medicamentului n snge n cazul sistemelor transdermice sau n esutul afectat n cazul sistemelor topice, cedarea producndu-se cu vitez controlat. Studii care au utilizat colagenul ca suport au artat c att absorbia in vivo i biodegradabilitatea, ct i cedarea medicamentelor sunt controlate de reticularea chimic sau fizic a colagenului, efectuat pentru a controla efectul de cedare. Att cedarea substanei active din matrici/hidrogeluri ct i absorbia i distribuia ulterioar sunt procese complexe a cror analiz trebuie efectuat riguros n vederea proiectrii raionale a formulrilor, dezvoltrii testelor privind calitatea acestora, controlului produciei sau stabilitii.

. Biomaterialele sub form de geluri i matrici au fost testate din urmtoarele puncte de vedere: cedarea medicamentelor, degradare enzimatic, control microbiologic i biocompatibilitate cu celule endoteliale. Metodele prin care s-a fcut o prim caracterizare a gelurilor de colagen au fost: substan uscat, cenu, azot total, substane grase i pH. Biomaterialele pe baz de colagen sunt din ce n ce mai apreciate de specialitii din medicin i stomatologie. Dei se bucur de o atenie deosebit n ultimul timp, suporturile de colagen pentru cedarea medicamentelor sunt nc n stadiul de cercetare sau/i experimentare clinic. Realizarea biomaterialelor pe baz de colagen sub form de suporturi pentru cedare local de medicamente n cantitatea i cu viteza dorit are ca motivaie utilizarea acestora n tratamentul diferitelor afeciuni ale pielii (rni, arsuri, infecii provocate de diferite bacterii) i/sau esuturi moi (boli parodontale, ulceraii ale mucoaselor, extracii dentare). Colagenul, pe lng funcia de suport de cedare, acioneaz ca pansament biologic pentru regenerarea esuturilor. Pentru rezolvarea problemelor medicale care apar foarte frecvent s -au utilizat ca medicamente hiclatul de doxiciclin i acidul tanic, acestea avnd numeroase aplicaii terapeutice. Sistemele de cedare obinute, sub form de geluri i matrici de colagen, au ncorporate substanele antimicrobiene doxiciclin i/sau acid tanic. Pn n prezent niciuna dintre substane nu s-a utilizat n sisteme de cedare pe baz de colagen fibrilar tip I, pentru obinerea acestora folosindu-se doar gelatin, hidrolizate de colagen sau diferii polimeri. S-a stabilit c gelurile care au pH acid sunt mai viscoase dect cele cu pH slab bazic corespunztoare la toate concentraiile de colagen, din cauza sarcinii nete pozitive mai mari a colagenului n mediu acid. n urma studiilor reologice i de cedare a medicamentului, pentru obinerea de matrici ct mai omogene este recomandabil concentraia de 1,2% colagen i 0,2% doxiciclin, iar reticularea se poate efectua cu 0 0,30% AG sau 0 20% AT. S-au preparat, de asemenea, i matrici care conin numai acid tanic, n care acesta joac att rol de agent de reticulare ct i de medicament, att la pH 3,8 ct i 7,4. Matricile de colagen s-au obinut prin liofilizarea gelurilor. Pentru meninerea stabilitii n timpul utilizrii i mrirea timpului de cedare unele geluri s-au reticulat n prealabil cu aldehid glutaric sau acid tanic. Reticularea chimic este esenial pentru asigurarea stabilitii matricilor n contact cu mediul fiziologic i este responsabil de modificarea proprietilor fizico-chimice i morfologice, cedarea medicamentului i proprietile biologice ale acestora. Ca o concluzie final, pentru tratarea diferitelor afeciuni ale esuturilor moi care necesit substane antimicrobiene pot fi recomandate sisteme de cedare ce conin doxiciclin reticulate cu 0,25% aldehid glutaric sau cu 10% acid tanic. Aceste sisteme sunt biocompatibile, nu produc efect citotoxic, nu dezvolt microorganisme, sunt stabile din punct de vedere termic i se degradeaz n timp n contact cu esutul, aducnd pH-ul n jurul valorii 6,5. Alt avantaj const n faptul c structura colagenului ne fiind denaturat, matricile sunt recunoscute mai uor de organism n procesul de refacere a esutului