Celulele: - sunt unitile structurale ale lumii vii, - se afl permanent n relaie de echilibru dinamic cu mediul nconjurtor, - transform elementele din mediu n elemente proprii: o prin procese consumatoare de energie, - au ca principale proprieti: creterea, dezvoltarea, autoreproducerea.
Din punct de vedere structural exist dou tipuri fundamentale de celule: procariotele i eucariotele.
Procariotele (celulele fr nucleu propriu-zis) sunt: - formele celulare de via cele mai simple i primitive, - reprezentate n principal de bacterii i alge, - celule mici, cu lungimea de 1-5 m, - formate din puine elemente structurale: o membrana celular alctuit din: membrana intern ce trimite spre interior mici expansiuni, membrana extern cu rol protector, la exterior poate prezenta un perete celular, o un nucleoid reprezentat de un lan de ADN fr histone asociate, ce nu prezint nveli nuclear pentru a-l separa de ceilali constitueni celulari, o numeroi ribozomi liberi n citoplasm.
Procariotele au capacitate de nmulire deosebit i se adapteaz foarte uor la condiiile de mediu. Procariotele sunt studiate n medicin doar ca ageni patogeni.
Eucariotele: - sunt celule mai mari, cu diametrul peste 10 m, - sunt reprezentate de protozoare (ex. amoeba), celulele plantelor, ani-malelor, omului, - au o organizare complex, cu trei componente principale: o membrana (suprafaa celular), o citoplasma, la nivelul creia exist numeroase organite delimitate de endomembrane, o nucleul distinct, al crui material genetic, cu histone asociate este delimitat de nveluul nuclear.
Organismul uman este alctuit din 10 12 10 15 celule eucariote grupate n numeroase (cteva sute) tipuri celulare, difereniate pentru a-i realiza funcia cu o eficien mare. Ele pot prezenta o singur funcie specific, dar frecvent au capacitatea de a realiza dou sau mai multe funcii: - celulele glandelor mucoase au rol n sinteza i secreia unor substane mucoase, - celulele musculare au ca funcie contractilitatea,
2 - celulele senzoriale, transform stimulii fizici i chimici n impulsuri nervoase, - polimorfonuclearele neutrofilele i macrofagele, digestia intracelular, - celulele epiteliale din intestin au rol n absorbie, dar sintetizeaz i enzime digestive (ex. dizaharidaze, peptidaze).
Celulele difereniate, de diferite tipuri (hepatocit, neuron, enterocit, nefrocit), la aceeai specie prezint diferene mari, fiind uor de recunoscut. ns celule de acelai tip, care aparin unor specii diferite (ex. hepatocitul de obolan i cel de om), prezint diferene mici.
FORMA CELULELOR
Celulelor eucariote au forme foarte diferite, determinate de: - factori genetici, - caracteristicile fizice i chimice ale mediului n care se afl, - raporturile intercelulare, - funciile pe care le ndeplinesc.
Celulele aflate n mediu lichid (ex. celulele sanguine) sunt de obicei de form rotund sau ovalar, dar forma lor poate suferi modificri sub influena factorilor: - interni sau intracelulari, - externi sau extracelulari. Astfel, leucocitele din snge, sferice sau ovale n plasma sanguin, i modific mult forma cnd strbat peretele vascular prin procesul de diapedez. La nivelul esuturilor i organelor, celulele realizeaz contacte strnse ntre ele, iar forma lor devine neregulat datorit compresiunilor reciproce.
DIMENSIUNILE CELULELOR
La microscopul optic pot fi examinate structuri ale cror dimensiuni sunt de ordinul micrometrilor. La microscopul electronic ns pot fi studiate i cele de ordinul nanometrilor sau chiar al angstromilor. De obicei este apreciat diametrul celulelor, iar suprafaa sau volumul lor pot fi calculate. Diametrul majoritii celulelor din organism este cuprins ntre 10-30 m: - cele mai mici celule la mamifere sunt considerate celulele granulare (neuronii granulari) din cerebel, cu diametrul de 3-4 m, - cele mai mari sunt ovocitele care au aproximativ 200 m, - unele celule nervoase pot depi 100 m. Nu exist o corelaie stns ntre mrimea celulei i mrimea corporal a individului din aceeai specie dect numai pentru celulele foarte specializate cum sunt celulele nervoase. Lund n considerare vrsta, se constat c celulele tinere au un diametru mai mare dect cele mbtrnite.
3 Volumul celulelor variaz ntre 200-1500 m 3 . Acelai tip celular are un volum comparabil n seria animal.
COMPOZIIA CHIMIC A CELULEI EUCARIOTE
Elemente chimice care intr n alctuirea celulelor eucariote sunt: - macroelemente (95%): oxigenul, carbonul, hidrogenul i azotul, - microelemente reprezentate de Ca, P, K, S, Na, Fe, Mg i Cl, - oligoelemente: o foarte importante pentru activitatea celular chiar dac sunt prezente n cantiti mici, o se cunosc pn n prezent peste 30 oligoelemente ce intr n structura organismului animal, Cr, Co, Cu, I, Se, Vn i Zn au rol esenial n activitatea celular.
Moleculele organice care intr n structura unor constitueni de baz ai celulei sunt: proteinele, lipidele, glucidele, acizii nucleici ADN-ul i ARN-ul. Proteinele sunt reprezentate de: - proteinele structurale, cu rol central n realizarea structurii celulei, - enzime, care au rolul de a cataliza reaciile intra i extracelulare. Glucidele sunt prezente sub form de glicogen, glicoproteine sau gli-colipide. Ele intr n alctuirea membranei celulare i a unor organite. Lipidele formeaz complexe lipoproteice care intr n structura cito-membranelor, pot fi stocate ca rezerve i servesc drept substrat energetic. Acizii nucleici dein informaia genetic.
Apa intr n alctuirea celulei n proporie de 60-90%, dar dei este in-dispensabil activitii celulare, ea nu constituie substratul acesteia.
DURATA VIEII CELULELOR
Durata vieii celulelor difer n funcie de tipul celular. Astfel, celulele epitelului intestinal triesc 48-72 ore, dup care sunt nlocuite, iar pe de alt parte celulele nervoase i cele musculare cardiace au durata de via egal cu cea a individului. Celulele epiteliale sunt elemente labile, cu o durat de via relativ scurt. Celulele uzate sunt nlocuite n permanen cu celule tinere provenite din diviziunea celulelor epiteliale din stratul bazal. Intensitatea procesului de rennoire celular a diferitelor epitelii este variabil. Astfel epiteliul intes-tinului subire se rennoiete la 4-6 zile, epiteliul de suprafa al stomacului la 3-4 zile, iar cel glandular anual. Studiul caracterelor morfologice ale celulelor descuamate st la baza citologiei exfoliative care permite depistarea precoce a unor afeciuni neoplazice (ex. studiul frotiului vaginal permite depistarea pre-coce a cancerului de col uterin). Cheratinocitele au durata de via de aproxi-mativ 28 de zile, dup care se descuameaz.
4 Problema duratei n timp se pune i pentru componentele structurale ale celulei. Astfel, ADN (cromatina nuclear) persist tot timpul vieii celulei, dar alte uniti structurale sunt n continu schimbare.
ORGANIZAREA MORFOLOGIC A CELULEI EUCARIOTE
Structura celulei este diferit n raport cu: - fazele ciclului celular, - vrsta celulei (celulele tinere au talie mai mic i structur mai simpl; cele mature au structur complex), - fazele funcionale ale celulei. Astfel, o celul adipoas cnd se ncarc cu grsime are un aspect, iar cnd pierde grsimea, alt aspect. Toate celulele eucariote au n componena lor trei elemente structurale de baz: membrana sau suprafaa celular, citoplasma i nucleul. Membrana celular este foarte subire i de aceea nu poate fi observat la microscopul optic. Citoplasma apare nestructurat la microscopul optic, cu aspect gra-nular sau filamentos. La nivelul citoplasmei exist organitele celulare: - ribozomii, cu rol n sinteza proteinelor, - reticulul endoplasmic, cu rol de sintez i de sistem microcirculator intracitoplasmatic, - aparatul Golgi, cu rol n procesul de secreie celular, - mitocondriile, productoare de energie, - lizozomii, cu rol n digestia intracelular, - peroxizomii, cu rol n procesele de detoxifiere de la nivel celular, - centriolul, ce iniiaz diviziunea celular. Pe lng organite, n citoplasm pot exista i formaiuni cu un caracter tranzitor cum ar fi incluziunile celulare glucidice, lipidice, proteice, pigmen-tare. Nucleul este structura celular care se evideniaz cel mai uor la mi-croscopul optic. n interiorul nucleului se gsete cromatina i nucleolul, n-corporate n matricea nuclear (suc nuclear, carioplasm, cariolimf).
5 MEMBRANA CELULAR
. Concepia actual privind structura membranei celulare a fost formu-lat pe baza informaiilor furnizate de teoriile precedente (modelul paucimo-lecular, teoria "unitii de membran", teoria mozaicului fluid), completate cu date noi oferite n primul rnd de microscopia electronic. S-a stabilit clar c structura fundamental a membranelor celulare este reprezentat de un bistrat lipidic continuu, situat la periferia celulei, cu grosimea a dou molecule lipidice, n care sunt interpuse molecule proteice integrale i periferice.
La nivelul celulelor exist trei tipuri de membrane: - membrana plasmatic, care delimiteaz celula i intervine n: metabolismul celulei, schimburile dintre celule i mediul extracelular, realizarea adezivitii celulare i a dispozitivelor joncionale, imunitate, - endomembrane care delimiteaz organitele (nucleul, reticulul endo-plasmic, complexul Golgi, mitocondriile, lizozomii, peroxizomii), - membranele speciale, cum este teaca de mielin.
n compozia chimic a membranelor celulare intr 30% ap, 70% sub-stane organice i cantiti foarte mici de substane anorganice. Din masa us-cat a membranelor, peste 90% o reprezint lipidele i proteinele (35-40% lipide, 55-60% proteine), iar restul sunt glucide (1- 9%). Teaca de mielin conine 80% lipide i 20% proteine, n timp ce mem-brana intern a mitocondriei este alctuit n proporie de 75% din proteine. n structura membranei celulare: - lipidele sunt localizate n totalitate n plasmalem, - glucidele sunt prezente doar n structura glicocalixului, pe frontul E (extern) al plasmalemei, - proteinele se gsesc sub form de proteine globulare n plasmalem i ca proteine fibrilare (ce formeaz reele fine) n glicocalix i mai ales n citoscheletul membranei, - apa este localizat n glicocalix, feele hidrofile ale plasmalemei i n citoscheletul membranei; n toate zonele mbibate cu ap vor ptrunde ionii anorganici, substane cu rol funcional foarte important.
Suprafaa celular cuprinde: - plasmalema, partea central a membranei celulare, cu grosimea de 7,5 nm, observat prima dat la microscopul electronic, constituit din: o stratul bimolecular lipidic o dou straturi de proteine repartizate asimetric de-o parte i de alta a bistratului lipidic,
6 - glicocalixul (glicolema), o structur glicoproteic cu grosimea de 50 nm ce acoper faa extern (frontul E) a plasmalemei, - cortexul celular cu grosimea de 5-9 nm, situat pe faa intern (frontul P) al plasmalemei.
PLASMALEMA
Plasmalema: - este componenta principal a membranei celulare, - are o structur lipoproteic trilaminat cu grosimea de 7,5 nm: aspectul trilaminat este conferit de cele dou foie ntunecate ntre care se afl o foi clar, - are permeabilitate selectiv dat de distribuia lipidelor i proteinelor.
Lipidele, localizate n totalitate n bistratul lipidic sunt reprezentate de: - fosfolipide: fosfatidilcolin, fosfatidiletanolamin, fosfatidilserin i sfingomielin, - colesterol, mai abundent n stratul extern, mpreun cu acizii grai saturai, - glicolipide, care predomin n stratul intern, mpreun cu acizii grai nesaturai.
Moleculele lipidice din plasmalem au forma de cui, cu: - un cap, numit grup polar, hidrofil (solubil n ap), purttor de sarcini electrice, - dou cozi, segmentul apolar, hidrofob (solubil doar n lipide), format din acizi grai.
Avnd la un capt gruprile hidrofile, iar la cellalt pe cele hidrofobe, moleculele lipidice sunt molecule bimodale. Lipidele pot forma n soluii apoase micelii sau agregate moleculare bi-stratificate la care partea hidrofil poate forma cu apa legturi de hidrogen (sau electrostatice), iar partea hidrofob este orientat astfel nct s nu fie n contact cu mediul apos. n laborator se pot crea bistraturi lipidice artificiale, sub forma unor vezicule sferice, cu diametrul de 25 nm-1 m, care poart nu-mele de liposomi. Datorit acestor proprieti lipidele din membran se dispun n bistrat cu o grosime de aproximativ 4 nm: - cu partea hidrofil (grupul polar) nspre exteriorul bistratului lipidic, - cu partea hidrofob nspre interiorul bistratului. astfel, zona central a bistratului lipidic este hidrofob, iar cele dou zone periferice hidrofile.
Datorit acestei distribuii a lipidelor, permeabilitatea plasmalemei pentru diferite substane (molecule) este inegal: - gazele i solvenii organici trec foarte uor, - glucidele, aminoacizii, acizii grai trec lent, - monozaharidele, electroliii trec foarte lent, - proteinele, polizaharidele i acizii nucleici nu trec.
7 Bistratul lipidic: - prezint o asimetrie dat de compoziia chimic diferit a mono-straturilor, - este fluid, iar moleculele sale pot efectua trei tipuri de micri: o de condensare, o de deplasare lateral, o "flip-flop", adic sar dintr-un strat n altul.
Proteinele: - constituie cea de a doua component de baz a plasmalemei, - sunt de dou tipuri: o extrinseci sau periferice, o intrinseci sau integrale.
Proteinele extrinseci se gsesc att pe faa plasmatic (P) ct i pe cea extern (E), fiind mai numeroase ns pe faa P. Cele de pe faa plasmatic se mai numesc i proteine membranare interne, iar cele de pe faa extern, proteine membranare de suprafa.
Proteinele intrinseci se extind n toat grosimea membranei, motiv pentru care se mai numesc i proteine transmembranare sau proteine integrale. Aceste proteine pot delimita canale transmembranare prin care o serie de molecule hidrosolubile pot difuza ntre lichidul intracelular i cel extracelular. Alte proteine structurale au funcia de crui, sunt numite proteine carrier i sunt implicate n transportul activ al unor substane.
Interaciunile dintre moleculele lipidice i cele proteice din plas-malem sunt de joas energie, de aceea moleculele proteice pot fi extrase re-lativ uor.
GLICOCALIXUL
Glicocalixul sau glicolema: - se afla pe faa extern a plasmalemei, - apare ca o structur fibrilar lax la microscopul electronic, - are grosimea de aproximativ 50 nm: o nu este la fel de dezvoltat n cazul tuturor celulelor, o o celul poate prezenta zone cu grosime diferit a glicolemei, chiar zone n care aceasta lipsete: n cazul celulelor epiteliale, glicocalixul acoper polul apical, pe cnd la polul bazal lipsete, aici aflndu-se membrana ba-zal, - prezint dou componente: o intern mai puin dens, cu grosimea de 20 nm i care poart nu-mele de nveli de suprafa, o extern, ceva mai dens, cu grosimea de 30 nm, numit lamina extern.
Din punct de vedere chimic, glicocalixul este alctuit n principal din glicoproteine. Structura sa prezint o estur delicat i lax de lanuri pro-teice pe care sunt ancorate
8 reziduuri glucidice. Partea proteic este repre-zentat de proteinele extrinseci ale plasmalemei, care se prelungesc pe lun-gimi diferite n glicocalix. Partea glucidic este reprezentat de fragmente oligozaharidice formate n principal din galactoz i cantiti mici de manoz, fructoz, glucoz, etc. ntre glicocalix i matricea extracelular nu se poate trasa o linie clar de demarcaie deoarece ele se ntreptrund, iar n compoziia matricei extra-celulare se gsesc molecule glucidice asociate cu proteine, formnd proteo-glicani i glicoproteine.
Glicocalixul intervine n: - controlul schimbului ionic transmembranar, - facilitarea recunoaterii i interaciunii intercelulare, - aderena intercelular, acionnd ca un ciment intercelular, - ataarea celulelor la componentele matricei extracelulare, - legarea i ataarea antigenelor i enzimelor la suprafaa celular.
CORTEXUL CELULAR
Cortexul celular: - este componenta cea mai subire a suprafeei celulare, are grosimea de aproximativ 5-9 nm, - are aspect de reea: o la microscopul electronic apare ca o reea anastomotic de micro-filamente proteice (actin) orientate neregulat, o nodurile reelei sunt reprezentate de proteine globulare, legturile dintre diferitele tipuri de proteine sunt modulate prin procese de fosforilare i prin intermediul gelsolinei, o protein reglatoare calciu- dependent, - se ancoreaz de plasmalem prin intermediul captului intern al pro-teinelor extrinseci, iar pe de alt parte este n legtur cu citoscheletul, - confer membranei elasticitate i rezisten: o elasticitatea este dat de dispoziia microfilamentelor proteice sub form de reea, o rezistena este asigurat de proteinele globulare ce se afl la nivelul nodurilor reelei proteice, - intervine i n mecanismul de recepie-transducie care mediaz trans-ferul prin membrana celular a unor semnale ajunse la celul din ex-terior.
RECEPTORII DE MEMBRAN
Receptorii sunt proteine specializate dispuse n structura membranei celulare, cu ajutorul crora celula intercepteaz mesaje sau semnale sosite la nivelul ei pe cale umoral sau nervoas. Aceste mesaje sunt reprezentate de molecule-semnal numite liganzi care ajunse la receptorii celulari se leag specific de acetia, determinnd un rspuns din partea celulei.
9 Liganzii sau mesagerii de ordinul I sunt produi de celule specializate i acioneaz specific asupra unor celule "int". n funcie de originea substanelor cu care receptorii sunt capabili s se cupleze, deosebim: - receptori pentru substane endogene, - receptori pentru substane exogene. Receptorii pentru substane endogene sunt: - receptorii pentru neurotransmitori, aezai pe faa extern a membra-nei postsinaptice a neuronilor sau a celulelor musculare: ex. receptorii pentru acetilcolin, noradrenalin, serotonin, dopa-min, histamin, acid -aminobutiric, acid glutamic, encefalin, - receptorii pentru hormone: ex. insulin, glucagon, adrenalin, - receptorii pentru antigene endogene, de la suprafaa celulelor implicate n rspunsul imun: ex. receptorii de la suprafaa limfocitelor T, codificai genetic pentru recunoaterea celulelor proprii organismului (self), - receptori pentru anticorpi: ex. pentru IgE de la suprafaa leucocitelor bazofile i a masto-citelor, receptorii pentru F C a IgG de pe suprafaa fagocitelor, - receptorii pentru complement, pe suprafaa membranei celulelor fago-citare, ex. cei pentru componenta C3 a sistemului complementului, - receptorii pentru glicoproteine.
Receptorii pentru substane exogene sunt: - receptorii pentru virusuri, recunos tipuri diferite de virusuri, - receptorii pentru antigene, sunt aezai pe suprafaa celulelor imuno-competente i sunt asemntori imunoglobulinelor, - receptorii pentru toxine microbiene, situai la suprafaa celulelor din diferite esuturi, - receptorii pentru substane medicamentoase, - receptori pentru lectine (fitohemaglutinina, concanavalina-A). .
Mecanismul de aciune al receptorilor Ligandul sosit la nivelul membranei unei celule int se va cupla cu re-ceptorul lui specific, pentru o anumit perioad de timp, fr s ptrund n celul. El constituie pentru celul un mesager i n funcie de mesajul pe care l conine, va declana o serie de evenimente la nivelul acesteia. Evenimentele complexe ce au ca finalitate modificri ale metabolismu-lui celulelor int, se deruleaz n trei etape i anume: - recunoaterea i ataarea liganzilor la receptori, - transferul semnalului prin membrana celular, - iniierea unui rspuns biochimic n interiorul celulei.
10 Recunoaterea i ataarea liganzilor la receptori au ca rezultat formarea complexelor ligand-receptor, care induc la nivelul membranelor celulei dou tipuri de modificri: - structurale, ce se traduc n general prin agregarea receptorilor de la suprafaa celulei n zone restrnse numite "plaje", atunci cnd "plajele" sunt mai dezvoltate, poart denumirea de "cupol", - funcionale, dependente de natura ligandului: o modificri de permeabilitate ale membranei, determinate n special de liganzii din categoria neurotransmitorilor (ex. acetilcolina), o inducerea endocitozei, cnd ligandul este vehiculat pe cale umo-ral, o ptrunderea de ioni din mediul extracelular, o activarea unor enzime din membrana celular, dac liganzii sunt hormoni, neurotransmitori sau diverse droguri.
MOLECULELE DE ADEZIUNE
Moleculele de adeziune sunt proteinele exprimate la suprafaa mem-branelor celulare, capabile s asigure o adeziune selectiv (specific) ntre dou celule sau ntre o celul i matricea extracelular (membrana bazal sau esutul de susinere). Selectivitatea unei molecule de adeziune este dat de capacitatea sa de a interaciona cu un numr limitat de molecule numite liganzi. Moleculele de adeziune joac dou posibile roluri n organism: - structural, prin asigurarea coeziunii esuturilor, - funcional tranzitor (limitat doar la perioada inducerii procesului) dnd posibilitatea unei celule de a efectua o funcie biologic determinat. Proprietatea fundamental a proteinelor de aderen este de a pune n relaie mediile intracelular i extracelular. Astfel, recunoaterea ligandului extracelular de ctre molecula de adeziune antreneaz producerea de infor-maii destinate restului celulei i susceptibilitatea de a modifica structura sau funciile acesteia. Aceste proprieti ale moleculelor de aderen se realizeaz datorit sistemelor transmembranare de transducie, sisteme membranare specializate n transformarea unei informaii extracelulare ntr-un mesaj intracelular recu-noscut de ctre celule. Influena moleculelor de aderen asupra mediului intracelular este a-sigurat prin relaia lor cu citoscheletul, ca n cazul moleculelor de aderen implicate n aderena structural sau prin capacitatea lor de a produce mesa-geri intracelulari, cum se ntmpl n cazul numeroaselor proteine implicate n aderena funcional. Moleculele de aderen sunt grupate n cinci familii principale: cade-rinele, imunoglobulinele, integrinele, selectinele, moleculele CD44.
Caderinele: - sunt o familie format din numeroase molecule, principalele sunt: o caderina-E, prezent n toate epiteliile, o caderina-N, caracteristic esuturilor nervos i muscular, o caderina-P prezent n mezoteliu i epiderm, - sunt glicoproteine monomerice ce asegura prin:
11 o domeniul extracelular, aderena intercelular dependent de calciu, o domeniul intracitoplasmatic asociere la microfilamentele de actin ale citoscheletului.
Imunoglobulinele: - sunt caracterizate de prezena unuia sau mai multor domenii de struc-tur molecular caracteristic (legturi antiparalele stabilizate prin puni de sulf), - cuprind numeroase molecule cu funcii foarte diverse:. o unele joac un rol major n rspunsul imun: imunoglobuline, moleculele HLA, receptori antigenici ai limfocitelor T, o altele sunt molecule de aderen care se pot grupa n: familia N-CAM (neural cell adhesion molecule), care joac un rol important n embriogenez i care sunt exprimate n esutul nervos la adult, familia antigenelor carcinoembrionare, proteinele de aderen endotelial reprezentate de I-CAM1 (intercellular adhesion molecule 1), I-CAM2 (intercellular adhesion molecule 2) i V-CAM (vascular cell adhesion molecule), proteinele de aderen leucocitar CD2.
Integrinele sunt caracterizate printr-o structur heterodimeric i pre-zint dou lanuri . Natura lanurilor permite clasificarea integrinelor n trei subfamilii principale, cu distribuie celular i cu funcii particulare. Integrinele 1 i 3 sunt principalele proteine implicate n adeziunea celulelor la matricea extracelular. Integrinele 2 sunt caracteristice leucocitelor i sunt implicate n interaciunile funcionale cu endoteliul. Prin domeniul lor intracitoplasmatic integrinele sunt asociate microfilamentelor de actin ale citoscheletului.
Selectinele sunt: - glicoproteine monomerice transmembranare, - reprezentate de trei molecule: o E-selectina i P-selectina exprimate la nivelul celulelor endoteliale, o L-selectina, specific unei subpopulaii de limfocite. - implicate n aderena leucocitelor circulante la celulele endoteliale.
Moleculele CD44 sunt glicoproteine de suprafa reprezentate de 10 molecule isomorfe implicate n aderena intercelular i aderena celulelor la matricea extracelular.
12 JONCIUNILE CELULARE
Pentru meninerea integritii esuturilor ce sunt supuse unor solicitri mecanice (ex. esuturile epiteliale) este necesar solidarizarea celulelor care le constituie. n acest scop, celulele sunt prevzute cu dispozitive care le asigur ataarea unele de altele, n strat compact. Aceste dispozitive, care asigur solidarizarea celulelor ntre ele sunt jonciunile celulare. Dup gradul lor de complexitate, jonciunile celulare se mpart n: - jonciuni simple; - jonciuni speciale.
Jonciunile simple: - sunt legaturi foarte slabe, - se realizeaz atunci cnd ntre membranele a dou celule alturate exist o distan de cel mult 30 nm: rmne un spaiu intercelular ngust care nefiind nchis va per-mite circulaia lichidului intercelular, - sunt asigurate de fore fizice care in de atracia molecular sau de legturi chimice realizate de anumitre substane prezente n glico-calixul celulelor: o fore van der Waals, o puni de hidrogen,
Jonciunile speciale sunt dispozitive de legtur care asigur o ataare a celulelor mult mai puternic n comparaie cu jonciunile simple. n raport cu dispoziia pe suprafaa celulei ntlnim dou tipuri de jonciuni speciale: - zonulae, formaiuni n form de panglic sau band, care nconjoar celula ca un bru, avnd o dispunere continu, - maculae, formaiuni circumscrise, n form de buton, pat, spot, cu dis-punere discontinu. Dup modul de ataare al celulelor ntre ele, jonciunile speciale se m-part n: - jonciuni ocludente, impermeabile sau "tight junction", care leag celu-lele ntre ele i oblitereaz spaiul intercellular, - jonciuni de ancorare, care leag celulele ntre ele, asigurndu-le rezis-ten la aciunea unor factori mecanici, - jonciuni de comunicare, gap sau nexus, care asigur trecerea unor mo-lecule dintr-o celul n alta.
Jonciunile ocludente (zonulae occludens): - sunt dispuse pe marginile laterale, n treimea apical a celulelor epiteliale ce delimiteaz lumenul unor organe, formeaz un cordon circumferenial complet, ca un bru, n jurul fiecrei celule, - se realizeaz prin fuzionarea unor proteine (ocludine, claudine) prezente n membranele plasmatice ale celulelor alturate, punctele lor de sudur sunt separate de mici spaii interstiiale.
13 se pot ntinde pe o distan de 600 nm n care alterneaz por-iuni de membran fuzionate, cu poriuni nefuzionate. n zona de jonciune spaiul intercelular este nchis pentru a nu permite trecerea substanelor. Jonciunile ocludente se realizeaz ntre celulele care alctuiesc epitelii impermeabile. Astfel, n cazul epiteliului din intestinul subire, jonciunile o-cludente sunt dispuse nspre polul apical al enterocitelor, mpiedicnd p-trunderea prin spaiul intercelular a coninutului din lumenul intestinal, ab-sorbia se va realiza selectiv, transcelular.
Jonciunile de ancorare asigur stabilitatea mecanic a grupurilor de celule. De-a lungul suprafeei interne a membranelor celulare exist un cortex celular (ce face parte din citoschelet) dispus sub form de reea, alctuit din filamente citoscheletale de actin, legate ntre ele prin intermediul unei pro-teine numit filamin. Aceast reea se leag de reeaua similar a celulei nvecinate prin intermediul unor proteine intercelulare de legtur. Jonciunile de ancorare sunt de mai multe tipuri: - jonciuni aderente (zonulae adherens); - desmozomi (maculae adherens); - hemidesmozomi.
Jonciuni aderente (zonulae adherens): - sunt situate n treimea apical a celulelor, sub jonciunile ocludente membranele celulelor nvecinate sunt foarte apropiate (15-20 nm), - se dispun sub form de benzi de filamente de actin ce nconjoar circumferenial celula la interior, n citoplasm, solidarizarea reelelor filamentelor de actin din celulele nvecinate se realizeaz prin intermediul unei proteine de ade-rare numit caderin. Astfel de jonciuni sunt prezente i la nivelul discurilor intercalare (care sunt complexe joncionale) existente ntre fibrele musculare cardiace.
Desmozomii (maculae adherens): - sunt jonciuni puternice n form de buton, - se formeaz ntre membranele celulelor aflate la 25-30 nm, n spaiul intercelular exist o substan proteic granular, cu o condensare central de natur glucidic, - prezint dou discuri dense n citoplasma celulelor adiacente: constituite din proteine numite desmoplakine i placoglobine, la ele sunt conectate reelele de filamente intermediare de che-ratin numite tonofilamente, ce aparin citoscheletului - prezint proteine transmembranare desmogleine i desmocoline, cu rol de "linkeri", care leag discurile din dou celule nvecinate
Desmozomii solidarizeaz ntre ele, celulele epiteliiilor stratificate (epiderm, epiteliul mucoasei bucale, esofagiene), mpotriva forelor de frecare ce acioneaz asupra lor, iar la nivelul miocardului menin ataate capetele celulelor musculare pentru a nu se ndeprta n timpul contraciei.
14
Hemidesmozomii sunt jonciuni de ancorare sub forma unor jumti de desmozomi, asigur contactul regiunii bazale a celulelor epiteliale cu mem-brana (lamina) bazal. Prezint n structura lor o plac citoplasmatic de care se ancoreaz reeaua de tonofilamente de la polul bazal al celulelor epiteliale, iar legarea sa de membrana bazal se realizeaz prin intermediul unor gli-coproteine transmembranare. Celulele supuse aciunii unor factori mecanici, cum sunt celulele epi-teliale ale epidermului sau cele ale colului uterin, preuint numeroi desmo-zomi i hemidesmozomi.
Jonciunile de comunicare (nexus sau gap junctions): - conecteaz membranele laterale ale celulelor, spaiul intermembranat este ngust de 2-3 nm, - asigur transferul direct de substane (ioni, ATP) de la o celul la alta, - sunt realizate de nite formaiuni numite conexoni, strbat att membranele celulelor adiacente, ct i spaiul dintre ele, asigurnd comunicarea ntre citoplasmele celor dou ce-lule, fiecare conexon este alctuit din ase subuniti proteice n form de bastonae, dispuse sub form de inel, delimitnd la mijloc un canal de comunicare, cu diametrul reglabil, ntre 0,4-2 nm.
Complexele joncionale sunt asocieri de dou sau mai multe tipuri de jonciuni ce se stabilesc ntre celulele alturate. La nivelul epiteliilor simple cubice i simple prismatice, aceste com-plexe joncionale sunt dispuse de regul n treimea apical a membranelor celulelor nvecinate i ele cuprind jonciuni ocludente (zonulae occludens), sub care se dispun jonciuni aderente (zonulae adherens), urmeaz apoi desmo-zomii (maculae adherens), iar apoi jonciuni de comunicare (gap junctions). ntre celulele musculare cardiace adiacente apar discurile intercalare, numite i strii Eberth, care sunt de asemenea complexe joncionale. Discurile intercalare sunt constituite din fascia adherens, desmozomi i jonciuni gap. ntotdeauna ntre celule se stabilesc acele jonciuni sau complexe jonc-ionale care sunt necesare celulelor respective pentru ndeplinirea funciilor lor specifice.
15 SCHIMBURILE PRIN MEMBRANA CELULAR
ntre celul i mediul extracelular exist relaii permanente concretizate prin comunicri i schimburi de substane, care sunt posibile datorit perme-abilitii selective a membranei celulare. Membrana celular este constituit dintr-un bistrat lipidic i molecule proteice care plutesc n aceste lipide. Multe dintre moleculele proteice pene-treaz bistratul lipidic. Permeabilitatea selectiv a membranei celulare se da-toreaz permeabilitii reduse a bistratului lipidic (care nu este miscibil cu fluidele intra sau extracelulare), dar care datorit proteinelor ataate, ce ntre-rup continuitatea bistratului lipidic este mrit i fcut selectiv. Multe molecule proteice penetrante sunt proteine de transport.
Proteinele de transport transmembranar Exist mai multe tipuri de proteine de transport transmembranar: - ATP-azele, care funcioneaz ca pompe de transport a ionilor prin membrane, mpotriva gradientului de concentraie chimic sau a gra-dientului de potenial electric, utiliznd energia rezultat prin hidroliza ATP, - proteinele canal, pasaje care atunci cnd sunt deschise ca rspuns la semnale specifice, permit trecerea prin membrane a moleculelor de ap sau a unor tipuri specifice de ioni, - proteinele cru (carrier), care spre deosebire de proteinele canal, leag moleculele transportate, dup care prin modificarea lor con-formaional vor elibera molecula legat pe partea opus a membranei. Att proteinele canal ct i proteinele cru prezint o mare selec-tivitate privind tipul (sau tipurile) de molecule sau ioni crora le permit traversarea membranei celulare.
Permeabilitatea selectiv, o proprietate fundamental a membranei ce-lulare, permite: - intrarea n celule a unor molecule eseniale (glucoz, lipide, amino-acizi), - meninerea n celul n concentraii constante a metaboliilor interme-diari i a electroliilor, - eliminarea din celule a: o substanelor active metabolic (enzime, hormoni), o deeurilor rezultate n urma proceselor metabolice, - crearea unui mediu adecvat desfurrii activitii enzimatice, prin meninerea pH-ului i a compoziiei ionice, - reglarea volumului celular ca urmare a relaiilor osmotice dintre celul i mediul extracelular, - crearea gradienilor ionici necesari excitabilitii celulelor nervoase i musculare. Organitele celulare prezint i ele un mediu intern avnd caracteristici diferite de cele ale citosolului nconjurtor, meninerea acestor diferene da-torndu-se endomembranelor. Prin acest mecanism se asigur celulei un control permanent al compo-ziiei mediului ei intern, cu un nalt grad de specificitate. Schimbul de substane prin membrana celular implic mai multe mecanisme de transport.
16
Diferitele tipuri de transport iau n considerare: - dimensiunile moleculelor transportate: ionii i moleculele mici traverseaz structurile membranei celulare prin difuziune sau cu ajutorul proteinelor membranare, macromoleculele i particulele sunt transportate prin vezicule delimitate de membrane, - consumul de energie: transportul pasiv, prin care moleculele sunt transportate n sensul gradientului de concentraie sau a gradientului electrochimic, se realizeaz fr consum de energie, transportul activ, mpotriva gradientelor de concentraie sau electrochimic, se realizeaz cu consum de energie rezultat prin hidroliza ATP.
TRANSPORTUL PASIV
Transportul pasiv: - asigur traversarea membranei celulare de ctre unele molecule mici, n sensul gradientului de concentraie sau al gradientului electrochimic n cazul ionilor, - se realizeaz fr consum de energie, deci nu este dependent de me-tabolismul celular, - se poate realiza prin dou modaliti: o difuziunea simpl, o difuziunea facilitat.
Difuziunea simpl - se desfoar lent, respectnd legile difuziunii i ale osmozei, - se realizeaz diferit n funcie de natura chimic a moleculelor. o moleculele mici neionizate dar liposolubile vor strbate stratul bimolecular lipidic, proporional cu gradul lor de liposolubilitate oxigenul, azotul, dioxidul de carbon i alcoolii, au o mare liposolubilitate. - moleculele de ap trec cu ajutorul unor proteine transmembranare numite aquaporine, - moleculele hidrosolubile, dac sunt suficient de mici, trec prin protei-nele canal.
Proteinele canal: - sunt proteine transmembranare cu rol n difuziunea simpl, - prezint canale cu dou extremiti orientate una extracelular, iar cealalt intracelular, aceast organizare structural permite moleculelor s treac prin difuziune simpl, n mod direct prin aceste canale, de pe o parte a membranei, pe partea opus.
Caracteristicile proteinelor canal sunt urmtoarele: - au permeabilitate selectiv pentru anumite molecule, - canalele pot fi nchise sau deschise prin pori.
17
Permeabilitatea selectiv a proteinelor canal, adic selectivitatea pentru transportul unuia sau mai multor ioni sau molecule se datoreaz unor caracteristici ale canalului: diametrul, forma i tipul ncrcturii electrice de-a lungul suprafeei sale interne. O importan deosebit o prezint proteinele canal specializate n transportul selectiv al unor ioni, proteinele canal de ioni: - proteinele canal de sodiu permit trecerea selectiv a ionilor de sodiu (Na + ): o au diametrul canalelor de aprox. 0,3-0,5 nm, o au suprafaa intern ncrcat negativ i astfel exercit o puternic for de atracie, - proteinele canal cu selectivitate pentru transportul ionilor de potasiu (K + ): o au diametrul canalelor de aproximativ 0,3 nm, o suprafaa lor intern nu este ncrcat negativ, - proteinele canal pentru ionul de calciu (Ca 2+ ) i pentru ionul de clor (Cl).
Porile proteinelor canal: - sunt extensii n form de poart ale moleculelor acestor proteine, - se nchid i se deschid lor prin modificarea conformaiei proteinelor canal: o poarta proteinelor canal de sodiu, se nchide i se deschide la exteriorul membranei celulare, o poarta proteinelor canal pentru ionii de potasiu, se nchide i se deschide la interiorul membranei celulare.
n funcie de mecanismul de nchidere i deschidere a porilor exist: - pori comandate de voltaj, conformaia lor molecular este dependent de valoarea po-tenialului de membran, - pori comandate chimic (de liganzi), modificarea lor conformaional se produce n urma legrii unei molecule semnal de proteina canal.
n cazul difuziunii simple, sensul de deplasare al moleculelor prin membran este dinspre faa cu concentraie mai mare, nspre cea cu concentraie mai mic, pn la egalizarea concentraiilor. Cu ct diferena de concentraie a moleculelor existente de o parte i de cealalt a membranei este mai mare, cu att rata lor de difuziune este mai ridicat. Rata de difuziune este mult influenat de mrimea moleculelor. Astfel, moleculele mai mici de 0,8 Kdal trec uor prin membran, pentru ca rata de difuziune s scad direct proporional cu creterea dimensiunii moleculelor.
Difuziunea facilitat: - este un tip de transport transmembranar pasiv prin care unele substane greu solubile n lipide i cu mas molecular relativ mare (ex. glucoz, aminoacizi, purine, glicerol), strbat membrana celular mult mai repede (de 100.000 ori) dect prin difuziune simpl, - se realizeaz cu ajutorul unor molecule proteice transmembranare cu rol de "crui":
18 preiau substanele de pe o fa a membranei, le trec prin membran, apoi le elibereaz pe faa opus.
Mecanismul prin care se realizeaz acest tip de transport transmembra-nar s-ar putea explica prin existena la nivelul canalului proteinei cru, a unui situs de legare pentru molecula care urmeaz a fi transportat. Aceasta va ptrunde n canal i va fi legat la nivelul situsului. Proteina cru va suferi o modificare conformaional, iar canalul su se va deschide pe partea opus a membranei celulare. Pentru c fora de legare a moleculei transportate de situs este slab, aceasta va fi eliberat pe partea opus a membranei. Prin difuziunea facilitat sunt transportate molecule, cum sunt glucoza i unii aminoacizi. Molecula cru pentru glucoz poate transporta i alte monozaharide cu structur asemntoare, cum este galactoza. Transportul prin difuziune facilitat se efectueaz n sensul gra-dientului de concentraie, rata de difuziune crete pn atinge un maximum (Vmax.), fiind limitat de rata modificrilor conformaionale a moleculelor cru.
TRANSPORTUL ACTIV
Transportul activ asigur trecerea foartee rapid prin membran a unor molecule i ioni, mpotriva gradientului de concentraie sau al celui electro-chimic. Acest tip de transport se realizeaz cu consum de energie. Modul de furnizarea a energiei utilizate a condus la descrierea a dou tipuri de transport activ: - transport activ propriu-zis sau transportul activ primar, n care este utilizat energia rezultat din hidroliza ATP; - cotransportul sau transportul activ secundar, n care energia necesar transportului unor ioni sau molecule mpotriva gradientului este fur-nizat de transportul pasiv al altor ioni sau molecule.
TRANSPORTUL ACTIV PROPRIU-ZIS
Pentru meninerea gradientului ionic intracelular este necesar trecerea ionilor prin membrane, de cele mai multe ori mpotriva gradientului de con-centraie sau al celui electrochimic. Acest tip de transport este realizat de unele protein-enzime din plasmalem, numite pompe ionice, care au capacitatea de a cupla transportul mpotriva gradientului de concentraie sau al celui electrochimic, cu hidroliza ATP. Exist pompele ionice care transport un singur ion (ex. pompa de Ca 2+ , pompa de Mg 2+ ) sau concomitent doi ioni (ex. pompa de Na + - K + ).
POMPELE IONICE
Pn n prezent se cunsc trei clase de protein-enzime care cupleaz transportul unor ioni cu hidroliza ATP: - pompe ionice (ATP-aze) P,
19 - pompe ionice (ATP-aze) V, - pompe ionice (ATP-aze) F. Toate aceste trei clase de ATP-aze prezint la nivelul feei interne (citosolice) a membranei, unul sau mai multe situsuri de legare a ATP-ului, care ns va fi hidrolizat (cu producerea de ADP, fosfat anorganic i eliberarea de energie), doar n prezena ionului transportat.
Pompele ionice din clasa P au structura cea mai simpl, constituit din patru subuniti transmembranare, dou polipeptide o i dou polipeptide |. Se crede c ionii transportai trec prin subunitatea o. n aceast clas de pompe ionice sunt incluse: - Na + -K + ATP-aza, care se gsete n membrana plasmatic; - Ca 2+ ATP-azele, care se gsesc: n membrana plasmatic, unde transport ionii de calciu (Ca 2+ ) afa-r din celul; n membrana reticulului sarcoplasmic (la nivelul fibrei musculare striate), unde are rolul de a pompa ionii de calciu din citosol n lu-menul acestui organit, urmat de relaxarea muscular; - pompe transportoare de protoni (ioni de H + ) care se gsesc n celulele care secret acid, la nivelul mucoasei gastrice i a celulelor tubilor con-tori distali i colectori din rinichi. H + -K + ATP-aza care se gsete n celulele epiteliale ale mucoasei gastrice are rolul de a transporta protoni (H + ) n exteriorul celulei i ionii de potasiu (K + ) n citosol. Activitatea pompei de protoni la nivelul celulelor parietale ale mucoasei gastrice st la baza secreiei de acid clorhidric de la acest nivel.
Pompele ionice din clasa V au structura constituit din aproximativ 7 subuniti (lanuri polipeptidice). Rolul lor este de a transporta mpotriva gradientului electrochimic ionii de hidrogen (protonii). H + ATP-azele se g-sesc n membrana plasmatic a unor celule secretoare de acid (ex. osteoclas-tele din esutul osos), dar i n membrana lizozomilor i endozomilor, sau a vacuolelor unor celule vegetale sau a unor fungi, unde au rolul de a menine un pH acid n lumenul acestora.
Pompelele ionice din clasa F au o structur asemntoare cu cea a H + ATP-azelor, fiind constituite din 8 lanuri polipeptidice. Rolul lor este de a cupla transportul ionilor de hidrogen cu hidroliza ATP. Au fost identificate n membrana mitocondriilor, a cloroplastelor i n membrana plasmatic a bacteriilor. Recent a fost identificat a patra clas de proteine de transport cu acti-vitate ATP- azic, implicate n transportul activ al unor medicamente. Este cunoscut o glicoprotein din membrana plasmatic (P170), care transport diferite medicamente din citosol n spaiul extracelular, mpotriva gradien-tului de concentraie, utiliznd energia furnizat de hidroliza ATP. Aceast protein, cunoscut ca P170, este responsabil de rezistena celulelor maligne la aciunea diferitelor chimioterapice, indiferent de concentraia lor.
20 POMPA DE SODIU - POTASIU (Na + -K + ATP-aza)
Dintre pompele ionice, cea mai important pentru activitatea celular este pompa Na + - K + . Prezent n toate celulele organismului aceast pomp are rolul de a menine diferenele de concentraie ale ionilor de sodiu i potasiu, de-o parte i de alta a membranei celulare, de a menine potenialul electric negativ n interiorul celulei. Prin activitatea sa, pompa de sodiu-potasiu controleaz volumul celular. Lipsa activitii acestei pompe ar determina tumefierea celulelor, pn la distrugerea lor. Concentraia ionilor de Na + din citoplasm este mult mai mic dect n mediul extracelular, de aceea pentru buna desfurare a activitii celulare a-cetia trebuie s fie scoi permanent din celul. Ionii de K + se afl n con-centraie de 15 ori mai mai mic n mediul extracelular dect n citoplasm, dar vor fi introdui n permanen n celul. Astfel, ieirea din celul a ionilor de Na + se face mpotriva gradientului de concentraie i mpotriva poten- ialului electric, iar intrarea ionilor de K + n citoplasm din mediul extracelu-lar se face n sensul gradientului electric, dar mpotriva gradientului de con-centraie. Transportul acestor ioni (Na + i K + ) prin membran, mpotriva gradien-tului de concentraie, este realizat de Na + -K + ATP-az, care n prezena ioni-lor de Na + i K + i a unei concentraii corespunztoare de ioni de Mg 2+ hi-drolizeaz ATP-ul. Na + -K + ATP-aza este un tetramer ce prezint dou subuniti o i dou subuniti |. Subunitatea | prezint: - trei situsuri pentru legarea ionilor de Na + , n poriunea care ptrunde n celul, - dou situsuri de legare pentru ionii de K + , situate n poriunea extern, - poriune cu activitate ATP-azic, situat n poriunea intern, n veci-ntatea situsurilor pentru ionii de Na + . Legarea ionilor de Na + la nivelul celor trei situsuri, va determina acti-varea funciei ATP-azice a pompei, cu producerea hidrolizei ATP. Va rezulta astfel energia necesar modificrii conformaionale a pompei de sodiu-potasiu, care va permite ieirea ionilor de Na +
i ptrunderea ionilor de K + n citoplasm. Hidroliza unei molecule de ATP va furniza enegia necesar ptrunderii n celul a doi ioni de K + i expulzrii a trei ioni de Na + .
POMPA DE CALCIU (Ca 2+ ATP-aza)
Ionii de Ca 2+ din citosol sunt ntr-o concentraie de 10.000 de ori mai mic dect n spaiul exrtracelular. Concentraia sczut a ionilor de Ca 2+ liberi de la nivelul citosolului este meninut prin activitatea pompelor de calciu: - din membrana celular, care pompeaz ionii de Ca 2+ n spaiul extrace-lular; - din membranele reticulului sarcoplasmic (n cazul celulelor musculare striate) i mitocondriei, care pompeaz ionii de Ca 2+ din citosol n inte-riorul acestor organite. n activitatea pompei de Ca 2+ din membrana plasmatic este foarte im-portant o protein din citosol numit calmodulin. Concentraia mare a io-nilor de Ca 2+ din citosol
21 determin legarea calciului de calmodulin, care va suferi o modificare conformaional i se va lega de Ca 2+ ATP-az. n acest mod Ca 2+ ATP-aza va fi activat i va elimina ionii de Ca 2+
n spaiul ex-tracelular. La nivelul celulelor musculare, eliberarea ionilor de Ca 2+ n citosol este urmat de contracie, iar prin activitatea Ca 2+ ATP-azei, ionii de Ca 2+ din ci-tosol vor fi pompai n interiorul reticulului sarcoplasmic, urmarea fiind relaxarea muscular. Pentru desfurarea activitii pompei de Ca 2+ este nece-sar prezena ionilor de Mg 2+ . La nivelul suprafeei citosolice Ca 2+ ATP-aza are o mare afinitate pen-tru ionii de Ca 2+ . Un singur polipeptid o, prin hidrloliza unei molecule de ATP, poate transporta doi ioni de Ca 2+ . Reticulul sarcoplasmic conine dou proteine, calsequestrina i pro-teina de legare cu mare afinitate pentru calciu, care au capacitatea de a lega ionii de Ca 2+ . Astfel, scade concentraia ionilor liberi de Ca 2+ din reticulul sarcoplasmic, iar cantitate de energie necesar pentru pomparea lor din citosol scade.
COTRANSPORTUL
Cotransportul este modalitatea de transport a unor substane (ex. gluco-za, aminoacizii) n citosol, mpotriva gradientului de concentraie, utiliznd pentru aceasta energia stocat n gradientul transmembranar al ionilor Na + sau H + . Transportul activ al ionilor de Na + din citosol determin excesul acestor ioni la nivelul spaiului extracelular. Ionii de Na + , n exces n spaiul extracelular, au tendina de a ptrunde n citosol (gradientul de concentraie stocheaz energie), iar energia de difuziune a acestor ioni poate fi utilizat pentru transportul n celul i a unor substane cum sunt glucoza sau aminoa-cizii. Ionii implicai n acest tip de transport poart numele de ioni cotrans-portai. Exist dou tipuri de cotransport: - simportul, cnd moleculele se deplaseaz n aceeai direcie cu ionul cotransportat, - antiportul n care moleculele se deplaseaz n direcie opus ionului cotransportat.
SIMPORTUL
Prin simportul Na + -glucoz i Na + -aminoacizi se realizeaz transportul mpotriva gradientului de concentraie a glucozei i aminoacizilor din lume-nul intestinului subire n citoplasma enterocitelor i a glucozei din lumenul tubilor uriniferi n citoplasma nefrocitelor. Simportul Na + -glucoz. La nivelul regiunii apicale, prevzut cu mi-crovili a membranei plasmatice se afl o protein de transport ce realizeaz simportul ionului de Na + i al glucozei. Proteina de transport prezint un situs de legare pentru ionul de Na + i unul pentru glucoz, iar energia necesar transportului este furnizat de diferena de concentraie a ionului de Na + de-o parte i de alta a membranei plasmatice. Dup ataarea ionului de Na + i a glucozei, proteina de transport va suferi o modificare conformaional, care va permite ptrunderea Na + i a glucozei n citosol. Simportul Na + -glucoz se realizeaz i la polul apical al membranei plasmatice (cu microvili) a nefrocitelor din tubii uriniferi.
22 Simportul Na + -aminoacizi se realizeaz printr-un mecanism identic, dar cu participarea altor proteine de transport. n citosolul enterocitelor se acumuleaz ioni de Na + , glucoz i ami-noacizi. n regiunea bazolateral a membranei plasmatice a enterocitului se afl Na + -K + ATP-aza prin activitatea creia ionii de Na + sunt pompai n spa-iul extracelular. Tot n regiunea bazolateral a membranei enterocitului se afl proteine transmembranare care transport moleculele de glucoz i ami-noacizii care se concentreaz n citosolul enterocitelor prin procesul de sim-port. Astfel, prin cele dou procese desfurate la nivelul celor dou regiuni (apical i bazolateral) ale membranei plasmatice a enterocitelor, ionii de Na + , glucoza i aminoacizii ajung din lumenul intestinului subire n circulaia sanguin.
ANTIPORTUL
Antiportul este modalitatea de transport a unor ioni n celul, cuplat cu ieirea n spaiul extracelular a unor ioni sau molecule. Exist dou mecanis-me importante de antiport: antiportul Na + -Ca 2+ i antiportul Na + -H + . Antiportul Na + -Ca 2+ este mecanismul prin care ionii de Na + intr n citosol, cuplat cu ieirea ionilor de Ca 2+ din citosol n spaiul extracelular. Acest tip de transport este realizat de o protein de care se leag ambii ioni. Antiportul Na + -Ca 2+ constituie alturi de transportul activ prin pompa de Ca 2+ , un mecanism adiional de transport al acestor ioni. La nivelul fibrei musculare cardiace, antiportul Na + -Ca 2+ este principalul mecanism de reducere a concentraiei ionilor de Ca 2+ din citosol, urmat de scderea frecvenei cardiace. Antiportul Na + -H + are o importan mare la nivelul tubilor contori pro-ximali, unde prin participarea unei proteine de transport, ionii de Na + ptrund din lumenul tubular n citosolul nefrocitelor (n sensul gradientului de con-centraie), n timp ce ionii de H + trec prin antiport n lumenul tubilor uriniferi. Prin acest mecanism este meninut la un nivel normal pH-ul citosolic necesar desfurrii proceselor vitale.
TRANSPORTUL PRIN VEZICULE
Transportul prin vezicule este o form particular de transport, prin care celula preia o serie de substane din mediul extracelular sau elimin diferite particule n spaiul extracelular. Mecanismul de transport include formarea la nivelul membranei celulare a unor vezicule care ncorporeaz particulele ce urmeaz a fi transportate, npreun sau fr lichid interstiial. n funcie de sensul n care particulele urmeaz a fi transportate deosebim: - exocitoza, - endocitoza, - transcitoza. Prin exocitoz celula elimin la exteriorul ei diferii produi de secreie sau substane rezultate din metabolism, fiind implicat n special n mecanismul secreiei celulare.
23 Prin endocitoz celulele introduc n citoplasm particule din mediul extracelular, prin vezicule formate din membrana celular. Dup modul n care particulele sunt interiorizate, deosebim dou tipuri de endocitoz: - fagocitoza, procesul prin care particulele sunt endocitate fr fluid intercelular; - pinocitoza, procesul de endocitare a unei cantiti oarecare de lichid in-terstiial mpreun cu particulele pe care le conine.
FAGOCITOZA
Fagocitoza este o modalitate de hrnire pentru anumite vieuitoare inferioare (protozoare). La mamifere fagocitoza joac un rol important n pro-cesele de aprare ale organismului, deoarece pe aceast cale sunt nglobate i apoi distruse intracelular bacteriile, unii parazii, substane strine, resturi celulare, celule degenerate sau mbtrnite, celule maligne, etc. Procesul de fagocitoz este realizat la mamifere, n condiii normale i patologice de ctre celulele specializate numite fagocite. n funcie de dimensiunea particulelor pe care sunt capabile s le nglo-beze, fagocitele sunt clasificate n: - microfage, reprezentate de granulocite, capabile s nglobeze numai particule de dimensiuni mici; - macrofage, reprezentate de celulele din sistemul fagocitelor mononu-cleare (sistemul monocito-macrofagic), capabile s nglobeze i particule de dimensiuni mai mari.
Microfagele reprezentate de granulocitele neutrofile i ntr-o msur mai redus de granulocitele eozinofile, cnd ajung la nivelul esuturilor sunt deja mature avnd imediat capacitatea de a fagocita. n mod normal, neutro-filul are capacitatea de a fagocita pn la 20 de bacterii, dup care se va inac-tiva i va fi distrus.
Macrofagele sunt prezente n toate tipurile de esut conjunctiv, cu o densitate mai mare n zone apropiate mediului extern, cum sunt corionul mu-coaselor, dermul pielii, stroma organelor parenchimatoase sau n jurul vaselor sanguine. Ele aparin sistemului monocito- macrofagic. Originea lor este n celulele stem existente n mduva hematogen, care prin difereniere dau natere monocitelor. Acestea trec n snge pentru aproximativ 60 ore, apoi prin diapedez trec n esutul conjunctiv, unde se transform n macrofage tisulare (histiocite) care desfoar activiti specifice. Durata lor de via este de cteva luni. Macrofagele au form rotund sau ovalar, prezint prelungiri citoplas-matice scurte, iar nucleul lor este relativ mic, rotund sau reniform, dispus central sau excentric i este heterocromatic. Nucleolii se disting greu. Cito-plasma este abundent i conine organite celulare numeroase, dintre care se evideniaz numrul mare de lizozomi (primari i secundari). Pe suprafaa lor prezint receptori pentru regiunea Fc a imunoglobulinei G (RFc) i pentru cel de-al treilea component al sistemului complementului (RC3). Diferitele celule care sunt incluse n sistemul fagocitelor mononucleare sunt urmtoarele: - monocitele din snge, - macrofagele (histiocitele) din esutul conjunctiv,
24 - celulele Kupffer din ficat, - microgliile din sistemul nervos central, - macrofagele libere din fluidele pleurale, peritonele, sinoviale i cele din alveolele pulmonare i splin, - osteoclastele din esutul osos, - celulele dendritice din epiderm (celule Langerhans) i celulele similare ramificate din ganglionii limfatici, splin i timus, toate fiind celule prezentatoare de antigene. Macrofagele sunt celule mobile care se deplaseaz n esuturi cu ajuto-rul pseudopodelor. Prin activitatea fagocitar a macrofagelor sunt ndeprtate din esuturi: microorganisme (pot fagocita mai mult de 100 de bacterii), res-turi organice, complexe imune multimoleculare, hematii, ocazional parazii (protozoarele din genul Plasmodium, care determin malaria). Recunoaterea fagocitar se realizeaz la dou niveluri: la nivel tisular, cu ajutorul opsoninelor i la nivelul celular, prin receptorii de suprafa. Op-soninele pot fi neimunospecifice (fibronectina) i imunospecifice (IgG, C3). Astfel, macrofagul poate realiza dou tipuri de fagocitoz: - fagocitoza neimunospecific mediat de opsonine neimunospecifice (de tipul fibronectinei), - fagocitoza imunospecific mediat de opsonine imunospecifice (de tip IgG i C3). n anumite situaii patologice, ca rspuns la ptrunderea n organism a unor microbi (bacilul tubeculos i bacilul leprei) sau a unor corpi strini ma-crofagele pot fuziona, dnd natere unor celule gigante multinucleate, cu 20-50 de nuclei cuprini ntr-o mas citoplasmatic unic. Alteori ele se agreg i se unesc prin jonciuni strnse, n jurul unor focare de infecie. Aceste celule poart numele de celule epitelioide, datorit asemnrii cu celulele epiteliale. Fagocitele trebuie s fie selective n ceea ce privete materialul fagoci-tat. Selectivitatea procesului se datoreaz faptului c: - multe structuri tisulare (proprii organismului) au suprafaa neted, care le confer rezisten la fagocitoz, - multe structuri proprii organismului au un nveli proteic protector care nu favorizeaz fagocitoza, n timp ce esuturile moarte i multe par-ticule strine nu au un astfel de nveli, - organismul are capacitatea de a recunoate materialele strine, prin sis-temul imun. Fagocitele prezint la suprafaa lor receptori cu ajutorul crora ele recunosc ceea ce este "self" de ceea ce este "non self" (antigeni). Fagocitele sunt capabile s recunoasc componentele structurale proprii alterate, cum sunt celule degenerate, mbtrnite, maligne, resturi celulare, etc. Dup extravazare prin diapedez, leucocitele se vor deplasa la locul a-gresiunii, sub aciunea unor ageni chemotactici, n sensul gradientului chimic, procesul numindu-se chemotaxie. Agenii chemotactici pot fi de natur endo-gen sau de natur exogen. Dintre substanele chemotactice de natur exo-gen, cele mai obinuite sunt produii bacterieni solubili (peptide i lipide), iar cele de natur endogen sunt reprezentate de: - produii de metabolism ai acidului arahidonic, n special de leucotriena B, - citokine, n special de cele din familia chemochinelor (IL-8), - componentele sistemului complementului, n special de C5a.
25 Legarea agenilor chemotactici la receptorii specifici de la nivelul membranei celulare a fagocitelor va avea ca rezultat activarea fosfolipazei C, care va conduce la hidroliza fosfatidilinozitolului-4,5-bifosfat, cu producerea inozitolului-1,4,5-trifosfat i a diacilglicerolului, cu eliberarea ionilor de Ca 2+ . Creterea concentraiei de ioni de Ca 2+ la nivelul citosolului, prin eliberarea din depozitele intracelulare i prin influxul de Ca 2+
extracelular, va declana asamblarea elementelor contractile, care face posibil micarea celular prin emiterea de pseudopode. La nivelul acestora exist o reea ramificat, constituit din actin i miozin. Micrile de locomoie implic asamblarea i dezasamblarea rapid a monomerilor de actin. Aceste procese sunt controlate de efectul ionilor de calciu i a inozitolilor asupra unor proteine reglatoare ale actinei cum sunt: filamina, gelsolina, profilina, calmodulina. Mecanismul prin care actina va interaciona cu miozina n interiorul pseudopodelor, n cursul micrilor de locomoie, este insuficient cunoscut. Agenii chemotactici induc i activarea fagocitelor, caracterizat prin: - producia de metabolii ai acidului arahidonic, - modularea moleculelor de adeziune leucocitar, - degranularea i secreia de enzime leucocitare, - activarea degradrilor oxidative.
ETAPELE FAGOCITOZEI
Fagocitoza se realizeaz n trei etape distincte, aflate n interrelaie: - recunoaterea i ataarea particulei care urmeaz a fi fagocitat, - nglobarea i formarea fagozomului, - degradarea materialului fagocitat.
Recunoaterea i ataarea Ocazional, neutrofilele i macrofagele pot recunoate i ngloba bac-terii sau materiale de origine exogen cu ar fi granulele de latex. Majoritatea microorganismelor ns, nu sunt recunoscute dect dup ce vor fi acoperite de opsonine n procesul de opsonizare. Exist dou opsonine majore: - fragmentul Fc al imunoglobulinei G (IgG); - C3b (forma sa stabil fiind C3bi), fragmentul opsoninic al compo-nentei C3 a sistemului complementului. Complementul reprezint un sistem format din aproximativ 20 de pro-teine prezente n plasm, dintre care multe sunt precursori ai enzimelor. A-ceti precursori sunt n mod normal inactivi, dar pot fi activai prin dou me-canisme: clasic i alternativ. La nivelul membranei celulare a leucocitelor exist receptori corespun-ztori opsoninelor. Acetia sunt: - receptorul RFc, care recunoate fragmentul Fc al IgG, - receptorii complementului 1, 2 i 3 (RC1,2,3), care interacioneaz cu C3b i C3bi. Receptorul RC3, are o importan particular deoarece: - este identic cu integrina-|2-Mac-1, implicat n adeziunea la endo-teliul vascular; - recunoate lipopolizaharidele bacteriene fr intervenia anticorpilor sau complementului, rezultnd fagocitoza nonopsonic;
26 - leag unele componente ale matricei extracelulare, cum sunt fibro-nectina i laminina.
nglobarea Legarea particulei opsonizate la receptorul RFc este suficient pentru a declana nglobarea, care ns devine foarte intens n prezena receptorilor pentru complement. n timpul nglobrii pseudopodele emise de fagocite vor nconjura par-ticula care urmeaz a fi nglobat pe toat suprafaa, printr-un mecanism nu-mit "n fermoar", rezultnd n final internalizarea unei poriuni din membrana plasmatic (a celulei fagocitare), cu constituirea fagozomului. Membrana li-mitant a fagozomului va fuziona cu lizozomii (primari), cu constituirea fago-lizozomilor (lizozomi secundari). Astfel coninutul granulelor lizozomale va fi descrcat n interiorul fagolizozomului, granulocitele i monocitele degra- nulndu-se progresiv. Multe dintre procesele implicate n fagocitoz i degranulare sunt simi-lare celor ntlnite n cazul chemotaxiei, fiind asociate cu: - legtura ligand-receptor, - activarea fosfolipazei C, - producerea de diacilglicerol i inozitol-1,2,3-trifosfat, - activarea proteinkinazei C, - creterea concentraiei citosolice de calciu.
Degradarea Reprezint ultima etap a procesului de fagocitoz. n cazul fagocitrii bacteriilor, la nivelul fagozomilor (neutrofilelor sau macrofagelor), exist a-geni bactericizi care omoar bacteriile nainte ca ele s fie digerate. Omorrea bacteriilor se realizeaz printr-un mecanism dependent de oxigen, care presupune intervenia unor ageni oxidani care se formeaz (sub aciunea unor enzime) la nivelul membranelor fagozomilor, sau a peroxi-zomilor. Agenii oxidani sunt: superoxidul (O 2- ), peroxidul de hidrogen (H 2 O 2 ) i ionul hidroxil (OH - ). Astfel, fagocitoza stimuleaz: - arderile cu consum de oxigen, - glicogenoliza, - creterea oxidrii glucozei (pe calea untului hexozomonofosfat), - producerea de metabolii reactivi ai oxigenului. Producerea metaboliilor de oxigen se realizeaz prin rapida activare a NADPH oxidazei, care oxideaz NADPH (nicotinamidadenin dinucleotid fosfatul). n acest proces se produce i reducerea oxigenului, cu generarea ionului superoxid. Acesta va fi apoi convertit n H 2 O 2 . Cantitatea de peroxid de hidrogen (H 2 O 2 ) produs la nivelul fagolizozomilor este suficient pentru a omor bacteriile. NADPH oxidaza este un sistem enzimatic complex, constituit din fos-foproteine citosolice i componente proteice ale citocromilor membranari. Activarea NADPH oxidazei necesit translocarea componentelor citosolice pentru a interaciona cu citocromii fixai la nivelul membranei, iar cnd membrana este invaginat, la nivelul fagolizozomului. n aceast situaie peroxidul de hidrogen este produs n interiorul lizozomilor. Granulele azurofile ale neutrofilelor conin enzima numit mielo-peroxidaz, care n prezena unui halogen, cum este clorul, transform pe-roxidul de hidrogen n HOCl. Acesta
27 este un agent antibacterian care distruge bacteriile prin halogenare, sau prin oxidarea lipidelor i proteinelor. Importana mecanismului de distrugere a bacteriilor, dependent de oxi-gen, este demonstrat de existena unui grup de defecte congenitale privind omorrea bacteriilor, care determin boala cronic granulomatoas caracte-rizat prin predispoziia unor pacieni pentru infecii bacteriene recurente. Aceast afeciune se datoreaz unor defecte genetice privind co-dificarea unor componente ale NADPH oxidazei. Omorrea bacteriilor se poate realiza n absena arderilor oxidative, prin intervenia unor substane coninute n granulele leucocitelor. Aceste sub-stane sunt: proteina creterii permeabilitii bactericide, lizozimul, lactofe-rina, proteina bazic major (la nivelul eozinofilelor), defensina. Dup omorre, bacteriile vor fi degradate la nivelul fagolizozomilor de ctre hidrolazele acide coninute de granulele azurofile. Materialele nedigerabile sunt reinute n vacuole, constituind corpii re-ziduali. n citoplasma unor celule cu via lung, cum sunt neuronii sau ce-lulele musculare cardiace, se acumuleaz cantiti mari de corpi reziduali care conin lipofuscina numit i pigment de uzur.
PINOCITOZA
Pinocitoza reprezint procesul prin care se realizeaz ptrunderea n celule a unor molecule mpreun cu fluid extracelular, sub forma unor vezicule extrem de mici. Pinocitoza reprezint ingestia de substane aflate sub form de dispersie n fluidul extracelular, proces stimulat de modificrile ionice. Pinocitoza se realizeaz n mod continuu la nivelul membranei plas-matice a celor mai multe celule. n unele cazuri procesul se desfoar cu mare rapiditate. Astfel, n cazul macrofagelor, pinocitoza se desfoar extrem de rapid, n fiecare minut pn la 3% din membrana macrofagului fiind nglobat sub form de vezicule. Pinocitoza este singura modalitate prin care multe macromolecule (ex. moleculele proteice) ptrund n celule. Exist dou forme de pinocitoz: - pinocitoza independent de receptori, cu producerea de vezicule pino-citotice netede, proces relativ neselectiv; - pinocitoza mediat de receptori, cu producerea de vezicule acoperite, prin care se realizeaz un proces selectiv de absorbie.
Pinocitoza independent de receptori este o modalitate de interiorizare (nglobare) a substanelor existente n lichidul extracelular, cu ajutorul unor vezicule formate prin internalizarea unei poriuni a membranei celulare, fr ca particulele s fie fixate n prealabil de receptorii membranari specifici. Procesul se desfoar la nivelul endoteliului vascular, n celulele musculare netede, dar este prezent la aproape toate tipurile de celule. Veziculele pinocitotice se formeaz prin invaginarea membranei plas-matice. Iniial, membrana plasmatic se va invagina pentru a forma mici de-presiuni proiectate n interiorul celulei. Apoi membranele se apropie, deschi-derea depresiunii create se ngusteaz, formnd
28 un lumen ngust. n conti-nuare membranele vor fuziona lund natere vezicule numite pinozomi. Continuarea constriciei va determina separarea veziculei de mem-bran. n faza urmtoare, pinozomii care se desprind de membrana celular vor fi antrenai de curenii intracitoplasmatici. n citoplasm pinozomii se vor uni cu lizozomii, iar particulele endocitate vor fi digerate pn la componente simple.
Pinocitoza mediat de receptori se mai numete i absorbtiv, selec-tiv sau concentrativ i este o modalitate de nglobare a unor particule pe care celula le recunoate cu ajutorul unor receptori existeni la suprafaa membra-nei celulare. n acest proces receptorii specifici de la suprafaa membranei se leag strns de macromoleculele extracelulare pe care le recunosc. Aceste molecule poart numele de liganzi. n mod uzual, moleculele proteice se ataeaz la membrana plasmatic la nivelul unor receptori specializai, specifici pentru tipul de protein absor-bit. n general, aceti receptori sunt concentrai n mici depresiuni la nivelul suprafeei externe a membranei plasmatice. Acestea se numesc caveole aco-perite, deoarece pe suprafaa lor citosolic se gsete o reea a crei compo-nent principal o constitue o protein fibrilar, clatrina. Clatrina este o protein fibrilar, vizibil n microscopia electronic ca o reea care acoper faa citosolic a caveolelor sau a veziculelor formate din membrana plasmatic i a celor formate la nivelul compartimentului trans al complexului Golgi. Clatrina purificat are forma unui triskelion cu trei brae, fiecare lan fiind constituit dintr-un bra lung (greu) i un bra scurt (uor). Polimerizarea spontan a acestor formaiuni determin extinderea caveolelor i eventual formarea veziculelor acoperite. Dup legarea moleculelor proteice la receptori se produce o modificare a proprietilor membranei celulare, astfel c ntreaga depresiune se invagi-neaz, iar proteinele care o nconjoar ca o reea vor determina fuzionarea marginilor acesteia, cuprinznd i o mic cantitate de fluid extracelular. Imediat dup aceea poriunea invaginat a membranei se va desprinde de suprafaa celulei, constituind vezicula acoperit. Veziculele acoperite cu clatrin tipice au aspectul unor mingi de fotbal cu diametrul de 50-100 nm. Dup endocitare veziculele acoperite pierd reeaua de clatrin, formnd vezicule netede, numite receptozomi. n afar de clatrin, care este componenta cea mai studiat a reelei proteice care acoper veziculele, o alt protein este dinamina. Aceasta este o protein citosolic, care leag i apoi hidrolizeaz GTP-ul. Perturbri ale ac-tivitii acesteia determin imposibilitatea legrii GTP-ului, blocnd formarea veziculelor acoperite. ntre reeaua de clatrin i membrana veziculelor se gsete un spaiu de aprox. 20 nm, care conine particule de asamblare. n afar de clatrin, dinamin, particule de asamblare, la acest nivel exist probabil i filamente de actin i miozin. Astfel, acest proces de formarea al veziculelor se realizeaz n urmtoarele etape: - membrana acoperit formeaz o depresiune, - apoi o caveol acoperit, - n final se va forma vezicula acoperit. Pinocitoza mediat de receptori necesit:
29 - energie, care va fi furnizat de ATP; - prezena ionilor de calciu n fluidul extracelular, care interacioneaz cu filamentele proteice contractile din jurul depresiunilor acoperite, pentru a mobiliza veziculele de la nivelul membranei celulare. Receptozomii vor fi antrenai de curenii intracitoplasmatici i se vor uni cu lizozomii n vederea degradrii (digestiei) particulelor endocitate. Dac n cazul pinocitozei independente de receptori concentraia sub-stanelor n veziculele endocitate este aceeai ca i n mediul extracelular, n cazul pinocitozei mediate de receptori concentraia este mult mai mare dato-rit capacitii receptorilor de a fixa un numr mai mare de particule. n acest proces rata de endocitare a liganzilor este limitat de concentraia de receptori corespunztori de la suprafaa membranei plasmatice, complexele ligand-receptor fiind n mod selectiv ncorporate n vezicule de transport intracelular (multe alte proteine membranare fiind excluse).
TRANSCITOZA
Procesul de transcitoz (transportul transcelular): - implic endocitarea substanelor, iar apoi exocitarea lor: materialele endocitate traverseaz celula, fiind apoi exocitate la nivelul membranei plasmatice pe partea opus, - se desfoar n unele esuturi unde celulele formeaz o barier ntre dou medii extracelulare, unele molecule sunt transportate de pe o parte a celulei pe cealalt fr implicarea lizozomilor, ex. la nivelul celulelor endoteliale i enterocitelor. La nivelul celulelor endoteliale intensificarea transcitozei reprezint un mecanism potenial de cretere a permeabilitii vasculare, aspect evideniat la nivelul neoplasmelor maligne. n cazul enterocitelor, imunoglobulina A care este secretat de plasmocitele din matricea esutului conjunctiv al laminei bazale (corion) se va lega de receptorii Fc de la nivelul membranei plasmatice a acestor celule. Complexele IgA-receptor vor fi nglobate n enterocite prin endocitoz, fiind apoi transportate sub forma veziculelor acoperite nspre polul apical al acestora. La acest nivel, veziculele vor fuziona cu membrana plas-matic unde IgA va fi eliberat n urma desfacerii complexelor IgA-receptor.
30 EXPANSIUNILE MEMBRANEI CELULARE
Suprafaa celular nu este niciodat neted. Exist ntotdeauna modifi-cri sub forma unor prelungiri sau extensii, unele avnd caracter tranzitoriu, iar altele fiind permanente. Aceste prelungiri sunt implicate n procesele de motilitate celular, absorbie sau n realizarea fagocitozei.
EXPANSIUNILE TRANZITORII
Suprafaa celular poate s emit expansiuni care privite la microscop apar ca valurile pe suprafaa unei ape. Unele pot chiar s se desprind pentru ca imediat s fie ncorporate din nou. Acest aspect, datorat fluiditii cito-plasmei, este foarte accentuat nainte de diviziunea celular i nainte de ex-pulzarea nucleului eritrocitelor. Alte expansiuni tranzitorii sunt pseudopodele, emise de obicei de ctre celulele capabile s se deplaseze activ pe un suport solid. Emit pseudopode celulele care se deplaseaz prin micri ameboidale i celulele capabile de fagocitoz (granulocitele neutrofile, macrofagele).
EXPANSIUNILE PERMANENTE
Expansiunile permanente ale suprafeei celulare sunt structuri stabile, susinute de fascicule de filamente de actin n cazul microvililor i stereoci-lilor sau de microtubuli n cazul cililor i flagelilor. Microvilii sunt expansiuni cito- plasmatice 0,5-1 m i digitiforme, cilindrice, cu lungimea de diametrul de 0,08 m, localizate la polul apical al unor celule epiteliale, cum sunt entero-citele, nefrocitele, hepatocitele, celulele foliculilor tiroidieni.
Fig. 1. Enterocite cu platou striat -microfotografie.
Rolul acestor prelungiri este de a mri de 10-20 de ori suprafaa de ab-sorbie a celulelor, dar i de a pompa n interiorul celulei substanele absor-bite. n microscopia optic microvilii nu pot fi identificai separat, ci apar ca o dung mai intens colorat, cu aspect striat, dispus la polul apical al celu-lelor, constituindu-se aspectul de platou striat la enterocite (fig. 1) i mar-ginea n perie n cazul nefrocitelor. La microscopul electronic se constat c microvilul este delimitat de membrana plasmatic, iar n interiorul lui se gsesc 20-30 de filamente de actin organizate n mnunchi (fascicul), care-i confer rigiditate.
31 Filamentele care constituie fasciculul sunt paralele i sunt legate trans-versal prin proteine asociate, cum sunt fimbrina i vilina. Rolul acestor pro-teine asociate este de a stabiliza filamentele n mnunchi. Filamentele de actin au aceeai polaritate i se termin la polul apical ntr-o zon amorf care conine o protein de acoperire neidentificat i care realizeaz legarea filamentelor de membrana plasmatic. n regiunile laterale ale microvilului, mnunchiul de filamente se leag de membrana plasmatic prin calmodulin i printr-o protein similar miozinei de tip I. La polul ba-zal, filamentele de actin din microvil se ancoreaz n regiunea apical a celulelor epiteliale de reeaua terminal (regiune specializat a citoscheletu-lui) constituit din filamente de actin i proteine asociate. Stereocilii sunt microvili foarte lungi, vizibili n microscopia optic. Pot fi observai la nivelul tractului ge-nital masculin, n epididim (fig. 2), dar i la nivelul urechii interne.
Fig. 2. Stereocili n epididim-microfotografie.
Cilii sunt formaiuni filiforme lungi de 5-15 m, cu diametrul de 0,5 m, prezente la polul apical al unor celule, ntotdeauna cubice sau prismatice (fig. 3). Cilii sunt prezeni la nivelul celulelor epiteliului mucoaselor: nazal, faringian, traheei, bronhiilor, trompe-lor uterine, uterului, cilor spermatice, etc.
Numrul cililor la suprafaa apical a unei celule este de ordinul sute-lor. Fiecare cil prezint un corpuscul bazal situat n citoplasm, care se con-tinu n profunzime cu o rdcin, iar la suprafaa celulei cu o tij. Membrana celular acoper cilul la exterior, iar la interior conine axonema i citoplasm lipsit de organite (fig. 4).
Fig. 4. Schema unui cil n seciune transversal. 1-membrana celular; 2-dublete periferice de microtubuli; 3, 4-brae de dinein; 5-nexin; 6-teaca central; 7-spie radiale, cu capul de legtur (8); 9-perechea central de microtubuli.
La microscopul electronic, pe o seciune transversal, se constat c a-xonema cililor (Fig. 19) este constituit din: - 20 de microtubuli cu configuraia 9+2, adic la periferie se afl 9 dublete de microtubuli, iar n centru doi microtubuli aezai mai distanat; - braele de dinein, care pornesc unidirecional de la un dublet spre cel nvecinat; dineina este o protein cu proprieti enzimatice (este o ATP-az) ce asigur energia necesar micrii cililor; - spiele radiale, care se ntind de la dubletele periferice, la teaca central; - teaca central, care nconjoar cei doi microtubuli centrali; mpreun cu spiele radiale intervin n reglarea micrilor ciliare; - nexina, care este o protein elastic ce conecteaz dubletele adiacente de microtubuli, contribuind la meninerea formei cililor. Dac seciunea transversal se face la nivelul corpusculului bazal (Fig. 20) se constat c aici cei doi tubuli centrali lipsesc, iar dubletele de la peri-ferie devin triplete (configuraia 9+0), rezultnd o structur care se aseamn pn la identitate cu centriolii. Cilii se gsesc la nivelul unor celule epiteliale pe suprafaa crora exist un strat de lichid. Funcia cililor este aceea de a deplasa lichidul care i scald, ntr-un singur sens, de regul nspre exterior, datorit faptului c micarea lor ordonat i succesiv ntr-o direcie este lent, iar n cealalt este rapid. Prin deplasarea lichidului care i scald, cilii realizeaz curirea epiteliului (ex. epiteliul traheal), fiind ndeprtate o serie de sub-stane sau particule
33 care au ptruns accidental sau care au rezultat din me-tabolismul sau moartea unor celule. n cazul trompelor uterine, cilii faciliteaz deplasarea ovocitului nspre uter. Mecanismul micrii cililor. Sub aciunea dinein ATP-azei are loc eli-berarea energiei ATP-ului, care imprim braelor de dinein o micare de alunecare n lungul suprafeei perechilor adiacente de microtubuli. Cnd mi-crotubulii frontali alunec n afar spre vrful cilului, iar cei posteriori rmn nemicai, cilul se va nclina. Flagelii sunt formaiuni cu lungimea de aprox. 80-100 m, prezente la suprafaa unor celule. Structura flagelului nu difer de cea a cilului dar lun-gimea sa este mai mare. n majoritatea cazurilor o celul prezint un singur flagel. n organismul uman singura celul cu flagel este spermatozoidul. Micarea ondulatorie a flagelului permite celulei s se deplaseze n mediul lichid, flagelul fiind componenta sa locomotorie. n acest mod, flagelul per-mite deplasarea spermatozoidului spre ovocit n vederea fecundrii.
CITOPLASMA
Citoplasma reprezint spaiul aflat ntre membrana celular i nveliul nuclear. Ea cuprinde dou componente majore: - matricea citoplasmatic; - organitele celulare. Matricea citoplasmatic se mai numete citosol, matrice fundamen-tal, substan fundamental a citoplasmei sau hialoplasm, toate semnificnd ns aceeai realitate biologic. La microscopul optic, matricea citoplasmatic apare astructurat, cu grade diferite de acidofilie sau bazofilie. Ea se prezint ca o "reea" microtrabecular cu dou faze: - faza polimerizat sub form de reea bogat n proteine structurale i protein-enzime; - faza fluid, bogat n ap, ce se afl n ochiurile reelei microtrabecu-lare. n faza lichid se gsesc diferite molecule ca: glucoz, aminoacizi, ioni sau gaze dizolvate (oxigen, dioxid de carbon, etc.). Matricea citoplasmatic este sediul unor procese metabolice eseniale pentru celul ca: glicoliza, calea pentozo-fosfatic, glicogenogeneza, glico-genoliza, metabolizarea aminoacizilor, biosinteza acizilor grai i a nucleoti-delor. La nivelul matricei citoplasmatice exist o serie de diferenieri care la celula animal cuprind: filamentele de miozin, filamentele de actin, fila-mentele intermediare, microtubulii.
FILAMENTELE DE MIOZIN
Miozina este o protein rspndit n celulele eucariote. Pn n prezent se cunosc dou specii moleculare ale acestei proteine. Miozina de tip I nu este prezent n celulele musculare, fiind implicat n celulele nemusculare n fenomene de motilitate ce au la baz mecanismul actin-miozin (ex. mic-rile din microvili sau transportul veziculelor i organitelor nvelite n mem-brane, de-a lungul filamentelor de actin). Miozina de tip II formeaz miofi-lamente n celulele musculare din muchii striai i netezi.
34 Molecula de miozina de tip II este alctuit din: - dou lanuri polipeptidice grele, fiecare cu greutatea molecular de aprox. 200.000 daltoni, dispuse sub forma unui dublu helix; fiecare lan are mici capuri globuloase dispuse n unghi drept la un capt al mo-leculei, acestea avnd activitate ATP-azic; - patru lanuri uoare, fiecare cu greutatea molecular de aprox. 20.000 daltoni sunt de asemenea componente ale capurilor miozinei, cte dou pentru fiecare cap; au rol n controlul funciei capului n timpul con-traciei musculare. Moleculele de miozin polimerizeaz, genernd filamente de miozin. Prin mpletirea cozilor moleculelor de miozin rezult corpul filamentului, iar capetele globuloase sunt proiectate n afar, fiind legate de corpul fila-mentului prin expansiuni sub form de brae, desprinse din fiecare molecul (sunt poriuni de helix). Aceste expansiuni se numesc puni transversale. Fie-care punte transversal prezint cte dou puncte unde este flexibil. Unul este la locul de emergen al braului din corpul filamentului de miozin, iar cel de-al doilea la locul jonciunii braului cu cele dou capete globuloase. Cele dou zone flexibile ale punilor au rol n contracie/relaxare pentru c permit ndeprtarea/apropierea capetelor fa de corpul filamentului de miozin. O proprietate important a capului miozinei este funcia sa ATP-azic, care permite capului s descompun molecula de ATP. Va rezulta astfel e-nergia necesar n procesul contractil. n celulele nemusculare filamentele de miozin au dimensiuni mici i un caracter tranzitoriu.
FILAMENTELE DE ACTIN
Actina, cea mai bine reprezentat protein a citoscheletului este prezent n celulele musculare unde reprezint aproximativ 20% din proteine, dar i n celulele nemusculare, unde constituie 5-10% dintre proteinele ce-lulare. Actina se prezint sub form de: - actin-G sau globular, care este forma monomeric; - actina-F sau forma filamentoas, care rezult prin polimerizarea actinei-G. Polimerizarea actinei-G este posibil datorit unor situsuri de legare pe care le posed i care permit interaciuni cap-coad cu alte dou molecule de actin-G. Vor rezulta astfel filamentele de actin, care la microscopul elec-tronic apar ca structuri ale cror subuniti sunt dispuse n -helix. Energia necesar procesului de polimerizare al monomerilor este furni-zat de hidroliza ATP. Lungimea filamentelor de actin este controlat de unele proteine care influeneaz asamblarea i dezasamblarea monomerilor de actin. Aceste proteine sunt: proteinele care leag actina, reprezentate de timozin i profi-lin i proteinele de acoperire care conserv lungimea filamentelor, repre-zentate de proteina cap Z, tropomodulina, gelsolina. Filamentele de actin formeaz: - fascicule alctuite din filamente paralele solidarizate de fimbrin la ni-velul microvililor, sau de -actinin, n aceast situaie spaiile mai mari dintre filamente permit interaciunea cu miozina n fasciculele contractile;
35 - reele alctuite din filamente de actin dispuse n zig-zag, legate printr-o protein numit filamin. Rolul fasciculelor i reelelor de filamente de actin este de a susine membrana celular, contribuind astfel la meninerea formei celulelor. La pe-riferia celulelor, sub membrana plasmatic se afl cortexul celular, cu aspec-tul unei reele tridimensionale. De asemenea, la locul unde celulele stabilesc legturi cu alte celule sau cu matricea extracelular, membranele celulare prezint regiuni specializate numite plci de adeziune. n celulele nemusculare filamentele de actin au un caracter tranzitoriu, profilina fiind o protein ce influeneaz procesul de polimerizare al actinei. Vilina i gelsolina sunt proteine care regleaz procesele de polimerizare a ac-tinei prin ionii de Ca 2+ , n acelai timp interconectnd filamentele de actin n mnunchiuri.
MICROTUBULII
Microtubulii, formaiuni filamentoase formate din tubuline, sunt com-ponente principale ale citoscheletului. Tubulinele sunt de dou tipuri: -tubulina i -tubulina. Sunt proteine globulare cu diametrul de aprox. 5 nm, ambele au aceeai mas molecular (aprox. 50 kdal), dar cu secvene diferite ale aminoacizilor. Cele dou subuniti formeaz dimeri, care prin polimerizare vor alctui protofilamente (protomicrotubuli), iar apoi 13 protofilamente prin aranjare sub form de cilindru cu interiorul aparent gol, vor forma un microtubul cu diametrul de 24 nm (fig. 5). Asamblarea i polimerizarea tubuline-lor este controlat de unele proteine asociate microtubulilor, cum sunt: proteina MAP (microtubule - associated protein), care favori-zeaz polimerizarea tubulinelor i leag mic-rotubulii de alte componente celulare i pro-teina tau.
Fig. 5. Asamblarea i polimerizarea tubulinelor.
Mirotubulii din structura citoscheletului sunt aranjai sub form de bandelete, generate i centrate de centrozom. Acesta este centrat de doi centrioli formai din 9 triplete de microtubuli. Diferenierea celulelor ciliate este nsoit de deplasarea centriolilor spre polul apical, unde formeaz sateliii centriolari care devin corpii bazali ai ci-lilor. Microtubulii citoscheletului sufer continuu procese de asamblare i dezasamblare prin polimerizare i depolimerizare. Astfel, 50% din tubuline sunt n stare de sol la nivelul citosolului, constituind rezerva utilizat n pro-cesele de asamblare-dezasamblare desfurate n formarea citoscheletului, a-paratului mitotic sau a inelului de citodierez. Exist unele substane cum sunt vinblastina i colchicina, care interfe-reaz cu asamblarea sau dezasamblarea microtubulilor. Vinblastina inhib formarea microtubulilor i
36 blocheaz formarea fusului mitotic prin fragmen-tarea microtubulilor, iar colchicina se leag de dimerul tubulinic i blocheaz procesul de polimerizare. Microtubulii intervin n: - alctuirea axonemei cililor i flagelilor; - meninerea formei celulare; - transportul intracelular al unor organite; - transportul intracelular al veziculelor; - transportul granulelor de melanin n celulele pigmentare; - alctuirea fusului de diviziune i n transportul cromozomilor de-a lun-gul acestuia; - formarea centriolilor.
FILAMENTELE INTERMEDIARE
Denumite astfel datorit diametrului lor care are valori ntre cele ale microfilamentelor (aprox. 10 nm) i cele ale microtubulilor (aprox. 25 nm), fi-lamentele intermediare rezult prin polimerizarea unor subuniti proteice, care difer n funcie de tipul celular.
Tabel. 1. Localizarea i funciile filamentelor intermediare. Protein Localizare Funcii citocheratin cu cele 20 forme dis- tincte (acide, bazi- ce, neutre)
tonofilamentele celulele epiteliale suport structural; markeri pentru tumorile de origine epitelial.
sunt asociate desmozomilor i hemidesmozomilor desmin muchi scheletali, muchi cardiac, muschi neted formeaz o reea care leag miofi- brilele/miofilamentele; marker pen- tru tumorile de origine muscular vimentin fibroblaste, celule endote- liale; condroblaste, macrofa- ge, celule mezenchimale, celule musculare netede din peretele vacular sunt asociate cu nveliul nuclear i cu porii nucleari; marker pentru tumorile esutului conjunctiv proteina glial fi- brilar acid astrocite, oligodendrocite, ce- lule Schwan suport structural; marker pentru tumorile gliale neurofilamente neuroni suport structural pentru axon i dendrite; faciliteaz starea de gel a citosolului lamininele A, B, C lamina nucler organizarea cisternei perinucleare i a cromatinei perinucleare
Aceste proteine sunt (tabel 1.) : - citocheratinele (familie de 20 de polipeptide), n celulele epiteliale; - neurofilamentele din citoscheletului neuronilor; - proteina glial fibrilar acid, n astrocite; - laminina, n lamina nuclear;
37 - vimentina, n celulele de origine mezenchimal; - desmina, n fibrele musculare netede i n membrana Z din fibrele mus-culare striate. Funciile filamentelor intermediare difer n raport cu tipul celular unde se gsesc, astfel: intervin n ataarea celulelor ntre ele prin ancorarea de proteinele transmembranare ale desmozomilor; intervin n legarea celulelor epiteliale de elementele matricei extrace-lulare, n cazul hemidesmozomilor; la nivelul fibrelor musculare (de toate tipurile), filamentele de desmin au rol structural, susin discurile Z i miofibrilele.
CITOSCHELETUL
Celulele eucariote prezint n matricea citoplasmatic n plus fa de organitele celulare delimitate de endomembrane i o reea complex de fila-mente proteice care constituie citoscheletul . Filamentele proteice ale citoscheletului sunt reprezentate de: - microfilamente (filamentele de actin); - microtubuli; - filamentele intermediare. Filamentele proteice ale citoscheletului sunt legate ntre ele, sau de or-ganite, prin intermediul unor proteine de asociaie. Citoscheletul este o structur dinamic, ntr-o continu reorganizare, cu rolul n: - meninerea formei celulelor, - compartimentarea funcional a citosolului, - realizarea micrilor celulare (emiterea de pseudopode), - fagocitoz, - diviziune celular (aparatul mitotic, inelul de plasmadierez), - ancorarea celulelor ntre ele.
MICRILE CELULARE
Motilitatea celular, o proprietate esenial a celulei, are la baz in-teraciuni n: - sistemul actin-miozin prin activitatea cruia se produc contracia muscular i micrile ameboidale; - sistemul microtubul-dinein prin funcionarea cruia se produc mic-rile cililor i ale flagelilor. Dintre micrile realizate la nivel celular, o importan deosebit o are contracia celulelor musculare cardiace, scheletale i a celor netede.
38 CONTRACIA MUSCULAR
Interaciunea actin-miozin realizat de structuri specializate din mu-chii striai i netezi determin un tip particular de micare celular care poart numele de contracie muscular. Din punct de vedere histologic se pot recunoate trei tipuri distincte de celule sau fibre musculare: - fibra muscular striat scheletal care intr n alctuirea musculaturii scheletului, limbii, faringelui, diafragmului, muchilor extrinseci ai globului ocular, prezint un aranjament ordonat al miofibrilelor res-ponsabile de contracia muscular, sub forma unor benzi transversale clare ce alterneaz cu benzi ntunecate ce-i confer acestui tip de fibr muscular numele de striat (fig. 6); contracia fibrei musculare striate scheletale este voluntar; - fibra muscular striat cardiac ce alctuiete musculatura involun-tar a inimii; are aspect striat n microscopia optic i se afl sub con-trolul inervaiei vegetative; - fibra muscular neted sau visceral ce se gsete n structura organe-lor cavitare sau tubulare, cum ar fi tractul gastrointestinal, aparatul uro-genital, cile respiratorii, vasele de snge, dar i n structura irisului i a corpului ciliar; nu prezint striaiuni n microscopia optic, iar aciunea sa este involuntar, fiind sub controlul sistemului nervos vegetativ.
Fibra muscular striat scheletal este o celul alungit, cilindric, cu o lungime variabil de la un muchi la altul. Se ntinde pe toat lungimea mu-chilor scuri, iar uneori poate ajunge pn la 50 cm lungime (m. croitor). Ce-lulele musculare striate sunt dispuse paralel n lungimea muchiului i nu se ramific. Fibra muscular striat este nvelit de o membran plasmatic lipoproteic cu grosimea de 15 nm, nconjurat de un glicocalix bogat n glicozaminoglicani, iar la exterior de o teac conjunctiv impropriu denumit i membran bazal, alctuit din lamina bazal i lamina reticular. Toate a-ceste structuri formeaz nveliul celular sau sarcolema, rezistent, groas de 0,5-1 m, ce nvelete fibra muscular striat. Celula muscular striat scheletal este o celul multinucleat, are sute de nuclei dispui n axul lung al fibrei, situai la periferie, imediat sub plas-malem. Nucleii au lungimea de aprox. 10 m, sunt ovoizi, uor aplatizai, hipercromatici i conin 1-2 nucleoli.
39 Sarcoplasma, citoplasma fibrei musculare, este semifluid, acidofil, mai abundent i mai dens la periferie. Ea conine proteine necontractile (ca miogenul i mioglobina), numeroi sarcozomi (mitocondrii), complex Golgi slab dezvoltat, lizozomi, incluziuni de glicogen, lipide, pigment de uzur. n citoplasma fibrei musculare exist numeroase miofibrile alctuite din proteine contractile care ocup aprox. 80% din volumul fibrei, dispuse paralel n lungimea fibrei musculare, sub forma unor fascicule denumite co-loanele lui Leydig. Miofibrilele apar n microscopia optic (fig. 6) ca o succesiune ordo-nat de: - discurile ntunecate denumite discurile A, care sunt anizotropice, bire-fringente n lumina polarizat, mai intens colorate cu eozin sunt str-btute de o zon clar, banda H sau striaiunea lui Hensen, care la rndul ei este strbtut la mijloc de linia M, - discurile luminoase sau discurile I, care sunt izotropice i monorefrin-gente n lumina polarizat; sunt mai slab colorate cu eozin i sunt str-btute la mijloc de membrana Z sau stria lui Amici. ntre dou membrane Z succesive se delimiteaz un sarcomer care re-prezint unitatea structural i funcional a miofibrilei. Un sarcomer msoar 2-3 m n repaus, iar n contracie extrem se poate scurta pn la 1m. El cuprinde cte dou jumti de band I ce flancheaz banda A. n timpul contraciei, datorit glisrii miofilamentelor, membranele Z se deplaseaz spre banda A, astfel nct n contracie complet benzile I nu mai sunt vizibile. Dei membrana H din discul A se scurteaz, discul ntunecat A i pstreaz lungimea constant. n muchiul contractat miofibrilele rmn la lungimea iniial, iar sar-comerul se scurteaz i se ngroa. Fibra muscular scheletal prezint o dubl striaiune, una longitudinal dat de miofibrilele dispuse n fascicule paralele cu axul fibrei i alta transversal dat de discurile clare i ntunecate din structura miofibrilelor. La baza contraciei fibrei musculare stau elementele contractile sau miofilamentele, vizibile doar n microscopia electronic, organizate sub forma unor filamente groase de miozin sau subiri de actin, de natur proteic (Fig. 25). Miofilamentele groase de miozin au lungimea de aprox. 1,5 m i grosimea de 12-15 nm. Sunt situate n poriunea central a sarcomerului, adic n banda A. Aceste miofilamente sunt meninute n mijlocul discului A de membrana H ce conine filamente transversale de miomesin (localizate n linia M). Fiecare miofilament este alctuit din aprox. 300 de molecule de mi-ozin. Miofilamentele subiri se prind pe linia Z cu un capt, iar cu cellalt ca-pt ptrund n banda A pn la limita striei H. Astfel, poriunile nvecinate din dou sarcomere conin numai miofilamente subiri. Acestea au lungimea de 2 m, grosimea de 6-7 nm i sunt alctuite din actin, tropomiozin i tro-ponin, care sunt asociate la nivelul discului Z (ce apare ca o linie n zig-zag) cu -actinin. Actina filamentoas (actina-F) este alctuit din dou lanuri rezultate prin polimerizarea moleculelor de actin G (globuloas), lanuri ce sunt dis-puse sub form de dublu helix. Fiecare molecul de actin globuloas are un loc de legare pentru miozin. Tropomiozina este o protein filamentoas dispus n jurul moleculelor de actin, pe care le stabilizeaz. Complexul troponinic ce regleaz legarea actinei de miozin este ataat de tropomiozin, fiind format din trei subuniti denumite:
40 - troponina T, care leag complexul troponinic de tropomiozin n locul unde actina se va lega de miozin, - troponina I, care previne legarea miozinei de actin, - troponina C, care leag calciul ce va modifica aranjamentul spaial al complexului troponinic, permind accesul miozinei la actin. Miozina, actina, tropomiozina i troponina constituie mai mult de 75% din proteinele totale ale fibrei musculare. Proteinele accesorii cu rol n ataarea, dispunerea i alinierea spaial a miofilamentelor includ: - titina (conectina), o protein elastic care conecteaz filamentele groase (din linia M) de discul Z, - nebulina, o protein ataat de discul Z, dispus paralel cu miofila-mentele de actin, - -actinina, o molecul alungit care ajut la ancorarea filamentelor de actin de discul Z, - miomesina, o protein care contribuie la ataarea filamentelor groase la nivelul liniei M, - proteina C, o protein cu funcii asemntoare cu cele ale miomesinei. Se pare c exist peste 20 tipuri de proteine reglatoare care contribuie la meninerea integritii structurale i funcionale ale sarcomerului. ntr-o seciune longitudinal prin fibra muscular scheletal, miofibri-lele dispuse n coloane paralele formeaz coloanele lui Leydig, iar n seciune transversal ele apar grupate n cmpurile Conheim, cu dispunerea miofila-mentelor sub form hexagonal.
Mecanismul contraciei musculare n fibra muscular striat scheletal
Contracia voluntar a musculaturii striate scheletale este sub influena sistemului nervos somatic. Fiecare fibr muscular striat este inervat de fibre nervoase motorii cu origine n motoneuronii o din coarnele anterioare ale mduvei spinrii, care i trimit axonii spre fibrele musculare scheletale unde vor stabili un tip special de sinaps, denumit plac neuromotorie . La acest nivel fibra nervoas i pierde teaca de mielin, fiind acoperit numai de celula Schwan i lamina sa bazal, iar axonul se ramific ntr-un numr de ramuri terminale, fiecare dintre acestea fiind situate n depresiuni ale membranei celulei musculare. Acetilcolina eliberat n spaiul sinaptic se leag de receptorii specifici de la nivelul sarcolemei, care devine mai permeabil pentru ionii de sodiu i se va depolariza. Impulsul nervos ce determin depolarizarea membranei plasmatice se propag de-a lungul celulei musculare i se continu, via sistemul "T" tubu-lar, spre interiorul fibrei musculare. La nivelul triadelor, unda de depolarizare propagat determin deschi-derea canalelor de calciu din membrana reticulului sarcoplasmic i eliberarea n citoplasm a ionilor de calciu stocai n cisternele reticulului sarcoplasmic (Fig. 27).
41 Ionii de Ca 2+ difuzai se vor lega de subunitatea C a troponinei, iar complexul troponinic va suferi o modificare conformaional ce va deplasa tropomiozina n profunzime, elibernd astfel locurile de legare ale miozinei de pe molecula de actin. Mecanismul molecular al contraciei musculare const n glisarea fila-mentelor groase de miozin de-a lungul filamentelor subiri, cu scurtarea sar-comerelor prin apropierea discurilor Z, proces care se realizeaz cu consum de energie metabolic furnizat prin hidroliza legturilor macroergice din mo-lecula de ATP. Premergtor contraciei, capetele globuloase ale moleculei de miozin vor fixa ATP; datorit activitii lor ATP-azice vor hidroliza imediat ATP-ul, energia rezultat va fi nmagazinat, iar produii de clivaj ADP i Pi vor r-mne ataai de cap, care n aceast etap este perpendicular pe filamentul de actin, fr a se leaga nc de acesta. Eliberarea situsurilor active de pe filamentul de actin (prin legarea io-nului Ca 2+ la troponina C) va permite legarea complexului miozin-ATP de subunitatea G a filamentului de actin. Interaciunea dintre capul moleculei de miozin i situsul activ al filamentului de actin determin eliberarea fos-fatului anorganic care genereaz o for ce rotete capul miozinei cu 45 i mpinge filamentele subiri printre cele groase, spre centrul sarcomerului. La sfritul ciclului, pe locul eliberat se va lega o nou molecul de ATP, care va provoca detaarea capului miozinei de pe monomerul filamen-tului de actin. Noua molecul de ATP care a fost legat, va fi la rndul su descom-pus, iar energia degajat va fi nmagazinat i va aeza capul miozinei n poziia sa iniial, gata pentru a ncepe un nou ciclu.
Desfurarea unui ciclu necesit hidroliza unei molecule de ATP, care asigur o deplasare a filamentului subire cu 7 nm, iar pentru producerea unei contracii musculare sunt necesare sute de astfel de cicluri.
Organizarea i contracia fibrei musculare striate cardiace
Muchiul cardiac este format din celule musculare scurte care se ra-mific i se anastomozeaz ntre ele, formnd o reea. Contracia fibrei musculare cardiace este ritmic, automat i involuntar. Celule au lungimea de aprox. 100 m i diametrul de 15-20 m. n mi-croscopia optic prezint striaiuni transversale i longitudinale date de un a-ranjament al filamentelor de actin i miozin similar celui din fibra muscu-lar striat scheletal. nveliul celular este asemntor ca structur cu cel al fibrelor musculare striate scheletale (alctuit din plasmalem, glicocalix i reeaua conjunctivo-reticular), dar este ceva mai subire. Plasmalema pre-zint invaginri sub forma caveolelor i a tubilor transversali "T". n contrast cu fibrele musculare striate scheletale, celulele cardiace sunt solidarizate la extremiti prin jonciuni intercelulare alctuite din desmozomi, ce solidari-zeaz celulele ntre ele, fascia adherens i jonciuni de comunicare, ce facili-teaz comunicarea ntre celule i sincronizarea contraciei acestora. Aceste structuri sunt vizibile n microscopia optic sub forma unor benzi groase, hipercrome, dispuse transversal, denumite discuri intercalare sau striile sca-lariforme ale lui Eberth.
42 Fibra muscular cardiac prezint un singur nucleu dispus central, cu form de bastona, cu axul mare orientat n lungul celulei, ceea ce permite diferenierea acesteia de celula muscular striat scheletal, care este multi-nucleat i prezint nucleii dispui periferic. Sarcoplasma este acidofil i mai abundent dect la fibrele musculare scheletale. n regiunea juxtanuclear exist un spaiu n care sunt concentrate organitele celulare (mitocondriile, aparatul Golgi) i lipofuscin, dar lipsesc miofibrilele. n atrii, n regiunea juxtanuclear sunt concentrate granule atriale cu diametrul de 0,3-0,4 m, ce conin doi hormoni polipeptidici: factorul na-triuretic atrial i factorul natriuretic cerebral. Ambii hormoni au efect diuretic, inhib secreia de renin din rinichi i a aldosteronului din glanda suprarenal. Reticulul sarcoplasmic nu este att de bine organizat ca cel al fibrei musculare scheletale. O cistern terminal a reticulului sarcoplasmic formea-z mpreun cu un tub T, la nivelul discului Z, o diad. Sistemul T tubular este mai larg i mai bine reprezentat dect n muchiul scheletal (Fig. 29). Contracia fibrei musculare cardiace se face dup un mecanism depen-dent de concentraia Ca +2 din citosol, asemntor cu cel din fibra muscular scheletal.
Organizarea fibrei musculare netede
Fibrele musculare netede formeaz musculatura intrinsec a tractului digestiv i genitourinar, tunica medie a vaselor de snge, musculatura cilor respiratorii. Fibre musculare organizate n fascicule sunt ntlnite n iris i corpul ciliar al ochiului, formeaz muchiul erector al firelor de pr, de ase-menea apar n capsula unor organe (ex. splina, prostata). Celula muscular neted are form de fus i poate avea lungimi cu-prinse ntre 20 m n peretele vaselor mici i 500 m n peretele uterului gravid i grosimea de 3-8 m. Fiecare celul are un singur nucleu eucromatic, dispus central, n form de bastona, cu capetele rotunjite, cu 1-2 nucleoli. Cnd celula se afl n stare de contracie nucleul devine spiralat ca un tirbuon. nveliul celular asemntor ca structur cu cel al fibrei musculare striate prezint cteva particulariti. Astfel, n relaie cu membrana plasmatic s-au pus n eviden trei zone de specializri morfofuncionale: caveolele, ariile dense i jonciunile intercelulare. Caveolele sunt microvezicule (aprox. 7.000-15.000/celul) formate prin invaginarea plasmalemei. Sunt dispuse n benzi paralele cu axul lung al celulei i asociate cu mitocondriile i cisternele reticulului endoplasmic. Se pare c acestea au o funcie similar cu sistemul tubular din fibra muscular striat i controleaz influxul ionilor de calciu n urma depolarizrii mem-branei. Ariile dense sunt zone de material electronodens, ce conin -actinin (ntlnit i la nivelul discului Z din fibra muscular scheletal) cu rol n an-corarea filamentelor de actin. Se pare c aceste arii dense ndeplinesc un rol asemntor cu cel al discurilor Z din fibra scheletal. Jonciunile intercelulare de tip gap (nexus) i de tip macula adherens, existente ntre fibrele musculare netede, permit rspndirea undei de depolari-zare de la o celul la alta i reprezint substratul morfologic implicat n con-ductibilitate.
43 Sarcoplasma acidofil conine concentrate la capetele nucleului mito-condrii abundente, ribozomi liberi, aparatul Golgi i granule de glicogen. n restul citoplasmei se afl rspndite filamentele de actin cu diametrul de 6-8 nm, printre filamentele de miozin cu diametrul de 8-10 nm. Aparatul contractil al fibrei musculare netede este mai puin structura-lizat dect n fibra muscular scheletal sau cardiac. Contraciile lente ale fibrelor musculare netede se afl sub controlul sistemului nervos vegetativ i a unor hormoni.
Contracia fibrei musculare netede
Fibra muscular neted este specializat pentru contracia lent, prelungit. Mecanismul prin care aceasta se realizeaz difer de cel al fibrelor musculare striate. Astfel: filamentele de actin au asociat tropomiozina, dar nu i troponina; filamentele groase sunt alctuite din alt tip de miozin dect cel prezent n fibra muscular striat, ce se va lega de actin numai dac lanul uor este fosforilat; cnd fibra muscular neted este relaxat, ionii de calciu sunt seches-trai n reticulul sarcoplasmic, iar cnd fibra muscular neted este n stare de contracie, calciul difuzeaz n citoplasm i se fixeaz pe cal-modulin; n urma acestei interaciuni sunt activate enzime ce fosfori-leaz lanurile uoare ale miozinei i i permite s se fixeze de actin; fibra muscular neted poate rmne n stare de contracie pentru pe-rioade mai lungi de timp, fr s oboseasc. Deoarece proteinele contractile sunt dispuse n reea, celula n stare con-tractat are o form globuloas, iar n stare relaxat este alungit. Pe lng contracie, fibrele musculare netede pot secreta componente ale matricei esutului conjunctiv. Astfel, n peretele vaselor sanguine, n uter, celulele musculare netede au organite dezvoltate pentru a ndeplini funcia secretorie i pot produce colagen, elastin; n unele cazuri pot sintetiza lami-nin, proteoglicani, colagen de tip IV. n peretele arteriolei aferente din glo-merulii renali, celule musculare netede din aparatul juxtaglomerular secret renina, componenta important a sistemului renin-angiotensin ce regleaz presiunea sanguin.
MICAREA AMEBOIDAL
Micarea ameboidal ntlnit frecvent la protozoare este ntlnit i la unele celule din organismul omului, cum sunt leucocitele sau fibroblastele. Locomoia ameboidal ncepe cu emiterea la unul dintre capetele celulei a u-nui pseudopod ce se fixeaz pe suprafaa tisular, iar apoi restul celulei se de-plaseaz n direcia pseudopodului.
Mecanismul locomoiei ameboidale Emiterea i retracia pseudopodelor se bazeaz pe trecere citosolului din stare de gel n stare de sol i invers.
44 Prin utilizarea microscopiei electronice s-a constatat c citoplasma pre-zint dou regiuni cu caracteristici diferite: - endoplasma, situat central, n stare de sol, - ectoplasma, situat imediat sub membrana plasmatic, n stare de gel, nu conine organite, conine o reea tridimensional de filamente de actin interco-nectate de proteinele asociate: filamina, gelsolina, -actinina.
n procesul de emitere a pseudopodelor endoplasma care este n stare de sol se deplaseaz la nivelul prelungirilor celulare unde se va transforma n gel. Aceast modificare reversibil a citoplasmei din stare de sol n stare de gel se realizeaz prin depolimerizarea i polimerizarea filamentelor de actin care intr n alctuirea citoscheletului. Un rol important n acest proces l au ionii de Ca 2+ . Creterea concentraiei acestora determin scindarea filamentelor de actin de ctre gelsolin i astfel citoplasma trece n stare de sol. naintarea celulei presupune i aderarea pseudopodului la structurile tisulare. Astfel, poriunea conductoare devine fix, iar restul celulei este tras nainte spre punctul de fixare. Fibroblastele atunci cnd prezint micri ameboidale, emit n direcia de deplasare nite prelungiri celulare numite lamelipode. Aderena la substrat este realizat de structruri speciale numite plci de adeziune. La extremitatea opus a celulei rmne fibra de retracie, care se poate rupe i rmne ataat la substrat. n timpul deplasrii, pe suprafaa membranei celulare apar ondulaii ce favorizeaz naintarea celulei.
MICAREA CILILOR
Micrile ciliilor de la suprafaa mucoasei respiratorii sau a mucoasei trompelor uterine ale tractului genital sunt micri sacadate. La nivelul cilor respiratorii micrile sacadate ale cililor deplaseaz n direcia faringelui mucusul i particulele pe care le conine, cu o vitez de 1 cm pe minut, realiznd curirea permanent a acestor ci. n trompele uterine cilii mobilizeaz lichidul i ovulul ctre cavitatea uterin. n aceste procese cilul execut o micare rapid spre nainte, n-clinndu-se n unghi ascuit fa de suprafaa celulei i mpinge lichidul aflat la suprafaa celulei n direcia deplasrii cilului. Dup fiecare nclinare cilul se retrage lent spre napoi, realiznd o micare de unduire, care nu are ns nici un efect asupra lichidului. Mecanismul micrii cilului. Nu toate aspectele legate de micrile ci-lului sunt clare, dar s-a constatat c: - ndeprtarea membranei cilului i a altor elemente structurale, dar cu pstrarea axonemei nu afecteaz micarea cilului, - micarea cililor necesit prezena ATP i concentraii adecvate ale ionilor de Mg 2+ i Ca 2+ , - dineina are proprieti ATP-azice, - pentru realizarea micrii spre nainte a cilului, microtubulii din regiu-nea frontal a cilului alunec n afar spre vrful cilului, iar cei din par-tea opus rmn pe loc.
45 Exist defectele genetice privind codificarea proteinelor ciliare. n aceste condiii elementele structurale ale cililor sunt afectate sau chiar lipsesc. Aceste modificri determin perturbri de coordonare a micrii cililor, cu apariia sindromului cililor imobili. Tulburri ale motilitii cililor pot deter-mina: dextrocardia (cordul se gsete n dreapta), cnd n timpul embrioge-nezei datorit defectelor cililor se produce o deplasare anormal a celulelor foielor embrionare; infertilitatea, prin afectarea transportului ovocitului prin trompa uterin; infecii ale cilor respiratorii, prin stagnarea mucusului, ur-mat de multiplicarea bacteriilor.
NUCLEUL
Nucleul este o component celular prezent n toate celulele eucariote, cu excepia hematiilor adulte i a trombocitelor. El a fost descoperit n urm cu peste dou secole (1781) de ctre Fontana, dar conceptul de celule nucleate a fost enunat abia n secolul urmtor (1833) de ctre Brown. Nucleul are un rol primordial n viaa celulei, ndeplinind n esen dou funcii foarte importante: - stocarea codului genetic i transmiterea (perpetuarea) informaiei gene-tice de-a lungul generaiilor, la nivelul su aflndu-se marea majoritate a ADN-ului celular, care reprezint aprox. 20% din masa nucleului; - reglarea i controlul tuturor proceselor vitale care au loc la nivel celular. Structura nucleului difer n funcie de fazele ciclului celular. Astfel, n interfaz (perioada dintre dou diviziuni) se descrie nucleul interfazic sau metabolic, alctuit din: - nveliul nuclear, care separ coninutul nucleului de cel al cito-plasmei; - matricea nuclear, care conine ncorporate n ea alte dou compo-nente ale nucleului: nucleolul i cromatina. n timpul diviziunii celulare nveliul nuclear dispare, nucleolul de ase-menea, iar cromatina se organizeaz sub form de cromozomi. Marea majoritate a celulelor eucariote prezint un singur nucleu, dar e-xist i celule binucleate cum ar fi hepatocitele, dintre care 7-10% prezint doi nuclei. Exist i celule care n mod normal sunt multinucleate. Unele dintre acestea prezint zeci de nuclei, ca osteoclastele, care au pn la 60 de nuclei, sau chiar sute, cum sunt fibrele musculare striate, ce au pn la 200 de nuclei. Celule multinucleate pot apare ns n diferite situaii patologice, cum ar fi celulele Langhans din infecia tuberculoas sau celulele de corp strin. Celule pot deveni multinucleate prin unul din cele dou mecanisme: - nucleul unei celule se divide de mai multe ori fr ca aceste diviziuni s fie urmate de diviziunea citoplasmei i separarea n celule fiice, rezultnd astfel un plasmodiu; - mai multe celule uninucleate pot fuziona formnd un sinciiu. Forma nucleului este adaptat n funcie de forma celulei, astfel: - celulele sferice, cubice, poliedrice au nucleul sferic; - celulele prismatice au nucleul oval; - celulele pavimentoase au nucleul aplatizat; - celulele fusiforme au nucleul alungit.
46 Exist ns i excepii de la aceast regul. Astfel, leucocitele granulare din snge sunt celule sferice i au un nucleu lobat, format din mai muli lobi unii ntre ei. n cele mai multe cazuri, nucleul este dispus central n celul, dar n a-numite stri funcionale el poate ocupa i alte poziii. Astfel, n celulele glan-dulare, n care la nivelul polului apical se acumuleaz granule de secreie, nucleul este mpins nspre polul bazal, iar n celulele adipoase nucleul este mpins la periferie de ctre lipidele acumulate n citoplasm. Dimensiunile nucleului difer n funcie de tipul celular, vrsta celulei, activitatea sa metabolic, etc. n medie, nucleul celulelor eucariote are di-ametrul cuprins ntre 5-25 m. Celulele tinere, cu metabolism activ au nucleu mare, eucromatic, iar celulele mbtrnite au nucleu mic, heterocromatic. ntre volumul nucleului i volumul citoplasmei se stabilete un raport cunoscut sub numele de raport nucleo-citoplasmatic, care poate varia n limite largi, de la 1/3 la 1/10. Cu ct celula este mai tnr i mai activ, cu att nucleul este mai mare. n anumite situaii patologice, cum ar fi cazul formaiunilor tumorale (n care toate celulele sunt tinere), determinarea aces-tui raport reprezint un test cu valoare de diagnostic. Valoarea raportului nucleo-citoplasmatic (RNC) se determin dup for-mula:
V n
RNC = -----------
V c - V n
n care: V n = volumul nucleului; V c = volumul celulei. Cnd raportul nucleo-citoplasmatic al unei celule atinge valoarea maxi-m, celula intr n diviziune, n urma creia se restabilete RNC normal.
STRUCTURA NUCLEULUI INTERFAZIC
Nucleul interfazic sau metabolic prezent n celulele eucariote aflate n interfaz are o structur tipic, constituit din: - nveliul nuclear; - matricea nuclear (nucleoplasma). nveliul nuclear este un sistem special de endomembrane, care separ coninutul nuclear de citosol. El este alctuit din cisterna perinuclear, conti-nu, strbtut din loc n loc de porii nucleari. Cisterna perinuclear este for-mat din urmtoarele componente: - membrana nuclear extern; - membrana nuclear intern; - spaiul cisternal (spaiul perinuclear intermembranar); - porii nucleari. Cele dou membrane au structura similar tuturor endomembranelor (li-poproteice) dar compoziia lor chimic este puin diferit n sensul c n structura lor predomin proteinele, aprox. 70%. Lipidele reprezint 20%, iar restul sunt glucide. Membrana nuclear extern are grosimea de 6 nm. Ea este n continui-tate din loc n loc cu membranele reticulului endoplasmic rugos i poate avea ataai ribozomi pe faa ei
47 dinspre citoplasm. Pe lng ribozomi, membrana nuclear extern mai prezint numeroase puncte de ancorare ale citoschele-tului, respectiv pentru ancorarea microtubulilor i a filamentelor de actin. Membrana nuclear intern are grosimea de 7-8 nm. Ea are un contur continuu i mai rigid dect membrana extern, deoarece sub ea, pe faa nu-cleoplasmatic, exist o reea proteic cunoscut sub denumirea de lamina fibrosa sau lamina nuclear, asemntoare unui citoschelet. Aceast forma-iune are o grosime variabil i este compus dintr-o reea fibroas de natur proteic, n care intr trei polipeptide denumite laminele A, B i C, care au capacitatea de a se lega specific de proteinele membranei nucleare interne. Secvena aminoacizilor acestor lamine este analoag cu cea a proteinelor fi-lamentelor intermediare ce intr n componena citoscheletului. Laminele au i capacitatea de a se lega de regiunile de cromatin nuclear, ancornd astfel cromozomii interfazici de nveliul nuclear (membrana intern). Spaiul cisternal este delimitat de cele dou membrane (intern i extern) i are o grosime variabil cuprins ntre 10-60 nm, care poate crete mult n unele situaii patologice. n acest spaiu au fost puse n eviden histone, imunoglobuline, ap, molecule mici solubile i uneori chiar virusuri ncapsulate. Din loc n loc, spaiul cisternal comunic cu reticulul endoplasmic ru-gos. Porii nucleari sunt orificii ce strbat din loc n loc nveliul nuclear la toate celulele eucariote. La nivelul porilor membrana nuclear extern fuzio-neaz cu membrana nuclear intern, astfel nct cele dou membrane se afl n continuitate. Numrul i distribuia porilor difer n funcie de specie i de tipul celular. La mamifere constituie 10% din suprafaa nveliului nuclear i au o distribuie ordonat. Arhitectura porilor a determinat introducerea termenului de complex al porului sau complex por. n structura complexelor porale intr niste proteine numite nu-cleoporine, care sunt grupate n: - componenta columnar ce constitue suprafaa intern a porului nuclear, - componenta anular care este constituit din dou octogoane, unul pe frontul citoplasmatic si unul pe frontul nuclear al porului nuclear: octogoanele sunt realizate de cte opt nucleoporine i sunt concentrice, - componenta luminara este reprezentata de proteine transmembranare care leaga complexul poral la invelisul nuclear. De la periferia porului nuclear pornesc niste filamente spre citoplasm, iar altele spre interiorul nucleului. Aici se ancoreaza la o structura n forma de inel. Porii nucleari sau complexele porale au o mare importan pentru c permit transportul selectiv al unor molecule sau ioni din interiorul nucleului n citosol i invers, din citosol n nucleu. Astfel, n interiorul nucleului vor ptrunde prin complexele porale enzime necesare sintezei ADN, proteine, aminoacizi, ioni. Invers, din nucleu n citoplasm sunt transportai precursori ribozomali sintetizati sau produsi n nucleol. Complexele porale au n general un diametru de aproximativ 9 nm, de aceea molecule sau ioni cu dimensiuni mai mici trec liber prin complexele porale. Molecule mai mari ns pot s treaca printr-un transport activ ntr-o direcie sau n cealalt. n acest proces de transport intervin dou tipuri de moelecule, RAN i karioferine (importine, exportine). Pentru a fi recunoscute moleculele ce urmeaz a fi transportate prin porii nucleari intervin nite semnale i anume semnalul de localizare nucleara (NLS) i semnalul de export
48 nuclear (NES). NLS-ul este o secven de 3, 4 aminoacizi (de obicei lizina, arginina, prolina) aflat n structura unor peptide. Importinele prezint o poriune i o poriune . Poriunea recunoate NLS-ul din structura proteinei i leag proteina respectiv. n prezena Ran-GTP, complexul realizat se leaga la nucleoporine apoi patrunde n interiorul nucleului. n mod asemntor exportinele recunosc proteinele care au n structura lor NES-ul, complexul format se ataaz la nucleoporine. Molecula respectiv va fi exportata astfel n citosol. Energia necesar procesului este stocata n gradientul transmembranar, Ran-GDP ce se afl n concentraie mai mare n citosol, iar Ran-GTP n nucleu.
Matricea nuclear (carioplasma, cariolimfa) reprezint acea parte a nucleului care n mod aparent este lipsit de structur. Ea apare ca o mas incolor n care se evideniaz alte dou componente nucleare: nucleolul i cro-matina. Dup extragerea cromatinei i a nucleolului, rmne matricea nuclear propriu-zis, alctuit dintr-o reea proteic stabil, cu greutate molecular mare. Cea mai mare parte a proteinelor o reprezint proteinele nonhistonice, urmate de nucleoplasmin. Matricea nuclear este o structur labil, dinamic, capabil de contractilitate. Ea reprezint, prin analogie cu citoscheletul, un adevrat nucleoschelet. n afar de aceast reea proteic, matricea nuclear mai conine: ap, ioni, molecule mici, enzime specifice, etc. Matricea nuclear are rol esenial n: - determinarea formei nucleului; - medierea aciunii unor hormoni; - medierea aciunii unor enzime specifice ale unor procese glicolitice, n sinteza NAD (nicotin adenin dinucleotid) i altele.
NUCLEOLUL
La microscopul optic, n celulele fixate, nucleolul apare ca un corpuscul bazofil, mai refringent dect carioplasma nconjurtoare. Nucleolul este evident numai n nucleul interfazic, dispare n timpul diviziunii celulare i reapare la sfritul mitozei, cnd se reorganizeaz din componente ale unor cromozomi care poart numele de organizatori nucleolari. El este prezent n nucleul tuturor celulelor eucariote nucleate, lipsind doar n celulele embrionu-lui (nu se produce nc sintez proprie). Nucleolul nu este delimitat de membran. n general are forma sferic i este dispus mai mult sau mai puin central n nucleu, dar n momentul cnd se elibereaz n citoplasm ARN-ul, el se deplaseaz spre nveliul nuclear. Odat cu mbtrnirea, nucleolul capt o form din ce n ce mai neregulat. Nucleolul are densitatea cea mai mare dintre toate structurile celulare. Dimensiunea medie a nucleolului este de 1-3 m. Este mai mare i mai dens n celulele cu activitate metabolic intens (ex. celule secretorii, neuroni) i mai mic n cele cu activitate mai redus (ex. celule epiteliale). n general, nucleolul are dimensiuni mari n celulele care prezint cretere rapid. Cei mai mari nucleoli se ntlnesc n celulele maligne, unde poate ajunge s ocupe pn la 30% din masa nucleului i s prezinte forme aberante. Numrul nucleolilor este variabil. Cel mai frecvent ntr-un nucleu exist un singur nucleol, dar uneori pot fi prezeni mai muli. n anumite limite numrul nucleolilor este
49 corelat cu gradul de ploidie, existnd de obicei cte un nucleol pentru fiecare set cromozomial.
La microscopul electronic, nucleolul prezint trei componete: - componenta granular (pars granulosa) alctuit din granule mici cu diametrul de 15- 20 nm; este componenta majoritar a nucleolului, fiind format din precursorii ribozomilor, respectiv particule ale subuni-tilor ribozomale aflate n diferite stadii de maturare; - componenta fibrilar (pars fibrosa) numit i nucleonem, alctuit din: o fibrile fine, cu diametrul de 5 nm, reprezentnd ADN-ul com-plementar pe baza cruia se induce sinteza ARNr, ele corespund transcripiei genelor ARN-ului ribozonal, de la care ncepe for-marea ribozomilor, o subuniti de 45 S, reprezentnd produsul primar rezultat n urma transcripiei, - componenta amorf (pars amorpha) constituit din elemente ale cario-plasmei, respectiv ap, molecule mici, electrolii i care ocup zonele libere dintre granulele i filamentele nucleolului. n compoziia chimic a nucleolului intr ADN, ARN i proteine. ADN-ul reprezint 3% din masa nucleolului. El intr n alctuirea organizatorilor nucleolari, care sunt nite bucle ale perechilor de cromozomi 13, 14, 15, 20 i 21, care ptrund n nucleol i sunt rspunztoare de sinteza ARNr i a proteinelor ribozomale. Organizatorii nucleolari controleaz i formarea nucleolilor. Astfel, la sfritul mitozei se formeaz 5 nucleoli co-respunznd cte unul pentru fiecare din cei 5 cromozomi mai sus menionai i care ulterior vor fuziona ntr-un singur nucleol. ARN-ul ocup 7% din masa nucleolului, fiind constituit din ARNm (ARN mesager), ARNr (ARN ribozomal) care se sintetizeaz n nucleol i ARNt (ARN de transfer sau de transport) aflat n tranzit prin nucleol. Proteinele ocup 90% din masa nucleolului. Aceste proteine provin din citoplasm i ele sunt reprezentate de enzimele implicate n transcriere i de precursorii ribozomali. Funciile nucleolului sunt urmtoarele: - biogeneza subunitilor ribozomale, funcia principal a nucleolului, ca-re ncepe prin copierea de pe buclele cromozomilor (organizatorilor nucleolari) a genelor care codific ARNr i proteinele ribozomale i apoi urmeaz sinteza ARNr i stocarea precursorilor ribozomali nainte de a fi transportai n citosol; - stocarea i transferul ARNt i mai ales ARNm, prin care codific sec-venialitatea proteinelor celulare i extracelulare, astfel c nucleolul re-prezint o staie de tranzit n transmiterea ARNm i ARNt n citoplas-m; - pregtirea celulelor pentru diviziunea mitotic, fiind demonstrat faptul c celulele crora li s-a distrus nucleolul nu se mai divid.
50
CROMATINA NUCLEAR
Cromatina este un material nuclear care pe coloraiile histologice are o mare afinitate fa de coloranii bazici. Cnd cromatina este rarefiat nucleul se coloreaz slab (nucleu eucromatic), iar cnd este mai condensat se colo-reaz intens bazofil (nucleu heterocromatic). Cromatina reprezint partea vi-zibil la microscopul optic a cromozomilor n interfaz. Cromatina i cromo-zomii sunt de fapt dou aspecte ale aceluiai material nuclear i anume ADN (cromozomii reprezint aspectul din mitoz i cromatina aspectul din inter-faz). n interfaz cromatina reprezint forma relaxat (desfurat) a cromo-zomilor, iar n cursul diviziunii cromatina formeaz structurile condensate ale cromozomilor. n interfaz cromatina se prezint sub dou aspecte: - eucromatina, o reea de filamente fine, mai slab colorate; - heterocromatina, blocuri condensate i intens colorate. Din punct de vedere biochimic, cele dou tipuri de cromatin au aceeai compoziie: ADN, proteine histonice i nonhistonice i cantiti foarte mici de ARN. Diferena morfologic dintre ele este dat de gradul diferit de spiralizare a ADN-ului. Acesta este intens spiralizat n heterocromatin i slab spiralizat n eucromatin.
Eucromatina fiind mai lax este accesibil transcrierii mesajului dei-nut de moleculele de ADN. Ea este de dou feluri: - eucromatina activ, care este transcris continuu; - eucromatina permisiv, care este transcris cu intermiten, numai n urma unei inducii enzimatice.
Heterocromatina este nalt condensat i inactiv pentru transcripia ADN-ului. Exist dou feluri de heterocromatin: - heterocromatina constitutiv care este constant condensat i conine gene care nu se transcriu; n cromozomi ea este situat pe lng centro-meri i constituie 15% din ADN-ul repetitiv; - heterocromatina facultativ prezint regiuni condensate doar n anu-mite celule, reflectnd diferene stabile de activitate genetic ntre diferitele tipuri de celule ale unui organism. Celulele embrionare au o heterocromatin redus pe cnd cele nalt specializate au o cantitate mare, ceea ce nseamn c pe msur ce se dezvolt celulele, din ce n ce mai multe gene sunt inactivate. De regul, heterocroma-tina facultativ conine gene structurale represate care s-au transcris sau se vor transcrie ntr-un anumit stadiu evolutiv al celulei. Raportul eucromatin/heterocromatin reprezint un indiciu al activit-ii metabolice. Astfel, un nucleu cu mult eucromatin are ADN-ul relaxat i aici sunt transcrise mai multe gene, fiind caracteristic unor celule cu activitate metabolic intens. Un nucleu cu mult heterocromatin are ADN-ul condensat i aici genele nu se transcriu, ceea ce caracterizeaz celulele cu ac-tivitate metabolic redus.
51
CROMOZOMII
n nucleul interfazic cromozomii sunt prezeni la nivelul cromatinei nucleare, respectiv n eucromatin i heterocromatin. Ei se individualizeaz n timpul diviziunii celulare cnd pot fi evideniai uor, datorit unui fenomen de condensare i spiralizare. Cromozomii metafazici sunt cel mai uor de ob-servat la microscop i ei au dimensiuni variabile ntre 1,5 i 10 m. Cromozomii reprezint o caracteristic de specie, fiind n numr con-stant la o anumit specie. Ei au rol important n transmiterea ereditar a ca-racterelor. Acestea sunt determinate de gene, iar genele sunt localizate n cromozomi. Genele sunt constituite din acizi nucleici, care reprezint suportul material al ereditii. Fiecare specie i fiecare individ are propriul su program genetic nscris n genele din cromozomii si. Materialul genetic este reprezentat de ADN. Gena este o poriune din molecula de ADN, iar in-formaia este stocat n gen sub form codificat. O gen cuprinde 300-1.500 nucleotide, iar cromozomii umani conin peste 30.000 de gene. Marea majoritate a materialului genetic se gsete n cromozomi i o parte foarte mic se afl n mitocondrii. Transmiterea informaiei genetice se realizeaz astfel: n faza S (sintetic) a ciclului celular se produce replicarea ADN-ului din cromozomi, ADN-ul nou sintetizat fiind o replic (o copie) a secvenei de nucleotide din ADN-ul iniial i conine aceeai informaie ge-netic. n cursul diviziunii celulare, ADN-ul cromozomial se mparte n mod egal la cele dou celule fiice care vor avea aceeai informaie genetic ca i generaia precedent. Din punct de vedere biochimic, cromozomii sunt alctuii din ADN, proteine histonice i nonhistonice precum i o cantitate foarte redus de ARN. Din punct de vedere morfologic fiecare cromozom este format din dou cromatide surori absolut identice, fiecare cromatid fiind o molecul de ADN. Cele dou cromatide conin aceleai gene structurale. Extremitile cromatidelor poart numele de telomere. Locul n care cele dou cromatide se unesc poart numele de centromer sau constricie primar. Aceast zon este mai puin colorabil i la microscopul elctronic s-a constatat c este constituit din dou formaiuni cilindrice numite kinetocori, respectiv cte unul pentru fiecare cromatid. Dup poziia centromerului deosebim patru tipuri de cromozomi: - metacentrici, cu centromerul situat n, sau imediat lng centrul cromozomului, ca urmare braele unui astfel de cromozom sunt aproape egale, - submetacentrici, cnd centromerul este plasat excentric i mparte cro-mozomul n dou brae scurte i dou lungi, - subtelocentrici (acrocentrici), cu centromerul astfel dispus nct braele scurte sunt puin vizibile, - telocentrici, cu centromerul dispus la unul dintre capetele cromozomu-lui, deci nu exist brae scurte. La nivelul telomerelor pot s mai existe strangulri care poart denumi-rea de constricii secundare.
52 CICLUL CELULAR
Prin ciclul celular se nelege perioada de timp scurs din momentul n-cheierii diviziunii prin care a luat natere o celul i pn n momentul nche-ierii propriei sale diviziuni. Ciclul celular cuprinde dou mari faze: - interfaza (perioada dintre dou diviziuni), - mitoza (perioada diviziunii celulare). Interfaza nu este o perioad de repaus ci o perioad de activitate meta-bolic intens n care celula i realizeaz funciile specifice i n acelai timp se fac i pregtirile pentru o nou mitoz. Interfaza cuprinde trei perioade distincte: - perioada G 1 sau presintetic, n care ADN-ul cromozomial are o funcie heterocatalitic, adic n aceast perioad particip la sinteza tuturor tipurilor de ARN i prin aceasta la sinteza diferitelor tipuri de proteine la nivelul ribozomilor, - perioada S sau sintetic, n care ADN-ul cromozomial are o funcie au-tocatalitic, adic are loc fenomenul de duplicare semiconservativ a ADN-ului cromozomial (2C4C), - perioada G 2 sau postsintetic n care ADN-ul i reia funcia heteroca-talitic, masa citoplasmatic crete, se acumuleaz substane energetice necesare procesului de mitoz i se sintetizeaz proteinele aparatului mitotic. n ciclul celular exist anumite puncte de restricie pe care celula trebuie s le depeasc pentru a putea parcurge etapele urmtoare. Dac celula nu este capabil s-l depeasc, evoluia ei se oprete n etapa ciclului celular situat imediat naintea punctului de restricie. Cel mai important punct de restricie este situat la trecerea din perioada G 1 n perioada S. Ca durat n timp, ciclul celular este de aproximativ 16 ore n culturi celulare (G 1 = 5 ore, S = 7 ore, G 2 = 3 ore, M = 1 or). ntre diferitele tipuri de celule din organism exist mari diferene n ceea ce privete durata ciclului celular.
Astfel, exist: - celule cu ciclul celular scurt, de aproximativ 72 ore, cum sunt enteroci-tele, - celule cu ciclul mediu, cum sunt celulele epidermului, cu ciclul celular de 30 zile, sau hepatocitele cu un ciclu de aproximativ 100 zile, - celule au ciclul lung de mai multe luni de zile, cum sunt celulele cartilaginoase, - celule perpetue, cum ar fi neuronii sau fibrele musculare cardiace, a c-ror ciclu dureaz ct viaa individului.
Sub aspectul desfurrii ciclului celular, celulele se mpart n: - celule statice, - celule n transit, - celule stem (matc, su, precursoare). Celulele statice sunt celule foarte specializate cum ar fi neuronii, fibrele musculare cardiace i scheletale, care sunt situate n faza G 1 a ciclului celular, faz de care nu trec niciodat.
53 Celulele n tranzit cuprind cea mai mare parte a celulelor din organism. Ele sunt capabile de 1-2 cicluri celulare, dup care i pierd capacitatea de diviziune. Ele sunt nlocuite mereu cu celule noi provenite din celule pre-cursoare. Celulele stem sunt reprezentate de un numr redus de celule, ce i ps-treaz proprietatea de diviziune pe tot parcursul vieii individului. n mod normal, aceste celule stem se afl ntr-o faz blocat a ciclului celular (G 0 ) de unde nu ies dect n urma aciunii unor stimuli. Ciclul celular poate fi influenat de: - factori generali ca: temperatura, lumina, ritmul circadian, hormoni (ex. hipofizari, tiroidieni), - factori intracelulari ca: o modificarea raportului nucleo-citoplasmatic, o factorii de cretere ai fibroblastelor, condrocitelor, celulelor epi-dermice, o factori genetici, n programul genetic fiind nscris numrul de cicluri celulare pe care celula l poate desfura (ex. fibroblastee au 50 de cicluri), - factori intercelulari, adic mesageri chimici venii de la alte celule; n vecintatea unor celule care mor, alte celule intr n mitoz; exist apoi hormoni locali (chalone) care induc mitoze la distan, n celule din acelai esut. Exist o seama de antimitotice utilizate n scop terapeutic cum ar fi: ci-tostaticele, radiaii ionizante, etc.
MITOZA
Mitoza (mitos-filament) este modalitatea normal de diviziune a ce-lulelor somatice. Ea se mai numete i diviziune indirect, pentru c mo-dificrile din nucleu le preced pe cele din citoplasm. Mitoza este ecuaional pentru c celulele fiice dobndesc aceeai cantitate de ADN i acelai cariotip ca i celula mam (2n, 2C). Mitoza este un proces biologic esenial care st la baza creterii i dife-renierii celulare, rennoirii celulelor, reparrii esuturilor, formrii i creterii tumorilor. Ea se mparte n patru faze (Fig. 35): - profaza, - metafaza, - anafaza, - telofaza. Durata mitozei la om este de circa 60 minute, iar fazele au o durat inegal. Astfel, profaza dureaz 30 minute, metafaza 8 minute, anafaza 4 mi-nute, iar telofaza 18 minute. Profaza debuteaz prin apariia celui de-al doilea centriol, fr alte modificri vizibile la nivelul nucleului sau citoplasmei. Apoi cei doi centrioli migreaz fiecare nspre un pol al celulei, iar ntre ei se dispun filamentele care vor alctui fusul de diviziune. Concomitent au loc fenomene nucleare, marcate prin dispariia nucleolilor, condensarea cromatinei i individualizarea cromozomilor, care se dispun cap la cap i constituie o formaiune numit spirem. n continuare cromozomii se individualizeaz, nveliul nuclear se dizolv i astfel nucleoplasma (mpreun cu cromozomii) se amestec cu citosolul. Dup dezorganizarea nucleului, fusul de diviziune tinde s ocupe poziie central n celul.
54 Metafaza se deruleaz n continuarea profazei i ncepe prin ataarea cromozomilor la filamentele fusului de diviziune, n zona ecuatorial a aces-tuia, alctuind placa ecuatorial metafazic. La nivelul acesteia, axa lung a fiecrui cromozom este perpendicular pe axa fusului mitotic, fiecare cro-matid fiind legat de o fibr din fus, prin intermediul kinetocorului. Ulterior are loc clivarea (despicarea) longitudinal a cromozomilor cu separarea celor dou cromatide surori, rezultnd astfel dou seturi de cromozomi monocro- matidici. Anafaza se caracterizeaz prin faptul c n cursul ei cele dou seturi de cromozomi se vor deplasa treptat nspre polii celulei (unul spre un pol iar ce-llalt spre polul opus). Telofaza ncepe cnd cele dou seturi de cromozomi ajung la cei doi poli ai celulei. n continuare, fusul de diviziune se dezorganizeaz, iar cro-mozomii se aeaz cap la cap refcnd spiremul, care ulterior se va transfor-ma ntr-o reea de cromatin. Apoi, n jurul cromatinei se reorganizeaz n-veliul nuclear i se reface nucleolul. n zona central a celulei, citoplasma se stranguleaz treptat, pn la separarea complet a celor dou celule, fenomen numit citodierez. Vor rezulta astfel dou celule fiice, fiecare avnd o cantitate de ADN egal cu aceea a celulei mam. Dei n urma mitozei rezult dou celule cu aceeai cantitate de ADN ca i celula din care au provenit, celulele rezultate nu se vor asemna ntotdea-una din toate punctele de vedere cu celula mam i uneori nici ntre ele. Dup gradul de asemnare dintre cele dou celule fiice i celula mam, se descriu patru forme de mitoz: - mitoza homoplastic numit i homotipic, n cazul creia celulele fiice se aseamn att ntre ele ct i cu celula mam; aceast form de mitoz se ntlnete numai la celulele nedifeniate (celule foarte tinere), - mitoza heteroplastic sau heterotipic, n cazul creia celulele rezultate se aseaman ntre ele, dar nu i cu celula mam; celulele rezultate sunt mai mature (mai difereniate) dect celula din care s-au format, de aceea aceast form de mitoz se mai numete i mitoz de di-fereniere, - mitoza homoheteroplastic sau asimetric, n cazul creia celulele fiice nu se aseamn ntre ele, una semn cu celula mam, iar cealalt este diferit, - mitoza de dedifereniere, care d natere la dou celule fiice ce se asea-mn ntre ele dar nu i cu celula mam, acestea fiind mai tinere (mai puin difereniate); aceast diviziune apare frecvent la limfocite cu for-mare de limfoblati.
Factorii care determin intrarea celulei n mitoz nu sunt nc toi pe deplin lmurii. Cei care particip ntr-o msur mai mare sau mai mic la de-clanarea acestui proces pot fi mprii n trei mari categorii: - factori generali: temperatura, lumina, unii hormoni (tiroidieni, hipofi-zari), vitamine, etc. - factori intracelulari, dintre care cel mai important este modificarea ra-portului nucleo- citoplasmatic i a raportului nucleolo-nuclear; prin creterea volumului citoplasmei fenomenele celulare nu mai pot fi controlate eficient de nucleu i n acest caz se impune intrarea celulei n diviziune cu refacerea unui raport nucleo-citoplasmatic normal, - factori intercelulari, care se pare c sunt cei mai importani. n fiecare organ sau esut se pstreaz, n mod normal, un echilibru ntre celulele mature (funcionale), celulele uzate i
55 celulele care se divid pentru a le nlocui pe cele care se distrug. Ori de cte ori o celul sau un grup de celule moare, o alt celul sau alt grup de celule intr n diviziune, meninnd n condiii normale un raport corespunztor ntre cele trei categorii de celule.
MEIOZA
Meioza: - este tipul de diviziune celular prin care se formeaz celulele sexuale, ovulul i spermatozoidul sunt celule haploide (n, C), prin unirea lor se formeaz zigotul care este o celul diploid (2n, 2C). - este alctuit din dou diviziuni succesive, meioza I i meioza II. o n meioza I are loc njumtirea numrului de cromozomi (diviziune reducional) n o n meioza II se aseamn pn la identitate cu o mitoz obinuit (diviziune ecuaional). Cele dou diviziuni meiotice se deosebesc prin modul de repartizare a materialului genetic la celulele fiice: - n anafaza meiozei I migreaz spre cei doi poli ai celulei cromozomi ntregi (bicromatidici), nu cromatide separate ca n mitoz. - cromatidele surori ale unui cromozom bicromatidic se vor separa i vor migra spre cei doi poli ai celulei abia n anafaza celei de a doua diviziuni meiotice. Celulele care au calitatea de a parcurge diviziunea meiotic sunt sper-matocitul i ovocitul primar. Dup prima diviziune meiotic vor lua natere spermatocitul i ovocitul secundar, care n urma celei de-a doua diviziuni meiotice, vor deveni spermatozoid, respectiv ovul. La fel ca i n cazul mitozei, pentru ca o celul s poat ncepe procesul de diviziune meiotic, ea trebuie s parcurg n prealabil faza S i s-i dubleze cantitatea de ADN. Numai dup aceasta va intra n profaza primei diviziuni meiotice. Meioza I cuprinde aceleai faze ca i mitoza (profaza, metafaza, anafa-za i telofaza), dar care se realizeaz diferit. Profaza I prezint urmtoarele subfaze: - leptoten, n care cromozomii sunt nc alungii i greu de individua-lizat, dar prin declanarea procesului de spiralizare i condensare, vor deveni din ce n ce mai vizibili, - zigoten, n care cromozomii omologi (din setul matern i patern) se aeaz unul n dreptul celuilalt, parte corespondent cu parte co-respondent se apropie, se alipesc, dar nu fuzioneaz, procesul poart numele de conjugare, n anumite zon, cromozomii omologi stabilesc legturi ntre ei, numite sinapse. - pachiten, n care se continu procesul de spiralizare a cromozomilor, o devin scuri i groi, o legturile dintre ei devin foatre stnse i suprapunerea lor este perfect, aa nct o pereche de cromozomi omologi se vede ca unul singur,
56 astfel de cromozomi omologi poart numele de bivaleni i n aceast situaie celula pare haploid, legtura foarte strns dintre cromatidele omologilor care formeaz un bivalent permite schimbul de fragmente ntre cromatidele nesurori, fenomen numit "crossing over". - diploten, n care cromozomii ncep s se separe longitudinal i astfel se evideniaz din nou structura lor bicromatidic: separarea lor nu este complet, ei rmnnd nc ataai la nivelul chiasmelor (poziia de pe cromatid unde a avut loc fenomenul de crossing over), astfel perechile de omologi formeaz tetrade cromozomiale. - diachineza, n care segmentele cromatidice se dispun de o parte i de alta a chiasmei, se rotesc i centromerii omologilor se ndeprteaz, determinnd alunecarea chiasmelor spre telomeri. n profaza I se produc astfel un numr mare de evenimente dintre care trei sunt mai importante: condensarea cromozomilor, conjugarea i crossing over-ul. Metafaza I se caracterizeaz prin dispariia membranei nucleare i for-marea primului fus de diviziune pe filamentele cruia, la nivelul plcii ecua-toriale, se ataaz cromozomii. n anafaza I fiecare omolog al unei perechi de bivaleni se deplaseaz spre unul din polii celulei (unul spre un pol, iar cellalt spre polul opus). Re-zult n acest fel dou celule haploide, dar cu fiecare cromozom bicromati-dic. Telofaza I nu este o faz obligatorie. Uneori la animale se formeaz o membran n jurul nucleilor i celula revine la stadiul din interfaz. Dar nici n aceast situaie celula nu intr n faza S i nu i dubleaz cantitatea de ADN.
Meioza II (a doua diviziune meiotic) are loc imediat dup meioza I, iar ca desfurare se aseamn cu mitoza. Exist totui cteva diferene fa de mitoz astfel: - meioza II nu este precedat de sintez de ADN; - n cursul meiozei II se divid celule haploide; - n cursul meiozei II cromatidele surori nu mai sunt identice din punct de vedere genetic, datorit schimbului de fragmente ntre cromatidele nesurori din timpul profazei I (crossing over-ul). Abia n cursul meiozei II cromatidele surori se despart la nivelul cen-tromerului i are loc deplasarea lor spre polii celulei deoarece n meioza I s-a produs numai separarea cromozomilor omologi. La sfritul anafazei II re-zult patru nuclei haploizi n care fiecare cromozom este monocromatidic. Astfel, prin dou diviziuni succesive, meioza mparte cele patru cromatide ale unui bivalent la patru celule distincte.
57 ORGANITELE CELULARE NEDELIMITATE DE MEMBRAN
RIBOZOMII
Ribozomii reprezint componente deosebit de importante ale comparti-mentului matriceal, datorit rolului lor n sinteza proteinelor. Ribozomii sunt de natur ribonucleoproteic i sunt prezeni n toate celulele, att la proca-riote, ct i la eucariote, cu excepia hematiilor adulte. Ei se mai numesc i citoribozomi, pentru a fi difereniai de ribozomii mitocondriali care se mai numesc i mitoribozomi. Ribozomii au fost descoperii de George Emil Palade cu ajutorul mi-croscopului electronic. Ei apar ca formaiuni granulare cu dimensiunea de aprox. 30 nm. Ribozomul este un complex format din dou subuniti inegale ca dimensiuni i inegale n privina constantei lor de sedimentare: - subunitatea mare, cu diametrul de 30 nm i cu o constant de sedimen-tare de 60 S, are form sferoidal i prezint o mic depresiune nspre subunitatea mic; - subunitatea mic, cu diametrul de 10-20 nm i cu o constant de sedi-mentare de 40 S, are o form alungit, convex-concav. Cele dou subuniti reunite (adic ntreg ribozomul) au constanta de sedimentare 80 S. Ribozomii sunt formai din ARN, proteine, cantiti mici de ap, ioni (calciu, magneziu), etc. ARN ribozomal (ARNr) se gsete n ambele subuniti ribozomale. Astfel, subunitatea mic conine o molecul de ARNr cu constanta de se-dimentare 18 S, iar subunitatea mare conine trei molecule de ARNr cu constanta de sedimentare 5 S; 5,8 S i 23 S. Proteinele ribozomale sunt localizate n interiorul ambelor subuniti ribozomale, fiind legate mai strns sau mai lax de moleculele de ARNr. Nu-mrul lor este destul de mare la nivelul ambelor subuniti ribozomale. Astfel, subunitatea mare conine 50 de proteine ribozomale, iar subunitatea mic 30. Ribozomii se pot gsi liberi n citoplasm, sau ataai de membranele reticulului endoplasmic rugos. Ei pot fi observai fie izolai, fie grupai n poliribozomi (polizomi). Numrul de ribozomi ce intr n alctuirea unui poli-ribozom depinde de mrimea moleculei proteice ce urmeaz a fi sintetizat. Gruparea n poliribozomi se realizeaz cu participarea unei molecule de ARNm, care are forma unui filament cu diametrul de 2 nm. Acest filament nir ribozomii ca mrgelele pe a, trecnd prin fiecare granul ribozomal ntre subunitatea mic i subunitatea mare a acesteia. Dup ce proteina a fost sintetizat lanul polipeptidic se rupe, iar ribozomii se disperseaz n cito-plasm. Marea majoritate a particulelor ribozomale la eucariote se gsesc a-samblate tot timpul n poliribozomi i numai un numr mic sunt dispersai n citosol. Poliribozomii pot fi: - poliribozomi liberi, - poliribozomi ataai de membrana reticulului endoplasmic.
58 Poliribozomii liberi sunt responsabili de sinteza proteinelor structurale, adic cele ce sunt utilizate pentru nevoile celulei. Ei sunt numeroi n celulele nedifereniate care cresc rapid, precum i n celulele difereniate (sau n curs de difereniere) care au nevoie de o cantitate mare de proteine matriceale (ex. mioblatii, precursorii eritrocitelor, etc.). Poliribozomii ataai membranelor reticulului endoplasmic sunt re-sponsabili de sinteza proteinelor pentru export ca i a unor proteine de uz intracelular cum ar fi enzimele lizozomale. Ei sintetizeaz i proteinele integrale ale membranei celulare. n celulele care sintetizeaz cantiti mari de proteine, poliribozomii ataai membranelor reticulului endoplasmic sunt cei care predomin. Exemple de astfel de celule ar fi: hepatocitele, plasmocitele, celulele acinilor pancreatici i ai glandelor salivare, etc. n funcie de necesitile de moment, ribozomii trec din starea liber n cea ataat i invers. Ataarea ribozomilor la membrana reticulului en-doplasmic este dirijat de nite molecule numite riboforine, existente n membrana reticulului. Biogeneza ribozomilor este iniiat la nivelul nucleolului. Aici are loc transcrierea ARN ribozomal de pe genele situate pe o poriune cromozomial comun cu organizatorii nucleolari. Imediat dup sintez, ARN-ul este parial asamblat cu proteine i formeaz precursorii ribozomali, adic ai subunitii mici i ai celei mari. Subunitile ribozomale migreaz separat n citoplasm, unde se matureaz foarte repede, se asambleaz i asociaz proteine citoplasmatice specifice ribozomilor. Principala funcie a ribozomilor este aceea c ei reprezint organitele ci-toplasmatice responsabile de sinteza proteinelor, att a celor structurale ct i a celor de export. La nivelul polizibozomilor liberi din citoplasm se sinteti-zeaz proteinele structurale, cele utilizate pentru diviziune, cretere, sau pro-teinele necesare nlocuirii organitelor uzate. La nivelul poliribozomilor ataai membranelor reticulului endoplasmic rugos se sintetizeaz proteinele de export, cum sunt enzimele, hormonii, anticorpii, etc., care vor fi eliberate din celule, pentru a fi utilizate n alt parte.
CENTRIOLII I FUSUL DE DIVIZIUNE
n citoplasma din vecintatea nucleului i adeseori n apropierea com-plexului Golgi se gsesc n mod normal doi centrioli, care mpreun formeaz un organit numit centrul celular. Centriolii sunt structuri microtubulare cu diametrul de 0,15 m i lungimea de pn la 0,5 m, dispui perpendicular unul pe cellalt. La microscopul electronic s-a constatat c peretele centri-olului este format din nou triplete de microtubuli dispuse n jurul unei zone centrale cu aspect omogen. Pentru identificare, microtubulii din fiecare triplet au fost notai: cel intern cu A, cel mijlociu cu B, iar cel extern cu C. Cu totul excepional pot fi observai i centrioli al cror perete este format din nou dublete de microtubuli sau chiar nou microtubuli simpli. Fiecare microtubul intern (A) este conectat la un miez cilindric central printr-o spi de natur fibrilar. Uneori s-au descris n jurul cilindrului dou rnduri de cte nou sferule ataate prin puni individuale de peretele tubular, aceste formaiuni fiind numite structuri satelite. Centrul celular este responsabil de iniierea diviziunii celulare i formarea fusului de diviziune. Astfel, nainte de nceperea profazei, centriolii sufer un proces de duplicare i
59 fiecare din cele dou perechi migreaz nspre unul din polii celulei. O serie de microtubuli se vor organiza n jurul fiecrei perechi de centrioli sub forma unei structuri radiare ce poart numele de aster. Ali microtubuli vor forma fusul de diviziune care se dispune ntre cele dou perechi de centrioli. O parte dintre microtubulii fusului de diviziune se ntind de la un pol la altul, dar muli microtubuli se ntind de la unul dintre poli, pn la kinetocorul cromatidelor, legnd astfel fiecare cromatid de unul dintre poli. Prezena microtubulilor este necesar n timpul diviziunii pentru mi-grarea celor dou seturi de cromozomi spre polii celulei, aspect demonstrat de faptul c substanele medicamentoase care interfereaz cu polimerizarea tubulinelor (ex. colchicina, vinblastina, vincristina) blocheaz celulele n me-tafaz i determin n final moartea celulelor.
INCLUZIUNILE CELULARE
Dac organismul dispune la un moment dat de anumii produi meta-bolici n exces, exist posibilitatea stocrii (depozitrii) lor temporare sau de-finitive la nivelul citosolului unor celule. Aceste depozite intracitoplasmatice poart numele de incluziuni celulare. Pot fi depozitate intracitoplasmatic substane diferite: glucide, lipide, proteine, pigmeni, cristale, cristaloizi, etc. Dac acest fenomen depete anumite limite se poate ajunge n situaii pato- logice, unele cu un caracter reversibil, altele fiind ireversibile. Glucidele sunt depozitate n citoplasma celulelor animale sub form de glicogen. Depozite intracelulare de glicogen pot fi evideniate n hepatocite i celulele musculare prin metoda PAS sau prin colorarea cu carmin Best. Lipidele sunt stocate n citoplasma celulelor ca trigliceride, sub form de picturi sferice de diferite mrimi. Celulele care stocheaz lipide sunt ce-lulele corticosuprarenalei, celulele corpului galben din ovar, nefrocitele, he-patocitele. Proteinele sunt depozitate aproape n exclusivitate sub forma gra-nulelor secretorii. Pigmenii pot apare n mod normal sub form de pigment brun-negru (granulele de melanin) n celulele pigmentare, sau pigment galben (lipofus-cin) n celulele nervoase, celulele corticosuprarenalei, etc. Pe msur ce or-ganismul mbtrnete, lipofuscina poate apare ca pigment de uzur n celu-lele musculare cardiace i n neuroni. Cristalele i cristaloizii pot apare, n mod normal, n citoplasma unor celule cum ar fi celulele Leydig din testicul sau chiar n nucleul unor hepato-cite. n unele situaii patologice, la nivelul citoplasmei pot apare i ali pig-meni cum ar fi: pigmenii biliari, hemosiderina. Atunci cnd nevoile celulei (sau organismului) o impun, unele dintre aceste incluziuni pot fi mobilizate i utilizate pn la epuizarea lor.
60
ORGANITELE CELULARE DELIMITATE DE MEMBRAN
Subcompartimentele celulare delimitate de membrane sunt legate ntre ele structural i funcional, alctuind un sistem de endomembrane. Legtura structural ntre aceste formaiuni este ns o legtur temporar. Din acest sistem de endomembrane fac parte: reticulul endoplasmic, aparatul Golgi, li-zozomii, peroxizomii, vacuolele, veziculele de exo- i endocitoz i chiar n-veliul nuclear, deoarece acesta comunic cu reticulul endoplasmic. Subcompartimentele celulare care alctuesc sistemul de endomembra-ne prezint urmtoarele trsturi: - membranele care delimiteaz subcompartimentele sunt asimetrice (ase-mntor plasmalemei), - legtura structural (de cele mai multe ori temporar) dintre comparti-mente este asigurat prin intermediul veziculelor, care pot fuziona fie cu alte subcompartimente ale sistemului, fie cu membrana plasmatic sau cu veziculele de endocitoz, fie pot fuziona ntre ele, - prin intermediul veziculelor se realizeaz un flux al membranelor care poate s fie orientat fie de la reticulul endoplasmic spre membrana plasmatic, fie invers, - prin intermediul veziculelor de exocitoz, subcompartimentele siste-mului de endomembrane comunic cu mediul extracelular, dar aceste vezicule nu comunic cu matricea nucleoplasmic (numai accidental). Majoritatea organitelor celulare delimitate de membrane sunt cuprinse n acest sistem de endomembrane (reticulul endoplasmic, aparatul Golgi, li-zozomii, peroxizomii). Exist ns i organite celulare delimitate de membra-ne, mitocondriile, care nu fac parte din acest sistem.
RETICULUL ENDOPLASMIC
Reticulul endoplasmic este un organit celular cavitar, rspndit n n-treaga citoplasm, fiind format din saci, cisterne, tubi, vezicule, anastomozate ntre ele. Formaiunile reticulului sunt delimitate de o endomembran cu grosime de aprox. 6 nm. Reticulul endoplasmic, observat iniial la microscopul optic, a fost des-cris sub diferite denumiri: substan tigroid sau corpi Nissl n pericarion, corpi Berg n hepatocit i ergastoplasm n celula pancreasului exocrin. De-numirea actual i prima descriere electronomicroscopic au fost fcute de ctre Porter i Kallman (1952). Organitul este prezent n toate celulele euca-riote cu excepia hematiei adulte. Deoarece el a fost observat la nceput n partea intern a citoplasmei a primit denumirea de reticul endoplasmic. Morfologia reticulului endoplasmic difer de la o celul la alta. Astfel, celulele embrionare au un reticul en-doplasmic rudimentar, care se dezvolt pe msura diferenierii celulei. De a-semenea, celulele aflate n interfaz au un reticul endoplasmic mai bine dez-voltat dect celulele aflate n diviziune. Exist dou tipuri de reticul endoplasmic:
61 - reticul endoplasmic rugos sau granular (RE rugos sau RE granular); - reticul endoplasmic neted (RE neted). Membranele celor dou tipuri de reticul endoplasmic sunt n conti-nuitate, lumenele lor comunic, de aceea apar ca o unitate. Reticulul endoplasmic rugos este format n principal din saci aplatizai sau cisterne i mai rar din canalicule. Pe suprafaa plasmatic a membranei, aceste formaiuni prezint ribozomi ataai (de aici denumirea de rugos sau granular). Reticulul endoplasmic rugos este dispus preferenial n jurul nu-cleului i are legtur structural direct cu cisterna perinuclear. Membranele RE rugos sunt n relaie de continuitate cu membrana nuclear extern, iar lumenul n continuitate cu spaiul cisternei. Lumenul reticulului este ocupat de reticuloplasm, o mas fluid amorf mai puin dens dect hialoplasma. Reticulul endoplasmic rugos, datorit ribozomilor ataai, este speciali-zat n primul rnd n sinteza proteinelor, motiv pentru care este mai dezvoltat n celulele angajate n procese intense de sintez, cum sunt celulele glandu-lare exo- i endocrine. Membranele reticulului endoplasmic rugos conin riboforine (proteine specifice) care: - faciliteaz ataarea ribozomilor la membranele reticulului endoplasmic rugos; - asigur transferul prin membran a lanului polipeptidic nou format la nivelul ribozomilor; - contribuie la meninerea formei caracteristice a cisternelor, deoarece ri-boforinele formeaz o reea extins n membran.
Reticulul endoplasmic neted este format n principal din tubi, cana-liculi sau vezicule i nu are ribozomi ataai. Din punct de vedere topografic, reticulul endoplasmic neted este dispus spre periferia citoplasmei, fr s vin n contact cu membrana plasmatic. El este mai bine dezvoltat n celulele care secret hormoni steroizi (celulele glandelor suprarenale, celule interstiiale din testicul i ovar) precum i n cele care produc glucide (celulele hepatice). n celula muscular exist un organit asemntor reticulului endoplas-mic neted, care are rolul de a stoca ionii de calciu, de a-i elibera n citosolul fibrei musculare cu producerea contraciei i de a-i restoca prin intervenia pompei de Ca 2+ din membranele sale, cu inducerea relaxrii musculare. Acest organit este reticulul sarcoplasmic, ce reprezint un tip special de re-ticul endoplasmic neted. Studiul electronomicroscopic al acestuia a evideniat c este dispus sub forma unei reele de tubuli sau cisterne orientate de-a lungul sarcomerului ntre i n jurul miofibrilelor (sistemul tubular L). La nivelul fiecrei zone H, aceti tubuli orientai longitudinal trimit anastomoze laterale, iar la nivelul jonciunii dintre banda A i I formeaz nite saci sau cisterne terminale unde sunt stocai ionii de calciu. Dou asemenea cisterne terminale se altur la nivelul jonciunii dintre banda I i banda A, dar rmn separate de sistemul tubular T (transvesal) cu origine n plasmalem. Aceast dispoziie particular a reticulului sarcoplasmic n fibra muscular striat scheletal, ce const din alturarea a dou cisterne terminale ce aparin sistemului L i a unui tubul transversal T, formeaz o triad. Astfel, la jonciunea dintre banda A-I de la nivelul fiecrui sarcomer, exist dou triade. Sistemul tubular T cu origine n plasmalem comunic cu spaiul extracelular, ptrunde la intervale regulate, se ramific i se dispune printre cisternele terminale pentru a forma triade. Cele dou sisteme tubulare T i L joac un rol important n mecanismul contraciei musculare, deoarece la nivelul triadelor are loc cu-plararea excitaiei cu contracia.
62
FUNCIILE RETICULULUI ENDOPLASMIC
Funciile reticulului endoplasmic pot fi grupate n funcii comune ambe-lor tipuri i funcii specifice RE rugos, respectiv RE neted. Funcii comune. Reticulul endoplasmic funcioneaz ca un sistem circ-lator intracitoplasmatic prin care sunt vehiculate n permanen diferite sub-stane spre alte zone ale citoplasmei, spre cisternele aparatului Golgi prin mi-crovezicule, sau spre spaiul perinuclear cu care comunic. Reticulul endoplasmic este implicat n sinteza componentelor structu-rale ale membranelor i a enzimelor prin care lizozomii i peroxizomii i desfoar activitile specifice. Reticulul endoplasmic rugos are ca principal funcie biosinteza protei-nelor de export. Pentru realizarea sintezei proteice, ribozomii se ataaz pe membrana RE rugos prin subunitatea mare (60S), n timp ce subunitatea mic (40 S) este orientat spre exterior. Legarea ribozomilor se realizeaz sub forma polizomilor, unde mai muli ribozomi se nlnuie pentru a citi mesajul de pe molecula de ARNm i pentru a ncepe sinteza lanului polipeptidic. Dup ataarea ribozomilor, sinteza proteic se desfoar pe membranele RE rugos, iar lanul polipeptidic n formare este transferat prin membran n lumenul organitului. Proteinele destinate exportului din celul se vor acumula n lumenul RE rugos i vor fi mpachetate n micovezicule ce se formeaz prin frag-mentarea sau nmugurirea cisternelor. Microveziculele vor fuziona cu membranele cisternelor complexului Golgi. Aici proteinele vor suferi un proces complex de acumulare, maturare i mpachetare n vezicule de secreie ce se desprind din complexul Golgi i vor fi eliminate din celul prin exo-citoz. Proteinele destinate nevoilor proprii ale celulei (pentru alimentarea sis-temului de endomembrane precum i proteinele enzimelor lizozomale) vor rmne ataate feei interne a membranelor reticulului endoplasmic rugos sau sunt integrate n bistratul lipidic al membranelor organitului. Pe lng aceast fucie de baz, RE rugos mai are rol n sinteza unor fosfolipide (lecitina) sau a unor glicoproteine integrale din membran. Reticulul endoplasmic neted are ca principal funcie sintetiza i meta-bolizarea acizilor grai i a fosfolipidelor. Este implicat de asemenea i n bi-osinteza colesterolului i a hormonilor steroizi. De aceea, reticulul endoplas-mic neted este mai dezvoltat n celulele specializate n aceste procese de sin-tez, din ficat, corticosuprarenal, gonade. O alt funcie important a reticulului endoplasmic neted o reprezint aceea de detoxifiere, adic de inactivare i metabolizare a unor substane cum sunt pesticidele, medicamentele, etc. Prin enzimele pe care le conine (citocromii P-450, glutation S- transferaze) reticulul endoplasmic neted deter-min metabolizarea acestor substane i eliminarea lor prin urin. Pentru o detoxifiere eficient cantitatea i activitatea enzimatic cresc. Astfel admi-nistrarea unor doze mari de fenobarbital determin dublarea suprafeei reti- culului endoplasmic neted din hepatocite i revine la normal (prin autofagie) dup aproximativ 5 zile de la ncetarea adimistrrii acestei substane.
63
COMPLEXUL GOLGI
Acest organit a fost descris prima dat de medicul italian Camillo Golgi n anul 1898, ca o reea de filamente fine pe care le-a observat n citoplasma unor celule nervoase. El a denumit aceast formaiune cu numele de aparat reticular intern. n 1910 elevul lui Golgi, Aldo Peroncito a observat c n timpul diviziunii celulei are loc o fragmentare a elementelor acestui aparat i a denumit aceste fragmente cu numele de "dictiozomi". Acetia apar la microscopul optic sub diferite aspecte: bastonae, tubi anastomozai, cisterne, etc. n cinstea descoperitorului su, oamenii de tiin au denumit ulterior organitul cu numele de aparat Golgi. Numrul complexelor Golgi ntr-o celul difer mult, de la unu la cte-va sute, n funcie de tipul, vrsta sau de activitatea funcional a celulei. Astfel, celulele tinere sau aflate n plin proces secretor au de regul un nu-mr mare de asemenea organite. Poziia organitului n celul difer dup tipul i activitatea acesteia. Astfel, n neuroni complexul Golgi este dispus perinuclear, iar n celulele se-cretorii exocrine apare supranuclear. La microscopul electronic s-a constatat c n structura lui intr trei componente de baz (fig. 7): - pachete de saci turtii sau cisterne aplatizate, - microvezicule, - macrovezicule. Cisternele aplatizate sau sacii turtii au form curbat i se dispun sub form de pachete. Numrul sacilor ntr-un pachet este variabil, n majoritatea cazurilor fiind ntre 5 i 11. Fiecare sac poate fi comparat cu o farfurie care are partea central mai subire i periferiile mai dilatate. n ansamblu, complexul Golgi are o polaritate morfofuncional dis-tinct, prezentnd: - compartimentul "cis" orientat spre nucleu, reprezentat de faa convex, numit i fa formatoare sau imatur, deoarece prin aceast fa organitul primete veziculele de transport a proteinelor sau lipidelor sintetizate de reticulul endoplasmic; - compartimentul "median", la nivelul cruia se realizeaz glicozilarea lipidelor i proteinelor; - compartimentul "trans" orientat spre membrana plasmatic, reprezentat de faa concav, numit i faa de elaborare sau matur, deoarece la a-cest nivel are loc elaborarea granulelor de secreie.
Fig. 7. Structura complexului Golgi-diagram.
64 Microveziculele sunt mici vezicule (de ordinul nm) care se desprind din reticulul endoplasmic i se deplaseaz nspre sacii golgieni de pe faa cis, cu care fuzioneaz. Ele se mai numesc i vezicule de transfer deoarece macro-moleculele sintetizate n reticulul endoplasmic sunt "transferate" cu ajutorul microveziculelor n sacii golgieni. Macroveziculele sunt dispuse la periferia cisternelor i pe faa concav a organitului. Ele se formeaz prin nmugurirea la periferie a cisternelor gol-giene i sunt de fapt vezicule de secreie care conin proteine sau alte macro-molecule ce au fost maturate la nivelul cisternelor golgiene i care urmeaz s fie eliminate din celul prin exocitoz. Grosimea endomembranelor care delimiteaz formaiunile complexu-lui Golgi este de aprox. 6-8 nm, mai mic la microvezicule i mai mare la ma-crovezicule. Alte vezicule eliberate de pe faa trans sunt de dimensiuni mai mici de-ct cele ale veziculelor de secreie. Ele conin hidrolaze acide i reprezint li-zozomi primari care prin enzimele pe care le conin vor participa la procesul de digestie intracelular. Complexele Golgi sunt structuri dinamice care prezint o mare labilita-te, o permanent modificare i o permanent regenerare. Astfel, paralel cu "dispariia" cisternelor prin formarea de macrovezicule (pe faa trans), noi cisterne se formeaz pe faa cis (faa formatoare), din microveziculele venite de la reticulul endoplasmic. Se apreciaz c o cistern sau sac golgian se for-meaz n 2-3 minute, iar ansamblul sacilor dintr-un complex Golgi se ren-noiete n aproximativ 30 minute pe seama microveziculelor care vin de la reticulul endoplasmic i care fuzioneaz cu membranele compartimentului cis.
FUNCIILE COMPLEXULUI GOLGI
Funcia de secreie celular, prin care produii sintetizai n reticulul endoplasmic, ce ajung la complexul Golgi prin intermediul microveziculelor vor fi aici maturai, condensai i mpachetai n vezicule secretorii. Maturarea lor se realizeaz prin prelucrare biochimic cum ar fi: glicozilarea terminal a proteinelor, glicozilarea lipidelor, sulfatarea lipidelor, etc. Concentrarea pro-duilor de secreie se realizeaz prin constituirea unor agregate sub influena unor interaciuni electrostatice ntre produii de secreie i ntre complexe de proteine- polizaharide cu sarcin contrar. Pentru desfurarea corespunztoare a acestor procese un rol important l au ionii de Ca 2+ . Aceste agregate sunt mpachetate apoi n vezicule de secreie ce se vor desprinde de pe faa trans sau de la periferia sacilor golgieni. Biogeneza lizozomilor const n separarea enzimelor lizozomale de ali produi de sintez i mpachetarea acestora n vezicule de dimensiuni mai mici dect veziculele de secreie. Aceste vezicule se desprind din formaiuni-le complexului Golgi tot de pe faa trans sau de la periferia sacilor golgieni. Dirijarea traficului endomembranelor se realizeaz sub forma vezicu-lelor care vin i pleac de la complexul Golgi. Astfel, complexul Golgi pri-mete permanent vezicule de la reticulul endoplasmic, le modific coninutul i elaboreaz alte vezicule ce vor fi expediate nspre plasmalem unde, dup exocitoz membranele veziculelor vor fi nglobate n structura plasmalemei nlocuind poriunile "consumate" prin crearea veziculelor de endocitoz. n felul acesta suprafaa plasmalemei se menine constant, dei n permanen se formeaz din ea vezicule de endocitoz, ns membranele consumate vor fi nlocuite de cele ale veziculelor de exocitoz. Alte vezicule vor fi dirijate n citosol, fie pentru asigurarea necesarului propriu de endomembrane, fie sub form de lizozomi primari.
65 Formarea acrozomului spermatozoizilor este o alt funcie a acestui organit. Complexul Golgi dispus supranuclear la aceste celule se modific i realizeaz formaiunea numit acrozom care conine enzimele necesare lizrii membranei ovulului.
LIZOZOMII
Lizozomii sunt organite n form de vezicule, sferice sau ovale, au dia-metrul cuprins ntre 0,2-1 m, sunt formai de aparatul Golgi i conin enzi-mele hidrolitice necesare digestiei intracelulare a materialelor nglobate de ctre celul. Au fost descoperii de ctre Christian de Duve (1952) prin me-tode biochimice i apoi au fost vizualizai la microscopul electronic de ctre Nivikoff (1956). Lizomii sunt prezeni n citoplasma tuturor celulelor anima-le, cu excepia hematiei adulte. La microscopul electronic s-a observat c ei sunt alctuii din: - membrana lizozomal, - matricea lizozomal. Membrana lizozomal are grosimea de 7-8 nm i structura asemn-toare cu a celorlalte endomembrane. Matricea lizozomal poate apare omogen, fin granular, sau heteroge-n, ceea ce determin un polimorfism lizozomal n fiecare celul. n matricea lizozomal exist aprox. 50-60 enzime hidrolitice ca: proteaze, lipaze, nucle-aze, fosfataze, sulfataze, etc., capabile s digere proteine, carbohidrai, lipide sau derivate ale acestora. Toate aceste enzime sunt hidrolaze acide, active la un pH situat n jurul valorii de 5. Membrana lizozomal este n mod normal impermeabil pentru aceste enzime, prevenind astfel contactul i digestia altor structuri celulare. Ruperea din diverse motive a membranei lizozomale, va determina eliberarea enzimelor, care vor produce liza citoplasmei nvecinate. Prin observaii la microscopul electronic s-a stabilit c lizozomii pot fi mprii n trei categorii: - lizozomi primari, - lizozomi secundari, - lizozozmi teriari. Lizozomii primari se prezint sub forma unor vezicule sferice care au la interior un coninut bogat n hidrolaze acide. Enzimele lizozomale sunt sin-tetizate n ribozomii ataai membranelor reticulului endoplasmic, unde sunt glicozilate cu manoz. Trec apoi n compartimentul cis al complexului Golgi, unde moleculele de manoz sunt fosforilate n poziia 6 (manozo-6-fosfat). Aceste enzime trec apoi prin compartimentul median spre compartimentul trans unde pe baza gruprilor manozo-6-fosfat (M6P) sunt direcionate spre lizozomi. Aceast selecie este posibil datorit unor receptori pentru M6P localizai n membranele compartimentului trans i care leag doar proteinele care au gruparea M6P. Astfel, enzimele lizozomale sunt separate de alte proteine, vor fi concentrate n vezicule transportoare, care fuzioneaz cu endolizozomii, iar apoi ajung la lizozomii maturi. La un pH acid se va produce disocierea receptorilor pentru M6P, care apoi vor fi reciclai, ajungnd din nou la nivelul compartimentului trans al complexului Golgi (fig. 8). Lizozomii primari sunt
66 lizozomii care nc nu au fost angajai n activitate. Ei sunt de talie mic i au o matrice omogen sau fin granular. Lizozomii secundari sau fagolizozomii se formeaz prin fuziunea lizozomilor primari cu fagozomii. Lizozomii teriari sunt corpii reziduali, care conin material nedige- rabil rmas n urma procesului de digestie la nivelul lizozomilor secun-dari.
.
Fig. 8. Diagrama sintezei i transportului enzimelor lizozomale
FUNCIILE LIZOZOMILOR
Funciile lizozomilor sunt: - heterofagia, procesul de digestie intracelular a substanelor introduse n citoplasm prin endocitoz (celule neoplazice, bacterii, virusuri, substane nutritive, etc.); procesul de heterofagie este legat de nutriia celulei i de mecanismele de aprare; - autofagia, procesul prin care organitele uzate, aflate n diferite grade de dezintegrare vor fi nconjurate de citomembrane, se vor forma au-tofagozomii care dup fuziunea cu lizozomii primari formeaz auto-fagolizozomii, n interiorul crora sunt digerate structurile uzate; - participarea la diferite procese fiziologice cum ar fi involuia timusului, apoptoza, reglarea nivelului unor hormoni aflai n exces n celul (cri-nofagia), etc.; - particip n unele procese patologice cum ar fi inflamaiile sau necro-zele. Imediat dup moartea organismului are loc ruperea membranelor lizo-zomale, cu rspndirea enzimelor n citoplasm, ceea ce determin autoliza post mortem. Digestia intracelular nu este n toate cazurile complet, uneori pot r-mne resturi nedigerabile care se acumuleaz n vacuolele digestive transfor-mndu-le n corpi reziduali
67 (lizozomi teriari). Corpii reziduali sunt eliminai n afara celulei prin exocitoz, dar uneori ei pot fi depozitai n citosol (ex. granulele de lipofuscin n procesul de mbtrnire) diminund treptat capa-citatea metabolic a celulelor respective.
PEROXIZOMII
Peroxizomii au fost descoperii la microscopul electronic de ctre Rhodin (1954) n celulele renale, dar o descriere detaliat a lor a fost fcut abia n 1966 de ctre Wattiaux. Peroxizomii sunt organite mici, sferice, cu diametrul de 0,5-1,5 m i se aseamn fizic cu lizozomii. Se deosebesc ns de acetia prin urmtoarele: - se presupune c se formeaz prin autoreplicare sau prin nmugurirea reticulului endoplasmic neted, - conin n special oxidaze. Peroxizomii sunt delimitai de o membran lipoproteic, iar n interior prezint o matrice proteic mai dens dect cea a lizozomilor. Matricea peroxizomilor conine enzime implicate n oxidarea anumitor substane, n special n |-oxidarea unor lanuri lungi de aminoacizi (care con-in mai mult de 18 atomi de carbon). Dintre enzimele cele mai importante amintim: urat-oxidaza, D-aminoacid-oxidaza i catalaza. Peroxizomii se gsesc n cantitate mai mare n celulele ficatului i ri-nichiului. n unele cazuri, peroxizomii prezint n matricea lor un miez electronodens ce are o structur paracristalin i care a fost numit cristaloid.
FUNCIILE PEROXIZOMILOR
Peroxizomii intervin n metabolismul apei oxigenate (H 2 O 2 sau peroxi-dul de hidrogen) n dou etape astfel: - iniial urat-oxidaza i D-aminoacid-oxidaza catalizeaz diferite reacii oxidativ- catalitice, reacii care utilizeaz oxigenul molecular i produc peroxid de hidrogen,
Urat-oxidaz sau D-aminoacid-oxidaz RH 2 + O 2 -------------------------------------- R + H 2 O 2
- n continuare, catalaza utilizeaz apa oxigenat pentru a oxida o mare varietate de substraturi (fenoli, alcooli, formaldehid etc.) printr-o reacie numit reacie peroxidativ.
catalaz RH 2 + H 2 O 2 ----------------------- R + 2H 2 O
Surplusul de peroxid de hidrogen va fi oxidat de ctre catalaz, deoare-ce el este toxic pentru celul, rezultnd n final ap i oxigen.
68
catalaz 2H 2 O 2 --------------------- 2H 2 O + O 2
Peroxizomii joac un rol important n procesele de detoxifiere, funcie facilitat de permeabilitatea foarte mare a membranei peroxizomilor pentru ioni i molecule mici. Catalaza peroxizomilor oxideaz alcoolul, fenolul, aci-dul formic, formaldehida, etc. Peroxizomii conin de asemenea un sistem enzimatic capabil de |-oxi-darea acizilor grai, apreciindu-se c 1/4 din totalul acestor oxidri au loc n peroxizomi, iar restul n mitocondrii.
MITOCONDRIILE
Pentru desfurarea complexelor activiti ce se desfoar la nivelul celulelor eucariote este nevoie n permanen de energie. Aceasta este asigu-rat de sistemele generatoare de energie. n cazul eucariotelor, sursa de ener-gie o reprezint unii metabolii, iar energia metaboliilor este convertit n e-nergia chimic a legturilor de ATP (adenozin- trifosfat). Aceste legturi sunt numite legturi fosfat-macroergice i reprezint forma de energie chimic ce poate fi utilizat cu promptitudine de ctre toate componentele celulare. Ce-lulele eucariote folosesc concomitent dou sisteme generatoare de ATP: - glicoliza; - fosforilarea oxidativ. Glicoliza se deruleaz la nivelul citosolului i folosete glucoza ca sub-strat pentru generarea energiei. Aceasta este prelucrat enzimatic pn la piruvat, cu generarea a dou molecule de ATP. Fosforilarea oxidativ se deruleaz la nivelul mitocondriilor i folo-sete ca substrat energetic piruvatul, deci ncepe acolo unde se sfrete gli-coliza. n felul acesta, cele dou sisteme de conversie energetic, glicoliza i fosforilarea oxidativ sunt cuplate. Mitocondriile sunt organite celulare prezente n citoplasma tuturor celulelor eucariote, cu excepia hematiilor adulte. Principala lor funcie este a-ceea de a produce energia necesar desfurrii activitilor celulare (cretere, difereniere, diviziune, micare, etc.). Ele au fost descoperite la microscopul optic de ctre Altman (1890) i denumite astfel de ctre Benda (1897). La microscopul electronic au fost descrise de Sjstrand i Palade (1952), in-dependent unul de altul. Mitocondriile au lungimea cuprins n medie ntre 1-3 m, dar pot ajunge pna la 7 m i au diametrul 0,5 m. Form mitocondriilor poate fi sferic sau pot fi ca un bastona, filifor-me, ramificate, curbe sau spiralate. Numrul mitocondriilor n celule este variabil, depinznd de tipul celu-lei i de intensitatea proceselor sale energetice. Astfel, spermatozoidul are aprox. 25 mitocondrii, nefrocitul n jur de 300, iar hepatocitul aprox. 2500.
69 De obicei mitocondriile sunt rspndite n ntreg citosolul, dar au posi-bilitatea s se grupeze la polul activ al unor celule. Astfel, n enterocite ocup n principal polul apical, n nefrocite polul bazal, n fibra muscular striat scheletal i cardiac se dispun printre miofibrile, n hepatocit de jur m-prejurul nucleului, iar la spermatozoid n jurul axonemei flagelului. n general mitocondriile ocup aprox. 5-6% din volumul celular, dar n cazul fibrei musculare striate scheletale i al hepatocitului ocup 20%, iar la fibra mus-cular cardiac 35%. Aceste valori sugereaz importana mitocondriilor pentru activitatea celulelor. n compoziia chimic a mitocondriei intr: proteine 60-70%, lipide 30-35% i 0,5 % ADN, ARN, ioni, aminoacizi, glucide. Dintre proteine, 70% au funcie enzimatic i 30% au funcie structural. Dintre lipide, 95% sunt fos-folipide i 5% colesterol. La microscopul electronic, mitocondria apare constituit din urmtoa-rele elemente structurale: - membrana extern, - membrana intern, - spaiul intermembranar (dintre cele dou membrane), - matricea mitocondrial.
Membrana extern are grosimea de aprox. 6 nm i o structur lipopro-teic. n compoziia ei chimic intr 50% proteine i 50% lipide, structura a-cestei membrane fiind asemntoare cu cea a reticulului endoplasmic. Mem-brana extern conine aproape tot colesterolul existent n mitocondrie. Ea es-te relativ rigid i foarte permeabil. La nivelul ei se realizeaz schimburile dintre organit i citosol i se desfoar o serie de activiti enzimatice, dar nici una dintre acestea nu are legtur cu producerea de ATP.
Membrana intern are i ea structur lipoproteic i grosimea de 6 nm. Caracteristic este faptul c aceast membran este plisat, formnd nume-roase creste (criste) mitocondriale care proemin n interiorul matricei mito-condriale, mrindu-i de peste cinci ori suprafaa, comparativ cu membrana extern. Forma cristelor poate fi lamelar, aa cum este n cazul majoritii mitocondriilor, sau poate fi tubular n celulele care secret hormoni steroizi (celulele corticosuprarenalei, celulele interstiiale din ovar i testicul). Compoziia chimic a membranei interne se deosebete de cea a mem-branei externe. Ea conine 80% proteine i 20% lipide, funcia ei fiind pre-ponderent metabolic. Membrana mitocondrial intern este strbtut de proteine integrale. Ea prezint un coninut ridicat de cardiolipin ceea ce face ca aceast membran s aib o permeabilitate foarte redus (inclusiv pentru ioni). Transportorii proteici existeni n grosimea ei o fac s prezinte per-meabilitate selectiv pentru acele molecule ce urmeaz s fie metabolizate n spaiul matricei mitocondriale sau pentru intermediari metabolici care ur-meaz s fie expulzai din mitocondrie. n general, membrana mitocondrial intern conine trei mari grupe de proteine: - proteinele lanului respirator (respectiv lanul transportor de electroni), - proteine de transport specific (care regleaz trecerea metaboliilor sau a ionilor spre interiorul sau exteriorul mitocondriei), - un complex enzimatic responsabil de producerea i eliberarea n matri-cea mitocondrial a ATP-ului:
70 aceste complexe enzimatice sunt dispuse pe faa matriceal a membranei interne, la microscopul electronic apar ca mici sfere cu diametrul de 10 nm, numite F 1 - ATP-az, prinse cu un peduncul de o pies inclus n membrana intern, numit particul F 0 , ntregul complex poart numele de ATP-sintetaz sau F 0 F 1 ATP-az. Enzima marker a membranei mitocondriale interne este citocromoxida-za. Alte enzime specifice sunt: succinat-dehidrogenaza, acil-carnitintransfe-raza, enzimele |-oxidrii acizilor grai, etc.
Spaiul intermembranar mitocondrial are n medie grosimea de 8 nm. La microscopul electronic, coninutul acestui spaiu apare clar i omogen, fiind constituit din soluii apoase ce conin ioni i diferite molecule. Ca enzim marker este considerat adenilat- kinaza, care catalizeaz reacia:
adenilat-kinaza ATP + AMP ----------------------------- 2 ADP
Aceast reacie este necesar pentru recuperarea AMP-ului, deoarece membrana mitocondrial intern este permeabil numai pentru ADP i ATP, nu i pentru AMP. Cele dou molecule de ADP rezultate n urma reaciei, vor trece n matricea mitocondrial i vor fi fosforilate la ATP. n afar de adenilat-kinaz, la acest nivel se mai gsesc i alte enzime ca: nucleozid-difosfatkinaza i nucleozid-monofosfatkinaza.
Matricea mitocondrial este compartimentul delimitat de membrana mitocondrial intern i se mai numete substana fundamental a mitocon-driei. Datorit faptului c ea conine o cantitate mare de proteine (60% din substana uscat) starea ei fizic este apropiat de gel. La microscopul elec-tronic, matricea mitocondrial apare fin granular datorit prezenei ribozo-milor mitocondriali, care pot fi liberi sau grupai n polizomi, dar pot fi i ataai pe faa matriceal a membranei interne. Poriunea central a matricei apare ceva mai electronodens i aici este localizat ADN- ul mitocondrial. Acest ADN este nfurat elicoidal i dispus circular. ADN-ul mitocondrial are aprox. 5 m lungime, fiind capabil s sin-tetizeze aprox.35 de molecule, ceea ce i confer mitocondriei o autonomie maxim de 35% fa de materialul genetic nuclear. Acest lucru face ca mitocondriile s fie organite semiautonome. Matricea mitocondrial conine dou tipuri de proteine: proteine struc-turale i protein-enzime (aproximativ 200). Pe lng acestea mai exist: nu-cleotide, aminoacizi, glucide etc. n general, cele mai importante proteine din matrice sunt: - enzimele oxidrii piruvatului i acizilor grai cu producere de coenzim A (CoA); - enzimele ciclului Krebs (ciclul acidului citric) responsabile de oxidarea acetil coenzimei A; - enzimele necesare replicrii i expresiei genelor mitocondriale.
71 Complexele enzimatice din matricea mitocondrial acioneaz asupra substratului n trei trepte, astfel: - n prima etap, piruvat dehidrogenaza convertete piruvatul, la acetil coenzim A i reduce NAD + la NADH; - n a doua etap are loc o cascad de reacii ce formeaz ciclul Krebs. Ciclul ncepe cu sinteza citratului din acetil coenzima A, dup care ci-tratul este oxidat i decarboxilat n trepte, rezultnd n final oxal-acetatul : la fiecare parcurgere a ciclului, dehidrogenazele care oxi-deaz intermediarii succesivi, reduc trei molecule de NAD + la NADH i o molecul de FAD + la FADH 2 ; - n a treia etap acioneaz lanul mitocondrial transportor de electroni care efectueaz tranzitul electronilor de la NADH la NADH 2 i ulterior la O 2 molecular. Pentru fiecare pereche de electroni ce se mic de-a lungul lanului, pe ntreaga sa lungime, sunt sintetizate trei molecule de ATP. n urma parcurgerii ntregului ciclu de la nivelul mitocondriei se obin 34 molecule de ATP. n felul acesta, oxidarea complet a unei molecule de glucoz (la CO 2 i H 2 O) genereaz 36 molecule de ATP: dou n timpul gli-colizei n citosol i 34 n timpul fosforilrii n matricea mitocondrial. Mitocondriile uzate sunt ndeprtate prin autofagie i n locul lor se for-meaz prin condriodierez alte mitocondrii. Prin acest proces o mitocondrie funcional va da natere la dou organite asemntoare. Funcia principal a mitocondriilor este generarea energiei necesare des-furrii activitilor celulare, cum sunt: diviziunea, diferenierea, secreia, contracia muscular, etc. Prin aciunea enzimelor oxido-reductoare i prin procesul fosforilrii oxidative iau natere molecule de ATP (fosfat macro-ergice). Sub aciunea ATP-azei, moleculele de ATP vor fi scindate, cu elibe-rarea unei cantiti de energie ce va fi utilizat pentru desfurarea procese- lor vitale din celul.
TRANSMITEREA I EXPRIMAREA INFORMAIEI GENETICE
Genele controleaz transmiterea caracterelor de la prini la copii, n-mulirea celulelor, dar n acelai timp coordoneaz sinteza elementelor struc-turale i a enzimelor. Informaia genetic este reprezentat de secvena ADN, iar perpetuarea de la o celul la alta se realizeaz prin replicare. Dogma central a biologiei moleculare postuleaz c informaia pentru sinteza proteinelor este coninut de secvena ADN i este transmis prin in-termediul ARNm proteinelor. Genele sunt constituite din ADN i controleaz sinteza de ARN. n citoplasm acesta coordoneaz sinteza proteinelor: - structurale, care alturi de lipide i glucide ntr n alctuirea diferitelor structuri celulare; - enzime, care catalizeaz reaciile chimice din celule.
72 Procesul de sintez al proteinelor este denumit i translaie, deoarece n acest proces are loc traducerea secvenei nucleotidice a ARNm n secvena aminoacizilor care formeaz proteina. Sinteza unei proteine este controlat n general de o pereche de gene, astfel, celula uman care are o sut de mii de perechi de gene, are capacitatea de a sintetiza peste o sut de mii de tipuri diferite de proteine. n molecula de ADN, genele sunt ataate cap la cap. n structura ADN intr: - acidul fosforic; - dezoxiriboza (un zaharid); - patru baze azotate, dintre care: o dou sunt purinice, adenina i guanina; o dou sunt pirimidinice, timina i citozina. Molecula dublu-helicoidal de ADN are un ax de susinere format din dou lanuri helicoidale constituite din acid fosforic i dezoxiriboza. ntre cele dou lanuri se afl bazele azotate. n procesul de sintez a ADN sunt parcurse dou etape: - sinteza nucleotidelor, prin combinarea unei molecule de acid fosforic cu o molecul de dezoxiriboz i cu una dintre cele patru baze azotate, rezultnd patru nucleotide diferite: acidul dezoxiadenilic, acidul dezoxiguanilic, acidul dezoxitimidilic i acidul dezoxicitidilic; - asamblarea nucleotidelor, care se face astfel nct acidul fosforic i de-zoxiriboza s alterneze ntre ele la nivelul celor dou lanuri separate. ntre bazele purinice i pirimidinice ale celor dou lanuri se stabilesc legturi slabe, astfel: - adenina se leag ntotdeauna de timin, - guanina se leag ntotdeauna de citozin. Legturi slabe de hidrogen ce se stabilesc ntre baze permit ca n timpul funcionrii ADN n celul, cele dou catene s se separe cu uurin.
CODUL GENETIC
Prin separarea celor dou lanuri ale ADN, baze purinice i piri-midinice proemin pe marginea fiecrei catene constituind codul genetic. Fiecare caten a moleculei de ADN posed cte un cod genetic propriu. Prin intermediul su, ADN controleaz procesele de sinteza de la nivel celular. Codul genetic cuprinde cuvinte de cod care sunt constituite din triple-tele succesive de baze. Cuvintele de cod controleaz secvena aminoacizilor n procesul de sintez a proteinelor.
73 ACIDUL RIBONUCLEIC (ARN)
Majoritatea ADN-ului celulei se afl n nucleu, iar cea mai mare parte a funciilor celulare se desfoar n citoplasm. Controlul reaciilor chimice din citoplasm se realizeaz prin intermediul ARN. Sinteza acestuia este controlat de ADN. Astfel, prin procesul numit transcripie codul genetic este transferat ARN-ului, care trece n citoplasm prin porii nucleari. Sinteza ARN necesit separarea temporar a celor dou catene de ADN, rezultnd: - o caten, folosit ca matri pentru sinteza ARN (transcripia); tri-pletele codului ADN determinnd formarea tripletelor (codoni) codului complementar al ARN, care controleaz secvena aminoacizilor din proteinele sintetizate; - o caten inactiv. Fiecare caten de ADN a fiecrui cromozom conine codul pentru aproximativ patru mii de gene. Structura elementar a ARN este similar cu a ADN, cu dou di-ferene: riboza nlocuiete dezoxiriboza, iar uracilul nlocuiete timina. Sinteza moleculei de ARN se realizeaz n dou etape: - sinteza nucleotidelor ARN (ca la ADN), pentru care sunt utilizate patru nucleotide diferite care conin bazele adenina, guanina, citozina, uraci-lul (n locul timinei din ADN). - activarea nucleotidelor, prin adiia a cte doi radicali fosfat, cu formarea trifosfailor. Cei doi radicali fosfat se combin cu nucleotidul prin legturi fosfat ma-croergice provenite de la ATP-ul celular. Astfel, fiecare nucleotid dispune de o mare cantitate de energie, necesar n urmtoarele etape ale sintezei ARN. Nucleotidele activate vor fi asamblate folosind ca matri catena de ADN. n acest proces este implicat enzima ARN polimeraza. Aceat enzim are urmtoarele proprieti funcionale: - recunoate i se fixeaz pe o secven de nucleotide numit promotor, din catena ADN, situat imediat naintea genei iniiale, aceasta fiind eta-pa esenial n sinteza ARN; - dup fixarea la promotor, determin "despletirea" a aproximativ dou ture din spirala helix a ADN cu separarea acestor poriuni; - se deplaseaz n lungul catenei ADN, nucleotidele complementare ale ARN vor fi legate la catena ADN; iar prin legarea ntre ele a nu-cleotidelor succesive ale ARN se va forma molecula de ARN. - cnd polimeraza ARN ajunge la captul genei sau al secvenei de gene, ntlnete secven de ncheiere a lanului; care determin desprinderea polimerazei de pe catena de ADN i eliberarea concomitent n nucleo-plasm a catenei de ARN. Cele patru tipuri de baze ale ADN i cele patru tipuri de baze ale ARN se combin ntre ele ntr-un mod specific, codul de pe catena ADN fiind transcris ntr-o form complementar pe molecula de ARN, astfel:
74 Baza ADN Baza ARN guanina citozina citozina guanina adenina uracil timina adenina
Exist trei tipuri de ARN, cu rol n procesul de sintez proteic. Acestea sunt: - ARN mesager (ARNm), ce transport codul genetic la nivelul citoplas-mei; - ARN de transfer (ARNt), ce transport aminoacizii activai ctre ribo-zomi, unde sufer un proces de asamblare rezultnd moleculele pro-teice; - ARN ribozomal (ARNr), care intr n structura ribozomilor.
SINTEZA PROTEINELOR
Proteinele sunt sintetizate din aminoacizi. Secvena n care sunt legai este determinat de ordinea n care bazele sunt aranjate n catena ADN, fie-care aminoacid fiind reprezentat de o secven de trei baze (triplet). Adenina, citozina, timina i guanina, din molecula de ADN, funcio-neaz ca literele ntr-un cuvnt. Prin aranjarea lor n combinaii diferite, pot forma mai mult de 64 de cuvinte de cod. Astfel pot fi codai pn la 20 de aminoacizi. Fiecare aminoacid poate avea mai mult de un codon. Codul unui lan polipeptidic se formeaz prin aranjarea ntr-o secven proprie a aminoacizilor care intr n alctuirea sa.
ARN mesager (ARNm) Majoritii aminoacizilor le corespund mai mult de un codon. Pe de alt parte un anumit codon reprezint comanda de ncepere a sintezei proteinei, iar trei codoni reprezint semnalul de ncetare a sintezei proteinei.
ARN de transfer (ARNt) ARN de transfer, indispensabil pentru sinteza proteinelor, are rolul de a transfera aminoacizii pe catena de ARNm, pe msur ce proteina este sinte-tizat. Fiecare tip de ARNt se combin specific cu unul din cei 20 de amino-acizi comuni acionnd ca un cru al aminoacidului specific spre ribozomi. La acest nivel, fiecare tip specific de ARNt recunoate un anumit codon de pe ARNm i aeaz aminoacidul la locul su n lanul molecule proteice sin-tetizate. ARNt este o molecul mic cu aspectul unui lan molecular plicaturat, n form de frunz de trifoi, fiind format din 80 de nucleotide. Rolul ARNt este de a ataa aminoacizii la catena proteic. De aceea este important ca pentru fiecare tip de aminoacid s existe numai un singur tip specific de ARNt, care s corespund n acelai timp unui anumit codon al ARNm.
75 ARNt are capacitatea de a recunoate codonul specific al ARNm, dato-rit unei triplete de nucleotide, numit anticodon. Acesta este localizat n mijlocul moleculei ARNt, corespunznd petalei din mijloc a frunzei de trifoi. n procesul de sintez a moleculei proteice ntre bazele anticodonului i cele ale codonului se stabilesc legturi slabe de hidrogen. Astfel, aminoacizii corespunztori se aliniaz ntr-o anumit ordine n lungul catenei de ARNm, stabilindu-se astfel secvena aminoacizilor din molecula proteic.
ARN ribozomal (ARNr) ARN ribozomal intr n structura ribozomului (60%) alturi de protei-nele structurale sau enzime, necesare sintezei proteice. Ribozomii sediul sintezei proteice fcioneaz ntotdeauna n asociere cu ARNt, care alege aminoacidul i cu ARNm care indic locul acestuia n lan-ul proteic.
Sinteza proteinelor n ribozom. n procesul sintezei proteinelor mole-cula de ARNm trece prin faa ribozomului, ncepnd de la un capt predeter-minat al moleculei de ARN, specificat de o anumit secven de baze ale ARNm, iar ribozomul va citi codul ARNm. Prin procesul de translaie va avea loc sinteza unei molecule proteice. n momentul n care prin dreptul ri-bozomului trece codonul stop, sinteza moleculei proteice nceteaz, proteina fiind eliberat apoi n citoplasm. Ataarea ribozomilor de reticulul endoplasmic se produce la nceperea sintezei proteinei, deoarece captul iniial al unor molecule proteice n curs de sintez are o secven de aminoacizi ce se leag la receptorul specific de pe reticulul endoplasmic. Proteina nou sintetizat strbate membrana RE rugos i apoi ptrunde n matricea acestuia. n acest timp la nivelul ribozomului continu sinteza pro-teinei ce va favoriza tracionarea i ataarea ribozomului la membrana re-ticulul endoplasmic. Acest proces se desfoar simultan n mai muli ribozomi ca rspuns la aceeai molecul de ARNm. n realizarea lanurilor proteice aminoacizii succesivi din lanul proteic se leag conform urmtoarea reacii chimice:
H2N O2 H R H2N O2 H R | || | | | || | | R C C OH + H N CCOOH R C C N C COOH + H2O
Radicalul hidroxil al gruprii COOH a unui aminoacid i un ion de hidrogen al gruprii NH2 de la cellalt aminoacid sunt ndeprtate i vor forma o molecul de ap. Cele dou situsuri reactive restante la cei doi ami-noacizi vecini se leag unul de altul ntr-o molecul unic. Acest proces se numete legtur peptidic. Fiecare legtur peptidic necesit mult energie, furnizat prin hi-droliza a patru molecule de ATP, procesul de sintez proteic fiind printre pro-cesele celulare cu cel mai mare consum energetic.
76 MATRICEA EXTRACELULAR
Matricea extracelular realizeaz interaciunea dintre celule i ali con-stitueni. Ea este alctuit din fibre incluse ntr-o substan fundamental al-ctuit din glicozaminoglicani i glicoproteine structurale. Matricea extracelular ocup spaiul interstiial i prezint o compo-nent fluid reprezentat de ap i de molecule solubile i o component solid alctuit din molecule insolubile i macromolecule ordonate n structuri. Componentele matricei extracelulare sunt secretate de ctre celulele con-junctive. Pn nu demult se considera c matricea extracelular este alctuit din proteine structurale pasive. n prezent, ca urmare a progreselor din biochimia i biologia celular i molecular a esutului conjunctiv, s-a schimbat con-cepiei privind matricea extracelular. Acum este clar c matricea extrace-lular este implicat ntr-un numr tot mai mare de procese. Astfel, matricea extracelular stabilizeaz structura fizic a esuturilor, asigurnd elasticitatea esuturilor i organelor; joac un rol important n adezivitatea celular; ndeplinete un rol metabolic i nu n ultimul rnd intervine n morfogenez prin influenarea: formei celulelor, proliferrii, migrrii i dezvoltrii celulelor la embrion. SUBSTANA FUNDAMENTAL
Substana fundamental a esutului conjunctiv este substana amorf, omogen i vscoas care umple spaiul dintre fibrele i celule esutului con-junctiv. n compoziia ei intr: glicozaminoglicanii, glicoproteinele structu-rale i lichidul tisular. Glicozaminoglicanii sunt polizaharide liniare formate din uniti diza-haridice repetitive i caracteristice. Acestea sunt compuse din: - acid uronic care poate fi acid glucuronic sau acid iduronic; - hexozamin care poate fi glucozamina sau galactozamina. Din grupul glicozaminoglicanilor fac parte: acidul hialuronic, condro-itin sulfaii, heparan sulfatul, keratan sulfatul, dermatan sulfatul i heparina. Cu excepia acidului hialuronic, toi ceilali glicozaminoglicani sunt legai covalent de o protein, rezultnd molecule de proteoglicani.
Acidul hialuronic este bine reprezentat n: substana fundamental a cordonului ombilical, piele, ligamente, sinoviale, valvule cardiace i n pereii vasculari. Cea mai mare parte a acidului hialuronic este legat de proteine. Datorit numrului mare de grupri hidroxilice de pe suprafaa sa, acidul hialuronic are rol n retenia apei, n controlul mecanismelor de difuzie i este reglator al unor activiti enzimatice. Datorit structurii sale laxe i poroase, acidul hialuronic ine la distan celulele, permindu-le s se mite liber i s prolifereze. Aceste funcii ale acidului hialuronic sunt importante n procesul de difereniere celular, permind migrarea celulelor. Acidul hialuronic este sintetizat de fibroblaste i mastocite, cantitatea acestuia fiind mai mare la tineri. Sinteza acidului hialuronic este stimulat de hormonii androgeni, estrogeni, STH, ACTH, iar degradarea sa se face cu ajutorul hialuronidazei.
77 Condroitin sulfaii apar ca amestecuri rezultate prin polimerizarea de uniti dizaharidice ce conin o molecul de acid glucuronic legat de N-acetil galactozamina 4- sulfatat sau N-acetil galactozamina 6-sulfatat. Condroitin 4-sulfatul (denumit i condroitin sulfat A) i condroitin 6-sulfatul (denumit i condroitin sulfat C) sunt legai ntotdeauna de proteine, fiind bine reprezentai n cartilaj, piele, tendon, ligamente i n pereii vasculari. Condroitin sulfaii sunt implicai n stabilizarea fibrelor de colagen, prin formarea de puni in- terfibrilare.
Keratan sulfatul se gsete n cornee, n nucleul pulpos i n cartilaj. El nlocuiete condroitin 4-sulfatul pe msur ce esuturile mbtrnesc. Con-centraia de keratan sulfat este crescut n strile patologice ale esutului con-junctiv.
Heparan sulfatul i heparina au efecte anticoagulante i de clarificare a plasmei, participnd la homeostazia mediului intern. Lanurile de heparan sulfat se leag de: colagenii fibroi de tipul I, III, V, fibronectin, laminin, trombospondin, care sunt prezeni n matricea interstiial ce nconjoar lamina bazal. Heparan sulfatul predomin n membranele bazale de la ni-velul glomerulului renal i din piele, unde ndeplinete un rol specific n re-cunoaterea, ataarea i filtrarea unor substane anionice. Dermatan sulfatul este un proteoglican sulfatat prezent n piele, inim i n vasele de snge.
Glicoproteinele structurale sunt alctuite dintr-un nucleu proteic i din polizaharide care se ramific, se termin adesea cu acid sialic i nu conin glucozamin. Glicoproteinele structurale mediaz relaiile intercelulare i in-flueneaz adezivitatea celular. Din aceast categorie fac parte fibronecti-nele, care pot fi identificate n matricea tuturor esuturilor conjunctive; con-dronectinele, prezente n cartilaj i lamininele, dispuse n membrana bazal.
Fibronectinele reprezint o clas important de proteine multiadezive, identificate n matricea extracelular conjunctiv i n membrana bazal, fiind sintetizate de fibroblaste, de celulele endoteliale i n msur mai mic de unele celule epiteliale. n prezent se cunosc peste douzeci de tipuri de lanuri polipeptidice diferite ce intr n alctuirea fibronectinelor. Rolul principal al fibronectinelor este n ataarea celulelor la colagenul de tip I, II, III i V, precum i n formarea de complexe cu fibrina, fibrinogenul, proteoglicanii, heparina, acidul hialuronic i cu unele componente ale complementului. De asemenea fibronectinele au rol important n organizarea citoscheletului, n migrarea i diferenierea celular din timpul dezvoltrii embrionare. n anumite condiii, fibronectinele pot suplini aciunea factorului de cretere a fibroblastului, a factorului de cretere a epidermului i a prostaglandinei F. Fibronectinele sunt proteine opsonizante care faciliteaz fagocitoza i pro-cesele de reparare tisular. Ele sunt importante deoarece faciliteaz migrarea macrofagelor i a altor celule implicate n imunitate, n timpul reparrii rnilor. Sinteza i cantitatea fibronectinelor sunt alterate n boala canceroas, reducndu-se astfel aderena intercelular i favoriznd metastazarea.
Entactina, component a laminei bazale, este o glicoprotein de ade-ziune, sulfatat, legat de laminin. Rolul su este de a lega laminina cu colagenul de tip IV al laminei densa.
78 Tenascina este o glicoprotein de adeziune, abundent n esutul embrionar. Este secretat de celulele gliale ale esutului nervos n dezvoltare. Are rol n migrarea celular, prin implicarea n adeziunea dintre celule i marticea extracelular.
Condronectina este prezent n cartilaj, unde mediaz adeziunea con-drocitelor la colagenul de tip II.
Laminina este o glicoprotein sulfatat, heterotrimeric care se gsete n mare concentraie n membranele bazale.
Osteonectina este o glicoprotein situat n matricea extraccelular a osului. Are rolul de a lega mineralele la colagenul de tip I; influeneaz cal-cificarea prin inhibarea creterii cristalelor.
Lichidul tisular rezult n urma trecerii din capilare n esutul conjunc-tiv a apei, mpreun cu molecule mici, inclusiv proteine cu mas molecular mic i cu diferii ioni. Rezult n felul acesta un lichid asemntor cu plasma sanguin. n unele situaii patologice, apa se acumuleaz n cantitate mare n esuturile conjunctive, formndu-se edeme.
FIBRELE CONJUNCTIVE
n substana fundamental a esuturilor conjunctive se deosebesc trei categorii de fibre: de colagen, elastice i de reticulin. La microscopul optic ele au aspect diferit, dar studiile biochimice i cele de microscopie electronic au scos n eviden faptul c ntre ele exist asemnare ultrastructural i de compoziie n aminoacizi.
FIBRELE DE COLAGEN
Colagenii sunt o clas major de proteine fibroase insolubile n matricea extracelular a esutului conjunctiv. Colagenul formeaz mai mult de 30% din greutatea proteinelor din esutul conjunctiv, iar n piele mai mult de 70% din greutatea dermului. n funcie de necesitile structurale i funcionale ale esutului, ele-mentele colagene pot fi abundente (ex. esut conjunctiv dens) sau slab re-prezentante (ex. esutul conjunctiv lax) i pot fi dispuse ntr-un mod distinct. De exemplu n tendon i ligamente, fibrele de colagen sintetizate de fibroblaste sunt groase, lungi i grupate n fascicule paralele, ce confer rezistena necesar la ntindere. n contrast, fibrele de colagen au tendina de a fi dispuse circular n jurul axului lung al unor structuri tubulare, extensive, cum sunt vasele de snge sau intestinul. n cartilaj i os, fibrele de colagen sintetizate de condroblaste respectiv osteoblaste, sunt dispuse astfel nct s ajute la ndeplinirea rolului mecanic al scheletului. Moleculele de colagen reprezint o component major a laminei ba-zale, care se gsete interpus ntre celulele epiteliale i esutul conjunctiv subiacent. n microscopia
79 electronic, lamina bazal poate fi observat ca o reea de fibrile fine ce pierd modelul caracteristic reprezentat prin benzi n-tunecate i clare. Endoteliul capilarelor este de asemenea susinut de o lamin bazal. n acest caz (capilarele glomerulului renal) lamina bazal are o gro-sime de 1500 . Colagenul servete pentru o varietate larg de funcii struc- turale i mecanice, iar ca un component al laminei bazale joac un rol important n controlul permeabilitii vasculare i epiteliale. Fibrele de colagen se coloreaz n roz n coloraia uzual cu hematoxi-lin-eozin, albastru n coloraia tricrom Malory sau cu albastru de anilin, verde prin metoda tricrom Masson (modificat de Goldner), rou aprins prin metoda Van Gieson i n mod specific rou cu colorantul rou Sirius. Fibrele de colagen au diametrul de 10-15 m, culoarea alb, sunt drepte sau ondulate, nu se ramific i nu se anastomozeaz. Fiecare fibr este alctuit din fibrile fine de 0,3-0,5 m, dispuse paralel, solidarizate ntre ele prin proteoglicani. Studiile de microscopie electronic au artat c fiecare fibril este alc-tuit din protofibrile cu diametrul de 200-400 , cu un aspect ultrastructural caracteristic, reprezentat printr-o periodicitate de 640 compus dintr-o ban-d clar i o band ntunecat. Unitatea de protein care se polimerizeaz pentru a forma fibrilele de colagen este o molecul alungit denumit tropocolagen, care msoar 280 nm n lungime i 1,5 nm grosime. Tropocolagenul const din trei subuniti de lanuri polipeptidice alfa spiralate, dispuse sub forma unui triplu helix. Diferenele n compoziia chimic a acestor lanuri polipeptidice sunt respon-sabile de existena diferitelor tipuri de colagen. Structura molecular este de-terminat de compoziia n aminoacizi a fiecrui lan. Lanurile de polipeptide din colagen conin secvena repetitiv de tipul (X-Y-Gly) n , n care cel mai adesea prolina se afl n poziia X, iar hidroxiprolina n poziia Y. Aceti doi aminoacizi reprezint 22% din compoziia n aminoacizi a colagenului. Glicina reprezint aproximativ 33% din coninutul n aminoacizi a colagenu-lui. Toi colagenii prezint segmente helicale spiralate care constau din lan-uri similare ca structur, dar proprietile unice ale fiecrui tip de colagen se datoreaz n primul rnd segmentelor care ntrerup triplu helixul i care se plicatureaz n alte tipuri de structuri tridimensionale. Configuraia sub form de triplu helix i ofer colagenului o serie de proprieti unice i este esenial pentru fibrilogeneza normal. Mutaiile care afecteaz formarea unui triplu helix stabil, conduc la modificri funcionale ale esutului conjunctiv. n colagenii de tip I, II i III, moleculele de tropocolagen se agreg n uniti microfibrilare care se mpacheteaz mpreun pentru a forma fibrile. Legturile de hidrogen i stabilirea de interaciuni hidrofobe, reprezint etape importante n agregarea i mpachetarea acestor molecule. ntr-o etap ulterioar, aceast structur este solidarizat prin formarea unei legturi co-valente, proces catalizat de lizil oxidaz. n prezent este clar ideea potrivit creia colagenii reprezint o familie de proteine foarte nrudite structural, dar care din punct de vedere genetic sunt distincte. n genomul uman exist cel puin 25 de gene diferite ce codific lanu-rile alfa, care prezint diferene minime n secvenele de aminoacizi, iar aceste lanuri alfa corespund cel puin pentru 16 tipuri diferite de colagen identificate i numerotate cu litere romane. n pielea uman s-au identificat 10 tipuri de colagen distincte din punct de vedere genetic, iar localizarea precis a genelor pe cromozomi, pentru cei mai muli dintre acetia, a fost fcut prin tehnici de hibridizare in situ.
80 Segmente colagenice de tipul triplu helix au fost identificate i n alte proteine, ca: acetilcolinesteraza, fraciunea C 1q a complementului i n recep-tori ai macrofagelor.
FIBRELE ELASTICE
Fibrele elastice sunt alctuite din elastin, o scleroprotein care spre deosebire de colagen conine n cantitate mai mic hidroxiprolina, dar n mod caracteristic mai mult valin, dezmozin i isodezmozin. Proprietatea e-senial a fibrelor elastice este elasticitatea, proprietate care diminu odat cu mbtrnirea organismului, din cauza depunerii srurilor de calciu i a trans-formrii elastinei n elacin. Elastina este sintetizat de fibroblaste i se agre- g n fibre cu diametrul de 0,5-2 m, mai subiri dect cele colagene, care se ramific i se anastomozeaz. Precursorul intracelular al elastinei se numete tropoelastin, care prin polimerizare d natere fibrelor elastice solidarizate ntre ele prin legturi covalente i necovalente. Fibrele i lamele elastice se coloreaz slab prin metoda hematoxilin-eozin sau sunt cromofobe, fiind evideniate cu orcein n rou brun, n rou cu rezorcin-fuxin sau n negru cu aldehid-fuxin; sunt constant PAS+ datorit cimentului interfibrilar de natur glicoproteic. Examinate cu ajutorul microscopului electronic cu transmisie, fibrele elastice mature prezint dou componente distincte: - componenta major reprezentat de elastin (aproximativ 90%) care este amorf, electronodens i nu prezint periodicitate distinct n mi-croscopia electronic; - componenta microfibrilar care nconjoar elastina fiind reprezentat de microfibrile cu diametrul de aproximativ 10-12 nm, alctuite din fibrilin, o familie de glicoproteine codificate de gene aflate pe cro-mozomii umani 5, 15 i 17; o caracteristicile fibrilinei este coninutul su mare n cistein. Fibrele elastice din esuturile conjunctive formeaz o reea res-ponsabil de elasticitatea diferitelor organe. Distribuia fibrelor elastice este variabil n diferite esuturi: n plmni i n aparatul cardiovascular sunt bine reprezentate (abundente); n aort se gsesc lamele elastice, iar n piele constituie o component minor, elastina reprezentnd doar 1-2% din greutatea dermului.
FIBRELE DE RETICULIN
Fibrele de reticulin sunt formate din reticulin, substan asem-ntoare colagenului, denaturat de colagenaz i pepsin, dar rezistent la aciunea tripsinei. Diferenele fa de colagen sunt legate de compoziia n aminoacizi, concentraia mai mare de glucide i prezena unei importante fraciuni lipidice (absente din colagen). Fibrele reticulare sunt mai numeroase la tineri, aspect care pledeaz pentru transformarea lor n fibre colagene la b-trni. Fibrele de reticulin sunt foarte subiri, cu diametrul cuprins ntre 0,5-2 m; se ramific i se anastomozeaz formnd reele. Nu se evideniaz n coloraii uzuale, dect prin impregnaie argentic i sunt PAS+. Argirofilia i reacia PAS+ sunt date de concentraia mare de glicoproteine asociate acestor fibre. Fibrele de reticulin conin 6-12% hexoze fa de numai 1% n fibrele de colagen. Imunocitochimia i histochimia evideniaz c fibrele de
81 reticulin sunt alctuite n principal de colagen de tip III n asociere cu alte tipuri de colagen, glicoproteine i proteoglicani. Ultrastructural, fibrele de reticulin prezint fibrile cu periodicitate axial specific colagenului, dar cu o dispoziie particular ce explic absena birefringenei. Fibrele de reticulin sunt sintetizate de fibroblaste, condroblaste, celule endoteliale, ca molecule de colagen tip III, care exocitate vor polimeriza n spaiul extracelular.
PROLIFERAREA I DIFERENIEREA CELULAR
Dezvoltarea organismului se realizeaz prin dou procese fundamen-tale: - proliferarea celular, prin care se produce creterea numeric a celulelor, - diferenierea celular, prin care se produce specializarea celulelor pentru ndeplinirea anumitor funcii. n perioada timpurie a dezvoltrii embrionare se produce proliferarea rapid a celulelor, iar prin difereniere vor rezulta numeroase tipuri de celule specializate. Organismul adult este alctuit din mai multe sute de tipuri celulare deosebite, majoritatea fiind blocat n faza Go a ciclului celular.
Diferenierea celular: - se desfoar pe tot parcursul vieii (ncepe n momentul concepiei i nceteaz la moartea individului). - are intensitate maxim n timpul dezvoltrii embrionare, - este un proces ireversibil la om, deoarece nici o celul difereniat nu mai poate, n condiii normale s-i recapete caracterele embrionare avute la nceputul diferenierii.
Desfurarea procesului de difereniere celular are la baz anumite mecanisme specifice. Astfel, la mamifere fertilizarea oului marcheaz nce-putul procesului de difereniere. Oul fertilizat i celulele rezultate din primele dou diviziuni (primele blastomere) pot genera prin difereniere oricare din tipurile celulare funcionale ale adultului. Acestea au deci un potenial maxim de difereniere, motiv pentru care sunt numite celule pluripotente sau multipotente. n cazul celulelor pluripotente, ntregul set de gene din nucleu este funcional, ele avnd astfel posibilitatea s urmeze orice traseu evolutiv de difereniere. Cnd celulele discului embrionar se dispun pe cele trei straturi ectoderm, mezoderm i endoderm, ele devin celule orientate. Din acest mo-ment ele pot da natere diferitelor tipuri de celule. Astfel, celulele ecto-dermului vor putea forma celule nervoase, celule epiteliale. i celulele orientate posed ntregul set de gene caracteristic speciei res-pective ns nu toate sunt funcionale, unele fiind represate. Vor rmne funcionale acele gene care sunt necesare pentru ndeplinirea funciilor specifice, caracteristice tipurilor celulare spre care poate evolua o celul orientat. Se formeaz mai trziu celulele stem, care au capacitate de nmulire, dar pot da natere numai unui singur tip celular sau a unui numr mic de celule nrudite. Astfel, celulele stem din mduva osoas hematogen reprezint celule cap de serie pentru leucocite, hematii i
82 trombocite; celulele stem din epiteliu sunt celule cap de serie pentru celulele epiteliale. Celulele care se formeaz din celulele stem nu mai au posibiliti de difereniere, ele numindu-se celule adulte specializate. nlocuirea acestora se poate face doar pe baza celulelor stem. Organismul adult la mamifere nu posed celule pluripotente sau celule orientate, dar are rezerve de celule stem n toate esuturile care se autontrein prin diviziune. Excepie fac esutul muscular cardiac i esutul nervos ale cror celule nu se mai divid.
FACTORII DE CRETERE
Proliferarea celular este controlat prin factorii de cretere care se leag la receptorii de pe suprafaa celular, care la rndul lor sunt conectai la moleculele semnal care transmit mesajul la receptorii nucleari, unde factorii de transcripie se leag la ADN, iar sinteza proteic va fi stimulat, determinnd astfel continuarea diviziunilor celulare (fig. 9). Factorii de cretere sunt proteine care se leag la receptorii de pe suprafaa celulelor, avnd ca principal rezultat activarea proliferrii i/sau diferenierii celulare (tabel. 2). Muli factori de cretere sti- muleaz diviziunea celular a mai multor tipuri celulare, n timp ce alii sunt specifici unui tip celular.
Fig. 9. Diagrama controlului proliferrii celulare.
Factorul de cretere al epidermului (EGF). Ca i ali factori, se leag de receptorii specifici de pe suprafaa celular. Receptorul pentru EGF conine un domeniu kinazic, cu activitate tirozin kinazic activat ca rspuns la legarea EGF. Acest domeniu kinazic va fosforila receptorul EGF printr-un proces de autofosforilare, ca la alte proteine, cu activarea receptorului. Experimental s-a demonstrat c proto-oncogena Neu este omoloag receptorului EGF. Factorul de cretere al epidermului are efecte proliferative att asupra celulelor de origine mezodermal, ct i asupra celor de origine ectodermal, n mod particular asupra cheratinocitelor i fibroblastelor. EGF are efect negativ asupra unor carcinoame, ct i asupra celulelor foliculului de pr.
83
Tabel. 2. Factorii de cretere i efectele lor. Factor de cretere Sursa principal Activitate primar PDGF trombocitele, celulele en- doteliale, placenta stimuleaz proliferarea: esutului conjunctiv, celulor glialele, celule- lor musculare netede EGF glandele submaxilare, glan- dele Brunner stimuleaz proliferarea celulelor mezenchimale, gliale i epiteliale TGF- celule tumorale (carcinoa- me), macrofage, cheratino- cite activate important n procesele de vinde- care FGF diferite tipuri celulare, pro- teine asociate matricei ex- tracelulare stimuleaz proliferarea diferitelor celule, inhib unele celule stem, induce dezvoltarea mesodermului n fazele embrionare precoce NGF stimuleaz creterea neuritului i supravieuirea celulelor nervoase Eritropo- etina rinichii stimuleaz proliferarea i diferen- ierea eritrocitelor TGF- celulele TH 1 (T-helper) ac- tivate i celulele (NK) efect antiinflamator, stimuleaz procesele de vindecare, inhib proliferarea macrofagelor i lim- focitelor IGF-I ficatul stimuleaz proliferarea diferitelor tipuri celulare IGF-II diverse celule stimuleaz proliferarea diferitelor tipuri celulare de origine fetal
Tot un rspuns la EGF este i inducia expresiei unor proto-oncogene nucleare, cum sunt Fos, Jun i Myc. EGF are de asemenea efect de scdere a secreiei gastrice acide. Factorul de cretere derivat din plachete (PDGF) este alctuit din dou lanuri polipeptidice A i B, care formeaz homodimerii AA sau BB, sau hetero-dimeri (AB). Proto- oncogena c-Sis este omoloag lanului A al PDGF. Doar forma dimeric a PDGF interacioneaz cu receptorul PDGF. Se cu-nosc receptori specifici homodimerului AA i receptori pentru dimerii BB i AB. Ca i receptorul EGF, receptorii PDGF au activitate tirozin kinazic intrinsec. Dup autofosforilarea receptorului PDGF, numeroase proteine semnal asociate receptorului sunt n mod subsecvent tirozin fosforilate. Efectul proliferativ al PDGF se exercit asupra mai multor tipuri de celule mezenchimale. Alte rspunsuri la PDGF includ: remanierile citoscheletale i intensificarea turnoverului polifosfoinositolului. Ca i EGF, PDGF induce expresia a numeroase proto-oncogene localizate nuclear, cum sunt Fos, Myc i Jun. Factorul de cretere fibroblastic (FGFs). Sunt cel puin 19 membrii distinci ai familiei FGF. Sarcomul Kaposi, prevalent la pacienii cu SIDA, secret un omolog al FGF,
84 numit proto-oncogena K-FGF. FGFs au un rol important n dezvoltarea sistemului scheletal i a celui nervos. FGFs au efect neurotrofic pentru celulele sistemului nervos central i periferic. De asemnea, diferii membrii ai familiei FGF sunt inductori puternici ai diferenierii mezodermale n perioada timpurie a vieii embrionare. Ca efecte non-proliferative sunt reglarea funciei celulelor hipofizei i ovarului. Factorii de cretere fibroblastici interacioneaz cu receptori celulari specifici. Au fost identificate patru tipuri distincte de receptori FGFR1-FGFR4. Toi aceti receptori au activitate tirozin kinazic intrinsec, la fel ca receptorii EGF i PDGF. i n acest caz, autofosforilarea este rspunsul imediat la legarea FGF. Dup activarea receptorilor FGF numeroase proteine semnal asociate recep-torului vor suferi procese de tirozin fosforilare. Proto-oncogena Flg este omoloag familiei de receptori FGF. Receptorul FGFR1 este i poarta de intrare n celule a herpes virusurilor. FGFs se prinde la suprafaa celulei de proteoglicanul heparansulfat. Scopul acestei legturi nu este clar, dar permite ca factorul de cretere s rmn asociat suprafeei extracelulare a celulei, care poate astfel stimulat n diferite con-diii. Receptorii FGF au expresie crescut la osul n dezvoltare i diferite boli dominant autozomale rezult n urma unor mutaii ale genelor receptorilor FGF. Cu prevalen mare este acondroplazia, la aceti pacieni producndu-se modificri ale domeniului transmembranar al FGFR3 (glicina nlocuiete arginina). Alte tulburri ale creterii oaselor cunoscute ca sindroame cra-niosinostoz rezult n mutaii ale FGFR1, FGFR2 i FGFR3. Uneori aceeai mutaie putnd cauza dou sau mai multe astfel de sindroame (tabel. 3).
Tabel. 3. Sindroame produse de mulaii ale genelor receptorilor FGF. Receptor afectat Sindrom produs FGFR1 Pfeiffer FGFR2 Apert FGFR2 Beare-Stevenson FGFR2 Crouzon FGFR2 Jackson-Weiss FGFR2 Pfeiffer FGFR3 Crouzon
Factorul de cretere transformator-| (TGF-|) a fost caracterizat ca o protein (secretat de celule tumorale) capabil s induc transformarea fe-notipului celulelor non- neoplazice n cultur. Acest efect este reversibil, as-pect demonstrat de revenirea celulelor la un fenotip normal dup ndepr-tarea TGF-|. Au fost identificate mai multe proteine omoloage TGF-| (TGF-|-1 TGF-|-4). De asemenea exist mai multe clase de receptori de suprafa care leag diferit TGF-|. TGFs-| au efecte proliferative asupra multor celule mezenchimale i e-piteliale. n diferite condiii TGFs-| au efecte antiproliferative asupra celu-lelor endoteliale, macrofagelor, limfocitelor T i B. Unele efecte includ sc-derea secreiei de imunoglobuline, supresia
85 hematopozei, miogenezei, adipo-genezei, steroidogenezei. Diferii membrii ai familiei TGF-| pot induce di-ferenierea mezodermal n perioada timpurie a embriogenezei. Factorul de cretere transformator-o (TGF-o) ca i forma , a fost ini-ial identificat ca substan secretat de diferite celule tomorale. n conjuncie cu TGF-|-1, poate transforma reversibil diferite tipuri de celule normale n cultur. TGF-o se leag la receptorii EGF ca i de receptorii proprii pro-ducndu-se astfel efectul factorului de cretere. Sursa principal de TGF-o sunt carcinoamele, dar i macrofagele i cheratinocitele activate. n popu-laiile de celule normale, TGF-o este un puternic factor de cretere al chera-tinocitelor. Eritropoietina (Epo) este sintetizat de rinichi, fiind reglator al eritropo-iezei. Epo stimuleaz proliferarea i diferenierea eritrocitelor imature, sti-muleaz creterea celulelor progenitoare eritroide i induce diferenierea uni-tilor formatoare de colonii de eritrocite. Factorul de cretere insulin-like (IGF-I), numit iniial somatomedina C, este un factor de cretere nrudit structural cu insulina. IGF-I este produs ca rspuns la hormonul de cretere (GH) i atunci induce activiti celulare sub-secvete, n mod particular n dezvoltarea osoas. Datorit faptului c IGF-I rspunde la hormonul de cretere a fost numit somatomedin. Studiile ulterioare au demonstrat c IGF-I are activitii autocrine i paracrine n plus fa de activitile endocrine observate iniial. Re-ceptorul IGF-I, ca i receptorul pentru insulin, are activitate intrinsec ti-rozin kinazic. Datorit structurii similare, IGF-I poate s se lege de recep-torii pentru insulin, dar cu o afinitate mai mic dect insulina. Factorul de cretere insulin-like este aproape exclusiv exprimat n esu-turile embrionare i neonatale. Dup natere nivelul detectabil al IGF-II scade semnificativ. De aceea se consider c este un factor de cretere fetal. Re-ceptorii IGF-II sunt identici cu receptorii pentru manoz-6-fosfat, respon-sabili pentru integrarea enzimelor n lizozomi. Factorul de necroz tumoral-o (TNF-o) este produs de ctre macrofa-gele activate. Ca i IL-1, TNF-o induce expresia altor factori de cretere au-tocrini, intensificnd rspunsul celular la aciunea factorilor de cretere. TNF-o acioneaz sinergic ce EGF i PDGF asupra unor tipuri celulare. Ca ali factori de cretere, TNF-o induce expresia unor proto-oncogene nucleare i a unor interleukine. Factorul de necroz tumoral-| (TNF-|) se caracterizeaz prin capaci-tatea de a omor diferite tipuri celulare i de capacitatea de a induce diferen-ierea terminal n altele. Un rspuns semnificativ non-proliferativ ca rs-puns la TNF-| este inhibarea lipoprotein lipazei prezent pe suprafaa clulelor endoteliale. Sinteza TNF-| se realizeaz n principal n limfocitele T citotoxice. Inducerea expresiei TNF-| rezult dup creterea nivelului IL-2, ca i prin interaciunea antigenelor cu receptorii de pe celulele T.
Citokinele: - reprezint un grup de molecule cu rol regulator ce funcioneaza ca mediatori ai comunicrii intercelulare, n condiii normale ct i n condiii patologice, - sunt glicoproteine solubile, cu greutate molecular mic, - i exercit efectele prin intermediul interaciunii cu receptori specifici de pe suprafaa celulelor circulante sau a celor tisulare, - sunt secretate primar de ctre leucocito i stimuleaz rspunsul imun umoral i celular i celulele fagocitare: o citokinele secretate de limfocite se numesc limfokine, o cele secretate de monocite sau macrofage sunt numite monokine.
86 O mare familie de citokine sunt produse de diferite celule ale orga-nismului. Multe dintre limfokine sunt cunoscute ca interleukine, care nu sunt secretate doar de leucocite, dar sunt capabile s afecteze rspunsul celular al leucocitelor. n mod specific interleukinele sunt factori de cretere orientai spre celule de origine hematopoietic.
I nterleukinele au un spectru mult mai larg de efecte biologice (tabel. 4). Au fost descrise pn acum aproximativ 20 de tipuri de interleukine. IL-1, IL-6 i IL-8 sunt mediatori multifuncionali nespecifici sintetizai de mai multe tipuri celulare, printre care i de keratinocite, cu rol n etapa precoce a re-aciilor de aprare a organismului mpotriva diferitelor agresiuni. n ansamblu rolul lor este de reglare a proliferrii, diferenierii i migrrii celulelor infla-matorii i non-inflamatorii.
Interleukina-1 (IL-1) este reprezentat de o familie de trei polipeptide nrudite din punct de vedere structural. Acestea sunt IL-1a i IL-1b, molecule cu un spectru larg de efecte sistemice, locale (prin mecanism autocrin) i imunologice, acestea din urma cu rol n medierea mecanismelor de aparare ale organismului gazda. A treia polipeptid este antagonistul receptorului IL-1 (IL-1ra), inhibitor specific al activitaii IL-1.
Tabel. 4. Citokinele i rolul lor. Interleukina Principala surs Activitate primar IL1- i IL-1- macrofagele i alte celule prezentatoare de antigene costimularea celulelor prezenta- toare de antigene i a limfocitelor T; inflamaie i febr, hematopo- iez IL-2 limfocitele TH 1 i NK proliferarea limfocitelor B i a limfocitelor T activate, funcii NK IL-3 limfocitele T activa- te creterea celulelor hematopoietice progenitoare IL-4 limfocitele TH 2 i mastocitele proliferarea limfocitelor B, cre- terea i funcionarea eozinofilelor i mastocitelor, inhibarea produc- iei de monokine IL-5 limfocitele TH 2 i mastocitele creterea i funcionarea eozino- filelor IL-6 limfocitele TH 2 ac- tivate, celulele pre- zentatoare de anti- gene i alte celulele somatice proliferarea limfocitelor B, trom- bopoiez, sinergic cu IL-1 i TNF pe imfocitele T IL-7 celulele stromale ti- mice i din mduva osoas limfopoiez T i B IL-8 macrofagele i alte celule somatice chemoatractant pentru neutrofile i celule T IL-9 limfocitele T efecte hematopoietic i timopo- ietic IL-10 celulele TH 2 activa- te, celulele TCD8 + , celulele B, macrofa- inhib producia de citokine, sti- muleaz proliferarea limfocitelor B i producerea de anticorpi, efect
proliferarea limfocitelor B, cre- terea i funcionarea eozinofilelor i mastocitelor, inhibarea produc- iei de monokine
Principala funcie a IL-1 este de a intensifica activarea limfocitelor T ca rspuns la antigene. Activarea imfocitelor T de ctre IL-1 determin crete-rea de ctre limfocite T a produciei de IL-2 i de receptori a IL-2, care de-termin intensificarea activrii limfocitelor T (prin mecanism autocrin). IL-1 induce de asemenea creterea expresiei interferonului- (IFN- ) asupra lim-focitelor T. Interleukinele-1 sunt secretate primar de ctre macrofage, dar i de ctre neutrofile, celule endoteliale, celule musculare netede, celule gliale, astrocite, celule T i B, fibroblaste i cheratinocite. Producia de IL-1 de ctre aceste tipuri diferite de celule se produce doar ca rspuns la stimularea celular. n plus fa de efectele asupra celulelor T, IL-1 poate induce pro-liferarea celulelor non-limfoide.
Interleukina-2 (IL-2) produs i secretat de limfocitele T activate, este o interleukin major responsabil pentru proliferare clonal a celulelor T. IL-2 exercit efecte i asupra limfocitelor B, macrofagelor i celulelor natural killer (NK). Producia de IL-2 se realizeaz primar la nivelul limfocitelor T helper CD4+ T. Expresia att a IL-2, ct i a receptorilor IL-2 este realiaz de celulele T, fiind indus de IL-1. IL-2 are rol n: - stimularea proliferarii limfocitelor T cu receptori cu afinitate mare pen-tru IL-2, - stimularea proliferrii i diferenierii limfocitelor B activate, - stimularea activitii celulelor NK, - stimularea sintezei IFN- la nivelul celulelor T.
Interleukina-3 (IL-3) produs de celulele T activate, este un membru al familiei factorilor de stimulare a coloniilor (CSFs). Principala aciune este stimularea formrii coloniilor de granulocite, macrofage i a coloniilor de granulocite-macrofage. n plus stimuleaz i producia de megacariocite.
Interleukina-4 (IL-4), denumit iniial factorul de stimulare al limfoci-telor B (BSF-1) are ca principale efecte: - activarea proliferrii celulelor B, - inducerea expresiei antigenelor clasei a II-a a MHC, - inducerea sintezei de IgG i IgE, - factor de cretere pentru unele limfocite T i mastocite.
Interleukina-5 (IL-5) acioneaza ca: - stimulatoare a sintezei de imunoglobuline de ctre limfocitele B, - activatoare a proliferrii i funciei eozinofilului.
88
Interleukina-6 (IL-6) apartine grupului de factori stimulatori ai celulei B (BSF-2). IL-6 este produs de macrofage, fibroblaste, celule endoteliale i celule T helper activate. IL-6 acioneaz sinergic cu cu IL-1 i TNF n reali-zarea rspunsului imun, incluznd activarea celulelor T. Are multiple alte e-fecte biologice: - induce diferenierea limfocitelor B i sinteza consecutiv de imunoglo-buline, - este cofactor al proliferarii celulelor T, - este cofactor al sintezei de IL-2, - stimuleaz sinteza de glucocorticoizi, - este principalul inductor al proteinelor de faza acut cu origine hepatic, - acioneaz sinergic cu CSFs n diferenierea celulelor hematopoietice.
Interleukina-7 (IL-7) este un factor de cretere a celulelelor B imature, timocitelor i a unor limfocite T.
Interleukina-8 (IL-8) reprezint o familie de proteine cu aciune chemo-atractant asupra leucocitelor i fibroblastelor. Aceast familie de proteine se numesc chemokine. IL-8 este produs de monocite, neutrofile, celule NK i are rol de chemoatractant pentru neutrofile, bazofile i celule T.
Interleukina-10 (IL-10) este o citokin pleiotropic produs de limfoci-tele Th2. Inhib sinteza: IL-2, IL-3, TNF-o, IFN- i a GM-CSF. Celelalte limfocite IL-11 IL-20 sunt recent descrise, funciile lor fiind nc incomplet elucidate.
Familia interferonilor (IFN) este format din IFN- produs mai ales de leucocite; IFN-, sintetizat de fibroblaste i celulele endoteliale i IFN- sin-tetizat de limfocite. IFN- i IFN- au un receptor comun, diferit de cel al IFN-. Aciunile interferonilor sunt (tabel. 5): - controlul creterii i diferenierii celulare, - modularea raspunsului imun celular i umoral, - modificri ale suprafeei membranei celulare.
Tabel. 5. Interferonii i rolul lor. Interferonii Sursa principal Activitate primar INF- i INF- macrofagele, neu- trofilele i unele ce- lule somatice efect antiviral, activarea celulelor i macrofagelor INF- limfocitele TH 1
activate i celule NK activarea macrofagelor, neutrofilelor, limfocitelor NK, stimuleaz imunitatea mediat celular, efect antiviral
89 Factorii de stimulare a coloniilor (CSFs) sunt citokine care stimuleaz proliferarea unor celule stem specifice pluripotente din mduva osoas la a-dult. Factorul de stimulare a coloniilor de granulocite (G-CSF) are efecte proliferative asupra liniei granulocitare. Factorul de stimulare a coloniilor de macrofage (M-CSF) este specific pentru linia macrofagelor. Exist i fac-torul de stilulare a coloniilor de granulocite i macrofage (GM-CSF) care sti- muleaz proliferarea ambelor tipuri celulare. Epo este considerat ca factor de creterea a coloniilor (CSF), pentru c stimuleaz proliferarea unitilor for-matoare a coloniilor de eritrocite. IL-3 este de asemenea cunoscut ca multi-CSF, pentru c stimuleaz celulele stem s produc toate formele de celule hematopoietice.
SEMNALIZAREA CELULAR
Celulele nu triesc izolat, comunicarea intercelular ajungnd n orga-nismele superioare la o mare complexitate. Orice modificare aparut n comunicarea intra- sau intercelular ca urmare a unor disfuncii ale unor ci de semnalizare celular, determin modificri n creterea i diferenierea celulelor. Celulele semnalizatoare sintetizeaz moleculele semnal sau liganzii, c-re vor ajunge la celulele int, unde detecia lor este realizat de receptori specifici. Prin transducie, semnalul captat de receptor este transmis, declannd rspunsul celular. Astfel, moleculele semnal pot declana: mo-dificarea metabolismului celular (ex. glicozilarea n hepatocitele care de- tecteaz adrenalina), o imediat modificare a ncrcturii electrice membra-nare, sau modificarea expresiei unor gene (transcripia) n nucleu.
n funcie de distana la care sunt transmise semnalele, deosebim: - semnalizarea endocrin, moleculele semnal sunt hormonii, ce acioneaz la distan, - semnalizarea paracrin, realizat ntre celulele vecine prin intermediul citokinelor, - semnalizarea autocrin, n care celulele rspund la moleculele semnal pe care le produc.
Liganzii sunt de dou tipuri: - unii trec prin membrana plasmatic, pentru a se lega la receptorii intracelulari (ex. steroizii, monoxidul de azot), - alii se leag la receptorii celular de la suprafaa celulei (ex. proteine). Steroizii sunt mici molecule hidrofobe care pot difuza liber prin membrana plasmatic, pentru a se lega la receptorii intracelulari. Receptorii pentru steroizi sunt proteine ce se afl n nucleu, cu excepia celor pentru glucocorticoizi, care se afl n citosol naite de a lega ligandul. Dup legarea moleculei semnal, receptorii devin activatori sau vor represa genele int. Monoxidul de azot dup ce este sintetizat, iese n afara celulei afectnd activitatea celulelor vecine prin mecanism paracrin. Dup ce difuzeaz liber prin membrana plasmatic monoxidul de azot va aciona pe enzimele intracelulare. Cea mai frecvent protein int este guanil ciclaza, enzima care genereaz mesagerul de ordinul II, cGMP.
90 La cea de-a doua categorie de liganzi: hormonii peptidici (insulina, glucagonul, hormonul de cretere, ACTH, etc.) sau factorii de cretere, legarea se face la receptorii de la suprafaa celulelor, ceea ce va declana un lan de reacii intracelulare. Interaciunile dintre receptorii de pe suprafa i moleculele int in-tracelulare se realizeaz prin intermediul proteinei G. Receptorii cuplai cu proteina G (RCPG) sunt asemntori din punct de vedere morfofuncional, prezentnd apte pasaje transmembranare. Proteina G sunt alctuit din subunitile , , i este n legtur cu membrana plasmatic. Legarea liganzilor la RCPD va fi urmat de legarea acestuia de o protein G, care va fi activat, se va desprinde de receptor, transportnd semnalul la o int intra-citoplasmatic, canal ionic, enzim (fig. 10).
Fig. 10. Diagrama activitii receptorilor legai de proteina G.
Exist i altfel de receptori celulari, receptorii tirozin kinazici, care spre deosebire de cei descrii mai sus se leag la enzimele intracelulare. n aceast categorie este inclus majoritatea factorilor de cretere. Procesul de fosforilare care urmeaz legrii ligandului va cuprinde att proteina receptor, ct i proteina int intracelular. Acest proces st la baza rspunsului celular la aciunea factorilor de cretere. Receptorii pentru citokine i pentru unii hormoni peptidici func-ioneaz n asociere cu tirozin kinaze nereceptoare, care aparin familiilor Src, Janus sau Jak. Legarea ligandului va determina dimerizarea receptorului i fosforilarea ncruciat a tirozin kinazelor nereceptoare, care odat activate vor fosforila receptorul, iar apoi tirozin fosforilarea moleculelor de semnalizarea situate n aval.
91 MBTRNIREA CELULAR
mbtrnirea este rezultatul modificrilor continue acumulate n or-ganismele vii, de la natere pn la moarte. Odat cu naintarea n vrst se produc o serie de modificri morfologice i funcionale, iar alterrile celulare reprezint o component important a mbtrnirii organismului. O serie de funcii celulare sufer un declin progresiv, odat cu naintarea n vrst. Fosforilarea oxidativ la nivelul mitocondriei se reduce, ca i sinteza proteinelor structurale i a enzimelor, sau a receptorilor celulari. Celulele senescente au o sczut capacitate de a prelua nutrieni, sau de a repara defectele cromozomiale. Fiecare celul mbtrnete specific, printr-un mecanism mai mult sau mai puin diferit de acela al altor tipuri celulare. Astfel, n cazul celulelor difereniate i care mai au capacitate de diviziune, se consider c n cursul vieii lor, acestea sunt capabile de un numr precis de diviziuni programate genetic. Pentru acest tip de celule, mbtrnirea nseamn n primul rnd scderea sau chiar oprirea procesului de diviziune. Pentru celulele care nu se divid (neuroni, celule musculare cardiace) mbtrnirea nseamn acumularea de macromolecule cu proprieti diferite fa de cele specifice acestor celule, sau acumularea de substane nedegradabile n citoplasma lor, paralel cu sc-derea capacitii metabolice. n procesul de mbtrnire celular apar o serie de modificri morfologice ale celulelor, cum sunt: - scaderea volumului celulei, - scaderea volumului nucleului, - scaderea raportului nucleu/citoplasm, - scaderea raportului nucleu/nucleol, - scaderea ratei diviziunilor, - hipercromia nucleului, - nuclei neregulai i anormal lobai, - modificarea bazofiliei citoplasmei, - mitocondrii vacuolate, - reducerea reticulului endoplasmic i a complexului Golgi, - acumularea de reziduuri nemetabolizabile n lizozomii teriari, - acumularea de lipofuscin, un produs de peroxidare a lipidelor, - vacuolizarea citoplasmei.
Ipoteze privind mbtrnirea celular
n procesul de mbtrnire celular sunt incriminate unele defecte genetice induse de scurtarea telomerelor cromozomilor. Telomerele sunt importante n stabilizarea poriunii terminale a cromozomilor i ancorarea lor la matricea nuclear. Pierderea ADN din poriunea terminal a cromozomilor, cu scurtarea telomerelor, va determina deleia unor gene eseniale cu scderea duratei de via a celulelor.
92 Se cunosc i unele defecte dobndite n celulele senescente. O teorie favorit invoc efectul progresiv al radicalilor liberi, datorat repetatei expuneri la radiaiile ionizante din mediu sau prin reducerea progresiv a mecanismelor defensive antioxidante (ex. vitamina E, glutation peroxidaza), sau prin ambele mecanisme. Radicalii liberi determin afectarea acizilor nucleici, estimndu-se c speciile de oxigen sunt responsabile pentru 10.000 modificri ale ADN per celul, pe zi. Nu doar ADN nuclear, ci i cel mitocondrial va suferi mutaii i deleii, care cresc dramatic cu vrsta. Radicalii liberi de oxigen catalizeaz de asemenea modificrile oxida-tive ale proteinelor, incluznd enzimele, favoriznd degradarea lor de ctre proteazele citosolice neutre sau alcaline, afectnd funciile celulare. Modificrile posttranslaionale a proteinelor intracelulare i extrace-lulare, care se cunoate c survin cu vrsta, determin modificri morfo-funcionale ale celulelor senescente. O modificare care reine atenia este glicozilarea non-enzimatic a pro-teinelor, care conduce la glicozilare avansat i la apariia de produi capa-bili s se lege de proteinele adiacente.
APOPTOZA
Dup 1980 s-a elaborat, n diferite variante, teoria morii programate a celulelor, conform creia fiecare tip de celul are nscris n programul su genetic o anumit perioad de via, dup care celula moare. Moartea celular programat poart numele de apoptoz. Apoptoza este o form natural de moarte celular, care se produce n procesele de dezvoltare a esuturilor i organelor Apoptoza este responsabil pentru numeroase evenimente fiziologice i patologice, dintre care amintim: - distrugerea programat a celulelor n cursul embriogenezei; - involuia hormon dependent la adult (ex. distrugerea celulelor endo-metrului n timpul ciclului menstrual, atrezia foliculilor ovarieni la menopauz, regresia glandei mamare dup lactaie); - eliminarea celulelor n proliferarea populaiilor celulare; - moartea: celulelor tumorale; celulelor imune, a limfocitelor T i B, dup depleia limfochinelor; eliminarea celulelor T autoreactive n timpul dezvoltrii timusului; - atrofia patologic a: esuturilor hormono-dependente (ex. prostata dup castrare, sc-derea limfocitelor din timus dup administrarea de glucocorticoizi); organelor parenchimatoase dup obstrucia ductelor (ex. tiroid, pancreas, rinichi); - lezarea celulelor n unele boli virale (ex. hepatita viral, n care la ni-velul ficatului apar corpii apoptoici Councilman); - moartea celular produs de stimuli capabili s produc necroz (ex. radiaii, medicamente, hipoxia) dar care dac acioneaz n doz redus determin apoptoz.
93 Modificrile morfologice ale celulelor n apoptoz sunt urmtoarele: - scderea volumului celular, citoplasma devine dens, iar organitele relativ normale apar ngrmdite; - condensarea cromatinei este cea mai caracteristic trstur a apop-tozei, agregate de cromatin apar dispuse periferic sub membrana nuclear; nucleul se poate fragmenta; - formarea corpilor apoptoici, iniial pe suprafaa celulei se observ invaginri, se vor forma vezicule, apoi celula se fragmenteaz, rezul-tnd numeroi corpi apoptoici delimitai de membrane, care conin citoplasm, organite strns mpachetate, cu sau fr fragmente nu-cleare; - fagocitarea celulelor sau corpilor apoptoici de ctre macrofage i vor fi rapid degradate la nivelul lizozomilor secundari. n coloraia cu hematoxilin-eozin, celulele apoptoice apar rotunde sau ovalare, intens eozinofile, cu fragmente de cromatin dense.
MECANISMELE APOPTOZEI
Exist mai multe mecanisme diferite prin care se produce sinuciderea celulelor prin apoptoz: unul este generat de semnale ce provin din interiorul celulei; altul este declanat de activatori ai morii celulare care se leag la suprafaa celular cum sunt factorul de necroz tumoral (TNF-), limfotoxina, ligandul Fas (FasL); un altul este declanat de speciile reactive de oxigen.
1. Apoptoza declanat de semnale interne este calea intrinsec sau mitocondrial. La celulele sntoase, pe membrana extern a mitocondriilor este exprimat proteina Bcl-2, care este legat de o protein Apaf-1. Afectarea intern a celulei (ex. prin speciile reactive de oxigen) va cauza desprinderea Apaf-1 de Bcl-2. O protein nrudit, numit Bax, va penetra membranele mitocondriale, determinnd eliberarea citocromului-c. Acesta i proteina Apaf-1 se vor lega la moleculele de caspase 9. Va rezulta un complex constituit din citocromul c, Apaf-1, caspasa 9 i ATP, numit apoptosome, a-gregat n citosol. Caspasa 9 face parte dintr-o familie de caspase, toate fiind proteaze. Caspasa 9 va activa alte caspase. Aceast capacitate a caspaselor de a activa alte caspase va produce o activitate proteolitic n cascad, care va determina digestia proteinelor structurale din citoplasm, degradarea ADN i n final fagocitarea celulei.
2. Apoptoza declanat de semnale externe este numit i calea extrinsec. Receptorii Fas i TNF sunt proteine membranare integrale, al cror domeniu receptor se afl la exteriorul membranei celulare. Legarea activatorilor complementari ai apoptozei, ligandul Fas i TNF, determin transmiterea semnalului la citoplasm i va determina activarea caspasei 8, care ca i caspasa 9 va iniia o activare n cascad a caspaselor care n final va duce la distrugerea i fagocitarea celulei.
3. Apoptoza declanat de factorul de inducere a apoptozei (AIF). Neuronii i probabil i alte celule au o alt cale de sinucidere, care spre deosebire de cele dou precedente nu utilizeaz caspasele.
94 Factorul de inducere a apoptozei (AIF) este o protein care n mod normal este localizat n spaiul intermembranar al mitocondriei. Cnd celula va primi mesajul c este momentul sinuciderii, AIF va fi eliberat de ctre mitocondrie, va ptrunde n nucleu, se va lega la ADN, va fi declanat distru-gerea ADN urmat de moartea celular.
Apoptoza i cancerul Unele virusuri care cauzeaz cancere utilizeaz mijloace care previn a-poptoza celulelor transformate. Unele papiloma virusuri sunt implicate n producerea cancerului de col uterin. Unele dintre ele produc proteina E6 care leag i apoi inactiveaz un promotor al apoptozei, numit p53. Virusul Epstein-Barr, cauza mononucleozei i a limfomului Burkitt, produce o pro-tein similar Bcl-2, sau produce alte proteine care cresc producia celular de Bcl-2. Aceste aciuni vor face ca celulele s fie mai rezistente la apoptoz, iar celulele canceroase vor putea prolifera. Chiar i celulele canceroase care apar fr implicarea virusurilor au ci prin care evit apoptoza. n unele leucemii i limfoame celulele B prezint un nivel crescut de Bcl-2, care blocheaz semnalele ce induc apoptoza. Celulele neoplazice ale melanoamelor evit apoptoza, prin inhibarea expreziei genei proteinei Apaf-1. Unele celule neoplazice, din cancerul pulmonar i din cancerul de colon, secret la un nivel crescut unele molecule care leag FasL, ce determin blocarea legrii acestuia la Fas. Astfel, celulele T citotoxice nu vor putea distruge celulele maligne. Alte celule canceroase au o expresie crescut a Fasl i pot distruge orice celul T citotoxic care va ncerca s le omoare.
Apoptoza n SIDA Caracteristic pentru pacienii cu SIDA este declinul numrului de celule T CD4 +
responsabile direct sau indirect pentru rspunsul imun. Cnd numrul lor scade n jur de 200/l, pacientul nu va mai avea un rspuns imun eficient, cu producerea unor infecii periculoase. Apoptoza este cea care cauzeaz dispariia celulelor T CD4 + . Virusul HIV invadeaz celulele T CD4 + ceea ce va determina distrugerea acestora. Dar mai puin de 1 din 100.000 de celule T CD4 + din sngele pacienilor cu SIDA sunt infectate cu virusul HIV. Apoptoza este cea care omoar i celulele CD4 + neinfectate. Dei mecanismele apotozei n aceast situaie nu sunt clare, exist mai multe posibiliti. Toate celulele T, att cele infectate ct i cele neinfectate au crescut expresia Fas. Expresia genei HIV, numit Nef n celulele infectate va cauza creterea expresiei FsaL pe suprafaa lor i va fi prevenit interaciunea cu Fas care s cauzeze distrugerea. Pe de alt parte, cnd o celul T infectat va ntlni una neinfectat (ex. n ganglionii limfatici) interaciunea FasL cu Fas la nivelul celulelor neinfectate va determina moartea acestora prin apoptoz.
Apoptoza n transplantul de organe Se cunoate de mult timp c unele pri ale corpului, cum sunt camera anterioar a ochiului sau testiculul, sunt locuri privilegiate imunologic. Antigenele din aceste spaii nu reuesc s induc un rspuns imun. Celulele din aceste locuri difer de celulele din alte zone
95 ale corpului prin faptul c un nivel crescut al expresiei FasL tot timpul. Astfel, celulele T antigen reactive care au expresie crescut a Fas vor fi omorte cnd ajung n aceste spaii. n acest mod ar fi posibil o nou cale de prevenire a rejeciei. Dac la unele celule ale rinichilor, ficatului sau cordului transplantat ar crete nivelul expresiei FasL, ar putea fi protejat rejecia grefelor de atacul celulelor T ale imunitii mediate celular. Cunoaterea mecanismelor intime ale acestui important proces de apoptoz ar deschide perspective pentru modularea lui. Modularea apoptozei ar putea servi pentru inhibarea apoptozei n celulele normale i inducerea ei n celulele tumorale. Clarificarea mecanismelor biochimice ale procesului de apoptoz ar putea schimba conceptul actual privind tratamentul bolilor n general i al neoplasmelor n special.