Curs: Biochimie medical

Conf Dr Elena Ionic

Master de Biochimie Medicala anul I

BIOCHIMIA I FIZIOPATOLOGIA PRINCIPALELOR PROTEINE PLASMATICE

Albumina Caracteristici: proteina cu cea mai mare concentraie din plasm - ntre 3,5-4,0 g/dl greutate molecular - 69 kDa, timp de njumtire de 16-24 zile, se sintetizeaz zilnic n cantitate de 12-20 g. prezent n toate lichidele biologice, catabolizarea are loc n toate esuturile, dar mai ales n ficat, rinichi i tractul gastro-intestinal. Funciile principale: meninerea presiunii osmotice coloidale intravasculare - reglarea schimburilor ntre plasm i lichidul interstiial; transportul substanelor insolubile n ap de tipul bilirubinei, AG, H steroizi i medicamentelor; surs important de aminoacizi eseniali, utilizat n procesele de regenerare tisular.
2

Patologie: Hipoalbuminemia Cauze: - aport sczut de proteine malnutriie - modificri ale produciei de proteine la nivelul ficatului - pierderile exesive de proteine n sindromul nefrotic, enteropatia exudativ (cu pierdere de proteine), arderile excesive - sarcin - valori ale albuminei serice sub 3g/dl indic un proces patologic - stri patologice - reaciile de faz acut mediate de citokine, Analbuminemia -boal genetic transmis autozomal recesiv care se manifestat doar la homozigoi. -lipsa albuminei la electroforeza proteinelor serice, -manifestri clinice: edeme maleolare, hipotensiune arterial i uneori steatoree, accelerare a VSH i pozitivarea testelor de disproteinemie. -Cretere a nivelului altor proteine plasmatice sintetizate n ficat fibrinogen, colinesteraz, factor XIII9 - timpul de njumtire biologic n plasm al albuminei infuzate este mult prelungit ajungnd pn la 55 zile.

Inhibitorii plasmatici ai proteazelor - ~ 10% din totalul proteinelor plasmatice - rol n protejarea organismului fa de aciunea proteazelor; - dup legarea inhibitorului de protein, acest complex este recunoscut de ctre receptori celulari specifici, fiind captat i ndeprtat din circulaie; - ex: inhibitori din grupa serpinelor (inhibitorii serin proteazelor), 2 macroglobulina, unii inhibitori de tip Kunitz (inhibitorul coagulrii pe calea mediat de factorul tisular), inhibitori ai MMP i inhibitori ai cisteinproteazelor (inhibitorii catepsinei B).

-1 antitripsina (1AT)

- MM = 54 kD = inhibitorul proteasic 1 ( 1PI) este sintetizat mai ales n ficat, sub stimulul citokinelor eliberate din macrofage procesare intracitoplasmatic eliberare n plasm [200-400] mg/dl, t1/2 = 6 zile. inactivare prin prindere ca ntr-o capcan de ctre 1AT ndeprtare din circulaie. -inactivat de fumat i radicalii superoxid din neutrofile prin oxidare situsului activ, 1AT exudat n esutul inflamat - deficit - n bolile pulmonare - ocul toxico-septic - creterea nivelului plasmatic de a1AT - putnd depi de 4ori valoarea normal n cursul reaciei de faz acut declanat sub aciunea citokinelor; 4

1 antichimotripsina (1CT)

- glicoprotein cu un coninut de 26% - MM ~ 68 kDa - activ n procesul de inhibare a catepsinei G leucocitare i chimotripsinei nu inhib elastaza i tripsina - rol n protejarea suprafeelor mucoase fa de proteaze conc mare la nivelul secreiilor bronice, - creteri ale nivelului de 1CT n reacia de faz acut, n substana cenuie a bolnavilor cu boala Alzheimer.

2 antiplasmina (2AP)

- glicoprotein de 70 kDa - n plasm [6] mg/dl - principalul inhibitor al plasminei - poate fi incorporat i n cheagul de fibrin inhibnd plasmina i la acest nivel - deficit genetic = boala Miyasato cu sindrom hemoragic datorit lizei rapide a cheagului de fibrin - scderi ale 2AP - n insuficiena hepatic (prin scderea sintezei), n coagularea intravascular diseminat sau dup terapia trombolitic (prin exagerarea consumului) precum i n cursul leucemiei promielocitare, cnd acest inhibitor este degradat de proteazele eliberate din promielocite.
5

2 Macroglobulina ( 2M)

- MM de 735 kDa - concentraie plasmatic de 200-300 mg/dl - sintetizat n ficat, macrofage i endotelii - T1/2 = 135 ore - inhibitor cu spectru larg de activitate, - enzime ale coagulrii, plasmina, elastaza, colagenaza i catepsina G etc. - Mecanism: sub aciunea proteazelor sufer clivarea unui fragment de 80 kDa se nfoar n jurul proteazelor, interfernd cu accesul acestora spre substratele macromoleculare ndeprtarea rapid a proteazelor din circulaie (T1/2 = 10 min) - rol n modularea activitii citokinelor proinflamatorii pri exercitarea unui efect de limitare a reaciei de faz acut - leag majoritatea citokinelor (mai ales IL-1, IL-6 i TGF) - efect imunoreglator - prin fixare la suprafaa limfocitelor intervine n sinteza Ig - rol n transportul insulinei i al Zn i altor microelemente - deficitul genetic homozigot este incompatibil cu viaa, iar deficitul parial, heterozigot este nsoit de sngerri pasagere determinate de accelerarea fibrinolizei. - scderi ale conc rareori, doar n caz de consum exagerat al inhibitorilor de proteaze, (pancreatite acute severe i sindroame de coagulare intravascular diseminat) 6

-creteri ale nivelului seric de 2M n sindromul nefrotic, diabetul zaharat - prezena sa n exudate denot o alterare important a permeabilitii locale a capilarelor, care permite extravazarea unei proteine cu MM deosebit de mare. 1-Glicoproteina acid (1GA) = orosomucoid =reactant de faz acut - este sintetizat n ficat - [44-140] mg/dl n plasm poate > 4 ori n cursul reaciilor inflamatorii - legare nespecific la suprafaa unor bacterii, virusuri sau protozoare; - leag o serie de medicamente ca mio-relaxantele (pancuroniu, alcuroniu), medicamente psihotrope (imipramina, clorpromazina) precum i propranololul i progesterona - rol n rspunsul imun reduce activitatea neutrofilelor. - indicator al declanrii i persistenei unui proces inflamator, revenirea la normal survenind la aproximativ 2-3 sptmni de la vindecare; - Valori sczute - n malnutriie, ciroz hepatic (deficit de sintez), sindrom nefrotic (pierdere urinar).

Proteina C reactiv CPR - sintetizat n ficat (IL-6 inductor, IL-1 - potenator), cantiti mai reduse provenind din limfocite T; - Cond normale - [CPR]seric <0,1 mg/dl (0,5 mg/dl); - [CPR]seric 100 3.000 ori, n cursul unui proces inflamator; - CRP se leag cu mare afinitate de polizaharidul C al pneumococului (de unde deriv i denumirea) i unele GP ce conin N-acetil-galactozamino6-fosfat ca reziduu glucidic terminal, aflate n peretele a numeroase bacterii, a fungilor i protozoarelor; - CRP induce proliferarea limfocitelor T supresoare cu rol n limitarea sintezei de anticorpi; - CRP este indus de citokine dar odat produs, ea limiteaz aciunea acestora i n asamblu acioneaz ca un modulator al proceselor imune; - indicator important n monitorizarea infeciilor i n general a inflamaiilor acute i cronice, diagnosticarea infeciilor post-operatorii, n urmrirea recidivelor septicemiei sau meningitei la nou nscui, n diagnosticarea infeciilor la leucemici, precum i n depistarea unor infecii la bolnavii cu lupus eritematos sistemic, care duc de regul la o exacerbare a bolii; - inflamaii nespecifice - reumatism poliarticular acut, poliartrita reumatoid, spondilita anchilozant, vasculit, rectocolita hemoragic i sindrom Reiter.
8

Haptoglobulinele - sunt o familie de GP - 10 fenotipuri de haptoglobine - sintetizate de ficat; - T1/2 n plasm = 5 zile; - leag Hb raport molar (haptoglobin : Hb) = 1:2 complexul este captat din circulaie de ctre macrofage (T1/2 = 9 30 min); - [haptoglobuline]serice = 300 mg/dl; - sunt reactani de faz acut ce nregistreaz valori crescute n infecii microbiene, arsuri, reacii alergice, cancere i leucemii; - scderi - n insuficiena hepatic, n anemii hemolitice; - determinarea haptoglobinei - reaciea de faz acut (creteri) i procesul de hemoliz (scderi). Proteinele serice ale amiloidului - intr n compoziia amiloidului care se depune n esuturi; - 2 proteine serice - proteina A i proteina P. Proteina seric a amieloidului A (SAA) - MM de 11-15 KDa - poate forma complexe de 100-200 kDa; - reactant de faz acut; - sintetizat n ficat - [SAA]plasmatic - poate > 100 ori la cteva ore de la declanarea reaciei de faz acut (inductoari: IL-1, TNF);

Rol: - de legare a lipopolizaharidelor din peretele bacteriilor i de ndeprtare a acestora din circulaie; - stimuleaz producia de colagenaz cu rol n remodelarea i repararea esuturilor; - intervine n procesele imune inhibnd limfocitele T-helper i interaciunea limfocitelor cu macrofagele; - este precursor al proteinei fibrilare A a amiloidului; - maladie genetic = febra mediteranian familial precum i n amiloidozele secundare, care pot survenila bolnavii cu infecii recurente sau prelungite; - creteri ale nivelului seric de SAA - sarcin, poliartrita reumatoid, lupusul eritematos sistemic, cancer pulmonar. - manifestri clinice: debut cu papule eritematoase discret pruriginoase pe zonele fotoexpuse - placa lupica; margini neregulate, bine delimitate, de culoare rosie; scuame subtiri, aderente, cu dopuri keratozice pe fata lor interna; pot fi afectate si mucoasele). - scderi - dup chemoterapie, urmate ns de creteri n caz de reactivare a procesului tumoral. Proteina seric a amieloidului P (SAP) - omologie cu CRP - 54%; - MM de 23 kDa; - nu este reactant de faz acut; - sintetizat n ficat;

10

- T1/2 n plasm = 9 zile. - [SAP]seric = 2-5 mg/dl; - evideniat n membrana glomerular i n ariile microfibrilare ale esutului elastic vascular; - particip la formarea depozitelor de amiloid n toate formele sistemice de amiloidoz, legndu-se cu mare afinitate de SAA. Transferina Fibronectina (FN) - GP cu MM de 440 kDa - grupul proteinelor de adeziune (conine tripeptidul Arg-Gly-Asp (RGD)); - prin intermediul RGD se leag la integrine, asigurndu-se astfel adeziunea celular; - FN din plasm - form solubil (pFN); - FN din matricea esutului conjunctiv i membranele bazale - form insolubil (cFN); - pFN - deficit de sintez - insuficiena hepatic, ciroz hepatic, leucemie acut limfoblastic; dup intervenii chirurgicale majore, traumatisme multiple i stri septice, mai ales atunci cnd se asociaz fenomene de coagulare intravascular diseminat. - deficit genetic de FN - ntrziere n vindecarea plgilor i tendina la formarea de cheloid n exces - pFN - sindromul nefrotic, obezitatea de tip abdominal; procese inflamatorii;

11

Vitronectina (VN) - GP cu MM de 75 kDa; - [VN]seric = 30-50 mg/dl; - conine tripeptidul RGD cu rol n adeziunea celular, precum i un domeniu bazic de legare a heparinei; - sintetizat la nivelul ficatului; - [VN]seric ~ [colinesteraza] i cu [factorul X]; - [VN]seric la bolnavii supraponderali i cu hipertrigliceridemie; se acumuleaz n peretele arterial afectat de ateroscleroz; -2 microglobulina (2m) MM de 11,8 kDa; [2m]seric <0,3 mg/dl; [2m]seric glomerulonefrite, nefropatie, leucemii limfoide cronice, boala Hodgkin, mielomul multiplu; 2m este depozitat n esutul sinovial; eliminrilor urinare de b2m perturbri ale funciei tubulilor renali; indicator pentru depistarea precoce a intoxicaiilor cronice cu metale grele i a nefropatiilor interstiiale.
12

Sistemul complement (SC) - cuprinde 20 componente proteice; - proteinele SC dotate cu activiti enzimatice circul n plasm sub form de zimogeni, activarea lor efectundu-se n lan n mod succesiv printr-un proces de proteoliz limitat. - intervine n liza celulelor, n chemotaxie, opsonizare, imunoaderen, fagocitoz i anafilaxie. - testul CH50 (complement hemolitic total 50%) - [SC] - procese inflamatorii acute, n cursul reaciei de faz acut (infecii, infarct miocardic), n puseuri evolutive ale unor boli cu inflamaie cronic (spondilit anchilozant, sclerodermie, poliartritareumatoid). - [SC] - n boli ce evolueaz cu complexelor imune circulante (CIC). - deficiene cu caracter genetic Imunoglobulinele -5 clase de Ig: IgG, IgA, IgM, IgD i IgE. - alctuite din patru lanuri polipeptidice, 2 lanuri uoare L de 22 kDa i 2 lanuri grele H de 52 kDa legate ntre ele prin puni disulfurice. - Anomaliile - prin hiperimunoglobulinemii policlonale sau monoclonale, fie prin diverse deficite.
13

Hiperimunoglobulenemiile policlonale - rspunsul imun este declanat ca urmare a unei infecii; - se exprim prin proliferarea mai multor clone de plasmocite i implicit prin creterea mai multor clase de Ig global a -globulinelor (band lat) corelat cu prezena de complexe imune circulante (CIC) i cu eventuale depozite tisulare de imunoglobuline implicarea ntr-un proces patologic localizat Hiperimunoglobulenemiile monoclonale Proliferarea unei singure clone de celule de tip B producerea unei populaii omogene de Ig. paraproteine sau componente M (ser/ urin) = Ig sau fragmente de Ig produse n exces ar trebui s exercite funcia de anticorpi fa de unele antigene microbiene, ns, datorit celorlalte clase de Ig se ajunge la imunodeficien. Tipuri, n ordine descrescnd a incidenei lor: mielomul multiplu, macroglobulinemia Waldenstrom, boala lanurilor grele i amiloidoza primar. determin transformarea malign a limfocitelor B n diferitele etape ale procesului de maturare; se caracterizeaz printr-o producie sczut de Ig (exceptnd mici cantiti de IgM). Proliferarea survenit ntr-un stadiu mai avansat de maturare i, respectiv, acumularea unor forme intermediare ntre limfocitul B i plasmocit macroglobulinemia Waldenstrom; 14 Proliferarea malign a unor clone de plasmocite mielomul multiplu n.

Mielomul multiplu (Mm) - Triada diagnostic clasic : plasmocitoz medular (peste 7% din totalul elementelor nucleate), leziunile osteolitice i prezena componentei M n ser sau urin. - ~ 20% din cazuri se produc numai lanuri uoare care se elimin prin urin sub forma proteinelor Bence-Jones, iar electroforeza serului evideniaz o hipogamaglobulinemie. - ~ 53% din cazuri - [IgG], n 25% [IgA], n 1% [IgD]. Manifestrile clinice: nespecifice, durerile produse de leziunile osoase sunt adesea interpretate ca dureri articulare cu caracter reumatic. Macroglobulinemia Waldestrom Proliferare malign a limfoplasmocitelor care secret IgM asociat cu limfoadenopatie i hepatosplenomegalie; manifestrile clinice majore: hipervscozitate, anemie i scderea rezistenei la infecii; lipsa leziunilor osteolitice, eliminrile urinare de lanuri uoare survin rar. Diagnosticare: aspectului monoclonal al electroforezei proteinelor serice, creterea marcant i izolat a IgM (de regul peste 3g/dl) prezena n frotiul medular a limfoplasmocitelor, care apar adesea i n frotiurile de snge periferic.
15

Boala lanurilor grele - boal limfoplasmocitar rar, - manifestri clinice funcie de izotipul de lan greu - se secret un lan greu incomplet care conine un fragment Fc intact i o depleie n regiunea Fab, n timp ce lanurile uoare k i l lipsesc. - Tipuri: boli ale lanurilor grele g (din IgG), boli ale lanurilor (din IgA), boli ale lanurilor m (din IgM). - Diagnosticarea: prin evidenierea lanului greu n ser sau urin, prin lipsa lanurilor uoare. - Pacienii au o rezisten deosebit de sczut la infecii. Sindroame de imunodeficien prin scderea produciei de imunoglobuline - se consider c se instaleaz atunci cnd [IgG] <500 mg/dl, [IgA] < 50 mg/dl i [IgM] < 40mg/dl ; - diagnosticare: capacitatea de a elibera anticorpi specifici (antistreptolizina O (ASLO), anticorpi indui dup vaccinarea cu anatoxina difteric sau tetanic), determinarea numrului de limfocite B circulante, prin citometrie n flux utiliznd Ab monoclonali specifici.
16

TIPURI DE DISPROTEINEMIE - pot fi difereniate prin simpla electroforez a proteinelor serice. 1. Disproteinemenia reactiv din inflamaia acut - [1] i [2] prin met electroforetice - ([a1AT], [a1CT], [a1 glicoproteina acid], [haptoglobinele], [CRP], [ceruloplasmina]) i ([albumina seric], [colinesteraza seric], [transferina] [lipoproteinele]) - prin imunohistochimie. - fibrinogenemiei accelerarea VSH. 2. Disproteinemia reactiv din inflamaia cronic - [G], proliferarea reactive a mai multor clone de plasmocite. - n cursul unui puseu evolutiv al unui proces inflamator cronic se poate ajunge la o creterea 1G i 2G precum i a fibrinogenemiei. -n endocardita infecioas subacut cresc mai ales G, pe cnd ntr-o endocardit reumatic recidivant predomin 2G. 3. Disproteinemia prin pierderea urinar de proteine - n sindromul nefrotic; - [proteinelor totale], albuminemiei i [2G] i [G]; - formele severe [G]; - principala cauz: permeabilitii filtrului glomerular fa de proteine.
17

4. Dispropoteinemia prin pierderea enteral de proteine - n enteropatia exsudativ - permeabilitii mucoasei tractului digestiv pentru macromolecule (albumina seric apare n sucul intestinal i n materiile fecale ) proteinele sunt supuse atacului enzimelor proteolitice din sucurile digestive hiperaminoacidemie i hiperaminocidurie hipoproteinemie (aspectul proteinogramei difer - 2G nu sunt att de crescute, iar hiperlipoproteinemia lipsete) 5. Disproteinemia din afeciunile hepatice aspecte diferite n funcie de etiologie i de stadiul evolutiv al hepatopatiei hepatita viral acut proteinograma- modificri puin exprimate i necaracteristice, avnd o valoare diagnostic redus, mai ales n comparaie cu creterea impresionant a aminotransferazelor; sindromul posthepatic - G cronicizare; cirozele biliare - [2G] cancerul hepatic - n stadiile de debut electroforeza proteinelor serice are o valoare diagnostic redus, adenocarcinomul hepatic cu ciroz - [albuminelor] i G fraciunii electroforetice 1. Metode imunologice permit evidenierea unei 1G fetale, alfafetoproteina, care, dac prezint valori mult crescute 18 (peste 500 ng/ml) sau crete de la o examinare la alta, sugereaz un carcinom hepatic primar.

6. Disproteinemia hiperimunoglobulinemiilor monoclonale = mielom, macroglobulinemie Waldenstrom, boala lanurilor grele prezint un aspect caracteristic, cu o band ngust, intens colorat n domeniul gama i mai rar beta. 7. Agamaglobulinemia = disproteinemii prin defect maladii genetice, mutaii la nivelul genelor care codific sinteza unei proteine plasmatice.

19