CASPASE 3

COISIN ANDREEA CORINA

MASTER LABORATOR MEDICAL, AN 1 , GRUPA A

 CUPRINS

• 1. POZITIA IN GENOM, STRUCTURA SI FUNCTIILE GENEI

• 2. PRIMERI UTILIZATI PENTRU CUANTIFICAREA EXPRESIA GENEI PRIN RT-QPCR
• 3. LINIILE CELULARE SI TESUTURILE IN CARE SE EXPRIMA GENA
• 4. EXPRESIA GENEI PENTRU ALTE LINII CELULARE
• 5. ARTICOL :
 Pozitia in genom si structura
• Pozitia genei in cadrul genomului:chr4:184,627,696-184,649,509(grch38/hg38).

(https://www.genecards.org/cgibin/carddisp.pl?gene=casp3&keywords=caspase,3#localization)

• In interorul celulei se gaseste predominant in : citoplasma, nucleu , mitocondrii,

lizozomi , reticulul endoplasmatic
• Structura
 Este formată dintr-un zimogen de 32 kDa
care este scindat în subunități de 17 kDa și 12 kDa.
 Numar de exoni : 9

https://www.researchgate.net/figure/Overall-structure-of-caspase-3-LDESD-Tw
 Functia genei
 Implicat în cascada de activare a caspazelor si este
responsabil de realizarea apoptozei.
 La debutul apoptozei, scindează proteolitic poli(ADP-
riboză) polimeraza (PARP) la o legătură „216-Asp-|-
Gly-217”
 Are rol in activarea caspazelor 6, 7 și 9 .
 Acționează ca un inhibitor al producției de interferon
de tip I în timpul apoptozei induse de virus prin
medierea clivajului proteinelor antivirale CGAS, IRF3
și MAVS, prevenind astfel supraproducția de citokine
 Desprinde și inhibă serină/treonin-protein kinaza AKT1
ca răspuns la stresul oxidativ https://www.nature.com/articles/cdd2009180
PRIMERI UTILIZATI PENTRU CUANTIFICAREA EXPRESIA GENEI PRIN RT-QPCR

• 5’ TGGATGTTTATGTCACCTTTTC 3’
• 5’ AGTCTATTTTATTATGGGCTCG 3’
 TESUTURILE IN CARE SE EXPRIMA GENA
CASPAZE 3
( DUPA CUM SE POATE OBSERVA IN TRACTUL INTESTINAL SE GASESTE PREPONDERANT , URMAT DE OASE SI TESUTUL LIMFOID APOI IN
RINICHI SI IN CAILE URINARE CAT SI IN ORGANELLE FEMININE (CERVIX , ENDOMETRU )
LINIILE CELULARE IN CARE SE EXPRIMA GENA
CASPAZE 3

https://www.proteinatlas.org/ENSG00000164305-CASP3/cell+line
 EXPRESIA GENEI PENTRU ALTE LINII
CELULARE
• MYELOMA CELLS L363, RPMI8226, U266
• BREAST CARCINOMA CELLS MDA-MB-231, MCF7
• NORMAL BREAST CELLS MCF12A / HTERT-HME1
• MELANOMA CELLS A375
• NORMAL HUMAN DERMAL FIBROBLASTSNDHF
• OSTEOSARCOMA CELLS HOS
• NORMAL OSTEOBLASTS HOB
 ARTICOLUL
EXPRESIA CASPAZEI-3 ȘI A CASPAZEI-8 ÎN
CANCERUL DE SÂN
 INTRODUCERE

• In tratamentul cancerului fenomenul de apoptoza este unul foarte important , deoarece prin
actiunea agentilor citotoxici sunt ucise celulele tumorale.
• Sunt prezentate 3 grupe majore de caspaze (pe baza funcţiei lor): I – caspaze inflamatorii; II –
caspaze iniţiatoare de apoptoză; III – caspaze efectoare de apoptoză . Caspaza 3 , face parte din
ultima categorie.
Acest studiu se bazeaza pe analiza histochimica si are la baza pacineti bolnavi de cancer de san in
stadiu incipient . A fost realizat in spitalele universitare din Nottingham între 1986 și 1998.
 MATERIALE SI METODA

• LOT DE STUDIU : 1902 de pacineti .

• VARSTA MEDIE : 55 de ani ( intre 18 si 77 de ani )
• DURATA medie de urmarire a pacientilor a fost de 177 de luni (intre 1 si 308 luni )
Pacientii au urmat toti acelas protocol in care toti au suferit mastectomie sau excizie partiala si jumatate
dintre pacienti au primit si radioterapie .
A fost determinata expresia HER2 prin imunohistochimie cu hibridizare fluorescență in situ (FISH)
Expresia proteinelor: caspaze-3 și -8 a fost investigată folosind micromatrice de tesuturi (TMA) prin
imunohistochimie, s-au prelevat 0,6 mm de la fiecare pacient din zona mai reprezentativa a tumorii .
 • Metoda WESTERN BLOT : specificitatea anticorpului primar a fost confirmată utilizând aceasta
metoda , pe un interval de linii celulare de cancer de sân.
Validarea specificității anticorpilor anti-caspază-3 și -8

Validarea anticorpilor pentru

anti-caspază-3 (panoul A) și
anticaspază-8 (panoul B). O
singură bandă specifică, de 35
kDa, a fost obținută pentru
caspaza-3 și o singură bandă
specifică, de 62 kDa, obținută
pentru caspaza-8.
• COLORAȚIE
IMUNOHISTOCHIMICĂ
Determinarea caspasei -3 și -8 a
fost realizata în principal prin
colorare citoplasmatică
granulară/difuză, variind de la
colorare slabă la colorare intensă.
Colorarea nucleară a fost
observată într-un număr mic de
cazuri și s-a observat că unele
celule inflamatorii exprimă
caspase 3 și -8.
In imaginea A aceasta este reprezentata Caspaza 3 , in imaginea B
este reprezentata Caspaza 3 in numar mai scazut .
In C si D este reprezentata caspaza C si D
• REZULTATE
• Expresia ridicată a caspazei-3 a fost asociată semnificativ cu pozitivitatea her2
• Expresia mare a caspazei-3 a fost asociată semnificativ cu apariția decesului din cauza cancerului
de sân , recidivă și metastaze la distanță .
• Un numar total de 1421 de cazuri au prezentat caspaza 3 si 1402 pentru Caspaza 8.
• BIBLIOGRAFIE
• HTTPS://
WWW.GENECARDS.ORG/CGI-BIN/CARDDISP.PL?GENE=CASP3&KEYWORDS=CASPA
SE,3#DOMAINS_FAMILIES
• HTTPS://WWW.UNIPROT.ORG/UNIPROT/P42574
• HTTPS://
WWW.NCBI.NLM.NIH.GOV/PMC/ARTICLES/PMC3132290/PDF/NIHMS-292310.PDF
• HTTPS://GENOME-EURO.UCSC.EDU/INDEX.HTML