Determinarea trigliceridelor

totale prin metoda enzimatic-

colorimetrică
LP9
Introducere

 Lipidele sunt o familie heterogenă de biomolecule care includ: monogliceride, digliceride,

trigliceride, acizi grași liberi, fosfolipide, sterol esterificați și neesterificați, pigmenți (carotenoizi,
clorofile), tocoferoli etc.

 Lipidele plasmatice constau din triacilgliceroli (16%), fosfolipide (30%), colesterol (14%) și esteri
colesteril (36%) și o fracție mult mai mică de acizi grași nesterificați, cu lanț lung (acizi grași liberi) (4%).
 Trigliceridele sunt esteri ai glicerinei cu trei acizi grași și sunt cele mai abundente lipide naturale,
constituenți ai țesutului adipos și reprezintă o rezervă de energie pentru organism.
Introducere
 Trigliceridele (TAG) pot fi de origine exogenă și se pot forma în intestinul subțire din alimentele
consumate, dar pot fi produse și în ficat din excesul de zahăr din dietă.
 Deoarece lipidele sunt insolubile în apă, astfel că transportul acestora se realizează prin asocierea
lipidelor nepolare (triacilglicerol și esteri colesteril) cu lipide amfipatice (fosfolipide și colesterol) și
proteine. Trigliceridele nu circulă liber în sânge; acestea sunt transportate de alte molecule, în
complexe numite lipoproteine (lipoproteine cu densitate foarte mică (VLDL) și chilomicroni).
 Diferitele tipuri de lipoproteine pot fi clasificate pe baza densității în:
- Chilomicronii (formați în urma absorbției intestinale a lipidelor)
- IDL = lipoproteinele cu densitate intermediară joasă
- VLDL = Lipoproteinele cu densitate foarte mică (forma de export a triacilglicerolilor din ficat la
țesuturile extrahpatice)
- LDL = lipoproteine cu densitate redusă (stadiul final al catabolismului VLDL)
- HDL = lipoproteinele cu densitate inaltă (implicate în metabolismul VLDL și al chilomicronilor, dar și
în transportul colesterolului)
Introducere
Recomandări

 Fiecare tip de lipoproteină are funcții și caracteristici specifice.

 Chilomicronii transportă lipidele absorbite în intestin după masă.
 VLDL și LDL transportă trigliceridele din ficat în țesuturile periferice pe stomacul gol.
 Măsurarea trigliceridelor este utilizată în screeningul stării de hiperlipidemie/ hiperlipoproteinemie,
pentru a detecta riscurile apariției aterosclerozei și în monitorizarea profilului lipidelor.
 Studiile au arătat că în cazul concentrațiilor crescute de trigliceride combinate cu concentrații crescute
de lipoproteine cu densitate scăzută (LDL) apare un risc deosebit de ridicat pentru bolile coronariene.
 Niveluri ridicate de trigliceride apar și în diferite boli ale ficatului, rinichilor și pancreasului.
 De asemenea, dozarea trigliceridelor se realizează pentru a urmari evoluția diabetului zaharat, a
nefrozei, a obstrucției biliare și a diferitelor anomalii metabolice datorate tulburărilor endocrine.
 În majoritatea cazurilor, hipertrigliceridemia este secundară unei alte boli (o tulburare metabolică sau
endocrină). Poate fi și consecința obezității sau a unei diete prea bogate în grăsimi.
Interpretare - Valori crescute ale TAG

 Creșterea trigliceridelor circulante poate genera dureri și distensie abdominală, diaree, vărsături,
pancreatită, mărirea ficatului, probleme oculare, boli cardiovasculare.
 Primul semn al hipertrigliceridemiei este turbiditatea serului, lucru observat după centrifugare. În
mod normal, serul este limpede și devine tulbure în prezența lipidelor.
 Sinteza crescută ale trigliceridelor: sindrom hiperlipemic ecvin, anorexie, obezitate, gestație, lactație,
postprandial.
 Metabolism anormal (lipoliză anormală): hipotiroidism primar, sindrom nefrotic (în special
hipercolesterolemie), deficit de lipoprotein-lipază (foarte rar)
 Altele: dietă bogată în lipide, hiperlipidemie „rasială” (Schnauzer miniatural, Beagle), pancreatită
acută, hiperadrenocorticism (tratament cu glucocorticoizi)
 Hiperlipidemii genetice (tipurile I, II-b, III, IV, V; deficit de APO C-II) si secundare
 Un nivel crescut al acestora este legat si de afectiunile hepatice grase, precum si pancreatita-
cauzeaza aparitia steatozei hepatice sau ficatul “gras”.
Interpretare - Valori scăzute ale TAG

 Nivelul scazut al trigliceridelor nu reprezinta neaparat un indiciu pentru o afectiune medicala. In

unele cazuri, poate indica malnutritie.
 abetalipoproteinemie
 malabsorbție
 hipertiroidism
 hiperparatiroidism
 Medicamente: acid ascorbic (doze mari), acid aminosalicilic, asparaginaza, acid chenodeoxicolic
(chenodiol), doxazosin, derivati ai acidului fibric (clofibrat, gemfibrozil), heparina, niacin, acizi grasi
omega-3 (ulei de peste), prazosin, terazosin, progestative.
 Interferențe analitice : probele intens lipemice (trigliceride>3000 mg/dL) pot determina un rezultat
fals, de aceea se recomanda diluția probei cu ser fiziologic.
Determinarea TAG – principiul metodei

 TAG din proba de ser sunt hidrolizate enzimatic de lipoprotein lipază (LPL) în glicerol și acizi grași liberi.

 Glicerolul eliberat este mai întâi fosforilat de glicerol kinază (GK) în glicerol-3-fosfat și ADP.

 Glicerol-3-fosfatul rezultat este apoi oxidat de glicerol-3-fosfat oxidază (GPO), eliberând peroxid de
hidrogen (H2O2).
Determinarea TAG – principiul metodei

 Cantitatea H2O2 formată este echivalentă cu cantitatea de trigliceride din probă și este determinată
prin reacția Trinder: peroxidul de hidrogen în prezența peroxidazei (POD) și fenolului, oxidează un
substrat cromogen incolor (4-aminoantipirină), cu formarea chinoneiminei (complex roșu).
 Absorbanța complexului colorat este măsurată la lungimea de undă de 500nm, intensitatea culorii
fiind proporțională cu concentrația de TAG a probei, exprimată în g/L.

4-amino-antipirina 4-clorfenol chinoneimină

Determinarea TAG – principiul metodei

- Tampon Good pH 7,2 ………..........................................50 mmol/L

- 4-Clorfenol ………………………….…………………………………...4 mmol/L
- ATP………………………………..………………………………………….2 mmol/L
- Lipoprotein lipaza(LPL) ……….…………………………..……….4000 U/L
Reactiv 1 - Glicerol kinaza (GK) …………….………………………………..….400 U/L
- Peroxidaza (POD) ……………….……………………………………2000 U/L
- Glicerol-3-fosfat-oxidaza (GPO) ………………………………1500 U/L
- 4-Amino-antipirina ……………………………….……………….0,5 mmol/L
Standard - Trigliceride ………………………………..…………..…0,2 g/L (2,3 mmol/L)
Proba - Ser/plasma recoltat pe heparina sau EDTA 
Determinarea TAG – mod de lucru

Probă Standard Blank

Standard
- 10 -
Apa (µL)
- - 10
Probă (µL)
10 - -
Reactiv de lucru (µL)
1000 1000 1000
Se amestecă și se incubează 20 minute la 20°C - 25°C sau 10 minute la 37°C. Citiți absorbanța la
500nm împotriva martorului de reactiv în 60 de minute.
Determinarea TAG – calcul

Trigliceride [mg/dL] = AProba /Astd x CStd [g/L]

Factori de conversie
Trigliceride [g/L] x 1.126 = Trigliceride [mmol/L]
Trigliceride [g/L] x 100 = Trigliceride [mg/dL]

Specie Câine Pisică Păsări Cal

TAG (g/L) 10-150 30-100 130-260 5-55