Elemente de biologie moleculara

Replicatia ADN
Transcriptie
Translatie
 Elementele moleculare care stau la baza
functiilor nucleului
Nucleotid - Unitatea structurala a moleculelor de
ADN si ARN
Codon Secven din 3 nucleotide. Unitatea
informaionala a moleculei de ADN si ARN.
Sunt cunoscui 64 de codoni (61 codoni definesc 20
aminoacizi, 3 codoni au rol de STOP pentru sinteza
proteic)
Gena (cistron) Unitatea funcionala, care se
transcre, a moleculei de ADN.
Este secventa de codoni, care contine informatia completa
privind secventa unui lant peptidic
Genom totalitatea genelor dintr-o celula
 Cele doua functii ale AND-ului nuclear
REPLICAREA ADN (functie autocatalitica) -
mecanism molecular, prin care are loc sinteza unei
copii de ADN, pe baza complementaritatii
nucleotidelorin. Are loc in diviziunea celulara

TRANSCRIPTIA (functia autocatalitica) -

mecanism molecular, prin care are lor transcrierea
unei molecule ADN intr-o molecula de ARN. Are
loc, in principal, in nucleul interfazic si reprezinta
fenomenul de expresie genica
 Structura ADN
Lant dublucatenar Lant monocatenar
 Functia autocatalitica a ADN-ului

Are loc inaintea unei diviziuni celulare

Are loc in faza de sinteza a ciclului celular
Are ca scop generarea unei copii fidele a
genomului unei celule
Este declansata/inhibata de semnale
intrinseci/extracelulare, care
activeaza/blocheaza functiile proteinelor
reglatoare de gene
CICLUL CELULAR
Mecanismul molecular de replicatie ADN
Replicaia ncepe bidirecional dintr-un
punct fix, origine, de la care se formeaz
dou furci de replicare
Dublul helix al ADN se desface prin
aciunea enzimelor care rup punile de
hidrogen dintre cele dou catene
complementare
ADNul despiralizat este stabilizat de
proteinele SSB (single strand binding
proteine)
Sinteza ADN ncepe cu un primer ARN
(un scurt fragment, de 10 nucleotide, de
ARN complementar cu originea ADN.
Primerii sunt mai trziu nlocuii cu
secvena ADN de enzime specifice
Sinteza are loc doar in directia 5' 3'.
Procariotele o singura origine de
replicare/cromozom
Eucariote multiple origini de replicare
 Complexul enzimatic al replicarii
ADN Primaza (polimeraza ARN specific) sintetizeaz primul fragment (de
tip ARN) nucleotidic la capatul 5'
ADN-polimeraza I adug prima dezoxiribonucleotid la captul 3-OH al
primerului ARN, alungete fragmentele Okazaki , are aciune exonucleazic,
realiznd nlturarea primerului ARN.
ADN-polimeraza III - acioneaz dup ADN-polimeraza I, contribuind la
alungirea lanului de ADN nou-sintetizat.
n comparaie cu ADN-polimeraza I, care polimerizeaz doar 10 nucleotide,
ADN-polimeraza III polimerizeaz circa 1000 nucleotide.
ADN-ligazele catalizeaz formarea legturi lor fosfodiesterice ntre un grup
3-OH i grupul 5-fosfat ale aceluiai lan ADN . Ligazele sunt eseniale n
sinteza moleculelor normale de ADN, n mecanismele de reparare a ADN,
ct i pentru tierea lanului ADN n recombinarea genetic.
Topoizomerazele I i II exercit aciunea de desfacere i despiralizare a
helixului de ADN,
topoizomeraza I taie doar o catena a dublului helix
topoizomeraza II taie ambele catenel ale dublexului helix ADN.
Topoizomerazele au cte dou subuniti: nick-aza, care taie catena
fosfodiesteric in lanul de ADN, i giraza, care resudeaz cele dou capete
libere ale ADN-ului
 Alungirea catenei de ADN
are loc doar in directia 51- 31
 Fragmentele Okazaki

ADN-polimeraza III alungete

lanul ADN doar n direcia 5' la 3'.
Sinteza ADN este continu pe o
caten (catena timpurie) i
discontinu pe cealalt catena
(catena trzie).
Pe catena trzie se formeaz
fragmente polinucleotidice,
fragmente Okazaki
Asamblarea fragmentelor este
realizata de ligaze
Modelul semiconservativ de sinteza ADN

Fiecare molecula dublu-catenara de ADN, formata ca

urmare a procesului de replicatie, va contine o catena
noua si una veche, din molecula de ADN parental
Corectarea greselilor de replicatie

Deficiente in controlul
si repararea greselilor
de citire, pot duce la
acumularea rapida a
mutatiilor in celula.
Diviziunea mitotic
MITOZA SI MEIOZA
 Importanta biologic a mitozei i meiozei
MITOZA
Diviziunea celulelor somatice in crestere, regenerare
Din celula diploid 2n se genereaza 2 celule fiice diploide,
fiecare 2n
Transmiterea nealterat a informatiei genetice la toate
celulele unui organism pluricelular
MEIOZA
Diviziunea celulalor germinale, 2n, cu formarea gametilor
haploizi, n.
Din celula diploida 2n, se formeaza 4 celule haploide, n.
Fuziunea a doua celule haploide duce la formarea unei
celule 2n zigotul (prima celula diploida a unui organism
pluricelular).
 Expresia genic
Transcriptia si translatia
Transcriptia si translatia sunt functii ale nucleului
interfazic
Transcripia fenomenul de transcriere a
informaiei genetice din secventa ADN n secventa
ARN
Doar o singur caten de ADN este folosit ca
matrit pentru sinteza ARN
Enzimele implicate in transcriere - ARN
polimerazele
ARN-polimeraza I sintetizeaz ARN ribozomal (ARNr);
ARN-polimeraza II sintetizeaz ARN mesager (ARNm)
ARN-polimeraza III sintetizeaz ARN de transfer (ARNt).
Transcriptia si Translatia genelor la procariote si
eucariote
Mecanismul de transcriptie in celulele eucariote
 Procesul de transcriptie in celula eucariota

Capat 5' - modificat GTP. Participa la Capat 3 - capat Poli A, aprox. 150 sau
recunoasterea semnalelor de legare la mai multe nucleotide adenozinice. Are rol
ribizomi. de stabilizare a moleculei de mARN.
 Mecanismul transcriptiei
Initierea
Recunoasterea promotorului de catre ARN polimeraza
Promotor secventa ADN, situat inaintea situsului de
start al sintezei ARN
La procariote promotorul este reprezentat din secventa
TATAAT, iar la eucariote, TATA-box, format din 7
nucleotide cu reziduuri A i T
Legarea ARN polimerazei de regiunea promotor
Alungirea catenei de ARN
Alungirea catenei in directia 5' - 3 sub actiunea ARN
polimerazei
Formarea legturilor de hidrogen dintre catena ADN si
catena ARN in sinteza (hibrid temporar)
Terminarea sintezei recunoasterea secventelor repetitive de
la captul terminal al genei
 Aparatul de translatie
Ribozomii - complexe riboproteice
multienzimatice
ARN de transfer (ARNt) transporta aminoacizii la
locul sintezei
Enzime aminoacil-sintetaze - realizeaz legtura
dintre aminoacid i molecula de ARNt
Aminoacizii - cei 20 de aminoacizi naturali, pentru
care exist cel putin o molecul de ARNt.
Factori de transcripie specifici (de initiere - IF , de
elongare - EF i terminatori - TF), care particip la
reglarea procesului de sintez.
 Codul genetic universal
3
4 = 64 codoni
Prima nucleotid a A doua nucleotid a codonului A treia nucleotid a

codonului 5' U C A G codonului 3'

UUU Fenilalanin UCU Serin UAU Tirozin UGU Cistein U

UUC Fenilalanin UCC Serin UAC Tirozin UGC Cistein C
U UUA Leucin UCA Serin UAA STOP UGA STOP A
UUG Leucin UCG Serin UAG STOP UGG Triptofan G

CUU Leucin CCU Prolin CAU Histidin CGU Arginin U

CUC Leucin CCC Prolin CAC Histidin CGC Arginin C
C CUA Leucin CCA Prolin CAA Glutamin CGA Arginin A
CUG Leucin CCG Prolin CAG Glutamin CGG Arginin G

AUU Izoleucin ACU Treonin AAU Asparagin AGU Serin U

AUC Izoleucin ACC Treonin AAC Asparagin AGC Serin C
A AUA Izoleucin ACA Treonin AAA Lizin AGA Arginin A
AUG Metionin ACG Treonin AAG Lizin AGG Arginin G

GUU Valin GCU Alanin GAU Acid aspartic GGU Glicin U

GUC Valin GCC Alanin GAC Acid aspartic GGC Glicin C
G GUA Valin GCA Alanin GAA Acid glutamic GGA Glicin A
GUG Valin GCG Alanin GAG Acid glutamic GGG Glicin G
Ribozomii
ARN de transport
 Caracteristicile codului genetic
Degenerat: numeroase triplete (codoni) sunt sinonime,
codificnd acelai aminoacid.
Nesuprapus: doi codoni succesivi nu au nucleotide comune,
iar citirea informaiei genetice se face continuu, fr reveniri.
Fr virgule: ntre codoni nu exist nucleotide sau codoni de
separare care s marcheze nceputul sau sfritul unui codon,
informaia genetic citindu-se continuu.
Universal: codul genetic cu triplete este valabil la toate
organismele vii, aceleai triplete codificnd aceiai aminoacizi
(excepie face genomul mitocondrial, unde exist mici
modificri n codificarea unor triplete).
 Mecanismul translatiei
1. Initierea sintezei proteice
ARNm migreaz n citoplasm, unde impreuna cu
ribozomii formeaza polizomii
Activarea primului aminoacid din lantul polipeptidic
(metionina) n urma reaciei cu molecula de ATP, in
prezenta aminoacil-sintetazei
AA + ATP --- aminoacil sintetaze AA -AMP + P-P
Legarea aminoacizilor activai la ARNt in prezenta
aceleiasi enzime
AA-AMP + ARNt ---aminoacil sintetaze AA-ARNt + AMP
Initial se formeaz complexul ARNm-AA1-ARNt1-
subunitatea mica ribozomala
 Complexul de initiere interactioneaza cu subunitatea mare ribozomal,
astfel incat AA1-ARNt1 (cu metionina) va fi pozitionata in situsul P al
subunitatii mari ribozomale
Urmeaz aditia celuli de al doilea AA2 in situsul A al subunitatii mari
ribozomale
Formarea legaturii peptidice dintre cei doi aminoacizi (din situsul P si A)
in prezenta enzimei peptidiltransferazei
Translocarea complexului ribozomal de-a lungul moleculei de ARNm cu
un codon (se elibereaza situsul A, iar situsul P va fi ocupat de
polipeptidul in crestere)
AA1-ARNt1 + AA2-ARNt2---peptidil transferazaAA1-AA2 + ARNt1 + ARNt2
2. Alungirea
lantului
polipeptidic
 3. Terminarea sintezei proteice
Sinteza polipeptidelor se termin atunci cnd
n situsul A apare unul din cei trei codoni stop
La codonul stop, are loc interactiunea
polipeptidului cu molecula H2O si completarea
capatului carboxilic COOH,
Desfacerea complexelor ribozomale in
subunitati, eliberarea moleculei ARNm si a
polipeptidului
La terminarea sintezei polipeptidice participa
factorii terminatori TF
 Localizarea celulara a fenomenelor
de replicatie, transcriptie si translatie