REACTII Ag. Ac.

CATEDRA DE MICROBIOLOGIE
LP9
 REACIA DE AGLUTINARE
Din latin: agglutinatio ncleiere

Reacia Ag-Ac se poate manifesta prin aglutinare, atunci

cnd determinantele antigenice sunt purtate de particule
figurate (Ag. insolubile corpusculare), iar Ac. specifici sunt
complei (cel puin bivaleni).

Aglutinarea este determinat de formarea unei reele ntre

Ag. i Ac., ce permite apropierea unui numr suficient de
particule figurate pentru a constitui aglutinate vizibile cu
ochiul liber.

Ac. IgM cu 10 epitopi poteniali aglutineaz mai activ dect

Ac. IgG.
 REACTII DE AGLUTINARE
CLASIFICARE

Reactii de aglutinare directa

reactii de aglutinare pe lama
reactii de aglutinare in tuburi

Reactii de aglutinare indirecta (pasiva sau

pe suport)
 REACTII DE AGLUTINARE
PE LAMA

Principiu: Ag. somatic O

Ag. flagelar H
Ag. capsular K

Ac. omologi

agregate vizibile cu ochiul liber

* numai aglutinarea rickettsiilor sau leptospirelor trebuie

urmarita microscopic!
 REACTII DE AGLUTINARE
PE LAMA
Indicatii:
Completeaza identificarea biochimica
prezumtiva a unor bacterii (ex. Salmonella,
Shigella, Yersinia etc.)
Identifica serovaruri ca markeri de
patogenitate (ex. Haemophilus influenzae tip
b, tulpinile EPEC, EIEC etc.) ori
epidemiologici
 REACTII DE AGLUTINARE
PE LAMA
Proba: cultura pura, proaspata, a tulpinii
de testat pe panta de TSI, de agar nutritiv
sau pe un mediu diferential
Necesar: baterie cu seruri de referinta
polivalente si monovalente specifice de
grup / tip diluate, la titrul indicat de
producator, in solutie salina izotona
fenolata 0,2%.
 REACIA DE AGLUTINARE
PE LAMA
Citire si interpretare:
Test (+): aglutinare evidenta in interval de 1
in picatura cu ser imun, absenta
aglutinarii la martor.
Test (-): absenta aglutinarii in ambele
picaturi.
Daca s-a obtinut aglutinare cu serul polivalent, se
va continua testarea suspensiei cu serurile
monovalente corespunzatoare.
 REACIA DE AGLUTINARE
IN TUBURI

Indicatii:
confirmarea rezultatelor aglutinarii pe
lama sau transarea lor cand sunt
incerte (aglutinari cu mai multe seruri,
aglutinari tardive)
titrarea aglutininelor pentru Dg.
seroimunologic
 REACIA DE AGLUTINARE
IN TUBURI
Necesar:
a. Pentru confirmarea identitatii antigenice:
Suspensia Ag.-ica preparata diferentiat cu
tipul Ag. Implicat:
Ag. H (ex. Salmonella): cultura de 8 h. in bulion, cu
mobilitate verificata microscopic, formolata 0,2%)
Ag. O: suspensie din cultura de 20 h. pe agar nutritiv
inactivata 1 2,5 h. la 100 C daca bacteria este
mobila sau are Ag. de invelis care o pot face
inaglutinabila prin seruri anti O (ex.: Ag. K la Shigella
subgrup A, C, D, Ag. L si B la E. coli, Ag. Vi la
Salmonella). Bacteriile imobile sau fara Ag. K pot fi
folosite in suspensii vii.
 REACIA DE AGLUTINARE
IN TUBURI
Ag. de invelis K si variantele sale: suspensie
din cultura de 20 h. pe agar nutritiv, formolata
0,2%.
Serul de referinta indicat de rezultatul
aglutinarii pe lama.
b. Pentru Dg. Imunoserologic:
probe de ser prelevate in dinamica
Ag. de referinta
 REACIA DE AGLUTINARE
IN TUBURI
Citire si interpretare:
se interpreteaza comparativ cu tubul martor,
pentru stabilitatea suspensiei de Ag., se
observa supernatantul, si cu ajutorul oglinzii,
fundul tubului.
Aglutinatul H apare floconos, usor disociabil
prin agitare
Aglutinatele O si K dense, grunjoase.
 REACIA DE AGLUTINARE
IN TUBURI
Se folosesc urmatoarele simboluri pentru
intensificarea reactiei:
0 = aspect identic cu martorul
1+ = depozit absent, aglutinare vizibila numai la
marire cu oglinda concava
2+ = supernatant usor opalescent, aglutinat depus,
cvasifloconos sau grunjos, vizibil cu ochiul liber
3+ = supernatant foarte usor opalescent, depozit
floconos, respectiv grunjos, cu tendinta de formare
de pelicula
4+ = supernatant perfect clar, depozit floconos
bogat, respectiv pelicula continua, omogena de
aglutinare, care acopera fundul tubului (umbrela).
 REACIA DE AGLUTINARE
IN TUBURI
Titrul este indicat de tubul de aglutinare +2.

Pentru Dg. Imunoserologic se folosesc

urmatoarele reactii:
reactia Widal dg. febrelor tifoide si
paratifoide
reactia Wright dg. brucelozei
reactia Weil Felix dg. tifosului exantematic
 REACTII DE AGLUTINARE
INDIRECTA (PASIVA sau PE
SUPORT)
Agregarea specifica imunochimica a unor
particule (eritrocite, particule de latex, mai
rar, bentonita, carbune, colodiu etc.)
coafate cu Ag. sau Ac. pentru a putea
identifica Ac., respectiv Ag. lor specifice.
Ag. / Ac. atasati pe diferite suprafete
fie prin legaturi covalente,
fie prin forte intermoleculare electrostatice
 REACTII DE AGLUTINARE
INDIRECTA (PASIVA sau PE
SUPORT)

In proba de testat: ser sangvin, LCR,

fecale, urina etc.) putem detecta Ag. Sau
Ac., in functie de elementul atasat de
suport (Ac. / Ag.)
 REACTII DE AGLUTINARE
INDIRECTA (PASIVA sau PE
SUPORT)
COAGLUTINAREA aglutinare indirecta
care foloseste ca suport tulpina Cowan de
Staphylococcus aureus (ATCC 12498), a
carei proteina A fixeaza Ac. prin
fragmentul Fc, lasand reactive fragmentele
Fab. Astfel, coaglutinarea este folosita pentru
detectarea Ag.
 27-1cd2be0728.jpg
 REACTII DE AGLUTINARE
INDIRECTA (PASIVA sau PE
SUPORT)
teste de mare sensibilitate care permit si determinari
semicantitative.
Firme (Oxoid, bio Mrieux, Sanofi Pasteur) ofera truse
variate pentru:
Detectarea rapida si sensibila, direct in prelevate patologice,
a unor Ag.
Bacteriene (streptococi grup A, B, pneumococi, meningococi,
Haemophilus influenzae tip b, E. coli K1)
Fungice (Cryptococcus neoformans, Candida,
Aspergillus)
Virale (rotavirus, Ag. HBS)
Enterotoxine (stafilococice, Clostridium perfringens,
Bacillus cereus)
 REACTII DE AGLUTINARE
INDIRECTA (PASIVA sau PE
SUPORT)
Identificarea rapida a unor izolate ca:
streptococii de grup A, B, C, D, F, G
E. coli O157
Listeria monocytogenes
Legionella pneumophila
Identificarea rapida a unor toxine din
filtratul culturilor bacteriene.
 REACTII DE AGLUTINARE
INDIRECTA (PASIVA sau PE
SUPORT)
Dg. Imunoserologic prin aglutinare pasiva:
Mononucleoza infectioasa prin detectarea Ac.
Heterofili
Infectia cu Helicobacter pylori
Detectarea titrurilor semnificative ale ASLO,
Proteinei C reactive, factorului Rheumatoid,
RPR carbon
- Dg. de certitudine al sifilisului (TPHA) reactii de
hemaglutinare
REACTII DE LATEX -
AGLUTINARE
 REACTIA DE HEMAGLUTINARE
PASIVA (HAI)
Unele Ag. de origine polizaharidica se fixeaza, practic,
spontan, dupa o scurta incubatie pe suprafata hematiilor.
Antigenele proteice se fixeaza doar dupa o pregatire
prealabila a hematiilor (ex. tratarea cu tanina,
formol).
RHAI se efectueaz in godeurile unei placi din
polistiren.
Reactia (+) se manifesta prin aglutinarea
eritrocitelor sensibilizate (umbrela inversata de
culoare bruna la fundul godeurilor).
 RFC REACTII DE FIXARE A C
Principiu: asociaza 2 complexe Ag. Ac.
care isi disputa C:
I: un cuplu virtual posibil, in care unul din
reactanti este cunoscut, iar reactantul omolog
poate fi prezent sau nu
al II- lea cuplu: este preformat prin reactia
hematiilor de berbec cu serul anti hematii de
berbec (cuplul hemolitic).
 RFC REACTII DE FIXARE A C
Daca I-ul cuplu se formeaza activeaza
(fixeaza) C pe calea clasica. Rar, fixarea C pe
un cuplu Ag. Ac. este vizibila in vitro. De aici,
necesitatea de a testa remanenta C in sistem
printr-un cuplu indicator, cuplul hemolitic.
Daca in sistem persista C activ, primul cuplu nu
s-a format , iar hematiile sunt lizate = reactie
negativa.
In absenta C, fixat pe I-ul cuplu, hematiile nu
sunt lizate = reactie pozitiva.
 RFC REACTII DE FIXARE A C
REACTIE REACTIE
POZITIVA NEGATIVA

PRIMA Ser imun (Ac.) + -

REACTIE Ag. Microbian + +
C + +

A DOUA Hematii de oaie + +

REACTIE Ser hemolitic + +
anti - oaie Absenta Hemoliza
hemolizei
 RFC REACTII DE FIXARE A C

Indicatii:
Identificarea Ag. specifice de grup
Pentru seroDg., cand cu baterii de Ag. cunoscute,
putem titra Ac. fixatori de C, care, de regula,
persista pana la un an de zile.
Acesti Ac. Apar precoce in cursul infectiilor, deci
semnificatia prezentei lor este de infectie acuta
sau recenta; exceptie fac unele infectii ale SNC
cand apar tardiv.
 RFC REACTII DE FIXARE A C

Utilitate:
Dg. infectiilor respiratorii acute: gripa, pneumonii
interstitiale
Dg. rickettsiozelor
Dg. leptospirozelor
 REACTII PRIMARE
RIA RADIOIMUNODOZARE
Ag. pot fi marcate cu izotopi radioactivi (3H, 125I, 14C).
Exista o competitie specifica pentru Ac. intre o cantitate
cunoscuta de Ag. radioactiv si Ag. nemarcat pe care il
dozam.
Dupa reactie masuram radioactivitatea complexului Ag.
Ac. Pentru aceasta, fie Ac. este in prealabil fixat pe un
suport insolubil, fie complexul este precipitat cu ser anti
Ig.
[Ag. nemarcat] o aflam comparand radioactivitatea
complexului cu o curba standard.
Metoda foarte sensibila pentru cuantificarea Ag. si
haptenelor.
 REACTII PRIMARE
RIA RADIOIMUNODOZARE
Indicatii:
Dozarea hormonilor
Dozarea medicamentelor
Dozarea markerilor specifici infectiei cu v. hepatitei
B (Ag. HBs, Ac. anti HBs, Ac. anti HBc,
Ag. HBe, Ac. Anti HBe)
Dezavantaje:
cost ridicat al materialelor
riscul manipularii substantelor radioactive
 REACTII PRIMARE
ELISA Enzyme Immunoassay
EIA)
Principiu: prezenta complexelor Ag Ac
poate fi vizualizata si cuantificata prin
adaugarea in mediul de reactie:
a conjugatului fie Ag., fie un Ac. cunoscut cuplat
cu o enzima
a substratului cromogen specific enzimei de
marcare
 REACTII PRIMARE
ELISA Enzyme Immunoassay
EIA)
Indicatii: identificarea unor Ag. sau Ac.
In functie de modificarea activitatii
markerului enzimatic, EIA pot fi clasificate
in:
Reactii de faza omogena
Reactii de faza heterogena
 REACTII PRIMARE
IMUNOFLUORESCENTA
Principiu: conjugate imunofluorescente
realizate cu Ac. specifici recunosc Ag.
dintr-un mediu de reactie, permitand
evidentierea lor microscopica.
Reactia de culoare obtinuta difera in
functie de fluorocromul utilizat.