Sunteți pe pagina 1din 49

REACTII

ANTIGEN-ANTICORP
SEROLOGIA
Tehnicile folosite in serologie:
 - reactia de aglutinare
 -reactii de precipitare in mediu lichid sau in mediu solid
 - reactia de fixare a complementului
 - reactia de hemaglutino-inhibare
 - imunoflorescenta
 - imunoenzimologie: ELISA( enzyme linked Immunosorbent
assay)
 - ELISA indirecta
 - ELISA sandwich
 - ELISA de competitie
 - Western-blot
 - tehnici de radioimunologie/radiodozare ( mai ales pentru
hormoni)
REACTIA DE AGLUTINARE
DEFINITIE
Reactie Ag-Ac de agregare in care
antigenul este reprezentat de celule
bacteriene sau fragmente de celule
bacteriene in suspensie (antigen
particulat)

=> retele tridimensionale  agregate vizibile


REACTIA DE AGLUTINARE
REACTIA DE AGLUTINARE
Aglutinarea pe lama
Aglutinarea in tuburi
Aglutinarea pasiva
Inhibarea hemaglutinarii pasive
AGLUTINAREA PE LAMA
Utilizare
 Identificarea rapida a bacteriilor pe baza proprietatilor antigenice
(Ag somatic: O, Ag flagelar: H sau Ag. capsular ) a unor tulpini
izolate din produsul patologic.

 Se formeaza agregate vizibile cu ochiul liber; aglutinarea


rickettsiilor sau leptospirelor trebuie urmarita microscopic

 Ex. : Salmonella, Shigella, Haemophilus influenzae tip B, tulpinile


EPEC
AGLUTINAREA IN TUBURI
PRINCIPIUL REACTIEI

In dilutii crescande de ser se adauga aceeasi


cantitate de antigen.

Titrul reactiei este reprezentat de dilutia cea


mai mare de ser la care se mai observa
aglutinarea
AGLUTINAREA IN TUBURI
EXEMPLE

RC. WIDAL S.typhi, S.paratyphi A,B

RC. WRIGHT bruceloze

RC. WEIL-FELIX tifos exantematic


AGLUTINAREA PASIVA
DEFINITIE

Reactie Ag-Ac in care Ag este reprezentat de o


solutie moleculara.
In urma fixarii pe un suport particulat acesta
devine aglutinabil in prezenta serului imun.
AGLUTINARE PASIVA
PARTICULE:
- INERTE: latex, colodiu, bentonita
- HEMATII DE OM grp. “O” HEMAGLUTINARE

- HEMATII DE ANIMAL PASIVA

Ag:
- PROTEIC adsorbit pe hematii native
- POLIZAHARIDIC adsorbit pe hematii tanate
(tratate cu acid tanic)
EXEMPLE
Ag adsorbit pe particule de latex
- Detectarea Ag de Haemophylus, pneumococ, streptococi grup A, B,
meningococ in LCR, ser, secretie faringiana

- Identificare rapida pentru: streptococii de gr. A,B,C,D,F,G, Listeria


monocitogenes, Legionella pneumophilia

- Diagnostic imunoserologic prin latex aglutinare (testul Paul-Bunell pt


mononucleoza infectioasa, prin care se detecteaza anticorpii heterofili, infectia
cu H. pylori, detectarea titrurilor semnificative ale ASLO)

- Evidentierea Factorului Reumatoid (FR)

- Ac anti-ADN in dg. LES


Ag adsorbit pe hematii
- dg. Tiroiditei Hashimoto
- dg. Poliartritei reumatoide (Rc. Waaler-
Rose)
INHIBAREA
HEMAGLUTINARII PASIVE
SCOP
Diagnosticul imunologic al sarcinii.
TEHNICA
I. (urina + ser imun anti-gonadotrofina)
II. (…) + suspensie de hematii tanate
Gonadotrofina (+) => hematii in suspensie
Gonadotrofina (-) => hematii aglutinate
REACTIA DE PRECIPITARE
Reactie Ag-Ac de agregare, in care antigenul este
reprezentat de macromolecule solubile, iar
mediul de reactie poate fi fluid sau gelificat.

Punerea in contact a Ag corespunzator duce la


formarea unor complexe Ag-Ac care precipita
atunci cand elementele ce participa in reactie se
gasesc in proportia optima.
EXEMPLE
PRECIPITAREA INELARA
REACTIA DE FLOCULARE
PRECIPITAREA IN GEL
- SIMPLA DIFUZIE
- DUBLA DIFUZIE
- DIFUZIA IN CAMP ELECTRIC
IMUNELECTROFOREZA
CONTRAIMUNELECTROFOREZA
REACTIA DE PRECIPITARE
- IN MEDICINA LEGALA- identificarea
originii petelor de sange
- IN DG. BOLILOR INFECTIOASE
- Rc.Ascolidg.infectiei carbunoase
- Rc Vincent-Bellotdg.meningitei
cerebrospinale
- identific. de grp. a streptococilor
(grp.Lancefield)
REACTIA DE FLOCULARE
 VDRL = Venereal Diseases
Research Laboratory
 - se foloseste un Ag ce
contine cardiolipina, lecitina
si colesterol pt. punerea in
evidenta prin aparitia de
grunji a anticorpilor
antilipoidici
 - a fost folosit in dg. sifilisului
ca test de triaj, pt.
monitorizarea tratamentului

TITRAREA TOXINEI DIFTERICE-


PRECIPITAREA IN GEL
DEFINITIE
Reactie Ag-Ac care utilizeaza gel de agar sau agaroza ca
mediu in care unul sau ambele elemente care intra in reactie
(Ag/Ac) difuzeaza, diametrul moleculelor de Ag si Ac fiind mai
mic decat diametrul porilor gelului.
PRINCIPIU
Vizualizarea unei zone opace de precipitare la intalnirea in
proportie optima a celor doua elemente (Ag/Ac)
SCOP
Evidentierea fractiunilor antigenice multiple dintr-un
amestec antigenic.
PRECIPITAREA IN GEL
SIMPLA DIFUZIE-RC MANCINI

DUBLA DIFUZIE
RC. OUCHTERLONY
PRECIPITAREA IN GEL
DUBLA DIFUZIE
TESTUL ELEK
DIFUZIA IN CAMP ELECTRIC
Imunoelectroforeza
 Imunelectroforeza asociază două tehnici,
electroforeza şi imunodifuzia. Prin aceasta
tehnica proteinele sunt separate prin
electroforeza – in prima etapa.
 In urmatoarea etapa se adauga in gel anticorpul
complementar proteinelor luate în studiu.
 Când exista un antigen corespunzator unui
anticorp, se formeaza un arc de precipitare in
gel.
DIFUZIA IN CAMP ELECTRIC
Imunoelectroforeza
DIFUZIA IN CAMP ELECTRIC
CONTRAIMUNELECTROFOREZA
Indicatii
 Imunodifuzia radiala simpla (Mancini):
 - dozarea unor antigene, in general ag. proteice din ser (
exista truse pentru dozarea: Ig G, Ig A, Ig M, α-1
antitripsina, proteina C reactiva,fractiunea C3 a
complementului, siderofilina)
 Imunodifuzia dubla ( Ouchterlony): dg. unor micoze si
parazitoze; testu Elek depisteaza in vitro toxina difterica
 Electoimunodifuzii: detectarea de antigene direct din
prelevate patologice sau evidentierea de anticorpi
REACTII Ag-Ac CU PARTICIPAREA
COMPLEMENTULUI
REACTIA DE FIXARE A COMPLEMENTULUI
DEFINITIE
Reactie Ag-Ac ce are loc in prezenta
complementului. (C’)
PRINCIPIUL
C’ se fixeaza numai pe complexul imun format
(Ag-Ac) fara a produce modificari vizibile.
Pentru vizualizarea reactiei se utilizeaza sistemul
hemolitic indicator.
REACTIA DE FIXARE A
COMPLEMENTULUI
RFC
Utilizeaza 2 sisteme Ag-Ac
1. Ac + Ag de testat
2. Hematii de oaie+anticorpi anti-hematii de oaie
+ C’

A. Fixare C’ pe 1=> hematii in suspensiebuton


(RFC+)
B. Fixare C’ pe 2=> hematii lizate (RFC-)
RFC
Utilitatea reactiei de fixare a
complementului
 - RFC este inca utila pt. diagnosticul infectiilor
virale (ex.virus gripal, VRS, ECHO, rubeola) sau
in diagnosticul rickettsiozelor sau leptospirozelor
 - pentru identificarea Ag specifice de grup
sangvin
 - pentru serodiagnostic, cind se folosesc baterii
de Ag cunoscute si se vor titra anticorpii fixatori
de complement
REACTII Ag-Ac CE UTILIZEAZA
REACTANTI MARCATI
RC DE IMUNFLUORESCENTA (IF)
- directa
- indirecta
RADIOIMUNOTESTAREA (RIA)
ELISA
- indirecta
- sandwich
Indicatii
 Depistarea de Ag in :

 - inf. respiratorii: V. gripal. V. paragripal,


V. herpes simplex, Legionella pneumophila,
Bordetella pertussis etc.

 -inf. genitale: Chlamydia trachomatis,


Treponema pallidum
Indicatii
 Depistarea de Ac. in :
 - inf. virale: v. citomegalic, v.E.B, v. herpes
simplex, v. varicela-zoster, v. urlian, v. rujeolic,
rubeolic etc.
 - inf. bacteriene: Legionella pn., Mycoplasma
pneumoniae, Borrelia burgdorferi, H. pylori,
Treponema pallidum
 - inf. parazitare: malarie, leishmaniaza,
toxoplasmoza, pneumocistoza etc.
RADIOIMUNOTESTAREA
PRINCIPIUL
Marcarea radioactiva cu I (I125), C (C14) sau H
(H3) a unuia din reactanti sau radiomarcarea unui
indicator (serul antiglobulinic) care reactioneaza
cu complexul imun primar. In final se masoara
radioactivitatea complexului format.
SCOP(1)
Initial testari de hormoni si enzime
Astazi diagnosticul bolilor infectioase
RADIOIMUNOTESTAREA
SCOP (2)
- detectarea enterotoxinei stafilococice
- detectarea toxinei botulinice
- evidentierea polizaharidului capsular la pneumococi
- diagnosticul gripei
- diagnosticul infectiilor herpetice
- diagnosticul infectiilor cu poxvirusuri
- diagnosticul hepatitelor cu virus B ( Ag HBs, anticorpi
anti-HBs, anticorpi anti-HBc, Ag HBe, anticorpi anti-
Hbe )
ELISA
 Principiu:
 Prezenta complexelor antigen-anticorp poate fi
vizualizata si cuantificata prin adaugarea in
mediul de reactie:
 - a conjugatului reprezentat fie de un antigen ,
fie de un anticorp cunoscut cuplat cu o enzima
(peroxidaza din hrean, fosfataza alcalina) si
 - a substratului cromogen specific enzimei de
marcare
ELISA
ELISA
 Evidentierea antigenelor pt. :
 - diagnosticul unor infectii bacteriene cu :
Streptococcus pyogenes, Chlamydia trahomatis
 - dg. unor infectii virale: v. hepatitei A, B,
rotavirus
 - dg. rapid al gripei
 - dg. gastroenteritelor virale
ELISA
 Identificarea prezentei anticorpilor IgM si
(cuantificarea) Ig G:
 - in infectii bacteriene cu: Borrrelia burgdorferi,
Mycoplasma pn, Chlamydia pn., Legionella pn.
etc.
 - infectii virale cu: v. hepatitelor A,B,C,D; HIV,
v.rubeolos, rujeolos, CMV, v. herpetice, v.
Epstein-Barr
 - infectii parazitare: toxoplamoza, giardiaza
Tehnica Western Blot ( WB)
 Indicatii: confirmarea serurilor reactive in
ELISA si IF
 Principiu:
 Numeroase membrane sintetice pot lega
proteine suficient de puternic incit devin suport
pt reactii imunologice in faza solida. Proteinele
legate isi patreaza reactivitatea antigenica fiind
accesibile anticorpilor din proba de testat.
Tehnica Western Blot ( WB)
 Acest principiu a dus la dezvoltarea unor tehnici
sensibile si cu mare specificitate , numite generic
“imunobloturi”.
 Curent este folosita tehnica Western Blot, in care
proteinele sint transferate dintr-un gel de electroforeza
pe o membrana suport si ulterior reactioneaza cu
anticorpii din proba.
 Tehnica WB combina selectivitatea electroforezei in gel
cu specificitatea testelor imunologice ceea ce permite
detectarea si analizarea proteinelor aflate in amestec.
 Rezultatele sint calitative.