EXPLORAREA SISTEMULUI
IMUN
Asist. Univ. Dr. Tataru Ana-Liana
REACTIA DE PRECIPITARE
IMUNODIFUZIA RADIALA SIMPLA (MANCINI)
TESTUL DIFUZIUNII IN GEL
IMUNELECTROFOREZA
TESTE DE AGLUTINARE, HEMAGLUTINARE,
COOMBS
IMUNOFLORESCENTA
TEHNICI RADIOIMUNOLOGICE (R.I.A.)
TEHNICI IMUNOENZIMATICE (ELISA)
DETECTAREA COMPLEXELOR IMUNE
EXPLORAREA COMPLEMENTULUI
TESTE CUTANATE (PRICK TESTS)
TESTE DE HISTOCOMPATIBILITATE
Reacţii de precipitare
Reacţia Ag-Ac complexe imune
1. Dublă difuzie:
Pe un strat de gel de agaroză se pun serul şi diferite soluţii de
antigeni
Daca există complementarism, Ac din ser şi Ag din soluţie vor difuza
unul spre celălalt şi formează complexe imune Ag-Ac.
Util: parazitologie şi micologie
2. Contraimunoelectroforeză
Ac şi Ag se plasează în godeuri săpate în gel de agaroză.
Sub acţiunea curentului electric se formează complexe Ac-Ag
Util: Ac anti ADN (LES)
Reacţii de precipitare
3. Imunodifuzia radială simplă (Mancini)
Într-un strat de geloză ce conţine Ac, se face un godeu în care se
pune serul de cercetat.
Se formează complexe Ag-Ac, cu diametru proporţional cu
concentraţia clasei de Ig de determinat.
Util: determinarea complementului şi a Ig în concentraţii mari
4. Imunoelectroforeza
Se aplică un ser polivalent într-un godeu făcut paralel cu direcţia de
migrare a proteinelor. Ac din ser vor difuza perpendicular pe axa de
mirgare electroforetică.
Util: evidenţierea paraproteinelor (MM, macroglobulinemia
Waldenstrom)
Reacţii de precipitare
5. Metoda Western Blot
Proteinele sunt separate electroforetic, transferate pe
membrane speciale şi identificate ulterior cu ajutorul Ac
specifici.
Util: HIV
TESTE DE AGLUTINARE
Calitatative - prezenta unui Ag/Ac prin
obtinerea aglutinarii in urma combinarii
Ag-Ac
Cantitative – determinarea titrului de Ac
orientati impotriva unui Ag. Se efect dilutii
se adauga o cantitate fixa de Ac se
determina dilutia maxima la care
aglutinarea mai este inca prezenta
Pt determinarea: grupelor sanguine sau
prezentei unor infectii bacteriene.
Reacţia de aglutinare
Testul COOMBS
Direct: util pentru dg anemiilor imunohemolitice
Principiu: se bazeaza pe proprietatea serului antiglobulinic
(produs prin injectarea de Ig umane la iepure) de a aglutina
eritrocitele pe care sunt fixati Ac antieritrocitari.
Indirect: util pt depistarea in ser a Ac orientati impotriva
unui anumit tip de eritrocite sau determinarea Ac non-
aglutinati din serul pacientului. Singurul test posibil la
pacientele cu Rh- si sarcina cu Rh+ evidentiaza Ac anti-
eritrocitari liberi
Principiu: se vor incuba eritrocitele se va spala excesul de
Ac se va adauga un reactant anti-Ig care va lega celulele
intre ele.
Imunoflorescenţa
1. Directă:
Reacţia Ag-Ac – microscopia cu ultraviolete
Ac marcaţi cu subst fluorescente (fluorosceina)
Util: evidenţierea complexelor tisulare Ag-Ac
2. Indirectă
Secţiunile tisulare sunt incubate cu serul de cercetat, apoi
spălate şi din nou incubate cu Ac anti Ig marcaţi cu
flourosceină
Util: detectarea prezenţei în serul uman a autoanticorpilor
Tehnici radioimunologice
Principiu: reactia Ag-Ac poate fi apreciata cantitativ prin marcarea
Ag/Ac cu izotopi radioactivi. Se masoara cantitatea de radiatii emisa de
complexele imune formate.
R.I.A competitiva: este uitilizata pentru cuantificarea proteinelor
serice, a hormonilor si a metabolitilor diverselor medicamente.
R.I.A necompetitiva: utilizata pentru determinarea IgE orientati
impotriva unor alegeni specifici folosind un alergen cunoscut pe post
de Ag si Ac anti IgE pe post de marker radioactiv.
Tehnica RAST: permite dozarea precisa a nivelului seric de Ac
orientati impotriva unui anumit Ag (antu factor intrinsec, anti
membrana glomerulara, antitrombocitari).
Teste imunoenzimatice
Tehnici imunoenzimatice
Principiu: reactia Ag-Ac poate fi apreciata cantitativ prin
marcarea Ag/Ac cu enzime (FA) si aprecierea
spectofotometrica a efectului cromogen al enzimei pe un
substrat enzimatic (p-nitrofenol).
ELISA (enzime-linked immunosorbent assay) – utila in dg
unuor boli infectioase.
Tehnica: Ag incriminat este atasat de baza unei micro-placi
se adauga o solutie cu concentratie cunoscuta de Ac marcati
enzimatic + proba de ser de cercetat Ac din ser
concureaza cu cei din solutie complexe Ag-Ac in proportii
ecivalente cu concentratiile lor se adauga substratul
enzimatic spectofotometric se apeciaza cantitatea de Ac
marcati enzimatic .
Prick tests (teste de tip intepatura)
- Evidentiaza HS la o serie de alegeni pe baza cutireactiei
- Alergenul este injectat in epiderm prin inteparea pielii:
HS tip I: local va aparea o papula > 2mm Ø dupa 15 min
HS tip III: local apare o papula de 1-5cm dupa 2-3 ore.
Teste intradermice : alergenul este injectat in derm (2mm) la niv
antebratului.
Se utilizeaza pt aprecierea raspunsului imun celular.
Aplicatii: TBC. Se injecteaza 10 unitati PPD.
Interpretare: + la 72 ore - papula >10mm Ø
Negativ la pacienti cu TBC sau cu test + in antecedente = deficienta secundara
a imunitatii celulare.
Teste de contact (patch tests)
- Utilizate pt evidentierea HS de tip intarziat fata
de o varietate de antigeni.
Aplicatii: dermatita de contact.
Evaluarea funcţiei fagocitare
Testul cu albastru de nitrotetrazolium
Este apreciată activitatea enzimelor lizozomale fagocitare
prin evaluarea capacităţii fagocitelor de a reoxida colorantul
redus (incolor) la forma albastră.
Util: deficitul enzimelor lizozomale oxidative – în
granulocitoza cronică.
Lupus eritematos sistemic
Ac antinucleari ANA
Ac anti muşchi neted
(Anti Sm)
Ac anti ADN dublu-
catenar
Ac antifosfolipidici
Ac anticoagulanţi
Ac anticardiolipină
Artrita reumatoidă
Factor reumatoid (FR)
Ac anti proteină
ciclică citrulinată
VHS, PCR
Examinarea lichidului
articular (pt
excluderea artritei
septice)
Sclerodermia
Ac antinucleari
Ac de sclerodermie
(anti SCL)
Ac anticentromere
Sindromul Sjogren
Factor reumatoid
(70%)
Ac antinucleari
Ac împotriva ag
citoplasmatice: SS-
A(Ro), SS-B (La) din
ducte salivare
IgA, IgM, IgG
TESTUL Schirmer
(masoară cantitatea de
lacrimi secretate)
Biopsia glandelor
salivare
Boala Graves Basedow
TSH suprimat
T4, FT4, T3
Ac antinucleari
Ac anti ADN dublu catenar
Hipertiroidism:
Hipercalcemie
FAL
granulocitelor
ANTICORPII (structura de baza-Ig)
1. Ig G – Ac antivirali si antibacterieni
- activeaza complementul pe cale clasica
- traverseaza memb placentara (protectia fatului in primele 6 luni)
- apar in raspunsul imun secundar si tardiv in cel primar
2. Ig M- Ac antitoxici, anti aglutinanti, opsonizanti
- activeaza complementul pe calea clasica
- nu traveseaza memb placentara
- apar in rasp imun primar
3. Ig A- asigura apararea mucoaselor
- activeaza complementul pe cale alterna
4. Ig E- rol in reactia anafilactica
5. Ig D- receptori specifici pentru Ag
