Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
ANTIGENELE ANTICORPI
(Ag) (Ac)
Ag si Ac
IN REACTIA DE
AGLUTINARE IMUNA
Ag sunt: Ac sunt (aglutinine):
particulate
participa la reactie > dilutii
seriate ale serului (bv)
Cunoscute (laborator)
au capacitate de aglutinare
in cantitate constanta
diferita (~ izotipuri)
ex. Ig M dpdv functional sunt decavalente
teoretic si pentavalente practic
TITRUL
valenta Ag
concentratia Ac.
Ac in exces > epitopii Ag se satureaza >>
CI de dimensiuni mici
Ag, Ac:concentratii echivalente: o retea extinsa de CI
Ag in exces > situsurile de combinare ale Ac se satureaza >
CI de dimensiuni mici
FACTORI CARE INFLUENTEAZA
REACTIA DE AGLUTINARE
densitatea si dispozitia spatiala a D Ag de pe
suprafata celulelor / particulelor
potentialul electric al reactantilor > variatiile de pH
prezenta electrolitilor in mediul de suspensie ( la conc
fiziologica de NaCl)
variatiile de temperatura
durata incubatiei:
*pt aglutinarea bacteriana incubatia este de 1-2 ore la 37ºC;
Citirea finala a rezultatelor se face dupa 24 ore la temp camerei
REACTIA DE AGLUTINARE
Hemaglutinarea:
Formarea aglutinatului:
Ag se leaga la Fab a 2 Ac >> Imuna
virala
REACTIA DE AGLUTINARE
METODOLOGIE
omogenizare reactanti > incubare ~2h.
Aglutinarea este vizibila cu ochiul liber = Ac sun prezenti in
serul bv=Dg+
!* La dilutii mari ale serului nu mai obtinem aglutinarea = Ag particulat
ramane in suspensie.
REACTIA DE AGLUTINARE
APLICATII
AGLUTINAREA BACTERIANA
se foloseste in laborator pt a stabili titrul de Ac serici in bolile infectioase
EX: tifos exantematic, infectii cu Brucella,enterobacterii- Salmonella
exista 2 forme:
a) aglutinare de tip H (hauch = val): produsa de o suspensie de celule bacteriene
flagelate in cursul careia se formeaza flocoane bacteriene mari si laxe;
*Ag flagelare aglutineaza (flagelilor bacterieni) interactioneaza cu Ac specifici
b) aglutinarea de tip O sau somatica (ohne hauch = fara val): produsa de bacteriile
imobile; se formeaza conglomerate celulare dense, compacte, in care celulele
bacteriene reactioneaza prin intermediul Ag somatice reprezentate de LPS
(lipopolizaharide =componente majore ale suprafetei celulelor Gram -).
* Ag somatice interactioneaza cu Ac specifici serici.
AGLUTINAREA BACTERIANA
TESTUL WIDAL
Utilizare: Dg serologic al
infectiilor cu Salmonella
Typhi
Georges-Fernand-Isidor
Widal si Sicard in 1896 au
descris Reactia Widal
Acest test si-a dovedit valoarea de
dg in cazurile in care nu se puteau
obtine cultivarea celulelor
TESTUL WIDAL
poate fi facut
in tub:dilutii seriate >
titrul
pe lama: calitativa
DG SEROLOGIC AL INFECTIILOR
CU SALMONELLA
serotipizare serodiagnostic
identificarea tipurilor al febrelor tifoide/paratifoide
serologice de Salmonella cu un set de Ag
utilizandu-se seruri
standardizate:
imune cu specificitate
Reactia de aglutinare =
cunoscuta prin reactia
T Widal in tuburi
de aglutinare in tub sau
pe lama
SERODIAGNOSTIC:
REACTIA DE AGLUTINARE
(T WIDAL)
Materiale necesare: Evidentiaza
Aglutininele anti-H au un titru inalt ( 1/1000-1/5000) iar
aglutininele anti-O : 1/250-1/1000.
reactie pozitiva:
>1/500 pt aglutininele anti-O
Tt anterioare cu ATB.
APLICATIE PRINCIPALA:
TIPIZAREA GRUPELOR DE SANGE
REGULA DE AUR:
Ag sunt pe suprafata RBC
Ac sunt in ser
SISTEMUL ABO
AL GRUPELOR SANGVINE
Exprimat in → tesuturi & fluidele CLASIFICAREA Ac DE GRUP
organismului inclusiv pe RBC, SANGVIN
plachete & celule endoteliale
Alloanticorpi:
3 Ag: A, B, H
•Reactioneaza cu Ag straine care nu
2 Ac: anti-A and anti-B sunt prezente pe propriile RBC
4 fenotipuri: A, B, AB, O → •Sunt produse ca rezultat al
stimularii imune via transfuzii/sarcina
A & B: transmitere fenotipica
autozomal co-dominanta Autoanticorpii:
(exprimata pe group A / B / AB de
Reactioneaza cu Ag de pe propriile
pe RBC);
RBC/ acelasi Ag de pe celulele altui
individ
REACTIVITATEA INCRUCISATA
Ac > reactie incrucisata cu Ag nespecific
in cazul in care Ag impartasesc un epitop similar/ identic
Grup B, Rh-
Fara aglutinare cu serul anti-A si anti-Rh
Da aglutinare cu serul anti-B
SISTEMUL DE GROUP SANGVIN Rh
CLASIFICARE/NOMENCLATURA
Wiener Antigenele Rh
IPOTEZA ALELELOR
MULTIPLE Sistem complex reprezentat de cateva
5 Ag: Rho, rh’, rh”, hr’, subunitati Ag : A, B, C, D, E.
hr”
Rosenfeld Contine 3 proteine membranare
Sistem Numeric integrale
Rh1 - Rh5 RhD/Rho ( important)
Fischer & Race RhCcEe
3 allele: D/d, C/c and Rh> Asociate cu GP:(Rh50, RhAg)
E/e
5 Ag: D, C, E, c, e Antigenul D → consta intr-o
d → fara locus D → proteina:
fara produsi antigenici RhD→cel mai immunogenic >
urmat de c, E, C e
TESTARE Rh
OBIECTIVE: COMPONENTE:
detectarea titrurilor scazute de
Ac serici (ex Rh Du) Suport solid pt Ag solubil
(cunoscut)
PRICIPIU: RBC = celule indicator
Ac (bv ser) reactioneaza cu Particule de latex
Ag adsorbit pe RBC > Carbune
hemaglutinatinare Bentonita
Serul > Ac necunoscut
*(RBC = pasive, nu participa
to reactie)
HEMAGLUTINAREA PASIVA
APPLICATII:
TESTUL ANTIGLOBULINIC
TESTUL ANTIGLOBULINIC
TESTUL ANTI-HUMAN GLOBULIN (AHG),
TEST COOMBS
UTILIZARI:
Detectarea Ac (IgG) anti-eritrocitari cu specificitate pt sistemul
ABO/Rh
PRINCIPIUL TESTULUI
ANTIGLOBULINIC
Metoda:
1) RBC > sensibilizate prin acoperirea cu IgG / complement >
Nu vor aglutina direct cand sunt centrifugate.
Pt a obtine aglutinarea:
2) + alt Ac > reactioneaza cu RBC prin Fc (IgG) sau C3b/C3d
3) > "punte" intre : Ac /C' adaugat si IgG de pe RBC > aglutinare.
*Nota:
*Reactivii nu contin Ac IgM. Prezenta Ac IgM pe
RBC este evidentiata de C3 (IgM = puternic
activator al C').
REACTIVI
Reactivul Anti-Human globulin (AHG or Coombs)
W a s h th e c e lls 3 tim e s
to re m o v e a n y
u n a tta c h e d a n tib o d ie s .
A d d A n ti-h u m a n
g lo b u lin
N o v is ib le a g g lu tin a tio n
a n d th e re fo re a n e g a tiv e
te s t
A d d C o o m b s C o n tro l
C h e c k C e lls
DAT POZITIV
Dg:
anemia hemolitica autoimuna (dem prezenta AAc anti RBC)
Boala hemolitica a nou-nascutului (dem prezenta Ac anti
Rh/anti ABO)
Transfuzii recente (RBC/plasma/masa tr)
Medicatie
Cautam alte date de lab care indica o distructie
RBC: Ht, bilirubina, LDH)
CAUZE CLINICE DE DAT POSITIV
A scazut datorita:
cu Proteus
TESTUL FELIX-WEIL
Bv suspectat de ricketsia> testat anti- (OX-2, OX-
19, OX-K).
SERO CONVERSIA
Reprezinta dezvoltarea
in ser,
ca rezultat al unei
infectii sau a unei
imunizari,
a unui titru detectabil de
Ac specifici fata de
microorganisme
SERO REVERSIA
testele serologice nu
mai pot detecta
prezenta unor Ac/Ag in
serul unui pacient
TESTAREA IN PERECHE
in faza convalescenta
(~ la 2 sapt)
Clinic semnificativ:
Crestere de 4x a titrului
Reactie + in 2 tuburi
aglutinare
Ag SOMATIC (O)
localizare: perete celular > prezinta variatii
de ordin chimic. Ag O - clasificare
Toate liniile de Salmonella cu Ag majore:
Somatic
Stabil termic
Produce o aglutinare
granulara > in varianta
smooth (S) sau rough (R)
Unele dintre acestea pot fi
supuse la conversie
lysogenica de catre
bacteriophagi
Ag FLAGELAR (H)
se gaseste numai la formele mobile
imprima specificitatea de de tip antigenic (aprox 2000
de variante Ag H = serotipuri)
Stabile termic
Apar in flageli
(proteine)
Aglutinarea este rapida,
slaba si floculara
Pot aparea variatii de
faza reversibila
Ag DE INVELIS(Vi=K)
= de suprafata,
situat > perete (K=Kapsel= capsula)
actioneaza ca factor de virulenta
structura G-L-P
tulpinile bact care au Ag Vi vor fi aglutinate numai
de Ac anti-V
Ag Vi se gaseste la putine serotipuri de
Salmonella, > rezistenta la fagocitoza
* chiar daca se afla in cantitate prea mica pt a
forma o structura capsulara vizibila, este suficient
pt a masca Ag O > inhiba aglutinarea celulelor
respective in prezenta serului specific anti-O.
TESTUL STANDARD AGLUTINARE
PT Ac SERICI ANTI- S. Tpyhi, S.
Paratyphi