Dozarea colesterolului total prin

metoda enzimatic-colorimetrică
LP10
Introducere

 Colesterolul este principalul sterol din corpul animal, insolubil în apă, deosebit de stabil și, prin
urmare, dificil de degradat.
 Colesterolul este o componentă a membranelor celulare, fiind implicat în fluiditatea membranelor
celulare. Cu cât este mai prezent într-o membrană, cu atât membrana este mai rigidă.
 Este implicat în biosinteza hormonilor steroizi, acizilor biliari și a vitaminei D.
Provine în mică parte din alimente de origine animală, în cea mai mare parte este de origine
endogenă sintetizat prin două căi:
- sinteză din acetilcoenzima A, 90% din producția întregului organism
- de origine intestinală.
 Colesterolul este un marker al dezechilibrelor metabolice din
organism. Este produs în principal de ficat din acetil-CoA și
țesuturile periferice într-o măsură mult mai mică.
Introducere

 Serul sanguin conține aproximativ 7 g/L de lipide, în principal colesterol liber și esterificat,
trigliceride, fosfolipide și acizi grași liberi.
 Majoritatea colesterolului nu circulă liber în sânge; este transportat de lipoproteine, complexe
formate între lipide și apolipoproteine.
 Se asociază în principal cu lipoproteine ​cu densitate mică LDL (“colesterol rau”) (transportă
colestrolul de la ficat la țesuturile periferice) sau cu lipoproteine ​cu densitate ridicată HDL (“colestrol
bun”) (transportă colesterolul în exces din țesuturile periferice la ficat) pentru ca acesta să fie
eliminat sau redistribuit.
 Celulele intestinale sintetizează colesterolul pe care îl împachetează în chilomicroni. Glandele
suprarenale și gonadele pot produce, de asemenea, colesterol.
 Introducere

 Fiecare specie are proporții diferite ale

acestor lipoproteine. Spre deosebire de
medicina umană, unde aceste fracții sunt
frecvent măsurate (pentru a distinge între
colesterolul bun și cel rău), acest lucru nu se
face în medicina veterinară.
 Colesterolul este un constituent important
al lipoproteinelor plasmatice și poate fi
determinat printr-un număr mare de metode
colorimetrice, enzimatice sau cromatografice.
Interpretare - Valori crescute ale colesterolului

 Hiperlipidemia este definită de o creștere a trigliceridelor circulante și/sau a colesterolului.

 Simptomele hiperlipidemiei includ convulsii, dureri abdominale, disfuncții ale sistemului nervos, plăci
cutanate și xantome ale pielii, umplute cu lipide galben-portocalii.
 Cauzele hiperlipidemiei:
- absorbția crescută a trigliceridelor/colesterolului: după masă
- producție crescută de trigliceride/colesterol: sindrom nefrotic (boală degenerativă a rinichilor)
- scăderea clearance-ului trigliceridelor/colesterolului: hipotiroidism, glanda suprarenală hiperactivă,
diabetul zaharat, inflamația pancreasului, obstrucția căilor biliare (colestază), gestație, defecte ale
enzimelor pentru eliminarea lipidelor sau a lipoproteinelor
- boli moștenite genetic (“hipercolesterolemia familială”);
- vârstă (odată cu înaintarea în vârstă crește riscul unui colesterol mare);
- tipul de alimentație (o dietă bogată în grăsimi aduce un aport ridicat de colesterol în organism);
- obezitatea, sedentarism.
Interpretare - Valori crescute ale colesterolului

 Depunerea grăsimilor pe pereții vaselor de sânge duce, în timp, la îngustarea lor. Plăcile de aterom,
prin calcifiere, vor bloca accesul oxigenului la nivelul țesuturilor. Ruperea plăcilor de aterom și
migrarea unor fragmente duce la formarea cheagurilor de sânge. Astfel vasele de sânge sunt și mai
mult obturate, iar consecinţele pot fi destul de severe:
- infarct miocardic;
- angină pectoral;
- AVC;
- boală arterială periferică;
- hipertensiune arterială;
- insuficiență cardiacă.
Interpretare - Valori scăzute ale colesterolului

 Nivelul scazut de HDL creste riscul de probleme cardiace. HDL îndeparteaza colesterolul din artere și
îl duce la ficat, pentru a fi eliminat. Aceasta indepartare a colesterolului poate proteja arterele.
 Studiile au aratat ca nivelurile scazute de HDL sunt legate de un risc mai mare de a dezvolta boli
cardiovasculare. Acest lucru este valabil mai ales daca alte lipide din sange cum ar fi colesterolul LDL si
trigliceridele, sunt marite.
 Colesterolul total foarte scazut poate fi legat uneori de malnutritie, malabsorbtie, anemie (număr
scăzut de globule roșii), probleme cu tiroida, boli hepatice etc.
 De cele mai multe ori, colesterolul foarte scăzut nu provoacă o problemă. Însă, există o anumită
îngrijorare ca, în cazuri rare, hipolipidemia ar putea duce la anxietate, depresie și alte probleme.
 Deoarece colesterolul este implicat în producerea de hormoni și vitamina D, nivelurile scăzute pot
afecta sănătatea creierului. Vitamina D este importantă pentru creșterea celulelor.
Determinarea colesterol – principiul metodei

 Colesterolul esterificat prezent în ser este hidrolizat enzimatic de colesterol esterază (CHE) în colesterol
liber și acizi grași.

colesterol esterificat colesterol liber colesterol-3-ona

 Colesterolul liber produs și cel preexistent este oxidat de colesterol oxidaza (CHO) formand colesterol-
3-ona si peroxid de hidrogen.

peroxid de hidrogen 4-amino-antipirina fenol quinonenimina (roșu)

 Peroxidul de hidrogen, în prezența peroxidazei (POD) și a fenolului, oxidează un substra cromogen

incolor (4-amino-antipirină) într-un complex de culoare roșie chinoneimină. Complexul absoarbe la 500
nm, iar intensitatea culorii este direct proporțională cu concentrația de colesterol, exprimată în g/L.
Determinarea TAG – principiul metodei

- Tampon Good pH 6.7 ………..........................................50 mmol/L

- Fenol ………………………….………………………………….,...........5 mmol/L
- Colesterol esteraza (CHE) …………..……………………………….200 U/L
Reactiv 1 Cholesterol oxidaza (CHO) …………….………………………..….50 U/L
-
- Peroxidaza (POD) ……………….……………………………………...2000 U/L
- 4-Amino-antipirina ……………………………….………………......0,3 mmol/L
Standard - Colesterol...................... ………………………………..…………..…2.0 g/L (5,2 mmol/L)
Proba - Ser/plasma recoltat pe heparina sau EDTA 
Determinarea TAG – mod de lucru

Probă Standard Blank

Standard
- 10 -
Apa (µL)
- - 10
Probă (µL)
10 - -
Reactiv de lucru (µL)
1000 1000 1000
Se amestecă și se incubează 20 minute la 20°C - 25°C sau 10 minute la 37°C. Se citește absorbanța la
500nm față de blank în decurs de 60 de minute.
Determinarea TAG – calcul

• 

Specie Colesterol (mg/dL) Specie Colesterol (mg/dL) 

Caine 135-278 Vaca 62-193

Pisica 71-156 Porc 81-134

Cal 71-142 Oaie 44-90