Dozarea HDL - colesterolului în ser

martie.2020
HDL-cholesterol – introducere

şi
LDL-Colesterolul – BUN sau RĂU?
HDL-cholesterol – introducere
• Structura - compus cu structură lipoproteică.
• Sinteza - ficat.
• Compozitie – conţinut lipidic de 45-55%, predominând fosfolipidele – 20-30%, colesterolul 17-23% şi
trigliceridele 3-6%. Componenţa proteică majoritară este apo A (AI, AII) ,dar conţin cantităţi mici de apo C, D,
E. Nu cuprind apo B.
• Rol – transportul colesterolului de la țesuturile extrahepatice către ficat pentru catabolizare și excreție
(transformare în acizi biliari și excreție prin bilă).

Împreună cu structura lipoproteică LDL-ul (transportă colesterolul de la ficat la țesuturi extrahepatice)

participă la menținerea nivelului colesterolului celular.
Concentrațiile HDL-colesterolului și apolipoproteinei-A sunt factori de risc pozitiv in ateroscleroză.
Pacienții cu nivele ridicate ale HDL-colesterol sunt protejați, avînd un risc scăzut de a face ateroscleroză.
Indicația principală pentru care se recomandă evaluarea colesterolului o constituie evaluarea riscului
de boală cardiovasculară.
Metoda de dozare – repere esenţiale

• Metoda: spectrofotometrică (enzimatică – colorimetrică) – metoda în punct final

• Specimen recoltat – sânge venos.

• Recipient de recoltare – vacutainer fără anticoagulant, cu/fără gel separator.

• Prelucrare necesară după recoltare – se separă serul prin centrifugare; se lucrează în aceeaşi zi sau se
stochează la 4ºC sau la -20ºC.

• Volum probă – minim 0.5 mL ser.

• Cauze de respingere a probei – specimen intens hemolizat / sânge recoltat interprandial.

• Stabilitate probă – serul separat este stabil 5-7 zile la 2-8°C; 3 luni la -20ºC; câţiva ani la -70ºC.
Metoda de dozare – principiul metodei

• Dupa o precipitare selectiva cu reactiv de precipitare a particulelor de

chilomicroni, VLDL si LDL, se centrifugheaza proba si se determina din
supernatant valoarea HDL.

• ! Principiul de dozare a HDL = identic cu cel de la dozarea colesterolului

Metoda de dozare - reacţii

Colesterol esteraza
Colesterol esterificat + H2O Colesterol liber + Acid gras

Colesterol oxidaza
Colesterol liber + O2 Colestenona + H2O2

Peroxidaza
H2O2 + 4-Clorfenol + PAP* Compus quinoniminic (roşu) + H2O

*PAP = 4-amino-antipirina
Intensitatea coloratiei compusului obtinut este direct proportionala cu concentratia
de HDL din ser si se masoara la 500 nm.
Metoda de dozare – mod de lucru

Reactivi :
1. Reactiv de precipitare
2. Reactiv enzimatic
3. Standard de HDL-colesterol 50 mg/dl
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

• 1. Reactia de precipitare: 200 l ser + 500 l reactiv de precipitare se agita -> se lasa in repaus 10 minute
-> se centrifugheaza 10 minute la 5000 rpm.

• 2. Reactia de culoare: 5-10 minute repaus la temperatura camerei -> se citeste absorbanta standardului si a
probei fata de martor la 500 nm.
Metoda de dozare – calcule

CALCULE

Ap/As x Cs = concentratia de HDL-cholesterol (mg/dL)

Factor de conversie: mg/dl x 0,026 = mmol/L

Valori normale si patologice

Normal > 40 mg/dL

Factor protector > 60 mg/dL

Valori de alerta clinica: < 40 mg/ dL => risc crescut de boala coronariana

Risc scazut 3.3 – 4.4

RAPORT COLESTEROL TOTAL / HDL: Risc mediu 4.4 – 7.1
Risc moderat 7.1 - 11
Risc crescut > 11
Valori patologice

Valori scăzute pentru HDL-colesterol sunt întalnite la:

• Fumători și sedentari
• Hipertrigliceridemie familială
• Pacienți cu afecțiuni hepatopocelulare cronice ( prin deficit de sinteză proteică)
• Boală renală cronică (pierderi proteice)
• deficit de APO A-I si APO C-III
• Hipotiroidism
Profil lipidic

Testele biochimice pentru o evaluare completa a metabolismului lipidic completeaza dozarea cu LDL- colesterol,
fractiunea proaterogena.

Dozarea de LDL-colesterol se poate realiza prin:

• metoda enzimatic colorimetrica in faza omogena (solubilizare micelara selectiva a LDL- colesterol cu un
detrgent neionic si interactiunea cu un derivat glucidic a VLDL si chilomicroni).
• Indirect conform formulei Friedewald:

LDL-col= CT-HDL-col- TG/5 sau

Limite neaplicabile: - TG> 400 mg/dl,

• Ser bogat in chilomicroni

Interval biologic de referinta LDL-colesterol:

Optim  100mg/dl
La limita 129 mg/dl
Crescut 130-159 mg/dl
Profil lipidic

Profil lipidic complet:

-Analiza aspect ser

-Dozare CT, TG, LDL, HDL

-Dozare ApoA1, ApoB100

Analize suplimentare:
- Lipidograma
- Lipoproteina (a)
 Profil lipidic
Aspect ser
- Proba tinuta 24h, la +4grade Celsius, ofera informatii legate de continutul in
lipoproteine bogate in TG

5 situatii:
1. Clar: valorile LDL +/- HDL crescute; TG < 250mg/dl
2. Opalescent: valorile VDLL +/- IDL crescute; TG > 500mg/dl
3. Lactescent: valorile VDLL +/- IDL crescute; TG > 1000mg/dl
4. Clar + inel cremos: valorile Chilomicronilor crescute; TG > 1000mg/dl
5. Opalescent + inel cremos: valorile Chilomicronilor + VLDL crescute;
TG > 1000mg/dl

Aspectul serului diferentiaza o hipercolesterolemie de o hipertrigliceridemie !