Imunofluorescenta

Imunofluorescenta este o tehnica folosita pentru microscopul optic cu fluorescenta si este utilizata in
mare parte pe esantioane microbiologice. Aceasta tehnica utilizeaza specificitatea anticorpilor la antigenii lor
pentru a colora fluorescent diverse biomolecule din structura unei celule, si astfel permite vizualizarea modului
in care este distribuita molecula respectiva pe intreg esantionul. Portiunea specifica de pe un antigen pe care o
recunoaste anticopul se numeste epitop. De-a lungul timpului, s-au inregistrat mari eforturi in ceea ce priveste
localizarea epitopilor, din moment ce multi anticorpi se pot lega la acelasi epitop, iar nivelurile de legare dintre
anticorpii care recunosc acelasi epitop pot varia. De asemenea, legarea fluoroforului la anticorp nu poate
interfera cu specificitatea imunologica a anticorpului sau cu capacitatea de legare la antigenul sau.
Imunofluorescenta este o metoda larg folosita de imunocolorare(care foloseste anticorpi pentru colorarea
proteinelor) si este un exemplu specific de imunohistochimie(ce reprezinta uzul relatiei antigen-anticorp in
tesuturi). Aceasta tehnica se foloseste in principal de fluorofori pentru a vizualiza localizarea anticorpilor.

MECANISMUL IMUNOFLUORESCENTEI
Imunofluorescenta poate fi utilizata pe sectiuni de tesut, culturi de celule sau celule indiviuale, si poate
fi, de asemenea, utilizata pentru a analiza distributia proteinelor, glicanilor si a moleculelor biologice mici si a
moleculelor non-biologice. Aceasta tehnica poate fi utilizata chiar si pentru a vizualiza structuri, cum ar fi
filamentele intermediare. Daca topologia unei membrane celulare este in curs de determinare, inserarea
epitopilor in proteine poate fi utilizata in asociere cu imunofluorescenta pentru a determina structuri.
Imunofluorescenta poate fi folosita in combinatie cu alte metode de colorare fluorescenta, cum ar fi utilizarea
DAPI(4’,6-diamidino-2-fenilindol) pentru a marca ADN. Diverse modele de microscoape pot fi utilizate pentru
analizarea mostrelor de imunofluorescenta; cel mai simplu este microscopul cu epifluorescenta, de asemenea,
si microscopul confocal este larg folosit.