1.

Descrierea tehnicii electroforezei 2D DIGE

Electroforeza bidimensional este una dintre cele mai frecvent utilizate tehnici de separare
pentru studierea proteomului i a modificrilor post-translaionale. Prima dimensiune implic
focalizarea izoelectric, prin care proteinele se separ pe baza sarcinii electrice, folosind geluri cu
gradient de pH (IEF). La un anumit pH, suma sarcinilor tuturor aminoacizilor dintr-o protein este
egal cu zero. Prin plasarea proteinelor ntr-un gradient de pH i aplicarea unui potenial electric
proteina migreaz spre anod sau catod n funcie de ncrcarea sa net. n cele din urm, proteina
ajunge la pI i nceteaz s migreze. A doua dimensiune - separare prin electroforez pe gel de
poliacrilamid, SDS-PAGE, prin care proteinele se separ pe baza greutii lor moleculare.
Colorarea se face cu Coomasie Blue sau cu Ag. DIGE utilizeaz etichetarea direct a proteinelor cu
colorani fluoresceni (cunoscui sub denumirea de CyDyes: Cy2, Cy3 i Cy5) nainte de IEF. Se
recomand ca proteomul s fie pre-fracionat (centrifugare), s se elimine materialul contaminant
din prob i s multiplicm proteinele de interes pentru analiza ulterioar [1], [2].

Fig. 1 - Electroforez bidimensional: focalizare izoelectric n prima dimensiune,

electroforez n gel de poliacrilamid cu sodiu dodecil sulfat n a doua dimensiune [1]

2. Descrierea articolului

Aceast tehnic de electroforez a fost pus n eviden prin articolul 2D-DIGE as a

strategy to identify serum biomarkers in Mexican patients with Type-2 diabetes with different body
mass index, publicat n data de 20 April 2017 n SCIENTIFIC REPORTS [3].

1
 Scopul acestui studiu este de a identifica noi proteine asociate cu dou boli: obezitatea i
diabetul de tip 2 (T2D), la pacienii de ras mexican, conform statisticilor, mai predispui la aceste
afeciuni metabolice [3].
Potrivit unor studii realizate de Organizaia Mondial a Sntii (OMS) exist diferene
rasiale i etnice semnificative n prevalena obezitii i a diabetului de tip 2. n consecin, se
urmrete identificarea unor noi biomarkeri pentru diagnosticarea i predicia acestor boli [3].
Toate probele serice au fost recoltate de la pacieni de origine mexican, care prezint
T2D, de la Clinica Pedro Brcena Hiriart- ISSSTE, Mexic. La studiul prezentat au participat 62
pacieni mexicani cu T2D care au fost grupai n funcie de indicele de mas corporal (IMC) pentru
a le compara profilul proteomului seric. Grupele au fost formate din pacieni: cu greutate normal
(NW), cu exces de greutate (OW), cu obezitatea I (ObI) i cu obezitate II i III (ObII / III). De
asemenea, n studiu a fost inclus un grup de control alctuit din voluntari sntoi (23), cu valori
normoglicemice i greutate normal, pentru validarea rezultatelor experimentale [3].
Probele de snge au fost supuse unor procese de electroforez n gel diferenial
bidimensional (2D-DIGE) urmat de spectrometrie de mas (LC-MS / MS). n urma rezultatelor
experimentale s-a raportat un total de 113 pete de proteine acumulate difereniat n ser la pacienii
mexicani cu diabet, comparativ cu grupul de control. Din acestea, 64 de proteine unice au fost
identificate cu ajutorul spectrometriei de mas, fiind detectate 37 de proteine care nu se exprim n
funcie de etnie, ntlnindu-se i la populaia european. Restul proteinelor (27) identificate nu au
fost ntlnite anterior i majoritatea sunt implicate n procesul metabolic. Patru din cele 27 de
proteine (14-3-3, OTP3, ApoH i ZAG) au fost selectate pentru cercetri mai detaliate prin Western
blotting, prezentnd o tendin clar legat de bolile amintite. Rezultatele relev proteine cu
potenial de biomarkeri specifici, asociate cu diabet i obezitate prezente n populaia mexican, care
pot s contribuie la diagnosticarea sau dezvoltarea unor terapii [3].

3. Avantajele i dezavantajele electroforezei 2D-DIGE

Avantaje ale electroforezei 2D-DIGE [1], [2]:

capacitatea de a eticheta dou sau mai multe eantioane cu colorani diferii i de a separa pe
acelai gel, eliminnd variabilitatea gel-la-gel;
cuantificare mai simpl i mai precis i sensibilitate mare;
permite analiza eantioanelor repetate din mai multe condiii experimentale;

2
 numrul de geluri care trebuie s fie potrivite este redus i imaginile surori de la acelai gel
vor avea modele identice;
ofer o hart consistent de spoturi luminoase pe toate gelurile dintr-un experiment,
facilitnd potrivirea la faa locului a spotului;
Pot gzdui cu uurin suficiente probe independente (biologice) replicate.

Dezavantaje ale electroforezei 2D-DIGE [1], [2]:

Este manual, laborioas;
Nu exist o matri de gel standardizat pentru a reproduce modelele proteice;
Capacitatea de rezoluie este limitat, fapt pentru care vizualizarea se reduce la 3000- 10000
proteine, n funcie de detecie.

4. Bibliografie

[1] http://www.rrml.ro/articole/2007/2007_3_5.pdf , accesat la data de 16.05.2017, ora 22:30;

[2] http://sci-hub.cc/10.1201/9781420076264.ch4 , accesat la data de 16.05.2017, ora 23:16;

[3] https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28425473 , accesat la data de 16.05.2017, ora 00:43.