UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 1

Disciplina Parazitologie
2021-2022
CURS 2 + LUCRARE PRACTIC Ă 2
FLAGELATE
CURS
Șef Disciplină Conf. Dr. Lidia LAZAR
Generalități
 Paraziti unicelulari (protozoare) avand flagelul (mastogont/kinetidgreaca) ca organ de locomotie
 Inmultire binara, longitudinala
 Specifice omului , dar si cu rezervor animal (zoonotic)
 Cosmopolite, dar si cu caracter tropical/subtropical

Morfologia si ultrastructura flagelului

 Ax central cu o medie de 9 microtubuli, denumit axonema
 Corpuscul bazal de insertie a flagelului denumit kinetosom sau blefaroplast
 Manson de citoplasma in jurul axonemei si o teaca externa (membrana externa)
 Organela specifica pentru flagel continand acid nucleic distinct (kADN ) numita kinetoplast
 Uneori, kinetosomul fuzioneaza cu kinetoplastul, unitatea jonctionala fiind denumita kinetonucleu

Principalele flagelate de interes medical

1. Flagelate cavitare: Giardia lamblia (intestinalis/duodenalis) si Trichomonas vaginalis
2. Hemoflagelate /flagelate tisulare: Trypanosoma spp si Leishmania spp

1. FLAGELATE CAVITARE
1.1. Giardia lamblia
Syn. Giardia duodenalis / Giardia intestinalis
Cadru nosologic general
 Flagelat cavitar intestinal
 Inmultire prin diviziune binara
 Sinonime: Giardia intestinalis; Giardia duodenalis/Lamblia intestinalis
 Genetic: Asamblaje (Genotipuri) majore: A-uman, B-zoonotic (caine, castor, alte rozatoare); contine 5 cromozomi, nu are mitocondrie,
metabolism anaerob
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 2
Disciplina Parazitologie
2021-2022

Morfologie: Parazitul are doua forme de viata: chist (stadiu de rezistenta) si trofozoit (stadiu vegetativ), (Fig.1)

Fig. 1 Diagrama stadii parazitare Giardia lamblia: A. Chist; B. Trofozoit

 Chistul (forma de rezistenta): dimensiuni de 8-12 µm, 2-4 nuclei, fascicul sinuos de flageli intrachistic, perete dublu, forma ovoidala, (Fig.
2)

Fig. 2 Chist Giardia lamblia: A. examen nativ; B. colorație Tricrom (https://:cdc.gov)

 Trofozoit (forma vegetativa): 12-15/5-9 µm, constant are 2 nuclei, 8 flageli, 8 kinetosomi, aspect piriform, fata dorsala convexa, fata ventral
concavă, ocupata pe 3/5 de discul adeziv (formatiune contractile bogata in actina, alfa-actinina, miozina, tropomiozina), miscare lenta
“frunza cazatoare”, (Fig. 3).
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 3
Disciplina Parazitologie
2021-2022

Fig. 3 Trofozoit Giardia lamblia: A. contrast faza; B. coloratie Giemsa; C. Fata

ventrala cu disc adeziv-ME (Microscopie electronică) (https://:sciencedirect.org)

Ciclul de viata (Ontogenia parazitara),(Fig.4)

Fig.4. Gardia lamblia- ontogenie-diagrama Lidia Lazar

 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 4
Disciplina Parazitologie
2021-2022
Patogenie
1. Obstructie mecanica a enteocitului prin discul adeziv de pe fata ventrala
2. Enzimatic: depletie dizaharidaze/lipase din marginea în perie
3. Imunologic: limfocit T cu cytokine promitotice, accelerand turnoverul enterocitar si aparitia de enterocite imature functional
4. Intraluminal: deconjugari de saruri biliare, inhibitia enzimelor pancreatice, flora bacteriana excesiva

Boala – GIARDIOZA/LAMBLIAZA
 Forma asimptomatica (la persoanele adulte si la purtatorii sanatosi)
 Giardioza acuta: diaree exploziva, sindrom gazos (meteorism, eructații, flatulență)
 Malabsorbtia secundara: intoleranta la lapte si derivate lactate, steatoree, alergodermii polimorfe (urticarie, eczema, bronsite astmatiforme,
blefaro-conjunctivite, etc), (Fig.5)

Fig. 5 Malabsorbtie in giardioza: Sectiune histopatologica intestin subtire-colorație H&E. (https://:propath.com)

Epidemiologie
 Cosmopolit
 Pattern-uri evolutive: tip endemic (copii sub varsta de 3 ani), tip sporadic (turisti) si tip epidemic din sursa hidrica (cu risc de bioterrorism)
 Doza minima infectanta : 10 (asamblaj A) la 100 (asamblaj B) chisti/doza
 Cale de transmitere digestiva (vegetale, apa , inclusiv de robinet)
 Portaj intracitoplasmatic symbiotic de endocytobionti (virusuri sau bacterii) care modifica sensibilitatea parazitului la medicatia
antiparazitara
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 5
Disciplina Parazitologie
2021-2022
 Profilaxie: igiena alimentara, personala si de defecatie, tratarea purtatorilor, ozonarea apei potabile (chistul este rezistent la
clorinare/superclorinare)

LUCRARE PRACTICA (LP)

Asist.univ. Dr. Ionela NEAGOE

Diagnostic infecție cu G. lamblia (GIARDIOZA)

 Diagnostic diferențial (DD) față de:
 alte afecțiuni intestinale de etiologie infecțioasa (alte infecții parazitare malabsorptive, amoebiază, intoxicație alimentară cu substrat
bacterian sau fungic, gastroenterită virală);
 afecțiuni intestinale non-infecțioase (sindrom intestin iritabil, intoleranță la lactoză, sprue tropical).

 Stadii de diagnostic (SD) detectate în cadrul investigațiilor morfologice (Fig. 6)

 Trofozoit (T) = stadiu patogen (SP) cu afectare mucoasă intestin subțire (IS)  Giardioză;
 Chist (C) = stadiu infecțios (SI) pentru om.

 Diagnosticul paraclinic în Giardioză – de rutină examen

coproparazitologic (preparat extratemporaneu/nativ și frotiu colorat
Giemsa/Tricrom), (Fig.2,3,8,9) În cazul unui rezultat negativ
(nedectarea microscopică de T și /sau C în materiile fecale) -
investigatii suplimentare de confirmare (Fig.7).

 Evaluarea microscopică a malabsorției – prin examen CPZ cu Lugol

si testul de colorație cu Sudan pentru lipide.
Fig.6 Schemă
Capsula duodenală morfologică
 test de confirmare stadii parazitare
 exclude necesarul unui intubaj duodenal; G. lamblia
 implica: inghitirea unei capsule (contine gelatin + capatul
distal a unui fir de nylon); digerarea progresivă a capsulei pana la nivel de duoden cu eliberarea capatului distal al firului; absortia-
aderarea conținutului duodenal (CD) la firul de nylon.
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 6
Disciplina Parazitologie
2021-2022
 procedura (4 h) se incheie cu: extragerea firului de nylon (se trage de capatul proximal al firului fixat la nivel facial) și examinarea
microscopică sub forma de preparat extratemporaneu +/- frotiu (Fig. 3B, 10)

Fig.7. Conduita de diagnostic paraclinic în suspiciunea de Giardioză în raport cu evoluția clinică (adaptare după Neagoe Ionela) .
[Caz 1 – Forma asimtomatică; Caz 2 – Giardioza acuta; Caz 3 – Giardioza cronica-Malabsortii secundare; MF. (materii fecale); C.D (conținut duodenal = lichid duodenal/bila/mucus); Ț.I (țesut intestinal);
ICT –ImmunoChromatographicTest - vezi și Fig.12), DFA – Direct immunoFluorescent Assay -vezi și Fig. 13), ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) – detectie coproantigene specifice de
perete de 102kDa; PCR (Polymerase Chain Reaction); RT-PCR (Real-Time Polymerase Chain Reaction); EDS (endoscopie digestiva superioară – vezi și Fig. 5, 11); G.i (Giardia intestinalis)]
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 7
Disciplina Parazitologie
2021-2022

Fig.8. Examen CPZ, preparat extratmporaneu cu ser fiziologic -G. lamblia. A.chiști – MF
formate (steatoreice) B. trofozoit (mobil) – MF diareice (foto adaptat după http://thunderhouse4-
yuri.blogspot.com)

Fig.9. Examen
CPZ – preparat
extratemporaneu
M.F formate și
soluție Lugol –
chiști imaturi cu
2 nuclei de G.
lamblia
Fig.10. EnteroTest pentru recoltare și
examinare microscopică conținut
duodenal.
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 8
Disciplina Parazitologie
2021-2022

Fig.11. Examen histopatologic colorație H&E – (sectiune jejuno-ileală -

EDS). Aspect vilozități a. Normal b. Aglutinate –postaderare trofozoiți
(săgeata) (https://oncohemakey.com/)

Fig.12. Test imunocromatografic detecție coproantigene G. lamblia Fig.13. Test DFA – chiști G. lamblia evidentiați
[C- banda control; T- banda test] ( folosind anticorpi monoclonali
http://www.custom-monoclonalantibody.com); (https://www.cdc.gov/);
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 9
Disciplina Parazitologie
2021-2022

SYNOPSIS - Diagnostic infecție cu Giardia lamblia

Șef lucrări. Dr. Suzana CILIEVICI

Diagnostic GIARDIOZĂ

I. Dg. de laborator:
1. Dg. Morfologic – Identificare:
a) Trofozoiţi
- în materii fecale
 examen CPZ direct cu Ser fiziologic; coproculturi (diverse medii).
- în conținut duodenal - lichid duodenal, bilă, mucus:
 recoltat prin Capsulă enterotest/Tubaj duodenal/ Prelevare endoscopică
 examen microscopic direct cu Ser fiziologic / frotiu colorat Giemsa
- în biopsie duodenală
 recoltata prin EDS +/- asistență Pill-videocamera
 examen histopatologic
b) Chişti
- în materii fecale
 examen CPZ direct cu Ser fiziologic, Lugol; frotiu colorat Giemsa

 Pentru dg. şi monitorizarea eficienţei tratamentului  examene CPZ

repetate la interval de 7-10 zile
2. Dg. Imunologic :
- detectare coproantigene de Giardia lamblia (imunocromatografie, DFA,
ELISA).
- anticorpi specifici IgA, IgG - fără importanţă clinică

3. Dg Genetic:
 detectare ADN Giardia lamblia – PCR, RT-PCR multiplex
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 10
Disciplina Parazitologie
2021-2022
CURS
Șef Disciplină Conf. dr. Lidia LAZAR

1.2. Trichomonas vaginalis

Cadru general si magnitudiunea bolii
 Flagelat uro-genital
 Are doar forma vegetative (trofozoit), fara chist (forma de rezistenta)
 Inmultire prin diviziune binara
 Specific uman
 Cauza de boli cu transmitere sexuala
 Trend actual de crestere a cazurilor de imbolnavire (50%) la grupa de varsta a adolescentilor si in mediul urban (OMS, 2018)

Parazitul (morfologie)
 Forma globuloasa, foarte mobil, miscare de tip “titirez”, (Fig.14).
 Poseda 5 flageli, 4 anteriori si al 5-lea recurent, formand membrana ondulanta scurta (maximum jumatate din lungimea corpului parazitului),
toti inserati pe un singur blefaroplast (anterior), 1 nucleu si 2 elemente de citoschelet (axostil – median- si costa, lateral, la baza membranei
ondulante).
 Metabolism anaerob, numerosi lizozomi si trei vestigii mitocondriale specifice

Fig. 14. Trichomonas vaginalis: A. examen nativ; B. colorație Giemsa; C. ME (https://:sciencedirect.org)

 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 11
Disciplina Parazitologie
2021-2022
Ciclul de viata (Ontogenia parazitara), (Fig.15)

Fig.15 Trichomonas vaginalis- ontogenie-diagrama Lidia Lazar

Patogenie
1. Aderare de receptorul vaginal/uretral : asigurata de axostil si de un mosaic de 4 adezine parazitare
2. Hemoliza: are receptor pentru eritrocite, elibereaza o enzima proprie (perforin-like), cu hemoliza si oferata crescuta de fier, necesar
metabolismului
3. Factori solubili = sunt un grup de 11-23 proteinaze lizozomale, dintre care dominante sunt:
 CDF (cell-detaching factor)-factor de detasare celulara: glicoproteina cu greutatea moleculară (GM) =200 kDa cu rol direct de
distrugere a lactobacililor generand un ph local =6. CDF este inhibat de beta-estradiol explicand agravarea bolii in faza pre si
postmenstruala
 Cisteinproteinaze (CP): cliveaza IgA local si C3

Boala TRICHOMONIAZA/TRICHOMONOZA
 La femeie: este simptomatica “ab initio” la 50% din cazuri, celelalte devenind simptomatice in max 6 luni
 Forma acuta: perioada de incubatie de 5-28 zile, cu leucoree (secretie vaginala) abundenta, albicioasa, spumoasa, fetida, (Fig.16A)
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 12
Disciplina Parazitologie
2021-2022
 Forma cronica: prurit vulvo-vaginal, dispareunie, colpita maculara cu aspect de “capsuna” (“strawberry cervix”) – oncovigilenta
(monitorizare oncologică), (Fig. 16B)

Fig. 16 Trichomoniaza: A. acuta cu leucoree; B. cronica-colpita

maculara (“strawberry cervix”) - Atlas of Colposcopy
https://:who.org/screening.iarc.fr

 La barbat: asimptomatica la 70-90 % din cazuri “ab initio”, (Fig. 17)

 Forma acuta: incubatie maxima de 10 zile, uretrita purulenta-like, (aspect alb-verzui), spumoasa, fetida
 Forma cronica: “picatura matinala” secretie uretrala purulenta-like minimala, (aspect seros, limpede), de dimineata

Fig. 17 Trichomoniaza-uretrita-Atlas of Tropical Medicine &

Parasitology, Peters &Gilles
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 13
Disciplina Parazitologie
2021-2022
Complicatii
 La femeie:
 Suprainfectii bacteriene: bartholinite, metroanexite, boli inflamatorii pelviene
 Tulburari de fertilitate: avort spontan, sarcini ectopice, infertilitate secundara
 Oncologice: displazii premaligne, cancer de col uterin

 La barbat:
 Prostatite, epididimite
 Tulburari de fertilitate-astenospermie
 Susceptibilitate crescuta pentru coinfectii HIV, HSV2, HPV
 Cancer de prostata
Epidemiologie
 Cosmopolit, frecventa cauza de boala cu transmitere sexuala in tarile dezvoltate
 Strict uman
 Potential oncogen
 Formeaza parteneriate patogenice simbiotice: extracelulare (Streptococcus spp) si intracelulare (Mycoplasma hominis/ Ureaplasma
urealyticum)

Transmitere
 Sexuala (venerica) 95%
 Iatrogena (echipamente medicale)
 Mecanica (material si echipamente sanitare, lenjerie, etc.)
 Perinatala (in momentul nasterii transvaginale)

Profilaxie:
 Igiena sexuala (identic pentru toate bolile cu transmitere sexuala)
 Tratamentul antiparazitar simultan al partenerilor sexuali.
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 14
Disciplina Parazitologie
2021-2022
LUCRARE PRACTICA (LP)
Asist.univ. Dr. Ionela NEAGOE

Diagnostic infecție cu T. vaginalis (TRICHOMONOZA URO-GENITALĂ)

 Diagnostic diferențial (DD) față de:

 alte afecțiuni genito-urinare de etiologie bacteriană, fungică, virală;
 afecțiuni genito-urinare non-infecțioase

 Stadiu de diagnostic (SD) detectat în cadrul investigațiilor morfologice (Fig. 18, 19)
 Trofozoit (T) = SP + SI pentru om

 Diagnostic paraclinic în Trichomonoza uro-genitală – de rutină examen microscopic

al secrețiilor uro-genitale si secundar cultivare pe medii sterile (Fig.19). În cazul unui
rezultat negativ (nedectarea microscopică de T) se cer investigații suplimentare de
confirmare (Fig. 20).
Fig.18 Trofozoiți T. vaginalis - frotiu colorație
 În infectiile avansate la femeie, complementar investigatiilor de diagnostic Giemsa - leucoree (APACOR_Parasitology_Poster.pdf)
morfologic, colposcopia:
 permite evaluarea morfopatologică a colului uterin (semnalare “strawberry cervix”), (Fig.16)
 faciliteaza examenul citopatologic (test Papanicolau)

Fig.19 Test de cutivare în vitro

InPouch TV A.Examen
microscopic direct mediu steril
însămânțat cu leucoree
B.detecție trofozoiți
(https://biomeddiagnostics.com/)
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 15
Disciplina Parazitologie
2021-2022

Fig.20 Conduita de diagnostic paraclinic în suspiciunea de Trichomonoză uro-genitală în raport cu evoluția clinică și sexul pacientului (adaptare după
Neagoe Ionela.)
[S.V. (secreție vaginală/leucoree – se recolteaza din fundul de sac vaginal latero-posterior, pre si post menstrual, dupa 24h de la actul sexual/spalarea intima); S.U (secretie uretrală); S.P. (secreție
prostatică/ ”picatura matinală” – recoltata direct sau după masaj prostatic); U (Urină – sediment urinar); T.v (Trichomonas vaginalis)] ICT (ImmunoChromatographicTest) și alte teste imunologice
(ELISA, imunofluorescența cu anticorpi monoclonali) -detecție antigene specifice T.v CDF200 / CP60 în secrețiile uro-genitale ; PCR (polymerase chain reaction); RT-PCR (Real-Time polymerase
chain reaction) - detecția ADN specific T.v +/- markeri genici asociati riscului de aparitie a cancerului de col uterin/prostata ; Caz A- vaginită; Caz B – colpită; Caz C – uretrită; Caz D- prostatita.
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 16
Disciplina Parazitologie
2021-2022

SYNOPSIS - Diagnostic infecție cu Trichomonas vaginalis

Șef lucrări. Dr. Suzana CILIEVICI

Diagnostic TRICHOMONOZĂ URO-GENITALĂ

I. Dg. de laborator:

1. Dg. Morfologic – Identificare:

 Trofozoiţi
- în secreţiile genitale (vaginală/ uretrală/prostatică) / urină
 examen microscopic direct preparat nativ; frotiu colorat Giemsa
 culturi (diverse medii, tehnica In PouchTV)
2. Dg. Imunologic :
 detectare Antigene de Trichomonas vaginalis în secreţii genitale/urina
imunocromatografie
3. Dg. Genetic
 detectare ADN Trichomonas vaginalis  PCR, RT-PCR multiplex
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 17
Disciplina Parazitologie
2021-2022
CURS
Conf. dr. Lidia LAZAR – Șef disciplină Parazitologie

2. HEMOFLAGELATE

Generalitati
Protozoare flagelate ale sangelui si tisulare
 Inmultire digenica (la doua gazde): obligatoriu una dintre ele este o gazda nevertebrata (insecta hematofaga) cu dublu rol: in ontogenia
parazitului si in transmitere lui (inoculativ –salivar sau contaminativ-dejecte)
 Ultrastructural, organela specifica, numita glicozom, specializata in metabolismul glucidic
 Paraziti tropicali /subtropicali
 Majoritatea cu rezervor animal
 Hemoflagelate de interes medical: familia Trypanosomidae; genul Trypanosoma si Leishmania (Viannia)

Stadii ontogenice (din ciclul de viata), (Fig.21)

 Amastigot (corp LD- Leishman Donovan; Leishmania)-flagel intracitoplasmatic, masa nucleară unică (nucleu și kinetonucleu fuzionate)
 Promastigot (leptomonas)-flagel extracitoplasmatic, nucleu median, kinetonucleu anterior
 Epimastigot (crithidia)- absent la om (valoare biologica)
 Trypomastigot-flagel extracelular si membrane ondulanta lunga, pe toata lungimea parazitului, nucleu median, kinetonucleu posterior.

Fig. 21 Stadii biologice de interes medical la hemoflagelate-diagrame

 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 18
Disciplina Parazitologie
2021-2022
2.1.1 Trypanosoma brucei (Africana/Salivaria)
Boala somnului (Tripanosomiaza Africana)
Cadru nosologic general si magnitudinea bolii
 Hemoflagelat african cu 2 specii patogene pentru om: Trypanosoma brucei gambiense- 90% dintre infectii (Africa de Vest si Centrala) si
Trypanosoma brucei rhodesiense (Africa de Est si Sud); Trypanosoma brucei brucei-patogena doar la animale, (Fig. 22A)
 Vector: Glossina spp (musca “tze-tze”), (Fig. 22B)
 Transmitere vectorial-inoculativa (salivar)

A B

Fig. 22 A. Areal geografic

Trypanosoma brucei
B. Glossina spp (musca
tze-tze)
(Atlas of Tropical Medicine
& Parasitology- Peters and
Gilles)

 Boala somnului (trypanosomiaza africana) apartine categoriei OMS de boli neglijate (NTDs -neglected tropical diseases – engl)
 65 milioane oameni cu risc de imbolnavire
 Sub 10000 cazuri de boala raportate OMS, 2018
 Prevalenţă în creştere
 300 clustere (focus) in 37 ţări endemice
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 19
Disciplina Parazitologie
2021-2022
 Uganda (regiune de co-existenta a speciilor de Trypanosoma brucei)

Ciclul de viata (ontogenia parazitara), (Fig. 23)

 Doza minima infectantă = 300 trypomastigoti
 Trypomastigotii de T.brucei sunt polimorfi, (Fig. 24): forma longilina/svelta (slender-engl) masurand 20-40 µm, cu flagel lung este esentiala
in patogenie, fiind singura forma multiplicativa la om (prin diviziune binara); a doua forma de trypomastigot este numita forma scunda/
bondoaca (stumpy-engl), masoara 15-25 µm lungime, cu flagel scurt, cu rol in transmitere la vector, singura infectioasa pentru acesta.

Fig.23. Ciclu de viață T. brucei diagrama Lidia Lazar Fig. 24 Trypomastigoti polimorfi-T.brucei spp.

Patogenie
 Variatia glicoproteinelor de suprafata ale trypomastigotilor: conduce la activare monoclonala limfocitara B cu hiperproductie de IgM si,
prin epuizarea anticorpogenezei, imunosupresie.
 Factori solubili parazitari (compusi toxici parazitari): a) piruvatiIL10vasculita, aparitia unui infiltrat inflamator concentric
perivascular “in manson” (cuffing-engl), (Fig.25) si reactii de hipersensibilitate; b) productie de tryptofol, compus parazitar inhibitor selectiv
de serotonina; c) reactii de autoimunitate (anticorpi antimielina)
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 20
Disciplina Parazitologie
2021-2022

Fig. 25 Trypanosomiaza africana: vasculita “in manson” –cuffing-col.

H&E (Atlas of Tropical Medicine & Parasitology- Peters and Gilles)

Boala: Trypanosmoniaza Africana sau Boala somnului

 Faza 0 (cutanata): trypanom= papula indurata, dureroasa, ulcerativa (șancru trypanosomic) = este prezent in forma infectiva cu T. brucei
rhodesiense, absent la T.brucei gambiense, (Fig.26A).

A B

Fig. 26 A.Trypanom (Șancru de inoculare); B. Semnul Winterbottom

(Atlas of Tropical Medicine & Parasitology- Peters and Gilles)

 Faza 1 (hemo-limfatica): febra neregulata, cefalee persistenta, mialgii, artralgii, prurit cutanat, rash circinat, iritabilitate; Semnul
Winterbottom este patognomonic la T.b. gambiensae = limfadenita cervicala posterioara bilaterala, (Fig.26B)
 Faza 2 (neurologica/meningo-encefalitica): tulburari de somn (inversarea ritmului circadian), hiperestezii (in zona nervului ulnar = semnul
Kerandel sau semnul cheii), paralizii si parkinsonism (hipertonie/tremuraturi) pe grupe musculare izolate, tulburari endocrine si psihice
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 21
Disciplina Parazitologie
2021-2022
(apatie, demisie sociala/familiala, psihoze cu agresivitate, imprevizibilitate), emaciere, coma si deces (3-8 ani - medie 3 ani- la T.b.
gambiense ; 4-8 luni la T.b.rhodesiense).

Epidemiologie
 Areal geografic limitat la “centura Africana”: 14°latitudine Nordica-29°latitudine sudica, 1800 m altitudine
 T. b gambiense este antropo-perizoonotica (om, porc, caine, bovine), cu habitat forestier ecuatorial;
 T. b. rhodesiense este zoonotica, de savana;
 T.brucei brucei este specie parazitara exclusiv patogena la animale (Nagana);
 Apartine grupului OMS de boli tropicale neglijate (NTDs – Neglected Tropical Diseases- engl)
 Transmitere: vectorial – inoculativ, musca ”tze-tze” ≡ Glossina spp, caile congenitale si transfuzionale sunt controversate.

Vectorul hematofag Glossina spp: este o musca vivipara, cuprinzand 31 specii de Glossina (musca “tzte-tze”), (Fig. 27B), ambele sexe
vectoriale transmit parazitul inoculativ, la fiecare pranz hematofag. Glossina spp prezinta atractanti olfactivi (substante aromate-cetone,
fenoli urinari-octenoli ) si vizuali (culori intense, miscare).

Fig. 27 A.Capcana cu atractanți; B. Vectorul -Glossina spp. C. Tripomastigot

Preventie
 Masuri colective, antivector
Glossina spp. pretinde strategii de combatere si preventie de tip K- inventiv (knack-engl): capcane cu atractanti (bionice, supravegheate prin
satelit GPI, odorizante, insecticide), Fig. 27A.
 Protectie individuala: imbracaminte in culori neutre, repelenti
 Chimioprofilaxia este toxica, nu exista vaccin/imunizare antiparazitara.
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 22
Disciplina Parazitologie
2021-2022
LUCRARE PRACTICĂ (LP)
Asist.univ. dr. Ionela NEAGOE

Diagnostic infecție cu T. brucei (TRIPANOSOMIOZA AFRICANĂ ≡ BOALA SOMNULUI)

 Diagnostic diferențial (DD)
1. În FAZA 1 (hemo-limfatică) = DD față de alte afecțiuni asociate cu stări febrile recurente, de etiologie infecțioasa (alte infecții
parazitare – malarie, boala kala-azar; infecții bacteriene -bruceloza, borelioza, tuberculoza, febra tifoidă; infectii virale- hepatite
viirale, infectie HIV) sau non-infectioasa (limfoame);
2. In FAZA 2 (meningo-encefalita cronică)= DD față de afecțiuni asociate cu fenomene neurologice de etiologie infecțioasă (meningita
fungică cu Cryptococcus, tuberculoză cerebrală, meningoencefalită din lues, encefalite virale - HIV) sau non-infecțioasă (tumori
cerebrale, sindroame de degenerescență cerebrală)

Trypomastigot POLIMORF
în organismul uman

Forma „stumpy” – Forma „slender” –

„bondoacă” din sânge „sveltă” din sânge și
LCR

Fig.28. Schemă morfologică stadii parazitare Trypanosoma brucei Fig.29. Schemă morfologică forme tripomastigot
(https://mykindofscience.com) Trypanosoma brucei (foto adaptat dupa Lee SH et al. 2007)

 Stadii de diagnostic (SD) detectate în cadrul investigațiilor morfologice (Fig. 28, 29)
1. Epimastigot (E) - în vector - musca Tze-Tze (Glossina sp.)
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 23
Disciplina Parazitologie
2021-2022
2. Tripomastigot (T) din organismul uman = stadiu patogen (SP) Boala Somnului ; SI cu transmitere interumana; T. din vector este SI

Kinetoplast

Fig.30. Test CATT (Card Agglutination Test

for Trypanosomiasis-engl )– test de aglutinare Fig.31 Proceduri de realizare Frotiu și Picatură groasă din sânge
capilar – Diferente si asemanari; (https://microbiologyinfo.com//)
directă pe card- detecție Anticorpi IgM anti
Ambele preparate permanente - de rutină în diagnosticul oricarei
T. brucei gambiense (www.itg.be )
parazitoze sangvine Fig.32. Examen MO sânge – FROTIU și
Per spot – 1 picătura sânge capilar sau ser
Picatura groasa – tehnica de concentrarea a sangelui direct pe lama PICĂTURĂ GROASĂ colorație Giemsa
sangvin + 1 picatura Antigen = citire
are utilitate în parazitemiile minore -tripomastigoți T. brucei (www.cdc.gov/);
rezultat după 5 minute
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 24
Disciplina Parazitologie
2021-2022
 Diagnosticul paraclinic în suspiciunea de Trypanosomioza Africană (T.A) se efectuează pe trei direcții: screening, confirmare diagnostic și
stadializare, în contextul epidemiologic (zona geografică endemică) și clinic (asamblul de simptome și semne identificate la examenul fizic),
(Fig. 33).

Fig.33. Conduita de diagnostic paraclinic în suspiciunea de Tripanosomiaza vest-centrala (V-C) / est-sudică (E-S) în raport cu evoluția clinică (adaptare după Neagoe
Ionela) [ MO (microscopie optică); CATT (Card Agglutination Test for Trypanosomiasis – vezi și Fig.30); HLG (hemoleucograma); VSH (viteza sedimentare hematii); CRP (proteina C reactivă); mediu NNN
(Novy-McNeal-Nicolle – vezi și Fig.34); PCR (polymerase chain reaction); RT-PCR (Real-Time polymerase chain reaction)];
FAZA 0 – cutanata; FAZA 1- hemo-limfatica; FAZA 2 – meningo-encefalita cronica
Prelevate recoltate: Sânge C (Capilar); Aspirat.L-G (limfo-ganglionar ) Aspirat șancru de inoculare – vezi și Fig.26A ); Sânge C./V. ( capilar sau venos); LCR (lichid cefalo-rahidian)
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 25
Disciplina Parazitologie
2021-2022
 Examenul microscopic al sangelui în FAZA 1 și 2 = obligatoriu 2 preparate permanente (FROTIU + PICATURA GROASA colorate Giemsa
din sânge proaspat recoltat – Fig 31, 32) +/- preparat extratemporaneu din 1 picatura sange pentru depistare tripomastigoți mobili.
Parazitemia fluctuanta cere tehnici suplimentare de concentrare a sangelui venos recoltat prin centrifugare - tehnica microhematocritului
(MBCM -microhematocrit buffy coat microscopy-engl/QBC-quantitative buffycoat-engl).
 Cultura pe mediu NNN (Novy-MacNeal-Nicolle) constituie o alternativă de diagnostic când parazitemia este redusă (Fig.34)
 Stadializare FAZA 2 = investigații imagistice (CT/IRM cerebral -demielinizari excesive SNC) + evaluare electroencefalografica (EEG
-traseu nespecific, uniform, ale undelor delta) complementare investigațiilor de laborator specific (Fig. 35, 36). Examene de circumstanță
suplimentare - prezenta anticorpilor antineurofilament si antigalactocerebrozid (test dot-ELISA).

Fig.34. Cultivare sânge în vitro + examinare

MO epimastigoți dezvoltați pe mediul special
axenic la 21-26oC pe o perioada maximă de 4
saptamâni (https://microbeonline.com);

Fig.36 Celula Mott-Marshalko= LyB degenerat hiperproducător de IgM în SNC

tipic în Tripanosomiaza africana FAZA 2 (A.frotiu LCR, colorație Giemsa);
Fenomen Cuffing =Modificări histopatologice tipice în SNC pe fond
Tripanosomiaza africana FAZA 2 (B. secțiune țesut cerebral recoltat necropsic,
colorație H&E)

Fig. 35 Frotiu LCR colorație Giemsa –

tripomastigot T. brucei
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 26
Disciplina Parazitologie
2021-2022

SYNOPSIS - Diagnostic infecție cu Trypanosoma brucei

Șef lucrări. Dr. Suzana CILIEVICI

Diagnostic TRIPANOSOMIOZĂ AFRICANĂ/BOALA SOMNULUI

Dg. de laborator specific:
1. Dg. Morfologic- Identificare:
 Forme tripomastigote
- în sânge, LCR, lichid de puncţie ganglionară
=facil pt. T. brucei rhodesiense - puseele de parazitemie sunt importante şi frecvente;
=dificil pt T. brucei gambiense - puseele parazitemice sunt mai rare şi neregulate, prin:
 examen microscopic direct, preparat nativ - recoltare în puseu febril
 ex. microscopic în contrast de fază - mobilitate +++
 frotiu colorat Giemsa și picătura groasă (sânge)
 tehnici de concentrare a paraziților în sânge: MBCM/ QBC
 Epimastigoți
 culturi din sânge pe mediul NNN
2. Dg. Imunologic:
 identifică anticorpii specifici IgM anti- Trypanosoma brucei gambiense – util pentru screening în teren, în faza
0+1 - test hemaglutinare directa- Tryp CATT
 Dozare antigene parazitare – util pt. monitorizare terapeutică
3. Dg. Genetic:
 identifică ADN Trypanosoma brucei gambiense/ Trypanosoma brucei rhodesiense - PCR, RT-PCR

Dg. de circumstanţă:
 Hematologic - anemie, hiperleucocitoză, plasmocitoză
 IgM  în ser şi LCR – monitorizare după tratament, dg. recidive
 LCR: proteine , celularitate  (plasmocite activate/celule Mott) - T.b gambiense +/-, T.b. rhodesiense ++.
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 27
Disciplina Parazitologie
2021-2022

CURS
Conf. dr. Lidia LAZAR – Șef disciplină Parazitologie

Trypanosma cruzi (Americana/Stercoralia)

Boala Chagas (Tripanosomiaza Americana)

Cadru nosologic general si magnitudinea bolii:

 Hemoflagelat American (raspandire pe continentele americane), 21 tari endemice, (Fig. 37A)
 Transmitere vectorial-contaminativa (excrementele/fecale vectorului)
 Vector: Reduviid- “gandacul pupacios”-kissing bug, (Fig.37B)

Fig.37 Trypanosoma cruzi:

A. areal geografic; B.
Reduviid spp (vector)
(https://:www. cdc.gov)

 Parazitul are la om 2 forme morfologice: trypomastigot (in sange)- monomorf, masoara 15-20 µm lungime/1-2,5µ latime, cu flagel anterior
foarte lung, membrana ondulanta pe toata lungimea corpului si kinetonucleu proeminent, posterior; si, amastigot (in macrofage, nevroglia
sistemului nervos parasimpatic si miocit neted, striat, inclusiv cardiac –pseudochisturi sau conglomerate de amastigoti (tisular)
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 28
Disciplina Parazitologie
2021-2022

 Boala Chagas apartine categoriei OMS de boli neglijatev (NTDs – Neglected Tropical Diseases-engl)
 Prevalenta in scadere
 70 milioane oameni la risc, sub 10% diagnosticati, 8000 nou-nascuti infectati anual, 7 milioane cu sechele somato-functionale
 Extensie extra-areal geographic nativ : urmare a migratiei sud-americane, cu peste 100000 cazuri in Europa-OMS, 2018

Ciclul de viata (ontogenia parazitara), (Fig.38)

Fig. 38 Ciclu de viață T. cruzii diagrama Lidia Lazar

Patogenie:
1) Mucine parazitare (pentru ancorare de celula-gazdei) activeaza macrofagele, cu hiperproductie de cytokine proinflamatorii;
2) factori enzimatici parazitari:
a) transialidaza confera rezistenta parazitului la citotoxicitatea mediata de anticorpi (ADCC);
b) racemase-prolina stimuleaza policlonal limfocitele B;
c) reactii de autoimunitate multiorganica.

Boala Chagas (Trypanosomiaza Americana)

 Faza acuta: febra, limfadenita generalizata, miocardita, encefalita. Semnul Romana (mai frecvent la copii si adolescenti): edem palpebral,
conjunctivita si adenopatie preauriculara, inconstant dacriocistita unilaterale, (Fig.39).
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 29
Disciplina Parazitologie
2021-2022

Fig. 39 Boala Chagas: semnul Romana (Atlas of

Tropical Medicine & Parasitology- Peters and Gilles, 2013)
 Faza cronica (20-25 ani):
a) forma cronic nedeterminata (60-70%): infectati- a/paucisimptomatici, dar care pot transmite parazitul. Apar modificari somatic-
functionale fruste (hipertrofia bilaterala de glande parotide, depletie de celule Leydig la barbat);
b) forma cronic simptomatica (10-30%)- megalia viscerelor cavitare (X10) : digestive (megaesofag, megacolon), (Fig. 40A), urinare
(megavezica, megauretere) si cardiomegalie (30-40%, prin distrugerea de catre amastigoti a fascicului Hiss si reteaua Purkinje), (Fig. 40B)-
cardiomiopatie chagassiana cu insuficienta cardiaca miogena, tulburari de ritm si de conducere atrio-ventriculare, anevrisme apicale
(Fig.40C), trombembolii, moarte subita.

Fig. 40 Boala Chagas: A. Megacolon; B. Cardiomegalie; C. Anevrism apical ventricul stg-

pieseoperatorii/necroptice (Atlas of Tropical Medicine & Parasitology- Peters and Gilles, 2013)
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 30
Disciplina Parazitologie
2021-2022
Epidemiologie
 Areal geografic limitat la continentele americane
 7 milioane oameni infectati, 70 milioane cu risc, doar 10% diagnosticati
 300.000 cazuri anuale in SUA, 1,24% dintre locuitorii hispanici in Los Angeles sunt pozitivi, 108.000 cazuri raportate in Europa (OMS,
2018)
 Apartine grupului OMS de boli tropicale neglijate (NTDs-neglected tropical diseases-engl.)
 Rezervor animal- zoonoza cu 3 focare: a) focar silvatic-mamifere carnivore salbatice, lilieci, pasari, rozatoare; b) peridomestic (opossum,
armadillos, rozatoare); c) domestic (caine, pisica, porc, pasari domestice)
 Transmitere
 Vectorial-contaminativ
 Congenital (transplacentar)
 Transfuzii de sange si transplant de organe
 Profesional (accident de laborator)
 Exceptional, oral (fructe acai, suc trestie zahar) – limitat (Brazilia)

 Vectorul: insecta hematofaga din familia Reduviidae, cu 3 genuri (Rodnius, Panstrongylus, Triatoma) si peste 100 specii. Are activitate
nocturna, inteapa omul la nivelul fetei (sinonime, kissing bugs, gandaci asasini, barbieri, etc), (Fig.41).

Fig. 41 Trypanosoma cruzi: Reduviidae (vector)- https://:www. cdc.gov

Profilaxie
2. Masuri colective antivector: strategie inventiva de tip K (knack-engl)cu insecticide, prin rotatie, aplicate bianual 2/12, locuinte igienice
(constructii cimentate), screening-ul bancilor de sange si al donatorilor (sange, organe).
3. Profilaxie individuala: protectie individuala (paturi cu plase), repelenti, vaccin (in cercetare-vector transgenic CruziGuard).
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 31
Disciplina Parazitologie
2021-2022
LUCRARE PRACTICĂ (LP)
Asist.univ. dr. Ionela NEAGOE

Diagnostic infecție cu T. cruzii (TRIPANOSOMIOZA AMERICANĂ ≡ BOALA CHAGAS)

 Diagnostic diferențial (DD)
 În FAZA I (faza acută) = DD față de alte afecțiuni asociate cu modificări cutanate/periorbitale (ințepaturi insecte, leishmanioza în
faza incipienta, sporotricoza, celulită periorbitală, furunculoză, conjunctivită virală, sifilis congenital), stări febrile de etiologie
infecțioasa (alte infecții parazitare – malarie, boala kala-azar, filarioza, febra Katayama în schistosomioza acută infecții bacteriene
-bruceloza, bartoneloza, tularemie, febra tifoidă,; infectii virale- febra Dengue, febra galbenă, mononucleoza infecțioasă), tulburări
meningeale (toxoplasmoză cerebrală, alte meningite nonchagasice)
 In FAZA II (faza cronică)= DD față de afecțiuni asociate cu megalia organelor cavitare (alte cardiomiopatii nonchagasice –
alcoolica, idiopatică, fibroză endomiocardică; megacolon nonchagasis-nontoxic, megacolon toxic, boala Hirschsprung; acalazia
esofagiana, cancer esofagian).

 Stadii de diagnostic (SD) detectate în cadrul investigațiilor morfologice

(Fig. 42)
1. Epimastigot (E) în vector – gândacul reduvid
2.Tripomastigot (T) extracelular -în organismul uman -SI cu
transmitere interumana. T. din vector este SI pentru om.
3.Amastigot (A) intracelular - în organismul uman = SP 
Boala Chagas

 Diagnosticul paraclinic în suspiciunea de Trypanosomioza americana-

în raport cu datele clinico-epidemiologice obtinute anamnestic și cele
obtinute prin examen clinic obiectiv (Fig.43).
 De rutina- examen microscopic sânge (FROTIU +PICATURA
GROASA colorate Giemsa) = tripomastigoți monomorfi extracelulari
+/- amastigoți intramonocitari., (Fig.44).
 Parazitemia minoră frecventă în infecția cu T.cruzii necesită:

Fig.42. Schemă morfologică stadii parazitare Trypanosoma cruzii

 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 32
Disciplina Parazitologie
2021-2022
 tehnici de concentrare a sangelui venos recoltat prin centrifugare - tehnica microhematocritului (MBCM -microhematocrit buffy coat
microscopy-engl/QBC-quantitative buffycoat-engl).
 cultura pe mediu NNN (Novy-MacNeal-Nicolle), (Fig.34, 43)
 metodele de cultivare parazitară în vivo - xenodiagnostic - exclusiv în zonele endemice (Fig.46.)
 teste genetice = markerul genic frecvent țintit – ADN-ul kinetoplastic; utilitate suplimentara în determinarea genotipica (Fig.43)
 Toti pacientii veniți din America latină care prezintă semne și simptome digestive sau cardiace trebuie investigați obligatoriu serologic și
evaluati sistematic funcțional și imagistic (Fig. 43, 47, 48, 49).

Fig.43 Conduita de diagnostic paraclinic în suspiciunea de Trypanosomioza americană în raport cu evoluția clinică (adaptare după Neagoe Ionela)
[HLG (hemoleucograma); VSH (viteza sedimentare hematii); CRP (proteina C reactivă); Ly (limfocite); MO (microscopie optică); mediu NNN (Novy-McNeal-Nicolle – vezi si Fig.34);
IIF (indirect immunofluorescence); ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay); WB (Western Blot); PCR (polymerase chain reaction); RT-PCR (Real-Time polymerase chain reaction);
ADN ( acidul dezoxiribonucleic); Rx (radiografie)]; FAZA I - faza acuta; FAZA II - faza cronica.
Prelevate recoltate: Sânge capilar sau venos; LCR (lichid cefalo-rahidian – vezi și Fig.45 în caz de M-En (meningorncefalită acută); Ser sangvin;
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 33
Disciplina Parazitologie
2021-2022

Fig.44. Examen MO frotiu și picătură groasă din sânge capilar – tripomastigoți

extracelulari de T. cruzii (https://www.cdc.gov/)

Fig.46. Xenodiagnostic-tehnica
de concentrare a sângelui „în
Fig.45. Examen MO vivo”- tehnica conventionala în
frotiu LCR -coloratie care vectorul este aplicat direct
Giemsa – pe pielea bolnavului.
tripomastigot T.cruzii Monitorizare (după ~90zile)
(https://www.cdc.gov/) dejecte insecta pentru detectie
microscopică trimopastigoți
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 34
Disciplina Parazitologie
2021-2022

Fig.47. Rx cardiac
Cardiomegalie
(consecință a distrucției miocitelor și sistemului
excitoconductor nodal de către amastigoți de T.
cruzii); (WHO/TDR/Crump)

Fig.48. Rx tranzit baritat

Megacolon cu fecaloame
(consecință a distrucției celulelor musculare și a
plexului mienteric din peretele colonului de către
amastigoți de T. cruzii); (WHO/TDR/)
Fig. 49 Examen histopatologic țesut cardiac
recoltat necropsic -colorație H&E-amastigoți
T.cruzii (https://www.cdc.gov/)
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 35
Disciplina Parazitologie
2021-2022

SYNOPSIS - Diagnostic infecție cu Trypanosoma cruzii

Șef lucrări. Dr. Suzana CILIEVICI

Diagnostic TRIPANOSOMIOZA AMERICANĂ/BOALA CHAGAS

Dg. de laborator specific:

1. Dg. Morfologic - Identificare:
- în sânge
 Tripomastigoți +/- amastigoți
 Ex. microscopic preparat nativ- mobilitate tripomastigoți
 Frotiu + picătura groasă (ambele colorate Giemsa) - tripomastigoti extracelulari +
amastigoti intramonocitari
 Tehnici de concentrare a paraziților - MBCM/ QBC
 Epimastigoți
 Culturi din sânge pe mediul NNN
- prin biopsie musculară
 Amastigoți
 Examen histopatologic: pseudochiști cu amastigoti in fibra musculară
- prin Xenodiagnostic
 Metatripomastigoți
 examen microscopic fecale insectă la 30, 60, 90 zile după prânzul infectant de la pacient
2. Dg. Imunologic:
 identifică anticorpii IgG anti-Trypanosoma cruzi, prin IFA, ELISA, WB
3. Dg. Genetic:
 identifică ADN Trypanosoma cruzi - PCR, RT-PCR, LAMP

Dg. imagistic
 Radiografie toracică- cardiomegalie
 Examen radiologic tranzit baritat – megaesofag/megacolon
 UMF “ Carol Davila, Facultatea de Medicina, An III 36
Disciplina Parazitologie
2021-2022

Bibliografie suplimentară suport

Lazar L. Synopsis de Parazitologie Medicală,. ISBN: 978-973-708-486-6, Editura Universitară “Carol Davila”, București, 2010.
Lazăr L. Compedium de Parazitologie Medicală, ISBN: 978-973-708-132-2, Editura Universitară “Carol Davila”,Bucuresti, 2004.
Steriu D. Infecții parazitare, ISBN: 973-7928-22-9; Editura ILEX, București, 2003.
Crețu C.M. & Cilievici S.E. Parazitoze autohtone și de import ghid de diagnostic și tratament. ISBN: 973-86042-8-1; Editura Cartea universitară,
București, 2004.
Crețu C.M. Parazitologie medicală. ISBN: 973-708-095-5; Editura Universitară “Carol Davila”,Bucuresti, 2004.