jrazitologie medicala LP1 Asist univ.

Neagoe Ionela

Diagnosticul de laborator in amibiaza intestinala cu

Entamoeba histolytica
A. Diagnostic imagistic - nu este de certitudine, oferă informați orientative, limitate.
Examenul baritat permite vizualizarea zonelor de stenozare ale calibrului intestinal, eventualele perforați intestinale
tipice subiecților cu colita amoebiana fulminanata / megacolon toxic sau prezenta unui amoebom

B. Diagnostic parazitologic-de certitudine

î. materii fecal
-

Examen coproparazitologic = examen al materiilor fecale:

QJ

a.l Examen macroscopic al materiilor fecale -in dizenteria amibiana: mucus+singe+puroi + diaree redusa cantitativ

a.2 Examen microscopic al materiilor fecale - La MO (Microscopul Optic) in scaunele diareice se va depista
trofozoiti iar in scaunele formate - chisti; Presupune realizarea a 2 tipuri de
preparate:

a.2.1 Preparat proaspăt lama + lamela (L + I) din: materii fecale + ser fiziologic (SF) sau soluție Lugol (conține iod
care omoara trofozoitii)

Metoda - preparat proaspăt L+l din fecale: l.Pe o lama de microscop se pune o picătură de SF călduț (la 37 oC) sau soluție Lugol + o cantitate
mica de materii fecale. 2.Acest amestec se acopera cu o lamela. 3. Se examinează imediat (la MO cu obiectivele mici) deoarece trofozoitii
(eventual existenti) au capacitate redusa de supraviețuire in mediul extern si preparatul proaspăt se poate usca intr-un timp foarte scurt.

a.2.2 Frotiu din materii fecale colorat cu: tricrom /Giemsa.

Metoda - frotiu din fecale: l.Pe o lama de microscop se pune o picătură din scaunul dizenterie. 2.Se etaleaza picătură prin "intidere" cu
marginea unei alte lame de microscop. 3.Se lașa se usuce. 4.Frotiul este fixat chimic (cu alcool metilic) 4.Frotiul se colorează cu unul dintre
coloranti enumerati mai sus. 5.Se examinează la MO cu obiectivul delOQx. Avantajul major (fata de preparatul proaspăt L+l) este ca prin
fixare si colorare, se observa detalile de ultrastructura ale parazitul si frotiul poate fi pastrat pe perioade îndelungate de timp fara riscul unei
deteriorări.

b) Coprocultura = Cultivarea în vitro a materiilor fecale pe medii de cultura speciale

(mediul Loffler) - completează examenul coproparazitologic in scop de confirmare.

Metoda - coprocultura pe mediu Loffler: Mediul Loffler (conține ser sangvin de bou coagulat) este un mediu solid repartizat in tuburi in
plan înclinat. 1.Panta mediului este insamantata cu o suspensie omogena din materii fecale si SF călduț. 2.Se adauga amidon de orez cu rol
nutritiv. 3.Se adauga un antibiotic (tetraciclină). 4.Se completează 2/3 din inaltimea pantei mediului cu SF călduț (partea superioarea a
pantei mediului ramane neacoperita cu SF). 5.Se incubeaza la 37o C. 6.Din 24-24h timp de 3 zile se fac examinări microscopice (preparate
proaspete L+l din sedimentul obtinut după evacuarea fazei superioare lichide). La MO - vor depista numai trofozoiti.

I.. Aspirat tisular recoltat bioptic de la. nivelul intestinului in cursul unei sigmoidoscopii
Sigmoidoscopia permite vizualizarea eventualelor leziuni de la nivelul mucoasei si submucoasei colonului si
faciliteza concomitent recoltarea prin razuire a țesutului din peretele abcesului sau aspirarea de exudat sau mucus.

Examinarea microscopica a aspiratului tisular - (pe preparate proaspate L+l si frotiuri colorate cu tricrom) la MO se
identifica numai trofozoiti cu hematii fagocitate in citoplasmă

1
 Zologie medicala LP1 Asist univ. Neagoe Ionela

C. Diagnostic imunologic - de confirmare - In suspiciunea de amibiaza intestinala - prin test rapid

imunocromatoqrafic sau test ELISA se depistează !!!!! antigenele (Ag) din materiile fecale =coproantigene

Metoda - test rapid imunocromatografic cu stripuri: In tuburi speciale se face o suspensie din fecale + tampon de dilutie. In urma introducerii
stripul in suspensia de fecale, eventualele antigene existente vor migra prin difuziune (de-a lungul stripului) pana in zona impregnata cu AMC
specifici cuplați cu particule de latex colorat. Formarea complexelor Ag-Ac in aceasta*este vizudfcata prin apariția unei benzii de culoare.
Avantaj- da rezultate rapide in 5-lOmin, fiind folosit si in screening.

D. Diagnostic genetic - de confirmare - prin test PCR (Polymerase chain reaction) se identifica ADN

parazitar extras direct din materiile fecale

Diagnosticul de laborator in amibiaza extraintestinala cu

Entamoeba histolytica
Diagnosticul imagistic - Teste ca Rx, US, scintigrafia hepatica cu 99mTc, CT, RMN hepatic/cerebral permit

vizualizarea abceselor amoebiene secundare sub forma unor zone lacunare sau hipodense.

OBServatie : Testele imagistice care ridica suspiciunea pentru o amibiaza extraintestinala trebuie sa fie completate
de un examen coproparazitologic.

B. Diagnostic de circumstanța - poate sugera un sindrom inflamator dar fara informații specifice.
Hemoleucograma - hiperleucocitoza cu neutrofilie si uneori o anemie hipocroma. Biochimia sângelui - creșteri mici ale
fosfatazei alkaline si transaminazelor asociate cu un VSH ridicat.

C. Diagnosticul imunologic - de certitudine - prin test ELISA se depistează !!!!!anticorpii anti E.

histolytica din ser sangvin sau LCR.

D. Diagnostic parazitologic - se practica doar in următoarele situații:

Cazul unui abces amoebian hepatic de dimensiuni mari cu risc de rupere in cavitatea peritoneala - se
recoltează prin punctie hepatica cu ghidaj imagistic - Aspiratul tisular din perete abcesului (după evacuarea
puroiului amoebian)

Cazul ruperii unui abces amoebian pulmonar - sputa expectorata / lichid de vomica (bronhoree ciocolatie)

Cazul abceselor amoebiane cutanate -Aspirat tisular de sub crusta abcesului (obtinut prin injectarea -
reaspirarea sub leziune a unei soluții de SF

Observație: In toate cazurile de mai sus - (pe frotiuri colorate cu tricrom si preparate proaspete L+l) la MO se
depistează numai trofozoiti

E. Diagnostic genetic - de confirmare - prin test PCR se depistează ADM parazitar extras din țesuturile

recoltate bioptic <

 Xologie medicala LP1 Asist univ. Neagoe Ionela
‘ '"'z
£ /
Diagnostic de laborator in colita cu Entamoeba coli
Diagnostic parazitologic

Examen coproparazitologic - OBServatie: depistarea la MO a mai mult de 5 chisti Entamoeba coli/ camp microscopic
Db 10X) are semnificație patologica pentru o colita

Diagnosticul de laborator in MAPA (infecția cu Naeglerio

fowlery)
A. Diagnostic de circumstanța - Hemoleucograma - hiperleucocitoza cu neutrofilie ; Examen macroscopic LCR -
țylbure (similar meningitelor bacteriene); Examen microscopic LCR - numeroase leucocite in special PMN, hematii, dar fara bacterii.
Biochimia LCR-ul - hipoglicorahic si proteinorahic.

P. Diagnostic Imagistic - CT/RMN cu contrast- indica zone de inflamare medie a lobilor frontali/occipitali

C. Diagnostic parazitologic - de certitudine

1. LCR - recoltat prin punctie lombara (L3-L4 cu hiperflexia pacientului)
Examen microscopic al LCR-ului - pe preparat proaspăt L+l direct din LCR - trofozoiti mobili; pe frotiuri fixate si
colorate cu Giemsa /Tricrom - trofozoiti colorați, recunoscuti după caracteristicile nucleului cu aspect de « ținta » ;

Metoda - preparat proaspăt L+l din LCR: l.Pe o lama de microscop se pune o picătură de LCR. 2.Se acopera cu o lamela. 3.Se examinează
imediat (la MO cu obiectivele mici) deoarece trofozoitii (eventual existenti) au capacitate redusa de supraviețuire in mediul extern si
preparatul proaspăt se poate usca intr-un timp foarte scurt.

Metoda - frotiu din LCR: l.Pe o lama de microscop se pune o picătură LCR. 2.Se etaleaza picătură prin "intidere" cu marginea unei alte lame
de microscop. 3.Se lașa se usuce. 4.Frotiul se fixeaza chimic (cu alcool metilic). 4.Frotiul se colorează cu unul dintre coloranti enumerati mai
sus. 5.Se examinează la MO cu obiectivul delOOx. Avantajul major (fata de preparatul proaspăt L+l) este ca prin fixare si colorare, se observa
detalile de ultrastructura ale parazitul si frotiul poate fi pastrat pe perioade indelungate de timp fara riscul unei deteriorări.

2. Țesut cerebral recoltat necroptic

Examen microscopic al țesutului cerebral - amprenta tisulara colorata cu Giemsa sau cu Tricrom - la MO cu ob de
100X se pot depista trofozoiti
Metoda - amprenta tisulara: l.Pe o lama de microscop se presează ușor cu o penseta tesutul recoltat necroptic 2.Se indeparteaza tesutul de
pe lama cu ajutorul pensetei. 3.Se lașa se usuce. 4.Preparatul se fixeaza chimic. 4.Se colorează cu unul dintre coloranti enumerati mai sus.
5.Se examinează la MO cu obiectivul delOOx. Avantajul major este ca prin fixare si colorare, se observa detalile de ultrastructura ale parazitul
si preparatul poate fi pastrat pe perioade indelungate de timp fara riscul unei deteriorări.

D. Diagnostic imunologic - de confirmare - prin test IF se depistează !!!iantigenele parazitare din LCR
sau tesut cerebral; OBServatiej Depistarea Ac este irelevanta- evoluția rapida a infecției cu exitus in 5-7 zile nu permite sinteza unui titru
decelabil de Ac specifici

E. Diagnostic genetic-de confirmare - prin test PCR se depistează ADIM parazitar extras din LCR si tesutul

cerebral necroptic

Diagnosticul de laborator in infecțiile cu Acanthamoeba sp.

3
 /fologie medicala LP1 Asist univ. Neagoe Ionela

4. Diagnostic imagistic — numai la imunodeprimatii cu EGAC; CT/RMN cerebral - leziuni edematiate in

renchimul cerebral sau cerebelos ; Rx toracal - suspiciune de pneumonie (nespecifica).
QJ

B. Diagnostic parazitologic — de certitudine -Se pot recolta diferite produse biologice in funcție de caz:

in Keratita amoebiana (inflamatia epiteliului cornean) - cazul purtătorilor de lentile de contact- tesut de raclaj
corneean / fragmente de cornee - recoltate post transplant de cornee

in Abcesele subcutanate granulomatoase - la imunosupresati - biopsie mucocutanata

3. in Osteomielite - la imunosupresati cu fracturi osoase deschise sau care suferit diferite grefe osose- tesut osos de raclaj
din fistulele osoase

4. in EGAC - la imunosupresati -LCR / tesut cerebral necroptic

5. in pneumonia cu Acanthamoeba - la imunosupresati - tesut bioptic pulmonar (transbronsic)

a) Examinări microscopice ale acestor produse biologice : pe preparate proaspete L+l, frotiuri, amprente tisulare colorate
Giemsa/ tricrom/ H&E se depistează la MO trofozoiti+/-chisti

b) Culturi pe mediu cu agar nenutritiv cu colonii crescute de Escherichia coli - completează examenele microscopice

Metoda -cultura pe mediu cu agar cu colonii crescute de E.coli : l.Se insamanateza suprafața mediului de agar (repartizat in Placi Petri) cu LCR /
macerat tisular; 2. Incubare 3 zile la temperatura camerei. 3 Examinarea plăcilor cu agar insamantat la M.O inversat. 4.Detectarea urmelor in zig-zag,
lasate de acantopodiile trofozoitilor'dezvoltați pe suprafața agarului. 5.prin adaugarea ulterioara in mediu de amphotericina B/ azitromycina, se
observa daca dezvoltarea trofozoitilor +/- chisti mai are loc.

C. Diagnostic imunologic — de confirmare — prin teste IF/ELISA -se urmărește depistarea I!I!antigenelor
parazitare in LCR sau țesuturi; OBServatie : Depistarea Ac nu se practica in diagnostic- la imunocompetenti limitarea parazitului doar la nivelul
corneei nu facilitează sinteza de Ac specifici circulanti; la imunodeprimatii - sinteza de Ac specifici circulați este scăzută sau inexistenta.

D. Diagnostic genetic - de confirmare - prin test PCR se depistează ADN parazitar extras din LCR sau
diferite țesuturi recoltate bioptic/necroptic

4
 Parazitologie medicala LP2 Asist univ. Neagoe Ionela

Diagnostic de laborator in Giardioza (infecția cu Giardia

lamblia) (flagelat cavitar)

A. Diagnostic de circumstanța - nespecific.

Teste de evaluare a malabsortie: Examenul microscopic al fecalelelor colorate cu Sudan III / soluție Lugol -
prezenta in fecale a grăsimilor nedigerate / amidon nedigerat / fibre musculare nedigerate

B. Diagnostic parazitologie- de certitudine

1. Materii fecale
a. Examen coproparazitologic:
a.l Examen macroscopic - aspectul steatoreic al materiilor fecale (scaune unsuroase) datorat malabsortiei lipidice
a.2 Examen microscopic - in scaunele formate se depistează la microscopul optic stadiul de chist iar in scaunele diareice
trofozoiti +/- chisti:
> a.2. 1 preparat proaspăt L+l din materii fecale cu ser fiziologic sau soluție Lugol;
C'J

2 frotiu din materii fecale colorat Giemsa

03

OBServatie : datorita eliminării intermitente a chistilor de Giardia lamblia mai ales in infecțiile cronice este necesara repetarea exmenului
coproparazitologice din 3 in 3 zile si o eventuala reluare a examinărilor după aproximativ 2 saptamani. Datorita acestor “perioade negative” sau “libere
de inchistare” se obțin frecvent rezultate fals negative prin examen coproparazitologic.

b. Coprocultura pe mediu special axenic suplimentat cu bila si tratat cu antibiotic - nu se

practica de rutina; facilitează multiplicarea stadiului de trofozoit

2. Aspirat duodenal - deși da rezultate mai bune decât in examenul coproparazitologic nu este utilizat de rutina;
recoltarea se poate face prin tubaj duodenal sau prin tehnica capsulei duodenale (Entero-Test)
Metoda -Entero-test: I.Se utilizează o capsula gelatinoasa care conține un fir de nylon cu un capat liber care este prins după înghițirea capsulei.
2. După digestia capsulei, firul de nylon se destinde in sucul digestiv si de el vor adera trofozoiti liberi sau prinși in mucus.3.Dupa 4 ore firul este scos
afara si spalat cu ser fiziologic călduț; 4.Din lichidul de spalare se fac preparate proaspete L+l sau frotiuri colorate Giemsa (la microscopul optic se vor
depista trofozoiti).

3. Țesut duodenal - se recoltează bioptic de la nivelul mucoasei duodenului sau jejunului in cursul unei endoscopii.
Examen histopatologic - la MO se vizualizează: trofozoiti/fragmente de trofozoiti, vilozitatile turtite in urma aderării
trofozoiti lor.
C. Diagnostic imunologic -de confirmare. Atunci când examenul coproparazitologic da rezultate negative se
poate trece la depistarea coproantigenelor prin: test rapid imunocromatografic cu stripuri/casete, test ELISA,
test IF
OBServatie: depistarea anticorpilor are valoare clinica redusa; anticorpii locali specifici persista pe o perioada indelungata si nu se pot face diferențieri
clare intre o infecție acuta si una recenta. *
D. Diagnostic genetic- de confirmare. Prin test PCR se identifica ADN-ului de Giardia extras din materiile
fecale.
/
arazitologie medicala LP2 Asist univ. Neagoe Ionela

Diagnosticul in Trichomonoza urogenitala (infecția cu

Trichomonas vaginalis) (flagelat cavitar)
A. Diagnostic pa razitologic:-de certitudine
1. Secreție vagihala = leucoree
Examen macroscopic leucoree -in faza acuta a infecției - este abundenta, spumoasa, albicioasa, fetida (miros de peste
stricat); in faza cronica - este redusa cantitativ.
Examen colposcopic -util in: 1.observarea de macule sau eroziuni punctiforme dezvoltate la nivelul colului uterin;
2. depistarea stadiuhclinic considerat preoncogen -strawberry cervix; 3.recoltarea secreției vaginale
HUConditii de recoltare ale secreției vaginale !!!£!:
1) recoltarea se executa cat mai profund din fundul de sac vaginal latero-posterior;
2) recoltarea se realizează in perioadele pre / post menstruale;
3) recoltarea se face la cel puțin 24 de ore după ultima toaleta intima;
4) recoltarea se face la cel puțin 24 de ore după ultimul contact sexual neprotejat
5) recoltarea se face după 5-6 zile de la întreruperea unui tratament cu antibiotice.
Secreție uretrala la femei sau barbati - se recoltează matinal inaintea primei mictiiini cu un tampon de vata
acuta este abundenta, purulenta, spumoasa, alb-verzuie, fetida.
steril; la barbati in faza
3. Secreție prostatica = “picătură matinala” - vizibila in faza cronica ca o secreție redusa cantitativ cu
aspect limpede seros, fluida; se recoltează matinal inainte de a mictiona sau prin masaj prostatic (tuseu rectal).
4. Sediment urinar - obtinut prin centrifugarea urinei recoltata in situația in care nu au fost respectate condițiile de
recoltare a celorlalte produse biologice menționate.

a. Examen microscopic al produselor patologice (menționate mai sus):

— rxj

. preparate proaspăt L+l - la MO se depistează trofozoiti mobile

cd

. frotiu colorat Giemsa - la MO - trofozoiti colorați (citoplasmă mov deschis, nucleu roșu violet, flageli/axostil in rosu-
oi

carmin)
b. Cultura (din produsele patologice menționate mai sus) - pe medii de cultura axenice
completează examenul microscopic, facilitând multiplicarea trofozoiti lor.
InPouch TV diagnostic system (tehnica de cultivare in pungi de plastic cu mediu lichid steril, inchise
ermetic)
Metoda - In Pouch I V: (consta dintr-un recipient din plastic, dublu compartimentizat cu mediu in camera inferioara). I .Se insamanteaza mediului cu
tamponul de vata pe care s-a recoltat secretia.2 Se fixeaza ulterior punga cu mediu intr-un suport de plastic special si este examinata la MO. 3 Daca la
MO nu se detecteza nimic (imediat după insamantare) se incubeaza la 37oC si se fac examinări după 24h. Avantaj maior: In Pouch TV este folosit atat
ca: recipient de transport al probei, camera de creștere a culturii cu incubare la 37oC cat si “ lama microscopica” pentru examinare la MO.

B. Diagnostic imunologic -urmărește depistarea de antigene din secrețiile vaginale, uretrale sau urina prin:
test rapid imunocromatografice, test Latex -Aglutinare (LA), test de imuofluorescenta (IF).
Metoda test Latex-Aglutinarc: l.artonase cu spoturi de marcaj impregnate cu AMC anti T vaginalis cuplați la particule de latex colorat sunt puse ii
contact cu secreția recoltata pe tampon. 2.Reacția pozitiva pentru prezenta de antigene specifice in secreție = aglutinare bleu, omogena, unifofr
raspandita pe suprafața spotului. 3.Reacție negative (antigene absente) = particulele neconjugate sedimentează sub forma unui “buton” bleu c
marginile neregulate, in centrul spotului de marcaj.

C. Diagnosticul genetic - se depistează ADN parazitar din secreții sau urina prin test PCR; foarte util in cazuril»
asimptomatice dar si in controlul terapeutic

2
 ■/

Parazilologie medicala LP2 Asist univ. Neagoe Ionela

Diagnosticul de laborator in infecțiile cu Leishmania sp.

(flagelat tisular)
A. Diagnostic de circumstanța oferă informații orientative care pot fi asociate cu manifestările clinice tipice
unei leishmanioze viscerale. Examen hematologic si hemoleucograma- pancitopenie (anemie, leucopenie, trombocitopenie).
Biochimie sânge: disproteinemie marcanta = hipoalbuminemie, corelata invers proportional cu o hiperglobulinemie IgG.

B. Diagnostic parazitologic
a. Examen microscopic al produselor biologice recoltate in funcție de forma clinica
manifestata. La MO - se depistează amastigoti liberi sau in citoplasmă macrofagelor tisulare pe frotiuri, amprente,
secțiuni tisulare colorate Giemsa sau cu tricrom
I. Caz de Leishmanioza cutatanata sau muco-cutanata - Dermatoscopie = evaluarea stadiului evoluție
leziuni + recoltare de țesut:
l.l Aspirat tisular de sub leziunea cutanata /ulcerația muco-cutanata recoltat prin injectarea reaspirarea
unei soluții de ser fiziologic;
1.2. Țesut OSOS -raclaj profund din leziunile specifice formei Espundia.
2. Caz de Leishmanioza viscerala-.
2.1. Aspirat medular -punctie osoasa din creasta iliaca sau stern;
2.2. Biopsie hepatica/splenica - se practica rar deoarece punctia de organ prezintă un risc ridicat de hemoragii
caz de hepatosplenomegalie cu trombocitopenie;
Aspirat ganglionar - punctie ganglionara in caz de limfadenopatii
2.3.
b. Cultivare pe mediu special NNN - Novy, MacNeal, Nicolle - de confirmare a unei infecții incerte
sau nedepistate prin examenul microscopic clasic dar si pentru izolarea parazitului.
Metoda - cultura pe mediu NN'N: I .Se insamanteaza mediul special NNN (mediu solid ce conține agar si sânge defibrinat de iepure, repartizat in
plan înclinat in tuburi de cultura) cu sânge sau cu o suspensie din aspiratul tisular recoltat. 2..După I saptamana de menținere la temperatura camerei
(25 oC), se recoltează lichidul de cultura dezvoltat la suprafața mediului, se centri fugheaza, iar din sediment se fac preparate directe L+l. La MO se pot
depista promastigoti.

C. Diagnostic imunologic
1. Depistarea anticorpilor (IgG specifice) prin teste de aglutinare directa, teste rapide
imunocromatografice, test ELISA.
2. Depistarea antigenelor prin teste de latex aglutinare - pentru confirmarea unei infecții evidențiata
prin diagnostic parazitologic dar si in condițiile in care probele de tesut visceral sunt dificil de obtinut
■ *

D. Diagnostic genetic - de confirmare; util in splenomegalii masive cu hipersplenism si biopsie splenicr

contraindicata - prin test PCR urmat de teste moleculare de diferențiere genotipica se depistează urmele de ADh
parazitar din sânge sau aspirate tisulare si se poate stabili un diagnostic diferențial intre diferitele specii de Leishmania.
UJ

L
i’arazitologie medicala Asist uiiiv. Neagoe Ionela

Diagnostic de laborator in infecțiile cu Trypanosoma bmcei si

Trypanosoma cruzii (flagelate tisulare)
A. Diagnostic de circumstanța - util mai mult in fazele cronice ale infecției cu Trypanosoma brucei.
Henwleucograma - anemie hemolilica + trombocitopenie cu leucocitoza. Biochiinia sângelui - hiperproteinemic cu IgM crescut + hipoglicemie.
Lxa mina rea LCR-uliii (biochimic si microscopic) - hiperproteinorahie + plasmocite normale si plasmocite degenerate (celule Mott-Marshalko).

B. DlSgnOStlCUl imagistic oferă informații orientative in faza acuta si cronica a ii fectiilorcu Trypanosoma cruzii.
Ecocardiografia poate evidenția o cardiomegalie cu lichid in pericard. Radiologie se poate identifica un megacolon sau un
rectosigmoid dilatat.

C. Diagnostic parazitologic

1. In FAZA A( TTA a infecției cu T.briicei/T.cruzii

In infecția cu T. brucei sq depistează - numai tripomastigoti extracelulari,

In infecția cu T. cruzii atat tripomastigoti extracelulari cat si amastigoti in monocitele tisulare
1. Vspirat ganglionar - recoltat prin punctie ganglionara in cazul semnului Winterbottom sau limfoadenopatie
periauriculara ce insoteste semnul Romana
2. venos (recoltat pe / fara anticoagulant) sau sânge capilar. De recomandat ca recoltarea sa se faca in cursul
puseului febril .
a. Examen hematologic - se practica de rutina; consta in executarea:
1. preparat proaspăt L+ 1 din sânge (la MO-tripomastigoti mobili)
•ermanente colorate Giemsa:
jt

a.2.1. Frotiu din sânge:

Metod.i troliu din sânge: l.La copalul unei lame de microscop se pune o picătură mica de sânge: 2. Cu ajutorul unei a II lame de microscop așezata in
unghi de 30-40°. se etalcaza sângele de la un capat la celalalt al lamei, astfel incat sa se termine in franjuri. 3.După uscare, frotiul este fixat cu alcool metilic
+ colorat inlr-o dilutie de colorant Giemsa. 4.Se examinează la MO cu obiectivul de 100X - se pot depista tripomastigoti extracelulari colorați in mov pe
langa hematii si leucocite

a. 2.2. Picătură groasa din sânge

Metoda picătură groasa: 1 .In centrul unei lame de microscop se pun 3 picaturi de sânge: 2.Cu coltul unei a II a lame se omogenizează circular cele 3
picaturi de sânge in scop de defibrinare: 3..se lașa sa se usuce la temperature camerei 4.Ulterior fara fixart* in alcool se introduce lama cu sângele
omogenizat direct intr-o dilutie apoasa de colorant Giemsa. Apa din soluția de colorant, are efect hipoton ce duce la liza hematiilor si lcucocitclor. 5.După
spăl are cu apa si uscare se examinează la microscopul optic cu obiectivul de imersie - se vor depista tripomastigotii si nudei leucocitelor colorați in mov-
albastru pe un fond mov-pal.

1). Preparate obținute prin tehnici (ie concentrare ale sângelui (utile in parazitemiile mici).
Tehnica leu cocon cent râtului
Metoda tehnica leucoconcentratuhii: 1 .Intr-un tub de centrifuga se pune Iml sânge + 2ml serfiziologic + 3 picaturi saponina 2% (saponina are efect
hcmolitic). După dccolorarca dilutiei sangvine aceasta se centrifugheaza iar din sediment se fac preparate directe si frotiuri colorate Giemsa.
Hemocultura pe mediu NNN (Novy, McNeal, Nicoilc) in cazul unci suspiciuni de tripanosomioza neindentificata prin
metodele anterioare
Metoda -heniocultura pe mediu NNN — I.Mediul NNN (tuburi cu agar + sânge defibrinat de iepure) se insamanteaza cu sânge 2. Se incubcaza 1
sapiainana la 25°C 3. Pe acest mediu se dezvolta epimastigotii de T. briicel iliodesiensis si /'. cruzii (deoarece numai in cazul acestor specii,
tripomastigotii sunt mai numeroși in sânge).
 zitologie medicala LP3 Asist tiiiiv. Neagoe Ionela

3. LCR sau tesut cerebral necroptic recoltat de la subiecți imunosupresati sau copii cu meningoencefalita acuta cu
T .:/i. (la MO tripomastigoti extracelulari sau amastigoti in celulele nervoase).

II In FAZA CRONICA a infecției cu Orwcez/T.crz/zz’z

1. LCR si tesut cerebral necroptic recoltat de la subiecții cu meningoencefalita cronica cu Tbrucei. La MO se

depistează numeroși tripomastigoti extracelulari + plasmocite degenerate (celulele Mott-Marshalko)

2. I csn t recoltat necroptic din peretele cordului, esofagului, colonului in infecțiile cu T.cruzii. Examen
histopatologic - la MO pseudochisturi cu amastigoti in citoplasmă fibrelor miocardice si fibrelor musculare din peretele
tubului digestive.

Xenodiagnosticul - util in zonele endemice pentru detecția infecțiilor ușoare sau cronice cu parazitemie mica.
Metoda- vcnodiagnostic: I Insectele ( Triatoma sp.) crescute in laborator, neinfectate, sunt lasale intr-un capac sa se hraneasca cu sânge timp de 3 zile direct
pe pielea subiectului suspicionat. 2. Ulterior in decurs de I saptamana-l luna insectele sunt tinute sub observație si sacrificate. 3.Examinarea microscopica a
intestinului posterior si dejectelor permite evindetierea epimastigotilor + tripomastigotilor metaciclici infectiosi.

1). Diagnostic imunologic-util in confirmare dar si in screening mai ales in zonele endemice.
1. Depistarea anticorpilor din sânge prin:
a. lest EL1SA. Test Aglutinare indirecta (TrypTect CAAT) pentru SCreeniflg-ul serologic al infecțiilor acute cti
T.brucei
b. testul de fixare a complementului, test IF pentru infectile cu / -nuzii

2. Depistarea ailtigcnelor prin teste ELISA, sau test Aglutinare indirecta - pentru confirmarea mluctiiioi cu I. cruzii
ice sau congenitale si in screening-ul donatorilor de sânge.

E. Diagnostic genetic - Prin test PCR se identifica urmele de ADN parazitar din sânge sau LCR (pana la 1
parazit/20ml sânge) si se fac diferențieri intre cele 2 specii de Trypanosoma dar si intre subspeciile de tripanosome africane.
PCR este util si in monitorizarea pacientilor cu chimioterapie, in diagnosticarea unei infecții dobândite congenital (la nou-
nascul).
 Jtologie medicala L1’3 Asist naiv. Neagoe Ionela

Diagnosticul de laborator in infecțiile cu Toxoplasma ondu

(sporozoar)

Grupe de risc: l)gravide imunocompetente, 2)nou-nascuti din mame cu seroconversie in cursul sarcinii si 3)imunodeprimatn
Observație : Diagnosticul imunologic se practica de rutina ; urmărește depistarea paralela a anticorpilor anti T. gondii de faza
acuta (IgM, IgA, IgE) si faza cronica (IgG) din serul sangvin (si din umoare apoasa in caz de afecțiuni oculare) la subiecții
imunocompetenti suspecti de toxoplasmoza dobandita/congenitala + gravide imunocompetente.

1. La Gravidele imunocompetente = Diagnostic antenatal

Diagnostic imunologic

a. Test serologic de screening—ELISA (se recomanda sa se faca inca din înaintea sarcinii)
Interpretarea rezultatelor in funcție de cazuri :
1. daca IgM - si IgG - = gravida nu este infectata ;
2. daca numai IgG + = gravida infectata cronic inainte de concepție (fara riscul unei transmiteri transplacentare deaorece
1 gG materne trec pasiv prin placenta in cursul sarcinii)
daca IgM 4- si IgG + = gravida posibil infectata recent = posibila primoinfectie in sarcina cu risc de transmitere
transplacentara.

b. In ultimul caz (3 se recomanda investigații suplimentare de confirmare :

A. Diagnostic imagistic - Examinări US trimensional/RMN - in fiecare luna (pentru evidențiere*

eventualelor mal formați cerebrale)

B. Diagnostic imunologic - I est serologic de determinarea a aviditatii IgG - la gravidele ci

seroconversie aflate in I trimestru de sarcina - este folosit in confirmarea a unei primoinfectii materne mai recente
sau mai vechi de 3luni.
OBS :D(ica se detectează o aviditate scăzută a IgG materne = gravida a dobândit infecția după concepție = riscul une
toxoplasim zc congenitala. Se recomanda :
avortul terapeutic + test PCR de confirmare cu detecția ADN parazitar in produsul de avort.

C. Diagnostic genetic -Test PCR (pe ADN parazitar izolat din lichid amniotic)- la gravidei
cu seroconversie aflate in nit iniile 2 semestre de sarcina - este folosit in confirmarea unei infecții congenital
a fătului cu T gondii.
OBS :l)aca PCR este + - toxoplasmoza congenitala - se recomanda : inițierea c ^
 tzitologie medicala LP3 Asist univ. Neagoe Ionela

11. La Nou-nascuti din mame suspecte de seroconversie in cursul sarcinii = Pi au neonatal

a. La naștere - recoltare sânge din cordonul ombilical:

Diagnostic imunologic - Test serologic ELISA / ISAGA (ImmunoSorbent

<

Agglutination Assay) - pentru detecția IgG specifice materne in sânge nou-nascut / urme de IgM, IgA si IgE
specifice sintetizate de copil

Diagnostic genetic-Test PCR - detecția ADN parazitar in sânge cordon ombilical.

CD

b. La 4-6 luni de la naștere — se recoltează sânge periferic de la copilul suspectat de toxoplasmoza congenitala:
A. Diagnostic imunologic -Repetare Test serologic-ELISA : Daca titru! IgG detectat la 4-6luni de la
naștere > IgGdetectat la naștere = IgG specifice sintetitizate de copil = toxoplasmoza congenitala
B Diagnostic imagistic - Examinări - RMN / CT cerebrale (calcificari diseminate dense, rotunde
(>lmm) periventriculare sau in ggl bazali) sau Examene oftamologice (eventuala retinocoroidita congenitala cu
un focar retinean activ)

111. La imunodeprimati :
A. Diagnostic imagistic - obligatoriu. Teste RMN, CT, Rx cerebrale pentru vizualizarea leziunilor
cerebrale (leziuni unice sau multiple mai mari de lom, dezvoltate mai ales in zona ggl bazali si trunchiului cerebral). 'US,
RMN, CT, Rx pt.vizualizarea altor leziuni viscerale / Examen ofta mo logic - retinocoroidita

B. Diagnostic imunologic — Test serologic ELISA- da frecvent rezultate neconcludente; se pot

detecta in funcție de caz urme de IgA/ IgE / IgG specific

C. Diagnostic genetic - pentru confirmare - Test PCR (pe ABN extras din diferite produse biologice :
sânge venos, urina, m.o.h, umoare apoasa, LCR sau țesut cerebral necroptic)

1). Diagnostic parazitologic - nu se practica de rutina, este alternativa (mai veche si mai puțin constisitoare a
testului PCR).
w

xamen al diferitelor p (recoltate in funcție de caz, la fel ca in diagnosticul

genetic) - evidențierea la MO - a tach izoit ilor liberi/int răcelii lari sau a chistilor tisulari cu bradi/.oiti iiitracelulari.
2.Cultivarea in vivc -Inocularea intraperitoneala la șoricei de laborator a unei suspensii din
produsul biologic -utilizata in: scopul izolării parazitului + confirmarea infecției - daca șoricelul dezvolta ascita.

4
 Parazitologie medicala LP4 Asist unlv. Neagoe Ionela

Diagnosticul de laborator in Criptosporidioza

(infecția cu Cryptosporidium sp.) si Isosporioza
(infecția cu Isospora belii)
(Sp&voBoav)
A. Diagnostic parazitologie
1. Materii fecale

Ex. coproparazitologic:

a. Ex. macroscopic - scaune lichidiene, mucoide (steatoreice in cazul infecțiilor cu Isospora belii).
b. Ex. microscopic:

I Frotiu din fecale colorat prin teh. Ziehl-Nielsen modificata (folosește I colorant = fuchsina si II contracolorant
- verde malachit sau albastru de metilen) la MO - se depistează oochisti maturi de Cryptosporidium / oochisti
imaturi sau maturi de Isospora colorați complet in roșu pe un fond verde sau albastru; in cazul lui
Cryptosporidium se pot observa si oochisti incomplet colorați in roșu - forme “ghost”).

Țesut intestinal recoltat bioptic in cursul unei endoscopii

Examen histopatologic - la MO - se pot depista toate stadiile parazitare

3, Aspirat duodenal - recoltat prin Tubaj duodenal / Capsula enterotest (in cazul imunosupresatiilor cu
afecțiuni ale arborelui biliar);Examen microscopic aspirat duodenal - oochisti de Cryptosporidium sp .

Al. Sputa (in cazul imunosupresatiilor cu afecțiuni respiratori)

Examen microscopic sputa/aspirat duodenal = frotiuri colorate prin teh. Ziehl-Nielsen modificata - MO -
se depistează oochisti de Cryptosporidium sp.

B. Diagnostic imunologic - in confirmarea in cazurilor de cryptosporidioza.

Depistarea coproantigenelor prin Test rapid imunocromatografic; Test ELISA, Test 1F (cu auramina)

C. Diagnostic genetic - important in confirmarea sau depistare unor infecții nediagnosticate prin
celalalte metode;.
Depistare ADN parazitar extras din fecale prin test PCR

3
 Parazitologie medicala LP4 Asist univ. Neagoe Ionela

Diagnosticul de laborator in Pneumocistoza

(infecția cu Pneumocystis jirovecii/carinii)

A. Diagnostic imagistic - Rx - aspectul in “geam mat” al plămânului afectat - caracterizat prin

opacitati răspândite omogen, difuzate bilateral (la nou-nascut) sau lobar (la adulti cu imunosupresie) +/-
opacifieri reticulonodulare extinse

B. Diagnostic parazitologie
1. Sputa indusa - provocata prin administrare unui aerosol salin (3%NaCl +apa)
2. Lichid de lavaj Bronho-Alveolar (LBA) - recolata prin tubaj cu S.F. călduț; da rezultate mai bune
decat sputa indusa
3. Tesut pulmonar - recoltat bioptic in cursul unei bronhoscopii/ punctie transtoracica cu ghidaj imagistic;
recoltare necroptica.

| Examen microscopic frotiuri din sputa/ LBA; amprente sau secțiuni tisulare din tesut pulmonar - colorate
'* prin 2 metode distincte de colorare:

a. Colorație panoptica - cu Giemsa sau cu hematoxilin-eozina (H&E)

Avantaj - la MO se pot depista trofozoiti si chisti; Dezavantaj - la MO- datorita contrastului cromatic slab,
parazitii nu se diferențiază clar de fondul microscopic:
Trofozoitii - apar neindividualizati sub forma unor conglomerate similare unor “nori cu puncte” (mov pe
colorație Giemsa / roz pe colorație H&E; punctele sunt nudei trofozoitilor).
Chistii - apar cu perete celular necolorat, cu 8 puncte colorate in mov (Giemsa) dispuse in rozeta (punctele sunt
cei 8 corpusculi intrachistici).

b. Colorație specifica - cu albastru de toluidina sau prin impregnarea argentica Gomori

Avantaj - la MO - parazitul se diferențiază cromatic de fondul microscopic; Dezavantaj - la MO - se
depistează numai chisti cu peretele celular colorat intens (in mov pe un fond bleu - colorație cu albastru de
toluidina / in rrxaro pe un fond verde - colorația Gomori); !!! Nu se evidențiază corpusculi intrachistici din
interiorul chistilor!!!

C. Diagnostic imunologic
Urmărește depistarea antigenelor circulante diseminate la subiecții cu imunosupresie HIV prin test ELISA.

D.Diagnostic genetic - Prin test PCR se urmărește depistarea ADN parazitar din saliva, snuta. LBA.
tesut pulmonar. Esențial in confirmarea infecțiilor nedepistate prin celalate metode.

4
Parazitologie medicala LP4 Asist univ. Neagoe Ionela

Diagnosticul de laborator in infecțiile cu Plasmodium sp.

(S^oco2.oax^

A. Diagnostic de circumstanța - Semnele hemolizei -urina de culoare neagra

(hemoglobinurie). Biochimici sângelui: LDH +++, acidoza si hipoglicemie (mai ales in neuropaludism).
Hemoleucograma semnalează o anemie.

B. Diagnosticul parazitologie - este de certitudine

1. Sânge capilar/periferic - recoltat in cursul puseul febril sau din 8 in 8 ore timp 3-4zile.
a. Examen hematologic - 2 tipuri de preparate permanente colorate Giemsa:
a.l Frotiu din sânge (metoda vezi dg. Trypanosoma sp.) - Avantaj: Pe baza detalilor morfologice ale
hematiei parazitate se poate stabili un diagnostic diferențial de specie (vezi tabel).
Specia P. vivax P. ova le P.malariae P.falclparum
Varsta hematiei Reticulocit Reticulocit Hematia Hematia de
parazitate adulta orice varsta
imn

Parazitemie 1-4% 1-4% 1% 10-40% !!!!!!!

Marimea hematiei 2 ori mai mare 11/2-2 ori mai Egala sau mai Egala cu
parazitate decât hematia mare decât mica decât hematia
normala hematia hematia normala
normala normala
Forma hematiei Rotunda Ovalara 1 unele Rotunda Rotunda
parazitate cu aspect de
cometa, cu
marginile rupte
infranjuri)
Granulatiile parazitare Schuffner Schuffner/James Ziemann Maurer (puține,
(hemozoina/plgmentul (numeroase, (numeroase, (puține, maron maron deschis)
malarie) portocalii) portocaliu- închis, uneori
violet) absente)

a.2 Picătură groasa din sânge (metoda vezi dg. Trypanosoma sp.)- Avantaj: foarte util in
parazitemiile mici când frotiul de sânge poate da rezultate fals-negative. Dezavantaj - datorita etapei
,de liza a hematiilor, diferențierea intre speciile de Plasmodium este dificila.
!!!!! Observație: Pe frotiu sau picătură groasa din sânge periferic se pot identifica la microscopul optic toate
stadiile (inel, amoeba, prerozeta si rozeta cat si gametocitii intraeritrocitari la toate specile de Plasmodium).
IIIHOBServatie: In infecția cu P. falciparum in faza incipienta se detectează in sângele periferic numai stadiile
de inel si aametocit intraeritrocitar. Celalate stadii intermediare ale lui P. falciparum (amoeba, prerozeta si
rozeta) sunt sechestrate in sângele profund visceral si sunt responsabile de complicații care pot duce la deces.
Numai in faza comatoasa a unei infecții cu P.falciparum (neuropaludism) apar toate stadiile in sângele periferic.
1
Parazitologie medicala LP4 Asist univ. Neagoe Ionela

b. Quantitative buffy coat (QBS) test: metoda alternativa mult mai rapida decât examenul
hematologic . Este foarte utila in parazitemiile mici;
Meto 1 .Se folosesc tuburi hematocrit tapetate la interior cu un colorant fluorescent: acridin-orange. 2.Tub este umplut cu
20pl s >eriferic. 3. La o extremitate a tubului se pune un dop de plastic, iar la cealalta extremitate se insera un plutitor
alune plastic. 4.După centrifugarea tubului, celule sangvine se vor separa in funcție de densitate. Buffy-coat (buff
=galben pal)- stratul de mijloc conține trombocite si leucocite. (Plutitorul are rolul de a imprastia buffy coat-ul si celule
adiacente) Hematiile cu paraziti se vor găsi sub stratul de leucocite din buffy-coat si deasupra sedimentului de hematii
neparazitate. 5.Hematocritul cu sângele centrifugat se fixeaza intr-un suport special de plastic. 6.Se examinează la
microscopul optic cu flourescenta - parazitii intraeritrocitari din stratul buffy coat apar fluorescenti.

2. Țesut cerebral necroptîc (in cazuri de neuroplaudism), - confirmarea necroptica a unei

infecții cu P. falciparum. Examen histopatologic - La MO- capilare pline cu eritrocite parazitate.
Examen anatomo-patologic - hiperpigmentarea diferitelor viscere SRE, petesii hemoragice rozetate in
creier.

B. Diagnostic imunologic
1. Detecția antigenelor parazitare im din sânge - se utilizează de rutina in screening, pentru
un diagnostic rapid de specie, dar necesita examen hematologic sau QBC test drept confirmare;
Teste rapide imunocromatoqrafîce - dau rezultate rapide in 10-15minute. Sunt teste care folosesc
stripuri sau casete si pot fi monoparazitare doar pentru dectia lui P. falciparum, biparazitare (P.f/P.v) si
tripluparazitare P. f/P. v/alte specii de Plasmodium.

2. Depistare anticorpilor specifici prin teste elisa are doar importanta epidemiologica
si nu de diagnostic (in zonele endemice este utila in screeningul donatorilor de sânge sau depistarea
indivizilor care au contact o infecție malarica).

C. Diagnostic genetic - util in confirmarea rezultatelor fals negative din parazitemiile

nedecelabile. Prin test PCR - se pot detecta urmele de ADN parazitar din sânge- 1 parazit/1 pl, si se pot
face si diferențieri genetice intre cele 4 specii.

2
Parazitologie medicala hzM iifiiv. Xcuține hniclu

Diagnosticul de laborator in infecțiile cu Taenia]

soliiim/Taenia saginata
(Cestod)

1.Diagnosticai de laborator in Tenioza (adult de 7. solium /T.

saginata in intestinul subtire)
A. Diagnostic parazitoiogic

Materii fecale
a. L.\ a in Cl) coproparazitologic ■ permite identificarea la MO a stadiului de ou pc.

a. I preparai proaspai IJ I din fecale cu SF soluție 1 Algol

<i.2 preparai proaspal I * i din fecale concentrate prin tehnica de Dotare Willis-Hung;
Metoda - tehnica de Hotare Willis: I.Intr-un pahar Borel se amesteca 2g. fecale soluție suprasaturuia de X.if'c ’ D.ip.i umoneni pc mmaiai.:
Mispensiei se asea/a o lamela si se lașa sa plutească aOminuiv. 3.După expirarea acestei perioade se “pescui e?<ic” lamela cu o pensei.i. s<: ase,,/:*, iu ceiitrui
lamei si se cxaminea/u la MO. 4 .Ouate tiara opercul) .sunt ușoare, plutesc la interfața aer lichid datorita derrdiaui tidic.r-u .•< .'ohine! mime fnlostic ■■ t
fix caza ia suprafața inferioara a lamelei.

u ? frotiu din fecale colorai prin tehnica Ziehl-Ncelsen ( facilitează diferențierea inter specie pe baza colorării stadiului de on
- colorarea iu roșu numai a oului de T.saginartr

OBScrvatic: e\ amentil copropara/itologic iese pozitiv doar după 2 luni post in l ecție

b. Testul ampretarii anale / Scotch test / Graham test/ Testul VIJI facilitează recoltarea de
material biologic direct din pliurile mucoase anale, cu identificarea la MO a oualor de Tenie ramase la acest nivel.
Metoda - Scotch test: I Se folosește o bagheta de sticla care are la un capat atașat o bucala de scotch cu partea lipicioasa vxpuo l.i exterior cu aiuioiu
careia se tamponează pliurile anale. 2.Bagheta cu materialul revoltat este (ras purtata la laboratorul de referința intr-un tub de ivi.; adecvai ' In labur.iio;
a he desprinde bucățică de sdtch cu materialul biologic recoltat: b)se pune pe o lama de microscop intr-o picătură de SI . che acoperii cu o lamela. U)
eyarrj'nea+Q lcț, ■ A O
c. identificare macroscopic# sau cu ajutorul unei iui)c biocuhtre u viermelui adult, progHfrul
terminal si scolex ul - in cazul eliminării spontane sau in urnut unui trata meni jmUJieliniiiiic. «Criterii de diagnostic
diferențial de specie: lungimea viermelui adult, raport dimensiune prodbt. număr si aspect ramificații uterine, prezenta sau tui
a cârligelor scolexului).

B. Diagnosticul genetic mull mai sensibil si eficient, prin test PCR se depistează AI)N Tenia sulium/saginata
extras din fecale.

|
I’arazitologie medicala IP? hisf tiniv. \ rustic ItHicid

Diagnosticul de laborator in C isticercoza (larve de Taenia

so Hu ni in tesutun)
A. Diagnostic imagistic important in vizualizarea leziunilor induse du stadiul larvar dai si in monitorizarea
evoluției bolii postehiinioierapie specifica
hi ucurocisticereoza Prin CI SI RMV cerebral s-au depista 4 stadii de involuție ale cisticercului piircm liiiuuio\ :
\ c/ictilai. coloidal. granular si calcificat:

1. In stadiul vezicula! larva este v-ia bila. mascara de la 3 nun - 2cm in diametru, rotunda
Nujndtice nici un..pispun; inilamaloi pe o durata de 2-Sa'n |>ostmfectie subiect asimptotnatic.

2. hi stadiul colindai larva moare si iticepe sa

Produsii metabolici cu rol antigenic difuzează prin peretele capsulei m creier si pro ypaca un răspuns imun inflamam' c
parenclujniil adjacent larvei apar sbnptonieie neurologice.

3. Iii stadiul granular larva este mult micșorată, capsula se ingroasa si scolexul degenerat >e calcifies.

4. In stadiul calcificat ( isticcrci calcificati au l-2mm in diametru cu suolecsi mineralizați la interior.

Cisficercii intruvenîriculari pol li depistați cei ușor prin RMN.

(isticerci in mușchi uui tcsut \ubcii1aniit calcificati. pol fi vizualizați radiologie. Cisticerci cu localizare orbitala - miixla
uxiraoculari pol fi surprinși in cursul unui RMN, CT, t S
(isficcrci oculari (corp vitros, subretinieni, conjunctiva) pot fi observați si extrasi prin aspirate in cursul unui examen
oflamologic (ftmdoscopîv)

B. Diagnosticul de circumstanța orientativ.

Hctnoleucograma indica o hipereozinolilie (maxim 20-30%) mai ales in faza de migrare tisuîarea a embrionului
Biochimic I ( R este proteinorahic si hipoglicorahic; Examenul microscopic al L( R indica cozinotdee da ■

C. Diagnosticul imunologic util in screening si esie de certitudine !!!!!!!

Depistarea anticorpilor (lg(i specific din ser shngvin/ LCR in caz de neurocisticcruoza umoare apoasa in caz du
cisticcrcoza ocular) prin (este serologice (ELISA. Western hlot-E IT B):

OBScnatie: In neurocistiuercoza răspunsul imun al gazdei cal si sensibilitatea de dctcciic a anticorpilor variaza in funcție du
localizarea cisticeivilor.

E. Diagnosticul parazitologic se practica mai frecvent in cazurile de c/v/n un pro '-.ah< n/oihiui si exceptional
in cg.! al a l e ca zurj ,dc . c i s ticejr oza •
E X amen a n 3 tO rn O- P a (O log l C a piesei extrase chirurgical prin aspirate, cu identificarea cisticercului după capsula s.
prezenta scolexului in interior:

I. Diagnostic veterinar “ Examen anatoino-patologic al cărnii du porc sau vita eu identificarea cislicercilor
intra mu seu lari
Para z ho logic medicala LP5 h/w iniiy. \fiinftr hmciii

Diagnostic de laborator in Botriocefaloza (infecția eu

i
Diphyllobothrium latum )
estod

A. Diagnostic de circumstanța.
Hcmoleucogi ama indica o hipercozinofilie neregulata {in medie 30%). from boci tope mc si anemic meguloblaslica ten
rcticulocilo/a si megalocilc).

B. Diagnostic parazitologic
I. Materii fecale - Rxanicn coproparazitoloșic cu depistarea la MO a stadiului de ou pe prepaiaic pioaspcic I
din fecale cu SF’ soluție I. ugol.
OBScrvade: examenul copiwarazitologic iese pozitiv doar după ! luna postinfectic.

2. Examenul nuicroscopic al viermelui adult eliminat spontan sau m urma urnii iiaiament aniiHclminbc
(dimensiune, aspect proglote cu identificare scolex).

C. Diagnostic piscicol identificarea larvelor piei ocercoide in musculatura <au icrele pcstiloi ichitiofagi

Diagnosticul de laborator in Hymenolepidoza (infecția cu

Hymenolepis nana)
(Cestod)

A. Diagnostic de circumstanța. Heinoleucograma poale indica o hiperco/im-lilic k- maxim 15

B. Diagnostic parazitologic
I. Materii fecale Examen coproparazitolouic - permite identificarea Li mo stadiului de ou
preparate proaspete 1.1 din fecale si SF soluție L.ugol sau din fecale concentrate prin tehnica de flotai c \\ ilIB.

-• Biopsie icjtino-ileala in cursul unei endoscopii. Examen microscopic secțiuni hislopatologke

colorate (H&E) cu detecția de; cisticercoi/i iuti a\ ilozitari si fragmente de adu It i mix -.0 mucoasi IS

3. Examenul macro si microscopic al xiermilor acllllti eliminați spontan mu in urrna unui trainmen!
antihclmintic.
Parazitologie medicala LP6 Asist univ. Neagoe Ionela

Diagnosticul de laborator in Hidatidoza chistica (infecția cu

Echinococcus granulosus)
(CESTOD)

A. Diagnostic de circumstanța Hemoleucograma - uneori o creștere eozinofihca de pana r 10%

(eozinoiiha creste mai ales daca CH -chist hidaic - este fisurat/spart).

B. Diagnostic imagistic - important in monitorizarea evoluției hidatidei si chimioterapiei.

de rutina completate in funcție de caz de CT si RMN pentru vizualizarea leziunilor rotunde sau ovale cu
dimensiuni variabile (l-20cm) cu continui lichidian sau cu perete calcificat cu diferite locații viscerale.

6 stadii standard de evoiutie morfologica a CH (stabilite ecografic de OMS):

CL, CEI, CE2, CE3, CE4 si CE5 - facilitează recunoașterea diferitelor faze ale bolii: activa (CEI, CE2)
tranzitionala (CE3) si inactiva (CE4 si CE5)

C. Diagnosticul imunologic - de confirmare

!!!! Depistarea anticorpilor de faza cronica IgG/ lgG4 prin test ELISA + test DD5 (dubla difuzie arc5) / test
EITB (enzyme linked immunotransfer blot). Este de certitudine in marea majoritate a cazurilor.

OBServatie: Răspunsul imun al gazdei variaza in funcție de localizarea si viabilitatea CH si de multe ori serologia da
rezultate negative:
1. CH cu localizarea hepatica si cele fisurate sau rupte sunt intens imunogene;
2. CH osoase, cerebrale si ocular sunt mai puțin imunogene;
3. CH batrane, calcificate sau foarte tinere sunt foarte puțin sau deloc imunogene.

D. Diagnosticul paraziîologic -de confirmare in minatoarele Situații:

1. Postchirurgicai
a. Examenul macroscopic al piesei operatorii extrase intact sau a fragmentelor cuticulare;
b. Examenul microscopic lichid hidatic extras prin punctionarea piesei operatorii - la MO
pe preparte directe L H se depistează protoșcolescilor
OBServatie: Este interzisa punctionarea extraoperatorie sau biopsia CH - risc de diseminare si soc anafilactic !!!.

2. CH rupte posttraumatic (se recoltează diferite produse biologice in funcție de posibila localizarea a CH)
Examen microscopic sputa expectorata, vomica, hidaturie, materii fecale - cu depistarea
protooscolecsilor pe preparate proaspete L+l din aceste prelevate.

X Ii zeu? i, e1 <denUat- iivuEL'^h; ia5?c<£»!jcare .u! .HI* lil Cv> ui>. pui aGiii j;i*av)ue,
r-

copii sub 3ani).

Test PAIR - (tehnica alternative chirurgie, cu invazivitate redusa asociata profilaxiei cu albendazol pre si post
intervenție) consta in Punctionarea CH, Aspirarea lichidului hidatic, Injectarea de substanța protoscolicida (NaCl 15%
+ etanol 90%) si keaspirarea după 10-20minute a lichidului de spalare care este examinat microscopic pentru detecția
protoscolecsilor.

lichid hi-iatic, diferite produse biologice recoltate in cazul suspiciunii ruperii unui CH.

1
Parazitologie medicala LP6 Asist univ. Neagoe Ionela

Diagnostic de laborator in Fascioloza (infecția cu

Fasciola hepatica)
(TREMATOD)
A. Diagnostic de circumstanța
Heinoleocograma- hipereozinofilie periferica de pana la 80% (in faza de migrare tisulara a metacercarului).

B. Diagnostic imagistic
util in infecțiile cronice cu obstrucție biliara (adulti hepatici complet dezvoltați).
IJȘ/CT/RMN - permite vizualizarea adultilor hepatici răsuciți in cornet sau a unor leziuni bine definite, focalizate.

C. Diagnostic parazitologic
da rezultate pozitive doar in faza de obstrucție biliara după 3 luni post infecție.

Materii fecale.
a. Examen coproparazitologic - se identifica la MO a stadiului de ou pe preparate proaspete L+l din fecale cu
SF/solutie Lugol
OBServatie: in cazul consumatorilor de ficat crud de mile (purtător de vierme adult de Fasciola), examenul coproparazitoiogic poate da
rezultate fals-pozitive pentru Fascioloza datorita prezentei in fecale a asa numitelor “oua de pasaj” rezultate in urma masticarii a adultului de
fasciola odata cu ficatul de miel infectat. Se recomanda repetarea examenului coproparazitologic după 3 zile timp in care se evita consumul de
ficat crud de miel.
b. Test de determinare a viabilității oualelor eliminate si de determinare a eficientei
tratamentului se aplica in cazul subiecților diagnosticați cu Fascioloza care au făcut chimioterapie specifica.
Timp de 2/3 saptamani postterapie prin examen coproparazitologic se mai pot depista oua de Fasciola.

Metoda - test viabilitate oua Fasciola: Testul consta in realizarea unei suspensii din fecale si apa. Din 3 in 3 zile timp de 2 saptamani
pe preparate proaspete L+l din suspensie, la MO, se urmărește depistarea fie a oualelor moarte in urma tratamentului fie a stadiului larvar I =
miracidium rezultat din oule viabile (in acest caz este necesara repetarea dozei terapeutice)
Aspirat duodenal - la MO se depistează stadiul de ou
Țesut hepatic obtiîlUt bîoptic (prin colangiografie percutana sau intraoperatoriu sau necroptic).
Examen histopatologic - la MO- adulti, fragmente de adulti secționați cu dispoziție in cornet inconjurați de
numeroase eozinofile.

D. Diagnostic imur.ologic
i >e » 5cop de confirmare &
L

I. ’n 11ciii v,-onicp d ep i s ■ a te
ii
'f.

examen coproparazi to ’ ogic.

2. Depistarea anticorpilor anti Fasciola din ser sangvin prin teste serologice -ELISA. Este utila in faza
acuta de nd-rare tisulara a m* tacercarilor de la nivel intestinal in ficat (simptomatologie mai zgomotoasa) dar si
in monitorizarea chimioterapeutlca

3
 Parazitologie medicala LP Asist univ. Neagoe Ionela

Diagnosticul de laborator in infecțiile cu Schistosoma spp.

TREMATOD

A. Diagnostic de circumstanța.
Hemoleucograma - hipereozinofiiie ~30% (atinge nivel maxim duna ~2!uni postinfectie) + anemie instalata cronic;

. Diagnostic imagistic - este util jh fazeie cronice infecției.

a. US - permite evidențierea unei hepatosplenornegali nespecifi
- evidențiază ingrosarii +/- calcificari ale peretelui vezici urinare si ureterelor
Examenul buritat - zone de stenoza intestinala
c. Urografia -permite vizualiza rea calcificarilor din peretele vezicii urinare
nivelul peretelui colonului si vezicii urinare dar si a nbrozarilor periportale de la nivel
■>

d. C'T - evidențiază calci acari

&

hepatic

C. Diagnostic parazitologie - util in infecțiile cronice; se face in scop de confirmare !!!!!!.

î. Materii fecale - in cazul infecțiilor cu S.japonicum si S.mansoni:
Examen coproparazitologic
al. examen macroscopic al fecalelor- scaune cu striuri sangviolente sau scaune melenice (cu sânge digerat).
a2. examen microscopic al fecalelor -depistarea la M.O. a stadiului de ou

2. Urina - in cazul infecțiilor cu S.haematobium\ se recomanda sa se recolteze intre orele 10 si 14 (concentrație maxima
de oua eliminate).
a. examen macroscopic al urinei - hematuria
b examenul microscopic al urinei - depistarea la M.O a stadiului de ou pe preparate proaspete L+l din sediment urinar:

3. Biopsie tisulara polipii dezvoltați in peretele intestinului in cursul unei endoscopii (caz infecție
din:
cu S.japomcum) sau in cursul unei rectosigmoidoscopii (caz infecție cu S.mansoni); polipii dezvoltat) III peretele
vezicii urinare in cursul unei cistoscopii (caz infecție cu S,haematobium)\ granuloamele hepatice prin ghidaj
imagistic; la M.O se depistează - oua înconjurate de un infiltrat granulomatos

Di Diagnostic imunologic
a. Depistarea antigenelor din ser sangvin , urina/fecaie: utila in infecțiile cornice -in scop de !!!!!! confirmare
dar si de !!!! monitorizare a chimioterapiei!!!! prin test ELISA sau test imunocromatografic: da rezultate positive
in 95% din cazuri.
TU
C:
cu

prin te le
r isc de a da leaciii încrucișate cu anticorpii sintetizări de alte trematode.

Metoda - Reacției de precipitare circuniovala: Intr-un gel de agaroza in care s-au decupat godeuri se pune suspensia antigemca =
oua; se adauga serul pacîentulu*. Dacr e Jsts anticorpi specifici se or forma complexe imune Ag-Ac evidențiate prin apariția unor
arcuri de precipitare in jurul fiecărui godeu.

nte depistarea prin test PCR a ADN «tar

diagnostic ecolog dep; in apa a lurcoccrcanlor.
ar

1
Parazitologie medicala LP7 Asist univ. league Ionela

Diagnostic de laborator in Ascaridioza (infecția cu

Ascaris lumbricoides)
NEMATOD

A. Diagnostic de circumstanța
Examenul microscopic al sputei - eozinofile + cristalele Charcot-Leyden (au aspect romboidal si rezulta din
asocierea miezurilor cristaloide rezultate din degradarea granulatiilor acidofile din citoplasmă eozinofllelor acumulate
in zonele congestive induse de larva).
Hemoleucograma - eozinofilie periferica -25%.

B. Diagnostic imagistic
a. Rx pulmonar util in faza acuta a infecției de localizarea tisulara a larvelor;
poate indica mici infiltrate migratori cu aspect nodular care insotesc larvele prin traseul lor prin plaman (migrare
specifica sindromului Loffler).
b. Examen baritat util in fazele cornice - depistarea adultilor cu aspect de linii intunecate pe un fond luminos.

C. Diagnostic parazitoiogic - este de certitudine !!!!!!

1. Materii fecale
Examen coproparazitologic: da rezultate pozitive doar după 2 luni postinfectie permite identificarea la MO a
stadiului de ou fertil/nefertil pe preparate proaspete din fecale cu SF/solutie Lugol sau din fecale concentrate
tehnica de flotare Wilis.

Examen macroscopic al adultilor eliminați spontan /prin tratament antihelmintic prin anus, cavitatea
bucala/nazala sau obținuți in urma unei intervenții chirurgicale, necropsii sau in cursul unei endoscopii.

2
Parazitologie medicala LP7 Asist univ. Neagoe Ionela

Diagnostic de laborator in Toxocaroza / Larva Migrans

Visceralis - LMV (infecția cu Toxocara cati/canis)
NEMATOD

A. Diagnostic de circumstanța
Hemoleucograma - hipereozinofilie periferica 60-80% - se menține constanta o perioda si după inițierea
chimioterapiei.
Test ELISA indica un număr ridicat al IgE totale.
Examenul microscopic al sputei - prezenta cristalelor si Charcot-Leyden.

Diagnostic imagistic
Rx pulmonar premite evidențierea unor infiltrate leucocitare, heterogene, migratorii de tip Loffler
US abdominal sau CT/RMN, abdominal sau cerebral permite evidențierea leziunilor granulomatoase
eozinofilice cu arii de necroza centrala si edem periferic
c. Oftalmoscopia indirecta permite evidențierea benzilor de tracțiune induse de larva (au caracter patognomonic)
de la nivelul granulomului retinian spre zona maculara/vitros/discul optic.

C. Diagnostic imunologic - de certitudine !!!!!

!!!! Depistarea anticorpilor specifici IgM si IgG din ser sangvin, LCR, umoare apoasa in fuctie de caz in teste cu
specificitate mai mare de 90% (ELISA, Western-Blott)

D. Diagnostic parazitologie - nu se practica de rutina

Biopsie de organ - punctie din nodulii suspecti cu ghidaj imagistic (invaziva, nerecomandata).
Examinarea histopatologica a granulomului eozinofilic cu larve (abces central cu eozinofile si cristale Charcot-
Leyden si capsula granulomatoasa fibroasa la periferie).

E. Diagnostic veterinar
Examen coproparazitologic - stadiul de ou in fecalele câinelui sau pisicii.
Examen macroscopic al viermilor adulti eliminate spontan de caine/pisica.

3
Parazitologie medicala LP7 Asist univ. Neagoe Ionela

Diagnostic de laborator in Trichocefaloza (infecția cu

Trichuris trichiura)
NEMATOD

A. Diagnostic de circumstanța.
Hemoleucograma - anemie si eozinofilie moderata in infecțiile severe.

B. Diagnostic parazitologie - de certitudine!!!!!

a. Materii fecale
Examen coproparazitologic - depistarea la MO stadiul de ou (pe preparate directe din fecale cu SF/solutie Lugol
sau din fecale concentrate prin tehnica de Hotare Willis).

b. Examen macroscopic al adultilor liberi eliminați in fecale in uma unui tratament antihelmintic sau fixați de
mucoasa ulcerata (in cazul unui prolaps rectal sau in cursul unei rectosigmoidoscopii).

Diagnostic de laborator in Oxiuroza (infecția cu

Enterobius vermicularis / Oxiur)
NEMATOD

A. Diagnostic de circumstanța.
Hemoleucograma - eozinofilie de -15% (maxima la - 3 saptamani postinfectie).

B. Diagnostic parazitologie - de certitudine!!!!!

a. Materii fecale
Examen coproparazitologic- depistarea la MO a stadiului de ou (pe preparate proaspete L+l din fecale cu
SF/solutie Lugol sau din fecale concentrate prin tehnica de flotare Willis).
cr

Tehnica amprentarii anale/Scotch Test/Test Graham (vezi diagnostic Tenia sp.) se depistează stadiul de ou

c. Examen macroscopic si microscopic al viermilor adulti (femelele adult), liberi in fecale, eliminați in urma unui
tratament antihelmintic / fixați la nivelul mucoasei anale/vulvare / atasati la nivelul mucoasei colonului
(sigmoidoscopie).

4
Parazitologie medicala LP7 Asist univ. Neagoe Ionela

Diagnosticul de laborator in trichineloza (infecția cu

Trichinella spiralis)
NEMATOD

A. Diagnostic de circumstanța
Hemoleucograma - hipereozinofilie de la 20% pana la 90% in infecțiile severe (după 3 saptamani postinfectie
incepe sa scada)

B. Diagnostic îmunologic — de certitudine !!!!!!- da rezultate pozitive după 3 saptamani posinfectie.

!!! Depistarea anticorpilor specifici circulanti prin test ELISA, IF, Western Blot, Reacție de precipitară
circumlarvara

Metoda reacție de precipitare circumlarvara: larvele obținute prin digestie peptica a pilierilor diafragmatici de cobai infectați
cu Trichinella, sunt puse si menținute 24h in contact cu serul pacientului. .Daca in ser sunt anticorpi apar precipitate antigen
anticorp la orificiile naturale ale larvelor.

C. Diagnostic parazitologie
1. Țesut muscular recoltat bioptic / necroptic da rezultate pozitive doar după 3-4 saptamani postinfectie.
Recoltarea se face din mușchii soleari, deltoid, intercostali, diafragm.

a. Examen trichineloscopic - lem2 tesut muscular este comprimat in 2 lame compresor; la MO / trichineloscop
se pot depista larve inchistate in citoplasmă fibrelor musculare (la 5-6 saptamani postinfectie)

b. Examen de digestie peptica artificiala - consta in digestia țesutului muscular cantarit cu 1% HC1 +1%
pepsina. Se fac preparate proaspete din lichidul de digestie. La MO se determina si incarcatura parazitara
(numărul de larve/gram tesut),

2. Materii fecale
Examen coproparazitologic da rezultate pozitive numai in prima saptamana postinfectiei. La MO se depistează
adulti si foarte rar larve.

5
>arazitologie medicala LP8 Asist univ. Neagoe Ionela

Diagnostic de laborator in Ancilostomioza si Necatoroza

(infecția cu Ancylostoma duodenale si Necator
americanus)
(NEMATOD -Hookworm)
A. Diagnostic de circumstanța
Teste pentru hemoragii oculte - test Adler sau teste imunocromatografice pentru depistarea prezentei sângelui digerat
in fecale.
Hemoleocograma: anemie hipocroma microcitara (feripriva) + hipereozinofilie de ~ 40%.
Endoscopie: evidențierea leziunilor hemoragice oculte in peretele IS

B. Diagnostic parazitologic - de certitudine .

!. Materii fecale
a. Examen coproparazitologic -la MO - stadiul de ou (pe preparate proaspete L+l sau preparate din fecale
concentrate prin tehnica de flotare Willis)
b. Larvoscopie -in scop de confirmare a examenului coproparazitologic se urmărește depistarea stadiului de larva
rhabditoida!!!! prin Coprocultura cu cărbune vegetal in cutii de plastic cu capac etanș :

Metoda Coprocultura pe cărbune: 1. Pasta cărbune vegetal + fecale se amesteca in cantitati egale 2. In mijlocul cutiei se pune
amestecul si se modelează o forma conica astfel incat după inchiderea cutiei capacul sa atinga vârful conului. 3. Pe capacul cutiei
inchise etanș se aseaza o bucata de vata imbibata in apa. 4. Coprocultura se menține la temperatura camerei sau la termostat la 26 oC.
5. După 2 zile se face prima examinare cu o lupa binoculara sau la stereomicroscop;
6. se urmărește depistarea larvelor rhabditoide acumulate in picaturile de apa condensate sub capacul cutiei (prin evaporarea apei
din vata, cutia se răcește, apa din fecale se evapora si condensează sub capac; larvele rhabditoide au geotropism negativ - se
indeparteaza de amestecul de cărbune, au hidrotropism pozitiv si tigmotropism pozitiv se acumulează in picaturile de apa condensate
sub capac).

2, Aspirat duodenal -obtinut prin tubaj in cursul unei endoscopii sau prin capsula enterotest (vezi diagnostic
Giardia lamblia). Examen microscopic sediment duodenal: depistarea stadiul de ou, foarte rar larve strogiloide.

Diagnosticul de laborator in Larva Migrans Cutanata -

LMC (infecția cu Ancylostoma caninum)
(NEMATOD -Hookworm)

Diagnostic parazitologic
a. Examen macroscopic al traselor sinuoase, congestionate sau leziunilor cutanate deschise in urma pruritului.
b. Examen microscopic al țesutului cutanat recoltat biuptic din zoua vtvicuA,pufuda?. a cordonului
serpinginos - la MO se depistează larve strogiloide inconjurate de eozinofile.

1
arazitologie medicala LP8 Asist univ. Neagoe Ionela

Diagnostic de laborator in Strongiloidoza/Anghiluloza

(infecția cu Strongiloides stercoralis)
(NEMATOD)

A. Diagnostic de circumstanța
Examen de digestie util in faza cronica când sau format adultii -poate indica o malabsortie lipidica, glucidica,
proteica.
Hemoleucograma poate indica in faza incipienta a infecției o hipereozinofilie periferica fluctuanta de 10-25%.
B. Diagnostic parazitologic
L Materii fecale.
a. Examen coproparazitologic permite depistarea la MO a larvelor rhabditoide si exceptional larve
strongiloide.

b. Coprocultura cu cărbune vegetal in cutii închise ermetic (vezi metoda la diagnostic Ancylostoma
duodenale), sau coprocultura pe mediu cu agar in placi Petri - pentru depistarea larvelor strongiloide!!!!!

După 48-72h de la insamantarea pastei de cărbune vegetal + fecale pe mediul de agar in placi Petri - se pot
depista la stereomicroscop larve stongiloide de Strongyloides +/- adulti masculi si femele (stadiul de adult
liber).

2. A s p i r a 1 d u < xlen a I recolat prin tubaj duodenal sau capsula enterotest - la MO larve rhabditoide.
3. Biopsie jejunala - Examen histopatologic - viermi adulti 4- larve rhabditoide

4. sputa expectorate. lichid pleuraL urina, I.Ă I<- in caz de Strogiloidoza generalizata la
imunosupresati; la MO - larve strongiloide.

C. Diagnostic imunologic
Depistarea anticorpilor specifici din ser sangvin sau LCR (caz de strongiloidoza diseminata la imunosupresati)
prin teste ELISA, Western Blot. Este util in monitorizarea chimioterapiei si evoluției bolii.

D. Diagnostic genetic depisatarea ADN-ului parazitar prin test PCR din fecale, sânge.

2
arazitologie medicala LP8 Asist univ. Neagoe Ionela

Diagnosticul de laborator in Filarioza bancroftiana si

Filarioza malaeziana (infecția cu Wuchereria bancrofti si
Brugia malayi) FILĂRII LIMFATICE =NEMATODE EVOLUATE
A. Diagnosticul de circumstanța Hemoleucograma-indica o hipereozinofilie periferica de peste 30%, ( -
80% in Sindromul eozinofilic tropical de tip pulmonar)

B. Diagnosticul imagistic - cu rol in screening, monitorizarea evoluției bolii postehimioterapie.

US- detecția viermiilor adulti in ducturile limfatice dilatate; US testiculara = “semn al dansului filariei”- semn
pathognomonic in filarioza cu Wuchereria bancrofti
Rx -vizualizarea viermilor adulti morti, calcificati in ducturile limfatice; Rx pulmonar -infiltrate leucocitare difuze
stabile/mobile induse de larve;
Limfangiografla cu substanța de contrast uleioasa -vizualizarea vaselor limfatice dilatate/ cu stenoze/ cu rupture
parietale;

C. Dignosticul parazitologic
1. Sânge periferic (capilari sau sânge venos recoltat pe EDTA
In infecția cu Wuchereria bancrofti, recoltarea sangvina se face nocturn intre orele 10pm-2am;
In infecția cu Brugia malayi, recoltarea sangvina se poate realiza la oricare ora a zilei
Examen hematologic - se practica de rutina. La MO se urmărește depistarea microfilarilor pe:
a) preparat proaspăt L+l din sânge;
b) ?!!îfrotiu din sânge si picătură groasa din sânge colorație Giemsa (vezi diagnostic Trypanosoma);
c) preparate din sânge concentrat prin diferite tehnici de concentrare utile in microfilaremiile mici!!! :
c 1) Leucoconcentrat (vezi diagnostic Trypanosoma)',
c2) QBC test (vezi diagnostic Plasmodium)',
c3) Tehnica filtrării prin membrana:
Metoda tehnica filtrării prin membrana 1.Sângele se filtrează prin seringi cu filtru Nucleopore (porii de 5pm); 2.Filtrul este tratat
cu methanol (pentru fixarea eventualelor microfilarii); 3. Se scoate filtrul din seringa, 4. se pune pe o lama de microscop, 5. se lașa sa
se usuce, 6. se colorează Giemsa, 7. se examinează la MO;

c4) testul Mazzotti = test de provocare farmacologica cu concentrarea fortata a microfilarilor in sângele periferic.
Metoda test Mazzotti: Se administrează 1 singura doza (2-6mg/kg corp) de dietilcarbamazina - DEC (acțiune fîlaricida cu risc de
hipersensibilitate de tip IV severa - eritem si prurit 24h); sângele se recoltează după 15-45 minute postadministrare si se examinează
microscopic prin metodele de mai sus.

2. Exudat ganglionar si smovial, lichid de hidrocel, linifo-ascita. chikdorax -la MO- microfilarii

D. Diagnostic imunologic - in scop de confirmare

1. Anticorpi specifici circulând -prin teste ELISA:
detecție de IgE la subiecții cu Sindrom eozinofilic tropical pulmonar
detecție de IgG la subiecții cu Elephantiasis.
Dezavantaj - poate da uneori reacții incrucisate cu anticorpi sintetizați fata de alte filării

Antigene circulante -prin teste ELISA, test imunocromatografic - de mare sensibilitate - foarte util in:
tu

!!!!monitorizarea chimioterapiei / cazul in care examenul hematologic da rezultate fals negative / situația in care
nu se poate recolta sânge periferic in perioada tipica infecției cu Wuchereria bancrofti.

E. Diagnostic genetic — prin test PCR se identifica ADN microfilarii extras din diferite produse biologice umane,
inclusive din organismul insectei vector.

3
 arazitologie medicala Asist univ. Neagoe Ionela

Diagnostic de laborator in Onchocercoza (infecția cu

Onchocerca volvulus)
FILARIE SUBCUTANATA = NEMATOD EVOLUAT

4. Diagnostic de circumstanța
Flemoleucograma - hipereozinofilie de peste 30% - se menține ridicata pe tot parcursul infecției;
Detecția prin palpare a nodulilor subcutanati

B. Diagnostic imagistic
Rx/US - permite evidențierea nodulilor subcutanati (onchocercoame) de dimensiuni mici, uneori calcificati, neidentificati prin
palpare.
Siomicroscopie - numararea prin retroiluminare a microfîlarilor in camera anterioara sau la nivelul corneei.
Examenul fundului de ochi - decolare retiniana.

C. Diagnostic parazitologic
£ Biopsie cutanata ex-sawgvfaa (superficiala) - se executa din zonele pruriginoase +/- modificări de
rnelanogeneza. La M.O pe preparate proaspete din tesut cutanat +SF = microfilarii

X- Racla) sclertJ-corneean? umoare apoasa in caz de keratita; la mo-microfilarii

Tehnica invaziva, de mare importanta (prin indepartarea adultilor este prevenita orbirea precocee provocata de microfilarii - mai
ales la cei la care nodului s-a dezvoltat proximal).
Examen macroscopic a! viermilor adulti in tesut fibrotic.
Examen histologic- adulti secționați transversal +/- microfilarii;

4. DEC Patch Test =Testul plasturelui cu DEC - nu are aceeași sensibilitate de detecție ca biopsia cutanta si
îodulectomia
Metoda DEC Patch test: l.Se aplica locala (pe pielea soldului) o crema pe baza de DEC10%(dietilcarbamazina) 2. Se acopera cu un plasture.
3. reacție pozitiva pentru infecție = dermatita locala generata de microfilariile moarte.

D. Diagnostic imunologic - util in infecțiile ușoare

â) depistarea Anticorpilor specifici IgE din sânge - prin teste ELISA. Are valoare limitata deoarece poate da reacții cu
mticorpi sintetizați fata de alte filării subcutanate.

b) depistarea !!!!!! Antigenelor specifice din urina, exudat dermic, lacrimi, ser sangvin prin test ELISA, test Western blot.

F. Diagnostic genetic - depistarea prin test PCR de ADN parazitar izolat din tesut dermic recoltat bioptic, umoare
apoasa, tesut de raclaj comean, insecta vector.

4
Parazitologie medicala LP9 itniv. \‘etif»oe Ionela

FILĂRII SUBCUTANATE

Diagnosticul de laborator in filarioza Loa-loa

A. Diagnostic circumstanța
Hemograma - hipereozinofilie periferica de peste 50% - se menține ridicata pe tot parcursul infecției;
Apariția tranzitorie a edemului de Calabar

. Diagnostic parazitologic
r a

- recoltat diurn intre 1 Oam-14pm

a) Examen hematologic - depistarea la MO a microfiiariiior pe preparate directe L H din sânge proaspăt dar si pe frotiuri
/ picaturi groase colorate Giemsa
b) In microfilaremiile mici - teste de concentrare ale sângelui recoltat (vezi diagnostic filării limfatice): testul de
concentrare fortata in sângele periferic - Test Mazotti

2. Examen macroscopic al viermilor adulti extrasi prin intervenție chirurgicala de la nivelul conjuctivei
globului ocular sau prin biopsie subcutana

C. Diagnostic imunologic
a) depistarea anticorpilor circulant! specifici IgG si IgE prin teste ELISA. Risc de reacții incrucisate cu anticorpi anii
alte filării
b) depistarea antigenelor circulante prin Western blot

D. Diagnostic genetic - util mai ales in screeningu! subiectiilor suspectați de o infecție activa cu Loa-loa. Prin
nested PC R creste sensibilitatea de detecție a infecțiilor oculte cu loa-loa

Diagnosticul Dracunculoza (infecția cu Dracunculus

c

medinenesis)

A. Diagnostic imagistic
Rx depistează adulti calcifîcati. morti, femele sau masculi, in tesutul subcutanat.

B. Diagnostic parazitologic
macroscopic al femelei adult - extrasa chirurgical sau prin tehnica ncconventioiuila Avicenna -
practica tradiționala de rulare a femelei adult cate 2-3cm/zi. Extragerea completa necesita 6 saptamani Risc de complicații
prin suprainfectii bacteriene (abcese subcutanate, gangrene locale, artrite, sinovite. septicemii, tetanos) in cazul in care
femela se rupe/moare.
2. Examen microscopic ai microfiiariiior in lichidul (fluidul uterin albicios, eliminat du femela m contact cu apa
calda) recoltat de la nivelul uleerafiilor

C. Diagnostic imunologic
Depistatarea anticorpilor specifici IgG si IgE prin test ELISA, Western Blot

2
Parazitologie medicala LP9 .-1.V/57 ww/y. Xeagoc Iturchs

ECTOPARAZITI

Diagnosticul de laborator in Scabie/Raie (infecția cu

Sarcoptes scabiei)
Diagnostic parazitologie
a) Examen macroscopic/ cu ajutorul unei unei lupe binoculare a tunelurilor sapate de adulti

b) Examen microscopic al țesutului cutanat recoltat bioptic prin raclaj de la nivelul veziculelor perlate
depistarea tuturor stadiilor pe preparate directe L-H din tesut cutanat omogenizat intr-o picătură de KOH 10" <>

c) Derniatoscopia este o noua modalitate de diagnostic mult mai facila, permițând detecția adultilor (cu aspect
triunghiular in căpătui tunetelor).

Diagnosticul de laborator in infecția cu Ixodes sp. (capuse)

Diagnostic parazitologie
Examenul macroscopic sau cu ajutorul unei lupe - a adultilor, larvelor si nimfelor

a) Extracția adultilor vii din derm cu ajutorul unei pensete cat mai aproape de piele printr-o mișcare scurta dar ferma.
Daca capusa nu este suficient hrănită, in urma îndepărtării, exista riscul rămânerii rostrului in derm cu instalarea unei
eventuale suprainfectii bacteriene cu abces.
Obs: Se interzice omorârea mecanica sau chimica a adultului inainte de a fi indepartat deoarece pe langa intensificarea
reacțiilor alergice, senzației de usturime si prurit exista riscul ca artropodul sa inoculeze si mai multe toxine, bacterii,
virusuri sau paraziti {Babesia sp.) odata cu saliva anticoagulanta.

b) Larvele si nimfele - pot fi îndepărtate fie mecanic cu ajutorul unei pense (de recomandat pentru nimfe care sunt
capabile de a transmite patogeni) fie prin imersare zonei afectate in apa calda in care s-a dizolvat bicarbonat de Na.

Diagnosticul de laborator in Pediculoza corpului, capului,

pubiana (infecția cu Pediculus humanus corporis,
Pediculus humanus capitis, Phthiriiis pubis)
Diagnostic parazitologie
Examen macroscopic sau cu o lupa a adultilor/ larvelor/ oualor (fixate pe firele de par), cu identificarea genului
si speciei după morfologia lor.