PARAZITOLOGIE MEDICALA

AN UNIVERSITAR 2014-2015

LP 1

EXAMENUL
COPROPARAZITOLOGIC

1.examen macroscopic;

2.Examen microscopic:
metode

directe (preparat nativ n ser fiziologic; preparat

nativ n soluie lugol; frotiu colorat);
metode de examinare n strat gros: Kato i Miura;
metode de concentrare: metode de flotaie;
metode larvoscopice;
amprenta anal;

3.Detectarea ADN-ului - reacii de hibridizare,

amplificare genic (PCR)

EXAMENUL COPROPARAZITOLOGIC

examenul parazitologic al materiilor fecale este o metoda de

diagnostic folosita pentru evidentierea parazitilor cu
localizare intestinala (protozoare, helminti);

frecvent se elimina ouale si larvele parazitilor, precum si

chistii si trofozoitii de protozoare; acestea sunt elemente
vizibile numai microscopic;

in infectiile masive se elimina viermii adulti vizibili cu ochiul

liber.
3

RECOLTAREA SI TRASPORTUL PROBEI

Recoltarea probei de materii fecale pentru examenul

parazitologic se va face din:
scaunul

emis spontan;

scaunul

obtinut dupa administrarea in prealabil a unui

purgativ salin in doza laxativa, pentru a antrena trofozoitii de
la nivelul ulceratiilor intestinale (pentru depistarea
protozoarelor intestinale, la bolnavii cronici si la purtatorii
asimptomatici).
4

RECOLTAREA NECESITA URMATOARELE

PRECAUTII:

sa se recolteze o cantitate minima de ~ 5-10g din mai multe

locuri ale bolului fecal

sa se recolteze orice fragment cu aspect suspect,vizibil

macroscopic.

cand se elimina parazitul intreg (Ascaris, Oxyuris) sau

fragmente (proglote de tenii), acestea se recolteaza cu o
pensa si se introduc intr-un coprocultor cu ser fiziologic.

recoltarea trebuie sa se faca in prima ora de la evacuare (mai

ales cand urmarim sa decelam trofozoiti de protozoare(E.histolitica, Balantidium coli, Lamblia)

RECIPIENTE COLECTOARE SI TRANSPORTUL

PROBEI:

recoltarea probelor se face in colectoare speciale furnizate de

laborator (coprocultor),care nu trebuie sa fie steril si nici sa
contina mediu de transport;

este recomandabil ca proba sa fie expediata la laborator in

maxim 2-3 ore de la recoltare;

cand nu exista posibilitatea expedierii:

vor

fi pastratate la +40C (temperatura de +40C asigura o

conservare a oualor de helminti si a chistilor de protozoare pentru
cateva saptamani)
conservate in solutii fixatoare (formol 10%, iod).

COPROCULTOR

EXAMENUL MACROSCOPIC

Examenul de ansamblu al materiilor fecale, facut imediat cu

ochiul liber sau cu lupa, poate furniza date de diagnostic privind:
culoarea;
consistenta;
mirosul;
prezenta

de elemente patologice (puroi, mucus, sange)- mucozitatile

sanguinolente atrag atentia asupra unei eventuale amibiaze sau
balantidioze;

prezenta

parazitului (Ascaris, Oxyuris) sau fragmente din parazit

(proglote de tenie).

EXAMENUL MICROSCOPIC
Preparatele examinate la microscop se obtin prin:
1.Metode directe:
Preparatul nativ -in ser fiziologic
-in solutie lugol
Frotiul colorat
2. Metode de examinare n strat gros: Kato i Miura
3.Metode de concentrare: Metoda Willis-Hung
Metoda Bailenger
4. Metode larvoscopice
5. Amprenta anal

EXAMENUL MICROSCOPIC

10

A. PREPARAT NATIV N SER FIZIOLOGIC:

este preparatul umed, ntre lam i lamel;

se realizeaz o suspensie de materii fecale n ser

fiziologic;

examinarea se face cu microscopul optic, cu obiective

uscate, condensator cobort;

permite studierea:
mobilitii,
morfologiei.

11

B.PREPARAT NATIV N SOLUIE LUGOL

la preparatul nativ n ser fiziologic se adaug o pictur

de soluie lugol;

chistii protozoarelor se coloreaz n galben-brun, oule

de helmini n brun-rocat intens

12

C.FROTIUL COLORAT

se efectueaz un frotiu subire pe o lam din

materiile fecale diluate n ser fiziologic;
se coloreaz MGG ( May Grunwald Giemsa) i se
studiaz la microscopul optic cu obiectiv cu
imersie, cu condensator ridicat;
se pot decela trofozoii (nucleul rou, citoplasma
violet-albastr) sau chiti.
13

2. METODE DE EXAMINARE N STRAT GROS:

KATO I MIURA

se recomanda pentru decelarea oualor de

helminti cu localizare intestinala:
Ascaris

lumbricoides,
Trichuris trichiura,
Taenia spp;

- examinandu-se o cantitate mai mare de materii

fecale, creste probabilitatea de depistare a oualor,
chiar si in cazul infestarilor cu eliminare redusa
a acestora in materiile fecale;
- majoritatea oualor isi pastreaza caracteristicele
morfologice, fiind usor de identificat.

14

Metode de examinare n strat gros: Kato i Miura

Tehnica:

50 mg materii fecale (ct un bob de gru) se depun pe o lam de

sticl;

se acoper cu o foi de celofan tratat n prealabil cu soluie KatoMiura (soluie de glicerin i verde de malachit);

se preseaz celofanul cu un corp solid pn cnd preparatul devine

plat;

se las 30 minute pe mas, timp n care materiile fecale sunt

clarificate de soluie lasnd s se vad prin transparen oule de
helmini;

se examineaz la microscopul optic, cu obiective uscate;

oule sunt de 5-20 ori mai frecvente dect n preparatul nativ.

15

3.METODE DE CONCENTRARE: METODE DE

FLOTAIE

Se clasific n 2 grupe dup principiul lor de baz:

ridicarea elementelor parazitare dintr-un mediu lichid

hiperton (principiul flotaiei Metoda Willis-Hung);

coborrea elementelor parazitare ntr-un mediu hipoton,

cu un anumit pH (principiul centrifugrii- Metoda de
concentrare Bailenger).

16

METODA WILLIS-HUNG

se recomanda pentru decelarea oualor usoare de helminti

Taenia,
Hymenolepis.

17

METODA WILLIS-HUNG
Tehnica:
se

pune 1g materii fecale intr-un flacon de sticla peste care se

adauga o cantitate mica de solutie Willis;
se

omogenizeaza bine cu o bagheta de sticla dupa care flaconul

se umple complet cu solutie Willis pana se formeaza un usor
menisc;
se

aplica deasupra flaconului o lamela de sticla;

se

lasa 10-15 min, dupa care se ridica vertical lamela si se

aplica cu fata cu care a stat in contact cu lichidul pe o lama;
preparatul

obtinut se examineaza imediat la microscop pentru a

evita uscarea si cristalizarea solutiei saturate pe lama.

18

METODA DE CONCENTRARE BAILENGER

este indicata pentru evidentierea oualor grele de

helminti:
Ascaris,
Trichocephalus,
Fasciola,
Dicrocelium.

si a chistilor de protozoare:
Entamoeba,
Lamblia (Giardia).

19

METODA DE CONCENTRARE BAILENGER

Tehnica:
intr-un

borcan cu dop de 50 ml care contine cateva perle de sticla se pun 2 g

de materii fecale peste care se adauga 20 ml solutie aceto-acetica;
se

inchide bine recipientul si se agita manual 1-2 min;

peste

emulsia rezultata se adauga o cantitate de 10 ml eter sulfuric,

se inchide bine recipientul si se agita din nou 1-2 min;

se

toarna amestecul intr-o eprubeta de centrifuga si se centrifugheaza 1-2

min la 1500 TPM;
dupa

centrifugare din sedimentul format se fac preparate intre lama si

lamela si se examineaza la microscop cu ob x10 si x40.

20

4.METODELE LARVOSCOPICE

sunt utilizate n suspiciunea unor helmintiaze care se

transmit prin sol sub form de larve;

constau n evidenierea larvelor existente n scaun, sau a

larvelor rezultate din oule eliminate n mediul extern
odat cu scaunul.

21

5. AMPRENTA ANAL

se realizeaza inaintea defecatiei si igienei locale;

este metoda cea mai buna pentru diagnosticul oxiurozei

si teniazei cu Taenia saginata.

22

Metoda Graham:
Tehnica:
se aplica o bucata de celofan adeziv (tip scotch) pe o lama de sticla;

se pune lama pe manerul unei baghete de sticla cu capatul rotunjit,

cu banda adeziva deasupra, apoi se trage incet celofanul peste
capatul baghetei;

se tine cu mana dreapta strans lama de bagheta si cu extremitatea cu

celofan se sterg pliurile anale;

se ia deoparte bagheta si se intinde inapoi celofanul adeziv, prin

presare cu un tampon de vata;

se examineaza preparatul obtinut la microscop cu ob. x10.

Metoda Hall:
are acelasi principiu ca si metoda Graham, dar, banda adeziva este
inlocuita cu celofan.

23

Metoda Graham

24

DETECTAREA ADN-ULUI

Diagnosticul molecular consta in evidentierea ADN-ului

parazitar, utilizandu-se ca primeri, secvente de ADN
specifice, folosind reactii de polimerizare in lant
(tehnica P.C.R. - polymerase chain reaction).

Metodele de extragere a ADN-ului se bazeaza mai ales pe

fragilizare fizica sau chimica a peretelui formatiunii
parazitare.

Purificarea ADN-ului se realizeaza prin metode clasice.

25

Entamoeba
coli

Petite Douve
segmente
embryonne

Entamoeba
histolytica

Entamoeba Endolimax
hartmanni

Bothriocphale

Trichocphale

Taenia

Oxyure

Giardia

Chilomastix

Hymenolepis
nana

Ankylostome

Dipylidium

26