DIAGOSTIC IN VIROZE

RESPIRATORII
VIROZE RESPIRATORII
Sindrom Virusuri frecvent
asociate
Etiologii
infrecvente
IACRS Rhinovirusuri,
Coronavirusuri
V. paragripale,
enterovirusuri,
adenovirusuri
Gripa Orthomixovirusuri
Crup V. paragripale Orthomixov,
VRS,
adenovirusuri
Bronsiolita VRS Orthomixo-;
paragripale;
adenovirusuri
Bronho-
pneumonie
Orthomixovirusuri
VRS,
Adenovirusuri
Virusuri
paragripale
v. rujeolos,
VZV, CMV



Diagnostic in infectia cu
virusuri gripale

Orientare clinica
febra (3-5 zile), mialgie, cefalee, astenie
(>2 saptamani), tuse neproductiva,
faringita, rinoree.
Gripa nu se diagnosticheaza clinic.
Simptomatologie asemanatoare cu infectii determinate de:
Mycoplasma pneumoniae, adenovirusuri,
virusul respirator sincitial, rhinovirusuri,
virusuri paragripale, si Legionella spp.

ORTHOMIXOVIRUSURI-V. GRIPALE A, B, C
myxa-mucus
tip A, B, C : NP, M
subtipuri: HA si NA 15 tipuri de HA si 9 de NA

Matrice
Nucleocapsida helicoidala
ARNss
HA - hemaglutinina
transcriptaza
anvelopa
NA - neuraminidaza
Produse patologice :
a) spalatura nazo faringiana se obtine cu
ajutorul unor tampoane cu coada (sterile)
introduse in cornetul nazal inferior.
b) aspiratul nazofaringian se obtine folosind
un speculum nazal prin administrarea a 3 ml ser
fiziologic in nari cu o seringa atasata la un tub de
plastic.
c) lavaj traheobronsic se obtine prin
bronhoscopie in conditii speciale de catre personal
calificat

Pentru a mari sansa de izolare probele se recolteaza
in primele 72 ore de la debutul infectiei.



Produse patologice
Exsudat naso-faringian/SNF
Recoltare. tampon steril - recoltare secretii de pe peretele
posterior si lateral al orofaringelui si din orice arie adiacenta cu
inflamatie, exudat sau ulceratie. Se evita atingerea tamponului
de limba, obraji sau buze pentru evitarea contaminarii;
recoltarea nazala se obtine cu ajutorul unui tampon cu coada
introdus in cornetul nazal inferior.
Stocare si transport. Optim se inoculeaza imediat dupa
recoltare. Daca aceasta nu este posibil se ingheata la -70 C si
se transporta pe zapada carbonica
Prelucrare. Tamponul este dispus intr-un tub steril cu circa 15
ml mediu de transport pentru virusuri si 2% SFV minim o ora,
timp necesar elutiei virusului. Tubul se centrifugheaza la 2500
g, 15 minute, la 4 C. Supernatantul este indepartat si
sedimentul este resuspendat in 3-4 ml TFS sau mediu de
cultura. Spalarea celulelor se poate repeta pentru indepartarea
urmelor de mucus din secretii. In final depozitul de celule reluat
in TFS serveste pentru izolare virala sau pentru efectuarea de
frotiuri ce vor fi testate in imunofluorescenta cu intreaga baterie
de seruri antivirale disponibile.
Diagnosticul de laborator al gripei
Directii de diagnostic
Izolare virala + identificare

Detectie directa
antigene virale- RIF
acid nucleic- PCR

Diagnostic serologic
1.-culturi primare de rinichi
de maimuta rhesus.
-linia continua epiteliala
de rinichi de caine (MDCK
- Madin-Darby Canine
Kidney).
2. pe ou de gaina embrionat,
de 9-11 zile, inoculat
intraamniotic sau
intraalantoidian.
Izolare virala diagnostic de electie

Hemadsorbtia
demonstreaza izolarea v.gripale
pe culturi de celule
Virusurile gripale nu sunt
citopatogene.
La 48 ore dupa inocularea v.
gripal se incearca detectia
virusului prin hemadsorbtie,
obisnuit cu eritrocite de
cobai la 4 C.
Hemadsorbtia rezulta din
incorporarea in membrana
plasmatica celulara a HA
virale. Hematiile adsorbite
specific rozeteaza la
periferia celulelor infectate.
1.-culturi primare de rinichi de
maimuta rhesus.
-linia continua epiteliala de
rinichi de caine (MDCK -
Madin-Darby Canine
Kidney).
2. pe ou de gaina
embrionat, de 9-11 zile,
inoculat intraamniotic
sau intraalantoidian.
Izolare virala diagnostic de electie

Izolarea pe OGE


Izolarea se dem. prin proprieratea v.
gripale de a aglutina hematii
REACTIA DE HEMAGLUTINARE
Capacitatea unor virusuri de a aglutina
hematiile unor specii de animale
Virusurile care poseda capacitatea de a
aglutina hematii se numesc virusuri
hemaglutinante (rubeola, rujeola, urlian,
unele adenovirusuri, enterovirusuri, gripale
si paragripale)
Punerea in contact a unor dilutii succesive,
binare de antigen hemaglutinant cu
hematiile corespunzatoare virusului
incriminat
Etape:
Ag. viral - dilutii binare
suspensie de hematii
Se incubeaza la temperatura camerei - 60 minute


Rol RHA:
Demonstrarea prezentei virusului hemaglutinant
Titrarea antigenului hemaglutinant inaintea reactiei de hemagutino-inhibare

UHA
DEMONSTRAREA PREZENTEI VIRUSULUI
IN OGE
REACTIA DE HEMAGLUTINARE
CLASIFICAREA V. HEMAGLUTINANTE
I. HA structurala care distruge R
V gripale, paragripale

II. HA structurala care nu distruge R
Arbovirusuri, v rubeolos

III. HA non-structurala
poxvirusuri
IDENTIFICAREA V. GRIPALE
R. HEMAGLUTINO-INHIBARE
Tehnica reactiei:

dilutii binare din ser imun de referinta
ag. viral hemaglutinant - 60 min la 37C.
sistem indicator - suspensia de hematii.
Se incubeaza 60 min la temperatura camerei

Reactia de identificare a virusurilor gripale
UHAI
Diagnosticul de laborator al gripei
Directii de diagnostic
Izolare virala + identificare

Detectie directa
antigene virale- RIF
acid nucleic- PCR

Diagnostic serologic
Imunofluorescenta directa
test rapid, reproductibil, ieftin

Diagnostic rapid in


gripa,
infectie herpetica,
rabie.




Reactia de
Imunofluorescenta
directa


Amprenta se va usca bine:
pp. amprentat direct pe lama

Imersie in acetona la 2-8C timp de 10
minute si uscare.




ID
PP
Reactivii trebuie sa fie la temp.camerei

Incubare cu anticorp fluorescent (30 min la 37 C)
Spalare
Citire la MO in lumina UV
ID
PP
Anticorpi monoclonali marcati
cu ITCF
anti epitopi specifici de la
nivelul anvelopei,
ex. anti H1N1; anti H3N3


Diagnosticul de laborator al gripei
Directii de diagnostic
Izolare virala + identificare

Detectie directa
antigene virale- RIF
acid nucleic- PCR

Diagnostic serologic
Diagnosticul serologic
Necesita recoltarea de probe de ser pereche de la
acelasi pacient.
Nu se practica in mod curent decit in caz de epidemii,
pentru diagnostic retrospectiv.
Diagnosticul necesita demonstrarea unei cresteri
semnificative (de peste 4 ori) a titrului Ac
specifici antivirali intre proba de faza acuta, recoltata
la o saptamana de la debutul bolii si cea din
convalescenta, recoltata 2-3 saptamani mai tarziu.
Metoda preferata de evidentiere a anticorpilor anti
virali specifici este hemaglutinoinhibarea.


DIAGNOSTIC SEROLOGIC
RHAI = Tulpini de referinta + ser pacient
diagnostic retrospectiv,
recoltarea de probe de ser
pereche
cresteri semnificative (de
peste 4 ori) a titrului Ac
specifici
Pacient cu febra, cefalee, astenie,
tuse neproductiva. Ce produse
patologice utilizati?
Cum faceti diagnosticul rapid?
Pe ce substraturi se poate face
izolarea virala?
Este diagnosticul serologic de prima
intentie in aceasta viroza?
Precizati tipul de reactie reprezentata in sirurile de godeuri C, D, E
si principiul tehnicii.
Pentru ce viroze tehnica aceasta este de electie si ce simptome
clinice prezinta pacientul?

Precizati tipul de reactie si infectiile virale
care pot fi diagnosticate cu aceasta.
Cum demonstrati izolarea unui
virus hemaglutinant?
Cum se face identificarea
virusurilor hemaglutinante?