Sunteți pe pagina 1din 58

ALGORITMUL

DIAGNOSTICULUI
IN VIROZE

Etapele diagnosticului
virusologic
Recoltarea produsului patologic
Transportul produselor patologice
Direciile diagnosticului virusologic

RECOLTAREA PRODUSELOR PATOLOGICE STERIL!!!

Fluidele orale reduc riscul contaminarii,


simplifica procedura de recoltare

PRODUSE PATOLOGICE

Snge - 3-5 ml prin punctia venoasa aseptica, pe anticoagulant.


Virusuri frecvent izolate: virusuri care disemineaza viremic si agentii etiologici ai
febrelor hemoragice.

Materiile fecale - 4-8 g in solutie de Mg SO4 (stabilizeaza infectivitatea


enterovirusurilor).
Virusuri frecvent izolate: enterovirusuri, rotavirusuri, calicivirusuri, mai rar
adenovirusuri enterice.

Secretii nazo faringiene


a) spalatura nazo faringiana se obtine cu ajutorul unor tampoane cu
coada (sterile) introduse in cornetul nazal inferior.
b) aspiratul nazofaringian se obtine folosind un speculum nazal prin
administrarea a 3 ml ser fiziologic in nari cu o seringa atasata la un tub de
plastic.
c) lavaj traheobronsic se obtine prin bronhoscopie in conditii speciale
de catre personal calificat
Virusuri frecvent izolate: virusurile gripale A si B, virusurile paragripale,
adenovirusuri, rhinovirusuri, coronavirusuri, virusul respirator sincitial,
v.rujeolos, v. rubeolos, v. urlian.

Lichid cefalorahidian (LCR) - 5-6 ml prin punctie rahidiana, inainte de


inceperea tratamentului.
Virusuri frecvent izolate: virusul rabic, unele arbovirusuri.

PRODUSE PATOLOGICE
Saliva. Se recolteaza saliva de langa ductul Stenon cu tampon steril.
Frecvent este limitata la diagnosticul infectiei rabice.
Lichid vezicular - Colectarea lichidului din vezicule, bule, pustule se face
dupa dezinfectia prealabila a regiunii cutanate sau mucoase. Se perforeaza
vezicula cu un ac atasat la o seringa de tuberculina sau cu ajutorul unei
pipete.
Virusuri frecvent izolate: HSV I, HSV II si VZV.
Urina -100 ml - orice specimen urinar obtinut prin abstinenta de la mictiune
timp de 2 ore este adecvat pentru diagnosticul virusologic.
Virusuri frecvent izolate. V. citomegalic, v. rujeolos.
Tampoane vaginale, lavaj cervico-vaginal, tampon uretral de la nivelul
colului uterin si uretrei (atat la femeie cat si la barbat); cu tampoane sterile,
respectiv periuta citologica (pentru uretra masculina), fara toaleta prealabila
a regiunii.
Virusuri frecvent izolate: virusuri herpetice si papilomavirusuri; diagnostic
BTS, uretritelor, leziunilor veziculare si hiperplazice genitale.
Biopsia tisulara. Fragmente de organ recoltate n ctiva ml de solutie
salina + ser de vitel 10% + antibiotice n concentratiile folosite n culturile de
celule.

Transportul probelor recoltate


Rapid
La

rece
Sigur
ambalare riguros corecta
etichetarea cu semn
biorisc
documentatie in legatura
cu agentul biologic
transportat

Formular de trimitere pentru diagnostic


virusologic
Adresa spitalului/policlinicii/
cabinetului ce trimite produsul
patologic

Medicul caruia i se va
comunica rezultatul (tel, fax, email)

Nume, prenume pacient

Sex, Varsta

Date clinice, suspiciune


diagnostic

Data debutului
simptomatolgiei

Tipul produs patologic

Data, ora recoltarii

Tipul tratamentului administrat


in prealabil

Date epidemiologice (contact


cu boli infectioase
transmisibile, vectori, calatorii
in zone endemice pt o anumita
boala, vaccinari)

Analiza solicitata
Semnatura, parafa medicului

Direciile diagnosticului virusologic


1. Izolare virala in:

Culturi de celule
Ou de gaina embrionat
Animal de laborator

2. Detectia directa a :

Particulelor virale EM , IEM


Antigene virale ELISA, IF
Genom viral PCR; Rt-PCR

3. Teste Serologice:
a. Ac virus- specifici tip IgM
b. seroconversia in ac virus- specifici tip IgG

Izolarea virala prin inoculare pe OGE

Pocks-uri pe MCA a OGE - v. variolic

Detectia directa a
particulei virale prin Microscopie Electronica

Coloratia negativa
acetat de uranil
acid fosfotungstic
Metode care cresc sensibilitatea
(106-108 particule/ml): SPIEM, SIA
Metode de concentrare:

ultracentrifugare
difuzia in agar

centrifugare directa pe grila de ME

Diagnosticul serologic

pe prob unic de ser - anticorpi antivirali de tip


IgM (rspunsul imun primar) - ELISA de captur
pe probe pereche de ser
-

proba I - la debut
proba II - la 2-3 sptmni

ELISA tehnica indirect sau de competiie


(proba I - nu exist anticorpi/ proba II
- apar anticorpi specifici virusului de detectat),
creterea semnificativ a titrului de anticorpi ntre
cele 2 probe (de minim 4 ori)
seroconversia

Etapele diagnosticului virusologic


Izolarea viral

Dem. virusului/componente

Diagnosticul
serologic

Direciile diagnosticului virusologic

Transportul produselor patologice


Recoltarea produsului patologic

Suspiciunea de viroz

VIRUSOLOGIE
Lucrari practice
Prepar. Univ Dr. Aura Temereanca
Asist. Univ dr. Cornel Popescu
Sef Lucrari Univ. dr. Camelia Sultana

ALGORITMUL
DIAGNOSTICULUI
IN VIROZE

Etapele diagnosticului
virusologic
Orientarea diagnosticului (suspiciunea
de viroz)
Recoltarea produsului patologic
Transportul produselor patologice
Direciile diagnosticului virusologic

Etapele diagnosticului
virusologic
Orientarea

diagnosticului

Recoltarea produsului patologic


Transportul produselor patologice
Direciile diagnosticului virusologic

Formular de trimitere pentru diagnostic


virusologic
Adresa spitalului/policlinicii/
cabinetului ce trimite produsul
patologic

Medicul caruia i se va
comunica rezultatul (tel, fax, email)

Nume, prenume pacient

Sex, Varsta

Date clinice, suspiciune


diagnostic

Data debutului
simptomatolgiei

Tipul produs patologic

Data, ora recoltarii

Tipul tratamentului administrat


in prealabil

Date epidemiologice (contact


cu boli infectioase
transmisibile, vectori, calatorii
in zone endemice pt o anumita
boala, vaccinari)

Analiza solicitata
Semnatura, parafa medicului

V. Varicela - Zoster

Etapele diagnosticului
virusologic

Suspiciunea de viroz

Recoltarea

produsului

patologic
Transportul produselor patologice
Direciile diagnosticului virusologic

RECOLTAREA PRODUSELOR PATOLOGICE

S T E R I L !!!

Conteinere sterile pentru recoltarea si transportul


produselor patologice

RECOLTAREA PRODUSELOR PATOLOGICE


STERIL!!!

Recoltarea probelor
- locul & timpul potrivit

POLIO (enterovirusuri)

Recoltarea produselor patologice

PRODUSE PATOLOGICE

Snge - 3-5 ml prin punctia venoasa aseptica, pe anticoagulant.


Virusuri frecvent izolate: virusuri care disemineaza viremic si agentii etiologici ai
febrelor hemoragice.

Materiile fecale - 4-8 g in solutie de Mg SO4 (stabilizeaza infectivitatea


enterovirusurilor).
Virusuri frecvent izolate: enterovirusuri, rotavirusuri, calicivirusuri, mai rar
adenovirusuri enterice.

Secretii nazo faringiene


a) spalatura nazo faringiana se obtine cu ajutorul unor tampoane cu
coada (sterile) introduse in cornetul nazal inferior.
b) aspiratul nazofaringian se obtine folosind un speculum nazal prin
administrarea a 3 ml ser fiziologic in nari cu o seringa atasata la un tub de
plastic.
c) lavaj traheobronsic se obtine prin bronhoscopie in conditii speciale
de catre personal calificat
Virusuri frecvent izolate: virusurile gripale A si B, virusurile paragripale,
adenovirusuri, rhinovirusuri, coronavirusuri, virusul respirator sincitial,
v.rujeolos, v. rubeolos, v. urlian.

Lichid cefalorahidian (LCR) - 5-6 ml prin punctie rahidiana, inainte de


inceperea tratamentului.
Virusuri frecvent izolate: virusul rabic, unele arbovirusuri.

PRODUSE PATOLOGICE
Saliva. Se recolteaza saliva de langa ductul Stenon cu tampon steril.
Frecvent este limitata la diagnosticul infectiei rabice.
Lichid vezicular - Colectarea lichidului din vezicule, bule, pustule se face
dupa dezinfectia prealabila a regiunii cutanate sau mucoase. Se perforeaza
vezicula cu un ac atasat la o seringa de tuberculina sau cu ajutorul unei
pipete.
Virusuri frecvent izolate: HSV I, HSV II si VZV.
Urina -100 ml - orice specimen urinar obtinut prin abstinenta de la mictiune
timp de 2 ore este adecvat pentru diagnosticul virusologic.
Virusuri frecvent izolate. V. citomegalic, v. rujeolos.
Tampoane vaginale, lavaj cervico-vaginal, tampon uretral de la nivelul
colului uterin si uretrei (atat la femeie cat si la barbat); cu tampoane sterile,
respectiv periuta citologica (pentru uretra masculina), fara toaleta prealabila
a regiunii.
Virusuri frecvent izolate: virusuri herpetice si papilomavirusuri; diagnostic
BTS, uretritelor, leziunilor veziculare si hiperplazice genitale.
Biopsia tisulara. Fragmente de organ recoltate n ctiva ml de solutie
salina + ser de vitel 10% + antibiotice n concentratiile folosite n culturile de
celule.

Etapele diagnosticului
virusologic

Suspiciunea de viroz
Recoltarea produsului patologic

Transportul

produselor

patologice

Direciile diagnosticului virusologic

Transportul probelor recoltate


Rapid
La

rece
Sigur
ambalare riguros corecta
etichetarea cu semn biorisc
documentatie in legatura cu
agentul biologic transportat

Etapele diagnosticului
virusologic
Suspiciunea de viroz
Recoltarea produsului patologic
Transportul produselor patologice

Direciile

diagnosticului
virusologic

DIRECIILE DIAGNOSTICULUI
VIRUSOLOGIC
1.

Izolarea viral

Demonstrarea prezenei
virusului / componentelor sale

2.

3. Diagnosticul serologic

Izolarea
virusurilor

Izolarea virusurilor
3 sisteme de izolare folosite n virusologie

Culturi de celule
Ou de gin embrionat
Animalul de laborator

Izolarea virusurilor

in culturi de celule

Izolarea pe culturi de celule


Neinfectate

= EFECTE CITOPATICE

Infectate cu v. variolic

HEK 293

HeLa

BSC-40

RABIE
Sus- neuron fara
incluzii Negri
Jos neuron cu incluzii
Negri (col HE)

Izolarea virala
prin
inoculare la
animalul de
laborator

RABIE modificari
patognomonice in SNC
Infiltrat mononuclear perivascularsus
Focare de infiltratie limfocitare in
celulele gliale -jos

Izolarea virala prin inoculare

pe OGE

Pocks-uri pe Membrana Chorio-alantoindiana OGE - v. variolic

DIRECIILE DIAGNOSTICULUI
VIRUSOLOGIC
1.

Izolarea viral

Demonstrarea prezenei
virusului / componentelor sale

2.

3. Diagnosticul serologic

Detectia directa
a particulei
virale

Microscopia electronica

Coloratia negativa
acetat de uranil
acid fosfotungstic
Metode care cresc sensibilitatea
(106-108 particule/ml)
Metode de concentrare:

ultracentrifugare
difuzia in agar

centrifugare directa pe grila de ME

Microscopie electronica
Coloratie negativa

vaccinia

Microscopie electronica
Coloratie negativa

variola

Electron micrographs of hepatitis C virus purified from cell culture.


Scale bar is 50 nanometers.

Detectia directa a
componentelor
virale
Acid nucleic
Antigene virale

Detectia directa a acidului


nucleic viral - PCR

Thermocycler

Detectia directa a antigenelor


virale ELISA (test imuno-enzimatic)

sandwich ELISA. (1) Plate is coated with a capture antibody; (2) sample is added,
and any antigen present binds to capture antibody; (3) detecting antibody is added,
and binds to antigen; (4) enzyme-linked secondary antibody is added, and binds to
detecting antibody; (5) substrate is added, and is converted by enzyme to
detectable form.

Detectia directa a antigenelor virale


reactia de imunofluorescenta (IF)
(test rapid de detectie a Ag)

Identificarea virusurilor prin neutralizarea


efectului citopatogen

RSN

Reactia de Seroneutralizare
- Identificarea Enterovirusurilor

Identificarea virusurilor prin inhibarea efectului viral


HA - hemaglutinina

RHAI

NA - neuraminidaza
Nucleocapsida helicoidala
ARNss
anvelopa
transcriptaza

Matrice

Reactia de Hemaglutinoinhibare
-Identificarea virusurilor gripale

DIRECIILE DIAGNOSTICULUI
VIRUSOLOGIC
1.

Izolarea viral

Demonstrarea prezenei
virusului / componentelor sale

2.

3.

Diagnosticul serologic

Diagnosticul serologic in infectiile virale

Raspuns
imun
primar

Raspuns
imun
secundar

Diagnosticul serologic

pe prob unic de ser - anticorpi antivirali de


tip IgM (rspunsul imun primar) - ELISA de
captur
pe probe pereche de ser
-

proba I - la debut
proba II - la 2-3 sptmni

ELISA tehnica indirect sau de competiie


seroconversia
In proba I nu exist anticorpi
In proba II apar anticorpi specifici virusului de detectat
creterea semnificativ a titrului de anticorpi ntre

cele 2 probe (de minim 4 ori)

Etapele diagnosticului virusologic


Izolarea viral
Dem. virusului/
componente

Diagnosticul
serologic
Direciile diagnosticului virusologic

Transportul produselor patologice


Recoltarea produsului patologic

Suspiciunea de viroz