Sunteți pe pagina 1din 15

IZOLAREA VIRUSURILOR IN

CULTURI CELULARE

EFECTE CITOPATICE
DIRECŢIILE DIAGNOSTICULUI
VIRUSOLOGIC
1. Izolarea virală

2. Demonstrarea prezenţei
virusului / componentelor sale

3. Diagnosticul serologic
Izolarea virusurilor
3 sisteme de izolare

• Culturi de celule

• Ou de găină embrionat

• Animalul de laborator
AVANTAJE / DEZAVANTAJE ALE
SISTEMELOR DE IZOLARE VIRALA

AVANTAJE DEZAVANTAJE

ANIMAL DE LAB Infectie naturala Cost / etica

O.G.E. Cost Susceptibilitate


limitata

CULTURI DE Sensibilitate buna / Susceptibilitate


CELULE disponibilitate variabila
Componentele culturilor de celule: Celule dispersate+ mediu nutritiv
Mediu nutritiv
• solutie salina tamponata - Earle, Hanks
• substanţe nutritive ( SFV, lizate proteice)
• vitamine
• antibiotice şi antifungice

Condiţii necesare pentru păstrarea în viaţă a celulelor din cultura celulară

• Condiţii aseptice
• pH adecvat
• Temperatură constantă
• atmosferă cu 10% CO2
CLASIFICAREA
CULTURILOR
DE CELULE

• Culturi de celule dispersate


» Culturi primare
» Tulpini celulare
» Linii celulare- CELULE TRANSFORMATE
CELULE TRANSFORMATE
1. conţin gene implicate în imortalizarea în vitro (cultivare
nr. infinit pasaje) modificari cromozomiale => cariotip
aneuploid;
2. se multiplică haotic, cerinţe nutritive foarte scăzute
(se multiplică la concentraţii foarte scăzute de SFV),
glicoliza anaerobă = sursa principala de energie.
3. membrană celulară modificată în compoziţie (absenţa
fibronectinei => scaderea adeziunii intercelulare
4. nu au inhibitie de contact, se dispun dezordonat
diferit de ţesutul din care derivă
5. inoculare la animale => TUMORI
6. modificarea morfologiei (rotunde, refrigente)
7. au antigene de suprafaţă diferite de N codif. de
virus /celule gazda=> neoantigene
8. aglutinează uşor cu lectinele (antigene vegetale)
9. modificarea mesageri secunzi (AMPc)
Echipament de laborator

Hote cu flux laminar pentru obtinerea, si


propagarea culturilor de celule si izolarea
virala
TIPURI DE EFECTE CITOPATICE

• SINCITIAL: HIV, v rujeolos, VRS


• PICNOTIC – LITIC
• enterovirusuri – v. poliomielitice; v. Coxsackie; ECHO

• INCLUZIONAR
EFECT CITOPATIC SINCITIAL
EFECT CITOPATIC INCLUZIONAR
• Intracitoplasmatic acidofil: v rabic, v vaccinal

• Intranuclear -acidofil: papovavirusuri


- bazofil: adenovirusuri

• Mixt: v herpetice, v rujeolos


ECP picnotic litic
INCLUZII
CITOPLASMATICE
(RABIE)
patognomonic in SNC - CORPII
BABES NEGRI in cornul lui Ammon
si neuronii piramidali din cerebel
INCLUZII INTRANUCLEARE
(BOALA CU INCLUZII CMV)
INCLUZII
INTRANUCLEARE