DIAGNOSTICUL DE

LABORATOR AL INFECTIILOR
MICROBIENE

ETAPELE INVESTIGARII DE LABORATOR A

UNUI PACIENT INFECTAT

PREPARAREA MEDIILOR DE CULTURA

Mediul de cultivare reprezint un substrat nutritiv, de complexitate
diferit, care favorizeaz creterea i dezvoltarea microorganismelor n
condiii artificiale, de laborator.
Cerine minime, obligatorii:
1. S asigure cantiti optime de ap i substane nutritive necesare creterii
i multiplicrii microorganismelor;
2. S asigure sursa de carbon i energie;
3.S asigure sursa de azot necesar biosintezei acizilor nucleici i
proteinelor;
4. S conin sruri minerale, cu rol n meninerea echilibrului ionic al celulei
(Na+, K+, Ca2+, Mg2+, Mn, Fe2+, Co2+);
5. S asigure factori de cretere necesari pentru dezvoltarea unor
microorganisme cu exigene de cretere;
6. S ofere un pH optim pentru dezvoltarea microorganismelor;
7. S ofere condiii de aerare corespunztoare tipului de metabolism
respirator al microorganismului care urmeaz a fi cultivat;
8. S fie steril i repartizat n recipiente sterile.

- prepararea mediilor: din ingrediente de baza/pulberi deshidratate

- insotite de certificat de calitate (atesta cresterea si supravietuirea
microorganismului tinta si inhibarea/supresarea cresterii altora)
- aspecte care influenteaza prepararea unui mediu:
calitatea
materialelor utilizate, calitatea apei, calitatea placilor Petri, calitatea
aditivilor, sterilitatea sangelui
- stocarea mediilor: loc ferit de lumina si caldura
mediile cu sange, alte lichide biologice, antibiotice
la frigider

Controlul calitatii mediilor

- testare pH sa nu depaseasca 0.2 unitati.
- sterilitate
- testarea performantelor de crestere microbiana

i de referinta recomandate pentru controlul mediilor (WHO, 200

CGP

Enterobacterii

Bacterii Gram negative

fastidioase

Enterococcus faecalis (ATCC

29212)
S. aureus (ATCC 25923)

Citrobacter freundii
Enterobacter cloacae

N. gonorhoeae

S. epidermidis

K. pneumoniae

N. meningitidis

Str. agalactiae

Proteus mirabilis

Str. mitis

E. coli (ATCC 25922)

S. typhimurium

Sh. flexneri

Str. pneumoniae

Yersinia enterocolitica

Moraxella catarrhalis

Str. pyogenes
Fungi

Alti BGN

Anaerobi

C. albicans

Acinetobacter lwof

Bacteroides fragilis

Ps. aeruginosa (ATCC 27853)

Cl. perfringens

* Nota: Tulpina de referinta - orice microorganism caracterizat la nivel de gen si

specie clasificat si descris conform caracteristicilor si originii obtinut dintr-o
colectie recunoscuta la nivel national sau international

te de performanta realizate pe mediile uzuale (WHO, 200

Mediu

Tulpina testata

Prezenta
cresterii/aspectul

Agar bila esculina 24h

Enterococcus faecalis
Streptococ alfa-hemolitic

coloniilor sau mediului

Da/innegrirea mediului
Nu

Geloza sange, 24h, CO2

Streptococcus pyogenes
Streptococcus pneumoniae

Da/ beta-hemoliza
Da/alfa-hemoliza

Gelatinaza 24h

E. coli
Serratia marcescens

Uree 24h

E. coli
P. mirabilis

+ (roz)

Surse de neconformitate privind calitatea

mediilor de cultura
Neconformitate
Sursa
Agar nesolidificat corespunzator

pH necorespunzator

Culoare modificata

Precipitate

Inhibarea dezvoltarii
microorganismelor/crestere
redusa/selectivitate redusa

Depasirea temperaturii de sterilizare, pH

scazut care poate determina hidroliza acida a
agarului,
eroare
de
cantarire
a
ingredientului, omogenizare insuficienta,
calitate necorespunzatoare a agarului
Sticlarie contaminata chimic, apa impura,
supraincalzirea mediului la sterilizare, pH
masurat incorect, deteriorarea mediilor
deshidratate
Sticlarie
murdara,
apa
impura,
supraincalzirea mediului la sterilizare, pH
necorespunzator,
deteriorarea
mediilor
deshidratate
Supraincalzirea mediului la sterilizare, apa
impura, sticlarie contaminata, deteriorarea
mediilor deshidratate
Supraincalzirea mediului la sterilizare,
sticlarie sau apa contaminata, deteriorarea
mediilor deshidratate, erori de cantarire a
ingredientelor si de omogenizare a acestora

Clasificarea mediilor de
Dup
consisten:
Dup provenien:
cultura

medii lichide;
medii solide;
medii semisolide (ex. mediu
OMS, mediu cu gelatina);

medii naturale (lichide: must de mal, lapte;

solidificate: cartof
glicerinat);
medii artificiale sunt medii cu compoziie
medii deshidratate.
chimic semidefinit, care conin o baz
natural (lichide: bulion, ap peptonat;
Dup complexitate i scopul utilizrii:
solidificate: geloz, gelatin).
Medii uzuale simple (ex. bulion simplu, agar nutritiv);
Medii speciale (sunt medii cu grade diferite de complexitate care permit
creterea preferenial a anumitor specii dintr-un amestec heterogen de
microorganisme dintr-o prob sau evidenierea anumitor caractere particulare de
metabolism ale microorganismului cultivat):
medii selective conin unul sau mai muli ageni inhibitori reprezentai de
colorani, antibiotice, sruri biliare care pot limita sau inhiba multiplicarea
anumitor specii de microorganisme dintr-o prob cu ncrctur microbian
mixt (mediu BSA, mediu MacConkey);
medii de mbogire -ofer condiii prefereniale de cretere pentru
anumite specii bacteriene, care se vor multiplica mai rapid dect
microorganismele asociate (ex. geloz-snge, geloz chocolat);
medii difereniale - evideniaz anumite particularitai metabolice, utile n
identificarea unei anumite specii de microorganisme: sistemele multitest;
medii de transport care asigur supravieuirea tulpinilor microbiene n
proba recoltat pn n momentul nsmnrii (ex. mediu Cary-Blair);
medii de conservare sau de ntreinere care asigur supravieuirea

Medii de cultivare a bacteriilor

Denumire mediu
Mediu Geloza nutritiva

Caracteristici

Recomandare

Mediu de cultura uzual care contine extract de

carne, peptona, NaCl si agar

- mediu de cultur de uz general pentru cultivarea

microorganismelor nepretenioase

Mediu Geloza nutritiva cu adaos de sange de

berbec defibrinat

- mediu de imbogatire, care permite cresterea

majoritatii microorganismelor

Geloz Mueller-Hinton II
(NCCLS)

Mediu geloza cu concentraie foarte sczut de

tiamin i timidin precum i cu nivel corespunztor
de Ca i Mg

- mediu folosit pentru

testarea sensibilitii
antibiotice

Geloza chocolat

geloz de baz suplimentat cu factori de

cretere, dup adugarea sngelui mediul
incalzeste la 80 C timp de 10 min.

Mediu Geloz sange

Neisseria, Haemophilus

microorganismelor

la

Medii de cultivare a bacteriilor

Bila Esculina
Azida agar

Baird Parker
Agar

Manitol Salt
Agar (Mediu
Chapman)

- contine esculina, azida de sodiu (inhibitor pt. specii Gramnegative) si bila de bou (inhibitori de Gram pozitive)
-este imbogatit cu hidrolizat enzimatic de cazeina,
proteoza-peptona si extract de vita
- hidroliza esculinei ajuta la detectarea streptococilor
apartinand grupului D.

Izolarea speciilor de Enterococcus faecium si

E. faecalis capabile sa hidrolizeze esculina, cu
acumularea in mediu a unui precipitat negru
rezultat din combinarea esculetolului cu
citratul feric
Hidrolizeaza esculina in prezenta bilei

-contine extract de drojdie suplimentat cu complex de

vitamine B care stimuleaza cresterea bacteriana, glicina si
piruvat de sodiu pentru a stimula cresterea sp. de
Staphylococcus.
-telurit de potasiu si de clorura de litiu inhiba cresterea
altor specii bacteriene decat Staphylococcus.

Izolarea stafilococilor coagulazo-pozitivi care

se vor dezvolta sub forma unor colonii de
culoare neagra prin reducerea teluritului de
potasiu. Sp. de Staphylococcus care prezinta
lecitinaza degradeaza mediu si se formeaza un
halou in jurul coloniilor. O zona opaca de
precipitat poate aparea datorita prezentei
lipazei

-Contine peptona, agar, continut mare de clorura de sodiu si

indicator de pH rosu fenol

S. aureus coagulazo-pozitivi produc colonii

inconjurate de o zona galbena stralucitoare,
SCN produce colonie roz, fara zona de halou.

-Continutul mare de sare inhiba dezvoltarea

microorganismelor, cu exceptia celor halofile

Medii de cultivare a bacteriilor

Denumir
e mediu

Caracteristici

Recomandare

Mac
Conkey
Agar

Contine saruri biliare ca

inhibitori de crestere pentru
specii bacteriene de coci Gram
pozitivi si cristal violet ca
indicator de pH

Mediu de diferentiere a
speciilor de enterobacterii
lactozo fermentative (virajul
culorii mediului la rosu) de
cele non-fermentative (virajul
culorii mediului la galben)

Medii de cultivare a bacteriilor

Denumire
mediu

Caracteristici

Recomandare

Salmonella
Shigella
agar

contine lactoza, saruri biliare, citrat feric si

indicator de pH- rosu neutru. Sarurile
selecteaza bacteriile Gram negative.
Celelalte componente diferentiaza intre
speciile Gram-negative.

E. coli fermenteaza lactoza din mediu,

rezultand colonii roz. (Nu produce
hidrogen sulfurat).
Membrii genului Salmonella nu
fermenteaza lactoza, dar produc
hidrogen sulfurat, rezultand colonii
clare, cu centru negru.
Membrii
genului
Shigella,
nu
fermenteaza lactoza, nu produc hidrogen
sulfurat, deci vor determina aparitia unor
colonii incolore.

Medii de cultivare a bacteriilor

Denumire
mediu
Mediu
A.A.B.T.
L
(Bromot
hymolblue
Lactose
Agar)

Mediu
cromog
en
diferent
ial

Caracteristici

Recomandare

mediu fara inhibitori, lactozat si cu indicator de pH- -pentru

diferenierea
albastru de brom timol.
coloniilor lactozo-pozitive
de cele lactozo-negative
-folosit mai ales pentru
Enterobacteriaceae
(lactoza degradat n
acid
determin
indicatorul
de
pH,
albastru
de
bromothymol,
s-i
schimbe
culoarea
n
galben.
Alcalinizarea
produce
o
colorare
utilizat
pentru
albastr).
evidentierea simultana a
tuturor
microorganismelor
ce
cauzeaza infectii de tract
urinar.

Mediul Lwenstein-Jensen (ou, cartof, verde malachit, asparagin, glicerin)

mediu pt. cultivarea

micobacteriilor

Medii de cultivare a bacteriilor

Mediile multitest

Permit evidentirea simultana a mai multor caractere

biochimice

TSI Triple Sugar Iron + indicator

de pH
Fermenta
rea
zaharurilo
r
Glucoza

Detectare
a
tiosulfatreductaze
i

Lactoza

Fe SO4

Alte aspecteZaharoza

Rosu fenol

Medii de cultivare a bacteriilor

Mediile multitest

MIU Mobilitate Indol Ureaza

Opacizarea
uniforma a
mediului

Metabolizarea
triptofanului cu
producere de indol
volatil
Inrosirea benzii de
hartie de filtru

Metabolizarea
ureei inrosirea
mediului

Medii de cultivare a bacteriilor

Mediile multitest

MILF Mobilitate

Indol

Opacizarea
uniforma a
mediului
Metabolizarea
triptofanului cu
producere de
indol volatil
Inrosirea benzii
de hartie de
filtru

Lizin-decarboxilaza
dezaminaza

Fenil-alaninAdaugarea 1-2 pic

FeCl3

Fermentarea glucozei
acumulare de acizi
Virajul culorii la galben (R -)
LDC determina acumularea de
cadaverina
Virajul culorii la violet (R+)

Aparitia unui inel

verde

Medii de cultivare a bacteriilor

Mediu Agar Simmons Citrate:

unica sursa de C (citrat de Na) +
indicator de pH (albastru de brom
fenol)

Citrat -

Citrat +

Medii de cultivare a fungilor

- mediu
Mediu Sabouraud

selectiv utilizat pentru cultivarea drojdiilor,

mucegaiurilor si a unor microorganisme acidurice