DIAGNOSTICUL DE

LABORATOR AL INFECTIILOR
MICROBIENE
ETAPELE INVESTIGARII DE LABORATOR A UNUI
PACIENT INFECTAT
 PREPARAREA MEDIILOR DE CULTURA

Mediul de cultivare reprezint un substrat nutritiv, de complexitate diferit, care favorizeaz

creterea i dezvoltarea microorganismelor n condiii artificiale, de laborator.

Cerine minime, obligatorii:

1. S asigure cantiti optime de ap i substane nutritive necesare creterii i multiplicrii

microorganismelor;

2. S asigure sursa de carbon i energie;

3.S asigure sursa de azot necesar biosintezei acizilor nucleici i proteinelor;

4. S conin sruri minerale, cu rol n meninerea echilibrului ionic al celulei (Na+, K+, Ca2+,
Mg2+, Mn, Fe2+, Co2+);

5. S asigure factori de cretere necesari pentru dezvoltarea unor microorganisme cu exigene

de cretere;

6. S ofere un pH optim pentru dezvoltarea microorganismelor;

7. S ofere condiii de aerare corespunztoare tipului de metabolism respirator al

microorganismului care urmeaz a fi cultivat;

8. S fie steril i repartizat n recipiente sterile.

- prepararea mediilor: din ingrediente de baza/pulberi deshidratate

- insotite de certificat de calitate (atesta cresterea si supravietuirea microorganismului

tinta si inhibarea/supresarea cresterii altora)

- aspecte care influenteaza prepararea unui mediu: calitatea materialelor utilizate,

calitatea apei, calitatea placilor Petri, calitatea aditivilor, sterilitatea sangelui

- stocarea mediilor: loc ferit de lumina si caldura

mediile cu sange, alte lichide biologice, antibiotice la frigider

Controlul calitatii mediilor

- testare pH sa nu depaseasca 0.2 unitati.
- sterilitate
- testarea performantelor de crestere microbiana
Tulpini de referinta recomandate pentru controlul mediilor (WHO, 2003)

CGP Enterobacterii Bacterii Gram negative

fastidioase
Enterococcus faecalis (ATCC Citrobacter freundii Moraxella catarrhalis
29212)
S. aureus (ATCC 25923) Enterobacter cloacae N. gonorhoeae
S. epidermidis K. pneumoniae N. meningitidis
Str. agalactiae Proteus mirabilis
Str. mitis E. coli (ATCC 25922)
S. typhimurium Sh. flexneri
Str. pneumoniae Yersinia enterocolitica

Str. pyogenes

Fungi Alti BGN Anaerobi

C. albicans Acinetobacter lwoffi Bacteroides fragilis

Ps. aeruginosa (ATCC 27853) Cl. perfringens

* Nota: Tulpina de referinta - orice microorganism caracterizat la nivel de gen si specie clasificat si descris
conform caracteristicilor si originii obtinut dintr-o colectie recunoscuta la nivel national sau international
Teste de performanta realizate pe mediile uzuale (WHO, 2003)

Mediu Tulpina testata Prezenta

cresterii/aspectul
coloniilor sau mediului

Agar bila esculina 24h Enterococcus faecalis Da/innegrirea mediului

Streptococ alfa-hemolitic Nu

Geloza sange, 24h, CO2 Streptococcus pyogenes Da/ beta-hemoliza

Streptococcus pneumoniae Da/alfa-hemoliza
Gelatinaza 24h E. coli -
Serratia marcescens +
Uree 24h E. coli -
P. mirabilis + (roz)
 Surse de neconformitate privind calitatea mediilor de cultura
Neconformitate
Agar nesolidificat corespunzator
pH necorespunzator
Culoare modificata
Precipitate
Inhibarea dezvoltarii
microorganismelor/crestere
redusa/selectivitate redusa
Sursa
Depasirea temperaturii de sterilizare, pH scazut
care poate determina hidroliza acida a agarului,
eroare de cantarire a ingredientului,
omogenizare insuficienta, calitate
necorespunzatoare a agarului
Sticlarie contaminata chimic, apa impura,
supraincalzirea mediului la sterilizare, pH
masurat incorect, deteriorarea mediilor
deshidratate
Sticlarie murdara, apa impura, supraincalzirea
mediului la sterilizare, pH necorespunzator,
deteriorarea mediilor deshidratate
Supraincalzirea mediului la sterilizare, apa
impura, sticlarie contaminata, deteriorarea
mediilor deshidratate
Supraincalzirea mediului la sterilizare, sticlarie
sau apa contaminata, deteriorarea mediilor
deshidratate, erori de cantarire a ingredientelor
si de omogenizare a acestora
Clasificarea mediilor de cultura
Dup consisten: Dup provenien:
medii lichide; medii naturale (lichide: must de mal, lapte;
medii solide; solidificate: cartof glicerinat);
medii semisolide (ex. mediu OMS, medii artificiale sunt medii cu compoziie chimic
mediu cu gelatina); semidefinit, care conin o baz natural (lichide: bulion,
medii deshidratate. ap peptonat; solidificate: geloz, gelatin).

Dup complexitate i scopul utilizrii:

Medii uzuale simple (ex. bulion simplu, agar nutritiv);
Medii speciale (sunt medii cu grade diferite de complexitate care permit creterea preferenial a
anumitor specii dintr-un amestec heterogen de microorganisme dintr-o prob sau evidenierea
anumitor caractere particulare de metabolism ale microorganismului cultivat):
medii selective conin unul sau mai muli ageni inhibitori reprezentai de colorani,
antibiotice, sruri biliare care pot limita sau inhiba multiplicarea anumitor specii de
microorganisme dintr-o prob cu ncrctur microbian mixt (mediu BSA, mediu MacConkey);
medii de mbogire -ofer condiii prefereniale de cretere pentru anumite specii bacteriene,
care se vor multiplica mai rapid dect microorganismele asociate (ex. geloz-snge, geloz
chocolat);
medii difereniale - evideniaz anumite particularitai metabolice, utile n identificarea unei
anumite specii de microorganisme: sistemele multitest;
medii de transport care asigur supravieuirea tulpinilor microbiene n proba recoltat pn n
momentul nsmnrii (ex. mediu Cary-Blair);
medii de conservare sau de ntreinere care asigur supravieuirea microorganismelor n
laborator pe o anumit perioada de timp (ex. mediu OMS, mediu YPG).
 Medii de cultivare a bacteriilor
Denumire mediu Caracteristici Recomandare
Mediu Geloza nutritiva Mediu de cultura uzual care contine extract de - mediu de cultur de uz general pentru cultivarea
carne, peptona, NaCl si agar microorganismelor nepretenioase
Mediu Geloz sange Mediu Geloza nutritiva cu adaos de sange de - mediu de imbogatire, care permite cresterea
berbec defibrinat majoritatii microorganismelor

Geloz Mueller-Hinton II Mediu geloza cu concentraie foarte sczut de - mediu folosit pentru
(NCCLS) tiamin i timidin precum i cu nivel testarea sensibilitii microorganismelor la
corespunztor de Ca i Mg antibiotice

Geloza chocolat geloz de baz suplimentat cu factori de Neisseria, Haemophilus

cretere, dup adugarea sngelui mediul
incalzeste la 80 C timp de 10 min.
 Medii de cultivare a bacteriilor
Bila Esculina - contine esculina, azida de sodiu (inhibitor pt. specii
Azida agar Gram-negative) si bila de bou (inhibitori de Gram pozitive)
-este imbogatit cu hidrolizat enzimatic de cazeina,
proteoza-peptona si extract de vita
- hidroliza esculinei ajuta la detectarea streptococilor
apartinand grupului D.
-contine extract de drojdie suplimentat cu complex de
Baird Parker vitamine B care stimuleaza cresterea bacteriana, glicina si
Agar piruvat de sodiu pentru a stimula cresterea sp. de
Staphylococcus.
-telurit de potasiu si de clorura de litiu inhiba cresterea
altor specii bacteriene decat Staphylococcus.
Manitol Salt -Contine peptona, agar, continut mare de clorura de sodiu si
Agar (Mediu indicator de pH rosu fenol
Chapman)
-Continutul mare de sare inhiba dezvoltarea
microorganismelor, cu exceptia celor halofile
Izolarea speciilor de Enterococcus faecium si
E. faecalis capabile sa hidrolizeze esculina, cu
acumularea in mediu a unui precipitat negru
rezultat din combinarea esculetolului cu
citratul feric
Hidrolizeaza esculina in prezenta bilei
Izolarea stafilococilor coagulazo-pozitivi care
se vor dezvolta sub forma unor colonii de
culoare neagra prin reducerea teluritului de
potasiu. Sp. de Staphylococcus care prezinta
lecitinaza degradeaza mediu si se formeaza un
halou in jurul coloniilor. O zona opaca de
precipitat poate aparea datorita prezentei
lipazei
S. aureus coagulazo-pozitivi produc colonii
inconjurate de o zona galbena stralucitoare,
SCN produce colonie roz, fara zona de halou.
 Medii de cultivare a bacteriilor
Denumire Caracteristici Recomandare
mediu
Mac Contine saruri biliare ca inhibitori de Mediu de diferentiere a speciilor de
Conkey crestere pentru specii bacteriene de enterobacterii lactozo fermentative
Agar coci Gram pozitivi si cristal violet ca (virajul culorii mediului la rosu) de
indicator de pH cele non-fermentative (virajul culorii
mediului la galben)
 Medii de cultivare a bacteriilor
Denumire Caracteristici Recomandare
mediu

Salmonella contine lactoza, saruri biliare, citrat feric si
Shigella indicator de pH- rosu neutru. Sarurile
agar selecteaza bacteriile Gram negative.
Celelalte componente diferentiaza intre
speciile Gram-negative.
E. coli fermenteaza lactoza din mediu,
rezultand colonii roz. (Nu produce
hidrogen sulfurat).
Membrii genului Salmonella nu
fermenteaza lactoza, dar produc
hidrogen sulfurat, rezultand colonii
clare, cu centru negru.
Membrii genului Shigella, nu
fermenteaza lactoza, nu produc hidrogen
sulfurat, deci vor determina aparitia
unor colonii incolore.
 Medii de cultivare a bacteriilor
Denumire Caracteristici Recomandare
mediu
Mediu mediu fara inhibitori, lactozat si cu indicator de pH- -pentru diferenierea coloniilor
A.A.B.T.L albastru de brom timol. lactozo-pozitive de cele
(Bromothy lactozo-negative
mol-blue
Lactose -folosit mai ales pentru
Agar) Enterobacteriaceae (lactoza
degradat n acid determin
indicatorul de pH, albastru de
bromothymol, s-i schimbe
culoarea n galben.
Alcalinizarea produce o
colorare albastr).

Mediu utilizat pentru evidentierea

cromogen simultana a tuturor
diferential microorganismelor ce cauzeaza
infectii de tract urinar.
 Medii de cultivare a bacteriilor
Mediul Lwenstein-Jensen (ou, cartof, verde malachit, asparagin, glicerin)

mediu pt. cultivarea

micobacteriilor
 Medii de cultivare a bacteriilor
Mediile multitest
Permit evidentirea simultana a mai multor caractere biochimice

TSI Triple Sugar Iron + indicator de pH

Fermentarea Detectarea
zaharurilor tiosulfat-
Rosu fenol
Glucoza reductazei

Lactoza Fe SO4

Zaharoza

Alte aspecte
 Medii de cultivare a bacteriilor
Mediile multitest
MIU Mobilitate Indol Ureaza

Opacizarea uniforma a Metabolizarea triptofanului Metabolizarea ureei

mediului cu producere de indol volatil inrosirea mediului
Inrosirea benzii de hartie de
filtru
 Medii de cultivare a bacteriilor
Mediile multitest
MILF Mobilitate Indol Lizin-decarboxilaza Fenil-alanin-dezaminaza

Opacizarea uniforma a Adaugarea 1-2 pic FeCl3

mediului
Aparitia unui inel verde
Fermentarea glucozei acumulare de acizi
Metabolizarea
triptofanului cu
producere de indol Virajul culorii la galben (R -)
volatil LDC determina acumularea de cadaverina
Inrosirea benzii de
hartie de filtru
Virajul culorii la violet (R+)
 Medii de cultivare a bacteriilor

Mediu Agar Simmons Citrate:

unica sursa de C (citrat de Na) +
indicator de pH (albastru de
brom fenol)

Citrat - Citrat +
 Medii de cultivare a fungilor

Mediu Sabouraud - mediu selectiv utilizat pentru cultivarea drojdiilor, mucegaiurilor si a

unor microorganisme acidurice