Lp 21. Identificarea Enterobacteriaceae-lor. Coprocultura.

Obiective:
I. Cunoașterea etapelor identificării bacililor dizenterici
II. Discutarea etiologiei sindromului diareic infecţios: bacteriană, virală, parazitară, in
vederea stabilirii stabilirii algoritmului de diagnostic adecvat
III. Însuşirea etapelor diagnosticului bacteriologic în boala diareică acută.

I. Identificarea Enterobacteriaceae-lor

1. Caractere microscopice:
- bacili gram-negativi, fără așezare particulară;
- speciile de Yersinia sunt mai frecvent cocobacilare, colorate bipolar
- speciile Proteus sunt uneori extrem de polimorfe.
- tulpini de Klebsiella, sau, mai rar, E. coli pot prezenta în frotiuri colorate Gram din
produse patologice, o capsulă care apare sub forma unui halou clar în jurul
bacteriilor.

2. Caractere de cultivare:
- nepretentioase nutritiv, cultivă pe geloză sau în bulion nutritiv.
- cel mai frecvent, pe medii agarizate coloniile sunt de tip S, cu diametrul de 2-3 mm
după 18 ore de incubare, iar la 37º C în bulion are aspect tulbure omogen.
- izolarea poate fi realizată pe medii diferențiale și selective, cu lactoza și indicator de
pH:
o pe medii cu selectivitate redusă (mediul MacConkey) bacteriile gram-pozitive
sunt inhibate, iar în raport cu virarea indicatorului, bacilii gram-negativi se
diferențiază în lactozo-pozitivi și lactozo-negativi;
o pe medii cu selectivitate mai mare (mediul Hektoen), sunt inhibați bacilii
coliformi (lactozo-pozitivi), lactozo-negativii putând fi diferentiați după cum
produc sau nu H2S - tulpinile care dezvoltă colonii H2S formează colonii cu
centrul de culoare neagră, “în ochi de pisică”.
3. Caractere biochimice:
a. triajul biochimic se realizează pe două medii multitest,
 MIU (mobilitate-indol-ureză) și TSI (triple sugar iron)
b. baterie extinsă de teste biochimice.
4. Caractere antigenice – utile pentru identificarea speciilor de Shigella și de Salmonella.

Genul Shigella:
- bacili gram negativi, imobili, lactozo – negativi
- fermentează glucoza făra gaz, nu produc H2S și urează
- nu descompun lizina
- nu cultivă pe mediu cu citrat de Na.
Genul Salmonella:
- bacili gram negativi lactozo-negativi, mobili, produc H2S
- descompun lizina si ornitina
- cultiva pe madiu cu citrat de Na
1
 - nu produc indol, ureaza si fenilalanin-dezaminaza
II. Etiologia sindromului diareic infecţios

Definiţie BDA: peste 3 scaune/ zi, semiconsistente sau apoase, determinând pierderi
lichidiene, ce pot duce la dezechilibre hidroelectrolitice însoţite de colaps cardio-vascular.

Agenţi etiologici bacterieni:

 Sindrom holeriform: gastroenterită acută cu scaune apoase, abundente, febră
absentă, absenţa tenesmelor şi a durerilor abdominale, absenţa leucocitelor în scaun.
o Vibrioni holerigeni
o Vibrioni NAG
o ECET, ECEP, ECAD, ECEAg
o Campylobacter

 Sindrom dizenteriform: colită acută cu scaune mucosanguinolent-purulente, febră,

tenesme şi dureri abdominale prezente, reacţie inflamatorie acută intensă în scaun.
o Shigella spp.
o ECEI
o Campylobacter
o Unele tulpini de Salmonella netifoidice
o Yersinia enterocolitica
o Entamoeba histolytica
Agenţi etiologici virali: rotavirusuri, enterovirusuri, adenovirusuri, coronavirusuri,
astrovirusuri, calicivirusuri (determină diaree apoasă).
Agenţi etiologici parazitari: Giardia duodenalis, Cryptosporidium parvum.

III. Diagnostic de laborator BDA, sdr dizenteriform

Scop: Izolarea şi identificarea Salmonella, Shigella, Yersinia (lactozo negativi)

Prima zi:
A. Prelevare
 din scaun emis spontan
 cât mai aproape de debut şi înaintea antibioticoterapiei
 în coprocultor cu mediu de transport Cary-Blair
 fragmente de mucus, sânge, puroi sau din 4-5 locuri, aproximativ 1 g
B. Transport în 1-2 ore; eventual refrigerare (max 24-48 ore)
C. Examen macroscopic
 miros
 culoare
 aspect
D. Examen microscopic direct
 Frotiu colorat cu albastru de metilen: celule inflamatorii, hematii, enterocite
PMN> 50/câmp alături de macrofage şi hematii în shigeloze
PMN<20/câmp în salmoneloze
Polimorfonucleare şi hematii în campilobacterioze.

2
 - Agenţi etiologici cu morfologii particulare (Campylobacter, formă de ʺpescăruș în
zborʺ)
E. Coprocultura este examenul de bază în diagnosticul sindromului diareic infecţios.
Scop: Izolarea şi identificarea Salmonella, Shigella, Yersinia (lactozo negativi)

 Se însămânţează pe medii cu selectivitate joasă şi medie (MacConkey şi Hektoen) şi

mediu de îmbogăţire pentru Salmonella (bulion selenit acid de sodiu).

A doua zi:
 Repicăm din mediul de îmbogăţire pe mediu cu selectivitate medie
 Coloniile lactozo-negative cu/fără H2S le repicăm pe mediile TSI, MIU şi pe un
mediu diferenţial lactozat, pentru verificarea purităţii culturii (minim 3 colonii L-).

Mediul Mac Conkey

(https://microbeonline.com/macconkey-agar-mac-composition-preparation-uses-and-colony-
characteristics/)

Mediul Hektoen

3
Hektoen enteric agar colonies: Stool culture on Hektoen enteric agar: mixed flora including
Escherichia coli (red arrow), Salmonella (blue arrow), and Proteus vulgaris (yellow arrow).

Mediul Hektoen (colonii L negativ, producătoare sau nu de H2S)

http://sms-home.com/pages/Hektoen%20Enteric%20Agar_jpg.htm

A treia zi:
 Urmărim repicajul din mediul de îmbogăţire - prezenţa coloniilor lactozo
negative  hidrogen sulfurat.
 Citirea testelor de triaj (medii multitest) şi identificare antigenică pentru
coloniile suspecte de Salmonella, Shigella, Yersinia;
 Identificare biochimică extinsă
 Antibiogramă (NU pt Salmonella; prelungeşte starea de portaj)
A patra zi:
 Formularea rezultatelor

Principii de tratament:
- reechilibrare hidroelectrolitică;
- antibioterapie în formele severe de boală (forme medii: fluorochinolone, cotrimoxazol,
azitromicină, conform antibiogramei, sau ceftriaxonă, în formele severe).

În sală se găsesc:
- coprocultură Hektoen –prezent Shigella
- coprocultură MacConkey –prezent Shigella
- bulion selenit
- triaj biochimic: TSI, MIU, Simmons

4
- repicaj pentru verificarea purităţii culturii pe AABTL
- tabel de interpretare al triajului biochimic
- frotiu bacili gram negativi, cultură, colorat Gram.

5
6