MICROBIOLOGIE,

LP1, SEMESTRUL I 2013

(Dr. Maria Nica)
* LABORATORUL DE MICROBIOLOGIE:
- ORGANIZARE, FUNCTII

* MASURI DE PROTECTIE A MUNCII IN
LABORATORUL DE MICROBIOLOGIE


LABORATORUL DE MICROBIOLOGIE:
- ORGANIZARE,
- FUNCTII
Activitatea din laboratoarele de microbiologie este
reglementata prin acte normative (ordine, norme)
care aplica recomandarile bazate pe observatii,
studii, experimente ale grupurilor de experti (ghiduri,
manuale).
In prezent, in Romania, activitatea laboratoarelor de
analize medicale este reglementata prin Ordinul 119
al Ministrului sanatatii, publicat in Monitorul oficial
nr.142/17 februarie 2004, completat cu Norma din 20
august 2007 privind functionarea laboratoarelor de
analize medicale, publicata in Monitorul oficial 617
din 6 septembrie 2007 (M.Of. 617/2007).

OBIECTIVELE Laboratorului de
Microbiologie:

Laboratorul de microbiologie medicala este locul unde se
desfasoara toate activitatile necesare pentru diagnosticul
microbiologic.
Organizarea este astfel conceputa incat sa indeplieasca
urmatoarele functii:
1. Sa asigure un spatiu corespunzator desfasurarii algoritmului
de diagnostic microbiologic in vederea izolarii, identificarii si
testarii sensibilitatii la antibiotice a microorganismelor
implicate in etiologic bolilor infectioase,
2. Sa previna contaminarea prelevatelor biologice,
3. Sa previna raspandirea microorganismelor patogene in afara
laboratorului,
4. Sa previna imbolnavirile profesionale ale personalului, a
infectiilor de laborator

OBIECTIVELE Laboratorului
de Microbiologie:
Diagnosticul microbiologic vizeaza urmatoarele
obiective:
1. Stabilirea prezentei sau absentei unor
microorganisme in prelevatul clinic.
2. Identificarea microorganismului: apartenenta la gen,
specie, subspecie, tip etc, pe baza unor proprietati ale
acestuia.
3. Evaluarea implicarii microorganismului intr-un proces
infectios.
4. Testarea sensibilitatii la antibiotice si chimioterapice.
5. Monitorizarea eficientei tratamentului antibacterian.
6. Depistarea purtatorilor sanatosi de germeni patogeni,
in activitatea de preventie, profilaxie.

AGENTI ETIOLOGICI -
MICROORGANISME CU POTENTIAL
INFECTIOS
Existenta grupurilor distincte de agenti infectiosi:

- bacterii,
- virusuri,
- prioni,
- fungi,
- protozoare.
LABORATOARE DE MICROBIOLOGIE IN
DOMENII CONEXE


* Microbiologie pentru sanatate publica:
- epidemiologie,
- igiena,
- Microbiologie veterinara
- Microbiologie farmaceutica, industria medicamentelor,
- Microbiologie alimentara,
* Laboratoare profilate pe:
- Microbiologie clinica,
- Microbiologie epidemiologica,
- sanitara,
- sanitar- veterinara,
- farmaceutica,
- alimentara,
- biologie moleculara, genetica etc.

LABORATORUL DE
MICROBIOLOGIE- ORGANIZARE
Pentru a-si indeplini functiile, laboratorul de
microbiologie este organizat dupa reguli care
vizeaza:
- amplasarea cladirii
- conditii corespunzatore privind absenta curentilor
de aer, iluminarea corespunzatoare etc.
- respectarea circuitelor obligatorii, pentru
prevenirea contaminarii probelor, a personalului, a
pacientilor: compartimente cu circulatie controlata,
respectarea circuitului probelor.

LABORATORUL DE
MICROBIOLOGIE- ORGANIZARE
In functie de complexitatea testelor si de tipul patogenilor
investigati, spatiul destinat laboratorului este organizat pe
urmatoarele consideratii
- organizare si personal
- teste si procedee procesate
- echipamentul folosit
- necesitati speciale electrice, pentru aer conditionat
si instalatii
- echipamente de securitate si sistem de alarma
- eliminarea deseurilor infectioase
Desi arhitectii, inginerii, constructorii sunt angajati pentru a
desena si a construi spatiul, microbiologul trebuie sa aiba un rol
activ pentru a se asigura ca designul si planul general optimizeaza
work-flow-ul si eficienta

LABORATORUL DE MICROBIOLOGIE-
ORGANIZARE
Compartimente distincte, cu destinatie bine stabilita,
corespunzatoare fiecarei activitati:

1. Incapere pentru Recoltare probe,
2. Incapere pentru Receptionarea, inregistrarea prelevatelor,
3. Incapere destinata Procesarii, insamantarii prelevatelor;
4. Compartimente in functie de tipul de prelevat/ calea de transmitere a infectiei (infectii
aerogene, digestive), gradul de infectiozitate al prelevatelor patologice, tipul tehnicilor
utilizate in diagnosticul microbiologic etc:
* Compartiment de Diagnostic microbiologic al prelevatelor normal sterile: lichide de
punctie, hemoculturi,
* Compartiment de Diagnostic Infectii digestive- Coproculturi,
* Compartiment Diagnostic Infectii respiratorii non TBC (exudate nazale si faringiene,
spute flora, aspirat bronsic etc),
* Compartiment Diagnostic Infectii TBC (tuberculoza),
* Compartiment Diverse (uroculturi, secretii otice, oculare, vaginale, uretrale, secretii
plagi superficiale, colectii profunde etc),
* Compartiment Preparare medii de cultura,
* Compartiment Sterilizare (caldura uscata, vapori sub presiune),
* Vestiar, Grup sanitar cu dus,
* Incaperi destinate depozitarii Reactivilor, stocarii tulpinilor izolate etc.



LABORATORUL DE
MICROBIOLOGIE- ORGANIZARE
* Impartirea modulara a laboratorului de microbiologie
(recomandata pentru maxim de flexibilitate):
- activitatile inrudite trebuie amplasate alaturat (de ex.
inactivarea deseurilor si spalarea sticlariei),
- birourile administrative trebuie situate langa intrarea
principala, departe de potentiale activitati contaminante,
- suprafetele de lucru (manipularea agentilor infectiosi)
trebuie amplasate in spatii izolate,
- holurile trebuie sa fie sufiecient de spatioase pentru a
putea trece un om pe langa celalalt (ambele sensuri),

Repartizarea spatiului in
laborator

- spatii pentru Colorare si microscopie optica,
- Microscopie cu camp intunecat si fluorescenta (unde sunt
aplicabile)
- spatii compartimentate si izolate (sistem complet separat),
exclusiv pentru diagnosticul microbiologic al infectiilor cu
Mycobacterium spp (Tuberculoza),
- Compartiment Serologie (linie ELISA, WesternBlott)
- spatii separate, compartimentate, pentru teste moleculare
specializate (Biologie moleculara),
- Rafturi etichetate pentru aranjarea materialelor consumabile
uzuale,
- Spatii separate pentru birouri, biblioteca si sala de conferinte

Sistemul de aer conditionat
in Laboratorul de Microbiologie

- temperatura constanta in jur de 20-22C si o umiditate
relativa de 40-60%,
- furnizarea aerului conditionat proaspat in diferite locatii
se face prin instalarea difuzoarelor cu ventilatie in
tavane,
- conductele de aer conditionat sunt construite din metal
galvanizat, ceea ce permite curatarea lor in interior in
cazul unei contaminari accidentale,
- filtre de absobtie pe baza de carbune activ si filtre HEPA,
- In laboratoarele cu nivel de biosiguranta ridicat (3-4)
trebuie intretinuta o presiune negativa cu respectarea
zonelor administrative.
Sistemul mecanic

- Acesta include sistemul electric, instalatiile,
comunicatiile si iluminatul:
- circuite speciale planificte pentru computere sau
alte sisteme consumtoare de energie,
- circuite care furnizeaza 110 si 220 volti in functie
de necesitati,
- telefonul si terminalele calculatoarelor trebuie
situate in locuri de unde pot fi folosite cu usurinta,
- instalatiile furnizeaza apa calda, apa rece, apa
deionizata si apa distilata etc

Peretii, podelele, tavanele si
mobilierul

Exista reglementari privind tipul de materiale si
finisarea incaperilor si mobilierului de laborator, pentru
reducerea la minimum a contaminarii mediului:
materiale pentru paviment,
vopsele,
suprafetele mobilierului,
realizarea imbinarilor si unghiurilor intre paviment si
peretii laboratorului, care trebuie sa fie usor de curatat
(colturi curbe),
inaltarea mobilierului de la podea pentru facilitarea
manevrelor de curatire etc

Peretii, podelele, tavanele si
mobilierul

- peretii trebuie vopsiti cu vopsea lavabila pentru a
putea fi curatati,
- podelele trebuie acoperite cu linoleum,
- tavanul si sursele de lumina artificiala sa nu permita
retinerea prafului (fara denivelari) si sa fie accesibile la
curatenie si dezinfectie,
- mobilierul trebuie sa fie flexibil astfel incat sa poata fi
dezasamblat si mutat cand apar schimbari sau cand un
nou echipament trebuie instalat,
- Suprafetele de lucru (si mobilierul) trebuie sa fie
impermeabile la apa si rezistente la dezinfectante si la
caldura moderata.


PRINCIPALELE ECHIPAMENTE SI
DISPOZITIVE UTILIZATE IN
LABORATORUL DE MICROBIOLOGIE

- echipamente de protectie a prelevatelor si personalului:
hote sau cabinete de biosiguranta biologica (de clasa I-IV, in
functie de caracterele prelevatelor si/ sau microorganismelor
posibil implicate),
- echipamente pentru observarea microscopica: microscoape,
lupe,
- echipamente pentru prelucrarea si incubarea probelor:
centrifugi (2500- 5000- 10 000- 20 000 rot/min, cu si fara
racire), termostate, incubatoare: 28 C, 35 C, 37 C, 42 C,
56C, balante,
- echipamente pentru prepararea mediilor de cultura: aparat
pentru demineralizare, distilare apa, aparat automat de
preparare si distribuire medii de cultura, pH- metru,
higrometru,

PRINCIPALELE ECHIPAMENTE SI
DISPOZITIVE UTILIZATE IN
LABORATORUL DE MICROBIOLOGIE
- echipamente pentru pastrarea reactivilor, mediilor de cultura,
tulpinilor bacteriene izolate: frigidere, congelatoare (- 20, -
80C)
- echipamente pentru diagnosticul prin metode automate:
sisteme automate de izolare si identificare bacteriana si/sau
pentru testarea sensibilitatii la antibiotice: BacT/ALERT,
BACTEC, MB/ BACT, mini API, VITEK 2 Compact, MICROSCAN,
- echipamente pentru sterilizare: etuve/ pupinele, autoclave,
lampi UV, - pompa de vid pentru sterilizare prin filtrare etc,
- dotari pentru stocarea materialelor contaminate: galeti de
inox cu capac, saci autoclavabili, cilindri, cristalizoare cu
solutii dezinfectante (preparate zilnic),
- instrumentar divers: foarfeci, bisturie, pense, seringi, anse
bacteriologice,
- Materiale sterile, unica utilizare, consumabile diverse,

PRINCIPALELE ECHIPAMENTE SI
DISPOZITIVE UTILIZATE IN
LABORATORUL DE MICROBIOLOGIE
- truse de coloranti (automate de colorare Gram, Ziehl-
Neelsen),
- diverse dispozitive: becuri Bunsen, trepiede, stative
metalice, cosuri sarma, cutii cu capac pentru transportul
probelor, casolete cu capac si orificii, termometre
camera,
- inventar sticlarie si/sau plastice de laborator: eprubete,
tuburi de centrifuga, pipete gradate, pipete Pasteur,
baghete de sticla, baloane, pahare, exicatoare,
cristalizoare, cilindrii gradati, lame si lamele pentru ex.
microscopic, camere de numarat, placi Petri,
- recoltoare sterile pentru diverse prelevate patologice:
tampoane de exudat, urocultoare, coprorecoltoare,
seringi etc.

Masuri de biosiguranta si
biosecuritate in laboratorul de
microbiologie
1. Este strict interzis accesul persoanelor straine in laborator,
2. Toate prelevatele biologice trebuie considerate a fi cu potential infectios,
3. Este obligatorie purtarea echipamentului de protectie (echipamentul de
laborator sa fie pastrat separat de cel utilizat in exteriorul laboratorului),
4. Este necesara purtarea manusilor de latex, pentru anumite manevre, dar in nici
un caz aproape de flacara becului Bunsen,
5. Este Interzis a se manca, consuma bauturi sau a se fuma in incinta laboratorului
(in orice incapere din institutia medicala),
6. Nu se recomanda purtarea unghiilor false, lentilelor de contact de catre
personalul care manipuleaza tulpini bacteriene,
7. Interzisa pipetarea cu gura,
8. Nu se depun pe masa de lucru obiecte de uz personal (genti, serviete, caiete,
haine etc), se depoziteaza in vestiar,
9. Manipularea produsului patologic se face la flacara becului Bunsen: orice
manevra implica flambarea gatului recipientelor din sticla, atat la deschidere, cat
si la inchidere, a pipetelor etc, si sterilizarea prin incalzire la incandescenta (la
rosu) a ansei bacteriologice (bucla si firul; portansa se flambeaza pe 1/3 din
lungimea sa),

Masuri de biosiguranta si
biosecuritate in laboratorul de
microbiologie
10. Bucla ansei incarcata cu produs patologic sau cultura bacteriana, se introduce la baza
flacariipentru a fi arsa, unde temperatura este mai scazuta (la varful flacarii exista riscul
improscarii cu bacterii inca nedistruse termic si contaminarea executantului si mediului),
11. In momentul manipularii ansei bacteriologice incarcate cu produs biologic sau cultura
bacteriana nu se fac gesture ample, necontrolate, nu se lasa ansa din mana atata timp cat
este incarcata cu produs contaminant,
12. Inainte de efectuarea unor tehnici de diagnostic bacteriologic, se pregateste protocolul
de lucru, se insusesc etapele, se pregateste tot materialul necesar, se controleaza mental
evolutia pasilor, pentru a nu exista niciun pericol de raspandire a germenilor sau a
contaminarilor incrucisate,
13. Nu se alearga, nu se fac miscari bruste in laborator, pentru a nu creea curenti de aer ce
ar putea antrena bacterii cu transmitere aerogena, cu potential infectios,
14. Pipetele gradate, pipetele Pasteur, lamele, lamelele contaminate, dupa folosirea lor, se
imerseaza in solutii dezinfectante proaspete, in cilindrii sau cristalizoare, care sa le
acopere in proportie de peste din lungimea lor sau in intregime,
15. Toate obiectele contaminate, se introduc in saci autoclavabili, apoi in galeti cu capac
(etichetate: Sticlarie sau Plastice) si transportate in Compartimentul Sterilizare, pentru
a fi autoclavate,

Masuri de biosiguranta si
biosecuritate in laboratorul de
microbiologie
16. Obiectele ascutite, taietoare, intepatoare (ace de seringa, lame de bisturiu-
unica folosinta) se elimina fara a fi atinse, in recipiente de plastic galbene
(etichetate corect, cu sigla de biosiguranta) inchise etans si eliminate la
Deseuri infectioase, pentru a fi incinerate,
17. Se respecta codul culorilor in laborator: culoarea galbena inseamna material
infectios (saci plietilena de diverse capacitati, cutii carton de transport deseuri
infectioase, cutii plastic cu capac pentru obiecte taietoare, intepatoare etc) si
culoarea neagra care inseamna deseuri menajere, neinfectioase,
18. In cazul unei contaminari accidentale a unei suprafete de lucru cu produs
infectios, se anunta imediat persoana care raspunde de activitatea din
laborator, se acopera suprafata cu tifon, panza, peste care se toarna solutie
dezinfectanta, proaspata, se mentine cel putin 30 min, dupa care se trece a
curatarea suprafetei respective,

Masuri de biosiguranta si
biosecuritate in laboratorul de
microbiologie

19. Se recomanda manipularea cu maxima atentie a substantelor
chimice caustice, toxice (acizi, baze, aldehide, cetone, alcooli) folosind
echipament adecvat: manusi, masti, ochelari de protectie etc.
20. Manevrarea gazelor, a diferitelor aparate elctrice (autoclav,
centrifuga, pompa de vid etc), a sticlariei de laborator, pentru evitarea
oricarui tip de accident de laborator: explozii, incendii, traumatisme.
21. Spalarea cu apa calda si sapun lichid dezinfectant a mainilor, ori de
cate ori se incheie o etapa de lucru; se recomanda solutii protectoare
ale pielii dupa spalare si stergere cu prosop de hartie de unica folosinta.

Hematology laboratory
Biochemistry laboratory
Molecular biology laboratory in
Virology
PCR in house Polyoma
Molecular biology laboratory-
Virology
RECEPTION OF MICROBIOLOGY
LABORATORY
MICROBIOLOGY LABORATORY


BACT/ALERT SYSTEM
Vitek 2 C system
AUTHOMATIC DISTRIBUTION OF
CULTURE MEDIA
BIOSAFETY CABINET LEVEL
II

BIBLIOGRAFIE


1. Ghid National de Biosiguranta pentru laboratoarele medicale. Ministerul Sanatatii, Romania, 2005 (Traducere
Laboratory Biosafety Manual- Ed.a III-a, Organizatia Mondiala a Sanatatii, Geneva, 2oo4.)
2. ORDIN nr. 1.301 din 20 iulie 2007, pentru aprobarea Normelor privind funcionarea laboratoarelor de
analize medicale. EMITENT: MINISTERUL SANATATII PUBLICE. PUBLICAT N: MONITORUL OFICIAL nr. 617 din 6
septembrie 2007 .
3. Agnes Perrin, Anton van Loon. Quality Management in Microbiology, pg.59-68. European Manual of Clinical
Microbiology, 1
st
Edition, April 2012, France. Editors: Giuseppe Cornaglia, Rene Courcol, Jean- Louis Herrmann,
Gunnar Kahlmeter, Helene Peigue- Lafeuille, Jordi Vila- SFM, ESCMID.
4. Daniel J. Diekema and Michael A. Pfaller. Infection Control Epidemiology and Clinical Microbiology , cap. 6, pag. 73- 84.
Manual of Clinical Microbiology 10
th
Edition, vol.1, 2011. Editors: James Versalovic, Karen C. Carroll, Guido Funke,
James H. Jorgensen, Marie Louise Landry, David W. Warnock, ASM Press, Washington, Dc.