Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
IMUNOFLUORESCENŢĂ
se bazează pe reacţia Ag-Ac în care
Ac (imunoglobuline), purificaţi sau
existenţi în serul speciei donatoare,
sunt legaţi chimic de un fluorocrom,
cel mai utilizat fiind izotiocianatul
de fluoresceină (FITC).
Anticorpii specifici
din serul hiperimun se separă IgG-ul
care apoi este cuplat cu un fluorocrom
(FITC).
Tehnica de lucru
Etalarea materialului cercetat pe lamă sub formă de:
frotiu, amprentă sau secţiuni crio;
Fixarea preparatului în acetonă;
Rehidratarea preparatului cu (PBS);
Cuplarea cu anticorpii marcaţi - acoperirea suprafeţei
preparatului cu conjugatul Ac-FITC şi menţinerea lui
într-o cameră umedă la 37ºC;
Spălarea suprafeţei preparatului într-o baie cu tampon
(PBS) şi agitare;
Montarea preparatului prin aplicarea unei lamele cu
ajutorul unei picături de glicerină (nefluorescentă);
Citirea preparatului la un microscop cu lumină U.V.
Se execută şi o serie de martori pozitivi şi negativi.
Interpretare
Ex. - IF directă pentru diag.
pestei porcine clasice (se folosesc
frotiuri din măduvă hematogenă obţinută din
sternebre):