LUCRAREA 10

Diagnosticul de laborator al infeciilor cauzate de enterobacterii:

Escherichia coli, Klebsiella, Proteus, Shigella, Salmonella
Familia Enterobacteriaceae cuprinde:
bacterii condiionat patogene: Escherichia coli, Klebsiella, Proteus;
bacterii patogene: Shigella, Salmonella.
Patogenie i produse patologice
Escherichia coli spp. produc:
infecii ale tractului intestinal (enterocolite). n aceste infecii sunt implicate
tulpinile patogene de Escherichia coli: EPEC, EHEC, EIEC, EAEC, EAggEC.
Produsele patologice (p.p.) sunt reprezentate de: materii fecale, bil, alimente, vrsturi;
infecii extraintestinale:
- infecii urinare (UPEC) - pp: urin;
- infecii intra-abdominale i ale plgilor - pp: puroi;
- meningit - p.p.: LCR;
- bacteriemie - p.p.: snge.
Klebsiella spp. (K. pneumoniae, K. oxytoca, K. ozaenae, K. rhinoscleromatis) produc:
pneumonii (K. pneumoniae) - p.p.: sput;
infecii urinare (K. pneumoniae, K. oxytoca) - p.p.: urin;
infecii din sfera ORL: ozena (K. ozaenae), rinoscleromul (K. rhinoscleromatis) p.p.: secreii nazale;
infecii ale esuturilor moi, ale urechii medii - p.p.: puroi;
infecii digestive - p.p.: materii fecale, bil, vrsturi, alimente;
meningit, septicemie - p.p.: LCR, snge.
Proteus spp. (P. mirabilis, P. vulgaris) sunt implicate n:
toxiinfecii alimentare - p.p.: materii fecale, vrsturi, alimente;
infecii urinare - p.p.: urin;
meningit - pp: LCR;
abces cerebral (P. mirabilis) - p.p.: puroi;
pneumonii - p.p.: sput;
infecii din sfera ORL: - p.p.: secreii nazale;
septicemie - p.p.: snge.
Shigella spp. (S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii, S. sonnei) produc:
dizenteria bacilar - p.p.: materii fecale emise spontan (recoltate pe sond Nelaton de la
purttori), vrsturi, alimente.
Salmonella spp. (S. typhi, S. paratyphi, S. enteritidis) produc:
salmoneloze: febre tifo-paratifoide;
salmoneloze digestive: toxi-infecii alimentare, gastro-enterite;
manifestri extra-digestive:
1

- bacteriemii nontifoidice;
- infecii pleuro-pulmonare;
- afeciuni osteo-articulare: osteite, osteomielite, artrite septice, etc.;
- infecii nozocomiale;
- infecii cardio-vasculare: pericardite, arterite;
- infecii urinare;
- infecii abdominale: colecistite, abces al ficatului, splinei;
- infecii ale SNC: meningite, abces al creierului, abces epidural, etc.
Produsele patologice se recolteaz n cazul:
febrei tifoide (S. typhi). de la bolnavi:
n prima sptmn - snge;
n a II-a sptmn. - materii fecale, bil, suc duodenal;
n a III-a sptmn - materii fecale, snge pentru serodiagnostic;
n a IV-a sptmm - snge pentru serodiagnostic;
- de la purttor: materii fecale dup administrarea unui purgativ, bil;
gastroenterite (S. enteritidis) - p.p.: materii fecale, vrsturi, alimente;
septicemii - p.p.: snge.
Diferenierea enterobacteriilor
Familia Enterobacteriaceae include germeni care se pot multiplica pe medii simple, sunt
aerobi sau facultativ anaerobi, utilizeaz glucoza cu sau fr producere de gaz, sunt
oxidazo-negativi i catalazo-pozitivi. Formeaz colonii de tip S (R n cazul culturilor
"vechi") sau M (pentru speciile capsulate), pot fermenta lactoza (Escherichia coli,
KlebsielIa spp.) sau sunt lactoz negativi (Salmonella spp., Shigella spp.). Diferenierea
enterobacteriilor se realizeaz prin:
Examen direct:
se efectueaz doar din produse patologice normal sterile;
se pot evidenia bacili G-, ciliai (Escherrichia coli, Proteus) sau capsulai
(Klebsiella).
Izolare:
- pe medii selectiv-difereniale pentru enterobacterii (Leifson, Levine, SS - pentru
Shigella i Salmonella);
- pe medii difereniale (geloz lactozat);
- pe medii geloz snge.
Identificare:
caractere morfotinctoriale
Bacteria
Coloraie
Dispoziie
Cili
Capsul
Escherichia coli
Bacili GNeregulat Peritrichi
Klebsiella
Cocobacili GDiplo
+
Proteus
Bacili polimorfi GNeregulat Peritrichi
Shigella
Bacili GNeregulat
Salmonella
Bacili GNeregulat Peritrichi

caractere de cultur

Bacteria
Escherichia coli

Klebsiella

Proteus

Shigella
Salmonella

Cultivare pe mediu de cultur solid

Formeaz colonii tip S, este lactozo +
- pe geloz - lactoz produce colonii galbene;
- pe mediu Levine formeaz colonii violete cu luciu metalic;
- pe geloz-snge formeaz colonii cenuii, unele tulpini produc
hemoliz ;
- pe MacConkey cu D-sorbitol (EHEC nu fermenteaz sorbitolul
sau l fermenteaz tardiv). Coloniile suspecte, sunt de tip S, 1-3
mm, necolorate (coloniile sorbitol-pozitive au o culoare roz).
Formeaz colonii mari de tip M, cu aspect de "curgere" pe
suprafaa mediului de cultur (tendin de confluare). Este lactozo
+.
Klebsiella pneumoniae nu se dezvolt pe medii nalt selective i
este parial inhibat pe cele moderat selective.
- pe medii cu bil produce colonii tip S, transparente, lactozo - ;
- pe medii fr bil nu formeaz colonii. Prezint fenomen de
crare, colonii cu caracter invadant, margini dantelate ce pot
acoperi toat suprafaa mediului;
- fenomenul Dienes:
- dac tulpinile provin de la aceeai specie i sunt nsmnate
pe aceeai plac prin cretere se suprapun;
- dac tulpinile sunt diferite, ntre ele rmne o zon de
demarcaie.
Formeaz colonii tip S, transparente, lactozo Formeaz colonii tip S, transparente, lactozo -;
colonii ochi de pisic pe mediu SS.

caractere biochimice
- importante pentru diferenierea enterobacteriilor;
- toate descompun glucoza:
enterobacteriile condiionat patogene sunt L+:
- pe geloz lactozat formeaz colonii galbene, culoarea mediului vireaz n
galben;
- pe mediu Leifso produc colonii roii, culoarea mediului vireaz n rou;
enterobacteriile patogene sunt L-:
- colonii transparente, culoarea mediului rmne neschimbat.
Caractere biochimice
Bacteria
TSI
MIU
Simmons
G
L
Z
H2S
Uree
I
M
Escherichia coli
+
+
+
+
+
Klebsiella
+
+
+
+
V
+
Proteus
+
+
+
V
+
+
Shigella
+
V
Salmonella
+
+
+
+

 Identificare antigenic
Bacteria
Escherichia coli

Klebsiella
Proteus
Shigella
Salmonella

Tipul de reacii
Reacii de aglutinare pe lam:
- cu seruri polivalente;
- apoi ce seruri monovalente pentru EPEC, EIEC, EHEC
(O157H7).
Reacia de umflare a capsulei (determin prezena antigenului K)
Reacii de aglutinare pe lam anti O i anti H
Reacii de aglutinare pe lam cu seruri specifice de grup
Reacii de aglutinare pe lam:
- cu seruri polivalente de AgO;
- cu seruri monovalente pentru serogrupurile A, B, etc.;
- cu seruri monovalente pentru serotip;
- determinarea antigenului Vi.

Determinarea patogenitii
Klebsiella pneumoniae inoculat la oareci intraperitoneal sau subcutanat determin
septicemie mortal;
Shigella - testul keratoconjunctivitei la cobai (testul Sereny).
Antibiograma
se efectueaz la toate tulpinile isolate;
tulpinile de Proteus spp. pot prezenta multirezisten, mai ales cele izolate din
infecii nozocomiale.
Diagnostic serologic
n febra tifoid: detectarea i titrarea anticorpilor fa de Ag O, Ag H ai S. typhi i
paratyphi A, B (reacia Widal).
Diagnosticul de laborator n infeciile produse de Escherichia coli
Genul Escherichia cuprinde n bun parte germeni comensali. Specia reprezentantiv este
Escherichia coli. Dei, majotitatea tulpinilor de E. coli sunt saprofite sau condiionat
patogene, exist i tulpini patogene (patotipuri: E. coli enteroagregativ, E. coli
enterohemoragic, E. coli enteroinvaziv, E. coli enteropatogen, E. coli enterotoxigen, E.
coli aderent difuz). Diagnosticul de laborator este bacteriologic, direct.
Diagnosticul de laborator microbiologic n infeciile cu localizare digestiv
Recoltarea i transportul se efectuaz cu respectarea regulilor impuse pentra aceste
operaii. Se recoltaz materii fecale, lichid de vrstur etc.
Examinarea macroscopic este urmat de examen de laborator. n cazul infeciei
produs de E. coli enterohemoragic (EHEC), materiile fecale pot avea aspect hemoragic,

cu lambouri de mucoas epitelial. De obicei se face frotiu. Examinarea se face ntre

lam i lamel i se pot observa hematii i PMN.
Cultura. Cultivat pe MacConkey cu D-sorbitol, tulpina EHEC nu fermenteaz sorbitolul
sau l fermenteaz tardiv. Coloniile suspecte, sunt de tip S, 1-3 mm, necolorate
(coloniile sorbitol pozitive au o culoare roz).
Identificarea se face pe baza:
- caracterelor morfotinctoriale: bacili gram-negativi;
- caracterelor de cultur: colonii de tip S, cu caracterele menionate mai sus;
- caracterelor biochimice (se examineaz numai acolo unde sunt condiii de
biosiguran, conform unei Directive Europene): fermenteaz glucoza (cu producere de
gaz), lactoz-pozitivi, nu fermenteaz (sau fermenteaz tardiv) sorbitolul, nu produc H2S,
pot produce indol, sunt ureaz-pozitivi, mobili (exist i tulpini imobile) etc.;
- caracterelor antigenice: prin reacii de aglutinare sau latex aglutinare (seruri
monovalente anti O157 i anti H7).
Antibiograma este recomandat pentru supravegherea apariiei fenomenului de
rezisten la antibiotice i chimioterapice; se realizeaz prin metode difuzimetrice.
Diagnosticul n infeciile urinare
n principal se recolteaz urin. n funcie de forma clinic se poate recolta i snge (n
pielonefrita acut) sau chiar i LCR. nainte de recoltarea urinei, pe lng regulile impuse
este necesar s se realizeze toaleta local. Atunci cnd nu se poate recolta prima urin de
diminea, trebuie ateptat pentru recoltare 3-4 ore dup miciune. Dac p.p. nu este
prelucrat imediat (n maxim 30 de minute dup recoltare), trebuie meninut la
temperatura de refrigerare, iar transportul trebuie realizat la +4C. Se recolteaz urina
"din mijlocul jetului". Exist i alte tehnici de recoltare, neinvazive sau invazive (puncie
i aspiraie suprapubian, cateterizare uretral, cu riscurile respective).
Examenul macroscopic (urina poate fi tulbure) implic pregtirea sedimentului urinar".
Examinarea preparatului se face ntre lam i lamel, stabilindu-se numrul de bacterii i
respectiv numrul de PMN pe cmp (dac exist leucociturie).
Cultura. Pentru cultivare se pot utiliza mai medii diferite. Se face o urocultur cantitativ
pentru determinarea numrului de bacterii/ml de urin. Urina se dilueaz 1/1.000 i apoi
se nsmneaz 0,1 mililitri de urin diluat. Pentru calcul numrului de bacterii/mL
urin, numrul de colonii aprute dup cultivare se multiplic cu 10 i respectiv cu 1000.
Interpretare urocultur cantitativ: dac numrul de bacterii/ml este mai mare de
100.000, se consider urocultura ca fiind pozitiv. Lipsa coloniilor sau un numr de
maxim de 10.000 bacterii/ml, semnific o urocultur negativ.
Dac urocultur este pozitive, bacteria izolat se identific pe baza caracterelor prezentate
mai sus i se trateaz pacientul conform antibiogramei.
Diagnosticul de laborator n infeciile produse de genul Klebsiella
Bacteriile din genul Klebsiella sunt enterobacterii imobile, nesporulate. Degradeaz
glucoza cu producere de gaz i fermenteaz lactoza. Specia tip este Klebsiella
pneumoniae (bacili Gram negativi, capsulai). Este un microb condiionat patogen. Poate
produce TLA de tip infecios, infecii ale tractului respirator superior, infecii urinare etc.,
inclusiv infecii nosocomiale.

Pentru diagnostic, se ia ca exemplu cazul de pneumoniei produse de Klebsiella

pneumoniae. Diagnosticul integral include elemente clinice, paraclinice i de laborator;
diagnosticul bacteriologic permite stabilirea etiologiei i tratamentului corespunztor.
Recoltarea i transportul preparatului patologic se face cu respectarea regulilor
cunoscute. Se recolteaz sput.
Examenul macroscopic poate evidenia aspectul mucoid, de culoare rou nchis, "n
jeleu de coacze" al sputei.
Examenul microscopic al p.p. permite observarea prezenei macrofagelor alveolare,
celulelor inflamatorii (PMN) i a barililor gram negativi, de dimensiuni relativ mari, cu
capsul (halou, vizibil).
Cultura. P.p. se cultiv pe medii de cultur obinuite (18-24 ore, 35-37C) i se
examineaz coloniile izolate, pentru identificare. Se recomand utilizarea mediilor slab
selective (MacConkey), deoarece Klebsiella pneumoniae nu se dezvolt pe medii nalt
selective i este parial inhibat pe cele moderat selective. K pneumoniae formeaz
colonii lactoz-pozitive, mari, de tip M, cu aspect de "curgere" pe suprafaa mediului
de cultur (tendin de confluare).
Identificarea microorganismului se face pe baza caracterelor:
morfotinctoriale: barili gram-negativi, dimensiuni mari, capsulai, dispui n
lanuri scurte, perechi sau izolai;
de cultur: colonii lactoz pozitive, de tip M, mari (2-3 mm la 24 de ore, peste
4 mm la 48 ore), bombate, vscoase, cremoase, n "pictur de miere", care dau aspectul
de "curgere" pe suprafaa mediului de cultur, cu tendin la confluare;
biochimice: glucoza pozitiv (cu producere de gaz), lactoz pozitiv, nu produce
H2S, imobil, ureaz pozitiv, indol negativ, se dezvolt folosind citratul ca unic surs de
C;
antigenice: se utilizeaz seruri cu Ac cunoscui pentru identificarea tulpinilor de
Klebsiella, prin aglutinare, coaglutinare sau latex aglutinare (n laboratoare de referin);
testarea sensibilitii la bacteriofagi.
Antibiograma este obligatorie i se realizeaz, de obicei, prin metode difuzimetrice.
Diagnosticul de laborator n infeciile produse de genul Proteus
Genul Proteus face parte din familia Enterobacteriaceae i cuprinde trei specii cu
importan medical: Proteus mirabilis, Proteus vulgaris i Proteus penneri. Germenii
din genul Proteus sunt ubicuitar rspndii n natur, putndu-se ntlni n sol, ape
reziduale, ape de suprafa, n materiile organice n putrefacie, n intestinul omului, n
alimente i n produse patologice. Sunt bacili Gram-negativi, aerobi sau facultativ
anaerobi, nu fermenteaz lactoza, produc ureaz, sunt ciliai peritrichi sau lofotrichi i
foarte mobili. Sunt polimorfi: au forme variate, de la bastonae scurte pn la forme
lungi, filamentoase. Nu prezint capsul i nici spori. Sunt germeni condiionat patogeni.
Pot produce TLA de tip infecios, infecii ale tractului urinar (ITU), dar chiar i alte
infecii (tegumentare, genitale, infecii nosocomiale etc.).
Diagnosticul de laborator n cazul infeciilor tractului urinar (ITU) produse de Proteus
Diagnosticul de laborator microbiologic este, bacteriologic, direct.

Recoltarea i transportul p.p. se realizeaz cu respectarea regulilor impuse. Produsul

patologic este urina, care poate fi tulbure, purulent. Transportul trebuie realizat n
maxim 30 minute, iar dac nu e posibil, p.p. trebuie transportat "la rece" (+ 4C).
Examenul microscopic al produsului patologic include realizarea preparatului proaspt
ntre lam i lamel, din sedimentul urinar. Acest tip de examinare este foarte important,
uor de realizat, ieftin i permite observarea unor elemente utile, care orienteaz
diagnosticul i stabilirea numrului de leucocite/cmp. De asemenea, mobilitatea poate fi
evaluat.
Cultura. Bacteriile din genul Proteus se cultiv pe medii de cultur simple, nu sunt
pretentioase nutritiv. Pe geloza simpl i pe geloz-snge cresc avand o caracteristica
unic n familia Enterobacteriaceae de a invada mediul, fenomen numit ,,fenomen de
crare, ,,fenomen de invazie sau de ,,roire. Din locul inocularii, valuri succesive de
cultur migreaz concentric pn la marginea mediului sau pn la ntlnirea cu valul
migrator al altei colonii. Pentru ca rezultatul s fie pozitiv, numrul de bacterii/ml de urin
trebuie s fie >100.000.
Identificarea microorganismului se va realiza pe baza caracterelor:
morfotinctoriale: bacili gram-negativi, cu polimorfism (bacili, cocobacili, forme
filamentoase de peste 30 m);
de cultur:
- fenomenul de invazie (dac nsmnm o tulpin la periferia unei plci Petri cu
mediu simplu, cultura se "dezvolt n valuri concentrice", pe toat suprafaa mediului). Pe
anumite medii selective (cu sruri biliare), invazia este inhibat i se obin colonii izolate,
de tip S, lactoz negative;
- fenomenul "liniei de demarcaie" (dac pe o plac cu mediu solid cultivm 2
tulpini diferite, n 2 puncte opuse, tulpinile se vor dezvolta invadnd pn n apropierea
liniei de ntlnire, unde se va crea o "linie de demarcaie" ntre cele 2 tulpini);
- fenomenul de "crare";
biochimice: sunt microorganisme lactozo negative (alte caractere biochimice se
pot studia pe mediile muli test, TSI, MTU etc.), glucoz pozitive (cu formare de acid i
gaze), produc H2S, mobile, ureaz pozitive, fenilalanin pozitive, se pot dezvolta folosind
citratul ca unic surs de carbon. Specia Proteus vulgaris este singura care produce indol;
antigenice. Speciile de Proteus prezint:- antigen somatic O, cu specificitate de
grup i antigen flagelar H, cu specificitate de tip.
Antibiograma este obligatorie i se realizeaz, de obicei, prin metode difuzimetrice. Sunt,
n general, destul de rezistente la dezinfectani i antiseptice obinuite. Sunt destul de
rspndite n mediul spitalicesc i au rezsten destul de mare la antibiotice.
Diagnosticul de laborator n infeciile produse de genul Shigella
Genul Shigella face parte din familia Enterobacteriaceae i reunete 4 subgrupe: A.
Shigella dysenteriae (13 serotipuri), B. S. flexneri (6 serotipuri), C. S. boydii (18
serotipuri) i D. S. sonnei (1 serotip cu 2 faze, R i S). Sunt bacterii strict adaptate
omului, ntotdeauna patogene. Sunt ntlnite n intestinul i materiile fecale ale
bolnavului, convalescentului i purttorului aparent sntos. Sunt bacili Gram-negativi,
neciliai, necapsulai, nesporulai. Sunt bacili gram negativi, imobili, nesporulai,
necapsulai, aerobi sau facultativ anaerobi, glucoz pozitivi (fr producere de gaz),

oxidaz negativi, lactoz negativi. Subgrupele se pot diferenia, pe baza fermentrii

manitei (subgrupul A este manit negativ).
Omul reprezint rezervorul de Shigella. Bacteriile sunt eliminate n mediul extern prin
materiile fecale, contaminnd apa, alimentele, solul. Transmiterea este direct fecal-oral.
Poarta de intrare este tractul digestiv, prin consum de apa i alimente contaminate.
Speciile mai frecvent ntlnite sunt S. dysenteriae i S. flexneri, fiind i cele maivirulente.
Controlul infeciei se face prin igiena personal i comunitar.
Produc infecii la nivelul tractului intestinal. Dizenteria poate s apar dup ingestia a
numai 10-100 bacterii. Shigella spp. pot produce i toxiinfecii alimentare de tip infecios.
Shigelele produc exotoxine care acioneaz ca enterotoxine (toxina Shiga n cazul
infeciei cu Shigella dysenteriae, cu efect neurotoxic, citotoxic, enterotoxic).
Diagnosticul de laborator este bacteriologic (direct) i trebuie stabilit rapid.
Recoltarea i transportul p.p. (materii fecale) se efectueaz cu respectarea regulilor
cunoscute.
Examenul macroscopic al materiilor fecale poate indica prezena unor cantiti mici de
mucus, puroi, snge. Transportul trebuie s fie realizat rapid (se recomand nsmnarea
la patul bolnavului; altfel, trebuie s fie folosit un mediu de transport, Cary-Blair).
Recoltarea se poate face i cu ajutorul sondei Nelaton, din colonul sigmoid.
Examenul microscopic al p.p. este foarte important. El poate oferi un rspuns concret,
rapid i util. Se examineaz preparatul ntre lam i lamel, iniial cu obiectivul 40x.
Dac se evidenieaz numeroase PMN, mecanismul producerii bolii este de tip invaziv,
iar dac se remarc un procent de peste 75% PMN, alturi de hematii, acest aspect este
sugestiv pentru dizenteria bacterian.
Cultura. Prima izolare se face pe medii slab sau moderat selective i medii difereniale
(ADCL, Istrate-Meitert). Dac apar colonii lactoz negative, coloniile transparente,
lactozo-negative sunt nsmnate pe medii (TSI, MIU, MILF, Simmons-citrat, uree),
pentru identificare biochimic prezumptiv.
Identificarea microorganismului se realizeaz pe baza caracterelor:
morfotinctoriale: sunt bacili Gram-negativi, unele tulpini posed capsul;
de cultur: produc colonii de tip S, lactoz negative, 1-2 mm, transparente;
biochimice: sunt glucoz pozitivi, fr producere de gaz, lactoz negativi, nu
produc H2S, imobili, ureaz negativi, indol negativi (excepie S. flexneri), oxidaz
negatvi, citrat negativi, lizin negativi;
antigenice: se utilizeaz seruri imune polivalente anti-subgrup sau seruri imune
specifice de tip (reacii de aglutinare pe lam, conform schemelor de lucru). Antigenele
mai importante sunt: antigenul somatic O, care st la baza mpririi n 4 grupe
antigenice; Grupul A: S. Dysenteria; Grupul B: S. Flexneri; Grupul C: S. Boydii; Grupul
D: S. sonnei i antigenul K;
testarea sensibilitii la bacteriofagi (lizotipia) poate fi utilizat n scop
epidemiologic.
Antibiograma este recomandat. Se realizeaz prin metoda difuzimetric standardizat
att n special n scopul supravegherii apariiei unor tulpini rezistente, ct i pentru
stabilirea tratamentului antimicrobian corespunztor.

Diagnosticul de laborator n infeciile produse de genul Salmonella

Genul Salmonella face parte din familia Enterobacteriaceae i cuprinde o singura specie,
Salmonella enterica. Aceasta specie cuprinde peste 2300 serotipuri difereniate pe baza
antigenelor somatice O i flagelare H. Principalul habitat al salmonelelor este tractul
intestinal al omului i animalelor. Aceste doua surse vor determina poluarea solului,
apelor reziduale, apelor de suprafa n care pot supravieui de la cteva luni la civa ani,
n condiii de temperatur i pH favorabile.
Genul Salmonella include bacili gram negativi, aerobi facultativ anaerobi, mobili cu cili
peritrichi, necapsulai, nesporulai, nu fermenteaz lactoza, produc H2S, utilizeaz citratul
ca unic surs de carbon. Pot produce salmoneloze minore (TIA) i salmoneloze majore
(febra tifoid). n cazul TIA/enterocolitelor, diagnosticul de laborator este bacteriologic,
direct. n cazul afeciunilor sistemice, diagnosticul poate fi bacteriologic i serologic.
Diagnosticul de laborator n infeciile cu localizare digestiv
Recoltarea i transportul p.p. se efectueaz cu respectarea regulilor cunoscute.
Preparatul patologic este reprezentat de materii fecale.
Examenul microscopic al p.p. se face ntre lam i lamel i se remarc prezena
granulocitelor.
Cultura. Salmonella spp. se cultiv pe urmtoarele medii de cultur: un mediu lichid de
mbogire (bulion selenit) i dou medii selectivo-difereniale (MacConkey i ADCL).
Dup 18-24 ore la 35-37C, pe mediile solide pot aprea colonii bacteriene suspecte
(lactozo-negative) din care se obine cultura pur. Cultura de 18-24 ore din bulion selenit
se repic pe medii solide. Pe mediile selective i difereniale determin colonii lactozonegative de tip S. Producerea de H2S, evideniat prin apariia unei pete de culoare
neagr n centrul coloniilor, face ca acestea s se numeasc ,, n ochi de pisic. Pe
mediul Wilson-Blair formeaz colonii opace, rugoase, cu margini neregulate, negre, cu
luciu metalic. Mediile de mbogire pentru Salmonella sunt mediile cu selenit, azid de
sodiu i bulionMuller-Kauffmann.
Identificarea microorganismului se realizeaz pe baza caracterelor:
morfotinctoriale: sunt bacili gram-negativi;
de cultur: pe medii selective i difereniale determin colonii lactozo-negative de
tip S, necolorate (pe mediu MacConkey). Producerea de H2S, evideniat prin aparia
unei pete de culoare neagr n centrul coloniilor, face ca acestea s se numeasc ,, n ochi
de pisic (pe mediu ADCL). Pe mediul Wilson-Blair formeaz colonii opace, rugoase,
cu margini neregulate, negre, cu luciu metalic. Mediile de mbogire pentru Salmonella
sunt mediile selenit azid de sodiu i bulionMuller-Kauffmann;
biochimice: fermenteaz glucoza (cu producere de gaz), sunt germeni lactoznegativi, produc H2S, indol negativi, lizin pozitivi i utilizeaz citratul ca unic surs de
carbon;
antigenice: reacii de aglutinare pe lam prin utilizarea serurilor imune cu Ac antiO i ulterior Ac anti-H, cu respectarea protocolului de lucru. Salmonella prezint trei
tipuri importante de antigene: antigenul somatic O, este rezistent la cldur i alcool,
prezint specificitate de grup; antigenele de suprafa (nveli, antigenul Vi este un
antigen specific de suprafa ntlnit doar la trei serovaruri Salmonella: typhy, paratyphy
C, Dublin; antigenele flagelare H, sunt proteine labile termic situate la nivelul cililor.

Fenomenul de variaie de faz se ntlnete la multe tipuri de salmonele, astfel putnd si schimbe tipul de specificitate al flagelilor cu un altul.
LPS (lipopolizaharidul) bacteriilor din genul Salmonella este coninut de nveliul celular
i eliberat dup liza bacterian i funcioneaz ca endotoxin. Aceasta poate juca un rol
important n patogeneza multor manifestri clinice: febr, activarea sistemelor de
coagulare, scderea contractilitii miocardului, oc septic. Patogenitatea salmonelelor
este datorat factorilor de virulen, adezinele i toxinele enterotoxinele termo-stabil
(ST), termo-labil (LT), verotoxina (toxina Shiga-like), citotoxina implicat n invazia i
distrucia celular, antigenul Vi cu rol de adezin, fimbrii.
sensibilitate la bacteriofagi.
Antibiograma este recomandat n cazul pacienilor foarte n vrst sau n cazul copiilor
foarte mici, prematuri, cu alte boli adugate i pentru supravegherea apariiei
fenomenului de rezisten la antibiotice i chimioterapice. Sunt sensibile la cloramfenicol,
streptomiocin, tetraciclin, ampicilin, dar au aprut i tulpini plurirezistente.
Diagnosticul de laborator n febrele enterale (febra tifoid)
Diagnosticul cert este reprezentat de izolarea i identificarea bacteriei S. typhi din p.p.
Diagnosticul bacteriologic, direct respect etapele prezentate anterior.
n prima sptmn de boal, p.p. este reprezentat de snge; ulterior pot fi recolte materii
fecale, urin, lichid biliar, mduv hematogen etc. Dac p.p. este reprezentat de materii
fecale, se respect procedura indicat mai sus (exist i unele particulariti). Coloniile de
S. typhi pot s nu prezinte centrul de culoare neagr pe ADCL. S. typhi nu produce gaz
din glucoz, H2S fiind produs n cantitate mic. Nu folosete citratul ca unic surs de
carbon. Pentru identificarea AgO este necesar o inactivare prealabil (termic). Prezena
AgVi poate crea probleme n identificarea AgO. Lizotipia poate fi foarte util. Testarea
sensibilitii la antibiotice i chimioterapice este indicat n toate infeciile produse de S.
typhi.
Diagnosticul serologic se realizeaz cu respectarea principiile generale. Serodiagnosticul
Widal (folosind culturi vii) nu se mai practic astzi. Tehnica actual poart numele de
analiz seric cantitativ (aglutinare n tuburi), n cadrul creia se utilizeaz serii de
tuburi (cte o serie pentru fiecare Ag cunoscut folosit). Pentru a evidenia Ac anti-O (TO S. typhi, AO - S. paratyphi A, BO - S. paratyphiB) i anti-H (d - S. typhi, a-S. paratyphi
A, b -S. paratyphi B) se folosesc 6 serii de tuburi. Se pregtesc diluiile, se incubeaz
pentru Ac anti-O timp de 18-20 ore la 52C i 10 minute la temperatura camerei, iar
pentru Ac anti-H timp de 2 ore la 52C i 10 minute la temperatura camerei i apoi se
procedeaz la citirea reacia. Un titru de 1/250 n cazul Ac anti-O i unul de 1/2.500 n
cazul Ac anti-H sunt sugestive. Creterea de 4 ori a titrului, la 2 determinri succesive
confirm diagnosticul.
n cazul convalescenilor i purttorilor este recomandat reacia de aglutinare n tuburi
pentru identificarea prezenei i titrului Ac anti-Vi (titru mai mare de 1/40).

10