STUDIUL

SPECTROMETRIC AL
VITAMINEI B6 DIN
PRODUSE
FARMACEUTICE
Coordonator Ştiinţific:
Prof. Univ. Dr. APETREI IRINA MIRELA
Autor:
GHINEA MANUELA
 Cuprins

 Noţiuni introductive
 Materiale şi metode
 Rezultate şi discuţii
 Concluzii
 Bibliografie selectivă
 Noţiuni introductive
 Vitaminele sunt compuşi organici indispensabili organismului uman, însă
majoritatea nu pot fi sintetizate în mod natural,fapt care necesită
obţinerea lor din alimentaţie .

 Dintre acestea face parte şi vitamina B6, cunoscută şi sub numele de

piridoxină, parte a complexului de vitamine B cu rol important în formarea
hemoglobinei, în metabolismul aminoacizilor, proteinelor, glucidelor şi
lipidelor (îndeosebi al acizilor graşi esenţiali), fiind şi stimulent
muscular,cu influenţă benefică asupra pielii,precum şi în procesul de
creştere.

 Necesarul zilnic este de 1,5-2 mg/zi

 Cele mai bune surse naturale de vitamina B6 sunt: drojdia de bere,

cerealele integrale, bananele, somonul,ficat,lăptişorul de matcă,
spanacul, gălbenuşul de ou crud, seminţele de floarea-soarelui, avocado.
 Materiale şi metode

Fig.1 Fig.2

Fig.3
 Materiale şi metode
 În lucrarea de faţă,analiza spectroscopică a vitaminei B6 s-a realizat prin
spectrometrie IR şi UV-VIZ.

Caracterizarea extractelor prin spectrometrie IR

 FT-IR reprezintă metoda spectroscopică rapidă de evaluare a calităţii şi

autenticităţii extractelor din produse vegetale,fiind domeniu de cercetare
aplicată cu impact relevant în industria farmaceutică şi medicină.În acelaşi
timp,spectroscopia IR oferă metode eficiente în controlul purităţii unor
substanţe organice,precum şi dozarea lor.

 În analiza şi interpretarea unui spectru IR nu există reguli rigide,dar înainte

de a trece la acest deziderat trebuie să se ţină seama de câteva cerinţe
generale cerute de scopul urmărit:
 Materiale şi metode
1. Spectrul trebuie înregistrat cu un aparat de o rezoluţie adecvată,
care să permită o rezoluţie corespunzătoare a benzilor de absorbţie;

2. Intensitatea spectrului să fie adecvată;

3. Dacă este necesar, spectrul va fi înregistrat pe regiuni,folosind

concentraţii precum şi metode şi condiţii de înregistrare care să
conducă la o intensitate corespunzătoare;

4. Spectrofotometrul trebuie calibrat periodic,astfel ca poziţionarea

benzilor de absorbţie să fie facută corect
 Materiale şi metode
 Pentru o analiză preliminară a unui spectru de infraroşu sunt
necesare două regiuni spectrale:

1. Regiunea cuprinsă între 650-909 cmˉ.

2. Regiunea peste 1300 cmˉ1,numită şi regiunea grupărilor funcţionale,
deoarece corespunde frecvenţelor caracteristice ale vibraţiilor de
valenţă ale principalelor grupări funcţionale –OH,-NH2,-NO2,-CN.

 Absenţa absorbţiei într-o regiune caracteristică unei funcţiuni

poate fi considerată o dovadă a absenţei grupării funcţionale
respective din moleculă.

 Prezenţa simultană în spectru a mai multor frecvenţe

caracteristice indică de cele mai multe ori,fără nici un dubiu,tipul
compusului chimic prezent în proba de analizat.
 Materiale şi metode

 Pentru analiza probelor

Vitamina B6 comprimate şi
soluţie injectabilă s-a folosit
spectrometrul FTIR Alpha, de
la firma Bruker,dotat cu un
sistem ATR de expunere a
probei de analizat (fig.4 )

Fig. 4
Spectrometrul FTIR Alpha, Bruker
 MATERIALE ŞI METODE

Fig.5 Fig.6

 Pe cristalul de ZnSe se adaugă comprimatul (triturat in prealabil) şi

proba lichidă astfel încât cristalul să fie complet acoperit.
 Materiale şi metode
 Spectrul FTIR se înregistrează cu ajutorul programului OPUS ,
instalat în Windows.

Fig. 7
 Materiale şi metode

 Pentru a putea pune în evidenţă prezenţa vitaminei B6,am realizat un

background folosind apă ultrapură pentru probele lichide, iar pentru
comprimate background faţă de aer.

 Spectrele înregistrate în aceste condiţii sunt prezentate în figurile de mai

jos,putând astfel fi identificate benzi de vibraţie caracteristice grupărilor
funcţionale din compuşii Vitamina B6 comprimate şi fiole,dar şi din alţi
compuşi prezenţi în produsele farmaceutice.
 Materiale şi metode
 Compararea spectrului IR al vitaminei B6 comprimate,
250 mg,cu spectrul IR etalon

Fig. 8-SPECTRUL IR al Vitaminei B6 comprimate,250 mg, Zentiva-etalon

 Materiale şi metode
 O serie de benzi de vibraţie din spectrul IR al vitaminei B6 –
fig.9(3323,3233,3095,2916,2817,1541,1216,1167,1142,1088,1018,
960,926,796,749,684,621,593,575) pot fi identificate în spectrul
etalon al vitaminei B6 (fig. 8),demonstrându-se astfel prezenţa
vitaminei B6 în proba analizată.

Fig. 9-Spectrul IR al vitaminei B6 comprimate ,250 mg,Zentiva-probă

 Materiale şi metode

Fig. 10- Spectrul IR al Vitaminei B6 fiole 50 mg/2ml, Zentiva-etalon

 Materiale şi metode

Fig. 11- Spectrul IR al vitaminei B6 fiole 50mg/5ml ,Zentiva-probă

 MATERIALE ŞI METODE

Fig. 12-Spectrul IR al Vitaminei B6 fiole 250 mg/5ml ,Zentiva-etalon

 Materiale şi metode

Fig. 13-Spectrul IR al Vitaminei B6 fiole 250 mg/5 ml,Zentiva-proba

 Materiale şi metode

 Analiza vitaminei B6 prin

spectrofotometrie în UV

 Determinarea spectrofotometrică a
vitaminei B6 din produse
farmaceutice
 Pentru analiza vitaminei B6 s-a
dezvoltat o metodă de analiză prin
spectrofotometrie utilizând un
spectrofotometru Rayleigh, model
UV-1601.
Fig. 14
 Materiale şi metode

 Pentru realizarea analizei s-a luat în lucru un

comprimat de Vitamina B6, triturat anterior şi s-
a cântărit la balanţa analitică cu patru zecimale,
pentru a afla masa
 M1 =0,3802 g
 S-a folosit o pătrime din cantitate (M2= 0,0718g) Fig. 15

dizolvată in 50 ml apă ultrapură.

 S-au mai luat în lucru Vitamina B6 fiola-
50mg/2ml (diluţie 50µl la 50 ml apă ultrapură) şi
Vitamina B6 fiola 250 mg/5ml (diluţie 25 µl la
50 ml apă ultrapură).
 Purificarea apei s-a realizat prin intermediul unui
ultrapurificator de apă, model FI STREEM
CYCLON.(Fig. 16)
Fig. 16
 Materiale şi metode
 Pentru a grăbi viteza de dizolvare
probele au fost lăsate câteva minute
pe o baie de ultrasunete,
ELMASONIC, model S10H (fig.18)

 După setarea parametrilor şi după

înregistrarea liniei de bază(prima
măsurare-fig. 19), s-a înregistrat Fig. 18
spectrul de absorbţie al probei
Vitamina B6 comprimate 250 MG,
Zentiva, în domeniul spectral 200-
400 nm, în cuve din quart, cu drum
optic de 10 mm faţă de apă
distilată,cu programul de măsurare
UV-SOFTWARE.

Fig. 17
Materiale şi metode

Fig. 19-Linia de bază

 Materiale şi metode
 Deoarece s-a depăşit valoarea 2 a absorbanţei, au fost necesare o
serie de optimizări (diluţii)pentru a obţine spectre optime pentru
analiza calitativă şi cantitativăa probelor de analizat.
 Astfel,pentru Vitamina B6 comprimate s-a folosit o diluţie de 1:100 şi
s-a înregistrat spectrul în domeniul spectral 200-400 nm. (fig.20)

Fig. 20-Spectrul de absorbţie al soluţiei de Vitamina B6 comprimate 250 mg, Zentiva,în domeniul 200-400 nm,diluţie 1:100
 Materiale şi metode

Fig. 21- Spectrul de absorbţie al soluţiei de Vitamina B6 comprimat 250 mg,Zentiva,

în domeniul spectral 200-400nm,diluţie 1:100
 Materiale şi metode

 Spectrul de absorbţie al soluţiei de Vitamina B6 comprimate în

domeniul spectral 200-400 nm,diluţie 1:100, se caracterizează prin trei
maxime de absorbţie definite la lungimile de undă 219 nm, 254 nm şi
324 nm.

 Aceste maxime se datorează, conform literaturii, vitaminei B6

comprimate prezentă în proba de analizat.

 Spectrul de absorbţie în UV este relaţionatcu tranziţiile electronilor de

pe un nivel de energie mai joasă pe un nivel de energie mai înaltă,
aceste tranziţii fiind în concordanţă cu structura chimică a vitaminei B6
 Rezultate şi discuţii
 Din analiza spectrului de absorbţie a soluţiei de Vitamina B6
comprimate,de concentraţie 250 mg,din produsul Vitamina B6
comprimate 250 mg s-au obţinut următoarele rezultate prezentate în
tabelul 1.

Lungimea de undă Absorbanţa

(nm)
219 1,72
254 0,41
324 0,75
Tab.1- Maximele de absorbţie pentru soluţia de Vitamina B6 compimate 250 mg,Zentiva,diluţie 1:100
 Rezultate şi discuţii

Fig.22-Maximele de absorbţie pentru soluţia de Vitamina B6 fiola 50 mg/2ml,Zentiva,diluţie 1:1

 Rezultate şi discuţii

Lungimea de undă
Absorbanţa
(nm)
219 1,08
254 0,29
324 O,47

Tab 2- Maximele de absorbţie pentru soluţia de Vitamina B6 fiola 50 mg/2ml,Zentiva,diluţie 1:1

 Rezultate şi discuţii

Fig. 23-Spectrul de absorbţie al soluţiei de Vitamina B6 fiola 250 mg/5ml,Zentiva,diluţie 1:1

 Rezultate şi discuţii

Lungimea de undă
Absorbanţa
(nm)

219 1,01

254 0,27

324 0,44

Tab. 3-Maximele de absorbţie pentru soluţia Vitamina B6 fiolă 250 mg/5ml,Zentiva,diluţie 1:1
Rezultate şi discuţii

Fig. 23-Toate probele suprapuse

 Concluzii
CONCENTRAŢIA
CONCENTRAŢIA DETERMINATĂ
LUNGIMEA DE ABSORBANŢA
PROBA PROBEI EXPERIMENTAL ÎN
UNDĂ(nm) PROBEI ANALIZATE PROBA
FARMACEUTICĂ

Vitamina B6 , 219 1,72 0,0199 263,43 mg/cpr

comprimate,
250mg/cpr, 254 0,41 0,0176 232,99 mg/cpr
Zentiva
324 0,75 0,0199 263,43 mg/cpr

Vitamina B6 , 219 1,08 0,0125 50 mg/2ml

Fiole 50 mg/ 2 ml,
Zentiva 254 0,29 0,0125 50 mg/2ml

324 0,47 0,0125 50 mg/2ml

Vitamina B6 , 219 1,01 0,0116 233,79 mg/5ml

fiole 250 mg/5ml,
Zentiva 254 0,27 0,0116 233,79 mg/5ml

324 0,44 0,0116 234,04 mg/5ml

Tab.4/Rezultatele obţinute prin metoda spectrofotometrică în UV

 Concluzii

 Aşa cum s-a văzut in slide-ul anterior, rezultatele

experimentale sunt foarte aproape de valorile indicate de
producător, ceea ce atestă că metodele spectrofotometrice
pot fi utilizate cu succes în laboratorul de biochimie pentru
determinarea vitaminei B6 din diverse forme farmaceutice.
Bibliogarafie selectivă
MULŢUMESC PENTRU
ATENŢIE!