Imunofluorescenta in microscopie

IMUNOFLUORESCENA reprezinta punerea n eviden a diferiilor antigeni cu ajutorul unor anticorpi specifici marcai cu un compus fluorescent IZOTIOCIANAT DE FLUORESCEINA (FITC)

 Tehnica imunofluorescentei se bazeaza pe proprietatea fluorocromilor de a se fixa pe imunoglobuline (anticorpi cu specificitate fata de anumite antigene ) fara a le modifica proprietatile biologice

 Tehnica iminofluorescentei se refera la marcarea cu un colorant a unui antigen sau anticorp

Reactia de imunoflorescenta este de 3 feluri

Reactia de imunoflorescenta este de 3 feluri

Directa

Cu fixarea complementului

Indirecta

Reactia de imunofluorescenta directa

Reactia de imunofluorescenta directa

Metoda directa ( Coons) permite identificarea Ag specifice in preparate cu ajutorul conjugatului fluorescent anti-Ac .

2.Reactia de imunofluorescenta
indirecta
Reactia de imunofluorescenta indirecta (IFG) vizualizeaza reactia Ag-Ac prin aplicarea unui conjugat fluorescent anti Ac. Se foloseste pentru detectarea Ac fixate pe Ag . Testul poate fi folosit atat pentru determinarea Ag necunoscut cu ser imun cunoscut cat si pentru detectarea necunoscuti cu Ag cunoscut

3.Reactia de imunofluorescenta cu fixarea complementului Tehnica fondat pe fixarea C:Markerul fluorescent este un ser anti-complement care se va lega de complementul fixat pe complexul Ag-Ac.

Microscoape cu lumina fluorescent si epi-fluorescenta

Microscoape cu Fluorescente sunt microscoape care folosesc o metoda de iluminare pentru localizarea materialelor marcate fluorescent (proteine, enzime, gene, .. etc) extragand o lungime de unda cu scopul ca elemente fluorescente vor aparea emitand o lumina la o lungime de unda distincta; iar lumina de fluorescente este obtinuta cu o lampa cu temperatura mica;

 este puternica lumina, alba si ofera imagini clare, comfortabile

pentru ochi. Este foarte indicata pentru observarea specimenelor vii. Sunt de obicei de 5W sau 10W si dau o luminozitate echivalenta cu sursele halogen sau tungsten. Pot fi montate pe baza microscopului sau pot fi atasate.

Microscopului de fluorescenta Sursa de lumina

O lampa xenon

Oglinda dicroica

Filtru de excitatie

Filtru de emisie

Aplicatii practice MICROSCOP CU

FLOURESCENTA

Autofluorescenta

Fluorescenta secundara