Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
TESTE IMUNOLOGICE
METODE IMUNOLOGICE DE
DIAGNOSTIC
Utilizate atat pentru detectarea
antigenelor si a anticorpilor de interes
Teste imunologice (immunoassays)
1. teste radioimunologice (utilizeaza marcarea cu
radioizotopi) ex. RIA
2. teste imunoenzimatice (utilizeaza marcarea cu
enzime) ex. EIA, ELISA
3. teste imunologice cu detectie in fluorescenta
(utilizeaza marcarea cu molecule fluorescente
(fluorocromi); ex. ELFA, IFA
4. teste imunologice cu detectie in chemiluminiscenta
(utilizeaza marcarea cu molecule care genereaza
chemiluminiscenta); ex. CLIA, ECLIA
Teste imunologice
(immunoassays)
Teste imunologice
teste imunologie - directe
- indirecte
- de competitie
- sandwich
Metoda RIA
utilizeaza marcarea curadioizotopi; ex.125I care asigura rapiditatea procesului de
conjugare si mentinerea activitatii biologice a reactantilor
este o metoda mai putin utilizata
emisia radioactiva (razele gammma pentru125I) este masurata cu ajutorul unui
scintilator gamma
pot fi utilizate, ca faza solida, bile de sefaroza sau peretele interior al unor tuburi
din plastic
Exista doua tehnici RIA principale
1.RIA competitiva - utilizata pentru cuantificarea unor molecule mici, cum ar fi
hormoni; hormonii sunt prea mici pentru a lega mai mult decat o molecula de
Ac, astfel incat ei nu pot fi detectati printr-un test care necesita legarea a mai
mult decat un Ac;
. o cantitate cunoscuta de Ag marcat radioactiv si Ag din proba de analizat sunt
mixate si reactioneaza competitiv cu o cantitate constanta de Ac legat de o faza
solida
.concentratia de analit este determinata cu ajutorul unei curbe standard (emisii
radioactive pe minut versus logaritmul concentratiei de analit) - cu cat
cantitatea de Ag neradioactiv din proba este mai mare, cu atat radioactivitatea
legata este mai mica.
Metoda RIA
2.
RIA competitiva
Metode imunoenzimatice
ELISA (enzyme linked immunosorbent
assay) metoda calitativa/semicantitativa
Principiul ELISA: antigenul sau anticorpul de captura
este fixat pe un suport solid si pus in contact cu o
imunoglobulina sau antigen sau orice alta molecula
pentru care are specificitate. O enzima cuplata, fie
direct de imunoglobulina sau de un alt anticorp antiimunoglobulina lizeaza un substrat cromogen rezultand
un compus colorat ce poate fi detectat
spectrofotometric la o lungime de unda
corespunzatoare
Met. ELISA
Cititior ELISA
Spalator ELISA
Cititor ELISA
Analizor automat
ELISA
Metode imunoenzimatice
EIA (enzyme immunoassay)
sau TIE (test imunoenzimatic)
metoda cantitativa
EIA automata
Metode imunoenzimatice
Metoda ELFA
metoda imunoenzimatica
cantitativa de determinare a
hormonilor, markerilor infectiosi
si virali si a unor autoanticorpi
metoda imunoenzimatica cu
detectie finala in fluorescenta
utilizeaza faza solida care
capteaza specific analitul ce
urmeaza sa fie determinat
analitul ce trebuie determinat
poate fi reprezentat de: antigen
(markeri tumorali, hormoni) sau
anticorpi (IgG, IgM, IgE) ce
leaga specific conjugatul
se bazeaza pe prietile
catalitice ale enzimelor pentru
a detecta i cuantifica reaciile
imunologice
Principiul ELFA
ELFA
alfa-fetoproteina (AFP)
antigenul carcinoembrionar (CEA)
antigenul tumoral 15-3 (CA 15-3)
antigenul tumoral 19-9 (CA 19-9)
antigenul tumoral 125 (CA 125)
antigenul specific prostatic (PSA)*
fractia libera a antigenului specific prostatic
(Free PSA)
coriogonadotropina umana (HCG)
*Valori semnificativ crescute ale PSA se intalnesc in prostatite
acute/cronice, HBP si cancer prostatic; important in diagnosticul
cancerului de prostata este raportul FPSA/TPSA
Cinetica anticorpilor
Toxoplasma - IgG avidity
Analizoare cu detectie in
chemiluminiscenta
Analizor imunologie
ce utilizeaza ECLIA
Asigurarea calitatii
rezultatelor
Controlul intern de calitate este un sistem metodologic si
organizatoric menit sa asigure calitatea rezultatelor de
laborator, prin decelarea erorilor sistemice sau intamplatoare si
identificarea si inlaturarea cauzelor care au generat erorile.
Controlul de calitate se refera la precizia, exactitatea si
acuratetea in cadrul sistemului.
Calibrarea este procedeul prin care se testeaza si se ajusteaza
un instrument, un kit, sau un sistem, in conditii specificate,
pentru a realiza o anumita corespondenta intre valorile
masurate si valorile cunoscute ale masurandului.
Procesul de calibrare consta in testarea materialelor de
referinta , astfel incat sa se obtina o curba de calibrare
(dependenta dintre valorile cunoscute ale masurandului si
indicatiile corespunzatoare furnizate de instrument) in baza
careia sunt calculate rezultatele pentru pacienti.
Asigurarea calitatii
rezultatelor
Validarea controalelor respecta mai multe reguli (sistemul Westgard):
Regula initiala (2s) compara valoarea controlului de calitate cu un domeniu
egal cu doua deviatii standard ale domeniului controlului (2s). Daca esueaza se
continua cu evaluarea celorlalte reguli.
Regula 3s - daca regula 2s va esua sistemul o va compara cu 3s pentru
domeniul de control. Daca aceasta regula esueaza testul va fi marcat ca fiind in
afara controlului.
Regula 2 (2s) controleaza valorile anterioare si consecutive ale aceluiasi
material de control care depasesc +/- domeniul de control de 2s. Esecul acestei
reguli va marca testul ca fiind in afara controlului.
Regula 3 (4s) daca domeniul pentru valoarea cea mai recenta, anterioara,
consecutiva, comparata cu valoarea controlului de calitate curent depaseste 4
SD, testul va fi marcat ca fiind in afara controlului. Daca testul trece regula se
va aplica regula finala.
Regula 4 (1s) aceasta regula esueaza daca 4 valori de control consecutive
depasesc 1 SD de aceeasi parte +/- a valorii medii tinta. Testul va fi marcat ca
fiind in afara controlului. Aceasta regula este evaluata istoric si in cadrul
aceluiasi material de control si indica eroarea sistematica.