Sunteți pe pagina 1din 326

UNIVERSITATEA BUCURESTI

IMUNOLOGIE SI IMUNOCHIMIE

GRIGORE MIHAIESCU 2003

CUVNT NAINTE Imunologia este unul dintre domeniile cele mai dinamice ale tiinelor biologice. Funcia imunitar este esenial pentru organismul uman i animal i de aceea, disfunciile imunitare severe sunt incompatibile cu supravieuirea. Pe de alt parte, activarea neadecvat a funciei imunitare are drept consecin iniierea sau progresia strilor patologice de hipersensibilitate i a maladiilor autoimune, ceea ce a amplificat interesul pentru studiul Imunologiei. Aceast lucrare este intitulat Imunologie i Imunochimie, pentru c accentueaz n mod deosebit, studiul reactanilor fundamentali ai imunitii! antigene i anticorpi. "ucrarea prezint ntr# o form didactic, foarte accesibil, mecanismele moleculare ale reactivitii imunitare n diferitele sale ipostaze! rspunsul imun fa de antigene moleculare, antigene de natur infecioas, autoantigene, antigene tumorale sau antigene de transplantare. $oninutul acestei lucrri este rezultatul cutrilor de#a lungul mai multor ani i a ncercrii de a prezenta ntr#o form concis, coerent i unitar, problematica ma%or a Imunologiei, n conte&tul dovezilor tot mai numeroase i mai convingtoare, c funcia imunitar are nu numai rolul clasic de aprare antiinfecioas, ci este ntr#o continu e&pansiune a implicrii sale, at't n meninerea homeostaziei chimice a organismului, c't i n numeroase stri patologice. Imunologie i Imunochimie este titlul unei lucrri care i#a propus ca deziderat, s consolideze un mod de g'ndire i de nelegere a funciei de aprare ca o funcie biologic esenial, a crei activare are nu numai efecte benefice, dar uneori genereaz manifestri patologice, aa cum sunt reaciile de hipersensibilitate i conflictele imunitare care stau la baza progresiei maladiilor autoimune. (n construcia lucrrii Imunologie i Imunochimie am pornit de la volumul )Imunobiologie* i de la captivantele cursuri inute, la nceputurile Imunologiei n Facultatea de +iologie a ,niversitii +ucureti, de -omnul Academician Profesor -octor -ocent .. /A012A, cruia i aduc un respectuos omagiu pentru generozitatea efortului constructiv al -omniei 3ale, investit n dezvoltarea disciplinelor microbiologice. "ucrarea Imunologie i Imunochimie este materializarea eforturilor de actualizare i conectare c't mai trainic a domeniului, la realitile tiinifice ale momentului. "ucrarea se adreseaz tuturor studenilor i absolvenilor mai noi, dar mai ales celor vechi, ai facultilor de Biologie, Medicin uman i Medicin veterinar, precum i specialitilor ale cror preocupri profesionale, practice sau teoretice, interfer cu domeniul Imunologiei. 4in s mulumesc anticipat tuturor acelora care vor studia lucrarea Imunologie i Imunochimie i vor face observaii critice ntemeiate, de care voi ine seama ntr#o viitoare ediie a acestei cri.

Autorul

INTRODUCERE

Imunologia studiaz, n primul r'nd, funcia de aprare a organismului uman i animal, care face parte din categoria funciilor de relaie i este esenial pentru supravieuire. 3istemul imunitar este esenial pentru supravieuirea organismelor multicelulare, datorit agresiunii permanente a agenilor infecioi 6microorganisme i virusuri7. 8mul adult poart pe suprafaa mucoaselor i a tegumentului, un numr uria de celule bacteriene 6circa 191:7, mai multe dec't propriile celule, unele av'nd potenialul de a iniia procese infecioase. -isfuncia sever congenital sau dob'ndit a funciei imunitare este incompatibil cu viaa. ;ermenul de imunitate are o provenien social! n 0oma antic, persoanele scutite de impozite ctre stat, erau considerate )imune*. 3ensul termenului s#a e&tins, ulterior desemn'nd persoanele scutite de a suferi efectele infeciei cu ageni patogeni.

<

Imunologia s#a nscut i s#a dezvoltat ca un domeniu al Microbiologiei, baz'ndu#se pe cunotiinele i conceptele Patologiei i Biochimiei. (n sensul clasic, restr'ns al noiunii, Imunologia studiaz reactivitatea organismului animal i uman, consecutiv contactului cu agenii patogeni, mecanismele elaborrii rspunsului imun, precum i particularitile esuturilor, celulelor i moleculelor care condiioneaz starea de imunitate. In sens clasic, noiunea de imunitate definete starea de nereceptivitate sau de rezisten a organismului fa de un agent patogen infecios, n situaia n care sunt ndeplinite condiiile pentru apariia unei maladii infecioase. -in acest motiv, Imunologia s#a dezvoltat ca un domeniu al Microbiologiei. (n concepia clasic, s#a considerat c activarea funciei imunitare are un efect e&clusiv benefic, protector pentru organism. n concepia modern, funcia imunitar se definete ca o proprietate biologic esenial a organismului uman i animal, care const n capacitatea de a diferenia rapid i specific, substanele proprii de cele strine. 3istemul imunitar este tolerant fa de substanele proprii, deoarece )a nvat* s le recunoasc n timpul vieii embrionare, dar este dotat cu proprietatea de a recunoate i de a diferenia prompt substanele strine, fa de care se activeaz i le ndeprteaz din organism. ;olerana imunitar este rezultatul unui proces de selecie a clonelor de limfocite, selecie ce are loc n perioada dezvoltrii embrionare a limfocitelor, ele fiind celulele efectoare ale rspunsului imun. 3elecia const n eliminarea clonelor de limfocite potenial autoreactive 6potenial reactive fa de moleculele proprii7 $omponentele chimice proprii organismului, pe care sistemul imunitar le tolereaz, sunt incluse n noiunea de )self* 6self, englez = propriu7, iar cele strine, care se abat de la structura chimic programat genetic a organismului, poart denumirea de substane nonself sau antigene. Astfel, funcia imunitar este o funcie biologic esenial, prin intermediul creia organismele diferenia prompt i cu mare sensibilitate, componentele self de substanele nonself. Funcia imunitar are un rol determinant pentru pstrarea homeostaziei mediului intern i a individualitii chimice a fiecrui organism, prin faptul c sistemul imunitar recunoate i tolereaz moleculele proprii, dar se activeaz la contactul cu substanele strine care se abat de la programul biochimic tolerat. -up ce nva s tolereze self#ul, chiar din perioada dezvoltrii embrionare, funcia imunitar realizeaz un permanent )control de calitate* a moleculelor self. Aa cum aparatul genetic asigur stabilitatea i integritatea unei specii ca sistem biologic, sistemul imunitar asigur pstrarea homeostaziei biochimice a organismului. Funcia imunitar este mediat de molecule cu rol de receptori de pe suprafaa limfocitelor i de molecule solubile n umorile organismelor. 8biectul de studiu al Imunologiei s#a diversificat odat cu progresul general al tiinelor biologice i n special, odat cu aprofundarea cunoaterii funciei de aprare. (ncep'nd din anii >?9, interesul tiinific pentru Imunologie a crescut considerabil din dou motive!

17 (n primul r'nd s#a demonstrat c funcia imunitar este esenial pentru organism, insuficiena sa mrind riscul infeciilor cu microorganisme patogene sau potenial patogene, iar disfuncia imunitar sever este incompatibil cu viaa. 57 3#a demonstrat c activarea funciei imunitare nu este totdeauna benefic pentru organism, ci uneori, stimularea ei determin leziuni tisulare severe, chiar ireversibile, asociate cu strile de hipersensibilitate sau iniiaz evoluia unor stri patologice grave, ca de e&emplu, maladiile autoimune. 2&emplul clasic este oferit de infecia cu M!cobacterium tuberculosis sau cu M. leprae. "eziunile tisulare, materializate n e&istena granuloamelor, se datoreaz chiar rspunsului imun, care este aa de amplu nc't produce manifestrile patologice. "trile de hipersensibilitate definesc o stare de reactivitate imunitar crescut i se caracterizeaz prin aceea c, la primul contact cu o substan nonself, nu se produce un rspuns imun detectabil, ci organismul dob'ndete o stare special de sensibili are imunitar fa de un antigen. "a contactul secundar ulterior, chiar cu cantiti foarte mici ale antigenului sensibilizant, organismul rspunde cu manifestri patologice de intensiti variabile, al cror rezultat final poate fi fatal. Aa se nt'mpl n strile de hipersensibilitate 6alergii7 la polen, la diferite medicamente 6de e&emplu, penicilina7, la veninul insectelor sau la diferite substane alimentare. @odificrile patologice consecutive alergiilor pot fi locale sau generalizate. ,n domeniu vast, n continu e&pansiune, dar relativ recent al Imunologiei l constituie maladiile autoimune. In esen, maladiile autoimune semnific ntreruperea strii de toleran perfect pe care sistemul imunitar o manifest fa de componentele self. -atorit unor stri fiziologice legate de procese de mbtr'nire, unor procese infecioase, datorit unor procese patologice degenerative sau ca urmare a utilizrii substanelor medicamentoase, n organism se produc modificri chimice tisulare care sunt detectate de celulele sistemului imunitar. $onsecina este declanarea unui rspuns imun fa de componentele self modificate chimic. Astfel se iniiaz un conflict autoimun, n cursul cruia sistemul imunitar genereaz efectorii si A celule activate i molecule A care recunosc specific moleculele self modificate. 0espingerea grefelor de esuturi i organe este consecina activrii funciei imunitare. Antigenele esutului grefat, solubile sau fi&ate pe suprafaa celulelor din gref, activeaz limfocitele 6celulele efectoare ale rspunsului imun7. Autogrefele sunt totdeauna tolerate. (n condiiile unei reactiviti imunitare normale, alogrefele i &enogrefele sf'resc prin a fi respinse. $u c't diferenele genetice i implicit biochimice ntre organismul donor i cel receptor de gref sunt mai accentuate, cu at't grefa este respins mai repede. Etapele dezvoltr I!"#olo$ e %a &t #' Imunologia este o tiin relativ t'nr, care a aprut iniial ca un domeniu a @icrobiologiei, care la nceputurile sale a studiat mecanismele reaciilor de aprare a organismului uman i animal fa de agresiunea infecioas. Imunologia a fost fundamentat de descoperirile lui Pasteur i @etchniBoff i pstreaz nc legturi de esen cu disciplina mam # @icrobiologia, dei astzi ea este una dintre ramurile cele mai importante i mai dinamice ale tiinelor biologice. Apariia Imunologiei ca tiin a fost precedat cu milenii, de observaii empirice referitoare la faptul c vindecarea unor maladii infecioase era urmat de o stare de rezisten permanent la reinfecie sau cel mult de forme uoare de mbolnvire. $u 5#< secole .$., n $hina i India s#a observat c unele maladii foarte grave 6variola, pesta, ciuma7, las n urm o stare de rezisten permanent la reinfecie sau cel mult, persoanele fceau forme foarte uoare de mbolnvire.

(n infecia variolic, apar leziuni caracteristice mai ales pe tegumentul feei. @ai nt'i apar vezicule mici, pline cu lichid clar, al cror coninut se tulbur datorit infiltratului celular i fac crust, iar dup vindecare, las o cicatrice ce se pstreaz toat viaa 6vrsat de v'nt7. 3#a trecut la infectarea artificial a persoanelor sntoase n scopul declanrii unei mbolnviri uoare, care s instaleze starea de imunitate. Practica varioli rii prin prizarea pe nas a mo%aratului de cruste uscate, recoltate de la cei trecui prin boal, era nsoit de infecii grave, datorit cantitii mari de virus inhalat. (n 1:1D, procedeul variolizrii a fost introdus n Anglia de @arE FortleE @ontagu i s#a practicat o perioad, cu toate riscurile mbolnvirii cu severitate necontrolat. Gaccinarea antivariolic a fost introdus de 2. Henner 61IJ?7. $a vaccin, el a utilizat un virus de la bovine 6coKpo&7. @etoda s#a bazat pe observaia empiric a rezistenei n cursul marilor epidemii de variol, a mulgtorilor care fuseser infectai cu virusul coKpo&. Acesta, produce o infecie pustular i fiind nrudit antigenic cu virusul variolei, confer protecie antivariolic. Gaccinarea persoanelor sntoase s#a fcut cu lichidul recoltat din pustulele de pe ugerul vacilor. Perioada tiinific a Imunologiei a fost inaugurat de ". Pasteur, prin descoperirea unor vaccinuri cu o larg aplicaie practic. -enumirea de )vaccin* a fost dat de Pasteur, n amintirea produsului recoltat de Henner din leziunile de pe ugerul vacii. -enumirea s#a pstrat pentru toate produsele folosite n practic, pentru a crea o stare de rezisten preventiv fa de eventualul contact cu agentul patogen. Pasteur a fundamentat tiinific practica producerii i utilizrii vaccinurilor. 2l a demonstrat c proprietile biologice 6patogenitatea i virulena7 bacteriilor i virusurilor patogene nu sunt fi&e. In anumite condiii, aceste proprieti se pot diminua prin anumite artificii de tehnic, aa nc't un agent virulent care de regul determin o infecie mortal, poate fi transformat ntr#un agent care produce o infecie uoar, fr semne clinice, dar creeaz o rezisten foarte solid. Gaccinurile atenuate ndeplinesc aceste deziderate. Pasteur a atenuat virulena agenilor patogeni prin dou metode! prin nvechirea culturilor i prin cultivarea la temperaturi ridicate. Pasteur a descoperit trei vaccinuri! al holerei ginilor, al antra&ului la ovine i al rabiei. Agentul patogen al holerei ginilor A #ersinia pestis A este o bacterie foarte virulent. ,n inocul de c'teva celule este suficient pentru a produce mbolnvirea i moartea organismelor sensibile. $ultura virulent de #ersinia, prin meninere la temperatura camerei 6 nvechire7 se atenueaz i dup inoculare la ginile normale, nu mai produce mbolnvirea. Psrile inoculate cu cultura bacterian atenuat, devin rezistente la reinfecia cu o cultur virulent, spre deosebire de psrile lotului martor, care se mbolnvesc i mor. $ultura bacterian veche a creat o stare de imunitate, adic a avut rolul unui vaccin. Atenuarea virulenei prin nvechirea culturii este un proces necontrolat i probabil se datoreaz modificrilor biochimice sau genetice ale celulelor, sub influena produselor de catabolism acumulate n mediul de cultur sau se datoreaz epuizrii mediului n substanele eseniale pentru cretere. Agentul patogen al infeciei crbunoase 6anthra&7 este Bacillus anthracis, o bacterie sporulat. 3porul se formeaz la <Io. $ultura bacterian crescut la :5o, i modific proprietile biologice, pierde capacitatea de sporulare 6devine asporogen7. Aceste modificri se nsoesc de pierderea progresiv a virulenei. Incubarea la :5o este o modalitate a obinerii dintr#o cultur virulent, a unei culturi cu virulen progresiv atenuat pentru organismul gazd6oaie, iepure, cobai, oarece7.

$rbunele este o boal grav a oilor, ce se transmite i la om. Pasteur a imaginat o schem de vaccinare a ovinelor, ncep'nd cu un inocul bacterian virulent pentru oarece i continu'nd cu inocul bacterian cu virulen mai mare. A creat o stare de imunitate a ovinelor, crora le#a conferit rezisten la bacteriile foarte virulente. Agentul infecios al rabiei nu a fost evideniat de Pasteur. Autorul a utilizat esut nervos medular sau creier de la iepurele infectat e&perimental, pe care l#a modificat prin uscare n prezena potasei caustice. A obinut un vaccin care, administrat c't mai repede dup muctura animalului rabid, creeaz o stare de rezisten, n absena creia infecia rabic evolueaz invariabil spre moarte. $ercetrile lui Pasteur au pus bazele Imunologiei medicale i ale obinerii i utilizrii pe baze tiinifice a vaccinurilor. A urmat o perioad n cursul creia s#au nregistrat progrese importante n obinerea i administrarea vaccinurilor. +azele conceptului imunitii humorale au fost puse de +ehring i Litasato 61DJ97, care au evideniat anticorpii serici, dup imunizarea animalelor de laborator. 3erurile imune pot fi folosite n scop terapeutic pentru a stopa sau a atenua evoluia unei boli infecioase, cu condiia ca administrarea acestor seruri s fie foarte precoce. In 1J5<, +ehring a organizat producia de seruri imune, preluat de Institutul Pasteur din Paris 6 nfiinat n 1DJ:7 i apoi de Institutul +abe i de Institutul $antacuzino. (n 1DJ:, Pfeiffer a descris fenomenul de bacterioli , demonstr'nd c serul sanguin al animalelor imunizate are proprietatea de a provoca liza celulelor bacteriene. 2l a demonstrat c bacterioliza necesit dou componente! serul sanguin al animalului imunizat i o pictur de ser proaspt de cobai. Procesul este foarte specific! serul produce numai liza celulelor bacteriene care au specificitate fa de anticorpii serici. H. +ordet a evideniat c fenomenul lizei se produce i n cazul hematiilor, dac sunt puse n contact cu serul sanguin de la iepurele imunizat cu hematii, la care se adaug ser proaspt de cobai, n care se gsete complementul 6ale&ina7. $onceptul imunitii mediate celular a fost formulat de @etchniBoff 61DJ17. 2l a evidniat c n organism e&ist o serie de celule specializate, cu capacitatea de a recunoate celulele strine i de a le ngloba prin procesul de fagocitoz, care sunt digerate i eliminate din celula fagocitar. @etchniBoff a fcut observaii pe crustaceul $aphnia magna, ale crui celule fagocitare nglobeaz i diger sporii fungici 6Monospora bicuspidata7. $'nd infecia cu spori este masiv, capacitatea de aprare a organismului este depit i gazda moare. $ele dou doctrine ale fenomenului imunitar, care s#au confruntat prin reprezentanii lor, au fost unificate de Fright 61J9<7. 2l a demonstrat e&istena n ser a unor anticorpi naturali denumii opsonine, care acioneaz n cooperare cu fagocitele. (n 1J<9, L. "andsteiner a evideniat o structur antigenic pe suprafaa hematiilor umane i a stabilit e&istena sistemului antigenic A+8, precum i a normelor ce trebuie respectate n practica transfu iei de s'nge. 0amon 61J5C7 a demonstrat c unii ageni patogeni 6ca de e&emplu, al difteriei, al tetanosului7 produc to&ine foarte puternice. Aceste to&ine au un potenial foarte ridicat! cantiti foarte mici de to&ine sunt suficiente pentru a provoca moartea animalelor de e&perien. ;ratarea preparatului de to&in cu formol :Mo i meninerea amestecului la <Jo pentru o perioad de timp, este urmat de

pierderea complet a proprietilor to&ice. Preparatul ato&ic este inofensiv i poate fi administrat n cantiti relativ mari, fr s determine efecte patologice. Preparatul ato&ic i pstreaz proprietile imunogene i induce o stare de rezisten a organismelor imunizate. 3ub aciunea combinat a formolului i temperaturii, to&inele difteric i tetanic au fost transformate n anato%ine. $ercetrile de biochimie61J<9#1JC97 au permis elucidarea structurii moleculare a antigenelor, a imunoglobulinelor i a haptenelor. 3tudiul mecanismelor celulare ale proceselor imunitare 61JC9#1JD97 este marcat de progresele biologiei moleculare i de interferena cu &irologia, Microbiologia, Biologia celular, Biofi ica, Biochimia, 'enetica. 3#a evideniat rolul esenial al limfocitului n fenomenele imunitare, precum i rolul plasmocitelor n sinteza i secreia anticorpilor. @c Farlane +urnet 61JCJ7 a elaborat teoria seleciei clonale a rspunsului imun, iar H.F.A.P.@iller 61J?97 a stabilit rolul esenial al timusului n dob'ndirea competenei funcionale a limfocitelor ;. 0. .ood 61J?97 a evideniat rolul bursei lui (abricius n geneza sistemului imunitar la psri. H. -ausset 61JC:7 a demonstrat c pe suprafaa celulelor oricrui organism se gsete o serie de molecule 6antigene7, care confer fiecrui organism o individualitate antigenic unic. -atorit acestor antigene, reaciile care sunt determinate de o gref de esut sau de organ, pot evolua n mod diferit! ntre organismele foarte nrudite, grefa prinde foarte bine, iar o gref ntre organisme cu diferene ma%ore de ordin genetic, produce o reacie de respingere, care este cu at't mai rapid cu c't diferenele antigenice sunt mai mari. Antigenele suprafeei celulare care confer individualitate biochimic unic fiecrui organism, se numesc antigene de histocompatibilitate. 2valuarea diferenelor celor doi parteneri 6donor i receptor7 n ceea ce privete moleculele de histocompatibilitate, este esenial nainte de grefarea organului. -up 1JI9, studiul sistemului imunitar corespunde unei abordri integratoare. -up opinia lui 1. L. Herne 61JDC7, )imunologia i#a pierdut statutul de disciplin izolat, fiind pe cale de a fi absorbit de biologia clasic*. -up 1JD9, Imunologia s#a diversificat i s#a aprofundat, dar n acelai timp este mai unificat ca oric'nd, sub imperativul numitorului comun al nelegerii funciei imunitare la nivel molecular. Abordrile moleculare vor sta la baza tuturor cercetrilor viitoare, legate de funcia imunitar. (n perspectiv, orizontul de evoluie a Imunologiei se e&tinde asupra nelegerii genelor codificatoare ale moleculelor efectoare i reglatoare ale rspunsului imun i ale mecanismelor aciunii lor. Astfel vom nelege diferenierea limfocitelor, activarea lor, mecanismele sintezei, secreiei, recirculrii limfocitelor i mecanismele aciunii moleculelor efectoare. Ar urma utilizarea cunotiinelor imunologice pentru prevenirea maladiilor cu substrat imunitar 6alergii, maladii autoimune7, pentru prevenirea respingerii grefelor de esuturi i organe i pentru imunoterapia neoplaziilor. Ga fi o perioad a re ntoarcerii aplicrii Imunologiei moleculare, la nivelul ntregului organism. ( v z "# le I!"#olo$ e Imunologia s#a nscut ca un domeniu al @icrobiologiei i s#a dezvoltat ca un domeniu al Bacteriologiei medicale, cu care a rmas n raporturi de dependen p'n ctre anul 1J?9. ;reptat

ns, prin acumularea unui volum mare de date tiinifice care au demonstrat intervenia funciei imunitare i a reaciilor imune n numeroase fenomene normale i patologice, Imunologia a devenit o tiin de sine stttoare. $onsecina fireasc a implicrii funciei imunitare ntr#o multitudine de procese normale i patologice, a fost aceea c din domeniul Imunologiei s#au desprins ramuri care, la r'ndul lor, tind s aib o e&isten autonom. Imunobiologia este cea mai cuprinztoare dintre ramuri. 2a studiaz fenomenele imunitare ca manifestri ale unei funcii biologice eseniale A funcia de aprare. 3tudiaz substratul biologic al rspunsului imun 6celulele imunitare, originea i mecanismele diferenierii lor, factorii celulari i humorali care asigur diferenierea lor7, mecanismele celulare i moleculare ale biosintezei anticorpilor, e&plic implantarea celulelor tumorale i geneza cancerului clinic n condiiile aciunii efectorilor sistemului imunitar. 3tudiaz mecanismele imunitare ale respingerii grefelor de esuturi i organe, mecanismele reactivitii imunitare n filogenie i ontogenie, precum i bazele celulare i moleculare ale strilor de hipersensibilitate i ale maladiilor autoimune. Imunochimia este o disciplin de grani ce aparine Imunologiei i Biochimiei, care studiaz funcia imunitar sub aspect biochimic. Preocuparea esenial a constat n studiul chimiei antigenelor i anticorpilor i al mecanismului lor de interaciune n reacia antigen#anticorp. -atele referitoare la structura chimic a antigenelor i anticorpilor au pus bazele Imunochimiei, dar ulterior, domeniul i# a lrgit sfera de activitate i studiaz urmtoarele aspecte! # # # # # # factorii moleculari ai rspunsului imun i n special ai imunitii mediate celularN moleculele de histocompatibilitateN marBerii antigenici specifici diferitelor populaii de celule limfoideN moleculele cu funcie de receptor de antigen, pe suprafaa celulelor limfoideN factorii de cooperare celular n cursul elaborrii rspunsului imun 6interleuchine7N componentele complementului etc.

;ermenul de Imunochimie a fost introdus de chimistul suedez Arrhenius 61J9I7. 2l i#a intitulat astfel studiul cu privire la reaciile chimice care se produc n organismul uman i animal, dup imunizare. Fondatorul Imunochimiei este P. 2hrlich. 2l a introdus metode cantitative n studiul reaciilor antigen#anticorp i a elaborat o teorie general asupra recunoaterii imune 6teoria catenelor laterale sau a receptorilor7. -up 1JC9, Imunochimia s#a dezvoltat spectaculos, datorit descoperirilor din domeniul biochimiei, datorit utilizrii unor metode fizico#chimice de analiz a macromoleculelor i prin aplicarea acestora la domeniul Imunologiei. 3#a nscut un set de metode, n esen biochimice, puse n slu%ba analizei moleculelor implicate n funcia imunitar. -omeniul s#a numit anali imunochimic i utilizeaz metode care deriv din mbinarea tehnicilor fizico#chimice cu cele imunologice. Imunochimia este deservit de metoda imunodifu iei, imunofluorescenei, )I*, +,I"*, diali a la echilibru etc. 2fectul utilizrii acestor metode de investigare a fost cunoaterea mecanismelor moleculare care stau la baza rspunsului imun, ndeosebi humoral i aplicarea n laboratorul clinic, a unor noi metode de diagnostic. (n clinic, studiile de Imunochimie au propus noi metode de tratament, bazate pe interaciunea unor molecule cu rol de vehicul pentru anticorpi, cu receptorii unor celule int 6imunoto&ine7. Imunogenetica studiaz determinismul genetic al rspunsului imun! mecanismele genetice care asigur diversitatea anticorpilor i a antigenelor de histocompatibilitate. Imunohematologia s#a nscut odat cu stabilirea diferenelor antigenice ale eritrocitelor umane i cu precizarea grupelor sanguine 6L. "andsteiner, 1J917 i s#a dezvoltat dup ce s#a stabilit

e&istena unor diferene fine ntre diferite tipuri de eritrocite i, n special, dup descoperirea factorului 0h i a rolului su n patologia sarcinii. Imunologia medical uman i veterinar s#a dezvoltat n trei direcii! # direcia profilactic, orientat spre descoperirea i producerea unor noi vaccinuri, capabile s creeze o stare de rezisten. 2a se preocup, de asemenea, de schemele de vaccinare, de posibilitatea asocierii diferitelor vaccinuri i de posibilitatea stimulrii rspunsului imun cu a%utorul ad%uvanilorN # direcia terapeutic studiaz posibilitatea obinerii serurilor imune. 2le conin anticorpi i se administreaz organismelor care prezint riscul mbolnvirii prin infeciiN # direcia diagnosticului studiaz posibilitatea identificrii agenilor etiologici ai diverselor maladii infecioase, cu a%utorul reactanilor imunologici 6seruri imune i antigene7. Imunopatologia studiaz fenomenele imunitare n relaie cu diferite maladii. In multe situaii patologice, rspunsul imun 6activarea funciei imunitare7 are efecte defavorabile, pre%udiciante asupra organismului. 0spunsul imun se instituie drept cauz, dar n special ca mecanism, pentru producerea unor manifestri patologice. Afeciunile generate de activarea sistemului imunitar 6imunopatii7 se grupeaz n dou categorii! # strile de hipersensibilitate6alergiile7N # maladiile autoimune. Imunopatologia studiaz, de asemenea, imunodeficienele 6 nscute i dob'ndite7, imunitatea de transplant i imunitatea antitumoral, rspunsul imun n maladiile infecioase virale i bacteriene, precum i n maladiile para itare. "erologia 6Imunoserologia7 s#a dezvoltat ca o ramur practic, dedicat studiului

CARACTERIZAREA GENERAL A ANTIGENELOR

GR. MIHESCU, CAMELIA MIHESCU

19

$onvenional, antigenele se definesc ca substane strine, care, consecutiv introducerii n organismul uman sau animal pe o cale parenteral 6alta dec't cea digestiv7, declaneaz sinteza anticorpilor cu care se combin specific. -efiniia este incomplet din c'teva motive. 1. $alea digestiv de administrare a antigenelor nu e&clude totdeauna posibilitatea declanrii rspunsului imun. Pentru agenii infecioi care se multiplic n tractul digestiv, administrarea oral asigur o bun imunizare 6de e&emplu, vaccinul polio se administreaz oral, dei calea parenteral este mai eficient7. 5. ,nele substane nonself sunt n mod eronat considerate ca neantigenice, deoarece, dei in vivo stimuleaz reactivitatea imunitar i induc sinteza unei cantiti mici de anticorpi, in vitro nu produc reacii vizibile antigen#anticorp. <. Fa de unele antigene, organismele nu declaneaz rspunsul imun, ci manifest o stare de toleran. :. ,nele molecule n stare nativ nu induc un rspuns imun, ci numai dup cuplarea covalent cu o molecul purttor. @olecula nativ i pstreaz proprietatea de a se combina specific cu anticorpii sintetizai. Astfel de molecule se numesc haptene. H. F. +ach 61JI?7 definete antigenele ca fiind molecule care, consecutiv introducerii n organism pe o cale adecvat, induc un rspuns imun materializat prin proliferarea celulelor limfoide i sinteza moleculelor de recunoatere 6anticorpi i receptori celulari7, cu care se combin in vivo i in vitro. Model"l $e#eral de )tr"%t"r a "#" a#t $e# 8 molecul antigenic este alctuit din dou componenteN # componenta purttor 6)carrier*7, care corespunde celei mai mari pri a moleculei! # gruprile determinante de specificitate sau epitopi, localizate pe suprafaa componentei purttor i formate din secvene specifice de monomeri. 2pitopii, prin secvena proprie a monomerilor i prin configuraia spaial specific, confer individualitate chimic i specificitate antigenic moleculei nonself. .ruprile determinante de specificitate sunt echivalenii moleculari i funcionali ai haptenei. .ruprile determinante de specificitate se gsesc n numr variabil pe suprafaa purttorului i pot fi identice at't n ceea ce privete compoziia chimic, c't i configuraia spaial 6ca n cazul antigenelor polizaharidice cu epitopi repetitivi7 sau sunt diferite, at't ca secven a monomerilor c't i n privina configuraiei spaiale. Fig. 1. @odelul general de structur a unui antigen. $ea mai mare parte a oricrei molecule antigenice este reprezentat de gruparea carrier, pe care sunt localizai epitopii cu diferite configuraii spaiale, stimulatori ai reactivitii imunitare. ,nii epitopi pot fi unici, iar alii sunt multipli. ,neori, epitopii stimuleaz sinteza anticorpilor cu afiniti diferite.

11

*ropr et' le de+ # tor ale a#t $e#elor (n studiile e&perimentale asupra imunogenitii unor molecule sintetice, @. 3ela 61J?J7 a descris dou proprieti eseniale ale antigenelor! 1. Imunogenitatea sau antigenitatea este proprietatea unui antigen complet, format din gruparea carrier i epitopi, de a declana un rspuns imun, humoral sau celular, ori de c'te ori ptrunde n organism pe o cale adecvat. Proprietatea de imunogenitate este asociat cu gruparea carrier a moleculei de antigen, grupare care ntr#o oarecare msur influeneaz i specificitatea anticorpilor. 5. 3pecificitatea definete capacitatea antigenului ntreg sau numai a epitopilor si de a se combina specific cu anticorpii sau cu receptorii celulari a cror sintez a fost indus. Proprietatea de specificitate este dependent, n primul r'nd de epitopi, dar este influenat ntr#o msur mai mare sau mai mic i de gruparea carrier. 1oiunea de imunogen, uneori, este distinct de aceea de antigen. 1oiunea de imunogen este mai restrictiv i semnific proprietatea unei substane, n stare nativ, de a stimula rspunsul imun, fr s necesite con%ugarea cu o alt molecul. 1oiunea de antigen este mai larg, deoarece desemneaz molecule nonself care sunt imunogene n stare nativ sau devin imunogene dup con%ugarea cu o molecul purttor. Antigenul poate fi uneori inacapabil, n forma sa nativ, s stimuleze rspunsul imun.

CLASIFICAREA I IMUNOGENITATEA ANTIGENELOR

-up originea lor, antigenele sunt e&ogene i endogene. Antigenele e&ogene sunt cele mai numeroase i pot fi mprite n trei categorii! 17 naturaleN 57 artificialeN <7 sintetice. A#t $e#e #at"rale Antigenele naturale formeaz categoria cea mai cuprinztoare. Aici sunt incluse toate macromoleculele naturale din virusuri, microorganisme, fungi, plante i animale. -up dimensiuni se disting antigene moleculare 6)solubile*7 i antigene corpusculare. Antigenele moleculare 6solubile7 constituie gruparea cea mai numeroas, care include toate tipurile de macromolecule! proteine, polizaharide, lipide, acizi nucleici. Antigenele corpusculare 6)insolubile*7 sunt reprezentate de virusuri i de celule 6procariote i eucariote7. A#t $e#ele !ole%"lare

15

$ele mai studiate antigene sunt proteinele i polizaharidele, la care se adaug con%ugatele! glicoproteine, nucleoproteine, lipoproteine, peptidoglicani, glicolipide. Proteinele sunt cele mai numeroase i mai importante antigene moleculare. -iversitatea lor chimic, generat de variaia secvenei de aminoacizi este uria. Practic, fiecare tip de molecul proteic nonself din lumea vie este un antigen pentru organismul animal i uman, deoarece are o secven unic de aminoacizi, care determin o structur secundar i tridimensional proprie i implicit, e&istena unor epitopi proprii ca secven a aminoacizilor i conformaie spaial. Imunogenitatea este o proprietate general a proteinelor, a celor cu rol structural 6colagenul, cheratina, elastina, fibroina viermelui de mtase, proteinele capsidei virale7, a celor cu rol funcional 6miozin, actin, albumin, hemoglobin, mioglobin, enzime, hormoni, imunoglobuline7, a celor cu rol de depozit de aminoacizi6ovalbumina, cazeina, gliadina A din seminele de gr'u7. ;oate proteinele i polipeptidele cu o greutate molecular mai mare de 1999 - sunt imunogene, ntr#o msur mai mare sau mai mic. -e cele mai multe ori, pentru antigenele proteice, nu se face distincia dintre epitopii inductori ai rspunsului imun i gruparea carrier, deoarece proteinele posed un spectru continuum de determinani antigenici, ce corespund unor secvene discrete ale suprafeei moleculare localizate n zonele cele mai e&puse contactului cu receptorii sistemului imunitar. Antigenitatea moleculelor globulare este determinat adeseori, de configuraia lor spaial, rezultat din plierea tridimensional. Pentru cele mai multe proteine globulare 6mioglobina, hemoglobina, lizozimul, ribonucleaza etc.7, aproape toi determinanii antigenici sunt conformaionali, adic sunt rezultatul plierii spaiale a moleculei, iar alii sunt secveniali, adic sunt reprezentai de o secven particular de aminoacizi. @oleculele proteice fibrilare 6cheratina, colagenul, fibroina7 au configuraii mai simple dec't cele globulare, catenele lor fiind aran%ate sau rsucite pe o singur dimensiune. -eterminanii antigenici ai acestor proteine sunt secveniali, formai din <#? aminoacizi. 3istemul imunitar al unui organism recunoate un numr limitat de determinani antigenici ai unei molecule proteice. 2pitopii, conformaionali sau secveniali, care stimuleaz rspunsul imun in vivo, iar in vitro induc proliferarea limfocitelor, se numesc epitopi dominani. 8 parte a determinanilor antigenici ai unei molecule native, cel mai adesea, sunt neimunogeni 6imunosilenioi7, nefiind accesibili sistemului imunitar al organismului, dar se pot e&prima ntr#un anumit set de condiii de imunizare 6gazd, ad%uvant etc.7. Acetia sunt epitopi interni ai proteinelor globulare. ,n determinant intern poate fi silenios n molecula nativ, dar devine imunostimulator dup clivarea enzimatic a moleculei, in vivo sau in vitro. -e aceea, @. 3ela a recomandat utilizarea termenului de )grupare imunodominant*, pentru epitopul sau epitopii care se e&prim n anumite condiii6gazd, ad%uvant, cale de administrare7 i determin specificitatea rspunsului imun. Fig.5. 2pitopii dominani sunt localizai la suprafaa moleculei globulare. 2pitopii subdominani devin accesibili dup clivarea moleculei n etapa prelucrrii n macrofag, iar epitopii criptici sunt inaccesibili fenomenului de recunoatere imunitar. Imunogenitatea antigenelor proteice se modific n diferite condiii. -enaturarea moleculelor native sub aciunea agenilor chimici i a cldurii, modificarea configuraiei moleculei sub aciunea agenilor reductori sau hidroliza enzimatic, modific

1<

imunogenitatea. Anticorpii specifici fa de proteina nativ precipit slab sau de loc proteina denaturat termic sau chimic. Formaldehida i glutaraldehida sunt ageni de legare ncruciat a moleculelor proteice, constituind reele multimoleculare stabile. Aceti ageni produc denaturarea proteinelor i modific funciile celor cu activitate biologic 6to&ine, enzime7. Astfel, e&oto&inele tratate cu formaldehid, i pierd proprietile to&ice, dar rm'n imunogene. Formaldehida i glutaraldehida se folosesc pentru conservarea antigenelor cu greutate molecular mic 6peptide7, dar sunt mai puin utilizate pentru conservarea proprietilor antigenice ale moleculelor mari. Agenii chimici de legare ncruciat modific imunogenitatea moleculelor proteice prin schimbarea conformaiei moleculei i mascarea epitopilor sau prin modificarea chimic a aminoacizilor epitopului. -enaturarea semnific deplierea structurii rsucite a moleculelor proteice i are loc prin modificarea pO, prin nclzire, prin reducerea legturilor 3#3 sub aciunea ureii i a beta# mercaptoetanolului sau a acidului performic. Prin denaturare, proteina i pierde nu numai funcia biologic, dar i modific specificitatea antigenic. -e e&emplu, cele : puni 3#3 ale 01#azei, ntre resturile de cistin, sunt reduse de P#mercaptoetanol i transformate n D resturi de cistein, cu pierderea total a activitii enzimatice. Anticorpii fa de 01#aza pancreatic bovin nativ nu precipit moleculele de 01#az denaturat prin reducerea legturilor 3#3. Invers, anticorpii fa de 01#aza denaturat, nu precipit 01#aza nativ. @odificarea specificitii anticorpilor sugereaz c reducerea legturilor 3#3 determin pierderea epitopilor conformaionali. Proteinele denaturate reverseaz greu la forma nativ, chiar prin restabilirea condiiilor de mediu. Oidroliza enzimatic modific configuraia spaial a moleculelor proteice native i diminu imunogenitatea lor, cu at't mai mult cu c't fragmentele rezultate au dimensiuni mai mici. Prin clivare enzimatic se anuleaz imunogenitatea epitopilor conformaionali i se relev epitopi care n molecula nativ au statutul de epitopi criptici. 8 atenie special s#a acordat studiului imunogenitii unor proteine ale cror proprieti biologic#active sunt uor de evaluat! enzime, inhibitori enzimatici, hormoni proteici, to&ine, imunoglobuline 6 n calitatea lor de antigene7, proteine ale capsidei sau ale nveliului viral. 2nzimele sunt antigenice, indiferent de originea lor. 0eacia moleculelor de enzim cu anticorpii specifici a constituit o modalitate de determinare a poziiei epitopilor. Anticorpii fa de diferii epitopi ai moleculei de enzim modific n grade foarte diferite activitatea ei catalitic. -ac anticorpii sunt specifici fa de epitopi localizai la nivelul situsului activ al enzimei, molecula i pierde activitatea fa de substrat, deoarece legarea anticorpilor la situsul activ inhib competitiv legarea moleculelor de substrat. .radul de inhibiie a activitii enzimatice este cu at't mai accentuat, cu c't molecula este mai mare. 2fectul inhibitor al anticorpilor nu se produce dac enzima a legat de%a substratul specific. -ac gruprile determinante de specificitate ale moleculei de enzim sunt situate n afara situsului catalitic, activitatea enzimei este parial inhibat, datorit modificrilor conformaionale care survin dup reacia antigen#anticorp, sau rm'ne intact. Foarte rar, comple&ul enzim#anticorp are un efect catalitic superior, comparativ cu enzima nativ. Oormonii sunt molecule slabimunogene, datorit uniformitii relative a structurii lor chimice n regnul animal. Anticorpii specifici fa de ma%oritatea hormonilor proteici se obin prin asocierea lor prealabil cu ad%uvantul Freund. Imunogenitatea hormonilor este ntr#o relaie direct cu gradul

1:

deosebirilor chimice e&istente ntre hormonul e&ogen i hormonul produs de organismul receptor. $onsecina este sinteza anticorpilor antihormon. Proprietile antigenice ale insulinei sunt bine cunoscute, datorit utilizrii clinice a hormonului. @olecula de insulin este alctuit din dou catene polipeptidice, cu un numr total de C1 de aminoacizi! 51 ai catenei A i <9 ai catenei +. $ele dou catene sunt reunite prin puni 3#3. 3tructura moleculelor de insulin de la diferite specii este foarte asemntoare, :I din cei C1 de aminoacizi fiind identici. -eosebirile se gsesc n catena A pentru aminoacizii D, J i 19 6la bovine Ala, 3er, Gal, la om sunt ;hr, 3er, Ile, iar la ovine Ala, .lE, Gal7. In catena +, diferena este limitat la aminoacidul $#terminal. Aceste mici diferene ale secvenei de aminoacizi nu modific funcia hormonului. -e aceea, insulina, indiferent de provenien, este la fel de eficient pentru tratamentul diabetului uman. @icile diferene de secven, n general, nu sunt sesizate de organismul receptor. ;otui, dup administrare prelungit, organismele receptoare cu reactivitate imunitar mai nalt, sintetizeaz anticorpi anti#insulin. Polizaharidele, dei au comple&itate structural relativ mare, condiionat de multitudinea posibilitilor de legare a atomilor de carbon, sunt molecule slabimunogene n stare nativ, comparativ cu proteinele. Antigenitatea lor este conferit de succesiunea unitilor componente, de configuraia spaial a moleculei i de greutatea molecular. $ele cu greuti mai mici de C9 B- nu sunt imunogene. Polizaharidele sunt antigene cu epitopi secveniali repetitivi i cel puin uneori, n funcie de originea polizaharidului i de specia imunizat, sunt imunogeni. -in punctul de vedere al structurii moleculare, se disting dou tipuri de polizaharide! a7 cele care au o caten central pe care se inser ramificaiile lateraleN b7 polizaharide lipsite de o caten central, iar ramificaiile sunt dispuse aleatoriu, fr nici o simetrie. 0olul catenelor centrale n conferirea imunogenitii este controversat, dar ramificaiile laterale au o importan deosebit pentru determinarea specificitii antigenice a polizaharidelor. -in punctul de vedere al compoziiei chimice pot fi homo# sau heteroplizaharide, iar n ceea ce privete sarcina, pot fi neutre sau ncrcate. 8ligo# i polizaharidele pot dob'ndi o structur teriar 6globular7. ,neori, configuraia spaial a polimerului glucidic este determinant pentru specificitatea sa antigenic. 3chimbrile conformaionale ale polizaharidelor se produc mai uor dec't ale proteinelor, pentru c au bariere energetice sczute. Pentru polizaharide, denaturarea este practic necunoscut, ceea ce le confer stabilitate. -ac imunogenitatea polizaharidelor native este slab, adeseori ele se comport ca haptene, adic devin antigenice dup cuplarea cu un purttor proteic, rezult'nd lectine, cu o foarte larg distribuie n lumea vie. In calitate de haptene, polizaharidele au proprietatea de specificitate, adic se combin cu anticorpii complementari fa de comple&ul glicoproteic. -in motive de ordin practic, cele mai studiate polizaharide din punct de vedere antigenic sunt cele de origine bacterian! de&tranul i polizaharidele capsulare. -e&tranii sunt polimeri ramificai de glucoz, resturile glucozil fiind unite mai ales prin legturi de tip Q 1#?, dar n funcie de specia productoare, punctele de ramificaie ale catenelor polimere pot fi 1#5, 1#< sau 1#:. -e&tranii sunt sintetizai n special de unele bacterii lactice, din zaharoz, dup reacia! -e&tranaz 16zaharoz7 ############### 6.lucoz7n R 6Fructoz7n

1C

-e&tranii au greuti moleculare foarte diferite 6p'n la 19 ? -7, n funcie de gradul de polimerizare. 1u sunt imunogeni i de aceea se folosesc ca nlocuitori ai plasmei. Prin transfuzii repetate cu soluii de de&tran la om i prin in%ectare repetat la oarece, s#au sintetizat anticorpi antide&tran. 3pecificitatea anticorpilor antide&tran este foarte nalt. In serul animalelor imunizate cu de&trani s#au detectat dou tipuri de anticorpi! unii specifici fa de resturile de glucozil legate 1#5 i alii specifici fa de resturile de glucozil legate 1#<, ce nu dau reacii ncruciate, dei deosebirea dintre cele dou categorii de molecule de de&tran const numai n modul diferit de legare a resturilor de glucozil ntre ele. Polizaharidele capsulare se pot gsi fie subforma moleculelor libere 6)solubile*7, fie subform corpuscular 6ataate celulelor bacteriene capsulate7. Gariaiile biochimice ale polizaharidelor capsulare, determinate de compoziia glucidic a catenei, de secvena monomerilor sau de modul de legare a lor n caten, confer tulpinilor bacteriene, specificitate antigenic de tip. "a 3tr. pneumoniae s#au identificat peste D9 de tipuri antigenice ale polizaharidelor capsulare. In compoziia lor intr he&oze, pentoze, derivaii lor aminai, metilai etc. 3pecificitatea antigenic a polizaharidelor capsulare depinde at't de compoziia chimic, c't i de succesiunea monomerilor n catena polizaharidic. $a vaccinuri, polizaharidele induc starea de toleran. (n stare purificat sunt molecule neimunogene, datorit uniformitii lor structurale n lumea vie. In%ectarea lor la animale nu induce sinteza anticorpilor. Acizii nucleici nativi sunt con%ugate nucleoproteice, n care acizii nucleici au rolul de hapten. @a%oritatea epitopilor con%ugatului sunt conformaionali. 8 fracie din anticorpii anti#con%ugat se combin cu acizii nucleici. Anticorpii anti# acizi nucleici se combin cu acizii nucleici n stare pur, indiferent de provenien. Proteinele asociate acizilor nucleici confer o nou specificitate antigenic i determin sinteza anticorpilor care se combin cu proteina puttor. 2&perimental, anticorpii anti#acizi nucleici se obin pe una din urmtoarele ci! 1. Imunizarea cu bacteriofagi din seria ; par 6; 5, ;:, ;?7, supui ocului osmotic. A-1 al acestor fagi se deosebete de A-1 din celulele eucariote, prin prezena C#hidro&i#metilcitozinei glicozilate, n locul citozinei. Anticorpii au specificitate fa de bazele glicozilate, ceea ce e&plic lipsa reaciilor ncruciate cu ali acizi nucleici. 5. Imunizarea cu ribosomi din celulele vegetale sau animale. Anticorpii sintetizai reacioneaz cu A01 de origine bacterian, vegetal sau animal, precum i cu polinucleotidele sintetice6poli#A, poli#$, poli#,7, dar nu reacioneaz cu A-1 nativ i nici cu A-1 denaturat. <. Imunizarea cu con%ugate hapten#protein, n care haptena este reprezentat de baze azotate, ribonucleozide, dezo&iribonucleozide, nucleotide, dinucleotide i trinucleotide. Anticorpii sintetizai reacioneaz at't cu haptena c't i cu A-1 nativ sau denaturat. :. Imunizarea cu comple&e formate din acizi nucleici i albumin metilat. $ele dou molecule formeaz un comple& necovalent, datorit interaciei dintre gruprile negative ale acizilor nucleici i cele pozitive ale proteinei. Anticorpii sintetizai reacioneaz cu comple&ul molecular, cu proteina, cu acidul nucleic nativ i denaturat de diferite origini.

1?

C. Anticorpii anti#acizi nucleici se gsesc n s'ngele pacienilor cu lupus eritematos diseminat 6"2-7. Anticorpii sintetizai fa de acizii nucleici cu rol de haptene n con%ugatele cu proteine nu au specificitate, deoarece precipit A-1 monocatenar, A01 de diferite origini, poliribonucleotide i acizii nucleici dublu catenari. "ipidele sunt molecule neimunogene n stare nativ, dar se pot cupla cu proteinele i n con%ugatul format au rolul de haptene. -in punct de vedere imunologic, cele mai importante lipide sunt fosfatidele 6sfingomielina i cefalina7 i glicosfingolipidele6galactocerebrozida7. 8 hapten lipidic cu o importan practic deosebit este cardiolipina, din cordul mamiferelor. In s'ngele indivizilor infectai cu ;. pallidum se gsesc anticorpi care reacioneaz cu cardiolipina nalt purificat 6reacie ncruciat7, e&tras din cordul bovin. ,n alt antigen lipidic este antigenul Forssman, inductor al sintezei anticorpilor hemaglutinani i n prezena complementului, hemolitici. 3tudiul imunogenitii lipidelor a fost ngreunat de insolubilitatea lor n ap. Problema reactivitii anticorpilor cu antigenele lipidice a fost depit parial, prin utilizarea lipidelor au&iliare 6lecitina i colesterolul7 n suspensia antigenic. -isponibilitatea liposomilor a permis studiul imunogenitii lipidelor asociate cu membranele. Hapte#e Oaptenele6haptein, grec = a apuca7 sunt substane chimice naturale sau de sintez, cu molecul mic, a cror imunogenitate este condiionat de cuplarea cu o molecul purttor, dar i pstreaz proprietatea de specificitate, adic reacioneaz cu anticorpii specifici a cror sintez a fost indus de haptena con%ugat cu o molecul cu rol de purttor. -enumirea de )hapten* a fost introdus de "andsteiner pentru a caracteriza din punct de vedere funcional un e&tract alcoolic de rinichi de cal, neimunogen ca atare pentru iepure, dar capabil s se combine cu anticorpii sintetizai dup imunizarea iepurelui cu e&tractul alcoolic de rinichi de cal, cuplat cu o molecul purttor. 2l a propus ca n categoria haptenelor s fie cuprins orice substan natural sau sintetic, cu greutate molecular mic sau mare, care n form nativ nu poate s induc un rspuns imun detectabil, dar dob'ndete capacitatea imunogen, dup cuplarea sa in vivo sau in vitro, cu o molecul purttor cu greutate molecular mare. $on%ugatul este imunogen nu numai n raport cu epitopii moleculei purttor, ci i cu epitopul haptenei. -in punct de vedere funcional, haptenele s#au numit )%umti de antigene*, deoarece au numai una din cele dou proprieti eseniale ale antigenelor! nu sunt imunogene, dar i pstreaz proprietatea de specificitate. -e aceea, termenul )antigenic* nu este sinonim cu cel de )imunogenic*. Oaptena este un antigen, dar n forma sa nativ, nu este imunogen. (n general, haptenele sunt molecule mici, dei uneori, macromoleculele pot funciona ca haptene. 2&tractul alcoolic de rinichi de cal este o hapten comple&. Oaptenele simple sunt reprezentate de polinucleotide, alcooli, formaldehida, unele medicamente etc. ,tiliz'nd haptenele simple, prin reacii de cuplare cu o molecul purttor s#au obinut antigene artificiale. Oaptena din comple&ul molecular are rolul gruprii determinante de specificitate. 3tudiul

1I

imunogenitii con%ugatelor hapten#molecul purttor a permis determinarea mrimii gruprilor determinante de specificitate ale antigenelor i indirect, determinarea situsului de combinare a anticorpilor. Pe aceiai cale s#a evaluat specificitatea, afinitatea i heterogenitatea anticorpilor. Oaptenele au fost folosite pentru studiile de cristalografie cu raze S a unui comple& antigen#anticorp. Oaptene autocuplante sunt molecule cu greutate molecular mic, a cror particularitate const n aceea c, dup in%ectare, n organism se combin spontan cu proteinele tisulare i formeaz con%ugate hapten#protein, in vivo. $on%ugatele hapten#protein induc sinteza anticorpilor i determin procese de hipersensibilitate sau iniiaz maladii autoimune. Astfel se comport derivaii dinitrofenolului substituii cu clor sau fluor, unii produi de degradare a penicilinei. A#t $e#ele %orp")%"lare Antigenele corpusculare sunt, n esen, antigene moleculare asociate virusurilor i celulelor. Proteinele capsidale i glicoproteinele nveliului viral sau proteinele prezentate pe suprafaa celulelor infectate cu virusuri, sunt foarte imunogene i stimuleaz rspunsul imun al gazdei. -e aceea, imunitatea consecutiv infeciei virale este, de obicei, de lung durat. Antigenele bacteriene sunt fie solubile 6eliminate n mediul e&tracelular7, fie corpusculare 6legate de celul7. -in prima categorie fac parte e&oto&inele i polizaharidele capsulare libere, iar din cea de a II#a, antigenul somatic 8 6endoto&ina bacteriilor .ram negative7, antigenele polizaharidice din glicocali&, flagelina, pilina, acizii teichoici, mureina etc. Antigenele eritrocitare sunt glicoproteine ale suprafeei eritrocitare, cu determinism biochimic cunoscut, n sistemul A, +, 9. .licoproteinele eritrocitare de grup sanguin se gsesc i pe suprafaa celulelor tisulare, dar i n secreiile e&ocrine 6saliv, suc gastric etc.7, la circa ICM dintre indivizi, denumii )secretori*. .licoproteinele din secreii sunt hidrosolubile i studiul lor a fost mai uor dec't al moleculelor eritrocitare. .ruprile glucidice ale glicoproteinelor membranei eritrocitare au rol dominant n determinarea specificitii de grup sanguin, aa cum au evideniat studiile de digestie enzimatic controlat. 2ritrocitele tuturor grupelor sanguine au un precursor antigenic comun A antigenul O 6codificat de gena O7, bine e&primat pe suprafaa antigenelor de grup 9 i n cantiti progresiv descresc'nde pe hematiile de grup A, +i Ab. 3pecificitatea antigenic de grup 9 este conferit de "#fucoz. .rupul A are o gen ce codific sinteza glicozil#transferazei, enzim ce adaug 1#acetil#-#galactozamina, la galactoza preterminal a moleculei O. -e aceea, specificitatea antigenic a eritrocitelor de grup A este conferit de trizaharidul 1#acetil#galactozamin, galactoz i "#fucoz! 1#acetil galactozamin 6Q 1#<7 .al A 0 60 = restul catenei polizaharidice7 Q 1#5 Fuc Indivizii de grup +au o gen ce adaug -#galactoza 6 n loc de 1#acetil galactozamin7 la galactoza preterminal a moleculei O, av'nd un determinant antigenic format din dou resturi terminale de -#galactoza i "#fucoza.

1D

Fig. <. 8ligozaharidele cu rol de epitopi determinani ai grupelor sanguine A+8. 8ligozaharidul este ancorat n membrana eritrocitului prin intermediul sfingomielinei, denumit ceramid. DCM din indivizii umani secret substanele de grup sanguin n saliv. "a indivizii )secretori*, oligozaharidele sunt prezente sub forma con%ugatelor cu polipeptidele codificate de genele secretoare 6dup 0oitt, 1JJI7.

Prezena restului de fucoz 6adic antigenul O7 este esenial pentru e&presia epitopilor A i +. .ena O i antigenul su lipsesc la fenotipul +ombaE. -e aceea, transferazele A i + nu pot aduga glucidele specifice la restul .al al polizaharidului i antigenele de grup A i + nu sunt e&primate. 2&primarea antigenelor A+8 pe hematii poate fi modificat prin tratamentul in vitro cu glicozidaze! o Q#glicozidaz 6e&tras din bobul de cafea verde7 poate cliva restul de .al de pe hematiile de grup + i le convertete n hematii de grup 9, ce pot rm'ne funcionale dup transfuzia la subiecii de grup 9. Antigenele de histocompatibilitate 6descrise de H. -ausset, 1JCD7 sunt molecule de suprafa ale ma%oritii esuturilor. -in punct de vedere biochimic, ele sunt strict specifice fiecrui organism uman i animal i confer individualitate biochimic proprie fiecrui organism. 3e numesc i antigene de transplantare, deoarece, dup grefarea unui esut sau a unui organ, moleculele de histocompatibilitate se comport ca antigene i declaneaz rspunsul imun al organismului receptor, care determin respingerea grefei. Antigenele individuale de histocompatibilitate se evideniaz prin reacia de respingere a grefei. (n funcie de raportul genetic dintre donor i receptor, antigenele de histocompatibilitate aparin urmtoarelor categorii! 17 autoantigenele includ antigenele proprii de histocompatibilitate, care, n condiii normale sunt tolerate de sistemul imunitar. 3ub aciunea unor factori fizici, chimici sau biologici, antigenele de histocompatibilitate se modific devenind autoantigene, generatoare ale conflictelor autoimuneN 57 izoantigenele cuprind antigenele de transplantare comune orga#nismelor identice din punct de vedere genetic, care aparin unei linii genetic pure 6inbred7. Gerificarea puritii genetice a unei populaii de organisme se face prin transplantul de piele. -ac grefa este acceptat, organismele respective aparin aceleiai linii inbred. ;ermenii )izoantigen* i )inbred* nu au coresponden pentru populaia umanN <7 aloantigenele 6alos = altul7 includ molecule care, dup in%ectare declaneaz rspunsul imun la organisme ale aceleiai specii, dar diferite genetic, de organismul donor. Aloantigenele sunt inegal rsp'ndite la indivizii unei specii i induc rspunsul imun la organismele care nu posed antigenul respectiv. Aloantigenele se evideniaz dup imunizarea unui organism, cu o suspensie celular provenit de la organisme ale aceleiai specii, dar aparin'nd unui alotip diferitN :7 heteroantigenele 6&enoantigene, &enos = strin7 includ molecule care se gsesc nTpe celulele tuturor indivizilor unei specii i care se comport ca antigene fa de organismele altei specii.

1J

Oeteroantigenele se evideniaz prin sinteza anticorpilor fa de antigenele celulelor provenite de la un organism al unei specii diferite. $elulele unei specii diferite aduc n organismul receptor nu numai heteroantigene, ci i aloantigene i chiar autoantigene. -e aceea in%ectarea unui heteroantigen este una dintre cele mai utilizate metode pentru a induce sinteza autoanticorpilor. Antigenele de organ sunt molecule specifice care confer particularitile biochimice i funcionale ale celulelor unui organ. -e e&emplu, proteinele hepatice sau ale glandei mamare difer de proteinele esutului renal al aceluiai organism. Antigene a ti!i"ia#e "a origine, antigenele artificiale sunt antigene naturale, modificate chimic prin cuplarea, cel mai adesea covalent, cu una sau mai multe molecule mici, care le confer o nou individualitate antigenic i o nou specificitate de combinare cu anticorpii, n raport cu molecula de origine. Antigenele artificiale s#au obinut, n principal, pornind de la moleculele proteice. Prin legarea moleculelor proteice cu diferite haptene s#au obinut trei tipuri de antigene artificiale! a7 con%ugate hapten#protein, prin reacia de diazotare, iodurare i respectiv substituie nucleofilN b7 con%ugate protein#protein, prin intermediul unor ageni bifunc#ionali de legare 6diizocianaii i carbodiimidele7N c7 proteine legate de suporturi insolubile, prin reacia de diazotare sau prin intermediul carbodiimidelor. a7 $on%ugatele hapten#protein au fost utilizate de "andsteiner, n studiile cu privire la mecanismele rspunsului imun. In con%ugate, haptenele ndeplinesc rolul de epitopi 6grupri determinate de specificitate7, iar mole#culele proteice au rolul de carrier. 0spunsul imun nu este orientat strict fa de epitopii haptenici, ci i fa de determinani antigenici ai gruprii carrier. $uplarea hapten#purttor necesit e&istena unei grupri reactive a haptenei, care s se lege covalent cu gruprile funcionale ale purttorului, cu condiia pstrrii integritii funcionale a celor doi reactani. Oaptenele se pot cupla cu purttori foarte diveri, dar proteinele naturale 6albumina, globulinele7 furnizeaz con%ugate foarte imunogene. "andsteiner a cuplat amino#benzen#sulfonatul cu molecule proteice, prin reacia de diazotare i a obinut azoproteine!

59

-up cuplarea haptenei cu ;ir, Ois sau "Es din structura unei proteine, rezult un antigen artificial care induce formarea a dou categorii de anticorpi cu specificiti diferite, dup cum reacioneaz cu haptena, sau cu molecula purttor. $on%ugatele azoproteice au permis studiul influenei configuraiei spaiale a haptenei, asupra specificitii antigenice. .ruparea sulfonat a fost legat n poziia orto, meta sau para a haptenei aminobenzen. Antiserurile obinute au specificitate fa de fiecare izomer. Izomerul meta al aminobenzen#sulfonatului, cuplat cu proteina, pstreaz capacitatea de a precipita cu anticorpii specifici fa de proteina nativ, n timp ce con%ugatele cu izomerii orto# i para# dau reacie foarte slab de precipitare. $oncluzia este c izomerii de poziie induc modificri sterice 6conformaionale7 ale haptenei.

$on%ugatele hapten#protein se pot obine prin reacia de iodurare. Proteinele puternic iodurate i modific specificitatea antigenic. 2le induc sinteza anticorpilor care dau reacii ncruciate de precipitare cu proteinele iodurate heterologe. 3emnificaia este c prin iodurare, proteinele i pierd specificitatea antigenic. ;oate proteinele iodurate induc sinteza anticorpilor fa de o grupare iodurat, n special fa de tirozina iodurat, indiferent de specificitatea gruprii purttor. 8 alt reacie de obinere a con%ugatului hapten#protein este cea de substituie nucleofil. $ele mai folosite haptene sunt 5,:#dinitrofenolul6-1P7 i 5,:,?#trinitrofenolul6;1P7. @ecanismul molecular al cuplrii este urmtorul! un atom de O din gruparea 8O # , 1O5R sau 3# 3O a proteinei, este nlocuit de gruparea haptenic prin eliminarea apei. Proteina pierde electroni, iar nucleul benzenic i accept. .ruprile donoare de electroni sunt 8O # , 1O5R, 3#3O. .ruprile -1P i ;1P sunt cuplate cu proteina purttor sub forma 5,:#dinitrobenzen#sulfonatului de 1a, a 5,:,?# trinitrobenzen#sulfonatului de 1a sau subforma derivailor halogenai. 0eacia dintre o protein i 5,:#dinitrobenzen#sulfonatul de sodiu ilustreaz mecanismul atacului nucleofilic, reacie n care proteina cedeaz electroni, iar nucleul benzenic i accept.

51

b7 $on%ugatele protein#protein se obin prin intermediul agenilor bifuncionali de legare! diizocianaii i carbodiimidele. -eoarece gruprile ciano au reactivitate diferit, reacia de cuplare se realizeaz n trepte. -e e&emplu, gruparea din poziia : a toluilen#diizocianatului este mai reactiv dec't gruparea ciano din poziia 5. Aceasta permite ca una dintre proteine s se cupleze n poziia :, iar ulterior, ntr#o nou etap a reaciei, cea de a II#a protein se va cupla la gruparea ciano din poziia 5!

$arbodiimidele, utilizate ca ageni bifuncionali pentru cuplarea proteinelor, sunt considerate anhidride simetrice ale ureii!

O51 A $ A 1O5 A O8O 8

O1 = $ =1O

O51 A $ : 1

55

,ree

$arbodiimida simetric

$ianamida asimetric

$arbodiimidele pot fi substituite simetric sau asimetric cu molecule proteice! 011 = $ = 101 sau 011 = $ = 105. Agenii bifuncionali de cuplare permit obinerea con%ugatelor proteice 6con%ugate anticorpi# feritin, insulin#albumin7, dar se folosesc i ca mediatori ai legrii diferitelor molecule proteice pe suprafaa eritrocitelor. @arca%ul cu feritin este deosebit de important din punct de vedere practic, deoarece se folosete pentru evidenierea electrono#optic, la nivelul membranei, a diferitelor molecule proteice. c7 $on%ugatele protein#suport insolubil se obin prin cuplarea proteinelor cu un suport insolubil, prin reacia de diazotare, prin intermediul carbodiimidelor sau al +r$1. $a suporturi insolubile se folosesc derivai celulozici! sephade&, sepharoza, agaroza etc. "egarea proteinei de suport, prin reacia de diazotare, se face prin intermediul tirozinei, lizinei, histidinei, triptofanului sau argininei. $on%ugatele anticorpi#suport insolubil se numesc imunosorbeni i sunt folosii cu o eficien deosebit pentru purificarea proteinelor dintr#un amestec, datorit specificitii lor de combinare cu anticorpii corespunztori, fi&ai ntr#o coloan de material inert. Antigenul complementar specificitii de legare a anticorpului fi&at n coloan, se leag necovalent de imunosorbent, dup care poate fi eluat cu un agent chimic. Anticorpii pot fi imobilizai pe un suport insolubil, prin tratamentul cu un agent de legare ncruciat 6glutaraldehid7, dar multe din situsurile reactive pt fi denaturate sau rm'n ascunse. Fig. :. Principiul funcional al imunosorbenilor utilizai n cromatografia de afinitate. $oloana conine sefaroz, pe care sunt fi&ate moleculele de anticorp. Amestecul de antigene este trecut prin coloan, unde va fi reinut numai antigenul care recunoate specific anticorpul fi&at. $el mai bun suport de imobilizare este agaroza, un polizaharid obinut prin fracionarea agarului. Agaroza este rezistent la aciunea degradativ a enzimelor bacteriene i a agenilor chimici i poate fi regenerat. 2ste disponibil subforma sferelor poroase hidratate, cu diametrul de :9#<99 Um i conine 5#DM agaroz n soluie apoas. In coloana de imunosorbent se pot fi&a nu numai anticorpii, ci i antigenele sau chiar celule intacte. Imunosorbenii se folosesc n activitatea de cercetare i n clinic, pentru prepararea unor produse biologice i a medicamentelor.

5<

Antigene $inteti"e Antigenele sintetice sunt polimeri de aminoacizi, cu secven cunoscut, obinui in vitro. Proprietile imunogenice ale homopolimerilor 6poli#"Es, poli#.lu, poli#Pro7 i ale heteropolimerilor au fost studiate de @. 3ela. 3tudiul imunogenitii heteropolimerilor are avanta%ul c ofer posibilitatea studiului influenei compoziiei chimice, a greutii moleculare i a conformaiei moleculare, uur'nd studiul imunochimic al gruprilor determinante de specificitate antigenic. $atenele polipeptidice sintetice pot fi lineare sau ramificate. $ele ramificate rezult prin ataarea polimerilor lineari, la o caten polifuncional. 0amificarea se obine mai uor cu aminoacizi aromatici. Oomopolimerii nu sunt imunogeni, cu e&cepia poli#"#Pro, poli#"#.lu, poli#"#Arg, poli#"#"Es. $opolimerii formai din doi aminoacizi nu sunt totdeauna imunogeni, dar cei rezultai prin polimerizarea a trei aminoacizi diferii sunt totdeauna imunogeni. $u c't compoziia lor este mai heterogen, imunogenitatea este mai accentuat. Prezena aminoacizilor aromatici confer o anumit rigiditate a epitopilor i implicit, o imunogenitate superioar. Pentru a fi imunogeni, copolimerii trebuie s fie catabolizai de aparatul enzimatic al celulelor care prelucreaz i prezint antigenul. Polipeptidele formate din -#aminoacizi sunt slab imunogene, datorit incapacitii organismului de a cataboliza polimerul. Polipeptidele sintetice s#au dovedit a fi foarte utile n studiile de imunochimie, cu privire la! # determinarea mrimii gruprii determinante de specificitate i indirect, a situsului de combinare a anticorpilor specificiN # rolul dimensiunilor moleculei asupra proprietilor de imunogenitateN # rolul configuraiei spaiale a moleculei n conferirea proprietii de imunogenitateN # identificarea epitopilor secveniali i conformaionali. i tehnicilor de e&plorare a reaciilor imune in vitro.

DETERMINAN%II ANTIGENICI

-e cele mai multe ori, antigenele sunt macromolecule comple&e sau chiar celule ntregi, dar rspunsul imun, dup in%ectarea lor n organism, este orientat predominant fa de situsuri discrete, strict limitate ale antigenului, denumite grupri determinante de specificitate 6gds7, situsuri antigenice, determinani antigenici sau epitopi.

5:

2pitopul este regiunea limitat a antigenului care induce un rspuns imun specific, se combin cu situsul activ al moleculei de anticorp i determin specificitatea reaciei antigen#anticorp. Antigenele proteice prezint cea mai mare diversitate de epitopi, at't n privina compoziiei chimice, c't i a configuraiei spaiale. 3tudiile de cristalografie cu raze S permit identificarea atomilor individuali ai unei molecule i determinarea mobilitii lor, e&primat n factori de temperatur atomic. Factorii de temperatur ridicat corespund regiunilor moleculare cu mobilitate nalt 6regiuni calde7. In molecula proteic, epitopii corespund zonelor moleculare cu o mobilitate nalt a atomilor. "a temperatura biologic, aceste secvene necesit cantiti mici de energie, pentru a trece dintr#o conformaie n alta. Invers, regiunile moleculare cu mobilitate atomic redus au factori termici de valoare sczut 6regiuni reci7 i necesit o cantitate mai mare de energie pentru schimbarea conformaiei. Adeseori, epitopii antigenici sunt localizai n regiunile calde ale moleculei. $apacitatea unei regiuni a moleculei de antigen de a funciona ca epitop 6adic de a stimula rspunsul imun7 se numete imunopoten. @rimea gruprii determinante de specificitate s#a apreciat indirect prin determinarea mrimii haptenei capabil s )umpl* complet situsul de combinare al anticorpului. (n acest scop s#a utilizat sistemul de&tran#antide&tran, ntr#o reacie de precipitare. -e&tranul cu greutate molecular de C9 Beste imunogen i prin in%ectare repetat la iepure, se obine serul imun anti#de&tran. Artificial se prepar oligozaharide cu dimensiuni controlabile. 0eacia de precipitare de&tran#anticorpi specifici este inhibat progresiv de oligozaharidul de glucoz i este complet n prezena he&azaharidului. 8ligomerul cu ? resturi de glucoz corespunde celui mai bun ligand care se cupleaz cu anticorpii anti#de&tran 6ligandul este orice molecul capabil s formeze un comple& cu o alt molecul7. Oeptazaharidul, ca i oligozaharidele cu mai puin de ? resturi de glucoz inhib mai puin eficient reacia de precipitare a sistemului de&tran#antide&tran. Fig. C. 8ligozaharidul format din ?#I resturi de glucoz, blochez cu cea mai mare eficien, reacia de precipitare dintre de&tran i anticorpii specifici antide&tran. 8ligozaharidele mai mari sau mici nu se combin eficient cu anticorpii i inhib ntr#o msur progresiv mai mic reacia de precipitare cu de&tranul. $ercetri similare s#au fcut cu homopolimeri de aminoacizi 6poli#"Es, poli#Ala7, legai de proteine purttor. 3erul imun obinut pe iepure, fa de aceste con%ugate, conine predominant anticorpi specifici fa de haptena homopolimeric. 0eacia de precipitare dintre serul specific i con%ugatul hapten#protein, este inhibat de pentamerul de alanin, ceea ce denot c acesta se leag cu cea mai mare afinitate de situsul de combinare al anticorpului. Pentamerul corespunde mrimii epitopului antigenic al con%ugatului i reflect, indirect, mrimea situsului de combinare al anticorpilor specifici. (n concluzie, mrimea unui epitop polizaharidic corespunde la ?#D uniti monomerice, iar pentru antigenele proteice, epitopul are :#? aminoacizi. Galena antigenului s#a definit convenional prin numrul de epitopi ai unui antigen. 1umrul de epitopi ai unei molecule antigenice variaz n raport cu mrimea i comple&itatea sa structural.

5C

Galena se evalueaz prin numrul moleculelor de anticorp care reacioneaz cu o molecul de antigen. Pentru evaluarea numrului de epitopi ai unui antigen, trebuie avut n vedere c molecula de anticorp este bivalent 6leag doi epitopi7, dar i faptul c un antiser nu conine anticorpi fa de toi epitopii unui antigen. 3tudiile privind reacia antigen#anticorp in vitro, au condus la concluzia e&istenei a trei tipuri de valene antigenice 6epitopi7! # valenele funcionale conformaionale sunt conferite de epitopii conformaionali, situai la suprafaa moleculei native de antigen i sunt accesibili sistemelor imunitare de recunoatere specific a moleculei. 1umrul lor este proporional cu greutatea molecular a antigenului i este dependent de comple&itatea conformaional a moleculei. ,n situs antigenic, teoretic, s#ar gsi la fiecare c'teva mii de daltoniN V valenele funcionale interne sunt reprezentate de epitopi interni, care, n molecula nativ sunt inaccesibile sistemului imunitar. 2le devin funcionale, in vivo, dup degradarea parial a moleculei, n celulele care prelucreaz antigenulN V valene nefuncionale, reprezentate de epitopi criptici care nu devin funcionale dup prelucrarea antigenului in vivo, dar se pot releva dup clivarea enzimatic in vitro a moleculei. 1umrul total al epitopilor unui antigen nu se cunoate, dar se poate evalua cu apro&imaie, dup degradarea parial a moleculei de antigen. -e e&emplu, albumina seric bovin nativ are ? situsuri funcionale conformaionale. -up scindarea enzimatic mena%at in vitro, rezult J fragmente peptidice, fiecare dintre ele d'nd reacie de precipitare cu serul anti#albumin nativ. Pentru ca reacia de precipitare s aib loc, sunt necesari cel puin doi epitopi, ceea ce nseamn c molecula de albumin seric bovin are cel puin 1D epitopi, care devin funcionali dup scindarea enzimatic a moleculei i induc sinteza anticorpilor specifici. E+e%t"l de %arr er Antigenele prezint o dualitate funcional evident, conferit de faptul c specificitatea rspunsului imun este orientat predominant, dar nu e&clusiv, fa de gruprile determinante de specificitate. "a r'ndul su, suportul macromolecular 6carrier7 are proprietatea de imunogenitate, dar confer i un grad de specificitate a rspunsului imun. 0ezultatele e&perimentale cu con%u#gate hapten#protein 6dinitrofenol#albumin seric7 au evideniat c n cazul n care suportul carrier este nonself, rspunsul imun este mai intens. Antigenul artificial s#a obinut prin cuplarea -1P cu albumina de oarece. In%ectarea con%ugatului la oarece induce un rspuns imun slab, cu un titru sczut al anticorpilor anti#-1P6anti#hapten7. $on%ugatul -1P#albumin seric bovin, in%ectat la oarece, stimuleaz intens rspunsul imun primar anti#hapten, ceea ce demonstreaz c gruparea carrier are rol modulator asupra rspunsului imun. 0olul gruprii carrier n reactivitatea imunitar a fost evideniat prin evaluarea titrului anticorpilor dup stimularea secundar. Animalele stimulate repetat cu haptena A, cuplat cu purttorul +, produc un rspuns imun secundar intens, cu anticorpi anti#hapten i anti#carrier. (ns, n rspunsul imun secundar, dac stimularea s#a fcut cu haptena A, cuplat cu un carrier diferit 6$7 titrul anticorpilor anti#hapten nu crete. Acest fenomen curios s#a denumit )efect de carrier*. ,n purttor eficient pentru stimularea rspunsului imun trebuie s fie imunogenic, adic s stimuleze rspunsul celulelor ;. @oleculele neimunogene sunt purttori ineficieni ai haptenelor,

5?

pentru stimularea rspunsului imun. Aceasta arat c mecanismele de recunoatere pentru hapten i pentru gruparea purttor sunt diferite. Imunizarea cu con%ugate hapten#carrier, a indus numai sinteza anticorpilor specifici anti# hapten, dac purttorul a fost un antigen ;#dependent. @oleculele neimunogene nu au caliti de carrier pentru haptene. )2fectul de carrier* denot c haptena i epitopii purttorului sunt recunoscui separat, de limfocitele + i respectiv ;. $ele dou subpopulaii de celule coopereaz pentru a induce sinteza anticorpilor cu specificitate de hapten.

FACTORII CARE COND%IONEAZ IMUNOGENITATEA Antigenul este o substan nonself, care, la contactul cu celulele sistemului imunitar, declaneaz sinteza anticorpilor specifici i a receptorilor celulari cu care se combin in vitro i in vivo. -efiniia este nesatisfctoare, pentru c se refer la ce face antigenul, fr s#l defineasc n termeni proprii. -efinirea complet a antigenului este rezultatul nsumrii unei serii de proprieti, fiecare dintre ele fiind o condiie necesar a imunogenitii, dar nu i suficient. $ondiiile imunogenitii au fost deduse prin studii e&perimentale, utiliz'nd antigene artificiale i sintetice. 1. $aracterul strin al moleculei este condiia ma%or a imunogenitii. 8 molecul nonself este cu at't mai imunogen, cu c't este mai diferit de moleculele organismului receptor. In esen, caracterul nonself al unei molecule nu este strict dependent de raporturile ta&onomice ale organismului donor cu cel receptor de antigen, ci este consecina deosebirilor de structur molecular. $ele mai multe proteine ale unei specii sunt nonself pentru alte specii, dar uneori, proteinele omologe ale unor specii sunt lipsite reciproc de imunogenitate. -e e&emplu, hemoglobina de cal nu este imunogen pentru iepure, dei celelalte proteine de cal sunt imunogene. $aracterul nonself nu implic n mod obligatoriu e&istena unor molecule cu totul noi, ne nt'lnite la organismul receptor, ci numai modificri minime ale moleculei, conferite de e&istena c'torva aminoacizi diferii n anumite poziii ale catenei proteice. Pentru restul secvenei, molecula nonself poate fi asemntoare proteinelor proprii organismului receptor de antigen. @icile diferene de secven a aminoacizilor, au rolul de epitopi. -e regul, proteinele aprute timpuriu n evoluie au un grad superior de asemnare chimic interspecific i sunt slab imunogene pentru speciile nrudite 6de e&emplu, albumina seric7, iar cele aprute mai t'rziu 6de e&emplu, globulinele serice7 sunt mai heterogene i mai imunogene. 5. @rimea moleculei influeneaz imunogenitatea moleculelor nonself. Pentru a fi imunogen, o molecul trebuie s aib dimensiuni care s depeasc un prag limit. @oleculele cu o bun imunogenitate sunt mai mari de 19 B-. $u c't o molecul este mai mare, cu at't numrul epitopilor si este mai mare. 3ecvenele de aminoacizi cu rol de epitopi au ansa repetrii de mai multe ori ntr# o molecul mai mare. Proteinele mari 6de e&emplu, ovalbumina A :9 B-, albumina seric # I9 B-, hemocianina A ?999 B-7 sunt foarte imunogene, iar cele cu molecul mic 6insulina A C,I B-, histonele A ? Bd, glucagonul A <,C B-7 sunt puin imunogene. .lucagonul este cea mai mic

5I

molecul natural fa de care s#au obinut anticorpi, iar cea mai mic molecul sintetic imunogen este un polipeptid de 1,: B-. Pentru polizaharide, limitele minime pentru imunogenitate sunt mai mari. -e&tranii sunt antigenici dac au peste C9 B-, cu variaii mari de rspuns imun de la o specie la alta 6omul i oarecele rspund bine, cobaiul A foarte puin7. @oleculele mici neimunogene sau slab imunogene pot dob'ndi o imunogenitate optim, dup adsorbia pe particule inerte de colodiu, caolin sau de crbune. Acestea au rol de purttori i asigur creterea taliei moleculare. <. $omple&itatea molecular. -imensiunile mari ale unei molecule nonself nu sunt totdeauna suficiente pentru a#i conferi imunogenitate. -e e&emplu, moleculele de polimeri sintetici 6poli# acrilamida, nElonul7 sunt foarte mari, fiind formate dintr#un numr mare de monomeri repetitivi, dar nu sunt imunogene pentru c nu au comple&itatea molecular minim necesar. @oleculele naturale, n special proteinele au un grad nalt de comple&itate, datorit diversitii monomerilor componeni. Fiecare tip de molecul proteic are o configuraie tridimensional unic, determinat de secvena specific de aminoacizi. Proteinele globulare au cea mai mare comple&itate antigenic, derivat din configuraia lor teriar. 2le posed epitopi e&primai pe suprafaa moleculei native, accesibili fenomenului de recunoatere de ctre celulele sistemului imunitar i epitopi interni, care pot stimula rspunsul imun, dup clivarea enzimatic a moleculei n celulele specializate pentru prelucrarea antigenelor. -e e&emplu, serul imun anti# albumin seric bovin precipit cu fiecare din cele J fragmente peptidice rezultate prin cliva%ul enzimatic al moleculei native, ceea ce sugereaz c in vivo, molecula este scindat i astfel se relev epitopi interni, fa de care se sintetizeaz anticorpi specifici. $omple&itatea unei molecule nu depinde numai de diversitatea monomerilor, ci i de secvena lor i de efectul secvenei asupra structurii secundare, teriare i eventual Wuaternare a moleculei. :. 3tarea fizic a antigenului. Imunogenitatea unei molecule este condiionat de o anumit rigiditate a epitopilor si. "ipsa rigiditii ar e&plica imunogenitatea redus a gelatinei, o protein denaturat, derivat din hidroliza colagenului, foarte bogat n glicocol 651#<CM7. (n mod obinuit, rotaia liber a unei molecule are loc numai ntre $ Q i legtura peptidic. .licocolul nu realizeaz ramificaii ale catenei polipeptidice n poziia $ Q, ceea ce face ca molecula de gelatin s prezinte rotaii libere n %urul a&ului longitudinal. .elatina are o proporie foarte mic de aminoacizi aromatici 6;ir, Ois7, iar cisteina i triptofanul lipsesc. "egarea "#;ir, n proporie de 5M mrete gradul de imunogenitate a gelatinei. $omple&ul induce sinteza anticorpilor care precipit gelatina nativ. C. 3olubilitatea. $ondiia solubilitii unui antigen pentru a fi imunogen este sugerat de urmtarele observaii! V polimerii macromoleculari sintetici care nu sunt solubilizai, adic nu sunt hidrolizai, sunt lipsii de imunogenitateN

5D

V organismele cu echipamente enzimatice hidrolitice mai active 6oarece7 elaboreaz un rspuns imun mai amplu fa de un antigen greu solubil6de e&emplu, polizaharidul de pneumococ7, n raport cu organismele care hidrolizeaz mai greu 6de e&emplu, iepurele7N - antigenele corpusculare 6celule, virioni7 devin imunogene dup solubilizarea i eliberarea componentelor imunogene n macrofag, unde are loc degradarea mena%at a antigenelor. Oidroliza enzimatic a antigenului nu este totdeauna o condiie prealabil obligatorie a imunogenitii. 3tudiile cu antigene sintetice au artat c, n momentul recunoaterii de ctre celulele sistemului imunitar, o parte a epitopilor sunt intaci, identici cu aceia ai moleculei native. ?. Accesibilitatea determinanilor antigenici. Pentru ca un epitop s fie imunogen, trebuie s fie e&pus la suprafaa moleculei, pentru a fi accesibil mecanismelor de recunoatere imunitar. -e e&emplu, un polimer de "#"Es, cu rol de purttor pentru tripeptidul ;ir#Ala#.lu este imunogen. -up mascarea epitopilor tripeptidici cu catene de poli#Ala, molecula i pierde imunogenitatea. Fig. ?. 0olul accesibilitii determinanilor antigenici n imunogenitate. $opolimerul multicatenar format din acidul "#glutamic 6.7 i tirozina 6;7, legat prin intermediul poli "#alaninei 6A#A7, de purttorul polilizin este imunogen. Acelai copolimer, legat direct de purttorul polilizin, dar mascat de polialanin, este neimunogen. I. $onfiguraia spaial a moleculei este un factor decisiv pentru imunogenez. 3tudiile privind imunogenitatea antigenelor sintetice, au evideniat c cel mai adesea, anticorpii se formeaz fa de o anumit secven de aminoacizi, care are rol de epitop. -ar, uneori, anticorpii sunt specifici fa de configuraia spaial a unui determinant antigenic. $oncluzia a reieit din specificitatea distinct a anticorpilor fa de dou polipeptide sintetice cu aceiai compoziie chimic, dar cu configuraii spaiale diferite. In primul caz, determinantul antigenic este tripeptidul ;ir#Ala#.lu, legat de un polimer sintetic, cu rol de purttor. "a iepure, se sintetizeaz anticorpi specifici fa de tripeptidul ;ir#Ala#.lu. (n al II#lea caz, prin polimerizarea tripeptidului se obine o molecul cu structura periodic a secvenei ;ir#Ala#.lu, care dob'ndete configuraie Q#helical. -up imunizarea iepurelui, se sintetizeaz anticorpi care precipit moleculele cu structur spaial Q#helical, dar nu precipit tripeptidul simplu. Pe baza acestor observaii, @. 3ela recunoate e&istena a dou tipuri de determinani antigenici! V determinani secveniali, a cror specificitate este dat de secvena subunitilor componente 6aminoacizi, monozaharide7, indiferent de structura spaial a moleculei. 2pitopii secveniali sunt comuni pentru toate polipeptidele care au secvene de aminoacizi identice sau asemntoare i e&istena lor este o surs a reaciilor imune ncruciateN Fig. I. ;ipuri de epitopi. 2pitopi secveniali i conformaionali, continui i discontinui. V determinani antigenici conformaionali, a cror specificitate deriv din configuraia spaial a moleculei. 2pitopii conformaionali sunt de dou feluri! continui i discontinui. $ei discontinui sunt formai din regiuni distincte ale moleculei, care a%ung n %u&tapoziie c'nd molecula se pliaz n configuraia sa nativ.

5J

@eninerea integritii determinanilor conforma#ionali este condiionat de integritatea legturilor 3#3. -up fragmentarea enzima#tic a moleculei, epitopii conformaionali discontinui i pierd integritatea i semnificaia funcional, iar cei continui au o soart variabil! i pierd sau i pstreaz configuraia avut n molecula nativ. Importana epitopilor conformaionali a fost evi#deniat pentru molecula de lizozim din albuul de ou de gin. +ucla format de aminacizii ?:#D9 este nchis de o legtur 3#3 ntre dou resturi de cistein. 3ecvena buclei a fost sintetizat artificial i legat de polimerul Ala#"Es, cu rol de carrier. $omple&ul format induce sinteza anticorpilor la iepure, specifici fa de aceast secven, dar dau reacie de precipitare i cu molecula nativ de lizozim. (ig. .. Bucla format din aminoaci ii /01.2 ai secvenei moleculei de li o im din albuul de ou, formea un determinant conformaional. (n general, anticorpii care se sintetizeaz fa de antigenele proteice naturale au specificitate, n primul r'nd, fa de epitopii conformaionali i mai rar fa de cei secveniali, ceea ce denot c sistemul imunitar recunoate molecula nativ sau regiuni ale ei, cu configuraia spaial iniial. (n concluzie, studiul antigenelor sintetice a avut un rol decisiv pentru definirea condiiilor de imunogenitate. Polizaharidele sunt molecule cu o slab imunogenitate, corespunztoare unei comple&iti moleculare limitate. Acizii nucleici i lipidele sunt molecule neimunogene n stare nativ, dar dup cuplarea cu un suport proteic, ndeplinesc rolul de haptene i devin foarte imunogene. -in aceast cauz, nucleoproteinele i lipoproteinele sunt antigene foarte eficiente. Proteinele native sunt imunogene, dar pentru e&primarea la un nivel superior a acestei proprieti, trebuie s ndeplineasc condiiile enumerate. Acestea, luate n parte, sunt necesare, dar nu suficiente. 8 bun imunogenitate este rezultatul cumulrii unui numr c't mai mare de condiii. ,n antigen ideal trebuie s fie greu degradabil 6pentru o persisten c't mai lung n organism7, s fie timodependent i s aib un numr c't mai mare de semnale imunogene 6epitopi7, conectate ntr#un ansamblu funcional, denumit imunon. Antigene en&'gene Antigenele endogene sunt componente celulare i tisulare proprii 6self7, fa de care, n condiii normale, sistemul imunitar nu manifest reactivitate. ;otui, unele componente tisulare, n anumite condiii, pot s stimuleze reactivitatea imunitar. 3e disting dou categorii de antigene endogene! 17 antigene sechestrate 6mascate7 i 57 antigene alterate. Antigenele sechestrate sunt substane cu localizare intracelular i de aceea nu sunt accesibile sistemului imunitar pentru a fi recunoscute n cursul dezvoltrii ontogenetice. 3ub aciunea unor factori 6fizici, chimici, biologici7, inductori ai unor procese de liz celular, moleculele cu localizare intracelular se pot elibera i sunt recunoscute ca nonself de sistemul imunitar. -e e&emplu, anticorpii antimitocondriali care caracterizeaz ciroza biliar primitiv, se sintetizeaz dup liza unor celule i eliberarea acestor organite. Alteori, unele componente tisulare sunt separate de sistemul imunitar, prin bariere anatomice! V proteinele cristalinului, delimitate de cristaloid, se elibereaz n cursul interveniilor chirurgicale, dup traumatisme care sparg capsula sau dup afeciuni care permeabilizeaz

<9

cristaloida. 2le sunt recunoscute ca molecule nonself i stimuleaz rspunsul imun anti#cristalin, ce poate afecta irisul, procesele ciliare i coroidaN V proteinele spermatice, n strile de spermostaz, induc sinteza local a autoanticorpilor n structurile epididimului. Anticorpii recunosc specific un antigen al spermatozoizilor i rezultatul este imobilizarea sau chiar aglutinarea, cu consecina sa, sterilitatea imunitarN V caseina din lapte poate stimula reactivitatea autoimunitar. Antigenele alterate sunt molecule normale ale suprafeei celulare, legate de membran, care, din diferite cauze6uzur fiziologic sau sub aciunea diferiilor factori A fizici, chimici, biologici7 i modific structura chimic i sunt recunoscute ca molecule nonself. -e e&emplu, unele medicamente, dup legarea cu diferite molecule din plasm sau de pe suprafaa eritrocitelor, le modific conformaia nativ i acestea sunt recunoscute ca nonself. Girusurile induc sinteza n celula infectat, a antigenelor proprii, dar adeseori moleculele specific virale determin modificarea unor molecule self, care sunt recunoscute ca molecule strine i iniiaz conflictul autoimun. (n condiii normale, antigenele sechestrate i alterate sunt neutralizate i eliminate, fr consecine patologice. (n 1J99, 2hrlich a formulat conceptul )horror autoto&icus*, care semnific preponderena aciunii mecanismelor homeostatice. In condiiile unei reactiviti imunitare crescute, activarea rspunsului imun fa de aceste componente chimice are drept consecine, declanarea maladiilor autoimune, considerate ca fiind e&presia patologic a funciei imunitare. Antigene (ete '!i#e Antigenele heterofile sunt substane neidentice, dar nrudite chimic, prezente la numeroase specii de organisme! om, animale, plante, microorganisme. Particularitatea dominant const n faptul c ele induc sinteza anticorpilor care dau reacii ncruciate! anticorpii specifici fa de un antigen al grupului heterofil, reacioneaz 6 ntr#o reacie de precipitare sau de aglutinare7 cu oricare dintre antigenele grupului. Prototipul antigenelor heterofile este antigenul de tip Forssman, descoperit n 1J11 n esuturile de cobai. H. Forssman a descoperit c serul imun obinut prin imunizarea iepurelui cu omogenat tisular de cobai, aglutineaz eritrocitele de berbec. 2ste o reacie ncruciat, pe care autorul a denumit#o reacie heterolog. ;ermenul )heterolog* s#a pstrat pentru reaciile ncruciate previzibile, pe care le manifest diferite antigene nrudite 6de e&emplu, albumina seric de om i de primate7. -enumirea )heterofil* s#a atribuit reaciilor ncruciate pe care le produc antigene ne nrudite. 0egnul animal poate fi mprit n specii Forssman pozitive 6cobai, hamster, oarece, oaie, capr, cal, pisic, c'ine, pui de gin etc.7 i specii Forssman negative 6om, iepure, obolan, maimue, bou, g'sc7. 1ici unele nici altele nu au vreun grad de nrudire genetic. Absena antigenului Forssman pe suprafaa celulelor tisulare la iepure, este foarte important din punct de vedere practic. 3erul imun anti#antigen Forssman se obine prin imunizarea iepurelui cu o suspensie de hematii de berbec. In contact cu hematiile de berbec, serul imun obinut pe iepure, produce aglutinarea lor, iar n prezena complementului se produce liza. Anticorpii specifici fa de antigenele hematiei de berbec dau reacie ncruciat cu antigenele tisulare ale grupului Forssman, dar i cu antigene de origine bacterian. Antigene de tip Forssman s#au identificat ulterior, prin reacii serologice, n celulele unor bacterii patogene 63tr. pneumoniae, 3higella, 3almonella7 i chiar

<1

n celulele microbiotei din tractul digestiv, ceea ce e&plic prezena anticorpilor naturali anti#hematie de berbec, n serul uman. 0eaciile imune ncruciate pe care antigenele de tip Forssman le dau cu serul imun obinut fa de unul din antigenele grupului se e&plic prin asemnarea structurii chimice a acestor molecule. $ele mai multe antigene heterofile sunt glicoproteine sau glicolipide, n care gruprile glucidice au rolul de haptene. $omponentele glucidice ale antigenelor heterofile sunt foarte asemntoare din punct de vedere chimic, chiar dac aparin unor organisme cu poziie sistematic foarte diferit. Antigenul Forssman este un glico#sfingolipid, la care determinantul antigenic este format din dou resturi de 1#acetil#galactozamin. Polizaharidele antigenelor de tip Forssman, n stare purificat, nu sunt imunogene, sunt rezistente la fierbere i chiar la autoclavare. $ele mai importante sisteme heterofile sunt cele cu semnificaie biologic sau importan medical! sistemul Forssman, sistemul Paul#+unnell 6P#+7 i sistemul Oanganutziu#-eicher6O#-7. Anticorpii caracteristici mononucleozei infecioase 6Paul i +unnell, 1J<57 apar la J9M dintre pacienii infectai cu virusul 2pstein#+arr i sunt Ig@ care se evideniaz ntr#o reacie de aglutinare cu eritrocite de ovine sau bovine. Anticorpii serici recunosc dou antigene distincte! un antigen prezent numai pe eritrocitele bovine 6+7 i un al II#lea antigen, e&istent at't pe eritrocitele de bovine c't i pe cele de ovine 6+37. @a%oritatea pacienilor cu mononucleoz infecioas sintetizeaz anticorpi anti#+ i anti#+3, dar o mic proporie conin numai anticorpi anti#+. Anticorpii P#+ se sintetizeaz fa de un antigen, ce pare a fi o glicoprotein codificat de virus. Anticorpii O#-, descrii de Oanganutziu 61J5:7 i -eicher 61J5?7 sunt declanatori ai maladiei serului, la pacienii care au primit in%ecii de ser heterolog. 3inteza lor este indus de antigenul O#-, care se gsete n esuturile mamiferelor, dar lipsete din esuturile normale umane, ns reapare n unele esuturi umane patologice 6limfoame i mieloame7. -in punct de vedere chimic, antigenul O#este acid 1#glicolil#neuraminic. Alte antigene heterofile. Antigenele grupului 0h se gsesc pe eritrocitele maimuei @acaccus rhesus i pe eritrocitele a circa DCM dintre indivizii umani. Antigenul O de pe eritrocitele umane de grup 9 este foarte asemntor cu un polizaharid al celulelor de Xersinia pestis 6agentul ciumei7, iar antigenul eritrocitar uman de grup A este asemntor cu un antigen al virusului variolei 6smallpo&7. -ezavanta%ul asemnrii chimice dintre antigenele unor ageni patogeni i antigenele de grup sanguin este evident! indivizii umani de grup sanguin 9 i A reacioneaz mai slab la contactul cu antigenele asemntoare, iar procesul infecios se instaleaz mai rapid. 8 importan practic deosebit au antigenele heterofile de ;. pallidum i cele de Proteus o&1J. Fracia ma%or a anticorpilor specifici fa de ;. pallidum aglutineaz o suspensie de celule bacteriene de Proteus o&1J. Aceiai fracie a anticorpilor se combin cu cardiolipina, ceea ce permite ca n reacia de fi&are a complementului pentru determinarea infeciei cu ;. pallidum s se utilizeze antigenul cardiolipinic, mult mai uor de obinut. A&)*+an,ii

<5

3ubstanele sau amestecurile de substane, care n asociaie cu un antigen sau in%ectate simultan cu acesta, intensific rspunsul imun specific fa de antigenul respectiv sunt denumite ad%uvani 6ad%uvere, latin = a a%uta7. Punctul de plecare al introducerii ad%uvanilor n practica imunologic a fost un fapt de observaie! dup asocierea unui vaccin bacterian celular, cu un vaccin macromolecular 6anato&in7, rspunsul imun antito&in este mult mai intens dec't n cazul n care cele dou vaccinuri se administreaz separat. -up in%ectarea vaccinului celular anti#tifoparatific A i +, mpreun cu anato&ina tetanic 6;A+7, titrul anticorpilor fa de anato&ina tetanic este de 59#<9 de ori mai mare dec't n cazul in%ectrii separate a anato&inei tetanice. 2&plicaia acestui fenomen a fost dat ulterior! la locul in%ectrii vaccinului, corpii celulari bacterieni determin un proces inflamator, adic un aflu& local de celule efectoare ale rspunsului imun 6limfocite, macrofage7. @acrofagele capteaz i fi&eaz anato&ina ntr#un stoc, de unde este eliberat treptat i astfel se prelungete durata de stimulare a sistemului imunitar. $el mai cunoscut i folosit pentru studiul e&perimental al imunogenitii antigenelor este ad%uvantul Freund, o emulsie1 de ap n ulei mineral de parafin. Antigenul se suspend n ap. 2mulsia de ap n ulei se realizeaz cu un emulgator care conine grupri lipofile i hidrofile 6lanolina, arlacel A7. Acesta este ad%uvantul Freund incomplet. -up adugarea celulelor omor'te de @. tuberculosis, rezult ad%uvantul Freund complet. Principiul imunostimulator al celulelor de @. tuberculosis este reprezentat de glicolipidele i glicolipopeptidele6denumite ceruri7 din structura peretelui celular. .licolipopeptidele sunt formate din acizi micolici esterificai cu un polizaharid 6arabinogalactan7 ce conine arabinoz, galactoz, manoz, la care se leag un fragment peptidic ce conine - i "#alanin, acid -#glutamic, acid diaminopimelic. Fig. J. 0eprezentarea schematic a interaciunii moleculelor componente ale ad%uvantului Freund. *d3uvantul (reund determin urmtoarele efecte4 a5 persistena antigenului n organism prin nt6r ierea degradrii sale i eliberarea treptat n circula ieN b7 picturile de emulsie vehiculeaz antigenul pe cale limfatic, n tot organismul, inclusiv spre ganglionii limfatici, unde se va declana rspunsul imunN c7 ad%uvantul Freund complet i incomplet fac imunogene doze mici de antigene, care altfel nu ar fi imunogene i mresc semnificativ titrul anticorpilor fa de oricare antigen. Amestecul de ad%uvant i antigen se administreaz subcutan sau intradermic. Administrarea intravenoas anuleaz efectul ad%uvantului. 2ste posibil administrarea decalat la interval de c'teva zile 6mai nt'i a ad%uvantului7, dac cele dou in%ectri se fac n acelai loc. 2fectul stimulator al ad%uvantului Freund este foarte intens pentru dozele mici de antigen. 2ste foarte eficient n asociaie cu antigenele proteice, stimul'nd sinteza Ig.. ,tilizarea sa la om este limitat de efectele secundare pe care le produce 6artrita de ad%uvant7. 2ndoto&inele bacteriilor .ram negative 63almonella, +rucella, +ordetella etc.7 au efect ad%uvant. 2le sunt n acelai timp ad%uvani, antigene, to&ine i factori pirogeni. 2fectul ma&im se obine numai dac endoto&ina se administreaz simultan sau la mai puin de ? ore dup in%ectarea antigenului. 1u se adaug vaccinurilor umane pentru c produce febr. 3rurile de aluminiu 6Al68O7<, Al638:75. 15 O587, fosfatul de aluminiu7 i cele de calciu au efect ad%uvant, deoarece se combin cu imunogenul i formeaz un comple& insolubil la situsul

<<

subcutan sau intramuscular al in%ectrii, mrind intervalul de timp n care celulele imunitare pot fi activate. 3e stimuleaz aflu&ul de fagocite i funcia de fagocitoz. $ompuii aluminiului sunt singurii ad%uvani acceptai n clinica uman i veterinar, dei prezint unele dezavanta%e! stimuleaz rspunsul imun mediat humoral, dar nu i imunitatea mediat celularN vaccinurile care conin compui ai Al nu pot fi conservate prin nghe i nici liofilizate i de aceea necesit transport refrigerat. Ali ad%uvani acioneaz prin stimularea activitii enzimelor lizosomale. Gitamina A i srurile de beriliu, de siliciu, srurile Wuaternare de amoniu mobilizeaz macrofagele la locul in%ectrii i stimuleaz activitatea lor fagocitar i degradativ.

12mulsia este o suspensie de picturi mici ale unui lichid n alt lichid, cu care nu este miscibil.

IMUNOGLO-ULINELE .ANTICOR/II0

2&istena anticorpilor a fost demonstrat de +ehring i Litasato 61DJ97, n serul animalelor imunizate e&perimental cu to&ina tetanic. 3erul lor neutralizeaz to&ina in vitro i o face inofensiv pentru animalele de e&perien. Autorii au folosit denumirea de )anticorp* pentru a desemna substanele protectoare ce apar n ser, cu specificitate fa de un antigen corpuscular 6bacterii7. Oeidelberger 61J<97 a purificat anticorpii din ser i a evideniat c aparin fraciei proteice. ;iselius i Labat 61J<D7 au demonstrat e&perimental c, de cele mai multe ori, funcia de anticorp este asociat cu fracia gama a proteinelor serice i le#au dat denumirea de gamaglobuline. (n 1JI9, prin consens ntre specialiti, 8@3 a stabilit ca substanele cu proprieti de anticorp, s fie grupate n categoria imunoglobulinelor, pornind de la faptul c toate substanele din acest grup au funcie imunitar i sunt cuprinse n fracia globulinic a serului. Anticorpii nu sunt numai gamaglobuline. 2&ist i alte globuline cu funcie de anticorp, dup cum e&ist i gamaglobuline care nu au activitate de anticorp 6de e&emplu, proteinele patologice +ence#Hones7. (ig.72. @obilitatea electroforetic a imunoglobulinelor serice. Ig. are cea mai heterogen sarcin electric i migreaz n regiunile gama i beta. Ig2 are are mobilitate similar cu a Ig-, dar nu poate fi identificat pe electroforegram datorit nivelului seric sczut.

<:

Anticorpii sunt imunoglobuline care se sintetizeaz n organism dup ptrunderea unui antigen i au proprietatea de a se cupla specific cu antigenul inductor i de a#i anihila aciunea nociv. ;ermenul de )anticorp* n accepiunea sa actual, a fost folosit de 2hrlich 61DJ17 n lucrarea )3tudii e&perimentale asupra imunitii*. Anticorpii formeaz 59M din totalul proteinelor plasmatice, dar se gsesc i n lichidele e&travasculare, n secreiile e&ocrine 6saliv, lapte, lacrimi7 i ca molecule receptor de anti1gen pe suprafaa limfo#citelor +. @oleculele de anticorpi au cea mai mic mobilitate electroforetic. -ei sunt asemntoare ca structur, moleculele de imunoglobuline formeaz o familie de o diversitate imens, ne nt'lnit la nici o alt protein. -iversitatea lor uria este ordonat n clase i subclase, n primul r'nd pe baza compoziiei n aminoacizi. Oeterogenitatea compoziiei n aminoacizi se reflect n sarcina lor electric, foarte diferit. "a electroforez, celelalte proteine serice migreaz ca o band compact, cu o mobilitate caracteristic, deoarece moleculele lor sunt omogene n ceea ce privete sarcina electric, la un pO dat. Imunoglobulinele migreaz ca o band larg, fiind heterogene, nu numai prin secvena aminoacizilor, ci i prin sarcina electric. Str"%t"ra !ole%"le de !"#o$lo,"l # 3tructura moleculei de imunoglobulin 6Ig7 s#a stabilit prin analiza proteinelor omogene secretate de plasmocitoame, cu metodologii comple&e! biochimice, analitice, cristalografia prin difracie cu raze S. ,nitatea structural de baz a moleculei de Ig este monomerul. Acesta este o unitate tetrapeptidic, format prin asocierea a dou lanuri grele 6O, 8eavE = greu7, fiecare av'nd circa :C9 de aminoacizi i o greutate molecular cuprins ntre C9#I? B- i dou lanuri uoare 6", ,ight = uor7, fiecare av'nd circa 51? aminoacizi i o greutate molecular de 5C B-. $ele : catene polipeptidice sunt legate ntre ele prin puni 3#3 i se rsucesc n spiral # at't unul fa de altul, dar i fiecare separat A fa de propria#i a&, rezult'nd o configuraie tridimensional, stabilizat prin 1?#5: legturi 3#3 i prin alte interaciuni necovalente. @onomerul tetrapeptidic tridimensional are form de ; sau de X. (n funcie de secvena aminoacizilor, fiecare lan polipeptidic este alctuit din dou regiuni distincte! a7 regiunea constant 6$ 7 corespunde %umtii $#terminale a celor : catene polipeptidice. Are o secven relativ uniform a aminoacizilor i asigur unitatea structural i funcional a moleculei de IgN b7 regiunea variabil 6G7 cuprinde o secven de circa 119 aminoacizi n %umtatea 1#terminal a celor : catene polipeptidice. @rimea sa nu este fi&, deoarece intervin inserii sau deleii de <#? aminoacizi. 0egiunile variabile ale fiecrei perechi de catene formeaz situsul de combinare al moleculei de Ig, care confer specificitate de legare cu antigenul. Gariabilitatea ma&im a secvenei de aminoacizi a catenei " se concentreaz n poziiile 5:#<:, C9#CC, DJ#JI, iar a catenei O, la secvenele <9#<?, C9#C?, D?#J1 i JC#199. Aceste secvene formeaz regiunile hipervariabile sau regiunile determinante de complementaritate 60-$7, fa de configuraia spaial a epitopului. Aminoacizii acestor secvene intr n alctuirea situsului de combinare al moleculei de Ig.

<C

3ecvenele relativ invariante se numesc regiuni cadru 60$7 i formeaz D9#DCM din regiunea variabil a moleculei de Ig. Gariaia secvenei aminoacizilor la nivelul regiunilor cadru este limitat la CM. 3ecvena regiunilor cadru i a celor determinante de complementaritate alterneaz astfel! 0$1, 0-$1, 0$5, 0-$5, 0$<, 0-$<, 0$:, 0-$:. Aproape de %umtatea catenelor O se gsete o secven de circa 1C aminoacizi, n care sunt grupate toate resturile de cistein ce formeaz puni 3#3 intercatenare. Aceast secven se numete regiunea balama. 2ste sensibil la aciunea proteazelor fiind clivat de papain, pepsin etc. "a Ig@ i Ig2, regiunea balama lipsete, dar cea omolog balamalei este clivat de proteaze. 0egiunea balama asigur fle%ibilitatea moleculei de Ig, permi'nd mobilitatea fragmentelor Fab, care, teoretic, pot forma unghiuri variabile, ntre 9#1D9o, conferind moleculei o geometrie variabil. $ele 1?#5: legturi 3#3 ale monomerului tetrapeptidic sunt constante ca numr i localizare pentru diferitele clase de Ig. 3e disting < categorii de puni 3#3! # legturi intercatenare O#O sau "#O, ale unui monomer. "egturile "#" s#au descris la IgA 5 i la proteinele +ence#Hones, care sunt dimeri de lanuri "N # legturi intracatenare, care determin structura teriar a fiecrui lan polipeptidic. # legturi intercatenare, ntre lanurile O ce aparin unor monomeri diferii, la IgA 5 i Ig@, care formeaz comple&e moleculare polimerice! moleculei de Ig se formeaz prin plierea fiecreia din cele : catene polipeptidice i prin rsucirea lor n spiral. -omeniile sunt regiuni globulare ale moleculei, legate ntre ele prin secvene lineare scurte. -omeniile se pliaz ntr#o conformaie stabil, conferit de secvena proprie de aminoacizi. $omparativ cu secvenele lineare, domeniile pliate sunt mai rezistente la proteoliz. $atena " are dou domenii! unul corespunztor regiunii variabile 6G"7 i altul corespunztor regiunii constante 6$"7. $atena O are : domenii! unul corespunztor regiunii variabile 6GO7 i trei domenii ale regiunii constante! $O1, $O5, $O<. (ig. 77. a. 0eprezentarea schematic a structurii primare a moleculei de imunoglobulin. (ig. 77. 1. "ocalizarea diferitelor funcii ale moleculei de anticorp. Fiecare caten O a moleculelor de Ig@ i Ig2 are C domenii! unul n regiunea variabil 6GO7 i : n regiunea constant 6$O1 A $O:7. 3ecvena de legtur ntre regiunea constant 6$O17 i cea variabil a fiecrei catene se numete on de comutare 6s = sKitch7. Fiecare domeniu are o form cilindric sau globular, cuprinde o secven de circa ?9 de aminoacizi i este stabilizat prin interaciuni necovalente de tip trans, cu domeniul omolog din lanul opus i de tip cis, cu domeniul vecin al aceleiai catene.

<?

-omeniile fiecrui lan, mpreun cu cele omologe ale lanului opus, formeaz uniti funcionale denumite module. $ooperarea lor funcional este ilustrat de faptul c domeniile G" i GO separate, au o capacitate foarte limitat de legare a antigenului, n timp ce forma lor asociat 6care constituie situsul de legare al moleculei7 este foarte eficient n legarea antigenului. (ig. 79. 0eprezentarea schematic a domeniilor pliate i stabilizate ale moleculei de Ig.. @oleculele de imunoglobuline e&ist sub dou forme! secretate, ca anticorpi n umorile organismului i legate de membrana limfocitelor +, ndeplinind funcia de receptori de antigen. Forma legat prezint o secven hidrofob la captul $#terminal, de circa <9 de aminoacizi, care strbate membrana i se ancoreaz n structura ei. @etodele de clivare i de denaturare chimic a moleculei de imunoglobulin au contribuit la nelegerea structurii i funciei sale. $livarea s#a realizat cu enzime proteolitice 6papain, pepsin, tripsin7 sau prin cianoliz cu +r$1. (ig. 7:. ;liva3ul en imatic al moleculei de Ig.1 umane. Pepsina cliveaz catena O i elibereaz fragmentele F6ab>75 i regiunea Fc 6segmentul cristalizabil7. Oidroliza prelungit taie fragmentul Fc> n peptide scurte. Papaina cliveaz molecula n regiunea balama 6la restul 55:7 i elibereaz dou fragmente Fab i un fragment Fc 6dup 0oitt, 1JD:7. Papaina scindeaz mo#lecula de imunoglobulin la nivelul regiunii balama 6aminoacidul 55:7 i elibe#reaz dou fragmente (ab 6(ragment antigen binding7 i fragmentul (c 6cristalizabil7. Fiecare fragment Fab 6C9 B-7 conine un lan " ntreg i %umtatea 1#terminal a lanului O, notat cu Fd 6difficult7, care cuprinde domeniile GO i $O1. Frag#mentul Fab poate fi scindat transversal i rezult frag#mentul Fv 6variabil7 format din domeniile G" i GO, se#parat de domeniile $" i $O1. Fragmentul Fc 6C9 B-7 este format din %umtile $#terminale ale celor dou catene O, unite printr#o legtur 3#3 i prin legturi necovalente. Pepsina cliveaz lan#urile O sub regiunea balama i elibereaz fragmentul Fc>, mai mic dec't fragmentul Fc papainic i dou fragmente Fab> legate ntre ele 6Fab>75, prin puni 3#3 intercatenare. +r$1 scindeaz lanurile polipeptidice la nivelul secvenelor cu @et, pe care o transform n homoserin. Fragmentele rezultate sunt heterogene ca mrime, n funcie de frecvena metioninei. Polipeptidele rezultate prin clivare enzimatic, c't i prin cianoliz, se separ prin tehnici cromatografice. -enaturarea moleculei de imunoglobulin prin reducerea legturilor 3#3. Agenii reductori 6mercaptoetanolul, mercaptoetanolamina, ditiotreitolul7 au o grupare 3O liber i reduc legturile 3#3 intercatenare i intracatenare. O8 A $O5 A $O5 A 3O 6@ercaptoetanolul7 "egturile intercatenare 6O#O sau O#"7 sunt reduse mai uor, iar cele intracatenare, care stabilizeaz buclele domeniilor moleculei de imunoglobulin, sunt disociate mai greu.

<I

0educerea legturilor 3#3 este reversibil. -up ndeprtarea agentului denaturant, renaturarea este rapid i complet. -in acest motiv, agenii denaturani se ncorporeaz n sistemul supus denaturrii. -enaturarea se poate stabiliza prin diferite metode chimice. -"#%' le !ole%"le de !"#o$lo,"l # (n ansamblul efectorilor sistemului imunitar, moleculele de imunoglo#bulin ndeplinesc dou categorii de funcii! # funcii de specificitate # funcii grupate sub denumirea de activiti biologice efectoare 3pecificitatea imunoglobulinei fa de un antigen este e&primat prin capacitatea de recunoatere fin a epitopului complementar al antigenului i de combinare cu acesta. 3pecificitatea moleculei de imunogobulin este conferit de situsul su de combinare. @area diversitate a moleculelor de anticorpi, asigur o diversitate uria a situsurilor de combinare, de ordinul a 19D A 19J specificiti de legare. 3pecificitatea de legare este dat de structura spaial a situsului de combinare cu antigenul, conferit de resturile de aminoacizi ale regiunilor hipervariabile ale catenelor O i ". Aminoacizii care formeaz situsul de combinare al moleculei de imunoglobulin, prin plierea regiunilor hipervariabile, delimiteaz o cavitate molecular ce difer ca form i mrime. $avitatea prezint substructuri 6proeminene i depresiuni7, pe care le formeaz secvenele hipervariabile, n timp ce restul regiunilor variabile ale celor dou catene confer structura tridimensional a cavitii moleculare. Potrivirea spaial dintre situsul de combinare al moleculei de anticorp i epitopul specific, din punctul de vedere al configuraiei spaiale, este perfect. 2ventualele imperfeciuni geometrice pot fi ocupate de moleculele de ap. Potrivirea perfect a celor dou uniti combinante este sugerat de metafora )cheie#broasc*. -up combinarea cu antigenul, modificrile spaiale ale situsului de combinare a anticorpului sunt minime, nedectabile. 2pitopul antigenic are un rol important n potrivirea conformaional perfect cu situsul de combinare a anticorpului, deoarece corespunde unei regiuni moleculare cu factor de temperatur mai ridicat, ceea ce sugereaz o fle&ibilitate mai accentuat a secvenei moleculare respective. Fle&ibilitatea unui determinant antigenic i permite s se adapteze mai uor ntr#un situs de legare pree&istent al moleculei de anticorp, chiar dac epitopul nu se potrivete e&act geometriei situsului de combinare a anticorpului. -atorit fle&ibilitii epitopului, legarea antigenului cu anticorpul se aseamn cu ) nt'lnirea a doi nori* i nu cu aceea a )dou pietre*. Anticorpii specifici fa de secvenele peptidice mobile 6calde7 ale antigenului proteic, se leag cu afinitate mai mare de proteina nativ. Aceste rezultate sunt foarte importante din punct de vedere practic, pentru selectarea segmentelor peptidice n vederea obinerii vaccinurilor sintetice subunitare.

<D

-imensiunile situsului de combinare s#au dedus indirect, prin determinarea mrimii haptenei care blocheaz reacia de combinare a anticorpilor cu antigenul nativ! oligozaharidul format din /1. uniti monomerice ocup complet situsul de combinare al moleculei de anticorp. 8ligozaharidele mai mici inhib parial reacia specific de precipitare. Pentru anticorpii specifici fa de antigene proteice, tetrapeptidele au blocat cu ma&im eficien reacia de precipitare dintre anticorpi i antigenul nativ. Funciile biologice efectoare sunt amorsate de reacia antigen#anticorp. 1umrul funciilor biologice efectoare este mai mic i sunt dependente de regiunile constante ale moleculei de imunoglobulin. Fiecare domeniu al regiunii constante a moleculei de imunoglobulin ndeplinete anumite funcii! # legarea antigenului pe imunoglobulinele de suprafa care funcioneaz ca receptori pe limfocitele +, declaneaz proliferarea i diferenierea lor, iar legarea antigenului cu imunoglobulinele citotrope pentru mastocite, declaneaz degranularea acestor celuleN # dup cuplarea cu antigenul, moleculele de imunoglobulin e&pun fragmentul Fc, recunoscut ulterior de receptorii specifici pentru Fc de pe suprafaa monocitelor, macrofagelor, P@11. Astfel se stimuleaz procesul de fagocitoz a celulelor nonself tapetate cu imunoglobuline, denumit imunofagocito < # celulele L, prin intermediul receptorilor pentru Fc, interacioneaz cu celulele nonself tapetate cu Ig. i realizeaz liza de contact prin fenomenul de citoto%icitateN # interaciunea antigen#anticorp genereaz un semnal care se transmite regiunii Fc. Aceasta i modific configuraia spaial i e&pune un situs de recunoatere 6pentru Ig. situat ntre .lu <1D i "Es <557, de care se leag $1WN # regiunea balama este transductoare de semnale i are un rol important n fle&ibilitatea moleculei de imunoglobulin, permi'nd variaia unghiului dintre fragmentele Fab! ele trec reversibil de la forma ; la X. .eometria variabil a moleculei de imunoglobulin mrete eficiena de legare a antigenului, deoarece a%usteaz poziia celor dou situsuri de combinare ale anticorpului, n funcie de distana la care se gsesc determinanii antigenici pe suprafaa unui antigen particulat 6virus sau celul7N # regiunea balama a moleculelor de Ig. i Ig- este sensibil la aciunea enzimelor proteolitice, iar a moleculei de IgA este rezistent. $omponenta glucidic a imunoglobulinei ndeplinete urmtoarele funciiN # realizeaz i menine o conformaie a moleculei de imunoglobulin, esenial pentru secreieN # mrete solubilitatea moleculelor de imunoglobulinN # are rol de spaiator ntre domeniile unui lan i ntre catenele moleculeiN # particip la funciile citotrope ale moleculei de imunoglobulinN # are rol n legarea $1W, component a sistemului complement.

<J

Hete 'genitatea anti"' 2i#' @oleculele de imunoglobuline din plasma oricrui organism sunt foarte heterogene, at't datorit diversitii epitopilor fa de care s#au sintetizat A ceea ce induce variaii ale secvenelor hipervariabile ale moleculei, c't i datorit variaiilor secvenei de aminoacizi n regiunile constante ale moleculei. Oeterogenitatea anticorpilor este ordonat n clase, subclase, tipuri, alotipuri i idiotipuri, pe ba a variaiei secvenei de aminoaci i. Moleculele de imunoglobuline au caliti duble4 ele se comport nu numai ca molecule de recunoatere, care recunosc specific antigenul, dar la r6ndul lor sunt recunoscute ca antigene. Pentru sporirea gradului de imunogenitate, moleculele de imunoglobuline se asocia cu ad3uvantul (reund i se in3ectea la animale de e%perien. &ariaiile de structur chimic a imunoglobulinelor se comport ca determinani antigenici i induc sinte a anticorpilor anti1imunoglobulin. &ariaiile de ordin chimic ale imunoglobulinelor se evidenia prin metode imunochimice de precipitare ntre moleculele de imunoglobulin cu rol de antigen i anticorpii anti1imunoglobulin din serul imun. -in punctul de vedere al manifestrii imunopotenei determinanilor antigenici ai imunoglobulinelor, s#au definit trei nivele de heterogenitate! i otipic, alotipic i idiotipic. Hetero$e# tatea zot p % Oeterogenitatea izotipic 6i os = acelai7 definete variantele biochimice ale imunoglobulinelor, comune pentru toi indivizii unei specii. Gariantele biochimice se datoreaz variaiilor secvenei de aminoacizi n regiunea constant a catenei O. 2le se comport ca determinani antigenici dup in%ectarea n organismul altei specii. Pentru identificarea epitopilor izotipici ai moleculelor de imunoglobulin uman, acestea, n asociaie cu ad%uvantul Freund, se in%ecteaz la iepure. Fiecare individ al unei specii e&prim toate variantele antigenice izotipice caracteristice speciei. Gariantele antigenice i otipice ale imunoglobulinelor umane s#au identificat iniial, n regiunea constant a catenei 8. 2&ist C variante antigenice distincte ale catenelor O n regiunea constant, notate cu g, m, a, d, e, corespunztoare celor C clase de imunoglobuline! Ig., Ig@, IgA, Ig-, Ig2. 3erul imun fa de un determinant antigenic de clas nu d reacii ncruciate cu celelalte tipuri de determinani, deoarece catenele O ale diferitelor clase de imunoglobuline prezint diferene mari de ordin chimic ntre domeniile echivalente, care merg p'n la circa ?9M din totalul aminoacizilor. -eterminanii antigenici ai unei clase de imunoglobuline sunt comuni tuturor indivizilor unei specii i se evideniaz n serul imun heterolog, obinut prin imunizarea organismelor altei specii. -e e&emplu, un antiser fa de lanul uman , obinut pe iepure, va precipita numai anticorpii clasei Ig. din orice ser uman. ,lterior, determinanii antigenici s#au identificat i n regiunile constante ale catenelor ,. -eterminanii antigenici ai catenelor " determin tipurile de imunoglobuline. $atena " are dou variante antigenice, notate cu = i l, care se gsesc la toate cele C clase de imunoglobuline. $ele dou tipuri structurale de lanuri " 6B i l7 prezint deosebiri de secven a aminoacizilor n regiunea constant i nu au determinani antigenici comuni. -e aceea, nu dau reacii imune ncruciate. 3erul imun heterolog anti#molecule de imunoglobuline umane cu caten "B, obinut

:9

pe iepure, precipit toate moleculele de imunoglobuline umane care conin catena "B, indiferent de clas. 3erul imun anti#"B nu precipit moleculele de imunoglobuline care conin catena " l. 8 molecul de imunoglobulin are dou catene de tip B sau l. Formula general a diferitelor clase de imunoglobuline este g5B5 6sau g 5 l 57, m5B5 6m5 l 57, a5B5 6a5 l 57. $atenele " de tip B i l determin tipurile moleculare de imunoglobuline. "a om, raportul Ig BT l este IT<, iar la oarece este 1JT1, valori care probabil reflect raportul numeric al genelor codificatoare pentru cele dou tipuri de catene. Izotipurile catenelor O nu influeneaz funcia de specificitate a moleculelor de imunoglobuline! acelai antigen poate fi legat de oricare din cele C clase de imunoglobuline. Pe l'ng variantele antigenice menionate A clase i tipuri A s#au identificat diferene mai subtile ale moleculelor de Ig. i IgA, n ceea ce privete proprietile fizice, chimice i biologice, diferene care corespund subclaselor antigenice. Aceasta nseamn c, pe l'ng determinanii antigenici de clas, e&ist i alte variante antigenice ale regiunii constante ale catenei 8, corespunztoare subclaselor. 2le se noteaz cu litera clasei, urmat de o cifr! Ig.1, Ig.5, Ig.<, Ig.:, respectiv IgA1, IgA5. @oleculele de imunoglobuline ale subclaselor au n comun determinanii antigenici proprii fiecrei subclase, aduc'nd un nivel superior de heterogenitate a catenelor O. -iferenele secvenei de aminoacizi ai catenei O, ntre diferite subclase sunt mici! 5: de aminoacizi ntre Ig.1 i Ig.:. $ea mai important deosebire const n numrul legturilor 3#3 intercatenare. @oleculele diferitelor subclase sunt sintetizate de celule diferite. Var a#tele alot p %e -escoperirea alotipiei 6alos = altul7 a pornit de la urmtorul fapt de observaie! n serul pacienilor cu artrit cronic reumatoid se gsesc molecule de tip special, ncadrate n categoria factorilor reumatoizi 6F07. Factorii reumatoizi sunt molecule de auto#anticorpi, adic Ig@ anti# Ig.. Factorii reumatoizi se evideniaz in vitro, prin capacitatea lor de a determina aglutinarea eritrocitelor tapetate cu o doz subaglutinant de anticorpi specifici antieritrocitari 6Ig.7. .rubb 61JC?7 a observat c F0 seric, uneori, aglutineaz hematiile tapetate cu auto#anticorpi specifici 6care se sintetizeaz n anemia hemolitic autoimun7 ale unor pacieni, iar alteori, reacia de hemaglutinare nu se produce, testul evidenierii F0 in vitro fiind fals negativ. $oncluzia reaciei de hemaglutinare pe care, uneori, F0 din serul pacienilor de artrit reumatoid o produce asupra hematiilor tapetate cu o doz subaglutinant de anticorpi specifici, a fost urmtoarea! autoanticorpii de pe suprafaa eritrocitelor unor indivizi cu anemie hemolitic autoimun, posed determinani antigenici diferii, pe care F0 poate s#i recunoasc. Astfel s#a dedus c moleculele de imunoglobulin de la indivizi diferii, sunt diferite din punct de vedere antigenic. (n consecin, imunizarea unui individ cu imunoglobulinele provenite de la alt individ al aceleiai specii, determin sinteza anticorpilor fa de determinanii antigenici ai moleculelor imunoglobulinice ale donorului.

:1

Imunoglobulinele sunt aloantigene ineficiente dac sunt in%ectate ca proteine solubile n organismul uman. -e aceea, transfuziile de s'nge total, de plasm sau in%ectarea imunoglobulinelor solubile, de cele mai multe ori, nu induc sinteza anticorpilor anti#imunoglobuline ale donorului. @oleculele de imunoglobuline devin antigenice dup asocierea lor cu ad%uvantul Freund. 3emnificaia variantelor antigenice alotipice ale moleculelor de imunoglobuline este analog celei a antigenelor de grup sanguin. Fenomenul este general, adic i alte molecule provenite de la un organism pot fi imunogene pentru alte organisme ale aceleiai specii, la care se comport ca aloantigene. Gariantele alotipice ale imunoglobulinelor se detecteaz n reacia de precipitare cu aloantiseruri obinute pe organisme ale aceleiai specii, dar cu alotip diferit de acela al organismului donor al antigenului imunoglobulinic. Gariantele moleculare alotipice sunt consecina e&istenei genelor alele perechi 6aa7, o caracteristic general a organismelor diploide. Prin mutaii succesive, n acelai locus, apar mai multe alele care formeaz o serie polialelic # a1, a5, a< YY an. .enele alele ocup acelai locus pe cromosomii omologi, ca i gena de tip slbatic a. Fiecare individ va avea o combinaie de gene alele! aa1, aa5 Y.. aan sau a1a5, a1a< YY a1an, cu variante antigenice distincte. Alotipurile imunoglobulinelor sunt rezultatul variaiilor secvenei aminoacizilor n regiunile constante ale catenelor O i ", ceea ce le confer un grad superior de heterogenitate, consecin a alelelor codominante la acelai locus. Pentru moleculele imunoglobulinice umane s#au descris trei categorii de marBeri alotipici! # factorii .m 6gama marBer7, numerotai de la 1 la 5C, pe catena O a subclaselor de Ig.. -e e&emplu, marBerul .1m6a7 pe moleculele de Ig.1 are secvena Asp#.lu#"eu#;hr#"Es, iar moleculele altor indivizi au secvena .lu#.lu#@et#;hr#"Es, adic doi aminoacizi diferii. Pentru Ig. < sau descris 1: aleleN # factorii A5m617 i A5m657, identificai pe catenele O ale subclasei IgA5N # factorii Lm6Inv7, pe catenele "B, n numr de treiN # dou variante alelice pentru Ig2. Foarte rar, determinanii antigenici alotipici sunt localizai n domeniile variabile ale moleculei. $a i n alte sisteme alelice, indivizii pot fi homozigoi sau heterozigoi pentru genele care codific marBerii. .enele se e&prim codominant i se transmit n descenden dup mecanismul mendelian. -e e&emplu, alotipurile b:bC pe catenele " ale imunoglobulinelor de iepure se e&prim astfel! un organism homozigot b:b: sau bCbC e&prim alotipul b:, respectiv bC. -ar genotipul b:bC rezultat n descendena lor e&prim marBerul b: pe o fracie a moleculelor i marBerul b C, pe restul moleculelor de imunoglobuline. Var a#tele d ot p %e Idiotipul 6idios = individual7 este reprezentat de o populaie omogen de molecule de anticorpi, sintetizate de descendenii unei clone celulare, care recunosc i se combin cu un singur determinant antigenic 6epitop7. 3pecificitatea idiotipic a unei populaii de anticorpi s#a dedus pe cale e&perimental!

:5

# antigenul 6celule de ". t!phi7 s#a in%ectat la organismele A i + 6iepuri7, identice din punct de vedere genetic. 3e sintetizeaz anticorpi aglutinani anti ". t!phiN # anticorpii aglutinani 16produi de organismul A7 s#au in%ectat la organismul $ 6iepure din aceiai linie genetic7. 3e sintetizeaz anticorpi anti#anticorpi 1, evideniai n reacia de precipitare. 3urprinztor, anticorpii anti#anticorpi 1 nu precipit anticorpii 5, dei anticorpii 1 i anticorpii 5 au aceiai specificitate fa de antigenele ". t!phi, iar organismele A, +, $ aparin aceluiai alotip. $oncluzia este c anticorpii 1 i anticorpii 5, dei au aceiai specificitate fa de antigenul de ". t!phi, la r'ndul lor, au determinani antigenici proprii. -e aceea, anticorpii anti#anticorpi 1 nu precipit anticorpii 5, sintetizai de un alt organism. @oleculele de anticorpi cu aceiai specificitate de combinare fa de un antigen, sintetizate de organisme identice genetic, au o individualitate antigenic distinct, denumit specificitate idiotipic. Oeterogenitatea idiotipic este consecina determinanilor idiotipici, localizai n regiunile hipervariabile ale catenelor O i ". 3pecificitatea idiotipic a moleculelor de anticorpi sintetizai de o clon de celule este conferit de unicitatea secvenei de aminoacizi de la nivelul secvenelor hipervariabile ce particip la formarea situsurilor de combinare, care determin epitopi cu caracter strict individual denumii idiotopi. ,nii idiotopi sunt localizai chiar n interiorul situsului de combinare sau n imediata sa vecintate. -ovada o constituie faptul c legarea epitopului specific de situsul de combinare a anticorpului, blocheaz ntr#o msur mai mare sau mai mic, legarea anticorpilor anti# idiotipici. (ig. 70. Ilustrarea diagramatic a heterogenitii anticorpilor. $olecia de idiotopi ai situsului de combinare a unei molecule de imunoglobuline formeaz idiotipul ei. Idiotipul este rezultatul configuraiei spaiale unice a regiunilor hipervariabile ale catenelor O i ", conferit de o secven unic a aminoacizilor. 0epertoriul idiotipurilor este de acelai ordin de mrime cu acela al specificitii situsurilor de com#binare. Pentru situsul de combinare al moleculei de imunoglobulin s#a pro#pus denumirea de paratop. "a alctuirea idiotipului particip ambele catene. $ele dou catene disociate nu pot s lege anti# idiotipul sau l leag cu o eficien foarte sczut. IgG Imunoglobulinele reprezint circa 59M din totalul proteinelor serice. Ig. este dominant cantitativ n serul uman normal, reprezent'nd I9#ICM din cantitatea total de imunoglobuline. $oncentraia sa medie n ser este de 15C9 mgT199 ml, cu variaii individuale normale ntre D99 A 5999 mgT199 ml. Ig. este cea mai heterogen dintre imunoglobuline n ceea ce privete sarcina electric. -in aceast cauz, n c'mpul electroforetic se distribuie n fraciile g 1 i g 5 ale serului. -in punct de vedere structural, Ig. este un monomer cu greutatea molecular de 1C9 B- i cu constanta de sedimentare I3. $omponenta glucidic reprezint circa <M din greutatea molecular a Ig..

:<

(ig. 7>. @odelul structural al Ig.1. -omeniile variabile ale celor dou catene 6GO i G"7 formeaz situsul de legare a antigenului. $ercurile negre indic poziia gruprilor glucidice. O0 = regiunea balama. g. se sintetizeaz tardiv n rspunsul imun pri#mar, dar este imunoglobulina predominant a rspunsului imun secundar i se distribuie uniform n compartimentele intra# i e&travasculare. Ig. se prezint sub forma a : variante antigenice, conferite de compoziia n aminoacizi a catenei g! Ig.1, Ig.5, Ig.<, Ig.:. Proporia normal a celor : subclase este de ??M pentru Ig.1, 5<M pentru Ig.5, IM pentru Ig.< i :M pentru Ig.:. Ig.< este mai grea, datorit catenei g < i are o regiune balama e&tins, codificat de c'iva e&oni, iar Ig.: are o regiune balama scurt i rigid, ceea ce produce o nepotrivire steric pentru fi&area complementului. Ig. este singura imunoglobulin care traverseaz placenta, asigur'nd astfel protecia ftului i nou#nscutului n primele luni de via. Pe membrana sinciio#trofoblastului se gsesc receptori pentru regiunea Fc a Ig., care mediaz transferul placentar al moleculei. In vivo, funcia esenial a Ig. este neutralizarea to&inelor bacteriene. Ig. activeaz sistemul complement i produce liza celulelor bacteriene i a particulelor virale, dar are i rol opsonizant. In vitro, Ig. particip la reaciile de aglutinare i precipitare. ;ermenul de n%umtire al Ig. este de 51 de zile. (n toate serurile imune, o proporie de C#1CM din moleculele de Ig., pare s conste din molecule asimetrice, cu un singur situs funcional de legare 6molecule monovalente7. Aceste molecule nu particip la reaciile secundare in vitro 6aglutinare, precipitare7. $ellalt situs este blocat stereochimic de un polizaharid bogat n manoz, legat de primul domeniu constant 6$O17. IgA ,nitatea de baz a structurii IgA este monomerul, alctuit din dou catene grele 6O7 cu specificitate de clas 6izotipic7 a i dou catene uoare 6"7 de tip l sau B. ,nitatea monomeric 6l75 sau 6a#B75 are o tendin constant de a produce structuri moleculare polimerice, formate din 5, <, : sau C monomeri 6193, 1<3, 1C3, respectiv 1I#1D37, care n ser se gsesc n concentraii descresc'nde. "a microscopul electronic, molecula de IgA monomer are aspectul literei X. $omple&ele dimerice au forma a dou litere X, aezate una n prelungirea celeilalte. $ele dou fragmente Fc formeaz un lan lung i rigid. IgA se gsete at't n plasma sanguin, c't i n secreiile e&terne! salivar, lacrimal, gastric vaginal, intestinal, biliar, pancreatic, lactat. Pe baza unor diferene de structur molecular 6numrul punilor 3#3, secvena aminoacizilor n regiunea balama7 au fost descrise dou subclase de IgA! IgA 1 i IgA5. 2le difer prin 55 de

::

aminoacizi, n primul r'nd datorit deleiei a 1< aminoacizi din regiunea balama a IgA 5, dar care se gsesc la IgA1. Aceast diferen structural confer rezisten moleculei de IgA 5 la aciunea unor proteaze bacteriene, care cliveaz specific IgA1 n regiunea balama. (n funcie de localizare se disting Ig* seric i Ig* din secreii. (ig. 7/. "tructura IgA1 uman. 3unt indicate poziiile punilor disulfurice inter# i intracatenare, precum i poziia ipotetic a catenelor polizaharidice. 8 punte disulfuric suplimentar stabilizeaz domeniul $ a 5 i o alta leag lanul H n polimerul de IgA.

Ig* seric este reprezentat n primul r'nd de IgA 1 6J9M7 i este monomer n proporie de D9M. $atenele " i O sunt reunite prin dou puni 3#3. 3ubclasa IgA 5 reprezint numai 19M din IgA seric. Pe baza marBerilor alotipici ai catenei O, IgA 5 se subdivide n dou variante alotipice! A 5m1 6la populaiile caucaziene7 i A5m5 6la populaiile mongoloide#negroide7 Funciile IgA seric nu sunt bine precizate, datorit dificultilor de purificare. 0olul su cel mai important ar fi acela de a ndeprta cantitile mici de antigene, provenite din alimente sau antigenele solubile ale microorganismelor, absorbite n circulaia general. 2liminarea timpurie mpiedic accesul acestor antigene la celulele sistemului imunitar i stopeaz declanarea unui rspuns imun de amploare, care ar devia forele de aprare a organismului, de la funcia sa esenial, aceea a proteciei antiinfecioase. In vivo, IgA nu activeaz complementul pe calea clasic i nu produce liza antigenelor celulare, dar moleculele agregate in vitro de IgA1 i IgA5 activeaz calea altern. Funcia opsonizant a IgA este controversat. IgA nu produce reacii de precipitare cu antigenele moleculare. Ig* din secreii6sau IgA secretor7 se gsete n secreia mucoaselor 6digestiv, respiratorie, urinar7, n secreia biliar i pancreatic. -e aici deriv i denumirea sa improprie, Ig* secretoare ?sIg*7, dei mai corect ar fi denumirea de )IgA din secreii*. (ig.7@."tuctura sIgA1 uman. Piesa secretoare, probabil este rsucit n %urul dimerului de IgA i se leag prin puni disulfurice de domeniul $ a 5 al fiecrui monomer. Piesa H este amplasat la %onciunea celor doi monomeri. Puntea disulfuric ce leag domeniul $ a 5 de regiunea balama nu este figurat 6dup 0oitt, 1JD:7.

sIgA se gsete n special n form dimeric 6D9M7, iar restul ca monomer sau alt tip de polimer. $ompartimentul seric al IgA nu influeneaz semnificativ concentraia IgA din secreii i invers, IgA din secreii nu este absorbit n circulaie. sIgA se sintetizeaz local, n structurile limfoide asociate mucoaselor! n mucoasa tractului respirator, dar mai ales cea nazal, a tractului digestiv 6 n special n mucoasa antrului piloric i a intestinului subire7, n lamina propria a acinilor secretori ai glandelor salivare i mamare, n glandele lacrimale. In toate aceste structuri se gsesc numeroase plasmocite i precursorii lor. Imunizarea oral stimuleaz n primul r'nd, sinteza IgA. Str"%t"ra !ole%"le de )I$A

:C

@olecula de sIgA este alctuit din doi monomeri de IgA, legai prin catena A 6%oining7 i o caten suplimentar, denumit component secretoare 6$37. Formula general a sIgA dimer este 6IgA75 H $3 i are greutatea molecular de <DC B- i constanta de sedimentare 193. $omple&ul molecular 6IgA75 H $3 este foarte rezistent la proteoliz datorit conformaiei speciale dob'ndit dup legarea catenei H i a catenei $3, precum i datorit capacitii sale de a se lega de mucinele din secreii. ;atena A este un glicopeptid de 1C#1? B- 61<? aminoacizi7 i se sintetizeaz n plasmocitele productoare de IgA. 2ste bogat n acizi glutamic i aspartic i conine un oligozaharid legat de Asp din poziia :<. $onine I#D resturi de cistein. "anul H se leag prin puni 3#3 de regiunea Fc a Ig@ polimeric i de sIgA. Prezena catenei H s#a stabilit la imunoglobulinele polimerice de la toate clasele de vertebrate, iar A01m pentru catena H s#a detectat la numeroase nevertebrate. In comple&ele moleculare cu un grad superior de polimerizare, numai dou molecule de IgA sau Ig@ se leag prin intermediul catenei H, celelalte fiind legate una de alta prin puni 3#3. Polimerizarea moleculelor de IgA n citoplasma celulei productoare este esenial pentru transportul lor la suprafaa mucoasei. "anul H se gsete n citoplasma limfocitelor +, n cursul diferenierii spre plasmocit. Aproape toate limfocitele din structurile limfoide asociate mucoaselor 6digestiv, respiratorie7, din esutul interstiial mamar, salivar i lacrimal, e&prim lanul H intracelular. $atena H este sintetizat i de unele celule care produc Ig. sau Ig- din aceste structuri, dar este degradat n citoplasm. Plasmocitele din mduva osoas care produc IgA sau Ig. sunt negative pentru lanul H. ;omponenta secretoare a sIgA este o glicoprotein din categoria betaglobulinelor, ne nrudit cu imunoglobulinele, bogat n glucide 6D,IM7. 3ecvena catenei cuprinde IC9 de aminoacizi, distribuii n trei domenii! domeniul citoplasmatic 619< aminoacizi7, transmembranar 65< aminoacizi7 i e&tracelular 6circa ?5C aminoacizi7, la care se adaug o secven semnal de 1D aminoacizi, care este clivat dup sintez. $omponenta secretoare se sintetizeaz n celulele epiteliale ale mucoaselor. -up prelucrarea n comple&ul .olgi 6unde are loc glicozilarea7, $3 migreaz pentru a fi integrat n plasmalema bazal i lateral a celulelor. 3inteza $3 este independent de IgA. "a noul nscut, $3 se sintetizeaz n sptm'na a D#a 6 nainte de apariia plasmocitelor7. 2ste prezent chiar la persoanele n ale cror secreii IgA lipsete. Funciile componentei secretoare. $omponenta secretoare are rol de receptor pentru moleculele dimere i polimere de IgA i Ig@, care au legat lanul H 6receptor poli#Ig7. "egarea lanului H pare s determine o schimbare conformaional a acestor molecule. @oleculele de IgA secretate ca monomeri, ca i polimerii care nu au legat lanul H nu se pot comple&a cu $3 i trec n circulaie. IgA dimeric trebuie s a%ung n contact cu celulele epiteliale, pentru a fi transportat la suprafaa mucoasei. ;eoretic, IgA polimeric poate veni n contact cu celulele epiteliale care au lanul $3 inserat n membran, pe una din urmtoarele dou ci! # difuzia liber prin esutul con%unctiv adiacent plasmocitelor din lamina propria a mucoasei, unde are loc sintezaN # translocaia din circulaie la nivelul capilarelor mucoasei.

:?

$omponenta secretoare este inserat n membrana laterobazal a celulei epiteliale. -in aceast poziie, prin domeniul su e&tracelular, $3 leag dimerii de IgA care conin lanul H, printr#un mecanism necunoscut. ,na din ipotezele privind mecanismul legrii presupune c $3 s#ar nfura n %urul dimerului de IgA, e&tinz'ndu#se de la o regiune balama la cealalt, mrind astfel rezistena dimerului la proteoliz. $omple&ul format este endocitat n vezicule de pinocitoz i este eliberat pe faa luminal a celulelor epiteliale, n secreia lor e&tern. ,n astfel de transport are loc n celulele epiteliale ale mucoasei tubului digestiv, ale mucoasei bronice, la nivelul epiteliului vezicii biliare i al tractului biliar, al acinilor glandelor mamare, al acinilor pancreatici i salivari. $3 leag chiar comple&ele imune care conin IgA polimeric, formate n lamina propria a mucoasei. Acestea sunt transferate la suprafaa luminal a epiteliului prin acelai mecanism ca i IgA polimeric. Anihilarea pe aceast cale a antigenelor este foarte important n tractul intestinal, unde componentele antigenice alimentare i ale microbiotei pot dob'ndi acces la lamina propria. (ig.7.. 0eprezentarea schematic a diferitelor trepte care se succed n generarea sIg* i IgM umane, pe calea transportului epitelial mediat de receptorul de poli#Ig 6pIg07. IgA polimeric care conine lanul H 6IgA#H7 i Ig@ pentameric 6Ig@#H7 sunt secretate de plasmocitele locale. $omponenta secretorie 6$37 este sintetizat n reticulul endoplasmic granular 602.7 al celulelor epiteliale i se matureaz prin glicozilare n comple&ul .olgi. In reeaua transgolgian 6;.7, este fosforilat i este e&pus ca receptor de poli# Ig, pe membrana plasmatic bazolateral. 2ndocitoza ligandului comple&at cu receptorul de poli#Ig, ca i a receptorului poli#Ig liber, este urmat de transcitoza la endosomii apicali i n final are loc clivarea receptorului poli# Ig i eliberarea moleculei Ig n secreii 6dup +randtzaeg i col., 1JJD7.

0olul $3 n transportul IgA la suprafaa mucoaselor este argumentat de faptul c bolnavii cu deficit al sintezei sale, nu au IgA n secreii, dei nivelul IgA seric este normal. ;ransportul transepitelial al sIgA este asociat cu o pierdere continu de receptori, care, spre deosebire de ali receptori, dup e&ocitoz la suprafaa celulei epiteliale nu sunt recirculai i nici nu se refac prin sintez de novo. -"#%' le e+e%toare ale )I$A (ig. 7B. 0eprezentarea schematic a fenomenului de )e%cludere imun*, pe care#l produc anticorpii din secreia mucoasei intestinale. Inainte de imunizare, o mic parte a antigenului proteic ingerat, scap digestiei intraluminale, este preluat de enterocit i transportat n spaiile intercelulare. -up imunizare, anticorpii din secreia intestinal, leag antigenul form'nd comple&e Ag#Ac. "egarea antigenului la suprafaa celulelor epiteliale este blocat. Antigenele comple&ate cu anticorpii n nveliul mucos, pot fi degradate de enzimele pancreatice adsorbite la supra#faa intestinului. Astfel, scade cantitatea de antigen disponibil pentru absorbia de ctre celulele intestinale. 3tudiul funciilor efectoare ale IgA este ngreunat de dificultile obinerii sIgA n stare pur. Funcia biologic esenial a sIgA este aprarea organismului fa de antigenele moleculare care ar putea fi nglobate 6prin endocitoz7 la nivelul mucoaselor 6 n special cea digestiv7 i de a

:I

asigura protecia fa de agenii patogeni care tind s ptrund de la e&terior pe calea mucoaselor digestiv, respiratorie, genito#urinar. sIgA formeaz comple&e cu urmtoarele tipuri de antigeneN # cu antigenele mole#culare adsorbite la suprafaa mucoaselor, av'nd rol n )e&cluderea imun* a acestora. 2&cluderea imun este o funcie ma%or a sIgA, ce const n limitarea penetrrii materialelor antigenice prin epiteliul mu#coasei. -eoarece IgA este ine#ficient n activarea comple# mentului i nici nu stimuleaz fagocitoza, e&cluderea imun este un mecanism, n primul r'nd, neinflamator. # cu antigenele celulare bacteriene, realiz'nd imobi#lizarea i aglutinarea acestora. Astfel, este prevenit ptrunderea lor n organismN # blocheaz legarea virusurilor de receptorii celulelor epiteliului respirator i ale mucoasei digestiveN # neutralizeaz efectul to&inelor 6botulinic, tetanic, holeric7N # este imunoglobulina predominant n saliv i constituie principalul mecanism de aprare n cavitatea oral, prin aciune sinergic cu ali factori antibacterieni 6lizozim, lactoferin, pero&idaz salivar i mucine7. Prezena sIgA n colostru i n lichidul amniotic sugereaz rolul su foarte important n conferirea imunitii pasive a noului nscut, at't la om c't i la animale. 0ezistena noilor nscui, hrnii natural este net superioar comparativ cu a celor hrnii artificial. $oncentraia sIgA n colostrul uman este foarte mare n primele 5:#:D de ore de lactaie 6?#DD mgTml7 i diminu brusc datorit diluiei ntr#un volum secretor mult sporit. $oncentraia foarte mare a sIgA n colostru se datoreaz eliberrii unor cantiti mari ntr#un volum mic de secreie. .landa mamar are un numr relativ mic de celule productoare de anticorpi, deoarece nu este stimulat antigenic. 8riginea sIgA n glanda mamar are dou surse! # o sintez local foarte intens n plasmocitele din esutul con%unctiv subiacent epiteliului acinilor glandulariN # transportul IgA din s'nge. sIgA din secreia mamar, la nivelul mucoasei digestive a noului nscut, nu este transportat n circulaia acestuia dec't ntr#o mic msur, n primele ore de via 6la om7 sau zeci de ore la alte mamifere. "a unele mamifere 6ovine, bovine7, sIgA din secreia lactat matern este transportat foarte activ n circulaia noului nscut. 2fectul protector antiinfecios al sIgA de origine matern se e&ercit prin faptul c moleculele rm'n legate de celulele epiteliale ale mucoasei digestive i blocheaz astfel aderena microorganismelor i a virusurilor. @oleculele de IgA nu sunt transferate prin placent. 3'ngele noului nscut nu conine IgA. 1ivelul seric al IgA caracteristic adultului, este atins la J#19 luni. (n condiii naturale, n tractul intestinal se sintetizeaz IgA fa de multe antigene e&ogene. IgA din secreia intestinal poate s treac intact prin tubul digestiv i s#i pstreze activitatea.

:D

Persoanele cu deficit congenital al IgA 61TC99#I997 au sensibilitate mare la infeciile mucoaselor, dei celulele epiteliale sintetizeaz $3. Aceleai persoane sunt predispuse la maladii autoimune, deoarece, n absena sIgA, mucoasa digestiv este traversat de o mare diversitate de antigene, care induc sinteza unor anticorpi ce interacioneaz nu numai cu antigenul e&ogen inductor, ci i cu componente moleculare proprii. In vivo, sIgA nu activeaz cascada complementului, dar moleculele agregate artificial, in vitro, activeaz calea altern. (ig. 92."tructura Ig@ pentameric. $atenele grele de Ig@ uman au C domenii. @onomerii sunt legai prin puni disulfurice ntre domeniile $m< i $m:. 3unt reprezentate catenele oligozaharidice, ca i poziia ipotetic a catenei H 6dup 0oitt, 1JD:7. IgM $aracteristica struc#tural a Ig@ este prezena unui lan greu al izotipului m, alctuit din CI? aminoacizi. Ig@ conine C grupri prostetice oligozaharidice, care constituie 15M din greutatea molecular total. 3ecvena de aminoacizi a lanului O cu specificitate antigenic m este organizat n C domenii! unul variabil i : constante 6$m 1, 19C amino#acizi A $m:, 111 aminoacizi7, codificai de e&oni diferii. "ipsete regiunea balama, fiind nlocuit cu domeniul $O5, sensibil la aciunea proteazelor. Ig@ se gsete sub dou forme! # monomer, legat de membrane # polimer, liber n ser. Ig@ legat de membrana unor limfocite, are n plus o secven $88O#terminal, hidrofob, format din :1 de aminoacizi, care ntrerupe transportul lanurilor m prin membran i ancoreaz molecula n structura sa. Ig@ este molecula ma%or cu rol de receptor de antigen, pe suprafaa limfocitelor +. IgM seric are structura unui pentamer 6"5 m 57, cu greutatea molecular de JC9 B-. Fiecare pentamer conine un lan polipeptidic H, bogat n cistein, foarte acid, cu rol n polimerizarea monomerilor. $ele C uniti monomere sunt aezate radiar, cu regiunile Fc orientate spre centru, unite prin puni 3#3, formate ntre domeniile $O < i prin lanul H. +raele 6Fab719 sunt orientate spre e&terior, chiar n unghi drept fa de discul 6Fc7C "a microscopul electronic, pentamerul Ig@ are aspect de stea cu C brae, dispuse n %urul discului central. Fiecare bra are forma literei X. +raele pot lua poziii diferite, ceea ce denot e&istena unei zone mobile pentru fiecare subunitate. Fiecare unitate monomeric este mobil la nivelul articulaiei n discul central, astfel c dup legarea cu epitopii de pe o suprafa membranar, Ig@ poate adopta configuraia asemntoare unui crab, iar regiunile multiple Fc devin accesibile lui $1W. Ig@ poate s e&iste n form he&americ, de 19#59 de ori mai eficient n liza mediat de activarea $, dec't n varianta pentameric.

:J

Galena pentamerului este teoretic 19, dar aceasta s#a determinat numai n reacia cu haptenele mici. In reacia cu antigenele comple&e, valena scade la C sau chiar mai puin, datorit probabil insuficientei fle&ibiliti a moleculei. Galena Ig@ este dependent de natura ligandului. (unciile IgM. Ig@ este receptorul ma%or de antigen pe suprafaa limfocitelor + mature. Ig@ seric are funcii aglutinante, fiind de 1999 de ori mai eficient dec't Ig. n legarea antigenelor particulate. Ig@ reprezint C#19M din cantitatea total de anticorpi serici, cu valori normale ntre D:#1I9 mg la 199 ml de s'nge. Ig@ activeaz complementul6$7, produc'nd liza antigenului celular i ingestia rapid a comple&elor solubile. -e aceea, Ig@ este foarte eficient n reacia de aprare fa de bacteriemii i fa de to&ine6difteric, tetanic, botulinic, to&ina din veninul de arpe7. Ig@ este principala opsonin imunoglobulinic a serului. *finitatea Ig@ 6care semnific fora de legare dintre un epitop i un paratop7 poate s fie slab, dar aviditatea global 6energia medie a interaciunii Ig@ cu epitopii multipli ai unui antigen7 este foarte mare fa de antigenele comple&e i fa de celule, ambele av'nd epitopi repetitivi. $ea mai mare parte a anticorpilor Ig@ se sintetizeaz n stadiul timpuriu al rspunsului imun primar fa de un antigen. Ig@ se sintetizeaz ca rezultat al activrii policlonale, nespecifice, a limfocitelor +, produs de virusul 2pstein#+arr la om sau de "P3 la oarece. Anticorpii sintetizai dup stimularea policlonal a limfocitelor, leag o varietate de antigene! virusuri, bacterii, protozoare, parazii i fungi. (n plasm se gsesc anticorpi )naturali* sau )spontani* a cror sintez are loc n afara stimulrilor antigenice. ;ermenul )natural* se folosete pentru a distinge aceste imunoglobuline, de cele care se sintetizeaz dup imunizare. @a%oritatea anticorpilor naturali aparin izotipului Ig@. 2i reacioneaz nu numai cu o diversitate de antigene nonself, ci i cu molecule self! cu hormoni 6insulina, tiroglobulina7, cu constituieni celulari 6A-1, miozina, actina, tubulina etc.7, cu fragmentul Fc al Ig. autolog 6F0 = factorul reumatoid7. Ig@ reprezint forma sub care se gsesc anticorpii naturali ai grupelor sanguine 6aglutininele a i b7, precum i anticorpii fa de antigenul somatic 8 6endoto&ina7 al bacteriilor .ram negative sau cei detectabili prin reacia Fassermann, dup infecia cu ;. pallidum. Ig@ trece greu sau nu trece n lichidele interstiiale i nici prin bariera placentar. 1ivelul seric al Ig@ de la adult este atins la 19 luni. Ig@ este izotipul cel mai bine conservat n evoluie, fapt evideniat prin relativa constan a secvenei de aminoacizi. (ig. 97. "tructura Ig2 uman. @olecula este format din : domenii constante i un domeniu variabil. 2ste indicat poziia punilor disulfurice inter# i intracatenare, precum i poziia catenelor oligozaharidice. $liva%ul enzimatic al Ig2 poate elibera fragmentele F6ab>75, fragmentele Fc i Fc>. IgE

C9

-enumirea de Ig2 vine de la )eritem*, deoarece aceast clas de anticorpi este unul din mediatorii reaciilor vasculare eritematoase. Ig2 a fost izolat i caracterizat de IshizaBa 61J??7, dintr#un mielom productor al acestui izotip. @olecula de Ig2 are dou catene " identice cu catenele " ale celorlalte clase de imuno# globuline i dou catene grele O cu specificitate antigenic e, fiecare cu c'te CC9 de aminoacizi, distribuii n C domenii! : domenii n regiunea constant i unul n regiunea variabil. $atenele O sunt reunite prin dou legturi 3#3, localizate n domeniul $5. $oninutul glucidic este de p'n la 11,IM. Ig2 este sintetizat n celule din mucoasa respiratorie, gastrointestinal i n ganglionii regionali. (n s'nge, Ig2 se gsete n concentraii foarte mici 65C9 ngTml7. 1ivelul su caracteristic adultului este atins la 19#1C ani. Ig2 nu strbate bariera placentar. $oncentraia seric a Ig2 crete n parazitoze i n strile alergice. In cazurile de astm alergic, concentraia Ig2 a%unge la 1CC9 ngTml. Ig2 este o molecul citotrop! interacioneaz in vivo prin regiunea Fc, cu receptorii specifici de pe suprafaa mastocitelor i bazofilelor, dar i in vitro cu celulele aceleiai specii sau ale speciilor nrudite. Inclzirea serului la C?o anuleaz activitatea citotrop a Ig2. )olul fi iologic principal al Ig2 pare a fi acela de protecie a situsurilor anatomice e&puse traumatismelor i ptrunderii agenilor patogeni. Ig2 recruteaz factorii plasmatici i celulele efectoare, stimul'nd reacia inflamatorie acut. Ig2 ar fi unul din efectorii mecanismelor de ndeprtare a paraziilor intestinali. Aciunea sa s# ar e&ercita prin efectul chimiotactic pozitiv fa de eozinofile, n focarul de parazitoz i prin stimularea contraciilor rapide i prelungite a musculaturii netede. Ig2 mrete permeabilitatea vascular i permite anticorpilor serici i celulelor eozinofile s penetreze mucoasa i s participe la reaciile de aprare. 2ozinofilele elibereaz coninutul enzimatic al lizosomilor i produc liza parazitului. Ig2 este declanatoare a reaciilor de hipersensibilitate imediat de tip anafilactic. In reaciile de hipersensibilitate imediat, mastocitele i bazofilele care leag Ig2 se activeaz. Activarea ar fi rezultatul formrii unor puni antigenice ntre moleculele de Ig2 adiacente, care leag un antigen6alergen7 multivalent. @oleculele de Ig2 conectate prin puntea antigenic genereaz semnalul activrii celulare, a crei consecin este eliberarea moleculelor vasoactive 6histamina, serotonina, 2$F, 303A7. (ig.99. "tructura Ig- uman. 3chema ilustreaz poziia punilor disulfurice inter# i intracatenare, precum i poziia ipotetic a catenelor oligozaharidice.

C1

IgD Ig- s#a descoperit n 1J?C ca o protein de mielom, cu proprieti speciale, care nu are specificitate antigenic a Ig., IgA sau Ig@, dar precipit cu anticorpii specifici fa de catenele " ale imunoglobulinelor i este alctuit din cele : catene. ,lterior Ig- s#a identificat n serul uman normal, dar i la toate speciile de mamifere i psri. Ig- se gsete n s'nge, n cantitate foarte mic 69,5M din cantitatea total de imunoglobuline7. @olecula de Ig- este monomer. "anurile " sunt n special de tip l, iar catenele O au specificitate antigenic d. "anul O are : domenii! < n regiunea constant i unul n regiunea variabil. 0egiunea balama este foarte e&tins i este sensibil la aciunea proteazelor. Funcii. Aproape toat cantitatea de Ig- are rol de receptor de antigen, mpreun cu Ig@, pe suprafaa ma%oritii limfocitelor + mature. @oleculele membranare au un domeniu transmembranar i o scurt e&tensie citoplasmatic, analog formei membranare a catenei m. $ele dou izotipuri membranare 6d i m7 au acelai tip de caten ", iar situsul lor de legare este identic, adic recunosc acelai epitop. 1u e&ist molecule hibride mTd, deoarece cele dou catene O nu se mperecheaz. 0aportul dintre cele dou izotipuri de pe suprafaa limfocitelor + este variabil i semnificaia funcional a acestui raport nu se cunoate. Ig- scade pe suprafaa limfocitelor + de memorie i dispare complet pe msur ce celulele se difereniaz spre plasmocit. Ig- seric are o concentraie de <#:9 mgTml, fiind produs de un numr mic de plasmocite splenice i tonsilare. 3inteza ntr#un numr mic de celule i timpul de n%umtire scurt 6de 5,D zile7 e&plic nivelul seric sczut al Ig-. 1umrul mic de plasmocite productoare de Ig- e&plic raritatea mieloamelor productoare de Ig-. -up stimularea antigenic repetat nu se sintetizeaz anticorpi ai izotipului Ig-. Ig- nu are funcie de anticorp efector. -up stimularea limfocitelor + care au ca receptor de suprafa molecule de Ig-, diferenierea nu urmeaz o cale din care s rezulte celule anga%ate n secreia de Ig-. "a pacienii cu deficit al sintezei de IgA, n glandele lacrimale, n parotide i n glandele nazale, plasmocitele productoare de IgA sunt nlocuite cu cele productoare de Ig-, iar n mucoasa intestinal, cu cele care sintetizeaz Ig. i Ig@. ;otui, Ig- nu este o imunoglobulin caracteristic secreiilor, deoarece n secreii nu este mai concentrat dec't n ser. (ig. 9:. 0eprezentarea grafic a distribuiei cantitative a diferitelor clase de imunoglobuline n umorile interne i e&terne.

INTERAC%IUNI ANTIGEN3ANTICOR/

0eaciile Ag#Ac sunt consecina proprietii eseniale a imunoglobulinelor, aceea a specificitii de legare cu determinantul antigenic care a indus sinteza lor. $ele mai multe date referitoare la natura interaciunii s#au obinut n reacia dintre anticorpii specifici fa de haptene i epitopul haptenei. Oaptenele au avanta%ul c, teoretic, prezint un singur epitop.

C5

0eacia Ag#Ac poate fi considerat ca prototip al interaciunilor macromoleculare, dar se deosebete de interacia enzim#substrat prin dou caracteristici! # reaciile Ag#Ac, in vivo, sunt totdeauna reversibile, deoarece anticorpii nu altereaz ireversibil antigenul, aa cum o enzim modific substratul eiN # heterogenitatea anticorpilor nu are echivalen la alte categorii de proteine. 0eaciile Ag#Ac pot fi clasificate, dup efectele pe care le produc! reacii primare, secundare i teriare. 0eaciile primare semnific recunoaterea specific i legarea celor doi reactani. 0eaciile primare se studiaz prin metoda dializei la echilibru, a imunofluorescenei, 0IA. 0eaciile secundare pot s apar in vitro, ca o consecin direct, dar nu obligatorie, a interaciunii primare. 2le se evideniaz n timp prin fenomene de aglutinare sau de precipitare, n funcie de natura antigenului. 0eaciile teriare e&teriorizeaz consecinele biologice ale reaciilor primare in vivo. 2le au un caracter comple&, deoarece sunt influenate de factorii organismului! de concentraia complementului, de mediatorii eliberai de alte celule 6mastocite7, de afinitatea receptorilor de antigen. 0eaciile teriare pot fi protectoare, dac au ca efect imobilizarea bacteriilor, neutralizarea to&inelor i a virusurilor sau pot avea efecte nocive! oc anafilactic, anafila&ie local, hemoliz intravascular. Bazele !ole%"lare ale #tera%' "# A$.A% Interaciunile Ag#Ac, in vivo sunt totdeauna reversibile. Factorii care condiioneaz interaciunea Ag#Ac sunt! 1 complementaritatea structural dintre determinantul antigenic i situsul de combinare al anticorpului. Acesta este factorul e&clusiv al specificitii reaciei. $omplementaritatea structural presupune adaptarea conformaional a celor dou grupri reactante i a fost g'ndit n termeni structurali, pe principiul cheie#broascN 1 complementaritatea electrochimic a gruprilor reactante este consecina complementaritii structurale i semnific intrarea n aciune a unor fore intermoleculare care stabilizeaz i consolideaz interaciunea celor dou grupri. Formarea legturilor intermoleculare necesit e&istena unor grupri atomice suficient de apropiate pe cele dou molecule. -istana dintre ele este invers proporional gradului de complementaritate. -ei complementaritatea structural strict nu este obligatorie, o potrivire spaial c't mai nalt este mai favorabil interaciunii. 2a se e&prim prin congruena suprafeelor de contact care furnizeaz fore de atracie intermolecular ce stabilizeaz comple&ul. "a interaciunea Ag#Ac particip urmtoarele tipuri de legturi necovalente! legturile de 8, forele electrostatice, legturi van der Caals i legturi hidrofobe. ;oate sunt fore nespecifice cu valoare mic i natura lor face ca reacia s fie reversibil.

C<

"egturile de O se formeaz c'nd doi atomi au n comun un nucleu atomic de O 6un proton7. Protonul comun se gsete ntre doi atomi de 1 sau de 8 sau ntre unul de 1 i unul de 8. 1ucleul de O este legat covalent de unul dintre cei doi atomi 6de 1 sau de 87. "egtura de O are energia de legare de <#I BcalTmol. (ig. 90. (orele intermoleculare implicate n formarea comple&ului Ag#Ac. Aciunea acestor fore necesit un contact str'ns ntre cele dou grupri reactante. ,egturile de 8 rezult prin formarea unei puni de O ntre doi atomi apropiai. (orele electrostatice se datoreaz atraciei grupelor ionice cu sarcini opuse situate la periferia celor dou lanuri proteice. (orele &an der Caals rezult prin interaciunea ntre diferii nori electronici, reprezentai sub forma dipolilor oscilani. ,egturile hidrofobe, care pot contribui cu %umtate din fora de legare Ag#Ac, sunt produse prin asociaia gruprilor nepolare i hidrofobe, de unde moleculele de ap sunt e&cluse. -istana optim ntre gruprile reactive variaz cu tipul de legtur. (orele electrostatice 6coulombiene sau ionice7 sunt rezultatul atraciei dintre atomi sau dintre grupe de atomi cu sarcin electric opus, situate pe cele dou grupri reactante! de e&emplu, ntre un cation 61aR7 i un anion 6$l#7 sau ntre $88# i 1O<R. 2nergia de legare a acestor fore este semnificativ la distane foarte mici 6sub 199 A o7 dintre gruprile reactante. Hu&tapunerea e&act a ionilor favorizeaz ac#iunea acestor fore. 2nergia de legare este de C BcalTmol i variaz invers proporional cu ptratul distanei dintre cele dou grupri reactante 61Td57. "egturile van der Faals, cele mai slabe fore de interaciune, sunt active pe distane foarte mici dintre gruprile reactante. 2nergia de legare este de 1#5 BcalTmol. "egturile van der Faals nu se bazeaz pe o separare permanent a sarcinilor electrice, ci pe fluctuaii ale acestora, induse de apropierea moleculelor. "a o distan intermolecular limit se formeaz c'mpuri electrice instantanee, cu efect polarizant asupra moleculelor nvecinate. Intre atomii suficient de apropiai, apare o for de atracie reciproc indus de sarcina dipol fluctuant, pe care un dipol o induce n dipolul nvecinat. Aceste fore se mai numesc i fore de dispersie. Intensitatea lor depinde de distana dintre gruprile implicate i este invers proporional cu puterea a I#a a distanei. Galoarea lor este optim la 1#5 Z. ,egturile hidrofobe 6sau apolare7 apar ntre grupri nepolare 6neionizate7 n soluii apoase i sunt consecina tendinei de e&cludere a reelei ordonate de molecule de ap, dintre molecula de antigen i cea de anticorp. Aceste legturi sunt favorizate de aminoacizii cu grupri apolare, care au tendina de asociere, diminu'nd numrul moleculelor de ap din vecintatea lor. Prin eliminarea moleculelor de ap dintre gruprile reactante, distana dintre situsurile active scade foarte mult i crete valoarea forelor stabilizatoare. $omplementaritatea spaial sau forele intermoleculare nu sunt, fiecare n parte, suficiente pentru a forma legturi stabile. Pentru stabilitatea interaciunii Ag#Ac sunt necesare ambele condiii. $u c't energia de legare a reactanilor este mai mare, cu at't comple&ele Ag#Ac sunt mai stabile. Interaciunea gruprilor reactante ale antigenului i anticorpului este definit de doi parametri! afinitatea i aviditatea anticorpilor. (ig.9>. @surarea afinitii anticorpilor prin diali a la echilibru.

C:

Interaciunea Ag#Ac este reversibil. In interiorul sacului de dializ, haptena este parial sub form liber i parial legat cu anticorpii, n funcie de afinitatea anticorpilor. Prin membrana sacului de dializ poate difuza numai haptena liber i con#centraia sa e&tern va egala concentraia haptenei libere din interiorul sacului. @su#rarea concentraiei haptenei n sacul de dializ permite calculul cantitii de hapten legat de anticorpi. 0e noirea constant a tamponului duce la disocierea total i la pierderea haptenei din sacul de dializ, ceea ce denot natura reversibil a legturii Ag#Ac 6dup 0oitt, 1JJI7. *finitatea anticorpilor msoar fora de legare dintre un determinant antigenic i situsul complementar de legare al unui anticorp specific. Afinitatea este rezultanta forelor de atracie i de respingere, care mediaz interaciunea celor doi reactani. Fora acestor interaciuni se msoar n reacia dintre un antigen monovalent 6a unei haptene7 cu anticorpii specifici. 8 interaciune cu afinitate nalt presupune structuri complementare perfecte, n timp ce complementaritatea imperfect a gruprilor reactante determin o afinitate sczut, deoarece forele de atracie sunt active numai pe distane foarte mici i sunt diminuate de forele de respingere. @etoda de msurare a afinitii anticorpilor este diali a la echilibru. @etoda se bazeaz pe proprietatea haptenelor mici, monovalente 6care nu dau reacii de precipitare cu anticorpii specifici7, de a traversa membrana de dializ, impermeabil pentru anticorpi, ca i pentru comple&ele hapten# anticorpi. 3oluia concentrat de anticorpi se repartizeaz ntr#un sac de dializ i se imerseaz ntr#un volum cunoscut de soluie tampon, la pO I,:, ce conine o concentraie cunoscut a haptenei. Oaptena liber difuzeaz prin membran, n compartimentul cu anticorpi i se combin parial cu acetia. "a echilibru, se msoar concentraia haptenei libere la e&terior, egal cu concentraia haptenei libere din interior. $oncentraia total a haptenei n sacul de dializ este mai mare, deoarece o proporie a moleculelor sale este legat de anticorpi. -iferena dintre concentraia iniial i cea final a haptenei, n compartimentul e&terior, msoar afinitatea ei de legare cu anticorpii specifici, n condiiile unui e%ces de molecule haptenice, care favorizeaz disocierea comple&elor antigen#anticorp. Aviditatea este un parametru al interaciunii Ag#Ac, care rezult din multivalena antigenului. $ele mai multe antigene posed mai mult dec't un determinant antigenic. -e e&emplu, celulele bacteriene sau virionii, dar i polizaharidele, au pe suprafa un numr mare de determinani antigenici repetitivi. Antigenele proteice au totdeauna determinani antigenici multipli, dar diferii. Antigenele multivalente leag un numr echivalent de molecule de anticorpi. 2nergia total de legare a epitopilor multipli ai unui antigen, cu situsurile anticorpilor specifici este mult superioar comparativ cu energia separat a fiecrei interaciuni dintre situsul de combinare i epitop. Aviditatea caracterizeaz energia medie de legare a unui antigen multivalent cu anticorpii specifici i msoar fora rezultant a afinitii dintre epitopii multipli ai unui antigen i paratopii complementari. $omple&ele Ag#Ac formate de antigenele multivalente sunt stabile, disocierea lor fiind dificil, deoarece este necesar ruperea tuturor legturilor e&istente. Afinitatea furnizeaz date cu privire la natura fizico#chimic a reaciei Ag#Ac, iar aviditatea este semnificativ pentru antigenele naturale multivalente.

CC

Afinitatea i aviditatea condiioneaz proprietile fiziologice ale anticorpilor. $ei cu afinitate mare sunt mai eficieni n reaciile biologice! n protecia antibacterian i antiviral, n reacia de precipitare in vitro. $omple&ele Ag#Ac formate de anticorpi cu afinitate mic, persist n circulaie i se depun pe membrana bazal a glomerulilor renali. $omple&ele formate de anticorpii cu afinitate mare se elimin rapid din circulaie, fr efecte defavorabile asupra funciei renale. Interaciunea Ag#Ac este caracterizat permanent prin formarea i anularea diferitelor tipuri de legturi intermoleculare. In vivo, probabil toate reaciile Ag#Ac sunt reversibile, dar reaciile secundare, in vitro 6aglutinarea, precipitarea7, n condiiile echilibrului reactanilor, sunt ireversibile.

-AZELE MOLECULARE ALE RECT%IILOR IMUNE NCRUCIATE

;rstura dominant a reaciilor Ag#Ac este specificitatea, derivat din nsi caracterul rspunsului imun. In general, anticorpii reacioneaz numai cu antigenul homolog, adic antigenul inductor al sintezei lor, dar e&ist i e&cepii, c'nd anticorpii unui ser imun reacioneaz i cu antigene heterologe, adic altele dec't cel folosit la imunizare, dar nrudite chimic cu acesta. @olecula de imunoglobulin, cu o structur tridimensional unic, poate s lege un numr de determinani antigenici diferii, similari ca structur chimic cu antigenul inductor sau cu o structur chimic distinct, dac epitopul su se potrivete spaial, cel puin cu o zon limitat a situsului de combinare al anticorpului. 2nergia interaciunii anticorpului cu antigenele heterologe este totdeauna mai mic. Posibilitatea ca o molecul de anticorp s interacione e cu antigene heterologe st la ba a multispecificitii imunoglobulinelor sub aspect molecular i a reaciilor ncruciate sub aspect serologic. -in punct de vedere molecular, posibilitatea legrii unor epitopi diferii, cu un anticorp unic n ceea ce privete situsul su de combinare, se e&plic prin faptul c la nivelul subunitilor sale structurale, se leag epitopi diferii, cu dimensiuni mai mici i configuraie complementar acestora. $apacitatea unui situs de combinare al unei molecule de anticorp, de a lega dou antigene diferite, corespunde reactivitii serologice ncruciate adevrate. "egarea epitopilor heterologi se face totdeauna cu afinitate mai mic. Pentru antigenele proteice, reactivitatea ncruciat este determinat de e&istena unor epitopi asemntori din punct de vedere spaial, cu mici diferene ale secvenei de aminoacizi, care induc uoare modificri ale epitopilor. +sena reactivitii ncruciate adevrate este c situsul moleculei de anticorp leag epitopi diferii. 8 alt cauz de ordin molecular a reaciilor ncruciate o constituie heterogenitatea configuraiei spaiale a situsului de combinare al moleculelor de anticorpi ale unui ser imun. Oeterogenitatea anticorpilor este consecina faptului c nu e&ist nici un antigen care s aib un singur epitop. $ea mai simpl hapten poate induce sinteza c'torva specificiti de combinare a anticorpilor. Oeterogenitatea specificitii de combinare a anticorpilor unui ser imun, mrete ansa unei reacii cu antigene heterologe.

C?

-in punct de vedere serologic, capacitatea anticorpilor unui ser imun, cu diferite specificiti de legare, de a reaciona imunologic cu antigene heterologe se numete reactivitate ncruciat de tip II i reflect capacitatea unei subpopulaii a anticorpilor serici de a lega un antigen heterolog. E/e!ple de rea%' !"#e 0#%r"% &ate

0eaciile imune ncruciate au fost iniial detectate pentru serurile imune fa de celulele bacteriene, datorit comple&itii antigenice a acestora. 8rice celul bacterian conine un numr mare de antigene distincte 6flagelare, somatice, capsulare, piliare, fimbriale, etc.7. 3erul imun specific conine anticorpi 6 n diferite proporii7 fa de toate categoriile de antigene celulare, unele fiind comune mai multor linii bacteriene. "a r'ndul lor, moleculele mari conin numeroi determinani antigenici, unii dintre ei put'nd fi comuni moleculelor omologe ale diferitelor specii. 0eaciile ncruciate sunt mai frecvente pentru antigenele care au epitopi de natur glucidic, deoarece glucidele realizeaz polimeri cu configuraii spaiale limitate ca diversitate. Antigenele heterofile de tip Forssman, de natur polizaharidic, cu o larg distribuie n lumea vie 6om, animale, plante, microorganisme7, se caracterizeaz prin capacitatea lor de a reaciona cu un ser imun specific fa de unul din antigenele grupului. Antigenele proteice din surse ta&onomice nrudite, dau frecvent reacii ncruciate. -e e&emplu, antiserul fa de albumina de ou de gin, precipit albumina din oul de raN albumina seric bovin i cea eWuin sau fibrinogenul uman i cel bovin reacioneaz ncruciat cu serul imun obinut fa de una din aceste proteine. Anticorpii anti#Obg de cal, sintetizai de iepure, reacioneaz nu numai cu antigenul specific, dar i cu Obg a unor specii nrudite! zebra, vaca, porcul, ns reacioneaz foarte puin cu Obg de roztoare, de psri, de amfibieni. 0eacia Ag#Ac a fost un instrument util pentru determinarea diferenelor structurale dintre proteinele omologe, care constau n secvena aminoacizilor. $u c't dou specii de organisme sunt mai apropiate filogenetic, cu at't proteinele lor omologe sunt mai asemntoare i dau reacii ncruciate mai intense. $apacitatea antigenelor distincte, dar nrudite chimic, de a induce sinteza anticorpilor care reacioneaz ncruciat, a creat complicaii n tratamentul bolnavilor cu diabet insulino#dependent. Insulina de origine animal 6porcin, bovin, ovin7, asemntoare cu cea uman, a determinat la unii pacieni aflai sub tratament de lung durat, sinteza anticorpilor anti#insulin, datorit micilor deosebiri ale secvenei aminoacizilor din poziiile D, J, 19. Anticorpii specifici fa de insulina unei specii, reacioneaz cu insulina celorlalte specii. D J 19 bovin Ala 3er Gal Insulina oaie Ala .lE Gal cal ;hr .lE Ileu porc ;hr 3er Ileu Alt complicaie a derivat din utilizarea preparatelor de insulin, contaminate cu proinsulin. Insulina este sintetizat n celulele + ale insulelor "angerhans, ca preproinsulin, care se deosebete de proinsulin printr#o secven de 59 de aminoacizi la captul 1. -up scindarea acestei secvene

CI

rm'ne proinsulina, la care aminoacidul 1 din catena A i aminoacidul <9 din catena +, sunt legai prin catena $ 6<< aminoacizi7. Peptidul $ are rol n formarea punilor 3#3 ntre catenele A 651 aminoacizi7 i + 6<9 aminoacizi7. In%ectarea preparatelor de proinsulin determin formarea autoanticorpilor anti#insulin. 2liberarea proinsulinei n organism prin liza celulelor insulare + are acelai efect. 0eaciile imune ncruciate reciproce sunt frecvente, dar nu obligatorii. -e e&emplu, serul imun de iepure anti#albumin seric bovin precipit ovalbumina, dar reacia reciproc nu are loc. )eacii ncruciate ntre antigene microbiene i tisulare. 3erul imun anti#polizaharid capsular de "tr. pneumoniae aglutineaz eritrocitele umane de grup A 6a cror specificitate antigenic este conferit de 1#acetil#galactozamin7, iar serul imun anti +. coli aglutineaz eritrocitele umane de grup + 6a cror specificitate antigenic este conferit de galactoz7. 3erurile imune de la pacienii cu maladii infecioase reacioneaz cu antigenul microbian omolog, dar uneori, i cu antigene ale gazdei. 8 astfel de reacie este foarte interesant, deoarece poate sta la originea intoleranei fa de self, dup un proces infecios. ,n e&emplu este cazul anticorpilor ce apar la pacienii infectai cu D. pallidum, care se combin cu cardiolipina. Anticorpi reactivi fa de cardiolipin se gsesc de asemenea, n serul pacienilor infectai cu M. leprae i la cei cu lupus eritematos sistemic. $ardiolipina liber n circulaie nu este imunogen, dar devine imunogen dup asocierea cu nveliul e&tern de D. pallidum, ceea ce e&plic sinteza anticorpilor la cei infectai, dar lipsete n celulele de M. leprae. 0eactivitatea ncruciat a stat la baza e&plicaiei reaciilor autoimune care se produc ntre antigene ale muchiului cardiac sau antigene valvulare i anticorpii anti#protein @ de "tr. haemoliticus. SISTEMUL IMUNITAR

2&istena tuturor organismelor vii este condiionat de activitatea unor mecanisme de rezisten i de imunitate, capabile s prote%eze individualitatea lor chimic, prin mecanisme de recunoatere i difereniere a substanelor proprii 6self7 de cele strine 6nonself7. In mod normal, aceste mecanisme sunt perfect tolerante fa de moleculele self, dar se activeaz i reacioneaz mai mult sau mai puin viguros pentru a ndeprta, a neutraliza sau a distruge substanele nonself. @ecanismele de rezisten i imunitate sunt prezente pe toat scara evolutiv a organismelor, ncep'nd cu bacteriile i se comple&eaz n evoluie. $elulele bacteriene posed mecanisme de protecie a individualitii genetice, reprezentate de! # fenomenele de restricie mediate de prezena unor sisteme enzimatice specifice 6enzime de restricie7, care recunosc moleculele strine de A-1, le cliveaz la nivelul unor situsuri specifice, rezult'nd fragmente mai mici, sensibile la aciunea e&o# i endonucleazelorN # fenomenele de reparaie genetic dependente de activitatea unor sisteme enzimatice care recunosc modificrile A-1 induse de mutaii sau de lipsa de fidelitate a mecanismelor de replicare,

CD

transcriere i traducere genetic, corect'ndu#le fie complet 6sistemele error free7 sau minimaliz'nd erorile n cazul sistemelor reparatorii predispuse la erori 6error prone sEstems7. "a plantele superioare, mi%loacele de aprare specific, aparent sunt absente, dar e&ist o gam larg de modaliti de aprare nespecific! # continuitatea i integritatea esuturilor epidermice, acoperite sau impregnate cu substane impermeabile pentru virusuri i microorganismeN # rezistena fiziologic conferit de coninutul nalt de zaharuri reductoare, prezena taninurilor, a diferiilor acizi organici, a pseudoanticorpilor cu activitate hemaglutinant n sucurile vegetale. "a proto oare, procesele de recunoatere asigur selecia hranei, identificarea partenerilor pentru con%ugare la parameci, iar la cele parazite, procesele de recunoatere mediaz interaciunea cu gazda. MECANISME DE A/RARE LA NEVERTE-RATE

-ei nu au sistem limfoid, nevertebratele recunosc i rspund la substanele nonself, la fel de eficient ca i vertebratele. "a ele funcioneaz o diversitate de mecanisme, unele fiind inductibile. 0spunsul este de scurt durat i nu are specificitate fa de agentul infecios patogen. 0spunsul imun al nevertebratelor se aseamn calitativ cu cel nscut al vertebratelor mediat de celulele fagocitare i de moleculele neimunoglobulinice. "a nevertebrate, aprarea organismului este asigurat de bariere fizico#chimice comple&e! secreia mucoas care acoper corpul celenteratelor, anelidelor, molutelor i protocordatelor, omoar potenialii patogeni. 2&oscheletul dur al celenteratelor, molutelor, artropodelor, echinodermelor i protocordatelor, formeaz o barier protectoare eficace fa de agenii infecioi. @a%oritatea nevertebratelor superioare au sistem circulator cu celule albe, denumite hemocite sau celomocite, n funcie de natura cavitii corpului. "ipsesc hematiile. (n mediul intern al nevertebratelor se gsesc fagocite, factori antimicrobieni constitutivi i inductibili cu efect neutralizant i litic, factori de coagulare a macromoleculelor strine. ;oate nevertebratele, chiar cele care nu au caviti ale corpului 6spongieri, anemone, viermi lai7, au fagocite, uneori de mai multe tipuri. $a i la vertebrate, fagocitele sunt efectorii rspunsului inflamator, sintetizeaz enzime lizosomale i posed mecanisme citocide dependente de supero&id. 0eaciile de aprare 6repararea tisular, fagocitoza, reacia de ncapsulare7sunt mediate de fagocite i de celulele hemostatice. Ingestia microorganismelor invadatoare este rezultatul aciunii fagocitelor, iar un numr mare de microorganisme i de metazoare parazite este ncapsulat de celulele hemostatice i de tip fagocitar. 2ndoparazitul care ptrunde n organismul nevertebratelor este fagocitat, sau dac are dimensiuni prea mari, este ncapsulat. Incapsularea este rezultatul unei fagocitoze fruste. Adeseori, endoparazitul ncapsulat, este omor't sub aciunea intermediarilor to&ici ai unei cascade enzimatice.

CJ

"a nevertebrate lipsesc limfocitele i moleculele de imunoglobuline, dar acestea sunt compensate de o varietate de factori umorali de aprare! aglutinine, lizozim, bactericidine, enzime lizosomale, factori de imobilizare. "a insecte s#au detectat peste 1C tipuri de proteine antibacteriene inductibile n c'teva ore dup in%ectarea unui antigen. 1evertebratele nu au proteinele cascadei complementare, dar viermii, insectele, crustaceii conin sistemul profenolo%ida ei. $omponentele acestui sistem sunt activate de o serie de enzime. "a captul cascadei de activare se formeaz enzima activ fenolo%ida a, cu rol esenial n ndeprtarea substanelor nonself. (ig.9/. ,n mecanism posibil de activare a profenolo%ida ei la fenolo%ida , la artropode. Activarea este stimulat de leziunile tisulare, de infecia cu microorganisme, de schimbri ale concentraiei ionilor de $a5R i ale valorii pO, care pot duce la coagularea plasmei i generarea factorilor care mediaz evenimentele ulterioare ale imunitii 6dup 0oitt, 1JJI7. Fagocitoza este foarte activ i este stimulat de aglutininele i bactericidinele cu rol de opsonine. -in punct de vedere funcional, aglutininele i bactericidinele sunt similare anticorpilor. Acestea sunt lectine, cu rolul de a lega componenta glucidic a glicoproteinelor de pe suprafaa celulelor nonself, rezultatul fiind aglutinarea. "ectinele sunt molecule care au aprut timpuriu n evoluie i sunt ubicvitare! se gsesc la bacterii, plante, nevertebrate i vertebrate. 2le tapeteaz microorganismele invadatoare i au rolul de a le imobiliza, dar au i rol opsonizant, uur'nd fagocitoza. In funcie de specificitatea lor de legare cu glucidele, lectinele sunt foarte diferite. (n corpul gras al insectelor superioare s#au caracterizat circa 199 de peptide antimicrobiene, a cror sintez rapid este indus de infecie. -in punct de vedere structural sunt de dou tipuri! # peptide ciclice, care conin puni 3#3 6de e&emplu, drosmEcina7, active fa de bacteriile .ram pozitive i fa de fungiN # peptide lineare 6cecropine bogate n .lE i Pro7, active fa de bacteriile .ram negative. $omponentele celulare i humorale cu funcii protectoare mediaz reacii aprare nespecifice 6 nscute7, fr rspuns accelerat la stimularea antigenic secundar. de

ORGANIZAREA SISTEMULUI IMUNITAR LA VERTE-RATE

"a vertebrate, aprarea este asigurat de mecanisme complicate celulare i humorale, de rezisten i imunitate. Funcia esenial a sistemelor de aprare este protecia fa de agenii patogeni invadatori. Interaciunea permanent cu microorganismele are un rol hotr'tor n dob'ndirea comple&itii structurale i funcionale a sistemului imunitar. -ovada o constituie faptul c la animalele germ#free 6a&enice7, numrul limfocitelor + i titrul anticorpilor serici naturali sunt

?9

de C#19 ori mai mici dec't la organismele convenionale. 2voluia a generat tipuri celulare specializate, tot mai eficiente funcional, care neutralizeaz, sechestreaz, omoar sau ndeprteaz agenii infecioi. "a vertebrate, reaciile de aprare sunt rezultatul aciunii unor factori humorali nespecifici 6complement, substane bactericide7 i specifici 6anticorpi7 i a unor populaii de celule specializate, cu aciune nespecific 6fagocite7 sau specific 6limfocite7. -in punct de vedere structural, n concepia modern, sistemul imunitar al organismelor superioare este considerat ca un organ difu sui#generis, alctuit dintr#un numr foarte mare de molecule i celule, reunite ntr#o reea de interaciuni comple&e, a crei funcie este asigurarea integritii i individualitii structurale a organismului. (n concepia restrictiv a lui 1.L. Herne, sistemul imunitar este reprezentat n e&clusivitate de limfocite, iar ntr#o accepiune mai larg, pe l'ng limfocite, n alctuirea sistemului imunitar intr o serie de celule accesorii cu rol esenial n declanarea rspunsului imun! macrofagele i o serie de celule nrudite6celulele "agerhans din tegument, celulele dendritice i cele interdigitate7. 3e apreciaz c numrul limfocitelor, la adultul normal, este de 19 15, iar al moleculelor de imunoglobuline, de ordinul a 1959. Impreun, aceste componente formeaz organul difu , cu greutatea de circa J19 g 61#5M din greutatea corpului7, a crui e&isten este adeseori ignorat, datorit caracterului sau difuz, n tot organismul. $elulele i moleculele sistemului imunitar sunt prezente n toate esuturile, dar n unele organe 6splin, ganglioni limfatici, plci PeEer, amigdale, timus7, componentele celulare au o densitate ma&im. 3istemul imunitar este unul din cele mai comple&e ale organismului. $omple&itatea lui deriv din structura de reea complicat de comunicaii intercelulare, din ubicvitatea sa n organism i din efectele multiple pe care le determin un numr mic de categorii celulare. 3istemul imunitar este considerat un adevrat )creier mobil*. -in punct de vedere structural i funcional, sistemul de aprare al organismelor superioare prezint numeroase dualiti! # e&istena unui compartiment al re istenei nespecifice i neadap1 tative 6 nscut7 i a unui compartiment cu aciune specific i adaptativ 6sistemul imunitar7N # prezena a dou populaii nclinate de limfocite 6; i +7, care mediaz imunitatea celular i respectiv humoral< # activitatea limfocitelor este modulat fie stimulator, fie inhibitor, sub aciunea unor celule i a unor factori humoraliN # e&istena organelor limfoide centrale 6primare7 i periferice 6secundare7N # e&istena unui rspuns imun primar i a unui rspuns imun secundarN # dualitatea structural 6dou perechi de catene polipeptidice7 i funcional 6bivalena7 a moleculei de anticorpN

?1

# comportamentul dublu al moleculei de anticorp! molecula de corp recunoate epitopul specific i la r'ndul ei este recunoscut de molecule cu rol receptor.

anti#

1umrul celulelor sistemului imunitar 6cu un ordin de mrime superior neuronilor7 i al moleculelor sale nu reflect fidel potenialul de aprare a organismului, deoarece n cursul rspunsului imun are loc proliferarea i amplificarea numeric a limfocitelor, precum i a potenialului de biosintez. "a aceasta se adaug o rat nalt de re noire i refacere a rezervelor sale celulare. "a om se produc zilnic un miliard de limfocite ce trec n circulaie. $ircul'nd i recircul'nd prin reeaua vaselor sanguine i limfatice, celulele i moleculele sistemului imunitar asigur supravegherea organismului, recunoaterea moleculelor i a celulelor nonself, pentru a le elimina. L !+o% tele 3istemul imunitar este reprezentat de esuturi derivate din mezoderm, a cror principal component celular este limfocitul. -e aici deriv denumirea de sistem limfoid. In ultimul timp se folosete denumirea de )limfon*, care semnific totalitatea organelor limfoide A primare i secundare, precum i celulele componente cu funcia de a recunoate antigenul. "imfocitele sunt celule care n cursul elaborrii rspunsului imun, recunosc specific antigenul i de aceea se mai numesc imunocite. -e aici deriv denumirea de sistem imunocitar, echivalent celei de sistem limfoid. ;oate celulele acestui sistem poart pe suprafaa lor, molecule cu rol receptor, capabile s recunoasc specific determinanii antigenici strini. 3istemul imunitar funcioneaz pe baza interaciunii dintre semnal 6antigen7 i receptorul specific limfocitar preformat. (n concepia modern, limfocitul este celula central a sistemului imunitar. 2a nu este celula )cap de serie* A aa cum o considerau vechii histologi, ci prezint o e&traordinar capacitate de reactivitate i difereniere. 1umrul limfocitelor. $opiii au un numr mai mare de limfocite i de aceea v'rsta trebuie considerat ca un parametru fiziologic de variaie, n evaluarea numeric a acestor celule. 2le reprezint 5C#<<M din totalul leucocitelor, adic circa 5199 celuleTmm < de s'nge. Galori mai mici de 1C99 limfociteTmm < semnific starea de limfocitopenie i cel mai adesea semnific un deficit numeric al limfocitelor ;. P'n n anii >C9, limfocitele erau distinse numai dup dimensiuni! mari, mi%locii i mici. $ele mai multe limfocite circulante au dimensiuni mici! I#19 Um diametru. "a microscopul optic, pe frotiul colorat @aE .runKald A .iemsa, limfocitele se disting de celelalte dup dimensiuni, sunt agranulare i au cel mai mare raport nucleocitoplasmatic. "imfocitele mari au un raport nucleocitoplasmatic mai mic i n citoplasm se gsesc granulaii azurofile. 3e numesc limfocite granulare mari 6"."7. In vitro, limfocitele sunt neaderente i nu fagociteaz. Astzi, Imunologia are la baz conceptul unei heterogeniti funcionale nelimitate a limfocitelor, care deriv din diversitatea specificitii receptorilor suprafeei lor.

?5

Populaia de limfocite care are receptori identici de antigen i recunoate un singur epitop 6sau c'iva nrudii7 formeaz o clon. ;oate celulele unei clone sunt descendente ale unei singure celule# mam. In consecin, n organism sunt tot at'tea clone de limfocite, c'te tipuri de determinani antigenici e&ist 6teoretic7 n natur. $orespondena complementaritii spaiale dintre receptorii limfocitari de antigene i epitopii antigenici asigur posibilitatea elaborrii unui rspuns imun specific, dup contactul limfocitelor cu oricare dintre epitopi. $aracterizarea funcional a limfocitelor este rezultatul cercetrilor ntreprinse dup anul 1J?9. (n raport cu organul limfoid primar n care se produce diferenierea i maturarea, 0oitt i col. 61J??7 au mprit limfocitele n dou categorii distincteN # limfocite D, care se difereniaz i se matureaz n timusN # limfocite B, care se difereniaz i se matureaz n bursa lui Fabricius la psri i n echivalenii ei funcionali, la mamifere. (n funcie de capacitatea lor de a interaciona cu antigenul specific, limfocitele sunt! # incompetente 6imature7, cele care nu recunosc antigenulN # competente 6mature7, cele care recunosc antigenul specific. 3tarea de competen este condiionat de prezena receptorilor prin intermediul crora antigenele sunt recunoscute. Pe suprafaa unei celule pot fi p'n la 199 999 de molecule receptoare identice, care ateapt nt'lnirea cu substanele nonself corespunztoare. -up ce limfocitul i#a dob'ndit competena n unul din organele limfoide primare, poate s rm'n n repaus, dac organismul nu a recepionat mesa%ul antigenic corespunztor. Aceste limfocite sunt neanga3ate 6neinformate sau naive7. $ele care au venit n contact cu antigenul specific sunt limfocite anga3ate 6informate7. 2le constituie substratul material al memoriei imunologice i ori de c'te ori se vor re nt'lni cu antigenul, vor produce un rspuns imun rapid i amplu. -up durata vieii, limfocitele sunt! # cu via scurt 6efectoare ale rspunsului imun7N # cu via lung 6de memorie7. 2le recircul n organism perioade ndelungate 6de ordinul anilor7. "a om, limfocitele de memorie ar supravieui circa 19 ani, fr s se divid. (n raport cu funcia pe care o ndeplinesc, se disting urmtoarele categorii de limfocite! # efectoare, cele care direct sau indirect, prin molecule efectoare, neutralizeaz antigenulN # reglatoare, cele care ralizeaz echilibrul optim al rspunsului imun. L !+o% tele B "imfocitele + reprezint C#1CM din totalul limfocitelor circulante i constituie o diviziune funcional ma%or a populaiei limfocitare. Impreun cu descendenii lor difereniai 6limfoblastul,

?<

plasmocitul7, limfocitele + sintetizeaz anticorpi, efectorii rspunsului imun mediat humoral 60I@O7. "imfocitul + imunocompetent 6matur, neanga%at7 sintetizeaz cantiti mici de molecule ale unui izotip de imunoglobuline, care rm'n legate de membrana limfocitului, av'nd rol de receptori de antigen, adevrate )antene* de detectare a antigenului specific. 3ub aspectul specificitii de legare a antigenului, fiecare organism posed milioane de clone de limfocite +, adic mici populaii celulare identice, descendente din aceiai celul mam, care recunosc i leag acelai antigen i produc anticorpi cu aceiai configuraie spaial a situsului de combinare. -up activare, toi descendenii limfocitului + sintetizeaz imunoglobuline i le secret ca anticorpi, cu aceiai specificitate de legare pe care a avut#o receptorul. 0eceptorul de antigen al limfocitelor +. @a%oritatea limfocitelor + umane din s'ngele periferic e&prim dou izotipuri de imunoglobuline pe suprafaa lor! Ig@ i Ig- sau numai Ig-. 3itusurile de legare ale celor dou izotipuri sunt identice. 1umai 19M dintre limfocitele + au pe suprafaa lor, ca receptor de antigen, molecule de Ig., IgA sau Ig2. $ele care au ca receptor molecule de IgA, sunt localizate n esutul limfoid asociat mucoaselor. @oleculele receptoare de imunoglobulin sunt inclavate cu captul $#terminal n membran. Intre Ig@ legat de membran 6Ig@m7, cu funcia de receptor de antigen i Ig@ seric 6Ig@s7, sunt dou deosebiri ma%ore! # Ig@m conine o secven $#terminal hidrofob, prin care se ancoreaz n membrana limfocitelor mature neanga%ate, care nu au venit n contact cu antigenulN # Ig@m este monomer, iar Ig@ seric este pentamer. 3ecvena $#terminal a Ig@m cuprinde 5C de aminoacizi hidrofobi ce formeaz domeniul transmembranar, urmat de o secven cationic "Es#Gal#"Es. $a la toate proteinele ancorate n membran, acest domeniu formeaz un Q#heli&, cu o lungime suficient pentru a strbate membrana. Fiind hidrofob, secvena de aminoacizi are interaciuni str'nse cu lipidele membranei. 3ecvena cationic se e&tinde n citoplasm, mrind gradul de stabilitate a moleculei n membrana celular. -up stimularea antigenic, sinteza se comut la Ig@ seric. ;recerea de la Ig@m la Ig@s este rezultatul unor diferene ale modului de prelucrare a A01 premesager. $opia de A01 premesager pentru sinteza catenei U6O7 are dou situsuri poteniale de clivare i ataare a resturilor de poli#A, ce marcheaz captul A01m. -up stimularea antigenic, din A01 premesager sunt clivate secvenele codificatoare ale domeniului $#terminal hidrofob i se sintetizeaz molecule de Ig@ fr secvena $# terminal de aminoacizi hidrofobi. $omutarea Ig@m ### Ig@s nu modific lanul " al moleculei. $ele dou forme ale Ig@ au domenii identice GO i G", adic au aceiai specificitate de legare a antigenului 6au acelai idiotip7. "imfocitul + are receptori membranari pentru substanele mitogene, pentru complement 6$ <b7, pentru regiunea Fc a imunoglobulinelor, pentru insulin etc. 0eceptorul pentru $ <b funcioneaz i ca receptor pentru virusul 2pstein#+arr. "imfocitele + neactivate au receptori de mic afinitate pentru I"#5, dar dup stimularea antigenic, ele e&prim rapid, receptori pentru I"#5 de nalt afinitate.

?:

"imfocitele + rspund la efectul stimulator al I"#5, prin proliferare rapid i secreia Ig@. Pe suprafaa limfocitelor + se gsesc la densitate nalt, moleculele $@O II. L !+o% tele T "imfocitele ; reprezint p'n la D9M din totalul limfocitelor circulante. Galorile normale n s'nge, pentru limfocitele ; sunt cuprinse ntre 1?59#:<59Tmm <, ntre una i 1D luni de via i ntre CJ9#<9J9Tmm<, dup 1D luni. Proporia limfocitelor ; se poate determina prin metoda rozetelor cu hematii de berbec sau prin metoda imunofluorescenei cu anticorpi monoclonali fa de receptorul de antigen. "imfocitele ; mature e&prim marBerul[ $-:[[ sau $-D. Aceste molecule aparin suprafamiliei imunoglobulinelor. $elulele $-: au de obicei funcie helper, iar cele ce e&prim marBerul $-D sunt citoto%ice. "imfocitele ; ndeplinesc funcii comple&e, at't efectoare ale rspunsului imun mediat celular c't i reglatoare, prin intermediul unor factori humorali pe care#i secret, denumii limfochine. "imfocitele ; realizeaz urmtoarele funcii! A lizeaz celulele care e&prim molecule nonself pe suprafaa lorN A regleaz rspunsul imunN A mediaz reaciile de hipersensibilitate nt'rziat. Aceste funcii sunt rezultatul heterogenitii funcionale i se datoreaz activrii unor subpopulaii distincte de limfocite ;! # limfocite Dc 6;cl, citoto&ice sau citolitice7 e&prim pe suprafaa lor marBerul ;D 6$-D7N # limfocite Dh 6helper7 au pe suprafa marBerul $- :. Acestea sunt cele mai numeroase, reprezent'nd ?9#?CM din numrul total de limfocite ; ale organismului umanN # limfocite Ds 6supresoare7, purttoare ale marBerului $-:N # limfocite D$ sau D$8 6delaEed hEpersensitivitE7 e&prim marBerul $-D. Funciile limfocitelor ;h se realizeaz prin intermediul limfochinelor secretate. In funcie de limfochinele pe care le sintetizeaz, limfocitele ;h se clasific n dou subseturi!;h#1 i ;h#5. $elulele ;h#1 6;h#c7 secret IF1 gama, I"#5 i ;1F beta 6citochine de tip 1, stimulatoare ale imunitii mediate celular7. $itochinele de tip 1 produc urmtoarele efecte! stimuleaz reacia de citoto&icitate i inflamatorie asociat cu reaciile de hipersensibilitate nt'rziat. In esen, limfocitele ;h#1 au rol n edificarea unui rspuns imun mediar celular 60I@$7. $elulele ;h#5 6;h#b7 secret citochine de tip 5! I"#:, I"#C, I"#? i I"#19 6dar nu secret Il#57 i stimuleaz activitatea limfocitelor + de memorie. $itochinele tip 5 6I"#:, I"#C7 stimuleaz rspunsul imun humoral fa de paraziii e&tracelulari 6stimuleaz diferenierea limfocitelor + spre plasmocit7 i instalarea strilor alergice prin capacitatea lor de a induce sinteza Ig2 i de a stimula mastocitele.

?C

In esen, limfocitele ;h#5 sunt implicate n edificarea rspunsului imun mediat humoral 60I@O7. Prin toate aceste efecte, limfocitele ;h sunt amplificatoare ale rspunsului imun "imfocitele $-D 6; citototo&ice7 reprezint 5C#<CM dintre limfocitele ; circulante. Funcia lor const n efectul litic prin contact celular direct asupra celulelor infectate cu virusuri, malignizate sau alogenice. "imfocitele ;- sunt mediatoare ale reaciilor de hipersensibilitate nt6r iat 6delaEed7 de tip tuberculinic. 2le secret limfochine cu efecte locale asupra macrofagelor i limfocitelor din focarul inflamator. "imfocitele ;s sunt inhibitoare ale amplitudinii rspunsului imun, dup epuizarea antigenului. 2le au rolul de a diminua intensitatea 0I@$ i 0I@O, menin'nd n limite fiziologice intensitatea reaciilor imunitare. 3e pare c i e&ercit rolul supresor asupra rspunsului imun, prin inhibarea activitii limfocitelor ;h, dar au i efect supresor direct asupra limfocitelor ; i + efectoare. "imfocitele ;s au rol important n inducerea strii de toleran fa de antigenele e&ogene, ca i fa de moleculele self. -eficienele funcionale ale limfocitelor ;s creeaz predispoziii pentru maladiile autoimune. -istincia funcional ntre limfocitele ;$-: i ;$-D nu este totdeauna net. ,nele clone de limfocite ;$-: au proprieti citoto&ice, iar unele clone ;$-D, dup contactul cu antigenul, prolifereaz i secret limfochine, ca i limfocitele ;$-:. Re%eptor"l de a#t $e# al l !+o% telor T 1RCT2 -ei moleculele de anticorpi au fost printre primele a cror structur chimic s#a identificat, caracterizarea biochimic a receptorului de antigen al celulelor ; s#a fcut foarte greu, deoarece nu a e&istat un echivalent celular ; al tumorilor de mielom. @olecula cu rol de receptor de antigen a limfocitelor ; s#a identificat recent, dup ce a fost posibil cultivarea liniilor de hibridom de celule ;. @oleculele receptoare de antigen ale limfocitelor ; au o larg variaie biochimic, corespunztoare specificitii de legare a spectrului foarte larg de antigene. $a i n cazul anticorpilor, pentru receptorul de antigen al celulelor ;, se folosete termenul de )idiotip* 6;i7, pentru a desemna o molecul a 0$; cu un set unic de epitopi asociai, derivai din configuraia sa spaial unic, complementar pentru legarea specific a unui epitop antigenic. Pentru izolarea i identificarea receptorului ;i s#au utilizat anticorpi monoclonali 6A@$7 anti# ;i, care precipit specific moleculele ;i dintr#un amestec comple& de proteine membranare. 2&aminarea peptidelor n imunoprecipitatele diferitelor clone de celule ;, prin metoda electroforezei n 3-3#poliacrilamid, a evideniat c 0$; este un heterodimer i const dintr#o glicoprotein de D9#J9 B-, care n condiii reductoare se disociaz n dou peptide de :9 i respectiv :< B-. @olecula ntreag const dintr#o pereche de lanuri peptidice, similare ca dimensiuni, legate prin puni 3#3.

??

"anul Q

"anul P

(ig. 9@. 3tructura receptorului de antigen al limfocitului ;. @olecula este un heterodimer format din lanurile Q i P, care se e&tind prin membrana celular i au scurte poriuni citoplasmatice. $omple&ul ;< este alctuit din : subuniti proteice 6\, ]i 5 ^7, localizate i dublul strat lipidic i n citoplasm.

$ele dou peptide sunt distincte i s#au notat Q i P. "anul Q are 5:D aminoacizi, cu punctul izoelectric la pO = C,9#C,C. "anul P are 5D5 aminoacizi, iar punctul izoelectric este la pO ?,C#I,9. Fiecare caten are : domenii! unul variabil 6G Q, respectiv G P7, unul constant 6$ Q, respectiv $ P7, unul transmembranar i unul intracitoplasmatic. Astfel alctuit, molecula 0$; face parte din suprafamilia moleculelor imunoglobulinice. Prin dimensiuni se aseamn cu lanul " al imuno# globulinelor! domeniul variabil al fiecrui lan are 119 aminoacizi, dar pentru c se ancoreaz n membran, se aseamn cu lanul O. -omeniile variabile 6Q i P7 sunt e&trem de variabile 6ca i regiunile variabile ale celor dou catene ale imunoglobulinelor7 i particip la formarea situsului de combinare al 0$;. 3itusul de combinare al 0$; este alctuit din regiunile hipervariabile sau regiunile determinante de complementaritate A0-$ 6< ale catenei Q i : ale catenei P7 i este aplatizat, adaptat funciei sale de a lega suprafaa aplatizat a moleculelor $@O. "a om, 0$; heterodimer este asociat cu molecula ; <, o grupare de trei peptide asociate necovalent. Funcia probabil a lui ;< este aceea de transductor al semnalului de activare, de la ;i la citoplasm, constituind, prin modificri conformaionale, un canal de trecere a ionilor de $a 5R prin membran, dup ce receptorul a legat epitopul specific. 3#au identificat dou tipuri de 0$;! Fig.5D.a. 3ubseturi ma%ore de celule ; (ig. 9..b. 3ubseturi funcionale de celule ; $-:R 3ubseturi de limfocite D, n funcie de tipul de 0$; 60$;#5, 0$;#57. "imfocitele 0$;#1 au un repertoriu restr'ns de interaciune cu antigenul, dar nu manifest fenomenul restriciei $@O. "imfocitele 0$;#5 e&prim

?I

$-: sau $-D, care determin recunoaterea antigenului asociat cu moleculele $@O II sau $@O I. "imfocitele ;$0#5R $-:R sunt divizate pe baza limfochinelor pe care le secret, n subseturi de celule ;h16stimulatoare ale I@$7 i ;h5 6stimulatoare ale I@O7 6dup 0oitt, 1JJI7.

# 0$;#5 este heterodimerul format din polipeptidele Q i P, legate prin puni 3#3, prezent pe suprafaa a circa J9M dintre limfocitele ;N # 0$;#1 este asemntor structural cu 0$;#5, dar const din polipeptidele E i ], cu o alt specificitate antigenic, identificat prin intermediul anticorpilor monoclonali. 3e gsete pe suprafaa a 9,C#1CM dintre limfocitele ; circulante umane, dar este mai frecvent pe limfocitele intraepiteliale ale mucoasei intestinale. "imfocitele ; ET] e&prim marBerul $-< i recunosc antigenul printr#un mecanism asemntor cu acela al limfocitelor ; QTP, adic recunosc epitopii asociai cu moleculele $@O I i II, dar frecvent par s interacioneze cu molecule $@O neclasice, iar specificitatea interaciunii lor cu epitopii antigenici este limitat. Aceste limfocite pot s recunoasc antigene neconvenionale, ca de e&emplu, proteinele de oc termic i antigenele nepeptidice ?glucidice5. (n general, limfocitele cu 0$;#1 6 ET]7 sunt negative pentru marBerul $-: i pentru $-D, dei unele e&prim nivele sczute ale unuia dintre marBeri. ,nele studii sugereaz c aceste celule contribuie la rspunsul iniial al gazdei, la diferii ageni infecioi! virusuri, bacterii6 n special micobacterii7, parazii, dar i la rspunsul anti#tumoral. 2le par s constituie )prima linie de aprare*. Ipoteza este n acord cu localizarea lor anatomic, la poarta de intrare n organism, n esuturile nelimfoide 6tegument, intestin7, dar i n situsurile inflamatorii. "imfocitele ; ET] se aglomereaz n focarele inflamatoare cronice6membrana sinovial, leziunile asociate cu lupusul eritematos diseminat7. "a rumegtoare, <9#D9M din totalul limfocitelor ; circulante au receptor ET], valorile ma&ime nregistr'ndu#se la organismele nou#nscute. "a alte specii, numrul acestor limfocite ; este mic. Abundena lor numeric la rumegtoare este corelat, probabil, cu bacteriemia masiv care nsoete procesul digestiv. (n esen, marBerii 0$; i $-< sunt definitorii pentru limfocitele ;. "imfocitele ; au un marBer distinctiv pe suprafaa lor, fa de limfocitele +! ;hE 1 6$- J97. Acest marBer poate fi e&primat i pe alte tipuri celulare i lipsete la o mic proporie a limfocitelor ;. Cel"lele N3 $elulele 1L 6natural Biller7 reprezint circa 1CM din totalul limfocitelor sanguine. 2le deriv din mduva osoas i au origine comun 6acelai progenitor7, ca i celulele ;. In vitro, sunt neaderente i nefagocitare, ceea ce le aseamn cu limfocitele. -in punct de vedere morfologic, celulele 1L sunt mari, granulare 6,',, large granular lEmphocEtes7, av'nd citoplasm mai bogat dec't celelalte limfocite, cu granulaii azurofile.

?D

$elulele 1L nu au nici unul din receptorii de antigen caracteristici limfocitelor ; sau + i de aceea au fost denumite celule )nule*. $elulele 1L au pe suprafaa lor unii marBeri caracteristici limfocitelor! au receptor pentru Fc E de mic afinitate, formeaz rozete 2, au receptor de mic afinitate pentru I"#5, produc I"#5 i IF1 E. Au i receptori caracteristici seriei mieloide. (n dezvoltarea lor, celulele 1L nu sunt dependente de timus. $elulele 1L au via scurt i reprezint o linie important, primordial n evoluie, cu rol esenial n mecanismele de aprare nscut a organismului! sunt active n respingerea grefelor i a celulelor modificate sub raport antigenic. Funcia celulelor 1L este de a recunoate i de a liza anumite celule tumorale i celule infectate cu virusuri. $elulele 1L au lizat celulele liniilor + limfoblastoide transformate de 2+G, deficiente n molecule $@O I, dar nu au mai lizat aceste inte dup transfecia cu genele O"A#+ sau O"A#$. @ecanismul recunoaterii celulelor purttoare de molecule nonself nu este cunoscut. 3e admite c celulele 1L recunosc moleculele $@O i se activeaz c'nd receptorii lor nu nt'lnesc moleculele $@O pe suprafaa celulelor int sau c'nd moleculele $@O au o densitate mai mic dec't cea normal. 2fectul interaciunii este liza celulei int. Aciunea definitorie a celulelor 1L este citoto%icitatea. 2le lizeaz fr restricie $@O, celulele tumorale sau pe cele infectate cu virusuri. Activitatea celulelor 1L este foarte nalt la oarecele nud 6fr timus7 sau la oarecii timectomizai neonatal. -up activare, celulele 1L elibereaz IF1 E. $el mai studiat receptor membranar al celulelor 1L este receptorul de mic afinitate pentru Fc al Ig. 6$-1?7. 8 subpopulaie distinct a celulelor 1L o reprezint celulele F 6Biller7. 2le sunt tot ".", dar spre deosebire de celulele 1L, e&prim receptorul de mare afinitate pentru (c E. Aciunea lor principal este citoto%icitatea mediat de anticorpi 6A-$$7, fa de celulele modificate antigenic. In vitro, limfocitele ; din s'nge, sub aciunea stimulatoare a unor citochine 6I"#5, IF1 Q7 difereniaz o subpopulaie, care au fost denumite ,*F 6lEmphoBine activated =illers7. In vitro, prin adugarea I"#5 i a antigenului tumoral, devin citoto&ice fa de celulele tumorale omologe. -AZELE GENETICE ALE DIVERSIT%II RECE/TORILOR DE ANTIGEN

Funcia imunitar se bazeaz pe interaciunea specific dintre receptorii limfocitari i epitopii nonself. -iversitatea specificitii de legare a receptorilor limfocitari este paradigma pe care se cldete ntregul edificiu al tiinei imunologice. -iversitatea receptorilor caracterizeaz ambele populaii de limfocite. "imfocitele + ale vertebratelor sintetizeaz anticorpi cu o mare diversitate a specificitii situsului de combinare 619D# 19J tipuri diferite, care leag un numr echivalent de epitopi antigenici diferii7. Inelegerea determinismului genetic al acestei uriae diversiti a nt'rziat mult fa de alte aspecte ale funcionalitii sistemului imunitar.

?J

Prima teorie modern cu privire la specificitatea anticorpilor a fost teoria )lanurilor laterale* a lui 2hrlich 61J997. "anurile laterale sunt receptori preformai, inserai n membrana limfocitelor "egarea antigenului pe receptorul membranar al limfocitului va stimula celula s sintetizeze molecule identice cu receptorul de antigen, care trec n ser ca anticorpi. Aceast teorie a anticipat teoria seleciei clonale, precum i ideea c sistemul imunitar poate genera receptori cu mult nainte de a veni n contact cu antigenul. 0eceptorii limfocitari sunt preformai, au o structur asemntoare cu aceea a anticorpilor serici i rm'n n ateptarea nt'lnirii cu antigenul specific. 2hrlich consider, ns, n mod eronat, c o celul posed receptori pentru mai multe antigene. ;eoria a fost abandonat c'nd "andsteiner a artat c sinteza anticorpilor este indus i de antigenele artificiale 6con%ugate hapten#protein7, ne nt'lnite niciodat n natur i astfel specificitatea anticorpilor a fost e&plicat prin teoriile instructive 6+reinl i Oaurovitz, 1J<97. Aceste teorii atribuiau un rol important gruprilor determinante de specificitate. 2pitopii ar ptrunde n celula care sintetizeaz anticorpi i ar aciona ca matri, imprim'nd polipeptidelor n curs de sintez, o configuraie spaial complementar. ;eoriile instructive au fost infirmate dup evidenierea diversitii enorme a moleculelor de anticorpi, care se sintetizeaz dup stimularea cu un antigen, precum i de faptul c o celul + i descendenii ei produc anticorpi cu o specificitate unic fa de un epitop. (n 1JCJ, @c Farlane +urnet a formulat teoria seleciei clonale, care postuleaz c sistemul imunitar este reprezentat de un numr uria de clone de limfocite, corespunztor unui numr echivalent de epitopi. $lona este o populaie de celule identice din punct de vedere genetic, descendente ale unei singure celule de origine. -iversitatea clonelor este reflectat n specificitatea fiecreia de a recunoate un anumit epitop i este generat n timpul diferenierii celulelor limfoide din celulele de origine. ;oate celulele unei clone poart pe suprafaa lor, molecule identice de imunoglobulin, care funcioneaz ca receptori specifici de antigen. -up interaciunea cu antigenul, molecula receptor va fi sintetizat i secretat, cu o rat foarte nalt, ca anticorp. 2pitopii antigenici selecioneaz din aceast colecie imens, clonele de limfocite care au receptori complementari din punctul de vedere al configuraiei spaiale i determin proliferarea i diferenierea lor n celule productoare de anticorpi. ;oate celulele clonei au aceiai specificitate pentru antigen. (ig. 9B. Ilustrarea schematic a teoriei seleciei clonale. Fiecare clon de limfocite are pe suprafaa sa, un receptor de antigen, specific pentru un epitop antigenic complementar. "a ptrunderea n organism, antigenul selecteaz acele clone care pot s lege specific epitopii complementari. $elulele selectate sunt stimulate s se divid i s se diferenieze n celule efectoare mature i celule de memorie. 3istemul imunitar funcioneaz pe principiul )gata fcut*, adic receptorul de antigen pree&ist pe suprafaa limfocitelor, astfel nc't problema diversitii anticorpilor trebuie e&plicat pe baze genetice. ;eoria seleciei clonale este argumentat de c'teva dovezi e&perimentale! # limfocitele imunocompetente au specificiti distincte pentru diverse antigene! de e&emplu, numai 1#5M dintre limfocite leag albumina seric bovin. 1umrul celulelor care leag un anumit antigen crete mult dup imunizarea cu antigenul respectivN

I9

# limfocitele unei clone au receptori i produc anticorpi cu o singur specificitate, fa de un singur epitop. Faptul c iniial se sintetizeaz Ig@ i ulterior Ig., nu este un contraargument, deoarece anticorpii celor dou clase au regiuni variabile identice i au aceiai specificitate de legare cu epitopulN # clona de celule cu specificitate de legare a unui epitop se poate elimina selectiv prin pasa%ul celulelor pe o coloan de afinitate, cu bile de sticl tapetate cu antigenul specific. $elulele care au receptori pentru antigen ader de coloan, iar celelalte trec, ceea ce denot c limfocitele sunt anga%ate s rspund la un antigen, nainte de a se nt'lni cu el, prin receptorii lor specifici preformaiN # incubarea limfocitelor cu un antigen puternic radiomarcat, produce moartea numai a celulelor care l leag specific. Me%a# )!ele $e#et %e ale d ver) t' !"#o$lo,"l #elor

3usinut de dovezi e&perimentale, teoria seleciei clonale este acceptat. 3e pune problema modalitii de codificare genetic a sintezei unei mari diversiti moleculare de anticorpi. Potenialului imens al unui organism de a sintetiza milioane de tipuri de molecule diferite de anticorpi, ar trebui s#i corespund un numr egal de gene codificatoare. .enerarea potenialului uria de diversitate genetic s#a e&plicat n diferite moduri! # teoria liniei germinale consider c genele care codific sinteza domeniilor G" i GO se gsesc n celula germinal. In genomul fiecrui individ s#ar gsi un numr imens de cistroni care s#ar transmite ereditar. Pentru cele 19D A 19J specificiti de legare ale moleculelor de anticorpi, ar e&ista tot at'tea gene codificatoare. ;eoria nu e&plic modalitile de pstrare n cursul evoluiei, a acestui numr uria de gene i nici posibilitatea sintezei anticorpilor specifici fa de antigenele sinteticeN # teoria recombinrilor somatice presupune e&istena unui numr limitat de cistroni codificatori ai domeniilor variabile ale moleculei de anticorp, n linia germinal. -iversificarea specificitii de combinare a anticorpilor s#ar realiza prin recombinri somatice ntre un numr limitat de cistroni, asociate cu diviziunile celulare n cursul diferenierii limfocitelorN # teoria mutaiilor somatice consider c repertoriul genelor pentru sinteza imunoglobulinelor este construit de novo n cursul dezvoltrii sistemului imunitar, pornind de la un numr mic de gene ale liniei germinale, prin mutaii la nivelul celulelor somatice. 3elecia pozitiv 6pstrarea viabilitii clonelor limfoide cu receptori pentru antigenele e&ogene7 s#ar face sub influena antigenelor care selecioneaz i stimuleaz proliferarea celulelor mutante, care sintetizeaz anticorpi cu situs de combinare complementar. ;eoria presupune persistena n organism, pentru perioade lungi de timp, a unui numr mare de antigene, ceea ce este improbabilN # teoriile mi%te presupun e&istena unui numr limitat de cistroni codificatori ai domeniului variabil 6G7, n celulele liniei germinale. -iversificarea imens a potenialului de codificare i sintez s#ar face prin recombinri somatice ntre aceti cistroni, n timpul diviziunilor celulare, declanate de recunoaterea i stimularea antigenic. Ipoteza lui -reEer i +ennett 61J?C7 e&plic diversitatea anticorpilor prin nsi particularitile lor de structur. 2&istena unei singure gene codificatoare pentru regiunile G i $ ale moleculei de imunoglobulin este improbabil, deoarece nu este posibil ca o gen s sufere at'tea variaii

I1

corespunztoare captului 1O5 al catenei polipeptidice i s rm'n constant pentru secvena codificatoare a captului $88O. 1u se cunoate nici o situaie n care segmentul A-1 corespunztor regiunii constante a unei proteine s fi rmas nemodificat, iar cel codificator al regiunii variabile s fie e&pus fenomenelor mutaionale cu o frecven at't de mare. 3ingura modalitate de a e&plica variabilitatea regiunii 1#terminale i constana regiunii $# terminale este acceptarea ideii c molecula de imunoglobulin este codificat de mai multe gene distincte A cel puin dou # una pentru regiunea variabil i una pentru regiunea constant. (n acord cu aceast ipotez, n celulele limfoide embrionare ar e&ista c6teva sute de gene codificatoare ale regiunii variabile i o gen pentru regiunea constant, care s#ar asocia la nt'mplare n cursul diferenierii limfocitelor +. 8 molecul funcional de imunoglobulin s#ar sintetiza ori de c'te ori recombinarea genetic aduce n limfocitul precursor al plasmocitului, o gen G n apropierea genei $ corespunztoare. Astfel s#ar forma cuplurile de gene funcionale G"#$" i GO#$O, codificatoare ale celor dou catene. Ipoteza venea n contradicie cu c'teva dogme ale biologiei celulare i moleculare! # dogma conform creia, o gen codific un polipeptidN # dogma constanei genomului pe toat perioada de dezvoltare a unui organismN # dogma imposibilitii rearan%rii genelor ntr#o celul somaticN # dogma continuitii informaiei genetice. -in aceste motive, ipoteza nu a fost acceptat. ;eoria genelor multiple codificatoare ale unei molecule de imunoglobulin a fost confirmat ulterior prin tehnica cineticii de hibridare 6"eder i 3Kan, 1JI17. Autorii au artat c at't n celulele limfoide embrionare c't i n celulele tumorii de mielom, regiunea constant a catenelor O i " ale moleculei de imunoglobulin este codificat de o singur gen, iar regiunea variabil este codificat de mai multe gene. Prin tehnica hibridrii, s#a comparat distribuia genelor codificatoare n A-1 din dou surse! # dintr#o tumor de mielom de oarece, ce secret un lan BN # din celulele limfoide embrionare 6imature7 de oarece, ce nu sintetizeaz imunoglobuline. A-1 din ambele surse a fost clivat cu enzime de restricie, n fragmente separate ulterior prin electroforez. Fragmentele codificatoare ale lanului B au fost identificate prin hibridare cu A-1c, obinut prin transcrierea invers a A01m al lanului B. 3#au folosit dou tipuri de A01m ale lanului B! # un fragment pentru lanul "B ntreg 6cu domeniile GB i $B7N # un fragment corespunztor %umtii <> a A01m, codificator al domeniului $BN Pentru ambele categorii de molecule de A01m s#au obinut fragmentele de A-1c corespunztoare.

I5

(n proba cu A-1 obinut din limfocitele embrionare, A-1c al fragmentului $B a hibridat cu un fragment de A-1 ce conine gena $B, iar A-1c pentru ntregul lan B a hibridat at't cu fragmentul genei $B, c't i cu un alt fragment de A-1 rezultat prin clivarea cu enzimele de restricie, care probabil conine gena GB. (n concluzie, n celulele limfoide embrionare, cele dou gene codificatoare ale catenei = se gsesc situate la distan, n fragmente de restricie diferite. (n proba cu A-1 obinut din celulele limfoide de mielom, ambele probe de A-1c, corespunztoare domeniului $B i lanului ntreg GB au hibridat ntr#un singur fragment. (n concluzie, n limfocitele mature, cele dou fragmente codificatoare ale lanului = se gsesc n vecintate imediat, n acelai fragment de restricie. (n esen, genele funcionale pentru sinteza imunoglobulinelor n celulele mature sunt rezultatul rearan%rii prin procese de transpo iie, a unor segmente genice mici, motenite n A-1 al liniei germinale. 0earan%rile au loc n limfocite, pe msur ce ele se difereniaz din celule imature precursoare, n limfocite + productoare de anticorpi. 3ingurul mecanism care aduce cele dou gene ntr#un ansamblu funcional este reunirea prin transpo iie i recombinarea genetic a celor dou secvene de A-1 pentru a forma o gen activ " i o gen activ O. Polipeptidele " i O sunt codificate de trei grupuri de gene nelincate! # grupul genelor 8, pentru sinteza catenelor \, U, Q, ] , ^ 6situate pe cromosomul 1: la om i 15 la oarece7N # grupul genelor =, codificatoare ale lanului "B 6situate pe cromosomul 5 i respectiv ?7N # grupul ,genelor G pentru sinteza catenei " G 6situate pe cromosomul 55 i respectiv ?7. Fiecare din aceste familii cuprinde un numr controversat de gene codificatoare ale regiunii variabile, situate separat, la distan, de gena codificatoare a regiunii constante a moleculei de imunoglobulin. .enele pentru catena " a imunoglobulinei de oarece s#au studiat prin clonarea fragmentelor de A-1 ntr#un fag ce se replic n celulele de +. coli. 3#a obinut astfel o cantitate suficient de mare de A-1 al genelor codificatoare pentru catenele "B i " G, at't din limfocitele embrionare, c't i din celulele limfoide mature de mielom, productoare de imunoglobuline. .ena codificatoare a lanului G este format din : segmente separate, ordinea lor n direcia C> ### <> find G, , G & G, A G i ;. "egmentul genic , G codific 1C#59 de aminoacizi ai secvenei leader de la e&tremitatea 1# terminal a catenei polipeptidice. Aceast secven este clivat pe msur ce lanul strbate membrana reticulului endoplasmic i lipsete din molecula de imunoglobulin matur

I<

"egmentul genic & G codific cea mai mare parte a regiunii variabile a lanului G, specific'nd legarea aminoacizilor de la poziia 1 la JI. "egmentul genic A G 6H, %oining = legare7 codific restul regiunii variabile, adic aminoacizii ntre poziiile JD#119. "egmentul genic ; G codific secvena constant a catenei ", ntre poziiile 111#51:. Familia de gene codificatoare ale catenei ,= este organizat asemntor cu a genelor " G! secvene leader ,=, aezate n tandem cu cele circa 9>2 de segmente genice &=, C segmente genice A= str'ns legate ntre ele 6din care unul este defectiv7 i la o distan de 1999 pb se gsete un singur segment genic ;=. .enele pentru catena O a imunoglobulinelor au o organizare asemntoare celei a genelor catenei ". 3egmentele genice codificatoare ale catenei O sunt mai numeroase i au o organizare mai comple&, deoarece conin n plus secvene codificatoare - 6diversitE7, intercalate ntre secvenele GO i HO. $ele circa 15 secvene genice - codific fiecare C#1C aminoacizi i amplific diversitatea biochimic a anticorpilor. 2le confer cea mai mare variaie biochimic a catenei O. 3ecvenele genice GO par a fi n numr de c'teva sute. Fiecare segment GO este asociat cu segmentul "O, codificator al secvenei leader. "a oarece sunt 599#<99 de segmente genice GO, 19# 59 segmente -, : gene HO i 19 gene $O, iar la om sunt circa 199 segmente genice GO6din care circa %umtate sunt funcionale7, circa <9 de gene - i J gene H, din care ? sunt funcionale. .enele GO sunt diseminate n : aglomerri. .enele $O, codificatoare ale regiunii constante ale claselor i subclaselor de catene O, se gsesc n ordinea! U, ], 1, \5, \:, ^, Q:.\<, \1, ^, _6nefuncional7, Q , Fiecare segment genic $O conine mai muli e&oni. Fiecare e&on codific un domeniu structural al moleculei de imunoglobulin. Asamblarea genei active pentru catena ". Pentru a rezulta o gen funcional "B, unul din cele circa 5C9 segmente genice GB se unete cu unul din cele : segmente genice funcionale HB, printr#un proces de recombinare probabilistic. Impreun cu gena $B, se formeaz ansamblul GH$, codificator al catenei "B, transcris ulterior n A01 premesager. Prin procesul de clivare i ndire, intronii sunt eliminai i rezult A01m pentru catena "B. 3e sintetizeaz lanul polipeptidic, iar secvena leader este clivat n cursul transferului prin membrana reticulului endoplasmic. 0earan%area funcional a genei pentru catena ", stopeaz rearan%area genelor ce codific acelai izotip 6fenomenul e&cluderii alelice7. (ig. :2. )ecombinarea genelor umane codificatoare ale catenei "B a imunoglobulinelor. .ena funcional n limfocitul + matur, rezult prin recombinarea uneia din numeroasele gene G, cu una din cele : gene H funcionale i gena $B. 0ecombinarea poate avea loc ntre oricare din gene lilustreaz aran%area genic ntre G5 A H: A $B. Asamblarea genei active pentru catena O este similar asamblrii genei active pentru catena ", dar mai comple&, deoarece implic recombinarea a trei regiuni genice distincte ale domeniului variabil! GO, - i HO. Iniial s#ar realiza legarea segmentelor genice - i HO, urmat de transpoziia

I:

uneia din genele GO n vecintatea comple&ului -#HO, pe unul din cromosomii celulei pre#+. 0earan%rile sunt posibile datorit secvenelor de recunoatere ale genelor G, -, H. -e cele mai multe ori, rearan%rile genice au loc intracromosomal i foarte rar intercromosomal. -ac rearan%area este nefuncional, are loc rearan%area genelor n cellalt cromosom pereche. In general, rearan%area are loc la situsul B, iar dac rearan%area n cei doi cromosomi este neproductiv, este iniiat rearan%area la situsul `. "a comple&ul GO#-#HO este translocat una din genele $O, care codific clasa i subclasa catenei O. (ig. :7. @odelul organizrii genei umane codificatoare a catenei 8. .enele regiunii GO sunt multiple 6C9#<997, fiecare cu secvena leader. 0eunirea segmentului genic - cu gena HO precede legarea genei G de perechea -HO. Intronul genei leader 6"7 este ndeprtat prin clivarea i reunirea e&onilor A01. 0eunirea alternativ poate genera imunoglobulina de membran 6m7 sau secretat 6s7. $ifrele indic numrul apro&imativ de gene de segmente genice. 2u = regiune activatoareN 3u = regiunea de comutare 6sKitch7 6dup Potter, 1JJD7. Imensa diversitate a specificitii de legare a anticorpilor este generat prin c'teva mecanisme! 17 $iversitatea combinaiilor posibile prin asamblarea nt'mpltoare a segmentelor genice. -e e&emplu, cele circa 5C9 segmente genice GB i cele : segmente funcionale HB produc circa 1999 65C9 & :7 combinaii GB#HB. Pentru gena O e&ist posibilitatea unui numr superior de combinaii GO A - A HO! circa 5C9 segmente GO, 15 segmente - i : segmente HO 65C9 & 15 & : = 159997. 57 (le%ibilitatea 3oncional a segmentelor genice. (n momentul asamblrii comple&elor GO A - A HO sau G" A H" se produc deleii, adiii, substituii de baze, care modific circa < aminoacizi la fiecare %onciune. 1umrul variantelor biochimice ale moleculelor de imunoglobulin crete de < ori pentru lanul " 61999 & <7 i de J ori pentru catena O 615 999 & J = 1999997. Adiiile i deleiile care nsoesc legarea segmentelor genice G"#H" trebuie s se fac astfel nc't s se pstreze unicul cadru de citire al tripletelor pentru fiecare segment genic G i H. -ac legarea segmentelor genice introduce sau pierde 1 sau 5 nucleotide 6sau alt numr nedivizibil cu <7, secvena n aval nu va fi citit. Aceasta este o rearan%are genic neproductiv. 3egmentele genice - pot fi citite n toate cele < cadre de citire, n diferite recombinri G#-#H, ceea ce contribuie semnificativ la diversitatea anticorpilor. <7 $iversitatea combinatorial prin mperecherea nt'mpltoare a catenelor O i ". -ac oricare lan " poate fi mperecheat cu oricare lan O, vor rezulta peste 19D variante de imunoglobuline 6199999 O & <999 "7. :7 *diii de nucleotide n regiunea H. $ea mai variabil regiune a moleculei de anticorp este cea de a III#a secven determinant de complementaritate a catenei O 6aminoacizii D?#J17, locul de unire a segmentelor genice GO#- i -#HO. Aici se gsesc scurte secvene de aminoacizi, foarte variabile, denumite regiuni H. 2le sunt codificate de secvene de nucleotide adugate de enzima terminal1deo%inucleotidil1transfera 6;d;7, activ n celulele limfoide imature, capabil s adauge

IC

nucleotide la captul <> al catenei de A-1 n curs de sintez, fr s necesite matri. Activitatea ;d; este minim la ft i la noul#nscut, dar este stimulat postnatal. 2nzima acioneaz preponderent pe genele catenei O, dar regiunile 1 s#au identificat i la %onciunile G#H ale catenei ". C7 Mutaiile somatice. ,n numr de ordinul milioanelor de variante ale regiunii G pot s apar prin substituii unice de nucleotide n segmentul genic G. Acesta este fenomenul hipermutaiei somatice a domeniilor variabile, care este activat mai ales n condiiile imunizrii intense, ceea ce e&plic creterea afinitii anticorpilor pentru epitopul stimulator. Oipermutaia somatic este mecanismul esenial pentru generarea diversitii anticorpilor. "a om, hipermutaia somatic se produce n prezena antigenului i are loc n centrii germinativi din esutul limfoid periferic. 0earan%rile genice se produc, iniial, la nivelul genei pentru sinteza catenei O. $atena O apare prima n citoplasma limfocitelor. ,lterior are loc rearan%area genelor ce codific sinteza catenei ". 0earan%area genelor se desfoar continuu n limfocitele + din mduva osoas hematogen. "imfocitele care nu genereaz o rearan%are genic productiv sunt eliminate, nefiind utile sistemului imunitar. Probabil c pentru o rearan%are productiv sunt necesare, statistic, multe altele neproductive, ceea ce presupune c pentru fiecare limfocit funcional se pierde un numr mare de celule. ;eleonomic ns, risipa este %ustificat de importana esenial a funciei imunitare pentru organism. @ecanismele de recombinare genic permit ca n conte&tul e&istenei a mai puin de 1999 de gene n linia germinal, organismul s produc o mare diversitate de anticorpi 6c'teva miliarde7, ceea ce constituie repertoriul imunoglobulinelor. -escoperirea mecanismelor genetice de transpoziie, generatoare a uriaei diversiti a specificitii de combinare a anticorpilor, a deschis o nou cale a nelegerii asupra modului n care informaia genetic poate s fie diversificat. @ecanismele de transpoziie sunt active n limfocitele +, dar i n celulele liniei ;, n care codific o diversitate asemntoare a receptorului de antigen al acestor celule, dar nu au fost identificate pentru alte gene. Me%a# )!ele $e#et %e ale $e#err d ver) t' RCT @ecanismele genetice generatoare ale diversitii specificitii de legare a 0$;i sunt asemntoare cu cele care genereaz diversitatea imunoglobulinelor. $alculele teoretice sugereaz c e&ist posibilitatea a cel puin 191: combinaii ;$0 5. .enele codificatoare pentru ;i s#au studiat dup clonarea A-1c, obinut prin metoda hibridrii substractiveIII . 3#a studiat distribuia genelor at't n celulele ; embrionare, c't i n limfocitele ; mature. 3e cunosc mai bine genele care codific lanul P. 2le sunt plasate n : regiuni distincte, care corespund segmentelor G, -, H, $. 1u se cunoate numrul genelor n fiecare regiune. Prima treapt este sinteza A-1c din A01m al limfocitelor ;. A-1c este hibridat cu A01m n mare e&ces, din limfocitele +. 3ecvenele de A-1c care nu hibrideaz cu A01m, probabil vor reprezenta secvenele de A01m specifice numai limfocitelor ;.

I?

0egiunea $ are dou segmente genice distincte! $ P 1 i $ P 5. 0egiunea H are dou grupuri de minigene! H P 1 i H P 5, fiecare cu c'te I segmente genice 6unul este nefuncional7. 0egiunea - are un numr nedefinit de gene 6-1 # -E7, iar regiunea G are circa <9 de gene. Formarea unei gene funcionale implic rearan%area celor : segmente genice, dar rearan%rile sunt mai versatile dec't ale genelor codificare pentru moleculele de imunoglobuline i rezult mai multe variante! Gb # Hb N -b A -bN -b A HbN Gb A -b A Hb. ;ipul dominant de recombinare pare a fi G # - # H # $. -iversitatea 0$; se realizeaz prin mai multe mecanisme! # numrul mare de gene G, -, HN # asocierile combinatoriale diverse ale segmentelor G A -# H. 2le sunt mai diversificate dec't ale genelor pentru imunoglobuline, fiind posibile rearan%ri - A - i G A HN # diversitatea %oncional prin deleie sau adiie de baze, la legarea segmentelor G, -, H. 0earan%rile genice pentru 0$;i se produc n timocitele imature, n zona cortical a timusului, nainte de a a%unge n zona medular. (ig. :9. .enele codificatoare ale receptorului limfocitar de antigen. $atenele Q, P i \, ] sunt codificate de gene G 6ale regiunii variabile7, gene -, H i o regiune genic constant 6$7. 0earan%area genelor G P pe unul din cromosomi, supreseaz rearan%area genelor pe cromosomul pereche 6e&cludere alelic7, astfel c fiecare celul e&prim un singur tip de caten 0$; P. 0earan%area genelor alele Q nu este supus fenomenului e&cluderii alelice i de aceea fiecare celul are dou tipuri de receptori de antigen 60$;7, fiecare av'nd propriul su lan Q, dar lanul P este comun. 3urprinztor, celulele $-D din epiteliul intestinal, care sunt generate e&tratimic, au 0$; Q. format din homodimeri Q # [[[@etoda hibridrii substractive 6prin scdere7 este o cale de a mbogi o anumit secven de nucleotide nainte de clonarea A-1c. @etoda se folosete n cazurile n care sunt disponibile dou tipuri celulare foarte asemntoare ale unui organism, dar proteina de interes este sintetizat de un singur tip. Aceast metod a fost folosit pentru a identifica proteina receptor de antigen a limfocitelor ;, absent pe suprafaa limfocitelor +.

[ @arBerii de suprafa ai limfocitelor ; umane s#au identificat cu dificultate, datorit naturii outbred a populaiei. 3#au notat cu literele ;$-, urmate de o cifr, n ordinea descoperirii! ;$-1, ;$-5 etc. Anticorpii monoclonali au constituit instrumentul esenial de lucru. $el mai cunoscut este marBerul ;$-:, deoarece funcioneaz ca receptor pentru OIG. 2ste un glicopeptid cu o regiune e&tracelular format din : domenii, un domeniu transmembranar i unul citoplasmatic, iar $- D este dimeric i prezint un domediu asemntor cu domeniul variabil al moleculei de imunoglobulin.

II

[[ $- 6cluster designation7 se refer la grupele 6cluster7 de anticorpi monoclonali utilizai pentru identificarea subpopulaiilor de limfocite. Fiecare grup de A@$ are specificitate fa de un anumit marBer celular. DEZVOLTAREA ONTOGENIC A SISTEMULUI IMUNOCITAR

"imfocitele ; i + se difereniaz dintr#o celul stem 6celul mam, tulpin, de origine7, care nu a fost identificat, fiind doar ipotetic, deoarece nu are caractere structurale distinctive. $elula stem este de origine mezenhimal. "a psri i mamifere, celula stem apare n me enhimul paraaortic al embrionului, av'nd un potenial foarte nalt de multiplicare i difereniere. $elula stem este pluripotent, chiar totipotent, deoarece prin multiplicare i difereniere, genereaz toate categoriile de celule sanguine! granulocite, monocite, limfocite, mastocite, megacariocite, eritrocite. -iferenierea iniial a celulei stem este pe linie eritrocitar i mieloid, iar diferenierea pe linie limfoid este ulterioar i simultan cu procesul de maturare. @aturarea limfocitelor semnific dob'ndirea imunocompetenei, adic a capacitii de a recunoate specific antigenul i de a se activa. -in mezenhimul paraaortic, celula stem migreaz n sacul vitelin, unde, pentru un interval de timp se desfoar hematopoe a. "acul vitelin este sediul esenial al diferenierii celulelor stem pe cale limfoid, la psri i mamifere, nainte de migrarea lor n ficat i splin. -up cultivarea embrionului total de oarece, fr sacul vitelin, nainte de migrarea i colonizarea sa cu celule stem limfoide, nu s#a evideniat difereniere celular pe cale limfoid. ,lterior n viaa embrionar, funcia hematopoetic este preluat de ficat i splin. In aceste organe, celulele stem se divid cu o rat nalt i se difereniaz pe linie eritrocitar, mieloid 6granulocitar7, monocitar, limfoid. (n ultima parte a vieii embrionare, funcia hematopoetic este preluat de mduva osoas, chiar dac ficatul i splina pstreaz o activitate hematopoetic foarte limitat i un scurt interval dup natere. $elulele limfoide difereniate n mduva osoas, la psri, migreaz iniial n splin i ficat, iar de aici migreaz n organele limfoide centrale 6timus i bursa lui Fabricius7. "a mamifere, din mduva osoas, limfocitele migreaz n ficat i splin. ,nele i dob'ndesc competena imunitar chiar n mduva osoas, n ficat sau n splin, organe care ndeplinesc funciile bursei la psri, iar altele migreaz n timus. Acesta este circuitul primar al limfocitelor, n care se produce diferenierea independent de antigen, n cursul creia limfocitele devin imunocompetente. Aceast etap se desfoar n organele limfoide primare 6timus, bursa lui Fabricius i echivalenii bursali ai mamiferelor7. In cursul ei, limfocitele dob'ndesc receptori specifici de antigen. (ig. ::. $iferenierea celulelor stem n limfocite ; i + are loc n timus i respectiv, n mduva osoas. "imfocitele mature migreaz n esuturile

ID

limfoide 6dup +lacB, 1JJ?7. (ig. :0. ,n model al cilor de difereniere a celulelor sanguine din celulele stem hematopoetice, n raport cu condiiile de mediu. $elulele stem i cele imature sunt delimitate de linii ntrerupte 6dup IButa, 1JJ57. A II#a faz a diferenierii limfocitelor este dependent de antigen i se produce n circuitul secundar. "imfocitele imunocompetente trec n circuitul sanguin i de aici migreaz n esuturile limfoide secundare, de unde, pe cale limfatic se re ntorc n s'nge. In circuitul secundar, limfocitele au ansa nt'lnirii cu antigenul specific receptorului lor, se activeaz, prolifereaz i se difereniaz spre stadiile de celule efectoare i celule cu memorie. (ig. :>. $iferenierea limfocitelor are loc n dou etape! 17 diferenierea independent de antigen n mduva osoas i n organele limfoide primareN 57 diferenierea dependent de antigen n organele limfoide secundare. @ecanismele moleculare care condiioneaz migrarea limfocitelor din splin i ficat, n organele limfoide primare, nu se cunosc. 2ste un proces aleatoriu sau este programat de receptori celulari, eventual dob'ndii n aceste organe. -ac este un proces condiionat, nseamn c n ficat, celulele limfoide sunt de%a pre#+ 6prebursocite7 i vor migra n bursa lui Fabricius i respectiv pre#; 6pretimocite7, care vor migra n timus. Rol"l ,"r)e l" -a,r % ") 0# d +ere#' erea l !+o% telor B +ursa lui Fabricius este un organ limfoepitelial i se dezvolt ca un diverticul dorsal al intestinului terminal, situat l'ng cloac. Primordiul bursal se observ la embrionul de : zile de incubaie, ca un mugure epitelial n regiunea cloacal. Pe msur ce crete, mugurele se vacuolizeaz i vacuolele prin coalescen, formeaz lumenul bursal. Pe suprafaa intern a cavitii bursale, epiteliul formeaz pliuri longitudinale, prolifereaz i constituie aglomerri celulare 6muguri epiteliali7 n lamina propria. Formarea mugurilor epiteliali este dependent de interaciunea celulelor epiteliale cu esutul mezenhimal. $elulele stem limfoide din sacul vitelin colonizeaz mugurele epitelial n zilele D#11 de dezvoltare embrionar. Fiecare mugure epitelial este colonizat de 1#< celule stem limfoide prebursale. $elulele limfoide prolifereaz intens i formeaz medula foliculilor bursali. At't celulele epiteliale ale bursei c't i celulele stem ale liniei limfoide prolifereaz intens n cursul vieii embrionare, dar i 5#: sptm'ni dup ecloziune. "a : sptm'ni dup ecloziune, bursa conine circa 19 999 de foliculi, fiecare av'nd circa 19C limfocite. $elulele stem limfoide prebursale sunt originare n me enhimul embrionar. (nainte de a a%unge n burs, genele pentru sinteza imunoglobulinelor s#au rearan%at, fiind anga%ate n dezvoltarea pe linia +. "a 15 zile de incubare, n interiorul bursei apar celule care e&prim Ig@ membranar, iar la ecloziune, circa J9M din celulele bursale au Ig@ pe suprafaa lor i sub 1M e&prim Ig. sau IgA. $elulele epiteliale din zona medular formeaz o reea la&, av'nd o structur intern de tip secretor. In zona medular, pe l'ng celulele epiteliale se gsesc limfocite, plasmocite, fagocite.

IJ

0egiunea medular i cea cortical sunt separate prin membrana bazal. "a suprafaa lumenului bursal, celulele epiteliale se difereniaz n epiteliul asociat foliculului, cu funcia de a fagocita i de a transporta materialul antigenic, din lumenul bursal, n regiunea medular. $elulele epiteliale din epiteliul asociat foliculilor i cele din medula bursal sunt diferite n privina capacitii de a fagocita i a activitii enzimatice. "a ecloziune, bursa are <9#:9 mg, atinge dezvoltarea ma&im 6<#: g7 la 5#: luni i se menine p'n la :#? luni, c'nd ncepe s involueze i se atrofiaz la maturitatea se&ual, c'nd dispar complet structurile limfoide i epiteliale. +ursectomia la ecloziune nu mpiedic migrarea limfocitelor + la periferie, pentru c procesul ncepe timpuriu n dezvoltarea embrionar. (ndeprtarea chirurgical a primordiului sau ablaia chimic a epiteliului bursal prin tratament cu testosteron, se poate face la 5#C zile de incubare, nainte ca foliculii bursali s fie populai de celulele stem limfoide. "a pasrea adult timectomizat, numrul de limfocite + n organele limfoide periferice nu este influenat. 3e gsesc plasmocite i anticorpi, dar cu un repertoriu foarte limitat al specificitii de legare, ceea ce denot o maturare e&trabursal foarte limitat a limfocitelor +. $oncluzia este c bursa lui Fabricius nu este strict necesar pentru asamblarea genelor codificatoare ale sintezei imunoglobulinelor i nici pentru diferenierea limfocitelor +, dar are un rol esenial pentru diversificarea clonal a limfocitelor +, adic pentru diversificarea repertoriului lor antigenic. +ursa lui Fabricius este un organ limfoid specializat n care se produce diversificarea somatic e&tensiv a genelor rearan%ate pentru sinteza anticorpilor, c't i e&pansiunea clonal a limfocitelor. 3pre deosebire de mamifere, la care generarea diversitii celor circa 19J specificiti de legare a anticorpilor se face prin legarea combinatorial a segmentelor genice G#-#H 6pentru catena O7 i a segmentelor genice G#H 6pentru catena "7, linia avian de evoluie a vertebratelor a e&ploatat o alt strategie pentru generarea diversitii specificitii de legare a moleculelor de anticorpi. In timpul dezvoltrii embrionare a puiului de gin, potenialul generrii diversitii genetice prin procese de recombinare genic este limitat, deoarece regiunea variabil a catenei O i a catenei " este codificat de secvene genice funcionale unice G i H. $onversia genic are loc cu o rat mare ntre singura gen funcional G 6GO1 sau G"17 i un grup de pseudogene G. -e aceea, rearan%area genelor n celulele embrionare ale liniei limfoide, nainte de migrarea n burs, va produce o diversitate foarte limitat a specificitii de legare a anticorpilor. @icromediul bursal selecteaz i favorizeaz diferenierea celulelor stem bursale care sufer o conversie genic productiv, iar celelalte 6circa J9M7, probabil cu conversie neproductiv, mor prin apopto n interiorul bursei. (ntre celulele epiteliale ale bursei i celulele liniei limfoide se stabilesc interaciuni foarte str'nse, eseniale pentru diversificarea specificitii antigenice a limfocitelor +. 2fectul bursei este mediat de factori humorali, ca de e&emplu, bursopoetina, un polipeptid mic, capabil s induc diferenierea limfocitelor + in vitro. ( +ere#' erea l !+o% telor B la !a! +ere -iferenierea liniei celulare + este ulterioar diferenierii liniilor eritrocitar i mieloid. "a mamifere, primul organ n care are loc diferenierea celulelor +, este ficatul fetal. Iniial, ficatul primete celule precursoare ale liniei limfoide generate n sacul vitelin, dar ulterior el nsui devine sediul funciei hematopoetice. Aceiai funcie de stimulare a diferenierii limfocitelor + ar

D9

avea#o splina fetal i chiar s6ngele circulant, care strbt'nd diferite organe dob'ndete capacitatea de a induce maturarea limfocitelor +. 3tudiul diferenierii limfocitelor + n ficatul fetal este ngreunat, deoarece ficatul nu se poate e&tirpa 6aa cum se pot e&tirpa timusul i bursa lui Fabricius7, iar numrul limfocitelor este mic comparativ cu al celulelor liniei eritrocitare. $elulele precursoare ale liniei + generate n ficatul embrionar i ulterior n mduva osoas, nu e&prim marBeri imunoglobulinici de suprafa. 2le i dob'ndesc competena imunitar n mduv, n ficat sau n splin. @aturarea 6dob'ndirea competenei7 const n e&primarea receptorului imunoglobulinic membranar. In genomul lor are loc rearan%area genelor G, -, H ale catenei O. 8dat cu rearan%area genic, limfocitele sufer o tranziie rapid i devin limfoblaste mari, care se divid. Prin diviziune rezult celule pre#+ mici, care e&prim catena U n citoplasm, dar nu e&prim Ig de membran 6U citR, "#, Igm#7. ,lterior se rearan%eaz genele B ale catenei " i numai dac genele B nu se rearan%eaz cu succes, se recombin genele Q. -up sinteza catenei ", moleculele de imunoglobulin se e&prim pe suprafaa limfocitului. 0earan%area ntr#o combinaie funcional a genelor unuia din cei doi cromosomi, mpiedic recombinarea genelor n cromosomul pereche, suger'nd o e&plicaie pentru fenomenul e&cluderii alelice. Prima imunoglobulin de suprafa a limfocitelor + este Ig@, ca protein integrat, cu o densitate de peste 599 999 de moleculeTcelul. "imfocitele + care e&prim pe suprafaa lor numai molecule Ig@ sunt considerate imature. Alturi de Ig@ pot s coe&iste IgA sau Ig.. Pe msur ce diferenierea limfocitelor + progreseaz, alturi de Ig@ apare Ig-, care treptat devine dominant cantitativ. "imfocitele + mature, n repaus 6neanga%ate7 au pe suprafaa lor, nivele mai nalte de Igdec't Ig@. Acestea sunt celule imunocompetente. "imfocitele + care nu reuesc s genereze o rearan%are funcional a genelor pentru sinteza catenelor O i ", sunt eliminate ntr#un stadiu timpuriu al diferenierii lor. -up stimularea antigenic, limfocitele + mature secret Ig@, Ig. 6una din subclase7, IgA sau Ig2. 1u se difereniaz o linie celular care s sintetizeze izotipul Ig-. T !")"l la !a! +ere & rol"l l" 0# d +ere#' erea l !+o% telor T ;imusul este un organ limfoid voluminos, aezat n partea superioar a mediastinului anterior. Are origine epitelial dubl! deriv din ectodermul perechii a III#a de pungi branhiale i din endodermul celei de III#a pungi faringiene. Primordiile epiteliale fuzioneaz i formeaz primordiul timic epitelial, care pierde legtura cu faringele i lumenul dispare. ;imusul este primul organ limfoid care apare la psri i mamifere. Primordiul timic este strpuns de celulele stem limfoide 6la oarece, n ziua a 11#a de dezvoltare embrionar7, cu originea n sacul vitelin. ,lterior n cursul dezvoltrii fetale, celulele limfoide vin din ficat, iar dup natere, din mduva osoas. "a ftul uman, la 59 de sptm'ni de sarcin, timusul este dezvoltat complet. Ar4 te%t"ra t !")"l"

D1

;imusul este alctuit din doi lobi. Fiecare lob este mprit incomplet, prin septuri con%unctive, n lobuli. "obulii conin o reea de celule epiteliale, printre care sunt diseminate numeroase celule limfoide 6timocite7. 2piteliul timic este difereniat zonal! zona cortical i zona medular. (ig. :/. $omponentele stromale ale micromediului timic. "a animalele tinere, zona cortical formeaz D9M din esutul timic. $elulele epiteliale sunt de form stelat, cu numeroase prelungiri fine care se interconecteaz, form'nd un citoreticulum. 1umrul limfocitelor este mai mare dec't al celulelor epiteliale. "imfocitele sunt mici i pe seciunile colorate cu hemato&ilin, zona cortical este ntunecat, datorit raportului nucleo# citoplasmatic nalt al limfocitelor imature. @a%oritatea limfocitelor6D9#DCM7 sunt imature, dublu po itive 6e&prim nivele nalte ale moleculelor $-: i $-D7 i au un nivel sczut de molecule 0$;. 2le stau n ochiurile unei reele de celule epiteliale i celule dendritice care e&prim molecule $@O. @oleculele $@O au rol esenial n selecia pozitiv a limfocitelor, adic maturarea lor n celule ; mature. 8 mic proporie a limfocitelor sunt blaste. /ona medular este format dintr#o reea dens de celule epiteliale mai mari, de form ovoid, cu prelungiri citoplasmatice scurte, bogate n organite secretoare. (n ochiurile reelei se gsete un amestec de limfocite cu un singur marBer, $-:R sau $-DR, dar e&prim 0$; Q#P, cu o densitate net superioar. 0aportul celulelor $-:RT$-DR este 5T1. "imfocitele sunt situate printre celulele pre entatoare de antigen 6celule dendritice, interdigitate i macrofage7. ,n numr mic 6sub 1M7 de limfocite timice e&prim 0$; \#], diseminate n corte& i medula. (n zona medular apar dou tipuri de structuri, derivate din celule epiteliale! corpusculii 8assal formai din celule epiteliale dispuse concentric, cu aspect general de degenerescen i cavitile chistice, cptuite de celule epiteliale columnare prevzute cu microvili. (ig. :@. 0eprezentare schematic a arhitecturii generale a timusului. 3ubregiunile timusului sunt prezentate n dreapta figurii, iar constituienii lor celulari, n st'nga 6dup Oood i colab., 1JD:7. ;imusul este bogat inervat, cu fibre adrenergice i colinergice, iar neurotransmitorii o&itocina, vasopresina i neurofizina sunt sintetizai endogen de celulele perivasculare medulare i de celulele )nurse*6celule epiteliale mari, asociate cu un numr mare de limfocite7, ceea ce sugereaz raporturile str'nse ale timusului cu sistemul nervos. (n raport cu distribuia limfocitelor, timusul are : regiuni funcionale! # regiunea subcapsular, bogat n limfocite imature 6pre#;7, abia intrate n timusN # corte%ul timic, n care limfocitele se divid cu o rat naltN # 3onciunea cortico1medular, format dintr#un cordon de macrofage )santinel*, cu rolul unei site celulareN

D5

# regiunea medular, cu relativ puine limfocite, care poart marBerii de suprafa proprii limfocitelor mature. ;imusul evolueaz, ating'nd adeseori o dezvoltare ma&im odat cu maturitatea se&ual, dup care ncepe involuia, asociat cu sensibilitatea sa la hormonii steroizi. "a oarece, involuia ncepe la ? sptm'ni. "a om, involuia timic ncepe dup pubertate, esutul reduc'ndu#se cu circa <M pe an, p'n la <C#:9 de ani i cu 1M pe an dup aceea. -imensiunile nu se reduc, deoarece esutul timic este nlocuit de esut gras. Atrofia glandei timice poate fi accelerat de corticosteroi i. Producerea unor cantiti crescute de corticosteroizi sau terapia cu corticosteroizi accelereaz atrofia timic. Fenomenul se numete involuie de stress, pentru c nivelul de corticosteroizi crete n strile de stress i n cele clinice. 3teroizii au aciune citolitic asupra timocitelor corticale. "imfocitele medulare sunt relativ rezistente, datorit enzimei 59 Q#hidro&il steroid#dehidrogenazei. Mat"rarea l !+o% telor T 0# t !") -ezvoltarea repertoriului limfocitelor ;, este un proces comple& de evenimente de selecie pozitiv i negativ, ce implic interaciunea moleculelor de suprafa i necesit influena micromediului timic. "imfocitele ; au raporturi spaiale str'nse cu celulele stromale epiteliale. Acestea furnizeaz asemnale educaionalea care orienteaz maturarea limfocitelor n dou direcii! # dob'ndirea 0$; i a capacitii de a recunoate antigenele e&ogeneN # dob'ndirea toleranei fa de selfN # eliminarea celulelor ; self#reactive, precum i a celor care nu genereaz combinaia genic a unui receptor funcional. $elulele pre#; se difereniaz n ficatul fetal i n mduva osoas. 2le conin o enzim specific # terminal deo%!nucleotidil1transfera a 6;d;7 # cu localizare nuclear. In corte&ul timic, limfocitele pre#; e&prim marBerii $-5 i $-< pe membrana citoplasmatic. Pe msur ce maturarea progreseaz, limfocitele fiind nc n corte%ul timic, e&prim marBerii $-: i $-D. -up e&presia la mic densitate a moleculelor $-: i $-D, se rearan%eaz genele care codific 0$; i celulele devin triplu pozitive60$;R, $-:R, $-DR7. Acestea sufer procesele de selecie, prin care se elimin celulele ; autoreactive i se selecteaz celulele care recunosc moleculele $@O I i $@O II. $'nd limfocitul ; imatur migreaz n ona medular, se pierde fie marBerul $-:, fie $-D. (n acest stadiu dispare marBerul ;d;. $elulele $-: R i $-DR se dezvolt din celule progenitoare dublu pozitive pentru cei doi marBeri, iar acestea i au originea n celule dublu negative. $ob6ndirea toleranei fa de self. (n zona cortical a timusului, limfocitele ) nva* s tolereze selful, fenomen ce const n selecia celulelor care recunosc moleculele $@O e&primate pe suprafaa celulelor epiteliale. Apro&imativ J9M dintre celulele pre#; care a%ung n zona cortical, nu reuesc s traverseze %onciunea cortico#medular. 2le sunt supuse unui proces de selecie po itiv ce const n supravieuirea limfocitelor care recunosc moleculele $@O ale celulelor epiteliale. 3elecia pozitiv const n supravieuirea limfocitelor care recunosc i interacioneaz cu afinitate medie, cu moleculele $@O. "imfocitele care nu genereaz un receptor care s recunoasc moleculele $@O, ca

D<

i cele care leag cu mare afinitate moleculele $@O, potenial inductoare ale conflictelor autoimune 6selecie negativ7, sunt eliminate prin apoptoz. (n zona medular, selecia limfocitelor continu, prin eliminarea clonelor reactive fa de self. @edula timic are particulariti funcionale proprii, care favorizeaz inducerea toleranei fa de self. In contrast cu corte&ul, medula este deschis circulaiei libere a proteinelor de origine sanguin i n structura ei se gsesc $PA 6celule prezentatoare de antigen7 originare n mduva osoas 6macrofage, celule dendritice, i interdigitate7. Aceasta semnific faptul c moleculele self din s'nge a%ung n timus i induc tolerana celulelor ; imature. @oleculele self care nu intr n s'nge 6de e&emplu, moleculele tisulare7, nu a%ung n timus i nu induc selecia negativ. Fa de aceste molecule este posibil ntreruperea strii de toleran. (ig.:.. $iferenierea celulelor D n timus. $elulele autoreactive cu specificitate pentru antigenele self nee&primate n timus, pot s devin tolerante prin contactul e&tratimic cu antigenele. ;$01 = receptor \, ]N pre# ;$05 = receptor pre#; Q, PN ;$05 = receptor matur Q, PN ;d; = terminal deo&inucleotidil transferaza 6dup 0oitt, 1JJI, modificat7. Prin selecie negativ, n zona medular, sunt eliminate limfocitele ; self#reactive, adic cele cu potenialul de a se activa fa de antigenele self asociate moleculelor ;M8. 2liminarea acestor celule este esenial pentru inducerea toleranei fa de self. 3unt de asemenea eliminate celulele ; care nu genereaz o combinaie genic pentru codificarea unui receptor funcional de antigen. 3e matureaz limfocitele care genereaz receptori specifici fa de epitopii nonself. 3elecia negativ este dependent de cantitatea de antigen ce a%unge n timus. -e e&emplu, un antigen abundent 6albumina7 realizeaz o concentraie mare n timus i determin o selecie negativ complet, adic elimin ntregul spectru de limfocite ; A cu receptori de nalt i %oas afinitate. -e aceea, tolerana fa de albumin nu va fi niciodat ntrerupt i nu se cunosc maladii autoimune cu reactivitate limfocitar fa de albumin. Alte molecule ptrund n timus, n cantiti mici, pe cale sanguin6de e&emplu, insulina7 i selecia negativ este incomplet, adic sunt eliminate numai celulele ; cu receptor de mare afinitate pentru antigen. In condiii e&perimentale, prin in%ectarea antigenului la concentraii mari, tolerana fa de aceste molecule poate fi ntrerupt i se poate stimula reactivitatea autoimun. 3e consider c e&primarea 0$; i a moleculei $- :, ce interacioneaz cu moleculele $@O II, inhib e&primarea moleculelor $-D, sau diferenierea celulelor cu un singur marBer6$- : ori $-D7 este un proces stochastic. 0ezultatul final al diferenierii limfocitelor ; n timus, const n generarea receptorilor celulelor ;, cu capacitatea de a tolera selful, asociat cu moleculele $@O, i de a reaciona la moleculele nonself, ceea ce este esenial pentru interaciunile celulare n cursul elaborrii rspunsului imun. 1umrul celulelor ; mature n organele limfoide secundare rm'ne constant, la o valoare ridicat, n condiiile n care timusul involueaz treptat. $onstana numeric a celulelor ; este atribuit duratei lungi de via a acestor limfocite, dar nu este e&clus producerea de novo n alte esuturi 6intestin, ficat, mduv osoas7. -a%tor %el"lar & 4"!oral a d +ere#' er l !+o% telor

D:

Pe baza datelor e&perimentale acumulate se poate deduce e&istena a cel puin dou mecanisme active asupra diferenierii limfocitelor n organele limfoide centrale. @ecanismele propuse nu se e&clud. $oe&istena i sinergismul lor demonstreaz importana organelor limfoide centrale n controlul procesului de difereniere i comple&itatea acestuia. @a%oritatea cercetrilor au vizat factorii de difereniere ai timusului, dar rezultatele pot fi e&trapolate asupra factorilor bursali ai diferenierii limfocitelor + la psri. 3#au conturat dou ipoteze referitoare la factorii de difereniere ai limfocitelor! ipoteza celular i ipoteza hormonal 6humoral7. (n acord cu ipoteza celular a micromediului epitelial al timusului, diferenierea limfocitelor ; s#ar realiza prin contactul direct al pretimocitelor cu epiteliul timic. 2&perienele de e&tirpare a timusului la animalele nou nscute, cu sistem imunitar imatur au evideniat c prezena timusului funcional este o condiie esenial pentru funcia optim a imunitii mediate celular. 2&tirparea timusului la animalele nou#nscute este urmat de instalarea )sindromului de epuizare*6@iller, 1J?17, ale crui simptome se manifest progresiv mai intens i n esen reflect incapacitatea organismului de a se apra fa de infeciile virale i fungice 6disfuncia imunitii mediate celular7. .refa timusului 6de la organisme singenice7 le restabilete treptat starea normal. 2&tirparea timusului la organisme mature a evideniat c absena timusului este compatibil cu viaa, fr manifestarea unor deficiene notabile. 3#a dedus astfel, c mecanismele celulare de contact al limfocitelor cu celulele epiteliului timic ar fi active numai n primele faze ale maturrii limfocitelor ;, dar absolut necesare pentru diferenierea lor. -up datele actuale, mecanismul celular al influenei timice nu este suficient pentru diferenierea celulelor ;. 3#a emis ipoteza hormonal, care consider c procesul de difereniere i maturare imunitar ar continua dup ce timocitele prsesc timusul. Oormonul secretat de celulele epiteliului timic ar e&ercita o aciune stimulatoare asupra diferenierii limfocitelor, at't intratimic c't i la distan, dup trecerea sa n circulaie, asupra celulelor limfoide circulante sau localizate n organele limfoide secundare, continu'nd astfel influena direct a epiteliului timic. (n favoarea e&istenei unui factor hormonal timic s#au adus argumente e&perimentale, care pot fi grupate n dou categorii! a7 +%periene de restabilire a funciei imunitare sub aciunea factorilor timici! de e&emplu, ndeprtarea timusului la oarecele nou#nscut este urmat de pierderea imunitii mediate celular. Implantarea subtegumentar a unei grefe de timus, plasat ntr#o camer special cu perei poroi, permeabil pentru molecule, dar impermeabil pentru celule, restabilete imunocompetena, ceea ce demonstreaz c nu este strict necesar contactul limfocitelor cu celulele epiteliului timic. 2ste suficient ca mediatorul 6mediatorii7 chimic secretat de timus s fie prezent n organism pentru a se produce maturarea limfocitelor ;. Pe de alt parte, oarecii#femele timectomizate la natere, i recapt competena imunitar n timpul sarcinii, sub influena hormonilor timici fetali, care trec n circulaia matern. b7 +videnierea factorilor timici prin metode biochimice! unii hormoni au fost izolai din timus, iar alii din s'nge. 1u sunt ntru#totul asemntori hormonilor convenionali, pentru c nu se pot substitui complet esutului timic i pentru faptul c unele molecule din categoria hormonilor timici pot fi generate i n alte esuturi. Factorii serici de origine timic dispar dup timectomie i reapar dup grefa de timus. 2&istena factorilor serici de origine timic argumenteaz n favoarea ipotezei

DC

c imunocompetena se dob'ndete at't n faza timic a limfocitelor, c't i la distan, dup ce limfocitele au prsit timusul. -enumirea factorilor de imunocompeten variaz mult, n funcie de origine, proprieti biochimice, efecte biologice. -in timusul de viel s#au e&tras c'teva polipeptide, iar unele s#au preparat pe cale sintetic. 8 serie de componente manifest activitate imunobiologic! timulina, timopoetina, timozinele. Dimo inele 6evideniate de .oldstein7 din cea de C#a fracie proteic de e&tract timic de viel, reprezint un grup de polipeptide cu greutatea molecular cuprins ntre 1999 i 1C 999 -, stabile la D9o. Prin combinarea metodelor analitice de cromatografie analitic i gel#filtrare, din aceast fracie s#au izolat 1? polipeptide. 2le induc, in vitro, sinteza @IF de ctre limfocite, precum i diferenierea celulelor formatoare de anticorpi. -e asemenea, timozinele restabilesc funciile imunitare la animalele timectomizate neonatal i la persoanele v'rstnice, la care competena imunitar diminu datorit involuiei timusului. -in acest amestec de polipeptide, cel mai activ este un polipeptid de 19D aminoacizi 615 B-7, a crui secven a fost determinat. Dimopoetina este un hormon polipeptidic al timusului de viel, izolat de .oldstein, format din :J de aminoacizi, evideniat n primul r'nd datorit efectelor sale asupra transmiterii neuromusculare i mai puin prin efectele sale asupra sistemului imunitar. +olnavii atini de m!asthenia gravis prezint, de regul, o hiperplazie timic 6timom7. 3#a creat sistemul e&perimental al acestei maladii, ceea ce a permis izolarea unui polipeptid care modific transmiterea neuromuscular, iar la indivizii bolnavi provoac oboseala muscular. 3#au identificat dou variante de timopoetin, care difer prin doi aminoacizi i stimuleaz activitatea limfocitelor ;. Dimulina ?(actorul timic seric, F;37 s#a izolat din serul uman, din serul de porc i din timusul de viel. In acord cu criteriile clasice ale endocrinologiei i fiziologiei, timulina este singurul polipeptid de origine timic recunoscut ca hormon, adic este secretat i reglat de timus. ;imulina lipsete n serul oarecelui nud, iar la animalele convenionale, dispare dup timectomie, dar reapare dup grefa timic. 2ste un peptid cu greutatea molecular de J99 -, cu urmtoarea secven a celor J aminoacizi! .lu#Ala#"Es#3er#.ln#.lE#.lE#3er#Asn. $oncentraia F;3 depinde de v'rst i scade odat cu scderea greutii timusului. ;imulina are activitate biologic numai c'nd este cuplat eWuimolar cu /n. 2chilibrul /n este alterat la v'rstnici. 3e pare c hormonii timici acioneaz asupra limfocitelor ;, dup ce acestea au prsit timusul. 2fectul lor stimulator se e&ercit asupra tuturor categoriilor funcionale de limfocite ;! helper, citoto&ice, supresoare. JbiKuitina este un polipeptid ce conine I: de aminoacizi 6D,: B-7 care se gsete n timus i n ma%oritatea esuturilor la animale i chiar la plante. In vitro, stimuleaz diferenierea limfocitelor precursoare ale liniei ; i +, ceea ce e&plic pstrarea funciei imunitare dup timectomizarea animalelor mature. ORGANELE LIMFOIDE SECUNDARE ./ERIFERICE0

D?

"istemul limfatic, alctuit din vasele limfatice, limf i organele limfoide secundare, este parte integrant a sistemului vascular sanguin al veretebratelor, dar la mamifere are rol esenial n transportul i distribuia antigenelor, anticorpilor i a celulelor imunocompetente. $elulele tumorale se disemineaz 6metastazeaz7 frecvent pe cale limfatic. Funcia primar a sistemului limfatic este de a colecta lichidul proteic interstiial, care rezult prin e&travazarea continu la nivelul capilarelor sanguine i de a#l readuce n sistemul vascular sanguin, menin'nd astfel constana volumului plasmei sanguine circulante. "a originea sistemului limfatic se gsesc capilarele limfatice, delimitate de o membran bazal subire, de care sunt ataate la& celulele endoteliale. Prin aezarea lor, aceste celule au rolul unor valve, care favorizeaz intrarea limfei n capilar i limiteaz ieirea. @embrana bazal este continu i este ncon%urat de fibre musculare netede. Inveliul muscular al vaselor limfatice manifest contracii ritmice intrinsece, care genereaz o presiune de c'iva mm Og, favoriz'nd circulaia limfei. (ig.:B. Principiul formrii limfei. Presiunea hidrostatic la captul arterial al capilarului determin ieirea fluidului proteic prin peretele capilar. "a captul venos, presiunea hidrostatic este mic i presiunea coloid#osmotic a proteinelor plasmatice determin reintrarea apei, electroliilor i cristaloizilor n circulaie. Proteinele nu pot fi reabsorbite i mpreun cu o parte a apei i srurilor, sunt drenate prin limf. -iametrul capilarului permite trecerea hematiilor, iar leucocitele, fiind mai mari, trebuie s se deformeze. Aceasta creeaz o rezisten la curgere, ceea ce determin o cdere a presiunii ntre captul arterial i cel venos al capilarului 6dup Oall,1JJD7. $onfluena capilarelor limfatice formeaz vase mai mari, prevzute cu numeroase valve bicuspide ce mpiedic curgerea gravitaional a limfei. "imfa mamiferelor poate fi compartimentat n limf periferic, intermediar i central. ,imfa periferic 6cea care nu a trecut printr#un ganglion limfatic7 are un coninut sczut de celule albe 6sub 1999Tmm<7, de dimensiuni mici, din care circa DCM sunt celule ; i circa 19M sunt celule cu voal. ,imfa intermediar 6din segmentul vascular n care se gsesc ganglionii limfatici7 conine un numr mare de limfocite mici 659 999Tmm <7, dintre care ICM sunt limfocite ; care au e&travazat la nivelul venulelor postcapilare din ganglioni. ,imfa central se gsete n vasele limfatice n aval de ganglioni, ce se unesc pentru a forma trunchiurile limfatice mari 6intestinal, toracic, ductul limfatic drept, ductul cervical7. "a mamifere, pe traseul vaselor limfatice care transport limfa de la periferie spre marile vene de la baza g'tului, se gsesc ganglionii limfatici. "istemul limfoid este alctuit din limfocite, ca element celular esenial i din organele limfoide primare i secundare.

DI

8rganele limfoide secundare reprezint suportul anatomic al rspunsului imun i sunt reprezentate de urmtoarele tipuri de structuri! # ganglionii limfatici, splin, esuturi limfoide organizate asociate cu suprafeele mucoase 6tonsile, plci PeEer, esutul limfoid asociat mucoasei gastrointestinale6.A";7, respiratorii 6+A";7N # altele sunt formaiuni limfoide difuze, reprezentate de aglomerri de diferite categorii de celule n care predomin limfocitele, asociate cu tractul gastrointestinal, respirator i urogenital. 4esuturile limfoide au localizri strategice, la porile de intrare a antigenelor n organism! tegumentul sau mucoasele. Aici se gsesc aglomerri de limfocite i celule care transport i prezint antigenele. 2le interacioneaz funcional, pentru a capta i neutraliza materialele nonself. 8rganele limfoide secundare au urmtoarele particulariti funcionale! # sunt populate tardiv cu limfocite care i#au dob'ndit competena funcional n organele limfoide primareN # la nivelul lor, limfopoeza este diminuat sau ine&istentN # la nivelul capilarelor care le irig, limfocitele prsesc flu&ul sanguinN # e&tirparea lor total este imposibil, datorit caracterului difuzN # conin proporia cov'ritoare a limfocitelor, segregate n arii distincte! aria celulelor D conine un numr mic de limfocite +, dar are un numr mare de celule dendritice, cu rolul de a prezenta antigenele pentru activarea limfocitelor ; i +N aria celulelor B conine n principal foliculi primari, ce reprezint situsurile n care limfocitele + activate, prolifereaz i formeaz centrii germinali, nainte de a se diferenia n celule productoare de anticorpi i celule de memorieN (ig. 02. 0eeaua ganglionilor limfatici. Aglomerarea celulelor cu funcie imun n esuturi limfoide secundare mrete eficiena reactivitii imunitare prin distribuia limfocitelor ; i + n arii ce favorizeaz interaciunea lor cu celulele care prezint anti#genul i prin caracterul de reea, care permite circulaia limfocitelor n ariile n care antigenele sunt concentrate. Ga#$l o# l !+at % .anglionii lim#fatici sunt organe lim#foide secundare, situate n grupuri pe traseul vaselor limfatice care dreneaz ariile super#ficiale ale pielii sau viscerele, cu dimensiuni de la c'iva mm p'n la 1cm. 3uprafaa lor este acoperit cu o capsul con3unctiv din care pornesc numeroase trabecule ce strbat parenchimul ganglionar. $apsula este format din esut colagenic dens. In structura ganglionului limfatic se distinge stroma, format din fibre i celule reticulare. $elulele reticulare sunt fibroblaste mari, ramificate, care produc fibre reticulare. In ochiurile reelei se gsesc celule limfoide, macrofage, vase limfatice i sanguine, care formeaz parenchimul ganglionar. .anglionii limfatici au o vascularizaie dubl! limfatic i sanguin. "imfa este adus n ganglion prin cele C#D vase limfatice aferente, care se vars n sinusul subcapsular. -e aici, printre

DD

trabeculele con%unctive, pornesc radiar sinusurile corticale, care ulterior devin sinusuri medulare. Acestea se continu cu vasele limfatice eferente. Parenchimul ganglionar are o structur difereniat zonal. 3e disting zona cortical i cea medular. /ona cortical este divizat n dou subzone! # corticala e%tern foarte bogat n limfocite +N # corticala profund 6paracortical7, populat de limfocite ; 6la oarecele nud A atimic# corticala profund este atrofiat7. (n subzona cortical e%tern se gsesc numeroase aglomerri de limfocite, denumite foliculi limfoi i primari, formai n special din limfocite mici. Au diametrul de circa 1 mm i sunt distribuii printre limfocitele dispersate uniform. Foliculii primari sunt formai din limfocite + mici, mature, neanga%ate, mpachetate str'ns. 8 component nelimfoid important a foliculilor primari o constituie aglomerrile de celule foliculare dendritice6$F-7. Prin receptorii lor pentru complement i pentru Fc, $F- concentreaz comple&ele imune n aria limfocitelor +. -up stimularea antigenic, n timpul elaborrii rspunsului imun, foliculii primari devin foliculi limfoi i secundari, datorit proliferrii celulare intense, cu o zon central format din celule limfoide mai mari 6celule + de memorie7, macrofage i celule foliculare dendritice, denumit centru germinativ. $entrul germinativ este sediul proliferrii celulare intense dup stimularea antigenic. 3ubzona cortical profund 6paracorte&7 este o arie limfoid situat sub corte&, ntre foliculi i zona medular. "imfocitele i limfoblastele sunt dense, iar celulele prezentatoare de antigen 6 n special celule interdigitate, celule cu voal7 sunt diseminate printre limfocite. Paracorte&ul este o arie ;#dependent, limfocitele; n repaus i activate fiind ma%oritare. Intern fa de paracorte& sunt cordoanele medulare, populate cu macrofage i plasmocite, care duc spre sinsul medular. ,nitatea funcional a paracorte&ului este cordonul paracortical, care se ntinde de la baza foliculului, p'n la cordonul medular subiacent. $ordonul paracortical are un diametru de 199#1999 Um i este spaiul n care celulele dendritice prezint antigenul, rarelor clone de limfocite ; specifice i favorizeaz activarea lor. /ona medular conine esut limfoid dens, sub forma unor cordoane aezate printre sinusurile medulare. In cordoane predomin limfocitele + productoare de anticorpi 6plasmablaste i plasmocite mature7, asociate cu macrofage, celule ;. 3inusurile limfatice sunt cptuite cu celule, a cror suprafa apical prezint denivelri care ncetinesc percolarea limfei prin ganglion. Antigenele care au penetrat barierele protectoare de suprafa a%ung n ganglionii limfatici prin vasele limfatice aferente. @acrofagele care cptuesc sinusurile limfatice, preiau antigenele i le transfer zonelor ;#dependent i ;#independent, unde sunt recunoscute de limfocitele care au receptori specifici. 3timularea limfocitelor din foliculii primari, de ctre antigenele ;#independente, induce dezvoltarea foliculilor secundari, cu formarea centrilor germinali n care se gsesc i sunt reinute limfocitele + de memorie. $elulele + activate de antigen, migreaz n cordoanele medulare i se difereniaz n plasmocite productoare de anticorpi. Anticorpii prsesc ganglionul limfatic prin vasul limfatic eferent.

DJ

(ig. 07. "tructura unui ganglion limfatic. 3ub capsula con%unctiv se gsete sinusul subcapsular, tapetat cu celule fagocitare. "imfocitele i antigenele ptrund n ganglion prin vasele limfatice aferente. $orte&ul conine aglomerri de limfocite + 6foliculi limfoi i5. @a%oritatea foliculilor posed un focar de celule proliferante, denumit centru germinativ. /ona paracortical conine, n esen, limfocite ;, ma%oritatea fiind n contact cu celule interdigitate, prezentatoare de antigen. Fiecare ganglion are o vascularizaie arterial i venoas proprie. "imfocitele circulante intr n ganglion la nivelul endoteliului specializat al venulelor post#capilare ale zonei paracorticale. @edula conine limfocite ; i + i ma%oritatea plasmocitelor organizate n cordoane. "imfocitele prsesc ganglionul numai prin vasul limfatic eferent. Antigenele ;#dependente a%ung n ganglioni odat cu limfa aferent, fiind transportate de celulele cu voal n zona paracortical. Activarea i proliferarea celulelor ; produc creterea n volum a ariei ;#dependente. 3'ngele circul n direcie opus limfei. *rtera aferent ptrunde n ganglion la nivelul hilului i se continu cu arteriolele, care formeaz un bogat ple% capilar. "a nivelul corte&ului profund, din ple&ul capilar se formeaz venulele postcapilare cu endoteliu nalt. "a acest nivel, limfocitele prsesc circulaia sanguin prin celulele endoteliale i se distribuie n zonele caracteristice! limfocitele + A n corte&ul e&tern, iar limfocitele ; A n corte&ul profund 6paracorte&7. -up ce strbat lent teritoriile ganglionare specifice, limfocitele trec n zona medular. Aici se colecteaz sinusurile limfatice medulare, care dreneaz limfa spre vasele limfatice eferente. "imfocitele prsesc ganglionul prin vasele limfatice eferente. $irculaia lent a s'ngelui n vasele din ganglionul limfatic, permite unui numr mare de limfocite s treac din s'nge n limf, unde pot nt'lni antigenul corespunztor. 3e mrete astfel ansa ca un numr mic de limfocite imunocompetente s nt'lneasc antigenul specific i s reacioneze proliferativ. 8rganizarea ganglionului limfatic trebuie s favorizeze interaciunile dintre antigene i limfocite. .anglionii conin numeroase celule capabile s prelucreze i s prezinte antigenele! macrofage, celule dendritice, celule interdigitate i celule cu voal. In ganglioni, populaia celular se re noiete continuu, prin traficul celulelor limfoide i al celulelor accesorii Funciile ganglionului limfatic sunt urmtoarele! # filtrarea limfei i epurarea componentelor nonself 6celule bacteriene, to&ine etc.7 de ctre fagocitele ganglionareN # este suportul material al proliferrii limfocitelor i al sintezei anticorpilor, dup stimularea antigenic. "imfa eferent este filtrat i mbogit n anticorpi i n limfocite. (ig. 09. "tructura splinei. 3plina este alctuit din pulp roie i pulp alb. Pulpa roie ncon%ur ariile pulpei albe. Pulpa alb conine foliculi primari i centrii germinativi, ca i n ganglionul limfatic.

J9

-up stimularea antigenic inductoare a rspunsului imun mediat humoral, n subzona cortical e&tern 6a celulelor +7 se produc ample modificri citologice, iar dup administrarea unui antigen timodependent, modificrile citologice apar i n subzona cortical profund 6a celulelor ;7. Spl #a 3plina este cel mai mare organ limfoid, cu rol important n funcia imunitar. 3plina este acoperit de o capsul con%unctiv, cu puine fibre musculare i incapabil de contracii ample, de la care pornete o reea de trabecule con%unctive, ce mpart esutul splenic n com#partimente comunicante. (n fiecare compartiment se gsesc pulpa alb i pulpa roie, spri%init pe esutul con%unctiv reticular . (n trabeculele con%unctive se gsesc arterele trabeculare 6ramificaii ale arterei splenice7. $'nd ating diametrul de circa 599 Um, arterele prsesc trabeculele con%unctive i ptrund n parenchimul splenic. 2le dau ramificaii laterale 6arteriole7, fiecare arteriol fiind acoperit de un manon dens de esut limfoid. In %urul arteriolei se gsesc limfocite, distribuite ntr#o strom con%unctiv, ce formeaz teci limfoide periarteriolare 6PA"3 = periarteriolar lEmphoid sheats7 sau manoane coa%iale de limfocite, n %urul arteriolelor. Arteriola are o poziie central n manonul limfoid. (ig. 0:. "tructura pulpei albe a splinei. Pulpa alb este mprit ntr#o zon central bogat n celule ; A teaca limfoid periarteriolar 6PA"37 A ncon%urat de foliculi primari care conin celule +. In fiecare folicul primar se gsete o aglomerare de celule foliculare dendritice 6F-$7. Pulpa alb este separat de pulpa roie 60P7 prin sinusul marginal 6@37. 3inusul marginal este inclus ntr#un strat de limfocite ale zonei marginale 6@/7. Adiacente sinusului marginal sunt macrofagele metalofile, care se crede c au rol important n reglarea traficului n spaiile pulpei roii i albe. $analele colapsate 6$$7 par a fi ariile prin care limfocitele intr i ies din pulpa alb. $A = arteriola central. ;otalitatea tecilor periarteriolare 6manoane limfoide coa&iale7 formeaz pulpa alb a splinei. @anoanele au o zon intern, bogat n limfocite ; i o zon e&tern bogat n limfocite +, grupate n aglomerri denumite foliculi. "imfocitele pulpei albe se vd pe seciunea esutului ca zone alb# cenuii, ncon%urate de pulpa roie. (ig. 00. Dopografia regiunilor timo#dependente 6;-7 i timo#independente 6;I7 n splin. ;eaca limfocitar periarteriolar constituie regiunea ;-, n timp ce foliculii limfoizi i esutul limfoid adiacent reprezint zona ;I. ,nele arteriole, dup ieirea din manonul limfoid 6pulpa alb7 dau numeroase ramificaii ) n perie*, denumite arteriole penicilate, care ptrund n pulpa roie. Pulpa roie ncon%ur pulpa alb i este format din cordoane de esut splenic 6cordoane +ilroth7 situate printre sinusurile venoase. ,nele capilare arteriale se pot conecta cu sinusurile venoase, dar ma%oritatea arteriolelor penicilate se deschid n cordoanele +ilroth 6circulaie deschis7. 3inusurile venoase sunt canale vasculare, delimitate de endoteliu i o membran bazal. 2ndoteliul este perforat de spaii poligonale mari, aezate ordonat.

J1

$ordoanele +ilroth sunt formate dintr#o reea tridimensional de celule reticulare i fibre reticulare, care formeaz o unitate funcional cu adventicea sinusurilor. In aceast reea se deplaseaz celulele splenice libere cu funcie fagocitar 6macrofage7. $ordoanele +ilroth comunic cu sistemul venos al splinei. 3plina este un filtru al s'ngelui, legat pe o derivaie a marii circulaii. "a nivelul cordoanelor +ilroth, circulaia are caracter )deschis*, deoarece s'ngele vine n contact direct cu celulele splenice. In ochiurile cordoanelor +ilroth se gsesc sinusurile. 2le sunt capilare cu diametrul neuniform, tapetate cu celule din seria macrofagelor, care au rolul de a fagocita antigenele particulate. In sinusuri se deschide o parte din arteriolele penicilate 6circulaie nchis7. @acrofagele din peretele sinusurilor i din cordoanele de esut splenic rein i capteaz hematiile mbtr'nite i plachetele. @acrofagele e&prim receptori pentru Fc al Ig., astfel c elementele figurate tapetate cu Ig. 6autoanticorpi7 sunt fagocitate. Prin mbtr'nire, eritrocitele i pierd acidul sialic de pe suprafa, e&pun'nd manoza i galactoza, care sunt recunoscute de celulele splenice. Alte arteriole, dup ieirea din manonul limfoid se termin n sinusul onei marginale, care se deschide ntr#un sinus venos al pulpei roii. /ona marginal const dintr#o reea fin de fibre reticulare, n ochiurile creia se gsesc limfocite +. 3inusul marginal este adiacent foliculilor limfatici i const din spaii vasculare aplatizate, ce se continu cu sinusurile pulpei roii. Peretele su este foarte permeabil i permite trecerea limfocitelor din s'nge n pulpa alb 6 n teaca periarteriolar7. 3inusul zonei marginale formeaz grania dintre pulpa alb i pulpa roie i reprezint ona de schimb celular dintre cele dou compartimente. -in pulpa alb, limfocitele trec n sinusurile marginale, apoi n sinusurile pulpei roii i de aici n sistemul venos al splinei. (n pulpa alb se gsesc foliculii limfoi i primari. 2i sunt localizai la periferia tecii limfoide periarteriolare sau n imediata ei vecintate. In manoanele limfoide periarteriolare, limfocitele au o distribuie selectiv! celulele ; segreg predominant n tecile periarteriolare, iar celulele +, n foliculii limfoizi. Antigenele din s'nge sunt preluate de macrofagele zonei marginale i a%ung n pulpa alb. 3inteza anticorpilor fa de antigenele circulante este una din funciile ma%ore ale splinei. $elulele + activate n pulpa alb, migreaz n pulpa roie, unde se gsete ma%oritatea plasmocitelor. In zona marginal se gsete ma%oritatea celulelor 1L. 3plina nu are circulaie limfatic. "a nivelul splinei, limfocitele ies din s'nge prin peretele capilarelor zonei marginale, care este foarte permeabil i se distribuie n pulpa alb, iar de aici strbat drumul invers i a%ung n pulpa roie, n sinusurile venoase. Acestea comunic at't cu capilarele zonei marginale, c't i cu sistemul venos al splinei. "imfocitele prsesc splina prin vena splenic. S )te!"l !"# tar al !"%oa)elor @ucoasele 6digestiv, respiratorie, genital, urinar7, din punctul de vedere al contactului cu antigenele, constituie structurile cele mai vulnerabile ale organismului uman i animal. In special la nivelul intestinului, contactul permanent cu microorganismele creeaz condiiile ptrunderii acestora n mediul intern. @ucoasele reprezint nu numai o entitate anatomic, ci i una funcional

J5

imunologic. Particularitile lor structurale i funcionale tind s le delimiteze tot mai mult de aparatul imunitar sistemic. 3istemul imunitar al mucoaselor, la mamifere, este o reea integrat de esuturi, formate din celule specifice, celule limfoide i molecule cu funcie imunitar, protectoare fa de infeciile pe calea membranelor mucoase. "a nivelul structurilor de contact cu antigenele, sistemul imunitar al mucoaselor este divizat anatomic i funcional! structurile +A";6bronchus associated lEmphoid tissue7 i .A";6gut associated lEmphoid tissue7. "a roztoare, structurile +A"; sunt bine dezvoltate, av'nd rolul de a rspunde la antigenele inhalate. "a om, structurile +A"; propriu#zise nu se dezvolt, iar esuturile limfoide ma%ore echivalente sunt tonsilele palatine i formaiunile adenoide 6tonsilele nazofaringiene7. Impreun, ele formeaz o barier fizic de esuturi limfoide, care constituie inelul Calde!er. ;onsilele i adenoidele se descriu ca 1A"; 6nasal associated lEmphoid tissue7. 3tructurile limfoide asociate mucoaselor 6@A";7 includ c'teva categorii de celule antigen#reactive! celule +, pozitive pentru moleculele $@O II, macrofage, celule "angerhans, celule dendritice, celule foliculare dendritice, plasmocite. Aceste celule sunt fie distribuite difuz, fie organizate n structuri anatomice distincte! foliculi limfoizi, plcile PeEer, amigdalele. *migdalele 6tonsilele palatine7 sunt aezate n unghiurile mandibulare. -imensiunile unei amigdale msoar 5,C cm lungime, 1,C cm lime i 1 cm grosime. ;onsilele i adenoidele sunt singurele structuri limfoide asociate tractului digestiv, acoperite de o capsul care ader intim de esutul limfoid subiacent. Pe faa intern 6care privete spre vestibulul faringian7 se gsesc deschiderile criptelor tonsilare. $riptele ptrund ad'nc n masa limfoid a tonsilei, uur'nd contactul celulelor reactive 6macrofage i limfocite7, cu antigenele care ptrund pe care digestiv i respiratorie. $irca C9M dintre celulele tonsilare sunt limfocite +, constituite n foliculi care conin centrii germinali. @a%oritatea limfocitelor + au ca receptor de antigen Ig., iar restul sunt Ig@ R i IgAR. $irca :9M din celulele tonsilare sunt limfocite ;. (ig.0>. 0olul potenial al 1A"; pentru dezvoltarea imunitii mucoaselor. ;onsila palatin prezint cripte ad'nci. 3chema ilustreaz categoriile ma%ore de celulele prezentatoare de antigen, 6"$ = celule "angerhans, @f = macrofageN F-$ = celule foliculare dendritice7, centrul germinativ al celulelor + i ariile parafoliculare cu celule ; 6;-A7. "imfocitele efectoare i cele de memorie recircul pe calea sistemului imunitar comun al mucoaselor 6dup @c.hee, 1JJD7. *pendicele este o structur limfoid asociat intestinului, prezent numai la iepure, maimue antropoide i la om. Prezint structuri limfoide cu organizare similar plcilor PeEer, cu un dom bine definit, aglomerri de celule + organizate n foliculi i arii interfoliculare bogate n celule ;. 2piteliul domului este permeabil, permi'nd trecerea liber a antigenelor solubile i a celor particulate, ca i a bacteriilor. (oliculii limfoi i sunt structuri asociate, caracteristice mucoasei intestinale, care se gsesc fie ca foliculi solitari de 9,C#5,9 mm, foarte numeroi n partea terminal a ileonului, fie ca foliculi agregai ce formeaz plcile Pe!er. Foliculii 6solitari sau agregai7 sunt localizai n corionul mucoasei, dar ptrund i n submucoas.

(ig. 0/. 3tructura schematic a unei plci Pe!er i a unui ganglion me enteric. O2G = venule cu endoteliu naltN $. = centru germinativ.

J<

8 plac Pe!er conine 59#<9 de foliculi agregai. Are form circular sau alungit 6eliptic7, cu a&ul mare orientat n lungul intestinului. 3unt mai numeroase n ileonul terminal. "ungimea este variabil, ntre 1#15 cm, iar limea, ntre 9,D#1cm. Plcile PeEer ocup marginea liber a intestinului6niciodat marginea mezenteric7. 2le se formeaz n cursul dezvoltrii fetale, ating nu# mrul ma&im la pubertate 6peste 5997 i scad ncet cu v'rsta. 3e estimeaz c 19M din celulele limfoide umane sunt asociate cu structurile limfoide ale tractului gastro#intestinal Fiecare folicul al plcii PeEer este format dintr#o aglomerare de macrofage, limfocite, plasmocite. Ariile interfo#liculare sunt bogate n limfocite ;. 3tructura foli#cular individualizat este separat de lumenul intes#tinal prin structuri speci#alizate, denumite domuri! domul epitelial, alctuit din celule epiteliale dife#reniate, de aspect cubo#idal, ale mucoasei intes#tinale i domul con3unctiv subepitelial. "a nivelul domului, epiteliul intestinal prezint puine celule mucoase i puini microvili, dar e&ist n schimb, o categorie de celule specializate funcional, denumite celule M 6membraneous7, ataate de enterocite prin comple&e %oncionale. Prezena vimentinei i cheratinei n celulele @ este dovada originii lor epiteliale. "a nivel microscopic, celulele @ se recunosc prin asocierea lor str'ns cu limfocitele intraepiteliale. 2le au pliuri membranare mari, bazolaterale, n care stau limfocitele intraepiteliale. $elulele @ formeaz o )umbrel* deasupra unui spaiu n care se gsesc limfocite intraepiteliale, macrofage, celule dendritice. $elulele @ au rolul de a pinocita antigenele solubile din lumenul intestinal, dar preiau i antigene particulate6virusuri, bacterii, protozoare7. Inglobarea antigenului nu este urmat de degradare lizosomal, ci antigenul intact este transportat n vezicule spre membrana laterobazal. Prin fuziune, antigenul este eliberat n spaiul laterobazal, unde este transferat celulelor subiacente, unele specializate n prelucrarea i prezentarea antigenelor, fenomen denumit translocaie. Antigenele sunt prelucrate n celulele dendritice i n macrofagele subepiteliale i sunt prezentate limfocitelor locale sau sunt transferate celulelor interdigitate i prezentate celulelor ; interfoliculare. $elulele interdigitate care prezint antigenul, deriv din celulele dendritice care au nglobat antigenul. (ig. 0@. a. L plac Pe!er. 1. 0eprezentarea schematic a mecanismului funcional al plcii PeEer. -etaliu al celulei @. -up nglobarea i transportul de ctre celula @, antigenul este prelucrat de macrofage sau de celulele dendritice, care se transform n celule interdigitate 6I-$7 i apoi este prezentat limfocitelor n ariile celulelor ; ale plcii PeEer i ale ganglionilor limfatici mezenterici 6@"17. 2 = enterocitN "= limfocitN m= macrofagTcelul dendritic 6dup 3minia, 1JJD7. 8 plac PeEer are < regiuni structurale! domul, foliculii cu centrii germinali 6zona celulelor +7 i aria parafolicular6populat de celulele ;, n special celule ;h7. Plcile PeEer sunt populate iniial de limfocite ;. -ezvoltarea centrilor germinali6ai limfocitelor +7 este dependent de antigenele microbiotei intestinale, pentru c la animalele germ#free, plcile PeEer sunt slab dezvoltate i lipsesc centrii germinali. "a organismele timectomizate neonatal i la cele congenital atimice, ariile interfoliculare sunt srace n limfocite ;. Pentru completa dezvoltare a plcilor PeEer, sunt necesare at't influenele stimulatoare ale timusului, c't i contactul cu microbiota intestinal.

J:

3tructurile limfoide asociate tractului digestiv sunt lipsite de nveliul capsular i de vasele limfatice aferente. In lipsa vaselor limfatice, lichidul interstiial care scald structurile limfoide ndeplinete funcia limfei aferente. "imfocitele foliculare au raporturi de vecintate cu epiteliul i de aceea se numesc foliculi asociai epiteliului. Foliculul limfoid, ca unitate structural a plcii PeEer, este strpuns de o arteriol ascendent, ce se termin ntr#o reea capilar situat sub epiteliul folicular. Aceste capilare se continu cu venulele postcapilare din ariile interfoliculare ;#dependente. ,imfocitele libere, diseminate n mucoasa tractului digestiv au distribuie difuz. 2le se gsesc n lamina propria i n stratul epitelial al mucoasei, printre enterocite. 2ste o populaie heterogen de limfocite! cele din lamina propria sunt n proporii egale limfocite ; i +, dar i un numr mare de plasmocite. In mucoasa intestinal se gsesc limfocite +, cu marBerul Ig2 R , numrul lor fiind crescut la persoanele cu alergii alimentare. In submucoasa gastrointestinal, n special n vecintatea vaselor de s'nge, se gsesc mastocite cu receptori de mare afinitate pentru Ig2. ,imfocitele intraepiteliale sunt n special limfocite ; citoto&ice6ICM7 i limfocite +, cu marBerul IgAR. @a%oritatea limfocitelor + sunt n curs de difereniere spre plasmocite. 2le sunt primele care recunosc antigenele luminale ce traverseaz mucoasa pe o cale independent de celulele @. "imfocitele ; intraepiteliale mediaz hipersensibilitatea nt'rziat cu specificitate de antigen i au funcie citoto&ic. $elulele limfoide din structurile organizate6plcile PeEer7 sunt neanga%ate. 2le au rolul de a iniia rspunsul imun, dup interaciunea cu antigenele care traverseaz celulele @. "imfocitele difuze din lamina propria sunt n mare parte activate, av'nd funcia de a produce IgA. (unciile M*,D. 3istemul imunitar al mucoaselor are o funcionalitate precis! s e&clud antigenele e&ogene, nainte ca ele s ptrund n mediul intern i s evite sau s minimalizeze e&punerea aparatului imunitar sistemic, la antigenele moleculare sau celulare care tind s ptrund n mediul intern. In acelai timp, esutul limfoid asociat mucoaselor trebuie s rm'n insensibil la microbiota normal a mucoaselor. @A"; are calitatea de )zon de control* a organismului, la contactul cu antigenele, dar are i rol reglator asupra funcionalitii aparatului imunitar sistemic. Aa se e&plic faptul c administrarea oral a unui antigen la om sau animale, n esen, nu produce un rspuns imun sistemic, ci de obicei, un rspuns imun al mucoasei. @ecanismul nu este cunoscut, dar sistemul imunitar al mucoaselor mpiedic rspunsul imun amplu al aparatului imunitar sistemic, la un numr foarte mare de antigene intestinale, n special de origine alimentar. Antigenele comple&e bacteriene sau virale pot iniia un rspuns imun comple&, prin intermediul aparatului imunitar al mucoaselor. -eficienele funcionale ale @A"; e&pun organismul i aparatul imunitar sistemic, unei permanente stri de activare, care depete limitele fiziologice, consecina fiind instalarea maladiilor autoimune. Prin epiteliul folicular, microorganismele dob'ndesc acces la structurile limfoide ale foliculului. $onsecina este benefic, deoarece, astfel se iniiaz rspunsul imun protector fa de microorganismele luminale. -in acest punct de vedere, celulele @ formeaz un sistem de avertizare timpurie. Ptrunderea microorganismelor la nivelul epiteliului folicular are i consecine nefavorabile, deoarece acesta poate fi o cale de acces a microorganismelor patogene 6 ".t!phi7, la structurile submucoase.

JC

"imfocitele + din foliculii limfoizi ai plcilor PeEer se gsesc ntr#o stare de proliferare activ. ;otui, numrul plasmocitelor este mic, ceea ce reflect posibilitatea ca limfocitele + din structurile .A";, s migreze n alte mucoase, nainte de a se diferenia n plasmocite.

Ta1e# "'42a ati+ 2 i+in& 2 in"i2a#e#e "a a"te iati"i a#e ' gane#' #i4!'i&e 2 i4a e 5i $e"*n&a e $aracteristici 8rgane limfoide primare "a zona de trecere ntre ectoderm i endoderm. $onin celule derivate din ectoderm din mezoderm 6limfocite7 . 8rgane limfoide secundare

8riginea

In mezoderm

@omentul dezvol# Foarte timpuriu n viaa trii sau dup embrionar natere 3unt populate timpuriu cu celule precursoare ale 0olul limfocitelor i au rol n dob'ndirea competenei imunitare a acestora. "a adult sufer o involuie progresiv, care la v'rstele -urata funciei lor naintate este nsoit de o deficien a funciilor imunitare. Activitatea 2ste intens i independent mitotic a de stimularea antigenic limfocitelor Formarea centrilor Absent germinativi de reacie 0educerea numrului de 2fectele e&tirprii limfocite i diminuarea precoce rapid a reactivitii imunitare 0educerea numrului de 2fectele e&tirprii limfocite i limitarea tardive reactivitii imunitare $entre de proliferare, Funcia esenial maturare i diseminare a limfocitelor.

;ardiv n cursul vieii fetale

3unt populate tardiv numai de limfocite mature.

Persist toat durata vieii

Intens numai dup stimularea antigenic Foarte intens 1u este posibil. -up blocarea imunitar diminu, dar totdeauna rm'n celule imunocompetente. Imposibil Focare ale rspunsului imun.

(ig. 0.. 0eprezentarea schematic a circuitului global al limfocitelor. 617 "imfoblastele din mduv a%ung pe cale sanguin n splin i timus. -up

J?

maturare, limfocitele sunt eliberate n s'nge. 657 "imfocitele mature intr n splin i o prsesc. 6<7 "imfocitele mature pot intra n structurile @A"; i n esuturile periferice. 6:7 "imfocitele prsesc @A"; i esutul periferic pe calea limfaticelor. 6C7 "imfocitele intr n ganglionul limfatic, trec'nd prin celulele specializate care cptuesc venulele postcapilare. 6?7 "imfocitele prsesc ganglionul limfatic pe cale limfatic i reintr n s'nge prin ductul toracic. RECIRCULAREA LIMFOCITELOR 8rganele limfoide primare 6mduva oaselor, timusul, bursa lui Fabricius7 au rolul de a produce limfocite mature neanga%ate 6)virgine*7. -up ce prsesc organele limfoide primare, limfocitele au proprietatea constitutiv de a recircula n organele limfoide secundare i n compartimentul teriar nelimfoid, n absena stimulului inflamator. 8rganele limfoide secundare sunt reprezen#tate de ganglionii lim#fatici, de splin i de structurile @A";. Funcia lor este de a acumula i prezenta antigenele, at't limfocitelor neanga%ate c't i celor de memorie. 4esuturile nelimfoide ale compartimentului teriar sunt reprezentate de restul esuturilor organismului. In mod obinuit, ele conin puine celule limfoide, dar n focarele de inflamaie se acumuleaz populaii limfocitare numeroase, n special limfocite de memorie. 4esutul limfoid secundar este suportul structural al reaciilor celulare ale rspunsului imun. "a acest nivel se produce contactul limfocitelor cu antigenul specific. Faptul impune, ca o condiie funcional esenial, recircularea continu a limfocitelor pentru a nt'lni i a recunoate antigenul. -in acest punct de vedere, limfocitele au o particularitate funcional unic! prsesc s'ngele ca i celulele mieloide 6neutrofile, monocite7, trec n organele limfoide secundare i n compartimentul teriar, dar, spre deosebire de cele mieloide, se rentorc n flu&ul sanguin. 0ecircularea s6nge1 esuturi limfoide secundare1s6nge se repet tot restul vieii limfocitelor i este independent de stimularea antigenic. @ilioane de limfocite trec zilnic prin fiecare organ limfoid secundar, astfel nc't fiecare antigen ptruns n organism pe o cale sau alta, va fi e&pus ntregului repertoriu de receptori de antigen ai limfocitelor. $apacitatea limfocitelor de a recunoate i de a coloniza anumite esuturi limfoide a fost denumit ecota%is sau homing. (ig. 0B. )ecircularea limfocitelor i a celulelor pre entatoare de antigen. "imfocitele neanga%ate prsesc timusul i migreaz n organele limfoide secundare 6splin, ganglioni limfatici7. $elulele prezentatoare de antigen 6celulele dendritice i fagocitele mononucleare7, dup ce prsesc mduva, trec n s'nge, apoi intr n esuturi, nglobeaz antigenul i l transport n esuturile limfoide pentru a fi prezentat celulelor ; i +. "imfocitele activate migreaz din esuturile limfoide i se acumuleaz preferenial la situsurile infeciei sau ale inflamaiei.

JI

@ecanismele homing au un rol esenial n meninerea diviziunilor funcionale ale organelor limfoide i n orientarea limfocitelor mature neanga%ate i a celor de memorie. 0ecircularea realizeaz dispersia populaiilor de limfocite efectoare i de memorie, spre ariile cele mai e&puse invaziei antigenice, dar realizeaz i supravegherea esuturilor n raport cu prezena antigenelor. 3oluia natural pentru aceast funcie a fost compartimentarea sistemului limfoid n organe individualizate i esuturi care sunt conectate i unificate printr#un trafic limfocitar orientat i prin recirculare. 0ecircularea limfocitelor este impus de modul de organizare a sistemului limfoid! fiecare organ limfoid dreneaz un teritoriu definit al organismului. Astfel, antigenul in%ectat subcutan sau intradermic este transportat la ganglionii limfatici regionali. Antigenul in%ectat intravenos a%unge n splin, iar cele care ptrund la nivelul mucoaselor 6digestiv, respiratorie, genito#urinar7 a%ung la structurile limfoide @A"; 6.A"; i +A";7. "imfocitele care recunosc antigenul la nivelul esuturilor limfoide secundare, se activeaz i iniiaz rspunsul imun, iar cele care nu au nt'lnit antigenul specific, trec prin esuturile limfoide n c'teva ore, se re ntorc n s'nge pentru c'teva minute i i reiau un nou circuit. $elulele limfoide mature 6competente7 se gsesc concentrate n organele limfoide secundare. $ele din s'nge constituie numai o proporie mic din totalul limfocitelor. -in totalul limfocitelor, numai o proporie foarte mic, 65M7 recircul n unitatea de timp, pe traseul s'nge A ganglioni limfatici A limf A canal toracic A s'nge, iar restul rm'n n organele limfoide secundare. "imfocitele cu cea mai nalt rat a rcirculrii sunt celulele ; de memorie. "imfocitele ; i + neanga%ate 6naive7, recircul cu o rat mult mai sczut ntre organele limfoide secundare, p'n nt'lnesc antigenul sau mor. $ele care au nt'lnit antigenul specific, se activeaz. ,na din primele consecine ale activrii este e&primarea intens a unor molecule de suprafa, din categoria integrinelor, care mediaz aderena ferm a limfocitului de componentele matricei e&tracelulare. "imfocitele care recunosc antigenul sunt reinute selectiv n organul limfoid secundar. 2fectul pe termen mai lung al stimulrii antigenice este e%pansiunea clonal a limfocitelor i diferenierea lor n celule efectoare ale rspunsului imun i celule de memorie. Aceste categorii au proprieti de migrare 6homing7 net diferite fa de limfocitele neanga%ate. "imfocitele efectoare i cele de memorie dob'ndesc capacitatea de a migra n compartimentul teriar 6adic n organele nelimfoide7. Pe de alt parte, ele manifest o selectivitate pronunat a compartimentului de homing, adic dup activare, recircul preferenial n formaiuni limfoide de aceiai categorie cu cele care au fost activate la contactul primar cu antigenul. "imfocitele ; \T]recircul preferenial n esuturile epiteliale neinflamate. Importana fenomenului de homing. Fenomenul de homing este foarte important n procesul genezei embrionare a organelor limfoide primare, deoarece asigur migrarea n timus, respectiv n bursa lui Fabricius i echivalenii ei, a precursorilor limfocitelor ; i + 6pre#; i pre#+7. Procesul recirculrii permite ca limfocitele mature neanga%ate s dob'ndeasc acces la structurile care concentreaz antigenele ce au ptruns pe cale tegumentar sau pe calea mucoaselor i s nt'lneasc epitopul specific. "imfocitele ; activate, prolifereaz i se difereniaz. At't cele activate, c't i cele

JD

de memorie manifest selectivitate de organ, adic recircul n acelai tip de organ limfoid secundar. @igrarea cu specificitate de organ, a celulelor ; de memorie, mrete eficiena rspunsului imun, deoarece re nt'lnesc antigene asemntoare celor care le#au indus activarea primar. @ecanismul migrrii selective este puin neles. Probabil implic mecanisme de trafic selectiv, controlat de molecule membranare. "a organismul adult, limfocitele recoltate din ductul toracic migreaz preferenial n @A";, iar cele din ganglionii limfatici se re ntorc n ganglioni, n ariile timo# dependente. "imfocitele ; i + recoltate din splin, dup transferul n organismul receptor, se distribuie n compartimentele ; i + ale organelor limfoide secundare. @a%oritatea limfocitelor din mduva osoas, migreaz n ariile timo#independente. Ariile timo1independente 6populate de limfocite +7 ale organelor limfoide secundare sunt! foliculii corte%ului e%tern din ganglionii limfatici, foliculii din plcile Pe!er i foliculii onei periferice din pulpa alb a splinei. Ariile timo1dependente 6populate de limfocite ;7 sunt! corte%ul profund al ganglionilor 6paracorte&7, manonul limfoid periarteriolar al pulpei albe a splinei i onele interfoliculare ale plcilor Pe!er. Bazele !ole%"lare ale +e#o!e#"l" de 4o! #$

(ig. >2. 3ecvena de evenimente ce regleaz migrarea limfocitelor din s6nge prin pereii venulelor cu endoteliu nalt 6O2G7, n organele limfoide. @icarea de rostogolire a limfocitelor pe suprafaa celulelor endoteliale este convertit repede n aderen stabil dependent de integrine, n 1#< s. @igrarea transendotelial a limfocitului aderent este reglat de un )stimul de migrare* e&primat de celulele endoteliale nalte. +azele moleculare ale stadiului final al migrrii prin membrana bazal nu se cunosc, dar probabil este reglat de chimioatractanii eliberai de ganglionul limfatic 6dup Ager, 1JJD7. Fiziologia recirculrii limfocitelor se bazeaz, n esen, pe reglarea proprietii lor de aderen i mobilizare. "imfocitele au proprietatea rar, de a#i regla proprietile adezive, toat durata vieii. -ac n s'nge limfocitele nu trebuie s adere ntre ele sau de alte celule circulante i nici de endotelii, trecerea lor n spaiul e&travascular necesit aderena ferm de celulele endoteliale. ;raficul limfocitar implic evenimente comple&e, care duc la recrutarea celulelor din flu&ul sanguin. Procesul implic ncetinirea deplasrii limfoci#telor, la contactul cu endoteliul vascular, apoi aderena str'ns de celulele endoteliale, urmat de migrarea transendotelial. Fenomenul migrrii prefereniale a limfocitelor din s'nge, n esuturile limfoide specifice 6homing7, este e&plicat prin e&istena moleculelor cu rol de aderen, denumite generic ade ine, at't pe suprafaa limfocitelor c't i pe suprafaa venulelor cu endoteliu nalt 6O2G7. Adezinele suprafeei limfocitelor sunt receptori specifici de homing, iar cele de pe suprafaa celulelor endoteliale ale venulelor au rol de antireceptori. At't unele c't i altele aparin familiei integrinelor. Ambele categorii de molecule mediaz interaciunea selectiv a celulelor sanguine cu endoteliul vascular, ca o precondiie a migrrii n esuturi i se numesc selectine.

JJ

"electina , se gsete pe suprafaa celor mai multe leucocite circulante! limfocite, neutrofile, monocite. 3pre deosebire de celelalte dou tipuri 62,P7, selectina " este e&primat constitutiv pe suprafaa celulelor. 0olul ei este medierea tranzitului leucocitelor n situsul inflamator, dar i n orientarea specific a recirculrii constitutive spre ganglionii limfatici periferici. -eoarece fenomenul recirculrii limfocitelor este permanent, selectinele corespunztoare sunt e&primate de asemenea permanent, at't pe celulele endoteliale ale venulelor c't i pe limfocite. Interaciunea limfocitelor cu selectinele endoteliale s#a studiat in vitro, prin incubarea limfocitelor cu seciuni subiri de esut limfoid. "imfocitele se leag specific de venulele cu endoteliu nalt 6O2G7 i n proporie nesemnificativ, de endoteliul altor vase sanguine. "imfocitele + ader preponderent de O2G din plcile PeEer, iar limfocitele ; ader preferenial de O2G din ganglionii limfatici. -up legarea specific a receptorilor limfocitari de antireceptorii celulelor endoteliale, se iniiaz evenimentele al cror rezultat este e&travazarea limfocitelor din esuturile limfoide secundare. ;recerea limfocitelor din flu&ul sanguin, prin peretele vascular, are loc n mai multe etape! # deschiderea %onciunilor str'nse dintre celulele endoteliale 6 n C#19 minute7N # migrarea selectiv a limfocitelor ; i +, n ariile caracteristice, n orele urmtoare. 0ecircularea limfocitelor n structurile limfoide ale mucoaselor Re"i "*#a ea #i4!'"ite#' 6n $t *"t* i#e #i4!'i&e a#e 4*"'a$e#' 6.A"; i @A";7 are particulariti distincte fa de recircularea limfocitelor n celelalte organe limfoide secundare. Principala diferen const n aceea c, ntr#o msur important, sistemul imunitar al mucoaselor este separat din punct de vedere funcional, de aparatul imunitar sistemic. 3epararea este rezultatul modului preferenial de recirculare a limfocitelor n .A"; i +A"; i anume, limfoblastele generate n structurile limfoide ale tractului gastrointestinal circul n ductul toracic i au tendina de a se re ntoarce n aceleai structuri limfoide. "imfocitele recircul n s'nge i reintr n esutul limfoid secundar. $elulele mature, neanga%ate, se distribuie aleatoriu n structurile @A"; i asigur e&istena ntregului repertoriu de receptori de antigen. "imfa ductului toracic este calea final comun a ntregii cantiti de limf generat sub nivelul diafragmei, ma%oritatea av'nd originea n teritoriul intestinal. In ductul toracic se gsesc limfocite mari 6blaste7. $elulele efectoare i de memorie manifest un homing preferenial, care menine compartimentarea limfocitelor. "imfocitele stimulate i blastele generate n structurile @A";, dup ce sunt descrcate n s'nge, e&travazeaz rapid n lamina propria i revin cu o mare probabilitate n aceleai structuri sau se distribuie n structuri limfoide omologe, asociate altor mucoase. @ulte se transform n plasmocite care sintetizeaz IgA. Pentru c celulele stimulate la nivelul tractului gastrointestinal recircul spre alte situsuri mucoase6plm'n, glande mamare, tractul urogenital7 s#a propus conceptul de )sistem imunitar comun al mucoaselor*. $hiar dac proporia limfocitelor care recircul preferenial la nivelul diferitelor mucoase 6tractul respirator i urogenital7 este limitat,

199

fenomenul este foarte important, deoarece sugereaz posibilitatea stimulrii imunitii protectoare generale, la toate situsurile mucoase, folosind un vaccin oral. (n plcile PeEer i n foliculii limfatici solitari ai mucoasei gastrointestinale se gsesc preponderent limfocite + cu izotip IgA, dar i limfocite + cu izotip Ig. i Ig@. Preponderena lor numeric se e&plic prin aceea c se leag mai ferm de venulele cu endoteliu nalt, comparativ cu limfocitele ;. -up contactul cu antigenul, ele se activeaz, prolifereaz i se difereniaz. ;otui, n plcile PeEer, practic nu e&ist celule productoare de anticorpi. Acest fapt denot c plcile PeEer sunt structuri limfoide specializate n medierea contactului dintre limfocite i antigenele tractului digestiv, dar celulele + dup stimulare migreaz din plcile PeEer nainte de a se diferenia n plasmocite. +lastele rezultate din celulele + stimulate, prsesc plcile PeEer pe cale limfatic i a%ung n ganglionii limfatici mezenterici. -e aici, blastele migreaz selectiv n mucoasa digestiv i respiratorie i constituie esutul limfoid difuz. "imfocitele ; au o modalitate mai puin restrictiv de a migra n mucoase. In structurile limfoide ale mucoasei, celulele ; sunt minoritare. 0olul lor pare a fi limitat la efecte reglatoare asupra limfocitelor +. (n concluzie, recircularea limfocitelor + la nivelul mucoaselor este restrictiv, n sensul c celulele stimulate de antigene, n structurile limfoide ale mucoasei digestive au o tendin marcat de a recircula n structuri limfoide asociate mucoaselor. 3#a avansat ipoteza unei specificiti de organ a recirculrii limfocitelor +. $ele activate n +A"; vor recircula n mucoasa respiratorie, iar cele activate n .A"; vor recircula la nivelul mucoasei digestive, asigur'nd o eficien protectoare ma&im. Re% r%"larea l !+o% telor 0# %o!part !e#t"l ter' ar #el !+o d -intre esuturile nelimfoide, cele mai cunoscute n privina raporturilor lor cu limfocitele sunt suprafeele epiteliale! epiteliul tegumentar i mucoasele tractului gastrointestinal, urogenital i respirator. Aceste structuri se caracterizeaz prin prezena a dou componente limfoide distincte. Prima, evideniat la oarece, populeaz epiteliile n cursul dezvoltrii embrionare. Acestea sunt limfocite cu localizare intraepitelial 6I2"7 i pentru a se diferenia sau pentru a se menine n aceast localizare, nu necesit contactul cu antigenul e&ogen. 3e pare c limfocitele intraepiteliale i au originea direct n organele limfoide primare sau chiar n mduva osoas, fr s necesite un stadiu de tranzit prin organele limfoide secundare. (ig. >7. 0olul @A"; n inducerea sinte ei Ig* n mucoase. Inglobarea antigenului de ctre celulele @, declaneaz rspunsul imun local. "imfocitele + IgAR i ;h $-:R, pe calea limfaticelor eferente, migreaz n ganglionii limfatici mezenterici i apoi n ductul toracic, pentru a a%unge n s'nge. Aceste celule migreaz n situsurile n care IgA este molecula efectoare, unde are loc diferenierea final, sinteza i transportul sIgA. 3timularea limfocitelor n @A"; i e&odul celulelor spre situsurile efectoare %ustific denumirea de )sistem imunitar comun al mucoaselor*. A II#a categorie de limfocite din structurile nelimfoide sunt, n special, limfocite D de memorie i limfocite efectoare care s#au activat n organele limfoide secundare. 2le au localizare intraepitelial sau se gsesc n esutul con%unctiv subepitelial.

191

$elulele epiteliale regleaz direct activitatea celulelor limfoide, at't prin pro&imitatea lor direct, c't i prin capacitatea de a sintetiza citochine, ce activeaz iTsau recruteaz celulele efectoare. "imfocitele intraepiteliale sunt, n primul r'nd celule ;, cu receptor Q#P sau \#]. 3uprafaa foarte mare a epiteliilor, trebuie s fie corelat cu e&istena mai multor I2", dec't alte tipuri de celule ;. @a%oritatea sunt bogate n granule citoto%ice, ceea ce a dus la presupunerea c I2" recunosc i lizeaz celulele epiteliale infectate, form'nd prima linie de aprare. 2ste greu de e&plicat modul n care celulele ;, cu o diversitate foarte larg a specificitii de legare a receptorilor de antigen, recunosc epitopii specifici e&pui pe suprafaa celulelor epiteliale fi&e. -e aceea, s#a presupus c I2" recunosc semnalele de stress imunitar, i nu epitopii specifici ai agenilor infecioi. 3emnalele sunt transmise de proteinele nrudite 6@I$A, @I$+7, dar distincte de moleculele $@O I. Aceste molecule nu prezint antigenul, dup modelul clasic al moleculelor $@O, ci I2" recunosc diferenele nivelului de e&primare a moleculelor @I$A i @I$+, pe suprafaa celulelor normale i a celor stressate. 3timulii activrii @I$A i @I$+ pot fi de natur infecioas sau evenimente de transformare care pun n pericol integritatea organismului. I2" sunt pozitive numai pentru $-D Q6$-D QR,P#7 sau sunt negative pentru ambii coreceptori 6$-: $-D Q #, P#7. 3e pare c epiteliile favorizeaz dezvoltarea e&tratimic a I2", care vin direct din mduva osoas.
#

"imfocitele asociate epiteliilor recircul cu o rat sczut, care poate fi constitutiv, dar se amplific mult dup stimularea antigenic local. (n esuturile nelimfoide, limfocitele ; realizeaz controlul de calitate a moleculelor e&puse pe suprafaa celulelor tisulare. -ac este detectat prezena antigenelor nonself 6virale, tumorale sau induse chimic7, limfocitele ; iniiaz rspunsul imun citoto&ic. ANTIGENELE COM/LE7ULUI MA8OR DE HISTOCOM/ATI-ILITATE .C M H0

2&istena antigenelor de histocompatibilitate a fost dedus din faptul c alogrefele tegumentare sau de organe, nu sunt viabile n organismul receptor. -up I#19 zile, esutul transplantat se inflameaz i cur'nd dup aceea, grefa este respins. 0espingerea grefei este de natur imunitar! sistemul imunitar al receptorului de gref recunoate ca nonself, anumite molecule ale celulelor grefei i se activeaz. @oleculele de suprafa ale celulelor grefate, recunoscute ca nonself, sunt denumite antigene de histocompatibilitate. 2le confer individualitate biochimic fiecrui individ. *ntigenele de histocompatibilitate se definesc ca molecule ale suprafeei celulare i care, datorit diferenelor biochimice individuale sunt recunoscute de sistemul imunitar al unui organism cu un alotip diferit ?cu o alt combinaie de gene alele la situsul codificator5. -iversitatea biochimic la nivel individual a acestor molecule, st la baza unicitii biochimice a fiecrui individ uman i este determinat de o diversitate genetic corespunztoare.

195

-eoarece se comport ca antigene ma%ore n organismul receptor de gref, antigenele $@O se numesc i antigene de transplantare. (n funcie de capacitatea lor de a stimula rspunsul imun de respingere a grefei, antigenele $@O sunt tari i slabe. Antigenele $@O tari reprezint principala barier n calea transplantului de esuturi i organe. "a oarece, moleculele $@O tari aparin sistemului O#5. .refele de esuturi i organe ntre organisme care difer prin antigenele comple&ului O#5 ale suprafeei celulare sunt invariabil respinse n 19#1: zile. Antigenele tari aparin claselor I i II. *ntigenele slabe 6uoare7 sunt codificate de sistemul minor de histo1compatibilitate i determin respingerea lent a grefei de piele, n circa 599 de zile. "a om, corespondentul sistemului molecular antigenic O#5 de la oarece este comple&ul antigenic al sistemului 8,* 68uman ,eucocEte *ntigen7. -enumirea semnific faptul c moleculele sistemului au fost detectate iniial 6H. -ausset, 1JCD7, pe suprafaa leucocitelor. Antigenele comple&elor O#5 i O"A au o varietate antigenic individual i de aceea natura lor chimic se poate studia numai n populaii genetic pure 6inbred7 de oarece, obinute prin mperecheri multiple ntre indivizii aceleiai descendene. Str"%t"ra !ole%"lar a a#t $e#elor CMH %la)a I Antigenele codificate de genele $@O clasa I sunt glicoproteine de membran, a cror regiune $#terminal se gsete n citoplasm, iar cea 1#terminal este e&pus e&tracelular. 8 molecul $@O clasa I este alctuit dintr#un lan 8 68eavE7 polipeptidic glicozilat 6:C B-7, n asociaie str'ns, necovalent, cu M19 microglobulina 615 B-7, un polipeptid care se gsete i n ser. $atena O este alctuit din <<J aminoacizi, distribuii n urmtoarele C domenii! # trei domenii e%tracelulare, n regiunea 1#terminal, notate cu Q#l, Q#5, Q#<, fiecare cu c'te J9 de aminoacizi. 3ub aciunea papainei, pot fi clivate de restul moleculei. -omeniile Q#5 i Q#< prezint legturi 3#3 intracatenare i formeaz bucle de ?< i respectiv D? aminoaciziN # domeniul transmembranar conine 5C resturi de aminoacizi hidrofobi, care traverseaz membrana. Imediat deasupra acestui domeniu se (ig.>9. 0eprezentare schematic a gsesc C aminoacizi bazici 6Arg, "eu7, tipici pentru structurii moleculelor ;M8 clasa I, proteinele legate de membran, cu rolul de a ancora ancorate n membrana citoplasmatic. $atena codificat de gena $@O prezint < lanul polipeptidic n membranN domenii globulare 6Q#1, Q#5, Q#<7. -omeniul Q#< este asociat cu un peptid A P# 5 microglobulina, un mic peptid globular de 15 B- cu o structur teriar asemntoare unui domeniu al Ig, stabilizat printr#o punte 3#3.

19<

# domeniul hidrofil cito#plasmatic 6<9 de aminoacizi la om, :9 la oarece7, conine n special serin, unele resturi fiind fosforilate, este implicat n transmiterea semnalului de la domeniile e&tracelulare, la mediatorii citoplasmatici. Acest domeniu conine resturi de cistein cu rol n legarea prin intermediul punilor 3#3, de alte catene O sau de proteine citoplasmatice. $omponenta glucidic este alctuit din dou grupri, fiecare fiind format din 15#1C resturi de zaharuri, ataate de domeniile Q#1 i Q#5. 3unt oligozaharide care conin manoz, de care se leag catene laterale de glucozamin i acid sialic. $atena O are o regiune variabil n %umtatea 1#terminal, cu dou subzone hipervariabile, care difer prin mai mult de ?9M din aminoacizi, de la un organism la altul, localizate n domeniile Q#1 i Q#5. 3tudiile prin difracie cu raze S ale domeniilor e&tracelulare, cristalizate dup clivarea cu papain arat c domeniile Q#1 i Q#5 sunt foarte asemntoare ca secven de amino#acizi i prin pliere formeaz mpreun o cavitate molecular, presupus a fi situsul de legare stabil a epitopului antigenic. $avitatea, susinut de secvene P#pliate ale acelorai domenii Q#1 i Q#5, este ocupat de o molecul linear, care este un peptid ce cristalizeaz concomitent cu catena O. 3itusul cavitar, dup ce leag antigenul, formeaz un comple& recunoscut de limfocitele ;$- D. 0estul catenei O corespunde regiunii constante. (ig.>:.a. 0eprezentarea schematic n )ochi de pasre* a suprafeei superioare a moleculei ;M8 clasa I umane, bazat pe structura obinut n cristalografie cu raze &. 3ecvenele P#pliate care formeaz baza cavitii sunt marcate prin sgei groase, orientate n direcia amino#carbo&il. 3ecvenele Q#helicale sunt reprezentate prin liniile groase spiralate. 3uprafeele interne ale celor dou helice i faa superioar a secvenelor P# pliate formeaz o cavitate. $ele dou sfere negre reprezint o legtur 3#3 ntracatenar. b. Gedere lateral a aceleiai molecule, care arat anatomia cavitii i plierea domeniilor Q#< i P#5 m 6: catene P#pliate antiparalele pe o fa i < pe cealalt7 6dup 0oitt, 1JJI7 M19 microglobulina 6P#5 m7 6o globulin mic, ce migreaz la electroforez n regiunea P#57 a fost descoperit n 1J?D, n urina pacienilor cu disfuncie renal provocat de into&icaia cronic cu cadmiu. 2ste sintetizat de ma%oritatea celulelor din organism. $onine circa 199 aminoacizi, cu uoare variaii numerice. 1u prezint variabilitate detectabil pe cale chimic sau imunologic i nu este glicozilat. $a i domeniul Q#< al catenei O, P#5 m prezint omologie a secvenei de aminoacizi cu domeniile constante ale moleculei de Ig. 3ecvena de aminoacizi a P#5 m formeaz un singur domeniu stabilizat printr#o punte 3#3, ntre dou resturi de cistein. P#5 m se asociaz necovalent cu lanul O al moleculei $@O clasa I, prin interaciunea cu domeniul Q#<, dar studiile recente de cristalografie cu raze S, sugereaz un contact e&tins cu toate cele trei domenii. @oleculele de P#5 m legate, se afl n echilibru cantitativ cu cele din plasm. Asocierea celor dou catene se face dup terminarea sintezei lor i este o condiie obligatorie pentru transportul moleculelor $@O I de la reticulul endoplasmic la membrana citoplasmatic i pentru ancorarea lor n membran. $elulele liniei -audi 6derivat din limfomul +urBitt7, dei sintetizeaz catena O, nu e&prim molecule $@O I, deoarece nu sintetizeaz P#5 m.

19:

@oleculele $@O I au un turnover constant. $ele vechi se elibereaz i trec n circulaie sau sunt endocitate i se sintetizeaz altele noi. 3tabilitatea lor este condiionat de rata disocierii peptidului i P#5 m. $atenele O libere se denatureaz i sunt degradate. @oleculele $@O clasa I sunt adevrate )certificate de identitate* biochimic i genetic, pentru fiecare organism, datorit polimorfismului lor biochimic foarte accentuat. 2le vegheaz la pstrarea homeostaziei biochimice a organismului i devin inta sistemului imunitar n urmtoarele situaii! dup grefarea esuturilor i organelor care poart molecule incompatibileN dup ce se asociaz cu antigenele virale, tumorale sau cu cele induse de agenii chimiciN dup modificarea biochimic printr#un proces mutaional.

Str"%t"ra !ole%"lar a a#t $e#elor CMH %la)a II Antigenele $@O clasa II#a sunt glicoproteine heterodimere de membran, formate din dou catene diferite, notate cu N i M. Prin solubilizare cu detergent, aceste molecule se elibereaz ntregi. "anul Q are <9#<: B-, iar lanul P are 5?#5J B-. Fiecare caten este format din : domenii! # dou e&tracelulare, alctuite din circa J9 de aminoacizi fiecare, notate cu Q#1, Q#5, respectiv P#1, P#5N un domeniu transmembranar 6circa <9 de aminoacizi7N un domeniu citoplasmatic 619#1C aminoacizi7. -omeniile Q#1 i P#1 au o variabilitate accentuat a (ig. >0. 0eprezentarea schematic a secvenei de aminoacizi. 2le se asociaz pentru a forma o moleculelor ;M8 clasa II1a. structur ce delimiteaz o cavitate n care este legat @olecula este format din 5 catene peptidul antigenic. diferite 6Q i P7, legate necovalent, a cror e&tremitate $#terminal se inser n citoplasm. $ele dou catene au c'te dou domenii globulare, asemntoare cu domeniile Ig. $u e&cepia domeniului Q#1, toate celelalte sunt stabilizate printr#o punte 3#3 intracatenar. $ele dou catene sunt glicozilate 6dup 0oitt, 1JJI7. -omeniile Q#5 i P#5 pre#zint omologie a secvenei de aminoacizi, cu domeniile mole#culei de Ig.

19C

-omeniile Q#5, P#1 i P#5 sunt stabilizate prin legturi 3#3, iar domeniile Q#1, Q#5 i P#5 sunt gli#cozilate. .ruparea glucidic conine manoz, galactoz, fucoz, glu#cozamin. -iferenele greutii mo#leculare a celor dou catene se dato#reaz nivelului diferit de glicozilare. (eter! # )!"l $e#et % al !ole%"lelor CMH @oleculele $@O sunt codificate de genele comple&ului ma%or de histocompatibilitate. $alificativul )comple&* este %ustificat de numrul mare de gene componente, iar cel de )ma%or* semnific importana deosebit a moleculelor codificate de aceste gene, n realizarea unor funcii imunitare importante! #elaborarea rspunsului imun #respingerea grefelor de esuturi i organe. (n raport cu tipul de proteine pe care le codific, genele $@O aparin clasei I i clasei a II#a. "a oarece, genele $@O codificatoare ale moleculelor comple&ului antigenic O#5 sunt localizate pe cromosomul 1I, ntr#un fragment de 5999#:999 Bb perechi, suficient de mare pentru a codifica circa 599 de proteine de dimensiuni medii. In acest comple& se gsesc < tipuri de gene descoperite independent! 1primul grup de gene 6descoperit n anii >:97 codific antigenele )tari* de transplantare, care induc respingerea rapid a grefelor de tegument i de organe, ntre indivizi neidentici genetic 6aparin unor alotipuri diferite7. Acestea sunt genele $@O clasa I, care codific moleculele $@O clasa IN #al II#lea grup, denumite genele rspunsului imun 6I07 codific sinteza unor molecule care condiioneaz intensitatea rspunsului imun al organismului, slab sau puternic, fa de un antigen. .enele I0 codific proteinele clasei a II#a de molecule $@O, denumite i molecule Ia 6I associated7N #al III#lea set de gene ale comple&ului $@O codific sinteza unor componente ale complementului. "a oarece, moleculele $@O I sunt codificate de gene situate la e&tremitile comple&ului genic O#5, notate L i -. .ena L are circa CC de variante alelice. Fiecare variant codific proteine distincte. (ig. >>. 0eprezentare diagramatic a localizrii subregiunilor genice ;M8 la oarece i om i poziia genelor ma%ore n aceste subregiuni. "a om, locusurile genice clasa II#a sunt localizate ntre centromer i locusurile clasei I, ca i la alte specii de mamifere. C'42#e9*# H3: #a 5'a e"e .2e " '4'$'4*# ;<0.

0egiunea cromosomal $lasa

L I

I II

3 III

19?

"ocusuri genice

A, 2

$:, $5, +f, ;1F

-, "

"a om, moleculele $@O clasa I sunt codificate de genele 8,*, iar moleculele $@O II, de regiunea cromosomal $, localizate pe cromosomul ?. @oleculele $@O I sunt codificate de trei gene! O"A#A, O"A#+, O"A#$. 3#au descris genele O"A#2, #F, #., #O i #H, dar acestea sunt considerate gene neclasice pentru c produsele lor de sintez se deosebesc structural i funcional de ale genelor O"A#A, #+ i A$. @oleculele $@O II sunt codificate de regiunea cromosomal O"A#-, ce aparine genelor clasei a II#a. .enele clasei a III#a codific sinteza acelorai proteine plasmatice 6$:, $5, +f7.

C'42#e9*# HLA .2e " '4'$'4*# =0.

0egiunea cromosomal $:, $5, +f + $ A 2, F, ., O, H $lasa II III I .ene neclasice "ocusuri genice -P, -b, -0 $:, $5, +f + $ A 2, F, ., O, H .enele O"A clasa I i II au cel mai nalt grad de polimorfism genetic dintre toi determinanii genici cunoscui ai organismului uman! O"A#A are D< de alele O"A#+, 1DC de alele O"A#$, :5 de alele. 1umrul alelelor este n continu cretere pe msur ce se identific noi variante. Polimorfismul genic este consecina e&istenei a cel puin dou alele pentru un locus. Pe fiecare din cei doi cromosomi pereche, un individ prezint < gene $@O diferite 6O"A#A, O"A#+, O"A#$7. $elulele umane prezint ? variante diferite de gene clasa I, c'te trei de la fiecare printe. .enele $@O I sunt codominante, astfel c pe suprafaa fiecrei celule se e&prim produsele de sintez ale ambelor alele parentale. 3e sintetizeaz astfel ? variante biochimice de molecule $@O I. (ntr#o populaie uman, moleculele $@O I i $@O II sunt foarte diferite din punct de vedere biochimic, ca o e&presie a polimorfismului genic al indivizilor umani. Antigenele O"A#A, + i $ sunt antigenele ma%ore recunoscute de sistemul imunitar al gazdei, n reacia de respingere a grefei. $antitativ, moleculele O"A#$ sunt inferioare fa de O"A#A i

19I

O"A#+. ;oate sunt capabile s prezinte antigenul. @oleculele $@O neclasice 62, F, .7 nu prezint antigenul. Polimorfismul biochimic al moleculelor $@O I este limitat la domeniile Q 1 i Q 5, la nivelul secvenelor ce formeaz cavitatea molecular. 'enele ;M8 II sunt localizate n regiunea O"A#-. 0egiunea genic O"A#- controleaz rspunsul limfocitelor n amestec. 3pecificitile alelice ale genelor $@O II au fost definite prin tipizare limfocitar i aparin locusurilor -K i O"A#-P sau prin tipizare serologic i aparin locusurilor O"A#-P, -b, -0. 0egiunea - este divizat n trei subregiuni funcionale ma%ore, care codific moleculele -0, -b i -P. In subregiunile -b i -P se gsete o pereche de gene funcionale -bA 1 i -b+1, respectiv -PA1 i -P+1, care codific cele dou catene 6Q i P7 ale moleculei $@O II. 3ubregiunea -0 este mai comple&. 2a conine o singur gen pentru sinteza catenei Q, -0A 1 i una sau dou gene pentru sinteza catenei P 6-0+1, -0+<, -0+: sau -0+C7. 1r. alelelor -0A1 -0+1 -0+< -0+: -0+C -bA1 -b+1 -PA1 -P+1

5 1D: 11 D 15 1D <1 19 II

$a i genele codificatoare ale moleculelor $@O I, genele codificatoare ale moleculelor $@O II sunt codominante. 3e sintetizeaz astfel D variante biochimice de molecule $@O II 6deoarece sunt dou gene codificatoare ale genei P pentru mlecula O"A#-07. $ombinarea aleatorie a numrului mare de alele e&plic polimorfismul e&tensiv al moleculelor $@O ntr#o populaie uman. 1umrul combinaiilor genice posibile ntre aceste alele este evaluat la circa 19J9, un numr cu mult mai mare dec't al indivizilor umani care coe&ist la un moment dat. In conte&tul e&istenei unui numr mare de gene alele codificatoare, posibilitatea ca doi indivizi ne nrudii s aib proteine identice ale moleculelor $@O clasele I i II este mic. 1u e&ist doi indivizi identici pentru toate cele ? variante de molecule $@O I i pentru cele D variante de molecule $@O II. @oleculele $@O I i II au rolul de a lega peptidele antigenice. 8 variant molecular poate s lege un numr limitat de peptide antigenice6de ordinul milioanelor7, dar probabilitatea unei potriviri spaiale crete mult prin e&istena a ? variante de molecule $@O I i a D variante de molecule $@O II.

19D

Peptidul antigenic este legat deosebit de stabil n situsul cavitar al moleculelor $@O I i II. Eval"area d +ere#'elor a#t $e# %e ale !ole%"lelor CMH Fiecare organism are o specificitate antigenic proprie conferit de moleculele $@O clasa I. -iferenele antigenice dintre indivizii alotipici ai unei specii, dependente de moleculele $@O I se evalueaz serologic. 3erul imun specific anti#molecule $@O se obine prin in%ectarea unei suspensii de leucocite, la un organism al aceleiai specii, diferit din punct de vedere genetic, adic un organism cu o alt combinaie de gene alele codificatoare ale moleculelor $@O I. 8rganismul receptor sintetizeaz anticorpi fa de antigenele O"A ale leucocitelor donorului, care se deosebesc de propriile sale molecule. 3pecificitatea antigenic a unui organism poate s conste n prezena unei molecule antigenice pe sau n celulele sale, care nu e&ist pe sau n celulele altor organisme sau se datoreaz unor diferene structurale fine ale moleculelor de histocompatibilitate, prezente la toate organismele speciei, n variante genetice distincte. Anticorpii anti#O"A se gsesc n serul femeilor multipare i se sintetizeaz ca rezultat al stimulrilor antigenice O"A de origine patern, e&primate pe celulele ftului, dar absente pe suprafaa celulelor organismului matern. "eucocitele ftului care strbat bariera placentar trec n circulaia matern i induc sinteza Ig., cu persisten ndelungat n circulaie. 8 alt surs de ser imun anti#O"A o constituie pacienii politransfu ai. Astfel ei se imunizeaz fa de antigenele O"A alotipice de pe suprafaa leucocitelor donorilor de s'nge. Antiserurile O"A se pot obine prin imunizarea voluntarilor. -iferenele antigenice dintre doi indivizi, determinate de moleculele $@O clasa II#a se evalueaz prin capacitatea lor de a iniia reacia limfocitar mi%t 60"@7. "imfocitele de la doi indivizi ce poart alele diferite la locusul O"A#- sunt co#cultivate in vitro. $ondiia reactivitii limfocitare este diferena unei singure alele la locusul ce codific aceste molecule. Indivizii care au molecule $@O I identice nu reacioneaz serologic, dar dac celulele lor difer prin moleculele $@O II, codificate de alele diferite ale locusului O"A#- produc un rspuns intens n 0"@. (ntr#un amestec de celule limfoide homozigote aa i bb se activeaz ambele populaii de limfocite, deoarece limfocitele aa reacioneaz fa de antigenul b, iar limfocitele bb se activeaz fa de antigenul a. Intr#un amestec de limfocite homozigote aa, cu populaia de limfocite heterozigote ab, rspund numai limfocitele aa. 0spunsul bidirecional apare i n amestecul limfocitelor ac i ab. -e obicei se evalueaz capacitatea limfocitelor receptorului de gref de a se activa fa de antigenele donorului i pentru a induce un rspuns unidirecional, populaia de limfocite a donorului este tratat cu mitomicin $ 6un inhibitor al sintezei A-17 sau este iradiat. ;ratamentul nu modific imunogenitatea celulelor. Funcia stimulatoare a celulelor limfoide este restr'ns la celulele specializate prezentatoare de antigen, radiorezistente i care nu se divid in vitro. 0spunsul celulelor n 0"@ este orientat e&clusiv fa de moleculele $@O I i II. @oleculele $@O II constituie un stimul primar esenial pentru 0"@.

19J

@oleculele $@O clasa I i II au rol esenial n elaborarea rspunsului imun, iar din punct de vedere antigenic, determin respingerea alogrefelor 6grefe ntre indivizi ai aceleiai specii, dar aparin'nd unor alotipuri diferite7. ( )tr ,"' a t )"lar a !ole%"lelor CMH I & II & )e!# + %a' a lor evol"t v @oleculele $@O I se gsesc pe suprafaa ma%oritii esuturilor, pe celulele endoteliale ale capilarelor, iar leucocitele e&prim cea mai nalt densitate a moleculelor $@O I! 1M din moleculele de suprafa ale membranei leucocitare sunt molecule O"A. @oleculele $@O I au o densitate mai mic pe suprafaa celulelor hepatice, din plm'n, rinichi i sunt foarte diluate pe suprafaa celulelor musculare i a celor mai multe glande endocrine 6cu e&cepia suprarenalelor7. @oleculele $@O II sunt e&primate predominant, pe suprafaa limfocitelor + i pe celulele specializate pentru prelucrarea i prezentarea antigenelor! celulele seriei monocit#macrofag, celulele endoteliale ale capilarelor sanguine i limfatice, celulele Lupffer, celulele dendritice, eozinofile, microglia 31$. @oleculele $@O lipsesc pe eritrocite, pe celulele endoteliului corneean, pe componenta e&ocrin a pancreasului, pe celulele acinare ale glandelor parotide, pe neuronii 31$, pe celulele endoteliale ale capilarelor 31$, pe esutul placentar. (n condiii normale, o form solubil de molecule O"A se gsete n plasm. 1ivelul ei crete marcat n timpul infeciei virale, probabil datorit creterii ratei sintezei moleculelor O"A, stimulat de interferon i de alte citochine. Intensitatea e&primrii noleculelor $@O II este variabil, fiind controlat de diferii factori! interferonul \ i I"#5, sintetizai de limfocitele ;, amplific nivelul de e&primare a moleculelor $@O II, iar P.25, glucocorticoizii, Q#fetoproteina, "P3 din bacteriile .ram negative, diminu densitatea acestor molecule, av'nd astfel rol imunosupresor. "imfocitele + i celulele tumorale secret molecule $@O II. Privit n perspectiva evoluiei, e&istena moleculelor $@O nu semnific respingerea grefelor de esuturi i organe, deoarece acestea nu se realizeaz n mod natural, ci au fost introduse n practica medical a ultimelor decenii. In sens evolutiv, e&istena moleculelor $@O ar putea fi atribuit necesitii organismelor de a semnaliza rapid, celulele care prezint molecule antigenice pe suprafaa lor! celulele infectate cu virusuri sau cele transformate malign. In acest conte&t, moleculele $@O au o semnificaie deosebit! pentru supravieuirea organismului, liza celulelor purttoare de molecule nonself trebuie s fie rapid, nainte ca virusul s se multiplice i respectiv, nainte ca celula malign s se divid i s formeze o microtumor.

119

Pentru ca intervenia limfocitelor ;c s fie eficient, este necesar ca moleculele $@O s fie prezente pe oricare celul ce poate fi infectat de un virus sau poate s fie transformat malign. Pe de alt parte, moleculele $@O, al cror rol esenial este acela de a prezenta epitopii nonself, trebuie s permit aciunea eficient i rapid a limfocitelor ;c. @oleculele $@O ndeplinesc i funcii neimune. @oleculele $@O I sunt componente ale receptorilor de hormoni. -e e&emplu, linia celular stabilizat -audi nu e&prim moleculele $@O I i nu are nici receptor pentru insulin, deoarece nu sintetizeaz P 5#microglobulina. RS/UNSUL IMUN

8rganismul, ca sistem funcional este echilibrat at'ta timp c't informaia antigenic pe care o primete, este identic cu cea proprie. Fa de moleculele strine, care se abat de la modelul informaional propriu, sistemul imunitar rspunde prin activarea mecanismelor de recunoatere pentru a ndeprta moleculele nonself. *nsamblul fenomenelor comple%e n cascad, declanate de interaciunea specific a sistemului imunitar cu antigenul, n cursul crora celulele imunocompetente se activea , proliferea i se diferenia n celule efectoare i celule de memorie, constituie rspunsul imun. Funcionalitatea sistemului imunitar se suprapune parial, modelului general al arcului refle%, deoarece presupune e&istena unui flu& informaional care corespunde unui e%citant specific 6Ag7 fa de un receptor 6limfocitele7, o cale aferent 6celulele care nglobeaz i prelucreaz Ag7, un organ central 6celulele limfoide dintr#un organ limfoid secundar7 i efectorii rspunsului imun 6anticorpi, celule efectoare7. Asemnrile dintre sistemul imunitar i sistemul nervos se e&tind i asupra altor particulariti! # sistemul imunitar este dotat, ca i sistemul nervos, cu )inteligen* 6capacitatea de a recepiona un numr mare de stimuli 6adic de a recunoate un numr mare de determinani antigenici diferii7 i de a prelucra informaie chimic. 3istemul nervos prelucreaz informaie sen orial, iar sistemul imunitar recunoate i prelucreaz informaie molecular. )Inteligena* sistemului imunitar se manifest discontinuu, n funcie de agresiunile antigenice asupra organismuluiN # )educaia* sistemului imunitar 6adic stocarea informaiei antigenice primit prin stimulri repetate7, ca i n cazul sistemului nervos, ncepe dup natereN # ambele sisteme ) nva* prin e&perien, pentru c ambele sunt dotate cu memorie, care poate fi consolidat prin repetarea stimulului. @emoria ambelor sisteme este nscris n modificri moleculare persistente ale reelei, dar nu poate fi transmis la descendeniN # ambele sisteme sunt organizate dup modelul unei comple%e reele celulare i moleculare. (ntre cele dou sisteme e&ist i deosebiri! sistemul nervos recepioneaz stimuli de orice natur, care acioneaz la nivelul ntregului organism, iar sistemul imunitar recunoate i reacioneaz numai la stimuli de natur molecular, care tind s perturbe echilibrul chimic al organismului.

111

/ARTICULARIT%ILE GENERALE ALE RS/UNSULUI IMUN

2laborarea rspunsului imun fa de o substan nonself este un proces fiziologic care se caracterizeaz printr#o mare eficien i suplee i are urmtoarele particulariti generale! # funcia imun are caracter adaptativ, care decurge din orientarea specific a reaciilor sale fa de o substan nonself. $aracterul adaptativ al rspunsului imun implic mobilizarea unor celule preprogramate care ateapt s fie activate de un anumit antigen, corespunztor specificitii lorN # caracterul foarte economic al funciei imunitare deriv din specificitatea aciunii sale. In timpul rspunsului imun se selecioneaz i se activeaz numai clonele de limfocite care au recunoscut specific epitopii antigenului, toate celelalte clone rm'n'nd disponibile pentru alte interaciuniN # eficiena funciei imune deriv din caracterul foarte economic al mi%loacelor celulare i moleculare pe care le mobilizeaz i din capacitatea de a amplifica efectorii si, pe dou ciN a7 proliferarea masiv 6circa D generaii celulare7 a celulelor selecionate sub aciunea stimulatoare a substanei nonself. -up activare se produc modificri funcionale calitative ale acestor celule, de difereniere proliferativ i maturare, rezultatul fiind generarea celulelor efectoare cu mare capacitate de aciune i a celulelor de memorieN b7 celulele efectoare produc cantiti mari de molecule de recunoatere, sub forma receptorilor specifici fa de substana nonselfN # caracterul de reea a celulelor activate n rspunsul imun, conectate prin mediatori moleculari 6interleuchine7 i care condiioneaz eficiena rspunsului imunN # celulele sistemului imunitar coopereaz stimulator cu numeroase alte categorii de celule, capabile la r'ndul lor s confere rezisten organismului. $ooperarea are loc, inclusiv cu factorii nespecifici 6 nscui7 ai rezistenei 6fagocitele, proteinele sistemului complement, molecule bactericide sau bacteriolitice din plasm7N # rspunsul imun adaptativ necesit o perioad de timp pentru activarea i proliferarea limfocitelor care au recunoscut antigenul, n timp ce reaciile neadaptative sunt prompteN # rspunsul imun adaptativ asigur protecia organismului i a descendenilor si, prin transferul placentar al anticorpilor i prin secreia lactatN # rspunsul imun adaptativ are o proprietate fundamental unic # memoria imun # consecin a e&perienei antigenice individuale, netransmisibil la descendeni. 0spunsul imun este rezultatul cooperrii unui numr restr'ns de tipuri celulare i moleculare. In funcie de predominana componentei celulare sau moleculare n compartimentul efector al rspunsului imun, se disting dou tipuri de reactivitate imunitar.

115

1. )spunsul imun mediat humoral 60I@O7, care se caracterizeaz n esen, prin sinteza anticorpilor ca molecule efectoare. 2fectele 0I@O sunt urmtoarele! # neutralizarea to&inelor i a infeciozitii particulelor virale # opsonizarea antigenelor celulare6bacterii, celule eucariote7 # legarea antigenelor moleculare n comple&e Ag#Ac i eliminarea lor. Imunitatea mediat humoral este transferabil de la un organism la altul prin intermediul serului. 0I@O este protector fa de infeciile bacteriene 6 n special piogene7, fa de reinfeciile virale i fa de antigenele moleculare pe care le neutralizeaz. 5. )spunsul imun mediat celular 60I@$7 se caracterizeaz prin aceea c, dup ptrunderea antigenului, de regul celular, sistemul imunitar mobilizeaz celule specializate, care atac antigenul int. Atacul se realizeaz fie prin contact celular direct ntre limfocitele ; efectoare i celula int, fie prin mediatori moleculari. 0spunsul imun mediat celular este declanat de antigene care se e&prim pe suprafaa celulelor! # antigene virale e&primate pe suprafaa celulelor infectate, n special dup infecia viral primarN # antigene fungiceN # antigene e&primate pe suprafaa celulelor infectate de bacteriile cu localizare intracelular obligat 6)ic=ettsia, ;o%iella, ;hlam!dia7 sau facultativ intracelular 6M. tuberculosis, M. bovis, M. leprae, Brucella sp., ,isteria monoc!togenes, (rancisella tularensis7, n special n macrofageN # antigenele tumorale< # antigenele celulare din grefele de esuturi i organe alogenice. 2&istena celor dou compartimente ale rspunsului imun este argumentat de rezultatele e&perimentale, dar i de observaiile clinice, adevrate )e&periene ale naturii*, asupra unor indivizi cu afeciuni determinate de incapacitatea 0I@O sau 0I@$. "indromul $i 'eorge se caracterizeaz prin aplazia congenital a timusului i paratiroidelor. +olnavilor le lipsete reactivitatea fa de antigenele care mobilizeaz I@$ i de aceea sunt sensibili la infeciile virale, fungice i la cele produse de bacterii cu localizare intracelular. 3inteza i titrul Ig serice sunt normale. 8ipo1 i agamaglobulinemia congenital de tip Bruton este o afeciune congenital determinat de gena tirozin#Binazei, situat pe cromosomul S, care afecteaz diferenierea celulelor limfoide + i produce imunodeficiena S lincat 6Sid7. $elulele + n s'nge sunt rare, dei numrul limfocitelor pre#+ n mduva osoas nu este semnificativ redus, ceea ce sugereaz o moarte celular crescut la tranziia pre#+#+. -eficiena clinic const n incapacitatea de a sintetiza anticorpi i din aceast cauz, copiii, dup <#? luni de via, fac infecii repetate i recurente cu bacterii .ram pozitive i prezint manifestri ale maladiilor autoimune. 0eactivitatea I@$ rm'ne nemodificat,

11<

pentru c organismul i pstreaz rezistena fa de infeciile virale i fa de bacteriile .ram negative. 3epararea celor dou compartimente ale rspunsului imun, humoral i celular, este artificial, deoarece ntre ele este o condiionare reciproc i profund! anticorpii au funcie opsonizant, favoriz'nd astfel I@$, iar pe de alt parte, I@$ este mediat de numeroi factori solubili. $ele dou compartimente interacioneaz sinergic pentru producerea unui rspuns imun eficient. ;otui, separarea este meninut deoarece reflect diferenele fundamentale ale mecanismelor de aciune ale celor dou populaii de limfocite! limfocitele + pentru 0I@O i limfocitele ; pentru 0I@$. 1ici un antigen nu induce un rspuns imun pur, humoral sau celular. ;otdeauna rspunsul imun este mi&t, cu predominana unuia sau a celuilalt dintre compartimente.

ETA/ELE RS/UNSULUI IMUN

0spunsul imun este rezultatul succesiunii urmtoarelor etape! # ptrunderea antigenului n organism i nglobarea lui de ctre celulele accesoriiN # prelucrarea antigenului i prezentarea epitopilor pe suprafaa celulelor accesoriiN # recunoaterea specific a componentelor nonself i activarea celulelor efectoareN # producerea efectorilor rspunsului imun. Ptrunderea antigenului n organism se realizeaz pe diferite ci! # pe cale cutanat # pe calea circulaiei sanguine # pe calea mucoaselor6respiratorie, gastro#intestinal i urogenital7. 2piteliul tegumentar i mucoasele reprezint o suprafa foarte mare, e&pus la o mare diversitate de substane antigenice. ;egumentul este o barier mecanic fa de cele mai multe antigene, iar mucoasele sunt prote%ate, n primul r'nd, de IgA din secreii. 2piteliul tegumentar i epiteliile mucoaselor au rol n fenomenul )e&cluderii antigenice*. 3chimbul liber ntre mediul e&tern i cel intern are loc numai n situaii patologice. 2laborarea rspunsului imun este, n esen, rezultatul cooperrii a dou categorii de celule! celulele accesorii ale rspunsului imun i celulele limfoide. Antigenul este recunoscut de celule specializate funcional i nglobat, cel mai adesea prin aciunea unor mecanisme nespecifice, de celulele accesorii, cu rolul de a prelucra i de a pre enta antigenul.

11:

Ce#*#e#e

2 e>entat'a e

&e

antigen

.C/A0

$elulele accesorii au rol esenial n elaborarea rspunsului imun, datorit capacitii lor de a ngloba substanele strine, de a le prelucra i de a le prezenta limfocitelor, de a fagocita celulele opsonizate i de a sintetiza substane imunomodulatoare. Prezentarea antigenului este treapta obligatorie care precede recunoaterea antigenelor proteice de ctre celulele ;. 8rice celul care poart pe suprafaa ei molecule $@O poate s participe la elaborarea rspunsului imun. $elulele prezentatoare de antigen au urmtoarele proprieti! preiau antigenele, le internalizeaz i le prelucreazN e&prim moleculele $@O I i IIN e&prim moleculele de aderen care favorizeaz interaciunea cu limfociteleN produc molecule stimulatoare ale creterii i diferenierii limfocitelor ;N elibereaz citochine. $ele mai importante celule accesorii pentru elaborarea rspunsului imun sunt macrofagele. In vivo, macrofagul particip decisiv la procesul de imunogenez. Indiferent de calea de ptrundere n organism, antigenele sunt captate de celule accesorii, cel mai adesea, de macrofag. $ea mai mare parte a antigenelor circulante sunt eliminate nainte de a declana rspunsul imun, n primul r'nd de celulele Lupffer, localizate pe faa luminal a capilarelor sinusoide din ficat. "a nivelul ficatului se elimin circa J9M din totalul antigenelor circulante 6bacteriile care strbat bariera mucoasei digestive, endoto&inele absorbite la nivelul colonului, antigenele de origine alimentar7. Alte celule specializate, cu rol ma%or n prezentarea antigenului sunt celulele dendritice i limfocitele B. ;elulele dendritice fac parte dintr#o familie care cuprinde urmtoarele tipuri de celule! # celulele ,angerhans, localizate n epiderm, dar i n mucoase6oral, nazal, esofagian, bronic, n mucoasa traheii7 # celulele cu voal, din limfa aferent # celulele dendritice, din epiderm, din epiteliile mucoaselor, din organele limfoide i din s'nge # celulele interdigitate, din aria paracortical a ganglionilor limfatici. 8riginea acestor celule nu este cert, dar se admite urmtoarea filiaie! monocitul sanguin, celula ,angerhans din epiderm, celula cu voal din limfa aferent ganglionului limfatic, celula dendritic din derm, din organele limfoide i din s'nge. $elulele dendritice s#au izolat din organele limfoide i din s'nge, pe baza capacitii lor de a adera de suport 6ceea ce permite eliminarea limfocitelor din amestec7 i de a#i pierde aderena dup 5: de ore de cultivare. 0olul lor n prezentarea antigenului este argumentat de faptul c stimuleaz intens reacia limfocitar mi&t. $elulele dendritice au rol foarte important pentru iniierea rspunsului imun. 3unt larg distribuite n esuturile limfoide i nelimfoide la toate speciile de mamifere studiate. Precursorii celulelor dendritice i ai macrofagelor sunt localizai n mduva osoas, iar monocitul este un stadiu

11C

comun, nainte de diferenierea pe cele dou linii. @onocitul trece n s'nge, de unde se disemineaz n esuturile nelimfoide 6epiderm, epiteliul tractului respirator, gastrointestinal, urogenital7 i se difereniaz n celul dendritic. (n tegument, celulele dendritice i celulele ,angerhans formeaz o reea ramificat n tot epidermul. 2le au capaciti optime de captare i prelucrare a antigenelor, care ptrund pe cale tegumentar. -up maturare, favorizat de citochinele produse local, migreaz din esuturile nelimfoide, n esuturile limfoide secundare. @igrarea din epitelii are loc pe cale limfatic, p'n n ganglionii limfatici regionali, iar cele din spaiile interstiiale migreaz pe cale sanguin n splin. In timus, celulele dendritice prezint comple&ele $@O#peptide, timocitelor care i dob'ndesc competena imunitar, pentru inducerea toleranei imune. $elulele acestei familii nu au receptori pentru Fc i nici pentru $<, dar e&prim la un nivel ridicat, moleculele $@O I i II. ;elulele ,angerhans reprezint 5#DM din totalul celulelor epidermice i formeaz o reea printre cheratinocitele straturilor profunde. 2le reprezint celulele dendritice imature i e&prim nivele mai mari de molecule $@O II. 3unt capabile s preia antigenul e&ogen prin intermediul moleculelor de suprafa, fiind celule prezentatoare de antigen foarte eficiente. $elulele "angerhans pot s prezinte antigenul local, n epiderm, sau pot s se mobilizeze, s prseasc stratul bazal i s migreze pe cale limfatic, p'n n ganglionii regionali. In timpul migrrii, celulele au prelungiri membranare i se numesc celule cu voal. In ganglionul limfatic, ele se distribuie n aria paracortical6corte&ul profund7 i devin celule dendritice i celule interdigitate 6o variant morfologic cu prelungiri mai scurte7, av'nd rol esenial n prezentarea antigenelor i activarea limfocitelor ;. $elulele "angerhans, celulele cu voal i celulele interdigitate sunt stadii diferite ale liniei celulelor dendritice. $elulele acestei familii nu au proprieti fagocitare. ;otui, li se atribuie un rol important n procesul prelucrrii antigenelor. Antigenele rm'n legate la nivelul membranei celulare i sunt prelucrate prin intermediul ectoprotea elor pe care le secret. Iradierea tegumentului cu raze ,G duce la dispariia celulelor "angerhans. ,imfocitul B este celula efectoare a 0I@O, dar are i rolul de captare i prezentare a antigenului specific. 2ficiena sa n captarea antigenului este ma&im, deoarece receptorul imunoglobulinic leag specific epitopii corespunztori chiar la concentraii foarte mici, de 1999 de ori mai mici dec't cele necesare prezentrii sale de ctre macrofag sau de ctre celula dendritic. "imfocitul + recunoate i prezint numai antigenele moleculare mici 6peptide7. Probabil c proteinele mari nu le sunt accesibile. 2&ist dovezi c antigenul peptidic legat la suprafaa limfocitului +, prin intermediul receptorului imunoglobulinic specific, este endocitat, prelucrat n compartimentul acid i prezentat n asociaie cu moleculele $@O II, pentru a fi recunoscut de limfocitele ;. "imfocitele + e&prim nivele relativ nalte ale moleculelor $@O II. 0olul lor de captare i eventual, prelucrare a antigenului este semnificativ la contactul secundar cu antigenul. $ele mai importante celule, cu funcia de captare i prelucrare a antigenului sunt macrofagele i celulele dendritice. Prima treapt a interaciunii antigenului e&ogen cu $PA 6macrofag, celula dendritic7 este legarea nespecific, necovalent, cu structuri nedeterminate ale suprafeei celulare. Antigenele din comple&ele imune sunt recunoscute de $PA prin intermediul receptorilor pentru Fc i $<.

11?

-up ce a ptruns n organism, antigenul este repede nglobat i depozitat n interiorul macrofagului. 3coaterea antigenului din circulaie are o semnificaie funcional deosebit, deoarece constituie un depozit din care este eliberat treptat i stimuleaz imunogeneza. Antigenul liber n organism poate s induc una din cele dou stri defavorabile pentru reactivitatea imunitar! # poate fi eliminat prea rapid din organism, nainte de stimularea rspunsului imunN # dozele prea mari de antigen liber sunt defavorabile reactivitii imunitare, prin blocarea rspunsului limfocitelor. 3tarea caracterizat prin incapacitatea de rspuns imun a organismului se numete parali ie imunologic. 2ste o stare de blocare complet a reactivitii imunitare prin )inundaie antigenic*. Antigenele moleculare sau particulate cu o bun imunogenitate sunt reinute parial n macrofag sub o form rezistent la degradare, pentru perioade mai lungi de timp. @acrofagele modific imunogenitatea antigenelor! dup legarea de macrofag, cele slab imunogene devin mai imunogene, iar cele cu imunogenitate ridicat, dup legarea de macrofag i pierd parial aceast calitate. / e#*" a ea antigene#'

Prelucrarea antigenelor e&ogene este o etap obligatorie deoarece limfocitele ; 6;h i ;c7 nu recunosc i nu preiau direct informaia antigenic nativ. "imfocitele ; recunosc numai informaia antigenic prezentat pe suprafaa $PA. $elulele accesorii ale rspunsului imun prelucreaz antigenele moleculare mari i pe cele particulate. -in punct de vedere biochimic, prelucrarea semnific deplierea, clivarea proteinelor i generarea peptidelor, ca rezultat al unei proteolize pariale. Prelucrarea antigenului e&ogen de ctre celulele prezentatoare, parcurge urmtoarele etape! internali area antigenului n veziculele membranare acideN proteoli a parialN cuplarea cu moleculele $@ON transportul la nivelul membranei plasmatice. .radul prelucrrii antigenului este dependent de natura sa. Intervalul de prelucrare este de :C# ?9 minute. -urata s#a determinat prin inactivarea metabolic a macrofagelor cu paraformaldehid, la diferite intervale de timp dup contactul cu antigenul. 2&perienele cu antigen marcat au evideniat c n $PA, materialul imunogen are dou destinaii! o parte este e&pus pe suprafaa celulei i este recunoscut de celulele ;, iar o alt parte este sechestrat n celul, de unde este eliminat activ n mediul e&tracelular i este preluat de alte $PA. Principalul mecanism degradativ care are loc n $PA este proteoli a li osomal. $oncluzia a fost dedus e&perimental! amoniacul i cloroWuina 6substane lizosomotrope7 se acumuleaz n lizosomi i blocheaz activitatea enzimelor prin creterea pO lizosomal. @acrofagele astfel tratate sunt incapabile s prezinte antigenele proteice sau bacteriene. $loroWuina blocheaz numai etapa prelucrrii antigenului, dar nu i recunoaterea sa de ctre limfocitele ;, deoarece administrarea ei dup o or de la contactul macrofagelor cu antigenul, a rmas fr efect. $loroWuina a blocat prezentarea antigenului de ctre celulele dendritice, dei ele nu sunt fagocitare in vitro i au un

11I

echipament lizosomal puin dezvoltat. 3#a dedus c ele prelucreaz antigenul la suprafa, prin intermediul ectoprotea elor membranare, dei nu e&ist dovezi directe n acest sens. Prezentarea antigenelor i asocierea cu moleculele $@O I nu este sensibil la aciunea substanelor lizosomotrope alcalinizante. Proteina ele cisteinice 6funcioneaz prin intermediari covaleni enzim#substrat7 sunt importante pentru prelucrarea antigenelor proteice, aa cum s#a demonstrat cu antigene sintetice. Proteoliza rapid i e&tensiv este cauza slabei imunogeniti a unor antigene 6sau chiar a absenei imunogenitii7. ,nele antigene sintetice 6copolimerul "#acid glutamic#"#alanin7 sunt mult mai imunogene dup inhibarea aciunii proteinazelor cisteinice. @ecanismele moleculare ale prelucrrii antigenelor sunt puin cunoscute. In macrofage se produce o digestie selectiv a antigenului, n urma creia o parte din epitopi se pstreaz, dar cea mai mare parte a antigenului este complet degradat. $omple&itatea antigenului condiioneaz numrul de peptide cu rol de epitopi, care deriv prin procesul de prelucrare i care pot fi legate de moleculele $@O. -ac antigenul este o bacterie, numrul de epitopi este nedeterminat i specificitatea lor antigenic este variabil, n funcie de comple&itatea aparatului enzimatic hidrolitic al celulei care prelucreaz antigenul. 1u toate antigenele necesit proteoliza 6fragmentarea7 prealabil recunoaterii de ctre celulele ;. ,neori este suficient numai denaturarea 6deplierea7 proteinelor pentru ca antigenul s fie prezentat de $PA, chiar tratate cu cloroWuin. Forma sub care limfocitele ; recunosc antigenele, depinde at't de natura $PA, dar n special de natura antigenului. @a%oritatea proteinelor sunt rapid endocitate i prelucrate, dar unele sunt legate de membrana celulei i prezentate n stare nativ, fr o prelucrare prealabil. Antigenele peptidice mici 6insulina, angiotensina7 pot fi recunoscute n form nativ, de unele subpopulaii de limfocite ;, n timp ce altele recunosc formele prelucrate ale acelorai antigene. -imensiunea i configuraia spaial a moleculei de antigen sunt hotr'toare n ceea ce privete gradul prelucrrii sale, nainte de a fi prezentat. -e regul, moleculele mari necesit prelucrarea prealabil, iar cele mici sunt prezentate n form nativ. Forma chimic a antigenului, dup prelucrare, nu este cunoscut cu certitudine. Foarte probabil, este un polipeptid de dimensiuni mici 6J#59 aminoacizi7. -up ali autori, prelucrarea nu este necesar pentru ca antigenul s fie prezentat limfocitelor ;, dar totdeauna este necesar conversia sa la o form care s#i permit interaciunea cu moleculele $@O II ale $PA i cu receptorii limfocitelor ;. -ovada este adus de faptul c liposomii cu molecule $@O II inserate n stratul lipidic, la care s#au ataat o varietate de antigene proteice native, stimuleaz clonele de limfocite ; in vitro, n absena complet a $PA. 2pitopii antigenelor peptidice e%ogene sunt e&pui la suprafaa $PA, n asociaie cu moleculele $@O clasa II, iar epitopii antigenelor de origine endogen sunt prezentai n asociaie cu moleculele

11D

$@O

clasa Rol"l !ole%"lelor CMH 0# preze#tarea a#t $e#elor

I.

0spunsul imun este rezultatul interaciunilor comple&e ntre celulele care prezint antigenele i limfocitele ; i +. Prezentarea antigenelor este o etap obligatorie a elaborrii rspunsului imun, ce deriv din faptul c limfocitele nu interacioneaz direct cu antigenele n stare nativ, ci numai dup ce acestea au fost prelucrate i prezentate pe suprafaa unei celule. @oleculele $@O ndeplinesc funcia de prezentare a antigenelor i au un rol esenial n declanarea rspunsului imun. Pentru a deveni disponibili interaciunii cu receptorii de antigen ai limfocitelor, epitopii sunt asociai intracelular, cu moleculele $@O I sau II i sunt transportai la suprafaa $PA ca fragmente peptidice sau ca proteine intacte, n funcie de natura i de mrimea antigenului. (ig. >/. Prelucrarea i pre entarea antigenului e%ogen, n asociaie cu moleculele $@O II. @oleculele $@O II, cu catena invariant, sunt asamblate n reticulul endoplasmic 6027 i transportate prin reeaua .olgi, de unde sunt orientate spre vezicula endosomal, care conine protein degradat parial, derivat din antigenul e&ogen. -egradarea catenei invariante, face posibil asocierea peptidului antigenic cu molecula dimeric 6-@7. $omple&ul este transportat la suprafaa celulei i este recunoscut de limfocitele ;h. @oleculele $@O I i II au capacitatea funcional de a lega i de a e&pune pe suprafaa celulei, un numr neli#mitat de peptide diferite. $omple&ul format de mo#leculele $@O I sau II i epitopul peptidic este recu#noscut de limfocitele ;. 1u se cunoate modalitatea interaciunii dintre moleculele $@O i epitopii antigenici. Ar putea fi o interaciune ferm sau moleculele $@O au numai rolul de suport pentru epitopii antigenici. 3e accept ideia unei ierarhii a epitopilor cu privire la ordinea legrii competitive de moleculele $@O, dato#rit sensibilitii diferen#iate la proteaze. 0ezult peptide cu afinitate diferit fa de situsul de legare a moleculelor $@O. Astfel, e&ist epitopi dominani, care se asociaz cu mare probabilitate de molecu#lele $@O, epitopi subdominani, cu mai puine anse de asociere cu moleculele $@O i epitopi criptici, care se asociaz rareori n comple&e cu moleculele $@O i care nu devin accesibili limfocitelor ; potenial reactive. A#t $e#ele e/o$e#e )"#t preze#tate 0# a)o% a' e %" !ole%"lele CMH II

@oleculele $@O II leag peptide derivate din proteinele e&ogene endocitate de celule! proteine solubile, proteine ale capsidei virale, proteine bacteriene sau proteine ale protozoarelor

11J

endocitate de celul. In vitro, s#a demonstrat c moleculele $@O II purificate, leag suficient de stabil o molecul peptidic, pentru a fi izolate mpreun prin gel#filtrare. Antigenele e&ogene sunt nglobate i prelucrate n fagolizosomii celulelor prezentatoare de antigen 6$PA7. @oleculele $@O II se sintetizeaz n reticulul endoplasmic granular i sunt modificate post#traducere, n cisternele .olgi. $ele dou catene ale moleculei sunt reunite prin catena invariant. Asocierea este meninut p'n c'nd moleculele $@O II a%ung n sistemul endocitar al celulei. In drumul lor spre suprafaa celulei, moleculele $@O II a%ung prin fuziunea veziculei transportoare, n compartimentul fagoli osomului ce conine antigenul parial degradat. "a acest nivel este eliminat catena invariant ce reunete catenele Q i P i care ocup situsul de legare a antigenului. @oleculele $@O II se asociaz cu peptidul antigenic de 1<#5C aminoacizi. $omple&ul format este e&pus la nivelul membranei, unde este recunoscut de limfocitele ;$- :. 3itusul de legare al moleculei $@O II este o cavitate format prin P#plierea domeniilor Q#1 i P#1, delimitat de secvenele Q#helicale ale domeniilor Q#1 i P#1. $omple&ul format este recunoscut de limfocitele ;$-:. (ig. >@. 0eprezentarea schematic a asocierii moleculelor ;M8 II cu peptidul antigenic 6dup $ressKell, 1JJ:7. @oleculele $@O II au funcia fundamental de a stimula elaborarea rspunsului imun specific fa de antigenele e&ogene, prin intermediul limfocitelor ;$- :. "imfocitele ;$-: secret I"#5, I"#:, I"#C, IF1 \, cu efect stimulator fa de limfocitele ;c i +. Asocierea unui peptid nonself cu moleculele $@O II semnific )cererea de a%utor* pentru eliminarea antigenului, materializat n activarea limfocitelor ;$- : i secreia de limfochine stimulatoare ale rspunsului imun. @oleculele $@O II au rol esenial pentru stimularea rspunsului imun, dar i pentru reglarea intensitii sale. Interaciunea moleculelor $@O II cu epitopii antigenici nu este specific. -eoarece moleculele $@O sunt polimorfe, e&ist diferene, uneori importante, ntre organismele outbred ale unei specii de a rspunde la un antigen. Astfel se e&plic diferenele individuale de sensibilitate fa de un agent infecios. ,n rspuns imun mai amplu, este generat de un organism care e&pune mai muli epitopi antigenici diferii, asociai cu diferitele variante de molecule $@O II, comparativ cu un organism care e&pune mai puine fragmente antigenice asociate cu 1 sau 5 tipuri de molecule $@O II. A#t $e#ele e#do$e#e )"#t preze#tate 0# a)o% a' e %" !ole%"lele CMH I

0olul moleculelor $@O n procesul recunoaterii antigenelor care se sintetizeaz n interiorul celulei 6proteine endogene7, a fost demonstrat de /incBernagel i -ohertE 61JI:7, pentru antigenele virale, n e&periene de genul urmtor! # oarecii liniei inbred - au fost inoculai cu virusul coriomeningitei limfocitare 6cu specificitate antigenic A7, pentru a stimula proliferarea limfocitelor ;c fa de celulele infectate cu acest virusN

159

# culturile de fibroblaste de la embrionii liniei - se infecteaz cu varianta antigenic A i respectiv +, iar fibroblastele liniei L se infecteaz cu varianta antigenic AN # limfocitele ;c ale organismelor liniei -, stimulate cu virusul A, recunosc i lizeaz, in vitro, fibroblastele liniei -, infectate cu varianta antigenic A, dar nu recunosc i nu lizeaz fibroblatele liniei - infectate cu varianta antigenic + i nici fibroblastele liniei L, infectate cu varianta antigenic A. $oncluzia a fost c nucleoproteinele citosolice virale, sintetizate n celul, pot deveni inta celulelor ;c, dup ce sunt e&puse ca un peptid prelucrat, n asociaie cu moleculele $@O I ale celulei infectate. Pe baza acestei concluzii s#a stabilit principiul general c proteinele intracelulare 6care nu sunt destinate membranei citoplasmatice7, pot s#i semnaleze prezena n raport cu celulele ;, prin e&punerea asociat cu moleculele $@O I. 0ezultatele au fost e&trapolate i pentru categoria larg a antigenelor e&ogene. (ig. >.. *ciunea limfocitelor Dc este restrictiv n raport cu moleculele $@O I, deoarece celula ;c recunoate at't antigenul specific, c't i molecula $@O I. Amnunte n te&t. 0ecunoaterea asociat a antigenelor cu moleculele $@O I sau II are dou semnificaii ma%ore! # celulele sistemului imunitar interacioneaz cu proteinele proprii, numai dac acestea sunt asociate cu un determinant antigenic nonself, de origine viral, tumoral sau indus de ageni chimiciN # recunoaterea antigenului este condiionat de e&istena fenomenului de histocompatibilitate, adic celulele care prezint antigenul i cele care l recunosc 6limfocitele ;c i ;h7 trebuie s poarte molecule $@O identice, adic celulele care interacioneaz trebuie s aparin aceluiai organism sau unor organisme genetic identice6ale aceleiai linii inbred7. Acesta este fenomenul de restricie 6limitare7 a interaciunilor celulare prin moleculele $@O. @oleculele $@O I au rolul de a lega i de a prezenta proteine self, peptide derivate din catabolismul proteinelor citosolice, antigene bacteriene sau ale paraziilor intracelulari, antigene virale sintetizate n celul prin traducerea unui A01m viral, antigene tumorale sau antigene a cror sintez a fost indus de ageni chimici. -up asocierea cu epitopi antigenici, moleculele $@O I devin inta atacului limfocitelor ;$-D. "imfocitele ;c sunt implicate, n primul r'nd, n recunoaterea i eliminarea celulelor infectate cu virusuri sau a celor transformate malign. Ambele tipuri de antigene sunt sintetizate n celul i sunt considerate ca av'nd origine endogen. 2venimentele celulare al cror rezultat este prezentarea peptidelor, se succed n urmtoarele trepte! # catabolismul antigenului proteic 6 n citoplasm7 # transportul peptidului din citosol, n cisternele reticulului endoplasmic # asamblarea comple&ului format din peptid i molecule $@O I

151

# transportul comple&ului la suprafaa celulei. Antigenele endogene se asociaz cu moleculele $@O I, chiar n cisternele reticulului endoplasmic granular. "a acest nivel, moleculele $@O II sunt inaccesibile asocierii cu epitopii antigenici, deoarece catenele Q i P sunt reunite prin catena invariant. Prezentarea antigenelor endogene, asociate cu moleculele $@O I nu este sensibil la aciunea agenilor lizosomotropi alcalinizani 6amoniac, cloroWuin7, dar este sensibil la derivaii peptidici6di# sau tripeptide aldehidice7 care inhib proteasomul. Proteasomul este un comple& proteic multicatalitic, compus din mai multe subuniti inelare suprapuse, asamblate ntr#o structur cilindric, n care se produce proteoliza moleculelor proteice citosolice con%ugate cu ubicvitina. Proteasomul este o structur care controleaz turn#overul proteinelor citosolice, inclusiv al factorilor de transcriere i al ciclinelor. ,bicvitina este un polipeptid mic, care este asociat pe cale enzimatic dependent de A;P, de lizina proteinelor citosolice. "egarea ubicvitinei produce deplierea proteinei int i asigur recunoaterea de ctre elementele comple&ului proteasomic citosolic. Proteinele celulare modificate dup cuplarea cu ubiWuitina, devin sensibile la proteoliz. Proteoliza are loc n mediul apos al structurii cilindrice i este independent de A;P. Astfel sunt prote%ai constituienii celulari de degradarea necontrolat. Peptidele rezultate n proteasom sunt foarte rapid degradate n citoplasm. -e aceea s#a presupus c ele se asociaz cu proteinele chaperone, cu rol protector i de orientare a peptidelor n lumenul reticulului endoplasmic. (ig. >B. Prelucrarea i pre entarea antigenului endogen, de ctre moleculele $@O I. Proteinele citosolice sunt degradate de comple&ul proteosomic, n peptide care sunt transportate n reticulul endoplasmic 6027. "a acest nivel, P#5 m induce diso#cierea catenei O de proteina chaperone 6calne&ina7. 3e asambleaz molecula $@O I i se asociaz cu peptidul antigenic. $omple&ul peptid#$@O I se elibereaz din asocierea cu transportorul ;AP, traverseaz cisternele .olgi i se e&prim pe suprafaa celulei, gata s fie recunoscut de 0$;. $elulele deficiente n ;AP1T5 nu elibereaz peptidele pentru a se asocia cu moleculele clasa I i nu pot e&ercita efectul citoto&ic asupra intei 6dup 0oitt, 1JJI7. (ig. /2. Formarea comple%ului ;M8 I1peptid n cisternele 02. Peptidele rezultate din pre#lucrarea antigenelor endogene sunt transportate n reticulul endo# plasmic, de o categorie de proteine transportoare, denumite ;AP 6pro#teine transportoare asociate cu prezentarea antigenului7 care folo#sesc energia rezultat din hidroliza A;P, pentru a transporta prin membrane diferite proteine, ioni, antibiotice. @olecula ;AP este un heterodimer, format din dou subuniti 6;AP1 i ;AP57. Fiecare subunitate are o regiune hidrofob 1#terminal transmembranar i un domeniu $#terminal ce leag A;P. @oleculele ;AP au capacitatea de a transloca peptidele prin membrana 02. $atenele moleculei $@O I se sintetizeaz separat pe cisternele 02 i odat cu traducerea sunt transportate n 02. $atena O, P#5 m i peptidul se asambleaz ntr#un comple&, chiar n cisternele 02 sau n compartimentul pregolgian. (n cisternele .olgi, catena O este glicozilat, iar comple&ul $@O I#peptid este ancorat n membran i e&pus la suprafaa celulei. @oleculele $@O I leag peptide mici, de D#19 aminoacizi. 3pecificitatea de legare este larg. @olecule $@O I identice leag peptide diferite.

155

"iniile celulare care nu sintetizeaz P#5 m, nu e&prim molecule $@O I pe suprafaa lor. Acesta este un e&emplu al funciei de )control de calitate* pe care l are 02. @oleculele $@O pliate incorect nu sunt transportate la nivelul membranei, ci rm'n n cisternele 02 i sunt degradate. Absena P#5 m determin plierea greit i degradarea catenei mari. $ontrolul de calitate este mediat de un set de proteine chaperone, care se asociaz reversibil cu proteinele pliate incorect i astfel permit )corectarea* greelii de pliere. "a nivel membranar, comple&ul molecular este recunoscut de limfocitele ;c i rezultatul interaciunii este li a celulei int. @oleculele $@O I nu disting ntre peptidele self i nonself. Peptidele asociate cu moleculele $@O I au fost izolate, fracionate prin OP"$ 6high#performance liWuid chromatographE7 i secveniate. Fiecare celul e&pune pe suprafa , sute de peptide, cele mai multe fiind proteine citosolice autologe. Asocierea moleculei $@O I cu un peptid nonself pe suprafaa celulei, semnific necesitatea distrugerii celulei int. -ovada n favoarea acestei ipoteze este adus de faptul c, in vivo, situsul de legare al moleculelor $@O I este ocupat de peptide self, adic fragmente ale proteinelor proprii, pe care celulele le capteaz din spaiul interstiial sau le produc n proteasom i le prezint ca i pe cele nonself. -up disocierea peptidului, molecula $@O I )goal* e&pus la suprafaa celulei, este instabil. Faptul c situsul de legare al moleculelor $@O I este ocupat de peptide self, este n acord cu teoria supravegherii imune, conform creia, celulele Biller i limfocitele ;c controleaz permanent suprafaa celulelor organismului, pentru a detecta eventuala apariie a antigenelor tumorale sau virale. $elulele care e&prim pe suprafaa lor molecule nonself, sunt eliminate prompt. -eoarece celulele prelucreaz i prezint continuu molecule proprii, celulele sistemului imunitar sunt stimulate permanent. "imfocitele controleaz calitatea moleculelor $@O I i detecteaz celulele ce prezint molecule alterate sau molecule nonself. Indivizii umani deficieni ai moleculelor $@O I, nu par a avea o inciden crescut a infeciilor virale severe, ceea ce sugereaz e&istena i a altor mecanisme de recunoatere a moleculelor nonself, neasociate cu moleculele $@O I. (ig. /7. 0eprezentarea schematic a moleculelor $-: i $-D.

Model"l

re%"#oa&ter

a#t $e#"l" de

%tre

l !+o% tele

0ecunoaterea antigenului de ctre limfocitele ; este mediat n primul r'nd, de receptorul de antigen 60$;7. 3ecvenele hipervariabile ale lanurilor Q i P formeaz regiunile determinante de comple#mentaritate 60-$ 1 i 0-$ 57. +uclele 0-$ 1 i 0-$ 5 ale regiunilor variabile 6G7 Q i P ale 0$;, interacioneaz cu regiunea Q helical a moleculei $@O, iar cele dou secvene 0-$ <, interacioneaz cu peptidul antigenic. Interaciunea limfocitului cu celula prezentatoare de antigen este mediat i de alte molecule.

15<

"imfocitele ;c prezint pe suprafaa lor, marBerul $- D i recunosc antigenele asociate cu moleculele $@O I, iar limfocitele ;h prezint marBerul $- : i recunosc antigenele asociate cu moleculele $@O II. @oleculele $-: i $-D sunt proteine membranare, monomorfe, participante la recunoaterea comple&elor $@O#peptide, de pe suprafaa celulelor int. -omeniile lor e&tracelulare, prin secvena aminoacizilor, se aseamn cu domeniile imunoglobulinelor. @olecula $-: este monomeric i este pliat n : domenii e&tracelulare, omologe cu ale moleculei de Ig, stabilizate prin puni 3#3. $-D este o protein dimeric, iar conformaia sa spaial prezint un domeniu asemntor domeniului variabil al moleculei de imunoglobulin. (n procesul recunoaterii antigenului, molecula $-D se asociaz cu domeniul constant Q#<, al moleculei $@O clasa I, iar molecula $-: se asociaz cu domeniile constante Q#5 sau P#5 ale moleculei $@O clasa II#a. @oleculele $-D i $-: sunt importante nu numai pentru orientarea limfocitelor spre intele adecvate, dar au i rol n transducerea semnalului, deoarece cozile lor citosolice leag o tirozin# Binaz, cu rol esenial n transmiterea semnalului activator al limfocitului ;. 0eceptorul de antigen al limfocitelor ; recunoate fragmentele peptidice comple&ate cu moleculele $@O I sau II. Pentru fiecare organism, diversitatea moleculelor $@O este limitat, dar ele leag o larg varietate de peptide scurte 6D#J aminoacizi, pentru moleculele $@O I i circa 1: aminoacizi, pentru moleculele $@O II7. -ei nu este o legare pe baza specificitii, interaciunea peptidului antigenic cu moleculele $@O este caracterizat de o afinitate nalt, deoarece se stabilete cu gruprile 1O5 i $88O de la e&tremitatea peptidului, restul secvenei de aminoacizi rm'n'nd disponibili pentru interaciunea cu 0$;.

(ig. /9. -iagrama domeniilor e&tracelulare ale moleculelor ;M8 clasa I 6sus7 i clasa II 6%os7. 3itusurile de legare ale celor dou clase de molecule au configuraii tridimensionale asemntoare i sunt ocupate de peptidul rezident self sau nonself 6dup 0oitt, 1JJ<7.

-eoarece moleculele $@O I i II leag peptide scurte, epitopii celulelor ; sunt alctuii din secvene peptidice lineare, adic configuraia epitopilor nu este dependent de conformaia proteinei native. -eoarece epitopii recunoscui de limfocitele ; sunt peptide scurte, rezult c prelucrarea proteolitic a antigenelor este o etap obligatorie, care precede interaciunea lor cu limfocitele ;. *reze#tarea a#t $e#elor a)o% ate %" !ole%"lele C(5

Antigenele nepeptidice sunt prezentate celulelor ;, prin alte mecanisme. @oleculele $-1 se aseamn structural cu moleculele $@O I. 2le prezint antigenele n asociaie cu domeniile hidrofobe, care formeaz caviti, capabile s lege antigenele lipidice i glico#peptidice. (n aceast asociaie, antigenele sunt recunoscute de limfocitele ;. 3e cunosc : izo#forme distincte de molecule $-1 6$-1a, #b, #c, #d7, codificate de C gene situate pe cromosomul 1. Prezentarea antigenelor lipidice

15:

n asociaie cu moleculele $-1 este sensibil la agenii de acidificare a endosomului 6cloroWuin, concana#micin A7. Probabil, asocierea antigenelor lipidice cu cu $- 1 se produce n compartimentul endo#somal acid. @oleculele $-1 sunt impor#tante pentru reaciile de aprare anti#infecioas, pentru c ele prezint antigenele de micobacterii 6acidul micolic, lipoarabinomananul7, celulelor ;. $alea $-1 de prezentare a antigenelor se aseamn cu cile de prezentare a antigenelor peptidice n asociaie cu moleculele $@O I i II. $- 1 este asemntoare din punct de vedere structural, cu moleculele $@O I, dar asocierea cu antigenul are loc n endosomul lipidic. Prezentarea antigenelor n asociaie cu moleculele $- 1 este considerat ca o cale distinct. A"ti+a ea #i4!'"ite#' T

(ig. /:. Moleculele ;M8 reglea rspunsul imun. a. 8 celul ; citoto&ic 6$-D7 recunoate peptidul n asociaie cu o molecul $@O clasa I, pe suprafaa unei celule infectate cu un virus. 1. 8 celul ; helper 6$-:7 recunoate peptidul antigenic asociat cu o molecul $@O clasa II, pe suprafaa unei celule prezentatoare de antigen 6$PA7. 2pitopii antigenici sunt recunoscui de 0$;, dar la procesul recunoaterii particip i moleculele $-D i respectiv $-:. $-D recunoate domeniul Q#< al moleculei $@O I, iar $-: se leag de domeniile Q#5#P#5 ale moleculei $@O II. $el puin trei molecule distincte sau comple&e moleculare, fizic independente, ale membranei au rol n transducerea eficient a semnalului activator al celulei ;, fiecare fiind asociat cu o activitate enzimatic relevant! # 0$;1 Q#P i comple&ul $-< 6\#]#^7. Partea invariant a 0$; este asociat cu tirozin#chinaza pCJ N
fEn

# coreceptorii $-: sau $-D, asociai cu tirozin#chinaza pC?lcBN # $-:C, cu activitate fosfatazic tirozin#specific. "imfocitele ; mature cu 0$; Q#P sunt $- : sau $-D. $elulele ;$-: recunosc fragmentele peptidice legate de moleculele $@O II, iar celulele ;$- D recunosc fragmentele peptidice legate de moleculele $@O I. Aceast specificitate a condus la sugestia c molecula $- : poate s lege molecula $@O II, iar molecula $-D leag molecula $@O I, ambele av'nd rol de coreceptori de antigen. (ig. /0. a. "uprafamilia genelor care codific imunoglobulinele i diferite alte molecule cu rol n recunoaterea intercelular. ;oate aceste molecule au o structur asemntoare. Familia moleculelor multigenice, cu rol n recunoaterea antigenului cuprinde imunoglobulinele, 0$;, moleculele $@O I i II.

15C

1. Familia moleculelor monogenice cuprinde molecula Dh! 6e&primat pe celulele ; i pe neuroni7, receptorii de poli1Ig 6transport IgA prin epiteliul mucoaselor7, H#;*M 6o molecul de aderen a neuronilor7, ;$0, ;$., precum i alte proteine 6o protein plasmatic uman, o protein neurocitoplasmatic7 6dup 0oitt, 1JJI7. $oreceptorii $-: i $-D sunt glicoproteine trans#membranare. Fiecare este aso#ciat cu o molecul de tirozin#Binaz specific celulei ;, pC?lcB. In procesul activrii celulei ; de ctre antigen, coreceptorul trebuie s se lege de aceiai molecul $@O ca i 0$;, pentru transducerea optim a semnalului. Inter#aciunea faciliteaz transmi#terea semnalului activator cu o eficien de p'n la <99 de ori mai mare. $-: i $-D sunt mem#bre ale suprafamiliei imuno#globulinelor. -ei ambele au rol de coreceptori i se asociaz cu aceiai tirozin#Binaz 6pC?lcB7, nu au omologie structural. 3tudiile de cristalografie cu raze S au artat c domeniul e&tern al moleculei $- : formeaz o protruzie pe faa lateral a moleculei, implicat n legarea moleculei $@O II. @olecula $-D este format din dou catene diferite 6Q i P7 i are un singur domeniu de omologie cu molecula de Ig, la captul amino. Acesta este urmat de o secven cu configuraie nedefinit i cuprinde resturile de cistein care permit legarea moleculelor n dimeri funcionali. @olecula $-D are rol de coreceptor, particip'nd la recunoaterea antigenului, prin asocierea cu domeniul Q#< al moleculei $@O I. (ig. />. -iferite aran%amente ale );D i ale co1receptorilor si sunt determinate de izoformele lui $-:C e&primate pe celula ;. Pe celulele neanga%ate, $-:, $-:C i 0$; migreaz independent pe suprafaa celulei. Pe celulele ; de memorie, cele trei molecule sunt asociate. Pe celulele ;h5 clonate, o izoform de $-:C cu gr. mol mic, se leag de $-:, dar acest comple& nu se asociaz cu 0$;. Activarea optim a celulei are loc n cazul n care cele trei molecule sunt asociate str'ns pe suprafaa limfocitului 6dup HaneKaE, 1JJI7. $oreceptorii se asociaz fizic cu 0$; n timpul activrii celulei ;. @olecula $-:C este o fosfataz transmembranar tirozin#specific. 2ste un antigen leucocitar, prezent pe toate celulele de origine hematopoietic, alctuit dintr#un domeniu e&tern variabil i un domeniu citoplasmatic constant ce const din dou subdomenii cu activitate fosfatazic tirozin# specific. $-:C prezint mai multe izoforme, care variaz cu tipul celular. Garia#bilitatea rezult din clivarea alternativ a A01m. $elulele ; i schimb izoforma de $- :C n timpul activrii i dup activare. Pe limfocitele ; neanga%ate, izoformele de $-:C sunt toate cu greutate molecular mare, iar celulele ; activate sau de memorie e&prim o variant a $-:C cu greutate molecular mic. Izoformele distincte se asociaz n mod diferit cu celelalte componente ale comple&ului la celulele neanga%ate i la cele de memorie, modific'nd eficiena transmiterii semnalului de activare.

15?

"imfocitele ;$-: recunosc com#ple&ul molecular $@O II#epitop, e&pus la suprafaa celulei prezentatoare de antigen 6$PA7 i se activeaz. "imfocitul activat secret I"#5, o interleuchin esenial pentru e&pansiunea clonal a limfocitelor ;$- : i amplificarea rspunsului imun. Amplificarea rspunsului imun parcurge mai multe etape! (ig. //. @ecanismul activrii celulei ;. # dup legarea limfocitului ;$-: de $PA, ultima produce I"#1N # stimuleaz limfocitul ;$-: s produc I"#5. I"#5 acioneaz stimulator asupra celulelor care o produc 6bucl autocrin7 i asupra limfocitelor nvecinate, care au aceiai specificitate a receptorului de antigen 6aciune paracrin7, efectul fiind e&primarea intens a receptorilor pentru I"# 5 pe suprafaa limfocitelor stimulateN # limfocitele ;$-: activate de I"#5 prolifereaz i genereaz o populaie de celule imunoreactive, ;h1 i ;h5, care la r'ndul lor, prin intermediul interleuchinelor pe care le secret, au efecte activatoare asupra compartimentului imunitii celulare sau stimuleaz activarea i proliferarea limfocitelor + specifice, n funcie de natura antigenului. (ig. /@. *mplificarea rspunsului imun. Pentru ca epitopii s fie recunoscui, moleculele $@O trebuie s e&pun simultan pe suprafaa celulei, un numr mare de peptide nonself, pentru un interval suficient, astfel nc't s permit limfocitelor ; s controleze calitatea moleculelor $@O ale fiecrei celule. ;impul de generaie al unei celule ;, dup stimularea antigenic poate fi de :,C ore, adic ntr# o sptm'n, dintr#o singur celul ; pot s rezulte 19 15 celule, ceea ce ar nsemna dublarea numrului de limfocite ; n organism. 8 protein de dimensiuni medii, cu 5#19 epitopi, poate fi recunoscut de 19#1999 celule neanga%ate, n funcie de capacitatea moleculelor $@O de a prezenta epitopii peptidici. $onsecutiv unei infecii virale, numrul celulelor $-D cu specificitate fa de antigenele virale, la oarece poate s creasc de 19 ori. -urata de via a limfocitelor ; este greu de evaluat, dar moartea lor prin apoptoz este declanat de I"#5 i de antigen. -up stimularea ciclului celular sub aciunea antigenului, limfocitele ; devin foarte sensibile la apoptoz. Proliferarea celulelor ; este stimulat dup ce I"#5 se fi&eaz pe receptorul specific. -up unul sau c'teva cicluri, limfocitele ; n faza . 1 sau 3, devin foarte sensibile la apoptoz. Aa se e&plic moartea hibridoamelor ; ca rspuns la legarea ncruciat a 0$;. Apoptoza celulelor ; este declanat n dou situaii! sub aciunea stimulatoare a antigenului i n absena limfochinelor. 0spunsul celulelor ; la antigen se desfoar n dou faze, cu evenimente moleculare distincte! faza de activare i cea de proliferare. Faza de activare const n inducerea genelor pentru sinteza I"#5 i a receptorului de mare afinitate pentru I"#5. In aceast faz, apoptoza este practic absent. Faza de proliferare a limfocitelor ; este iniiat de fi&area I"#5 pe receptorul su. -up ce celulele ; au parcurs unul sau c'teva cicluri

15I

celulare i intr n faza . 1 sau 3, devin foarte sensibile la apoptoz. Factorul esenial al apoptozei este I"#5. $onceptul controlului feed#bacB al intensitii rspunsului imun prin fenomenul apoptozei 6reglarea propriocid7 s#a nscut din nevoia de a e&plica acest nou rol al I"#5, care contrasteaz cu proprietile sale proliferative. ;eoria afirm c I"#5 confer celulelor ;, sensibilitate la apoptoz. .radul stimulrii antigenice determin inducerea apoptozei. -up ncetarea stimulrii antigenice, sinteza I"#5 i a receptorului su scade. In absena I"#5, cu rol trofic pentru limfocitele ;, se iniiaz apopto a pasiv. Invers, dac celulele ; intrate n ciclul diviziunii sunt intens stimulate de antigen, se produce apopto a activ 6indus de antigen7. Apoptoza pasiv diminu e&pansiunea populaiei celulelor ;, i o adapteaz la intensitatea unui rspuns fiziologic. Apoptoza activ este indus numai de activarea 0$;. $a rezultat al acestor dou forme de apoptoz, rspunsul feed#bacB elimin celulele ; dac antigenul i I"#5 sunt n e&ces sau n deficit. de 8 parte a celulelor ; poate s scape morii apoptotice pasive sau active i s devin limfocite ; memorie, cu via lung.

1 3tructura 0$; a fost prezentat (ntr#un capitol anterior.

A"ti+a ea

#i4!'"ite#'

3pre deosebire de limfocitele ; care recunosc numai antigenul modificat, prelucrat i prezentat n asociaie cu moleculele $@O, limfocitele + recunosc at't forma prelucrat c't i forma nativ, nemodificat a antigenului solubil. $ontactul limfocitelor + cu un antigen timo#dependent, declaneaz diferenierea limfocitelor + pe dou ci! # calea e&trafolicular, rezultatul fiind sinteza timpurie a anticorpilor # calea centrilor germinativi, care duce la memorie imunologic i genereaz plasmocite. (n splin, n absena cooperrii cu limfocitele ;h, consecina este lipsa de rspuns imun 6anergia7. -ac are loc cooperarea ;#+, se formeaz focare proliferative oligoclonale. -in focare, unele limfocite + migreaz n centrul germinativ i dob'ndesc memoria imunitar.

15D

"imfocitele + recunosc direct antigenele timo#independente i se activeaz fr s necesite cooperarea limfocitelor ;. -up activare ntr#un centru germinativ, de ctre un antigen ;#independent sau dup interaciuni cu celule ;h, celulele + mici n repaus sunt convertite la limfoblaste mari i ulterior acestea evolueaz fie spre plasmocite productoare de anticorpi, fie se difereniaz n celule mici de memorie. Procesul de activare n centrul germinativ este nsoit de generarea mutaiilor n regiunea G i comutarea de la Ig@, la Ig., IgA sau Ig2. @utaiile mresc diversitatea situsurilor de legare a antigenului. -ac mutaia produce un situs nefuncional, celula activeaz programul morii genetice 6apoptoza7. Aceste modaliti de difereniere sunt influenate de semnale co#stimulatoare i de citochine 6I"#5, :, ?, 19, ;.F+7. "imfocitul + leag specific antigenul n configuraia nativ, prin intermediul receptorului imunoglobulinic de membran i probabil l ncorporeaz sub forma comple&ului antigen#anticorp. Aa se e&plic faptul c anticorpii specifici fa de proteinele native recunosc epitopi conformaionali discontinui, alctuii din aminoacizi, care n secvena primar sunt localizai la distan, dar n molecula pliat a%ung n pro&imitate. -e aceea, limfocitele + sunt foarte eficiente n procesul captrii, prelucrrii i prezentrii unui antigen in%ectat n doz foarte mic 6de 1 999 de ori mai mic dec't doza necesar prezentrii aceluiai antigen de ctre macrofage sau de ctre celulele dendritice7. Antigenele care stimuleaz receptorii celulelor + sunt diverse! proteine, polizaharide, lipide, molecule mici6arsenat, trinitrofenol7. Importana limfocitelor + ca prezentatoare de antigen este redus n cursul rspunsului imun primar, dar devin foarte importante n cursul rspunsului imun secundar, n special n cazul n care doza stimulant de antigen este foarte mic. (n cursul stimulrii antigenice secundare, limfocitele + de memorie, a cror populaie este numeroas, nglobeaz specific antigenul prin intermediul receptorilor imunoglobulinici 6endocitoz mediat de receptori sau prin pinocitoz nespecific7. 3oarta antigenului recunoscut specific de limfocitele + nu este cunoscut. Antigenul ar rm'ne n compartimentul vezicular i nu ar fi amestecat cu proteinele citoplasmatice. Proteinele internalizate, probabil sunt prelucrate de proteazele lizosomale i se elibereaz fragmentele peptidice care se asociaz cu moleculele $@O II. $omple&ele peptid#molecule $@O II sunt transportate la suprafaa celulelor +, unde interacioneaz cu 0$; specific al celulelor ;h. Interaciunea peptid# 0$;, determin eliberarea citochinelor din limfocitul ;h, la r'ndul lor, cu rol stimulator asupra proliferrii i maturrii celulelor +. Pe de alt parte, antigenul nativ, fr s fie internalizat i prelucrat, ar putea declana stimularea limfocitelor + de memorie. -in aceast cauz, rspunsul imun va fi specific fa de epitopii conformaionali ai moleculei native, n configuraia sa spaial. "imfocitele + recunosc i leag specific, polipeptide mici i mi%locii. @oleculele proteice mari i antigenele corpusculare sunt nglobate i prelucrate de macrofage i de celulele dendritice, iar epitopii lor sunt e&pui n asociaie cu moleculele $@O II, fiind recunoscui de limfocitele ; i +. Mecanismul molecular al activrii limfocitelor + este greu de studiat, datorit faptului c proporia limfocitelor stimulate de antigenul specific este mic, chiar i dup stimularea secundar. -in acest motiv, activarea limfocitelor s#a e&plicat prin e&trapolarea rezultatelor obinute dup activarea policlonal nespecific, in vitro, consecutiv legrii moleculelor de lectine, cu efect mitogen asupra limfocitelor +. 0eceptorii de lectine ai limfocitelor + nu s#au identificat.

15J

A II#a metod de studiu a mecanismului activrii limfocitelor + a constat n utilizarea anticorpilor cu specificitate fa de Ig de membran, marcai cu fluorocromi. Astfel s#a evideniat c moleculele imunoglobulinice ale suprafeei limfocitului +, cu rol de receptor de antigen, prezint un grad ridicat de mobilitate. -up cuplarea cu anticorpii specifici 6sau cu antigenul bivalent specific7, moleculele imunoglobulinice membranare se grupeaz n zone discontinui 6)petice*7 i ulterior conflueaz ntr#o zon delimitat a membranei, denumit )bonet*. Acesta este fenomenul de )capping* 6bonetare7. @oleculele receptoare de antigen astfel grupate, sunt eliberate n mediul e&tracelular sau sunt endocitate. "egarea ncruciat a moleculelor de suprafa, declaneaz activarea limfocitului +. 0eceptorul limfocitelor + este evaluat la 19 D#19J specificiti de legare. -atorit numrului foarte mare de specificiti de legare antigenic a limfocitelor +, organismul prezint o mare diversitate de imunoglobuline serice 619999999 tipuri diferite7, adic un numr de 1999 de ori mai mare dec't numrul proteinelor structurale, enzimatice i hormonale din organism. Antigenele timo1independente par s activeze limfocitul +, prin acelai mecanism. 2le au epitopi repetitivi care leag simultan mai muli receptori de antigen ai membranei limfocitului +. Punile moleculare ntre receptorii de antigen, declaneaz semnalul activator al limfocitului, materializat n proliferarea i diferenierea sa. (ig. /.. *ctivarea limfocitului +, dup legarea unui antigen cu epitopi repetitivi.

St !"larea #e)pe% + % a l !+o% telor B Proliferarea limfocitelor + este indus nu numai de antigenul specific i de superantigene, ci de orice ligand care leag ncruciat receptorii de antigen i formeaz puni intermoleculare. "egarea ncruciat a imunoglobulinelor de suprafa 6probabil nu numai a lor, ci i a altor molecule membranare7 declaneaz semnalul pentru proliferare, dar nu i pentru diferenierea lor n plasmocite. 3timularea limfocitului + este, uneori, rezultatul activrii receptorilor membranari neimunoglobulinici, sub aciunea diferitelor mitogene. @itogenele sunt antigene timo#independente. $ele mai cunoscute mitogene sunt lectinele5 din seminele plantelor. -in punct de vedere chimic, mitogenele sunt glicoproteine cu specificitate de legare pentru glucidele de pe suprafaa celulelor. "ectinele sunt produse de toate organismele, dar unele tipuri de celule produc cantiti mari de lectine. Av'nd o distribuie ubicvitar, lectinele ndeplinesc funcii biologice importante, fiind molecule de recunoatere n diferite procese biologice! # eliminarea glicoproteinelor din circulaie # aderena agenilor infecioi de celulele gazd sensibile # recrutarea leucocitelor la situsul inflamator

1<9

# medierea interaciunilor celulelor imunitare. "ectinele cele mai studiate sunt cele din plantele leguminoase! $on A, POA, lectinele de soia 63+A7 i din arahide 6P1A7. $a model de structur, toate lectinele leguminoaselor sunt formate din 5 sau : subuniti identice sau aproape identice de 5C#<9 B- fiecare, toate av'nd aceiai specificitate de legare a glucidului. "ectinele se clasific ntr#un numr mic de grupe de specificitate, n funcie de monozaharidul pentru care ele manifest cea mai nalt afinitate de legare 6manoza, galactoza, 1#acetilglucozamina, "#fucoza i acidul 1#acetilneuraminic7. ,nele lectine leag slab monozaharidul, dar interacioneaz cu oligozaharidele6di#, tri# i tetrazaharidele7. -e e&emplu, selectinele leag numai oligozaharidele. "ectinele se combin cu glucidele printr#o reea de legturi de O i interaciuni hidrofobe. "ectinele au constituit instrumentul ma%or pentru studiul mecanismelor stimulrii mitogenice a limfocitelor. (n prezena unei lectine mitogene, in vitro, o larg varietate de celule int ne nrudite antigenic, sunt lizate de celulele ;c, fenomen cunoscut sub denumirea de citoto%icitate dependent de lectin6prin analogie cu fenomenul A-$$7. "iza celulelor tumorale de ctre macrofage, dependednt de lectine, este o alt form de citoto&icitate. ,nele lectine sunt to&ice pentru celulele mamiferelor, in vivo i in vitro. Funcia ma%or a lectinelor este cea de recunoatere celular. -e e&emplu, hemaglutinina peplosului viral este lectina specific pentru acidul 1#acetil neuraminic, iar lectinele suprafeei bacteriene mediaz legarea celor patogene de celulele gazd, o treapt esenial pentru iniierea procesului infecios. Oaptenele inhibitoare ale lectinelor bacteriene prote%eaz fa de infecia e&perimental cu bacteriile care e&prim lectina, furniz'nd baza dezvoltrii terapiei anti#adezine a infeciilor bacteriene. ,nele lectine ale suprafeei celulei bacteriene mediaz legarea specific de fagocitele 6P@1, macrofage7 umane i de oarece, n absena opsoninelor, rezultatul fiind fagocitoza, ingestia i digestia bacteriilor. Procesul s#a denumit lectino1fagocito . "a nevertebrate, se crede c lectinele de pe suprafaa hemocitelor sunt molecule de recunoatere a moleculelor nonself. "ectinele cu funcie endocitar sunt receptori legai de membran cu diferite specificiti i par a avea rol n clearance#ul glicoproteinelor i chiar al celulelor 6eritrocite mbtr'nite, bacterii7 din circulaie. Interaciunile adezive mediate de glucidele de suprafa i de selectine, controleaz traficul leucocitelor spre situsurile inflamatorii i migrarea 6homing7 a limfocitelor n organele limfoide specifice. 0spunsul limfocitelor + la lectine este policlonal, deoarece sunt activate limfocitele cu specificiti multiple de legare a antigenului. In vitro, la concentraii mari, unele mitogene activeaz toate clonele de limfocite +, inclusiv pe cele de memorie, independent de specificitatea lor

1<1

antigenic. "a concentraii mici, mitogenele pot produce chiar activarea specific a limfocitelor +. 0eceptorii de mitogene nu se cunosc, dar sunt diferii de receptorii imunoglobulinici pentru antigene. "imfocitele ; sunt stimulate policlonal de POA, $on A, iar PF@ 6poBeKeed mitogen7 stimuleaz celulele ; i +. Ali activatori policlonali ai limfocitelor + i ai diferenierii lor la plasmocite sunt virusul 2pstein#+arr, concentraiile mari de endoto&ine ale bacteriilor .ram negative, polizaharidul de "tr. pneumoniae, ficolul, polimerii -#aminoacizilor, polivinil#pirolidona. ;oate aceste antigene persist ndelung n organism, pe suprafaa macrofagelor din sinusul subcapsular al ganglionilor limfatici i n zona splenic marginal. 2le leag ncruciat receptorii imunoglobulinici ai limfocitelor +. $elulele + ale noilor nscui nu rspund bine la antigenele timo#independente, ceea ce are consecine importante pentru eficiena vaccinurilor polizaharidice la copiii mici. 3emnificaia fiziologic a activrii policlonale nu este clar. -up activarea nespecific policlonal, se sintetizeaz anticorpi a cror specificitate nu este totdeauna complementar antigenului inductor. -e e&emplu, limfocitele + stimulate de virusul 2pstein#+arr sintetizeaz anticorpi care se combin cu fosforil#colina, o molecul absent n structura virionilor, dar prezent n peretele celular de "tr. pneumoniae. Activarea policlonal a limfocitelor + este important n fazele timpurii ale infeciei, dar are i posibile consecine negative ce constau n inducerea variatelor fenomene autoimune. Cooperr %el"lare 0# ela,orarea r)p"#)"l" !"#

-e cele mai multe ori, sinteza anticorpilor dup stimularea antigenic, este rezultatul interaciunilor stimulatoare ale limfocitelor + convenionale 6+ 57, cu limfocitele ;h. ,n antigen macromolecular poate fi considerat ca un comple& format din carrier i determinani haptenici 6epitopi7, recunoscui de limfocitele ;h i +. Antigenele care pentru stimularea rspunsului imun necesit cooperarea celor dou populaii de limfocite, aparin grupului larg al antigenelor timo1dependente. 2le sunt reprezentate de proteinele heterologe, de polipeptidele sintetice, de hematiile heterologe, de flagelina monomer etc. $ele mai multe antigene moleculare, n special de natur proteic sunt timo#dependente. ;ooperri celulare D1B1macrofag. Pentru declanarea rspunsului imun, antigenele timo# dependente necesit cooperarea limfocitelor ;h, cooperare supus restriciei moleculelor $@O. Aceste antigene se comport ca univalente, n raport cu specificitatea antigenic a fiecrui determinant i de aceea, n absena cooperrii celulare, ele sunt ineficiente n stimularea rspunsului imun. Pe de alt parte, antigenele timo#dependente pot fi prea repede degradate de celulele fagocitare. 1u au activitate mitogenic, iar dac se leag de receptorii limfocitelor +, aceste antigene se comport ca haptene i nu declaneaz diferenierea celulelor +. -e cele mai multe ori, limfocitele cooperante ;h i + recunosc epitopi diferii ai aceleiai molecule de antigen solubil nativ, neprelucrat, dar e&pus pe suprafaa limfocitului +. "imfocitele + recunosc epitopi conformaionali ai antigenelor proteice mici, iar limfocitele ;h recunosc epitopi secveniali, de 19#59 aminoacizi. $ele dou celule cooperante ader una de alta. -up ce recunoate antigenul, celula ;h activat secret I"#5 n spaiul intercelular ngust, cu rol declanator al stimulrii

1<5

limfocitului +. $lona de limfocite +, cu receptori specifici pentru epitopul antigenic, prolifereaz. Astfel, se produce fenomenul e%pansiunii clonale. "imfocitele ;h i + coopereaz i n cazul n care recunosc epitopi diferii ai unui antigen, asociai cu moleculele $@O II, pe suprafaa unei $PA. @a%oritatea antigenelor solubile i toate antigenele corpusculare sunt captate i prelucrate de macrofage i de celulele dendritice i sunt prezentate n asociaie cu moleculele $@O II. 2pitopii acestor antigene, de cele mai multe ori cu specificitate diferit, sunt recunoscui de limfocitele + i ;h. "imfocitele ;h se activeaz i elibereaz I"#5 cu efect stimulator asupra limfocitului +, care prolifereaz i se difereniaz p'n la celula cap de serie A plasmocitul A ce sintetizeaz i secret anticorpi specifici fa de epitopul stimulator al limfocitului +. A%t varea l !+o% telor B6 #d") de a#t $e#ele t !o. #depe#de#te

Antigenele timo#independente se numesc astfel, deoarece declaneaz rspunsul imun prin activarea direct a limfocitelor +, fr s necesite cooperarea limfocitelor ;h. Antigenele timo# independente sunt molecule mari, neproteice! polizaharidul capsular de "treptococcus, ficolul 6polimer de sucroz7, de&tran#sulfatul, "P3 ale bacteriilor .ram negative, levanii 6polimeri de fructoz7, polivinil#pirolidona. Antigenele timo#independente au trei proprieti comune! # au secvene repetitive n structura lor chimic. Aceast condiie nu este suficient i nici definitorie pentru calitatea de antigen timo#independednt, deoarece polimerii sintetici ai "# aminoacizilor, au secvene repetitive, dar sunt antigene timo#dependenteN # au o structur tridimensional care favorizeaz interaciunea direct cu receptorii de antigen ai limfocitelor +N # sunt molecule re istente la aciunea enzimelor degradative i persist ndelung n organism. "imfocitele ; nu coopereaz la elaborarea rspunsului imun indus de antigenele polizaharidice, deoarece acestea sunt rezistente la procesele degradative i nu furnizeaz oligozaharide care s se poat asocia cu moleculele $@O II. Fragmentele moleculare eventual rezultate din procese degradative, se leag cu afinitate mic de proteine i nu se asociaz cu moleculele $@O II. $ele dou categorii funcionale de antigene nu sunt strict delimitate n ceea ce privete mecanismul activrii rspunsului imun. -up degradarea structurilor repetitive, antigenele timo# independente devin timo#dependente. -e e&emplu, glucagonul6antigen timo#dependent7, dup clivare cu tripsin, elibereaz doi determinani antigenici! unul corespunztor captului 1#terminal, timo#independent i cel corespunztor captului $#terminal, timo#dependent6stimulator al limfocitelor ;h7. A%t varea l !+o% telor B5

1<<

"imfocitele +1 par s fie stimulate i s produc anticorpi dup un mecanism independent de celulele ;. Aceste celule au nivele nalte de Ig@ pe suprafaa lor, apar timpuriu n ontogenie i migreaz predominant n cavitile peritoneal i pleural, au capacitate de re noire i manifest diferite specificiti de legare a epitopilor antigenici. $elulele +1 recunosc antigenele bacteriene comune 6fosforil#colina7, Ig, A-1, proteinele membranare eritrocitare. 3pectrul reactivitii nu este limitat la molecule nonself, ci se manifest i fa de molecule proprii! hormoni 6insulin, tiroglobulin7, constituieni celulari 6A-1, miozin, tubulin, fosfolipide, fragmentul Fc al Ig. autolog7. 3inteza auto#anticorpilor de ctre celulele +1 este argumentat de faptul c e&pansiunea neoplazic a acestor celule 6ca n leucemia limfocitar cronic7 este adeseori asociat cu simptomele autoimune. $elulele +1 au un rol important n imunitatea nscut, deoarece secret cantiti mari de anticorpi naturali 6Ig@7 fr e&punerea la antigenele din mediu i fr imunizare. $elulele +1 au o contribuie foarte important la rspunsul imun al mucoaselor. @ulte plasmocite din structurile limfoide ale intestinului, productoare de IgA, deriv din celulele peritoneale +1, suger'nd migrarea limfocitelor ntre cavitatea peritoneal i .A";. IgA sintetizat fa de antigenele peretelui bacteriilor din lumenul intestinal, este secretat n special de celulele + 1. sIgA produs de celulele +1 are rol important n protecia suprafeei mucoaselor, mpiedic'nd penetrarea sistemic a bacteriilor microbiotei intestinale. 3inteza sIgA nu necesit celulele ;h i nici structuri foliculare organizate 6plci PeEer i centri germinali7. ,n alt situs strategic de aprare antimicrobian este ona marginal a splinei, localizat la %onciunea pulpei albe i roii. 2a conine macrofage, celule dendritice, celule + i este prima linie de aprare fa de agenii patogeni venii pe cale sanguin. $elulele + din zona marginal se deosebesc fenotipic de alte limfocite splenice prin prezena mai bine e&primat, a receptorilor pentru complement i pentru Ig@. $a i celulele +1 peritoneale, celulele zonei marginale sunt foarte sensibile la stimularea cu "P3, care induce diferenierea lor rapid n plasmocite. 3timularea lor este independent de celulele ;h. E+e%tele )t !"lr a#t $e# %e a)"pra 'e)"t"l" l !+o d )e%"#dar

Antigenul in%ectat intravenos este captat preferenial de macrofagele din zona marginal a splinei. Antigenele care strbat mucoasa intestinal sunt captate de celulele @ ale domului plcii PeEer. 2le sunt transportate la limfocitele ; i + din ariile plcii. 2venimente asemntoare au loc n esutul limfoid asociat bronhiilor. Antigenul in%ectat subcutan sau intradermic este transportat n ganglionii limfatici locali, fie n stare liber cu flu&ul limfatic, fie legat pe suprafaa celulelor specializate6celulele "angerhans prsesc epiderma prin vasele limfatice eferente, devin celule cu voal i dup ce a%ung n ganglionul limfatic migreaz n aria celulelor ; i devin celule interdigitate7. "imfocitele mature recirculante vin n contact cu $PA, se activeaz i formeaz centrii germinativi. (ntr#un ganglion limfatic se disting : faze ale reactivitii celulare.

1<:

17 In primele ore dup stimularea antigenic se produce o reacie inflamatorie local, cu o cretere a flu&ului sanguin de circa 5C de ori. 3e intensific traficul limfocitar spre ganglionii regionali. $oncomitent se produce obturarea cii de ieire a limfocitelor din ganglion, dar rata curgerii limfei nu se modific. 3ub aciunea unor factori locali 6prostaglandine, factori de aderen7 se mrete gradul de aderen limfocitelor i astfel n ganglioni se formeaz un )dop* limfocitar. 57 -up 1#5 zile se intensific ieirea limfocitelor ganglionare n flu&ul limfatic eferent. In ganglion sunt reinute limfocitele care au recunoscut specific antigenul. <7 (n cea de a III#a i a IG#a zi dup stimularea antigenic se intensific proliferarea limfocitelor activate i n limfa eferent apar limfoblaste. Acestea au proprieti specifice de homing! vor migra n ali ganglioni i n noile sedii se difereniaz n celule care sintetizeaz anticorpi 6plasmocite7. :7 -up cea de a IG#a zi diminu generarea blastelor. -in celulele stimulate rezult celule de memorie care trec n s'nge i devin circulante. 3timularea cu antigene timo#dependente este nsoit de formarea centrilor germinativi. In centrii germinativi, limfocitele + proliferante se gsesc n asociaie cu limfocitele ;h.

DINAMICA RS/UNSULUI IMUN MEDIAT HUMORAL

(n serul normal, cantitatea total de imunoglobuline este de 19 mgTml 6circa C & 19 1? molecule7. (nainte de imunizare, anticorpii serici specifici fa de un antigen dat, sunt sub nivelul detectabil prin metodele clasice. 0spusul imun generat dup contactul primar al organismului cu antigenul constituie rspunsul imun primar, n a crui dinamic se disting trei faze! # faza de laten # faza de cretere a titrului anticorpilor # faza de scdere a titrului anticorpilor serici. (a a de laten este intervalul cuprins ntre momentul stimulrii antigenice i nceputul creterii titrului anticorpilor serici. -urata sa este foarte variabil n funcie de natura antigenului 6de e&emplu, 5#< zile pentru hematiile de berbec i 59 de zile pentru to&ina difteric7, de do a de antigen administrat, de calea de administrare 6subcutan, intramuscular, intravenoas7, de modul de administrare 6cu sau fr ad%uvant7.

1<C

"atena este mai scurt pentru antigenele corpusculare. Perioada de laten este necesar e&pansiunii clonale. "a contactul primar al sistemului imunitar cu antigenul, n organism se gsete o populaie numeric restr'ns de limfocite care recunosc specific antigenul. In perioada de laten, clona de limfocite activat specific, prolifereaz intens 6cu o succesiune de circa D generaii celulare7 i va produce o populaie de celule, corespunztoare numeric reaciei de aprare a organismului. (a a de cretere a titrului anticorpilor serici ncepe la sf'ritul perioadei de laten. ;itrul anticorpilor crete cu o rat e&ponenial. -urata sa este foarte variabil! fa de hematiile de berbec, titrul ma&im al anticorpilor este atins la :#C zile, iar al anticorpilor anti#to&in difteric, la circa J9 de zile. ;itrul rm'ne ma&im 6 n platou7, c'teva zile, dup care ncepe s scad. (a a de scdere a titrului anticorpilor ncepe cur'nd dup atingerea valorii ma&ime. 0ata scderii depinde de rata sintezei, de rata degradrii anticorpilor, dar i de cantitatea de antigen disponibil, care leag anticorpii n comple&e, determin'nd scderea titrului lor. ;itrul Ig. scade cu IMT zi, IgA A cu 5CMT zi, Ig@ A cu 1DMTzi. "a <9#:9 de zile, titrul anticorpilor poate deveni nedectabil. (n fazele de cretere i de scdere a titrului, anticorpii sunt detectabili prin reacii secundare in vitro, de aglutinare i de precipitare. (ig. /B. $ele : fa e caracteristice ale rspunsului! faza de lag, faza creterii logaritmice a titrului anticorpilor, fa a de platou i fa a de declin, n timpul creia anticorpii sunt catabolizai. -inamica rspunsului imun depinde de natura antigenului i de specia gazd. (n perioada de debut a rspunsului imun primar se sintetizeaz Ig@. -up c'teva zile se detecteaz Ig., care atinge un titru ma&im mai nalt dec't Ig@. ;itrul Ig@ ncepe s scad, nainte ca titrul Ig. s ating valoarea ma&im. "a nivelul ma&im al titrului anticorpilor, Ig. este de circa 19 ori mai concentrat dec't Ig@, ceea ce denot c dup activare, dei ma%oritatea limfocitelor + 6circa J9M7 au ca receptor de antigen molecula de Ig@, dup activare comut sinteza de la izotipul Ig@ la izotipul Ig.. ,nele limfocite ale clonelor n e&pansiune, nu se difereniaz n plasmocite, ci sintetizeaz molecule de imunoglobulin care rm'n asociate membranei citoplasmatice. (n tehnica hemolizei localizate n gel, aceste celule nu produc pla%e de liz. 2le constituie substratul celular al memoriei imunitare. 0spunsul imun are caracter adaptativ i se caracterizeaz prin trei trsturi eseniale 6care lipsesc reaciilor de aprare nespecifice, nscute7! # specificitatea 6anticorpii se combin cu antigenul inductor7 # diversitatea i otipic i a situsului de combinare # memoria 6pstrarea memoriei e&perienei contactului cu antigenul7. $iversitatea. @oleculele de anticorpi sunt foarte heterogene n ceea ce privete izotipul 6Ig., A, @, 27. Ig@ dispare relativ repede, dar Ig. i IgA persist la titruri sczute, nedectabile prin metodele obinuite, pentru perioade variabile 6sptm'ni, ani7. Anticorpii sunt heterogeni din punctul de vedere al specificitii de legare cu diferii epitopi ai antigenului inductor.

1<?

Anticorpii rspunsului imun primar 6Ig@ i Ig.7, n general, au afinitate sczut, dar aviditatea lor este mare. *finitatea anticorpilor msoar fora de legare dintre un epitop i situsul de combinare al anticorpului specific. Afinitatea este rezultanta forelor de atracie 6legturi de O, fore electrostatice, fore van der Faals, legturi hidrofobe7, dintre cele dou grupri reactante. *viditatea msoar fora rezultant a afinitii dintre epitopii multipli i paratopii complementari i este consecina faptului c cele mai multe antigene sunt mozaicuri de epitopi. $omple&ele antigen#anticorp cu Ig@ au aviditate mare, deoarece anticorpul este decavalent.

RS/UNSUL IMUN HUMORAL SECUNDAR

0spunsul imun secundar este e&presia memoriei imunitare. @emoria definete capacitatea unui organism de a elabora un rspuns imun mai eficient, adic mai rapid, dar n special mai intens, dup contactul secundar cu antigenul. 0spunsul imun secundar fa de antigenele timo1independente este comparabil cu rspunsul imun primar! # dup stimularea secundar, titrul anticorpilor nu crete semnificativ # se sintetizeaz predominant Ig@ # nu se produce comutarea sintezei la Ig. # memoria imunitar este slab e&primat. 0spunsul imun secundar este indus de antigenele timo1dependente i se caracterizeaz printr#o laten mai scurt, creterea rapid a titrului anticorpilor, cu un ma&im mult mai nalt dec't n rspunsul imun primar. -oza de antigen inductoare a rspunsului imun secundar este mult mai mic, iar timpul necesar dublrii titrului este de ordinul orelor. Iniial se sintetizeaz Ig@, fr o perioad evident de laten. 3inteza Ig. este de asemenea accelerat. ;itrul ma&im al Ig. este de c'teva ori mai mare dec't n rspunsul imun primar i rm'ne ridicat o perioad mult mai lung de timp. -in punctul de vedere al evenimentelor celulare, la c'teva zile dup iniierea rspunsului imun secundar, limfocitele + de memorie, activate, migreaz n mduva osoas i se matureaz n plasmocite. Mduva osoas este un sediu ma%or al rspunsului imun specific i o surs ma%or de imunoglobuline. In rspunsul imun secundar, cea mai mare parte a imunoglobulinelor se sintetizeaz n mduva osoas. In timp ce esutul limfoid periferic rspunde rapid dup stimularea antigenic, dar numai pentru o perioad scurt, mduva osoas rspunde lent, dar sinteza de anticorpi este masiv i de lung durat, fa de un antigen care stimuleaz repetat.

1<I

(ig. @2. )spunsul imun primar i secundar fa de un antigen macromolecular. 2ste ilustrat corelarea titrului anticorpilor cu activitatea celulelor +. $itochinele regleaz comutarea sintezei de la Ig@ la Ig.. ;rsturile distinctive ale rspunsului imun secundar sunt! a7 maturarea afinitii anticorpilor< b7 comutarea i otipului la sinte a Ig'. Maturarea afinitii anticorpilor se e&plic prin aceea c pe parcursul diferenierii proliferative a limfocitelor +, se produc mutaii somatice ale secvenei regiunii G, prin substituii de nucleotide i prin selecia mediat de antigen, a clonelor de limfocite cu afinitate mare de legare a epitopilor complementari. "a om, hipermutaia are loc n prezena antigenului, n centrii germinativi, singurul situs n care antigenul este reinut pentru luni sau ani, asociat cu celulele. Antigenul este sechestrat pe suprafaa celulelor dendritice foliculare, care l pstreaz sub forma comple&elor antigen#anticorp, n pro&imitatea limfocitelor +. $onsecutiv mutaiei somatice, se sintetizeaz anticorpi cu afinitate mai mare, deoarece, treptat, crete numrul limfocitelor + cu mutaii care confer afinitate mai mare de legare a anticorpilor cu antigenul. $elulele + care au suferit mutaii nefuncionale, mor prin apoptoz. @utaiile sunt mai ales punctiforme, cu foarte rare deleii sau inserii a nucleotidelor unice. 3inteza anticorpilor cu afinitate nalt are dou consecine practice importante! # comple&ele antigen#anticorp sunt greu disociabile i se elimin mai rapid din mediul internN # anticorpii dau reacii ncruciate cu antigenele nrudite. 0eaciile ncruciate ale anticorpilor cu afinitate crescut au o importan practic deosebit, pentru c imunizrile cu antigene nrudite, pot avea efecte neateptate. -e e&emplu, indivizii aduli vaccinai cu virusul influenza, pot s produc, surprinztor, anticorpi cu un titru mai mic fa de antigenul folosit n vaccinare, dec't titrul anticorpilor fa de o tulpin de virus care a produs o infecie la v'rsta copilriei. Acesta este fenomenul )amintirii pcatului originar* i st la baza studiilor epidemiologice retrospective, pentru precizarea serotipului unui agent infecios care a declanat epidemii trecute. 2&plicaia const n faptul c imunizarea primar genereaz celule cu memorie fa de mai multe antigene nrudite. "a re nt'lnirea cu unul din antigenele nrudite, este stimulat o populaie de celule care recunoate determinani antigenici comuni. 3e sintetizeaz anticorpi care se combin cu ambele variante antigenice, dei, uneori, anticorpii specifici fa de epitopii celui de al II#lea antigen pot s lipseasc. ;omutarea i otipului const n trecerea de la sinteza Ig@ n cursul rspunsului imun primar, la sinteza altor izotipuri, n special Ig., n rspunsul imun secundar. "a nivel molecular, comutarea izotipului este rezultatul deplasrii comple&ului genic G-H, de la poziia sa original, adiacent captului C> al genei $U, ntr#o poziie nou, adiacent captului C> al altei gene $, de e&emplu $ \. -up aceast aran%are genic, toat secvena genic dintre poziia iniial a comple&ului G-H i localizarea final, este eliminat prin deleie. Procesul rearan%rii genelor se numete recombinare prin comutare 6sKitch recombination7.

1<D

2&cepia de la acest mecanism este sinteza simultan a receptorilor de membran Ig@ i Ig6mIg@ i mIg-7, de ctre celulele + mature. 3inteza catenei O nu implic recombinarea prin comutare, ci este rezultatul ndirii alternative a e&onilor unei copii de A01 premesager care conine genele G-H, cu secvena genei $U sau a genei $d. (ig. @7. a. @ecanismul ndirii genice pentru comutarea de la Ig@ membranar, la Ig@ secretat. Pentru forma secretat, secvena hidrofob codificat de e&onii @#@ care ancoreaz Ig@ receptor de membran este eliminat. 1. Ig@ i Ig- cu funcia de receptori de antigen, coe&ist pe aceiai celul, prin ndirea difereniat a copiei primare de A01. .ena activ pentru sinteza imunoglobulinelor este transcris n A01 premesager, care conine secvene codificatoare pentru regiunile G i $ 6e&oni7, dar i secvene necodificatoare6introni7. Intronii se gsesc ntre secvenele recombinate GH sau G-H i gena $. Pentru catena O, intronii se gsesc ntre e&onii care codific domeniile individuale. Intronii sunt eliminai prin ndirea A01 i rezult A01m unitar, care este tradus n polipeptidele moleculei de imunoglobulin. 3inteza imunoglobulinei se face cu rate distincte n diferite celule +, n raport cu gradul ei de difereniere. 8 celul + nestimulat antigenic sintetizeaz circa 19 ? molecule de imunoglobulin pe zi, cu rol, n primul r'nd, de receptori membranari de antigen, iar un plasmocit produce p'n la 5999 molecule de imunoglobulinTsecund, toate av'nd rolul de anticorpi plasmatici. 1evertebratele nu au memorie imunitar. Anticorpii ndeplinesc urmtoarele funcii eseniale! # se combin specific cu antigenele solubile i formeaz comple&e antigen#anticorp, care sunt epurate de macrofage # neutralizeaz to&inele # se leag specific cu determinanii antigenici virali i neutralizeaz infeciozitatea virionilor # opsonizeaz microorganismele dintr#un focar infecios # fi&eaz complementul pe suprafaa unui antigen celular i efectul este liza 6bacterioliza, citoliza, hemoliza7. -a%tor %are %o#d ' o#eaz #te#) tatea r)p"#)"l" !"# ;itrul anticorpilor sintetizai n cursul rspunsului imun este dependent de mai muli factori! de calea de administrare a antigenului, de do , de ritmul i modul de administrare 6cu sau fr ad%uvant7 i de factorii genetici ai organismului imunizat. Pentru producerea contactului rapid dintre antigen i celulele imunocompetente din ganglionii limfatici este avanta%oas calea parenteral de administrare! intradermic, subcutan sau

1<J

intramuscular. In%ectarea intravenoas favorizeaz contactul antigenului cu limfocitele din splin, dar rspunsul imun are o intensitate mic, datorit eliminrii rapide a antigenului. $ea mai eficient cale de administrare a antigenului este cea intradermic, pentru c persistena sa la locul in%ectrii este de lung durat i la situsul in%ectrii se acumuleaz celule implicate n elaborarea rspunsului imun. 2&ist chiar posibilitatea sintezei locale, in situ, a anticorpilor. $o a de antigen influeneaz nivelul afinitii anticorpilor. -ozele mari de antigen, induc o maturare insuficient a afinitii anticorpilor, n raport cu dozele mici, deoarece acestea stimuleaz numai clonele de limfocite cu receptori de nalt afinitate fa de antigenul stimulant, n timp ce dozele mari ale aceluiai antigen stimuleaz clonele de limfocite de nalt i de mic afinitate i produc chiar stimularea nespecific a limfocitelor. Intensitatea rspunsului imun este dependent de legea do elor repetate i a intervalelor . Administrarea aceleiai doze de antigen, n mod fracionat i la intervale adecvate, este mai eficient dec't administrarea dozei unice, deoarece fiecare doz mic pregtete organismul, fc'ndu#l mai reactiv fa de doza urmtoare. ,neori, a II#a in%ectare, foarte apropiat n timp de prima, poate fi inoperant, deoarece antigenul este eliminat de anticorpii sintetizai dup stimularea primar. $el mai bun protocol de administrare pentru a obine un rspuns imun secundar optim, const n in%ectarea unei doze mici de antigen, urmat de doze progresiv cresc'nde. 8 cantitate prea mare de antigen, produce )inundarea* organismului cu substane nonself i rspunsul este parado&al. In loc de stimularea rspunsului imun se obine efectul invers, denumit parali ie imunologic. Paralizia imunologic este o reacie de protecie a organismului, fa de dozele mari de antigen. 8rganismul i blocheaz toate mecanismele de rspuns imun. Fenomenul areactivitii imunitare poate surveni at't dup in%ectarea unei cantiti prea mari de antigen uor metabolizabil, c't i dup in%ectarea unei cantiti moderate a unui antigen care se metabolizeaz greu. "a fiecare specie de organisme, pentru fiecare antigen, pare s e&iste un echilibru controlat genetic, ntre doza stimulatoare a rspunsului imun i cea care produce paralizia imunologic. Antigenele )bune* sunt hidrolizate parial i stimuleaz declanarea rspunsului imun, iar antigenele )slabe*, fie sunt degradate rapid, fie sunt rezistente la degradare i induc starea de paralizie imunitar. -e aceea, doza optim necesar inducerii unui rspuns imun optim este diferit de la un antigen la altul i se determin e&perimental pentru fiecare caz. -e asemenea, pentru fiecare antigen se stabilete numrul de fracii ale dozei, intervalul administrrii fraciilor, calea de administrare, ad%uvantul. Pentru antigenele corpusculare, in%ectrile se fac, n general, la I zile, iar pentru cele macromoleculare, la 1:#51 de zile. 0aportul dintre cantitatea de antigen intact i cel parial degradat, care se gsete n organism la un moment dat dup adminisrare, este o reflectare direct a ratei cu care antigenul este metabolizat. Imunogenitatea unui antigen este influenat de modul de administrare. Asocierea cu ad%uvanii mrete gradul de imunogenitate a multor antigene, iar pentru altele, asocierea cu un

1:9

ad%uvant este o condiie obligatorie a imunogenitii. Administrarea n asociere cu un ad%uvant este foarte important pentru imunogenitatea proteinelor uor degradabile i a celor slab imunogene 6de e&emplu, hormonii7. $ele uor degradabile, dup administrare n stare nativ, dispar repede din organism, dar n asociaie cu un ad%uvant sunt eliberate treptat, stimul'nd organismul o perioad mai lung de timp. In%ectarea intravenoas anuleaz efectul favorabil al ad%uvantului. Maturitatea sistemului imunitarn 6imunocompetena7 influeneaz intensitatea rspunsului imun. Administrarea unui antigen la un organism al crui sistem imunitar este imatur, nu activeaz rspunsul imun, ci induce o stare de toleran. 0spunsul imun al indivizilor umani, la cei doi poli ai v'rstelor, este slab. "a copii, sistemul imunitar este imatur, iar la v'rstnici, treptat, funcia imunitar diminu, ceea ce se reflect n reducerea activitii limfocitelor ;, creterea proporiei limfocitelor ;s, scderea activitii celulelor 1L, toate av'nd un efect imunodepresiv, asociat cu creterea incidenei neoplaziilor i cu scderea capacitii de aprare fa de agenii infecioi. (actorii genetici sunt eseniali pentru capacitatea de rspuns imun a organismului. 8 substan nonself poate fi un bun antigen pentru unele specii, dar neantigenic pentru altele. -e e&emplu, albumina seric bovin este imunogen pentru iepure, dar este slab imunogen pentru om, iar polizaharidul capsular de "tr. pneumoniae este imunogen pentru om i oarece, dar neimunogen pentru iepure i cobai. Antigenele naturale sunt mozaicuri de epitopi. 3istemul imunitar al unei specii, recunoate unii epitopi, dar rspunde mai greu sau ignor ali epitopi. -iferitele specii de organisme, pot sintetiza anticorpi cu specificiti distincte fa de acelai antigen, deoarece recunosc epitopi diferii. ,neori se nregistreaz diferene semnificative ale reactivitii imunitare, chiar ntre organisme ale aceleiai specii, corelate cu starea fiziologic, cu starea nutritiv, cu se&ul, cu v'rsta. -in aceast cauz, serurile imune nu sunt reactivi standardizai i rezultatele obinute n reaciile imune in vitro, nu sunt totdeauna reproductibile. A#t %orp #at"ral

Imunoglobulinele serice sunt cele mai abundente proteine serice 619 mgTml7, care s#au sintetizat n afara oricrui proces de imunizare, dar au specificitate fa de antigene cunoscute. -e e&emplu, n serul de oarece se gsesc anticorpi anti#hematie de berbec. -enumirea de anticorpi )naturali* sau )spontani* s#a folosit pentru a#i distinge de anticorpii sintetizai dup imunizare. Anticorpii naturali se sintetizeaz ca urmare a stimulrii imunitare continue, sub aciunea antigenelor microbiotei intestinale. Funciile anticorpilor naturali sunt controversate. Anticorpii naturali sunt polireactivi, adic dau numeroase reacii ncruciate, cu o diversitate de antigene 6polizaharide, proteine, acizi nucleici7, de diferite origini! virale, bacteriene, fungice sau ale paraziilor multicelulari. 8 importan deosebit au anticorpii naturali ce se leag cu determinantul Q#gal, cu levanul, cu "P3 sau cu fosfatidil#colina. Funcia anticorpilor naturali anti#Q#gal pare a fi

1:1

legat direct de aprarea fa de agenii patogeni. Pierderea genei galactozil#transferaz n evoluie, a conferit un avanta%, prin sinteza anticorpilor anti#gal, cu rol protector fa de agenii patogeni. @a%oritatea anticorpilor naturali sunt sintetizai de un set special de limfocite +, denumite B7. 3inteza anticorpilor naturali se datoreaz faptului c, postnatal, organismele sunt supuse stimulrilor antigenice multiple, cu antigene de diferite origini 6virale, bacteriene, fungice, alimentare7, care ptrund pe calea mucoaselor digestive i respiratorii. Antigenele stimuleaz policlonal, limfocitele + din formaiunile limfoide asociate mucoaselor. -ei se sintetizeaz dup stimulri repetate cu doze mici de antigene, afinitatea anticorpilor naturali este inferioar celei a anticorpilor sintetizai dup imunizare. Anticorpii naturali aparin izotipului Ig@. -in aceiai categorie fac parte aglutininele sanguine N i M. 3inteza lor are loc nainte de natere, n afara oricrei stimulri antigenice. Anticorpii naturali, datorit spectrului larg de legare cu antigene ma%ore comune diferiilor ageni patogeni, au rolul de molecule de recunoatere ale imunitii nscute. 3istemul imunitar nscut cuprinde i molecule cu o structur diferit de aceea a anticorpilor, ca lectina care leag mano a 6@+" = manose binding lectin7. 2ste o opsonin din s'nge care fi&eaz complementul i utilizeaz receptorul $1W al macrofagului. 3erul normal de bovine conine o protein denumit conglutinin, care determin agregarea 6conglutinarea7 eritrocitelor tapetate cu componente ale complementului. "a alte specii, sinteza conglutininei este indus de imunizarea cu molecule tapetate cu componente ale complementului sau sinteza sa este declanat dup activarea complementului in vivo. Imunoconglutininele sunt auto#anticorpi fa de epitopi e&primai de componentele activate ale complementului, care n moleculele native sunt criptice. $onglutininele sunt anticorpi anti# complement, echivaleni factorilor reumatoizi, specifici fa de Ig.. 3erul uman conine nivele sczute de imunoconglutinine, dar nivelul lor crete dup activarea complementului n infeciile acute i cronice i n maladiile inflamatorii cronice, produse de virusuri, de microorganisme i de parazii. B o) #teza !"#o$lo,"l #elor

3ediul sintezei imunoglobulinelor este plasmocitul. "imfocitele sintetizeaz cantiti minime de imunoglobuline, care rm'n ancorate n membrana citoplasmatic i au rolul de receptor de antigen. -up activarea limfocitului, celulele descendente rezultate printr#un proces de proliferare i difereniere, sintetizeaz cantiti cresc'nde de imunoglobuline. Plasmocitul este celula cap de serie, difereniat terminal, care nu se divide i triete c'teva zile. 2a sintetizeaz molecule identice de imunoglobuline 6monoclonale7, cu o singur specificitate de legare fa de un epitop antigenic, cu o rat de circa 5999 moleculeTsecund. $atenele polipeptidice " i O se sintetizeaz separat, pe polisomi de dimensiuni diferite, ataai pe cisternele reticulului endoplasmic. @rimea polisomilor este proporional cu lungimea catenei polipeptidice, pe care o sintetizeaz i este dependent de lungimea moleculei de A01m

1:5

codificatoare. $atena " se sintetizeaz pe polisomi de I#D ribosomi, iar catena O, pe polisomi de 1:#1? ribosomi. Polisomii lungi, purificai precipit in vitro, cu serul imun anti O. $ele dou catene se sintetizeaz ca precursori mai mari, cu o secven 1#terminal de circa 59 de aminoacizi 6secvena leader7, care este clivat n timpul transferului n lumenul cisternei de reticul endoplasmic. $ele dou tipuri de catene se sintetizeaz ca uniti de sine stttoare i ulterior se asambleaz pentru a forma o structur tetracatenar. @oleculele de imunoglobulin sintetizate, se acumuleaz n cisternele reticulului endoplasmic granular i ulterior sunt transferate n cisternele .olgi. "a acest nivel se formeaz legturile 3#3 i se ataeaz gruprile glucidice. $ompoziia componentei glucidice este variabil, dar ca structur de baz este reprezentat de 1#acetil# glucozamin, manoz, galactoz, fucoz, acid sialic. "egarea primelor dou monozaharide ncepe n momentul n care catena O este ataat de polisom. $atena polizaharidic se alungete progresiv, pe msur ce proteina se deplaseaz n cisternele .olgi. @oleculele de anticorpi prsesc aparatul .olgi, n vezicule secretorii, care fuzioneaz cu membrana citoplasmatic i elibereaz coninutul la e&terior. .licozilarea este o condiie obligatorie pentru secreia moleculelor de imunoglobulin. @oleculele de IgA i Ig@ prezint forme polimerizate. Asocierea polimerilor este catalizat de lanul H. Polimerizarea are loc concomitent cu secreia. In citoplasma plasmocitului nu se gsesc molecule polimerizate. (n celulele care sintetizeaz imunoglobuline destinate secreiei, catenele " se gsesc n mic e&ces fa de catenele O. Pentru fiecare din cele dou tipuri de catene, e&ist un numr egal de molecule de A01, dar catena " se sintetizeaz de dou ori mai repede dec't catena O, av'nd dimensiuni de dou ori mai mici. Cata,ol )!"l !"#o$lo,"l #elor

$atabolismul imunoglobulinelor s#a studiat utiliz'nd moleculele marcate cu I15C sau I1<1. Primul are timpul de n%umtire de CI de zile, iar al II#lea, de D zile. Iodul radioactiv se cupleaz cu nucleul aromatic al tirozinei, sub aciunea bl'nd a unor ageni o&idani 6O585, cloramina ;7, care mresc ansa ca molecula de imunoglobulin marcat s rm'n nemodificat din punct de vedere structural i funcional. 0ata scderii radioactivitii, reflect rata catabolizrii proteinei native. $atabolizarea imunoglobulinei este o reacie de ordinul 1, adic din molecula nativ rezult produi finali de catabolism. $antitatea de imunoglobulin catabolizat6dIg7 ntr#un interval de timp 6dt7 este direct proporional cu concentraia moleculelor n s'nge i este constant, conform relaiei! d IgTdt = B Ig 6B reprezint rata catabolizrii imunoglobulinelor, adic fracia de molecule din cantitatea total, ce se catabolizeaz n unitatea de timp, de obicei n 5: de ore7. 0ata de catabolizare este o reflectare direct a timpului de n%umtire a imunoglobulinelor. Galorile celor doi parametri sunt cu at't mai mari, cu c't concentraia imunoglobulinelor este mai mare. Pentru calculul ratei de catabolizare a imunoglobulinelor este suficient s se determine timpul de n%umtire a radioactivitii, care la un individ normal este de 55 de zile.

1:<

Mecanismul cataboli rii imunoglobulinelor. Prima ipotez cu privire la mecanismul molecular al catabolizrii afirm c moleculele de imunoglobulin trec din spaiul vascular, ntr#un )compartiment de catabolizare*, n care se gsesc celule capabile s le recunoasc i s le capteze prin pinocitoz. -eoarece aceste celule au un numr limitat de receptori capabili s lege specific moleculele de imunoglobulin, n veziculele de micropinocitoz vor fi ncorporate nu numai moleculele fi&ate pe receptori, ci i molecule libere. In accepiunea ipotezei, moleculele fi%ate pe receptorii celulelor, sunt prote3ate de procesele degradative i prsesc celula, revenind n circulaie, n timp ce moleculele care au fost pinocitate nespecific 6fr legarea prealabil de receptori7 sunt degradate. Ipoteza e&plic logic dependena ratei de catabolizare a imunoglobulinelor, de concentraia lor. "a concentraie sanguin sczut, ma%oritatea moleculelor de imunoglobuline sunt endocitate specific, prin intermediul receptorilor i astfel sunt prote%ate de degradare, ntorc'ndu#se intacte n circulaie. Aa se e&plic faptul c n cazurile de hipogamaglobulinemie, timpul de n%umtire este mare. "a concentraii mari de imunoglobuline, timpul de n%umtire se scurteaz. (n aceste cazuri, numai o proporie mic de molecule este prote%at de degradare prin legarea de receptorii celulari, restul fiind endocitate nespecific i e&puse degradrii. A II#a ipotez consider c procesul catabolic este iniiat numai dup ce moleculele de imunoglobuline au suferit o modificare conformaional a regiunii (c . @oleculele modificate 6prin uzur metabolic7 se fi&eaz prin regiunea Fc, de membrana celulelor care au astfel de receptori! leucocitele, P@1, macrofagele 6 n special hepatice i splenice7 i sunt nglobate prin micropinocitoz. In veziculele de pinocitoz, are loc reducerea legturilor 3#3 intercatenare i hidroliza sub aciunea enzimelor lizosomale. Aceast ipotez, contrar celei de mai sus, consider c moleculele de imunoglobulin, odat fi&ate pe receptorii celulari, sunt nglobate n celule i degradate parial sau total. Pentru procesul catabolizrii, n concepia ipotezei, hotr'toare este tranziia moleculei de imunoglobulin de la conformaia nativ, la cea modificat. Ipoteza este spri%init de heterogenitatea receptorilor pentru Fc de pe suprafaa macrofagelor. 8 categorie de receptori pentru Fc fi&eaz numai moleculele care au suferit modificri ale regiunii Fc. 2i se deosebesc de receptorii clasici pentru Fc, care leag moleculele native de imunoglobulin. Ut l zr ale )er"r lor !"#e

$ea mai larg utilizare 6 n perioada 1J59#>:97 a serurilor imune a constituit#o domeniul seroterapiei 6terapia de urgen a unor infecii septicemice, a infeciei difterice, scarlatinoase, tetanice, rabice7. -ezavanta%ul ma%or este c serurile imune conin nu numai anticorpii specifici, ci i toate celelalte proteine serice, care sunt imunogene pentru organismul receptor i induc rspunsul imun, adeseori cu manifestri patologice 6boala serului7. Anticorpii se folosesc n tehnici i metodologii de diagnostic imunologic. ,tilizarea lor depinde de posibilitatea de a#i produce pe iepure, capr, berbec sau cal. Principalele direcii de utilizare a anticorpilor sunt urmtoarele! # n determinrile fine ale unor cantiti mici de antigene 6tehnicile 2"I3A, 0IA7N # pentru purificarea proteinelor n cromatografia de afinitateN # pentru identificarea unor medicamente n ser i urinN

1::

# pentru deto&ifierea organismului de droguri 6eliminarea digo&inei dup into&icare prin administrarea ndelungat la pacienii cu insuficien cardiac7N cu # pentru identificarea unui agent infecios, prin reaciile serologice care utilizeaz seruri imune specificitate cunoscut 6serotipizare7.

5"ectinele sunt glicoproteine care se leag nespecific cu glucidele sau cu gruprile glucidice ale glicoproteinelor. 2le precipit polizaharidele i glicoproteinele sau aglutineaz celulele. Activitatea lor aglutinant i precipitant poate fi inhibat de haptene6monozaharide i oligozaharide7. IMUNITATEA MEDIAT CELULAR 0spunsul imun mediat celular s#a evideniat nainte de descoperirea diferenelor funcionale dintre limfocitele ; i +, odat cu observaia c unele antigene induc reacii inflamatorii a cror intensitate nu este corelat cu titrul anticorpilor serici. "a indivizii la care anticorpii serici nu sunt detectabili, pot fi produse reacii de hipersensibilitate nt'rziat, ca manifestri directe ale rspunsului imun mediat celular. (n organism, imunitatea mediat celular ndeplinete urmtoarele funcii! # protecia fa de infeciile bacteriene cu localizare intracelular, fa de infeciile fungice, virale i cele produse de protozoareN # rezistena fa de multe tipuri de celule tumoraleN # mediator al proceselor inflamatorii asociate cu diferite procese infecioaseN # respingerea alogrefelor. (n toate aceste cazuri, reacia imun mediat celular se declaneaz nainte de sinteza anticorpilor. 0spunsul imun mediat celular este consecutiv recunoaterii unei structuri antigenice pe suprafaa unei celule int, de ctre limfocitul citoto&ic ;$- : sau ;$-D, ori de ctre celulele 1L sau L, cu potenial litic natural. (n general, limfocitele ;$-: recunosc antigenele prelucrate, sub forma fragmentelor peptidice, pe suprafaa celulelor specializate 6macrofage7, n asociaie cu moleculele $@O II. (ig. @9. ;itoto%icitatea mediat celular. $elulele ; 6$-D i unele celule $-:7 recunosc antigenul asociat cu moleculele $@O. $elulele 1L detecteaz absena moleculelor $@O I autologe pe celula int i a unor liganzi puin cunoscui pe celulele tumorale. $elulele L recunosc regiunea Fc a Ig. legat pe antigenele de suprafa ale celulei int 6dup 0oitt, 1JJ<7.

1:C

"imfocitele ;$-D recunosc antigenele prezentate pe suprafaa celulelor int, n asociaie cu moleculele $@O I. 2le au dimensiuni mici i recunosc celulele proprii infectate cu virusuri sau malignizate, dar i transplantele alogenice sau &enogenice. "imfocitele ;$-D produc efecte citoto&ice asupra celulei int, at't in vivo c't i in vitro. Procesul morii celulare sub aciunea limfocitelor ;c specifice, in vitro, se desfoar n trei stadii! # stadiul de recunoatere # programarea pentru li # de integrarea celulei int. "imfocitul ;c recunoate antigenul de pe suprafaa celulei int, prin intermediul receptorului de antigen. (ig. @:. Interaciuni celulare n procesul litic al celulei int. "a contactul cu celula int, mobilitatea limfocitului ;c se accentueaz i ntreaga suprafa a celulei int este e&plorat n c'teva minute. 3tadiul de recunoatere dureaz circa un minut i necesit obligatoriu prezena cationilor bivaleni 6$a5R7. Programarea pentru li const n eliberarea moleculelor cu efect citoto&ic. In spaiul ngust al %onciunii cu celula int, limfocitul ;c elibereaz o protein citolitic 6o limfoto&in7 de I9 Bdenumit perforin i gran imele 6enzime asociate granulelor7! serin1protea a 6denumit gran ima B7, o cistein1aspartic protea 6caspa 5. $aspazele sunt proteaze din categoria cistein#proteazelor, care necesit pentru aciunea lor, intermediari covaleni cisteinil#aspartat. 2le cliveaz substraturi celulare specifice care produc modificri ale citoscheletului i cromatinei ce declaneaz moartea apoptotic a celulei int. 3pecificitatea strict a aciunii lor este neobinuit la proteaze. Perforina i granzimele sunt principalele molecule ale granulelor celulelor ;$- D i 1L. Aciunea lor este sinergic. Proteazele determin liza rapid a celulei int, iar celelalte proteine cu efect citoto&ic acioneaz lent. Perforina se polimerizeaz i formeaz pori transmembranari, cu diametrul de 19 nm. -in acest punct de vedere, modul su de aciune se aseamn cu $J . (ig.@0. Ilustrarea schematic a celor dou mecanisme ale citoto%icitii! e&ocitoza granulelor de perforinTgranzim i citoto&icitatea mediat prin interaciunea Fas"TFas, produs de limfocitele ;c $- DR i $-:R. $e integrarea celulei int se caracterizeaz prin apariia leziunilor membranare i dureaz circa 199 minute. 2ste un proces dependent de temperatur i nu necesit prezena limfocitului ;c, dei n prezena sa procesul este accelerat. -up contactul cu o celul int, limfocitul ;c se deplaseaz pentru a e&plora alte celule. Procesul de recunoatere a antigenului este limitat 6restrictiv7 de identitatea moleculelor $@O I.

1:?

"imfocitul ;c este rezistent la aciunea litic a proteinelor proprii, deoarece granzimele sunt sintetizate ca prepropeptide. -up cliva%ul peptidelor leader, moleculele sunt transportate prin cisternele golgiene p'n la granulele omologe lizosomilor. Pentru liza unei celule int, limfocitul ;c elibereaz 19M din coninutul su to&ic. Al II#lea mecanism al citolizei, independent de $a 5R i de perforin 6descris n 1JJ<7 este mediat de interaciunea receptorului (as cu ligandul (as 6Fas"7. 0eceptorul Fas 6$-JC7 este e&primat pe celula int, iar ligandul Fas 6Fas " = $-JC"7 este e&primat pe limfocitele ; citoto&ice. (ig.@>. 0eprezentare schematic a rolului perforinelor citolitice asupra celulei int 6dup @ale i colab., 1JDI7. (n concluzie, limfocitele ; citoto&ice pot media liza celulei int, fie prin e&ocitoza granulelor citolitice, care conin comple&ul perforin#granzim, fie prin interaciuni ntre receptorul (as i ligandul (as. (ig.@/. -up eliberarea coninutului enzimatic, celula efectoare rm'ne viabil i funcional fa de alte celule int. Aciunea limfocitelor ;c se evideniaz in vitro, n reacia limfocitar mi&t60"@7 uni# sau bidirecional. (n reacia unidirec#ional, limfocitele organismului A se cultiv n amestec cu limfocitele organismului +, blocate metabolic prin tratament cu mitomicin $ sau prin iradiere S. -up tratament, proprietile antigenice rm'n nemodificate, dar limfocitele devin neproli#ferante. (n :#C zile, limfocitele populaiei viabile sunt stimulate, pro#lifereaz i devin citoto&ice. (n 0"@ bidirecional, se produce activarea concomitent a celor dou populaii de limfocite ;c cocultivate. 0aportul numeric este decisiv pentru evoluia interaciunilor. "imfocitul ;c este supus atacului concertat al c'torva limfocite ;c agresoare i este lizat. Indeprtarea ionilor de $a 5R din mediul de cultivare, cu 2-;A, previne liza celulei int. Probabil, ionii de $a au un rol esenial n e&ocitoza i n activarea perforinei. ,imfocitele granulare mari 6,',, ,arge granular lEmphocEtes7 sunt celule non#;, non#+, efectoare ale citoto&icitii mediate celular i au receptori pentru regiunea Fc a imunoglobulinelor. 0a#portul nucleo#citoplasmatic este mic, cu multe granule azurofile n citoplasm. -atorit dimensiunilor mai mari i densitii mai mici, "." pot fi uor separate de limfocitele mici, prin centrifugare. 2fectul lor citoto&ic s#a evideniat in vitro, pentru celulele umane i de oarece. 2le reprezint C#19M din totalul limfocitelor circulante i recunosc celulele purttoare de antigene prin mecanisme distincte. a7 ;elulele HF 6Hatural =iller7 se identific, datorit capacitii lor de a adera la suportul de plastic, dup 5: de ore de incubare a limfocitelor izolate din s'ngele periferic, cu I"#5 recombinant. Astfel, celulele 1L pot fi captate pe suportul de plastic i separate de limfocitele ;, a cror activare i e&primare a moleculelor membranare de aderen, necesit o perioad mai lung de timp. In vitro, celulele 1L lizeaz spontan o varietate de celule maligne, celule infectate cu virusuri sau celule alogenice, ntr#o interaciune nespecific ce nu este restrictiv n raport cu identitatea moleculelor $@O. Imunizarea prealabil a organismului cu celule sensibile, nu ridic nivelul citoto&icitii nerestrictive n raport cu moleculele $@O i de aceea se numesc )ucigae naturale*.

1:I

1u se cunoate receptorul prin care celula 1L interacioneaz cu celula int i nici structura membranar a celulei int recunoscut de celula 1L. @oleculele $@O I de pe suprafaa celulei int, cel puin uneori, inhib liza mediat de celulele 1L, aa cum arat studiile in vitro. Aceste observaii au condus la ipoteza c celulele 1L sunt specializate s recunoasc i s lizeze celulele cu nivele sczute ale moleculelor $@O I. Activitatea lor citoto&ic este stimulat de interferon. (ig. @@. ;elulele HF nu lizeaz celulele self normale 6A7, dar lizeaz celule alogenice 6+7 sau celulele self care nu e&prim molecule $@O clasa I 6$7. $elula 1L e&prim cel puin un receptor specific cu rol inhibitor al interaciunii cu moleculele autologe $@O clasa I. -up infecia viral sau ca o consecin a transformrii maligne, celulele autologe pierd o proporie important a moleculelor $@O I, fiind nlocuite de peptidele anormale. In ambele cazuri, aceste celule devin sensibile la liza mediat de celulele 1L. $elulele alogenice care e&prim molecule $@O I, ne nrudite cu moleculele self, sunt lizate deoarece interaciunile dintre receptorii 1L i moleculele $@O I nu sunt inhibate eficient. 2fectul litic este rezultatul aciunii unui factor pe care celula 1L l transfer n celula int, prin contact intercelular direct. .ranulele secretorii conin molecule citoto&ice, ca i cele secretate de limfocitele ;c. $elulele 1L par a avea un rol foarte important n rezistena organismului fa de celulele tumorale i n liza celulelor infectate cu virusuri. Aciunea lor este detectabil la 5#< zile dup infecia viral, preced'nd astfel aciunea efectorilor limfocitelor ;c specifice i a anticorpilor. b7 ;elulele F sunt limfocite granulare mari 6"."7, dar se deosebesc de celulele 1L, prin prezena receptorilor membranari de nalt afinitate pentru Fc \. $elulele L interacioneaz cu celulele int prin intermediul moleculelor de Ig.. $elulele tumorale sau cele infectate cu virusuri leag moleculele de Ig. pe suprafaa lor, la nivelul situsurilor antigenice i e&pun fragmentul fragmentul Fc. Acesta funcioneaz ca adaptor, permi'nd celulei L, prin intermediul receptorului pentru Fc, s recunoasc i s lizeze celulele int tapetate cu anticorpi. "iza celulei int, mediat de receptorii pentru regiunea Fc, este cunoscut sub denumirea de citoto%icitate mediat de anticorpi 6*$;; = antibodE dependent cell cEtoto&icitE7. Fenomenul A-$$ s#a demonstrat indirect, in vivo, la pacienii in%ectai cu A@$ specifici fa de antigenele unor celule tumorale 6melanom, limfom al celulelor +7! se produce liza e&tensiv a celulelor tumorale, at't prin fenomenul A-$$, c't i liza consecutiv fi&rii complementului. Alte celule "." sunt limfocitele 1L activate in vitro, sub aciunea I"#5, cunoscute sub denumirea de celule ,*F 6lEmphoBine activated =iller7. (ig. @.. Ilustrarea schematic a mecanismului citoto%icitii mediate de anticorpi 6A-$$7. -up activarea cu stimuli e&ogeni 6de e&emplu, I"#57, unele limfocite ; i celulele 1L se activeaz! cresc ca dimensiuni, crete numrul granulelor i dob'ndesc capacitatea de a lega i de a liza un spectru larg de celule tumorale, celule infectate cu virusuri sau chiar celule tisulare normale. Astfel de celule efectoare, activate de I"#5, s#au denumit ,*F 6lEmphoBine activated =iller7. $elulele "AL se definesc ca limfocite care mediaz citoto&icitatea nerestrictiv n raport cu moleculele $@O,

1:D

fa de o varietate de inte, dup activarea in vivo sau in vitro numai cu I"#5 sau n amestec cu alte citochine. $elulele "AL nu reprezint o categorie special de limfocite, ci deriv preponderent din celulele 1L, dar i din limfocitele ;. @ai puin de 1M din totalul celulelor ;, care mediaz citoto&icitatea nerestrictiv n raport cu moleculele $@O, sunt pre#cursorii celulelor "AL. $e#lulele "AL secret citochine! ;1F#Q i interferon. $elulele purttoare de molecule nonself 6malig#nizate sau infectate cu virusuri7 sunt recunoscute de monocite i chiar de P@1 eozinofile, care au activitate litic asupra celulelor int. Macrofagele i monocitele activate sunt mai mari dec't celulele n repaus, e&prim mai intens moleculele $@O II i au coninut lizosomal mai bogat.

(ig.@B. ;elulele Dh au rol esenial n I@$. $elulele accesorii prelucreaz antigenul i l prezint limfocitelor ;h. Prin intermediul I" pe care le secret, limfocitele ;h selecteaz i activeaz mecanismele efectoare adecvate. 2le pot stimula celulele + s se diferenieze n celule productoare de anticorpi, s stimuleze sau s inhibe alte categorii de celule efectoare! ;c, 1L, macrofage, granulocite i celule L mediatoare ale citoto&icitii mediate de anticorpi 6dup 0oitt, 1JJ<7. @acrofagele se activeaz sub aciunea IF1 \, a endoto&inelor bac#teriene, dup infecia cu bacterii intracelulare 6M!cobacterium, ,isteria7. Activarea const n amplificarea ratei metabolice. @acrofagul activat devine citoto&ic pentru celula int. Interaciunea macrofagului cu celula int nu este mediat de structuri specifice, dar macrofagul activat face discriminare ntre celulele modificate 6malignizate sau infectate cu virusuri7 i cele normale. @acrofagele activate fagociteaz intens i realizeaz efectul A-$$. 2le produc IF1 Q cu efect activator asupra celulelor 1L, secret o&id nitric 6187, to&ic pentru celula int, O585, produi de o&idare a glucozei cu efect to&ic asupra intei, secret I"#1, ;1F 6tumour necrosis factor7, colagenaz. ;1F este o pro#tein citoto&ic cu efect lent 6:D#I5 de ore7 asupra celulei sensibile, foarte asemntoare limfoto&i#nei produs de limfoci#tele ;c activate. Ambele sunt proteine hidrofobe i se leag cu mare afini#tate de aceiai receptori ai celulei int. +o inofilele au rol important n aprarea fa de viermii parazii, prin efecte de citoto&i#citate de tip A-$$. Fo#carele de parazitoz sunt asociate cu eozinofilie. 8ricare ar fi celu#lele efectoare ale citoto#&icitii mediate celular, limfocitele ;h 6subsetul ;h17 au rol esenial n stimularea reactivitii imunitare mediate celular, prin intermediul cito# chinelor, n special I"#5 i IF1.

MEDIATORII MOLECULARI AI REACTIVIT%II IMUNITARE

1:J

0spunsul imun este controlat at't prin interaciuni directe ale diferitelor tipuri de celule cooperante, c't i prin produsele de sintez pe care acestea le secret. Factorii moleculari cu rol n reglarea rspunsului imun, iniial, au fost denumii citochine. $itochinele cunoscute sunt mprite n urmtoarele grupe funcionale! ;"( 6$olonE 3timulating Factors7, I, 6Interleuchine7, I(H 6Interferoni7 i DH( 6;umor necrosis factor7, factori de cretere i chemochine. $itochinele sunt proteine inductibile, care pot fi secretate de orice celul din organism, cu posibila e&cepie a eritrocitelor. $itochinele sunt molecule cu activitate biologic, n concentraii foarte mici 6femto#molar = 19 # 1C 7, care induc un rspuns specific al celulelor sensibile. Acestea posed receptori de mare afinitate pentru diferite citochine i rspund prin modificarea ratei sintezei A01 i a proteinelor. $itochinele sunt parte integrant a conceptului lui $. +ernard, privind homeostazia mediului intern. Activitatea citochinelor se manifest in vivo i in vitro, la concentraii foarte sczute i din aceast cauz au fost denumite imunohormoni sau hormoni reglatori ai rspunsului imun. 3pre deosebire de hormoni, care acioneaz la distan, citochinele acioneaz la nivel local, iar mecanismul aciunii lor este similar cu acela al hormonilor peptidici. 3pectrul de aciune al citochinelor este foarte larg, fiind implicate n toate aspectele patologice. $itochinele nu au activitate enzimatic, dar produc efectele numai dup ce se leag de receptorii specifici de mare afinitate, ai celulelor sensibile. $ele mai multe celule au un numr mic de receptori 6sute, p'n la c'teva mii7. Pentru a produce un rspuns ma&im, numai un procent al receptorilor trebuie s lege citochina specific. 3e activeaz cile de semnalizare intracelular i eventual se produce comutarea unui set de gene, care codific diferite proteine! molecule de aderen intercelular, proteaze, proteine de faz acut, enzime ale catabolismului lipidic, 18#sintaza i citochine, inclusiv cea care a produs stimularea iniial a celulei. (n funcie de efectele pe care le produc, I" se grupeaz astfel! # I" care stimuleaz mobilitatea orientat a celulelor 6chemochine7 # I" care modific rata 6stimulare sau inhibiie7 diviziunii celulelor i diferenierea lor # I" stimulatoare sau inhibitoare ale funciilor specifice ale unor celule # I" care modific viabilitatea celulelor 6induc apoptoza7. $aracteristicile generale ale citochinelor sunt urmtoarele! # ma%oritatea citochinelor sunt polipeptide sau glicoproteine cu gr. mol. ntre C# <9 B-N # multe formeaz homodimeri sau homotrimeri 6I"#15 este un heterotrimer7N # sinteza lor constitutiv este minim sau absentN # aciunea lor este limitat, autocrin, paracrin sau chiar intracrin, dar nu endocrin, dei unele se gsesc n s'nge n timpul infeciilor generalizate. Aciunea lor este mediat de receptori de

1C9

mare afinitate. ,nele citochine au spectru larg de aciune, dar cel puin unele efecte ale lor se manifest asupra celulelor hematopoetice. $itochinele acioneaz adeseori prin stimularea sintezei sau inhibiiei altei citochine 6cascada de citochine7 sau prin modularea e&primrii receptorilor pentru alte citochine. ,neori, citochine cu structuri moleculare diferite au aciuni asemntoare 6redundan7. 8 singur citochin acioneaz asupra mai multor tipuri de celule i produce aciuni multiple 6pleiotropism7. -e obicei, celulele n organism sunt supuse aciunii concomitente a mai multor citochine cu efect sinergic sau antagonic. (ig. .2.a. *ciunea citochinelor este, n general, local. 0areori, ele se gsesc n cantiti semnificative n s'nge. Aciunea local a citochinelor este intracrin 6 n interiorul celulei7, autocrin 6autostimularea celulei productoare7 i paracrin 6aciunea asupra celulelor din pro&imitatea situsului sintezei7. 3emnalele locale pe care le transmit diferitele citochine sunt eseniale pentru meninerea homeostaziei celulare, tisulare i a organismului. b. 0eprezentare diagramatic a spectrului de activiti pe care le induc citochinele asupra celulei eucariote. $ele mai importante sunt activarea metabolismului i a sintezei diferitelor proteine 6cicloo&igenaz, enzime proteolitice, 18#sintaz7, diferii receptori de aderen. $itochinele pot s modifice ciclul celulei sensibile, produc'nd stimularea diviziunii, inhibiia ei sau apoptoza. $hemochinele sunt o clas de citochine mici, care determin migrarea orientat a leucocitelor. INTERLEUCHINE .IL0 -enumirea veche de limfochine sugereaz c ele sunt sintetizate n primul r'nd de limfocite. Pentru citochinele produse de celulele seriei monocit#macrofag se folosete denumirea de monochine. -enumirea de interleuchine este mai adecvat, deoarece reflect rolul lor esenial, acela de a media cooperarea celulelor sistemului imunitar. Interleuchinele sunt peptide hidrosolubile, cu rol reglator, sintetizate n special de limfocite, dar i de alte celule. 2fectul lor se e&ercit, n primul r'nd asupra celulelor limfoide, dar i asupra altor celule. Producerea interleuchinelor, in vitro, s#a evideniat n 1J?5, prin tehnica incubrii celulelor din e&udatul peritoneal de oarece, n tuburi capilare plasate n ambiana materialului solubil eliberat de limfocitele sensibilizate dup stimularea cu antigen, in vitro. Factorul solubil produs de limfocitele stimulate, inhib migrarea macrofagelor din tubul capilar i s#a denumit factorul inhibitor al migrrii macrofagelor 6@IF7. Producerea interleuchinelor in vivo s#a recunoscut n 1J?I, dup ce s#a remarcat c procesele inflamatorii sunt mult mai intense n raport cu titrul anticorpilor sintetizai i c ele sunt dependente de eliberarea unor factori din limfocitele ; activate i din macrofage. Interleuchinele au rolul de a recruta alte celule, pe care le atrag n focarul inflamator. P'n la descoperirea interleuchinelor rmseser nee&plicate modalitile prin care, o multitudine de celule neconectate anatomic, i coordoneaz activitatea n sensul elaborrii rspunsului imun, dup stimularea antigenic.

1C1

3inteza I" este dovedit de urmtoarele observaii! # e&istena liniilor limfoide, a cror cretere in vitro este dependent de I". Aceste linii celulare se folosesc pentru testarea prezenei I" ntr#un lichid biologicN # unele clone de limfocite, dup stimularea in vitro cu lectine, produc cantiti mari de I", utilizabile pentru analiza biochimic. In vivo, I" sunt produse de limfocitele ; 6mai puin de limfocitele +7, de celulele seriei monocit#macrofag, de celulele endoteliului vascular, de fibroblastele esutului con%unctiv, de cheratinocite etc. I"#1 3ursa ma%or de I"#1 o reprezint fagocitele mononucleare 6celulele seriei monocit#macrofag7. -ar orice tip de celul nucleat matur poate s sintetizeze I"#1! cheratinocitele, celulele dendritice, astrocitele, microglia, limfocitele + normale, unele clone de limfocite ; in vitro, celulele 1L, neutrofilele, fibroblastele, celulele endoteliale, celulele musculare netede. 3inteza I"#1 este indus de aciunea unor stimuli biologici 6endoto&inele bacteriilor .ram negative, e&oto&inele, mureina bacteriilor .ram pozitive, zimosanul din peretele celular al levurilor, comple&ele imune, $<a, citochinele limfocitelor activate, lectinele mitogene7 sau nebiologici 6particule de 3i, cristale de urai7. (ig. .7. *genii declanatori ai sintezei I"#1. 3unt dou variante moleculare 6I"#1 Q i I"#1P7, codificate de gene distincte. 3#a identificat a III#a variant molecular, I"#1ra 6receptor antagonist7, care se fi&eaz pe receptorii pentru I"#1 Q i I"#1 P, inhib'nd efectele lor. I"#1 Q i I"#1 P se sintetizeaz ca precursori de <1B- 65I1 i respectiv 5?J aminoacizi7, care sunt clivai proteolitic i rezult molecule de 1I B-. I"#1 este activ at't n varianta nativ, c't i forma rezultat dup clivare. I"#1 P este clivat de o cistein#proteaz intracelular 6I$2 = interleuBin converting enzEme7. +fecte. -up ce este produs local de celulele stimulate, I"#1 acioneaz autocrin sau paracrin, stimul'nd rspunsul inflamator i rspunsul imun specific, fiind un mesager cu spectru larg de aciune. I"#1 este un mediator pleiotropic 6cu efecte multiple7 al rspunsului gazdei la infecii sau la leziuni! #stimuleaz producerea altor citochine 6.#$3F, ;1F#Q, I"#?, I"#D, I"#11, P-.F7N (ig..9. I"#1 este produs de multe tipuri celulare ca rspuns la leziuni, infecie sau dup stimularea antigenic i influeneaz multe categorii de celule i proceseN stimuleaz activitatea citocid a celulelor 1LN activeaz metabolismul P@1 i chimiota&ia spre situsul producerii I"#1N induce e&presia moleculelor de aderen n endoteliu i mrete permeabilitateaN stimuleaz chimiota&ia i funcia citocid a macrofagelorN stimuleaz proliferarea celulelor ;h, e&primarea receptorului pentru I"#5 i pro#

1C5

ducerea de citochineN stimuleaz proliferarea i dife#renierea limfocitelor + n celule productoare de anticorpi. # stimuleaz prolife#rarea celulelor ;, cresc'nd sinteza de I"#5 i e&primarea receptorilor pentru I"#5 pe celulele ;N # induce e&primarea moleculelor $@O II pe $PAN # stimuleaz diferen#ierea limfocitelor pre#+ i maturarea lor n celule +N # stimuleaz monocitele s produc I"#1 6bucl autocrin7N # este chemoatractant pentru leucocite la situsul inflamaiei, prin inducerea sintezei moleculelor de aderen pe endoteliul vascularN # induce sinteza pro#teinelor de faz acut 6$0P7 n ficatN # este reglatoare a hema#topoezei, contracar'nd efectele mielosupresoare ale radioterapiei i chimioterapiei prin inducerea sintezei 38- 6enzim cu @n7 n mitocondriiN # stimuleaz producerea de $0O din hipotalamus, cu eliberarea A$;O din hipofiz. I"#1 poate stimula direct eliberarea A$;O. 3timularea a&ei hipotalamo#corticosuprarenalei induce sinteza glucocorticoizilor. Acetia au efect reglator prin feed#bacB, inhib'nd sinteza I"#1, dar stimul'nd e&primarea receptorilor pentru I"#1N # pare a avea rol n distrugerea cartila%ului articular, sub aciunea unei metaloproteaze produs de condrocite, care caracterizeaz artrita reumatoid. In aceast maladie autoimun, I"#1 activeaz condroclastele i osteoclastele i de aici deriv denumirea ei de catabolin< # stimuleaz proliferarea fibroblastelorN # in vitro are efecte citostatice i citocide pentru unele linii de celule maligneN # este factorul pirogen endogen, pentru c stimuleaz sinteza prostaglandinelor 6P.<7, active asupra centrului hipotalamic al termogenezei, produc'nd febrN (ig..:. $ile producerii compuilor ico anoidici din fosfolipidele membranare. "iniile groase reprezint conversia enzimatic, iar cele ntrerupte, transformri neenzimatice. P. = prostaglandinN ;& = trombo&anN "t = leucotrien. (ig..0. 0eprezentare schematic a )cascadelorP en imatice ce duc la formarea P. i ";, mediatori ai efectelor endoto&ice i ai reaciilor inflamatorii. # stimuleaz proliferarea celulelor + dup contactul lor cu AgN # este factor contrasupresor, deoarece inhib activitatea celulelor ;sN

1C<

# stimuleaz activitatea metabolic a macrofagelor i secreia enzimelor 6colagenaz7, uur'nd mobilitatea lor n substana fundamentalN # activeaz limfocitele ; i +N # produce hipozincemie: i hipoferemie i inhib creterea i diviziunea celulelor bacterieneN # asupra corte&ului cerebral, I"#1 produce inhibiie 6somn7, cu unde lente.

IL3: I"#5 a fost descoperit n 1JI? de .allo, n mediul de cretere al limfocitelor normale, stimulate cu POA. -enumirea veche a I"#5 este ;$.F6;#cell groKth factor7. I"#5 este principalul hormon cu rol esenial n generarea unui rspuns eficient i este factorul esenial reglator al rspunsului imun. 2ste produs de limfocitele ;$- : activate. "imfocitele ;$-: n repaus nu produc I"#5, dar limfocitele ;h1 se activeaz dup ce recunosc antigenul asociat cu moleculele $@O II i produc I"#5 i interferon \, iar setul ;h 5 produce I"#:, I"#C i I"#?. ,nele clone de limfocite ;$- D pot produce cantiti mici de I"#5. "imfocitele + infectate cu G2+ produc I"#5. In vitro, I"#5 este produs de linii celulare ;, dup stimulare cu POA sau $on A. Alte linii celulare sintetizeaz I"#5 constitutiv, fr stimularea prealabil cu lectine mitogene. $onformaia tridimensional a moleculei de I"#5 este un Q#heli&, alctuit din : catene. *ctiviti biologice. I"#5 e&ercit efect stimulator asupra celulelor care au secretat#o 6bucl autocrin7, dar i asupra altor limfocite 6bucl paracrin7, deoarece receptorul de mare afinitate pentru I"#5 se gsete pe ma%oritatea celulelor limfoide. "imfocitele stimulate prolifereaz i e&prim, la densitate nalt, receptorii de I"#5 pe suprafaa lor. Astfel se produce e%pansiunea clonal a limfocitelor care au recunoscut specific un antigen. Interaciunea I"#5 cu receptorul su declaneaz activarea i proliferarea celular. 0olul primar al I"#5 este e&pansiunea clonal a limfocitelor $-: i $-D. I"#5 stimuleaz diferenierea limfocitelor ;$-:, n celule ;h1 sau ;h5. Asupra celulelor ;h1, I"#5 acioneaz autocrin, iar asupra celulelor ;h5 i $-D acioneaz ca factor paracrin. 3timuleaz activitatea citoto&ic a limfocitelor $-D. (ig..>. I,19 este sintetizat de limfocitele ;h. 0olul su esenial este stimularea celulelor ; i eliberarea mediatorilor 6IF1 \7, dar stimuleaz i creterea limfocitelor +. Activarea monocitelor i a celulelor 1L este important pentru amplificarea rspunsului imun. "a pacienii cu carcinom renal, precursorii autologi ai celulelor 1L pot fi activai in vitro, de doze mari de I"#5 61999 ,ITml7 i genereaz celule "AL 6lEmphoBine#activated Biller7, utilizate e&perimental n terapia cancerului.

1C:

,imfocitele B, dup stimularea sub aciunea I"#5, se activeaz, e&prim receptori de mare afinitate pentru I"#5, prolifereaz intens i secret Ig., IgA, Ig@. I"#5 stimuleaz comutarea izotipic din rspunsul imun secundar. ;elulele HF rspund la efectul stimulator al I"#5 prin creterea activitii citoto&ice, fr activarea proliferrii. I"#5 stimuleaz activitatea macrofagului, care devine citoto&ic pentru celulele tumorale i pentru bacteriile parazite intracelular. @acrofagul stimulat produce O 585, 18, P.25 i ;1F#Q. Activitatea antifungic a granulocitelor crete mult dup stimularea cu I"#5. Probabil se intensific producerea de lactoferin i ;1F#Q. 3inteza I"#5 este stimulat de I"#1. "a r'ndul ei, I"#5 stimuleaz sinteza I"#:, C, ?. I"#5 rm'ne principala citochin care controleaz rspunsul proliferativ al limfocitelor $-:. 3inteza I"#5 este indus de orice stimul antigenic, dar aciunea ei este specific, deoarece determin numai e&pansiunea clonelor care au recunoscut determinanii antigenici. .ena codificatoare a I"#5 a fost clonat, ceea ce a permis obinerea unei cantiti suficiente de I"#5 n stare cristalizat. 2ste o glicoprotein de 1C,: B- i conine resturi de sialil i glicozil. 3#a clonat gena codificatoare pentru receptorul I"#5. 0eceptorul este format din < catene polipeptidice! I"#50 Q 6CCB-7, I"#50 P 6IC Bd7 i catena \, al crei rol rm'ne incert. $atena \ este component a receptorilor celulari pentru alte citochine! I"#:, I"#I, I"#J, I"#1C i de aceea a fost notat cu E c 6comun7. 3#au identificat trei clase de receptori pentru I"#5! # receptorul de mare afinitate, format din toate cele trei cateneN # receptorul de afinitate medie, format din catenele Q i PN # receptorul de mic afinitate, format numai din catena Q. "imfocitele nestimulate antigenic au numai receptorul de mic afinitate. -up stimularea antigenic primar, se e&prim receptorul de afinitate intermediar, iar dup stimularea secundar se e&prim, cu o densitate mare, receptorul de afinitate nalt. Aceasta sugereaz c intensitatea rspunsului imun este condiionat de disponibilitatea receptorilor de I"#5. 0eceptorul de I"#5 funcioneaz ca un ntreruptor start#stop 6on#off7. I"#5 interacioneaz iniial, cu catena de CC B- i ulterior, cu cea de IC B-. Interaciunea este ferm i de aceea, disocierea este lent. -up disocierea I"#5 de receptor, semnalul de activare a limfocitelor dispare. IL3? este un polipeptid de 1:9 aminoacizi la oarece i 1<< la om. 2ste produs de limfocitele ; i de celulele 1L, iar mastocitele i eozinofilele stimulate produc cantiti mici de I"#<. In reaciile alergice, I"#< modific funciile mastocitelor, eozinofilelor i macrofagelor. 2fectele ei se e&ercit asupra celulelor din imediata vecintate a celor care au produs#o, dar c'nd se produce o activare masiv a limfocitelor 6de e&emplu, n infecia gripal7, I"#< apare i n circulaie i efectele ei sunt sistemice. I"#< stimuleaz activarea celulelor accesorii 6granulocite, fagocite, plachete7, cu funcii de aprare i reparare ntr#un focar inflamator. 3timuleaz diferenierea celulelor stem n mduva

1CC

hematopoetic, efectul fiind recuperarea funcional a mduvei osoase consecutiv chimioterapiei citoto&ice. IL3@ este produs de c'teva seturi de limfocite i are efecte multiple asupra celulelor limfoide. 3ursa ma%or de I"#: sunt limfocitele ;h5, o subpopulaie esenial pentru iniierea 0I@O fa de agenii patogeni e&tracelulari. I"#: acioneaz autocrin i determin stimularea celulelor productoare. 3timuleaz e&primarea moleculelor $@O II pe celulele + i secreia Ig2 i Ig.1. -e aceea s#a numit factorul stimulator al limfocitelor +. Induce diferenierea celulelelor ;$- : spre celule ;h5, care la r'ndul lor secret I" 6I"#C, I"#197 stimulatoare ale 0I@O. 2ste o citochin anti# inflamatorie, produc'nd inhibiia citochinelor inflamatorii 6I"#1, ;1F7 i a P.. IL3A este secretat de limfocitele ;h5 i stimuleaz proliferarea i diferenierea limfocitelor + n rspunsul imun. 3timuleaz diferenierea celulelor stem medulare, n monocite i eozinofile. 3inteza crescut a I"#C determin eozinofilie. IL3= este o citochin multifuncional, secretat de macrofage, de limfocitele ;, de celulele endoteliale. 3timuleaz sinteza IgA n structurile limfoide asociate mucoaselor. 2fectele I"#? sunt sinergice cu ale I"#1. I"#? este un mediator al rspunsului de faz acut. 0spunsul de faz acut este o reacie sistemic anti#inflamatoare, consecutiv infeciei sau leziunii tisulare i se caracterizeaz prin febr, leucocitoz, creterea permeabilitii vasculare, scderea nivelului metalelor 6/n, Fe7 i a steroizilor plasmatici, dar crete nivelul proteinelor de faz acut. Proteinele de faz acut sunt sintetizate de hepatocite sub aciunea stimulatoare a unui factor specific, iar I"#? are aciune similar cu aceea a factorului stimulator al hepatocitelor. IL3< este produs de fibroblaste. "a oarece, rolul esenial al acestei citochine este de a stimula diferenierea celulelor limfoide imature, n limfocite ; i +, n special intrarea i meninerea lor n faza 3. 3itusurile aciunii sale sunt mduva osoas i timusul. IL3B este produs de macrofage, fibroblaste, celule endoteliale. Face parte din categoria chemochinelor. Aciunea sa principal este cea chemotactic fa de neutrofile, eozinofile, limfocite ;, n focarul inflamator. 3inteza ei rapid este indus de "P3, de infecia viral, n celulele mononucleare din s'nge, n fibroblaste, n cheratinocite. I"#D stimuleaz activarea neutrofilelor 6migrare transendotelial, eliberarea enzimelor lizosomale, intensificarea metabolismului o&idativ, generarea anionului supero&id n focarul inflamator7. Are efecte asupra celulelor nelimfoide! este haptotactic6induce migrarea celulelor epiteliale spre suprafa7. IL3C este sintetizat de limfocitele ; i determin efecte multiple asupra celulelor stem hematopoetice, limfopoetice i neuronale. Aciunea sa este sinergic cu I"#:. In absena I"#:, I"#J stimuleaz activarea limfocitelor + i sinteza Ig2 i Ig.. IL3;D are rol reglator important asupra sintezei diferitelor citochine. 2ste produs de limfocitele ; activate, de monocite, de celulele +, de cheratinocite6dar i de celulele carcinomului de colon, de melanoame7. $elulele ;h5 constituie sursa principal de I"#19, dar este produs de clone ;h1 dup stimularea cu antigenul specific. 2fectele sale multiple se e&ercit asupra limfocitelor, monocitelor, celulelor 1L, celulelor dendritice. Inhib activarea macrofagelor i e&primarea moleculelor $@O II pe suprafaa lor. Inhib sinteza citochinelor proinflamatorii. (ig../. I,179 este produs de macrofage i are rol central n rspunsul imun. I"#15 stimuleaz celulele 1L i ; s elibereze interferon

1C?

\, iar celulele ; neanga%ate sunt stimulate s se diferenieze spre fenotipul ;h1. IL3;; are ase#mnri funcionale cu I"#?, dar are un spectru mai restr'ns de aciune. 2fectele sale se e&ercit asu#pra sistemului hema#topoetic, limfopoetic, hepatic, adipos i neuronal. 2ste proin#flamatorie i induce sinteza proteinelor de faz acut. IL3;: s#a identificat n supernatantul liniilor celulare + transformate, ns celulele + normale 6de om i oarece7 nu sintetizeaz cantiti semnificative de I"#15. 3ursele principale sunt macrofagele i celulele dendritice. @acrofagele # primele celule care recunosc antigenul, ncep s produc I"#15. $elulele int ale I"#15 sunt limfocitele ; 6$- :, $-D7 i 1L. In vivo, I"#15 induce diferenierea limfocitelor ;$-:, n celule ;h1 care sintetizeaz interferon \, inductor al anemiei, neutropeniei i limfopeniei. 2ste o citochin de iniiere a rspunsului imun, fiind puntea de unire ntre reaciile de aprare nespecific i rspunsul imun specific. 3timuleaz diferenierea celulelor ;h neanga%ate, n celule ;h1, mediatoare ale 0I@$. IL3;? este produs de celulele ;h5, dar i de alte seturi de celule ;h, de celulele ;$- D, de alte celule activate 6mastocite, eozinofile, bazofile7. Induce proliferarea limfocitelor + care sintetizeaz Ig2 i Ig.:, suger'nd rolul su n patogeneza strilor alergice. Inhib activarea macrofagelor i sinteza citochinelor proinflamatorii, av'nd astfel proprieti anti#inflamatorii. IL3;A are multe activiti biologice comune cu ale I"#5. $atenele P i \ ale receptorului pentru I"#1C sunt comune i pentru receptorul de I"#5, iar catena Q este specific. I"#1C are o distribuie tisular mai larg dec't I"#5. 2ste factor de cretere pentru celulele ; 6umane i de oarece7, pentru celulele + i 1L. Are aciune sinergic cu I"#15. I"#1C se gsete n lichidul sinovial la pacienii cu artrit reumatoid, unde recruteaz limfocitele ; i le stimuleaz pentru a produce IF1 \, ;1F#Q i .@#$3F. 0olul reglator al I"#5 nu este compensat de I"#1C i nici de alte citochine. A#te "it'"(ine

$elulele limfoide i macrofagele sintetizeaz factori proteici, denumii limfoto%ine, cu efect litic asupra celulelor sensibile. "imfoto&ina s#a evideniat iniial, ca un factor citoto&ic n supernatantul limfocitelor activate. "imfoto&inele sunt produse de limfocitele ;$- D, de celulele 1L i de macrofagele stimulate. -enumirea de )limfoto&ine* deriv de la efectul lor citoto&ic sau citostatic, fa de celulele malignizate sau fa de cele infectate cu virusuri. "imfoto&ina produs de limfocitele ;c se numete perforin i are rol ma%or n liza celulei int. "imfoto&ina poate fi produs ca protein solubil sau ca protein asociat membranei citoplasmatice a unor celule. Forma solubil a limfoto&inei este alctuit din trei monomeri de limfoto&in Q 6"; Q7 i este produs de celulele ;c 6$-D7 i de subsetul ;h#1 al limfocitelor $-:. "imfoto&ina se e&prim i pe suprafaa celulelor ;, ntr#o alt variant biochimic! o subunitate proteic a ";#Q, asociat cu dou molecule de ";#P.

1CI

@acrofagele stimulate cu endoto&ine, sintetizeaz o monoBin de 1I B-, denumit ;1F#Q sau caectin. DH(1N este o glicoprotein de 1C? aminoacizi, trimeric, produs n primul r'nd de macrofage dar i de alte celule! adipocite, limfocite +, cheratinocite, fibroblaste, granulocite, mastocite, monocite, celule 1L, celule musculare netede, celule ;. Factorii inductori ai sintezei ;1F#Q sunt foarte numeroi! celulele alogenice i bacteriene, peptidoglicanul, comple&ele imune, "P3, intermediarii reactivi ai reducerii 85, celule malignizate, infecia viral, zimosanul din peretele levurilor, ionii de /n etc. +fecte. ;1F#Q inhib ciclul de replicare viral i stimuleaz diferite activiti biologice! diferenierea monocitelor n macrofage, activitatea A-$$, sinteza moleculelor $@O I i II, activitatea fagocitar, creterea i proliferarea fibroblastelor, este un factor pirogen, hipotensiv, favorizeaz regenerarea ficatului, induce sinteza proteinelor de faz acut i apoptoza celulelor int, activeaz celulele endoteliale, stimuleaz distrugerea cartila%ului, activeaz limfocitele ; i +, stimuleaz sinteza Ig. "ocal, ;1F#Q mrete aderena limfocitelor ;$- D la endoteliul vascular i le stimuleaz citoto&icitatea. 2ste o citochin proinflamatorie. ;1F#Q este implicat direct n distrugerea celulelor + insulare, n diabetus melitus insulino# dependent. -enumirea de caectin pentru ;1F#Q deriv de la efectul ei stimulator asupra catabolismului, ceea ce e&plic apariia i manifestarea sindromului de epui are 6cae&ia7, caracterizat prin pierderea n greutate, la pacienii neoplazici sau cu infecii cronice. $aectina inhib transcrierea genelor care codific sinteza enzimelor lipogene. 0eceptorii de caectin se gsesc pe hepatocite, pe celulele musculare i adipoase i rspund prin intensificarea catabolismului. $a urmare, trigliceridele sunt mobilizate din depozite i crete concentraia plasmatic a lipoproteinelor cu densitate foarte mic. (actorul inhibitor al migrrii macrofagelor 6@IF7 este prima limfochin ale crei efecte au fost descrise. Inhibiia migrrii macrofagelor este produs de o varietate de factori! citochine, mitogene, to&ine. 3ub denumirea de @IF a fost caracterizat o protein de 15, C B- din umoarea apoas a camerei anterioare a globului ocular, care produce supresia rapid a citoto&icitii mediat de celulele 1L, fa de endoteliul corneean. $amera anterioar a globului ocular este considerat ca situs privilegiat din punct de vedere imunologic. 4esuturile sale 6endoteliul corneean i cristaloida7 nu e&prim molecule $@O I i astfel devin inta atacului litic al celulelelor 1L infiltrate. Activitatea inhibitorie a @IF a fost anulat de anticorpii specifici anti#@IF. INTERFERONII I MECANISMELE AC%IUNII LOR Interferonii sunt o categorie special de citochine, a cror sintez este indus de diferii ageni chimici sau biologici. Funciile lor se caracterizeaz printr#un spectru larg de activiti nespecifice, cea mai important fiind inducia strii antivirale. Interferonul a fost descoperit de Isaacs i "indenmann 6lJCI7. 2i au observat c in%ectarea membranei corioalantoice a embrionului de gin, cu virus influenza inactivat 6denumit virus inductor sau interferent7, blocheaz replicarea ulterioar a virusului influenza infecios 6virus

1CD

revelator al interferenei7. Autorii au artat c inhibiia replicrii virale 6interferena7 se datoreaz unui factor inhibitor, pe care l#au denumit interferon ?I(H5. 2lucidarea naturii chimice i a modului de aciune a interferonilor a constituit o problem de interes ma%or a biologiei moleculare i a virologiei n ultimele decenii. Inducerea strii antivirale este cea mai important funcie a interferonilor, dar ei au i alte activiti biologice ma%ore! # inhibiia multiplicrii celulelor normale i tumorale # reglarea proceselor de difereniere celular # reglarea funciei imunitare. Hatura interferonilor. -iferitele variante moleculare de interferoni au fost grupate n dou tipuri! interferoni de tip I i de tip II. Interferonul de tip I cuprinde variantele N, M i Q. Interferonul de tip II include varianta molecular E. Interferonul N este produs de leucocite i este reprezentat de o varietate larg de molecule, codificate de un numr mare de gene. Interferonul M este sintetizat de variate celule nehematopoetice 6de e&emplu, fibroblaste7, dup infecia cu virus sau dup ce sunt stimulate cu A01 dublu catenar. 3inteza sa este codificat de o singur gen. Interferonul Q, s#a identificat la bovine i la ovine i este sintetizat n cantiti mari n epiteliul uterin, n perioada care precede implantarea embrionului i de aceea s#a denumit interferon trofoblastic. Interferonul E este produs de limfocitele activate sub aciunea antigenului specific sau a substanelor mitogene i reprezint interferonul de tip II. -eoarece, in vivo, este sintetizat de limfocitele ; activate, de limfoblastele seriei + i de limfocitele granulare mari 6celulele 1L7, interferonul E este considerat a fi de tip imun. -istribuia interferonilor n cele dou tipuri i subtipuri se bazeaz pe proprietile lor antigenice individuale. Antiserul specific fa de moleculele de interferon ale unui tip nu precipit i nu neutralizeaz aciunea interferonilor celuilalt tip. (n general, moleculele de interferoni sunt glicoproteine. Interferonii P i \ au resturi glucidice legate la asparagina D9 i respectiv 5C i JI. @a%oritatea interferonilor Q nu sunt glicozilai. .licozilarea nu este esenial pentru e&primarea activitilor biologice, ceea ce e&plic faptul c interferonii sintetizai n celulele bacteriene, de genele codificatoare clonate, au activitate biologic. Interferonii Q i P sunt stabili chiar la pO 5 i i pstreaz activitatea n prezena 3-3, ultima fiind o proprietate foarte important pentru purificare. "inte a interferonilor. In mod obinuit, celulele normale nu sintetizeaz cantiti detectabile de interferoni. .enele codificatoare ale sintezei lor nu sunt transcrise. 3inteza interferonilor este indus de diferii ageni! virusuri infecioase sau inactivate, moleculele de A01 dublu catenare helicale, endoto&inele bacteriilor .ram negative 6 Brucella sp., ,isteria monoc!togenes7, infecia cu micoplasme, cu ricBettsii i chlamidii, polimerii sintetici, mananii 6polizaharide7, diferii activatori metabolici etc. "P3 este un bun inductor al IF1 Q i P. Pentru virusurile cu genom A01 dublu catenar, inductorul sintezei de interferon este chiar genomul viral. Girusurile cu genom A-1, cu e&cepia celor din grupul po&, sunt slab inductoare, iar cele cu genom A01 monocatenar sunt inductoare ale sintezei interferonilor, deoarece A01 se replic printr#un intermediar dublu catenar. A01 monocatenar, A-1 mono# sau dublu catenar, ca i hibrizii A-1#A01 nu sunt inductori ai sintezei interferonilor.

1CJ

Girusurile inactivate 6din vaccinuri7, ca i cele ce infecteaz un substrat nepermisiv sunt inductoare ale sintezei interferonilor. (n leucocitele mononucleare, sinteza IF1 este indus de glicoproteinele nveliului viral. In vitro, la <Io, sinteza ncepe la : ore dup infecia viral i atinge rata ma&im concomitent cu sinteza proteinelor virale. Informaia genetic codificatoare a sintezei interferonilor este distribuit n trei familii de gene. 3inteza interferonului Q este codificat de l: gene i I pseudogene, localizate pe braul scurt al cromosomilor perechii a J#a. Interferonul P este codificat de o gen 6sau c'teva7, cu aceiai localizare, iar interferonul \ este codificat de o singur gen localizat pe perechea a l5#a de cromosomi. $a o caracteristic, nici una din gene nu conine introni. $el mai bun inductor al sintezei de interferon este A01 dublu catenar natural sau sintetic. @ecanismul induciei nu este cunoscut. Probabil, A01 dublu catenar induce sinteza unui factor, care, la r'ndul su neutralizeaz represorul specific al transcrierii acestor gene. Factorul determinant al induciei este nsi natura bicatenar a moleculei de A01 i nu informaia genetic nscris n ea. 1u se cunoate nici mecanismul induciei sintezei interferonului \ 6de tip imun7, n limfocitele activate de antigenul specific sau stimulate de mitogene. Inducia sintezei interferonilor necesit sinteza A01m i traducerea sa n catena polipeptidic. Inhibitorii sintezei proteinelor 6actinomocina -7, administrai simultan cu inductorul, inhib sinteza interferonilor. Interferonii secretai de diferite specii de organisme sau de diferite categorii de celule ale unui organism, prezint deosebiri legate de secvena aminoacizilor, de coninutul glucidic, care au stat la baza gruprii lor n cele trei clase. ;oi interferonii se sintetizeaz ca precursori de l?? aminoacizi, cu secvene semnal 1# terminale de 59#5< aminoacizi, necesare secreiei. -imensiunle reale ale catenei polipeptidice sunt de l:<, l:C i respectiv de l:? resturi de aminoacizi. @olecula de interferon are dou domenii cu secvene de aminoacizi relativ constante! unul n %umtatea 1#terminal, care formeaz situsul de legare pe receptorul celular, iar cellalt, n %umtatea $#terminal, pare s moduleze legarea de receptor i probabil mediaz funciile biologice. 3tudiul biochimic al moleculei de interferon a fost nlesnit de obinerea anticorpilor monoclonali specifici fa de diferite tipuri de interferon. Interferonii A%t v t' se sintetizeaz, , olo$ %e probabil, la toate clasele ale de vertebrate. #ter+ero# lor

e+e%toare

Activitatea biologic principal a interferonilor este cea antiviral i a fost demonstrat e&perimental. Infeciile virale sunt mult mai severe la animalele de e&perien, crora, odat cu virusul infecios li s#a in%ectat ser imun specific anti#interferon. Interferonii formeaz prima linie de aprare umoral fa de infeciile virale, nainte de mobilizarea rspunsului imun. Interferonii prote%eaz celulele de efectele citopatice virale, dar nu elimin complet infecia. 3tarea de protecie antiviral, indus de interferoni dureaz c'teva zile i apoi dispare. -up c'teva zile de absen, starea de protecie poate fi indus din nou. Interferonii nu au aciune antiviral direct, ci induc o stare antiviral.

1?9

Interferonii au specificitate de specie, adic activitile biologice i n special efectul protector antiviral se manifest fa de orice virus, n raport cu celulele speciei care a produs interferonul. +aza specificitii de aciune, rezid n interaciunea dintre interferon i receptorul celular. Activitatea biologic a interferonilor este direct proporional cu afinitatea lor de legare cu substratul celular. Interferonul de oarece are, in vitro, efect protector fa de celulele de oarece, indiferent de virusul infectant. Acelai interferon are un efect protector minim 6CM7 pentru celulele de obolan, iar pentru celulele umane, efectul protector este nul. Protecia antiviral este dependent de concentraia interferonilor. -ozele mari, administrate n sisteme e&perimentale, in vitro, sunt protectoare fa de nivelul sczut al multiplicitii de infecie, asemntor celui natural. @ultiplicitatea nalt de infecie 6cea e&perimental7, depete efectul protector al interferonilor. -escoperirea interferonilor a condus la revizuirea conceptului imunitii celulare i a rolului su n limitarea infeciilor virale. 3istemul interferonului este primul care i e&ercit efectul protector, dintre toate sistemele de aprare cunoscute. 2l este operativ n decurs de c'teva ore de la infecie. $ele mai multe virusuri sunt inductoare ale sintezei interferonului i sunt sensibile, n diferite grade, la aciunea lui. Interferonul este produs de celulele infectate, concomitent cu desfurarea ciclului multiplicrii virale. 2ste eliberat din celule imediat dup sintez i difuzeaz spre celulele nvecinate, crora le induce starea antiviral. Astfel, virusul, n ciclul su replicativ, nt'lnete o barier intracelular. 1ivelul activitii antivirale, probabil, este dependent de concentraia e&tracelular a interferonului, astfel c celulele nvecinate celor productoare de interferon devin cele mai rezistente la infecia cu virus. $elulele mai ndeprtate sunt mai puin prote%ate. 2ficiena relativ a diferitelor mecanisme de aprare, inclusiv a celui mediat de interferon depinde de ruta pe care se rsp'ndete virusul. -e la poarta de intrare, virusul se disemineaz spre organele int, pe calea fluidelor organismului 6s'nge, limf7, prin leucocitele infectate sau pe cale a&onal. -iseminarea pe cale sanguin i limfatic este limitat de macrofagele asociate capilarelor sanguine i limfatice. Giremia diminu i odat cu ea diminu severitatea infeciei. 2&perienele cu administrare de interferon evideniaz c interferonul circulant reduce viremia i prote%eaz organele int. Interferonul este mai puin eficient fa de virusurile care se disemineaz pe cale a&onal. "a pacienii hipogamaglobulinemici, limitarea i eliminarea infeciei virale este rezultatul aciunii interferonului, a reaciei febrile a organismului, a rspunsului inflamator i a imunitaii mediate celular. Bazele !ole%"lare ale a%t v t' #ter+ero# lor

Interferonii nu au activitate biologic n celulele care i sintetizeaz. Principala lor activitate A cea antiviral1 nu este direct, deoarece interferonii nu sunt molecule efectoare, ci inductori ai strii antivirale. Interferonii acioneaz asupra celulelor neinfectate i le induc starea de rezisten fa de infecie, influen'nd multiplicarea virusurilor n diferite etape ale ciclului 6de e&emplu, transcrierea A01m, traducerea etc.7, n funcie de sistemul celular. -up secreia din celulele n care a fost sintetizat, interferonul se leag de receptorul membranar al altor celule, unde funcioneaz ca o citochin paracrin i activeaz un set de gene specifice. $orespunztor celor dou tipuri de interferoni, se cunosc dou tipuri de receptori. Ambele sunt glicoproteine de membran.

1?1

$omple&ele interferon#receptor sunt endocitate. Internalizarea lor declaneaz evenimentele nucleare, al cror rezultat este starea antiviral i apariia unor modificri ale metabolismului celular. Interferonii induc sinteza unor proteine, care mediaz efectele lor multiple. 3tarea antiviral este produs pe mai multe ci. Pot fi inhibate diferite etape ale ciclului de replicare viral! penetrarea i dezvelirea, transcrierea A01m viral, traducerea A01m viral, replicarea genomului, asamblarea i eliberarea virusului progen. -ecisiv este natura virusului, dar tipul celular poate avea un rol important. 3tarea antiviral este, n primul r'nd, consecina sintezei n celul, a unei proteine inhibitoare a transcrierii iRsau a traducerii mesa3ului genetic viral ?PID 7, care interfer fie cu sinteza A01m viral, fie cu traducerea sa, fie cu ambele procese. 8 a II#a cale ma%or a inducerii strii antivirale este degradarea A01m viral prin aciunea 9S1>S oligo1adenilat1sinteta ei i a riboendonuclea ei. (n cele mai multe sisteme virus#celul, inhibiia multiplicrii virale este rezultatul interferenei cu etapa traducerii A01m viral. In celulele liniei sensibile " 6originar din fibroblaste de embrion de oarece7, infectate cu virus vaccinal, se produce dezagregarea polisomilor celulari. A01m viral se asociaz cu ribosomii eliberai i formeaz polisomi ce sintetizeaz proteine specific virale. In celulele tratate cu interferon, nainte de infecia viral, A01m viral nu se asociaz cu ribosomii i nu se sintetizeaz proteine specifice. In absena proteinelor virale, infecia este abortiv. 2fectul este acelai dup infecia cu reo#, picorna#, toga#, rhabdo#, parami&o#, herpes# sau cu papovavirusuri. (n celulele tratate cu actinomicina - 6un inhibitor specific al sintezei proteice7, efectul protector al interferonului nu se realizeaz. ,na din proteinele inhibitoare ale traducerii A01m viral este protein1china a dependent de *)H dublu catenar ?PF)5, denumit i china a factorului de iniiere a sinte ei proteinelor la eucariote ?eI(195.

(ig..@. Aciunile antivirale ale interferonilor 6IF17. Interferonii se leag specific de receptorii de IF1 i produc numeroase efecte, dou dintre ele fiind ilustrate n schem. IF1 induc sinteza proteinelor antivirale A 5>,C> adenozin#sintetaza i o protein#chinaz. Ambele sunt activate de A01 dublu catenar, intermediarul replicrii virale. 3intetaza induce formarea 5>C>ppp#oligo A, care activeaz o endonucleaz capabil s produc degradarea A01m. Protein#chinaza fosforileaz factorul de iniiere al traducerii proteinelor, elF5, pe care l inactiveaz 6dup @ale, 1JDI7. PL0 este o chinaz serinTtreonin, prezent n celule i n mod normal se sintetizeaz cu o rat foarte sczut. 2nzima, n proporie de 59M se gsete n nucleu 6mai ales n nucleol7 i D9M are sediul citoplasmatic. In cea mai mare parte, protein#chinaza citoplasmatic este legat de ribosomi i este mai fosforilat dec't cea nuclear. Protein#chinaza este inactiv 6latent7, dar poate fi activat de A01 dublu catenar. (n celulele tratate cu interferon, nivelul protein#chinazei 6o protein de ?I B-7 crete de peste 59 de ori. PL0 se activeaz n prezena A01 dublu catenar, rezultatul fiind autofosforilarea c'torva resturi de serin i treonin. Autofosforilarea este cel mai probabil, intermolecular i se produce ntre dou molecule de PL0 asociate cu aceiai molecul de A01 dublu catenar. In consecin, concentraiile mari de A01#dublu catenar inhib procesul autofosforilrii. Oeparina 6un polianion7 activeaz aceast enzim. 3ubstratul fiziologic unic al PL0 fosforilate este subunitatea Q a factorului

1?5

de traducere eIF#5. eIF#5 fosforilat nu poate fi reciclat pentru iniierea traducerii i produce inhibiia sintezei proteinelor celulare. (n celula infectat cu un virus, protein#chinaza, se asociaz cu A01#dublu catenar, se activeaz i se fosforileaz. Protein#chinaza activat, poate fosforila un numr de substraturi celulare, inclusiv factorul 5 Q, de iniiere a sintezei proteinelor la eucariote 6eIF#5 Q7, la restul de serin Cl 6Lumar, 1JJD7. eIF#5 Q fosforilat, blocheaz iniierea sintezei catenei polipeptidice. Alt cale activat de A01 dublu catenar i de interferon este calea 5>,C>#oligo#adenilat# sintetazeiT01#aza. Interferonii induc sinteza unei familii de enzime denumite 5#C6A7sintetaze, care polimerizeaz A;P n oligo#adenilai de diferite lungimi, legai 5>#C>. Aceste enzime sunt inactive, dar se activeaz datorit unei schimbri conformaionale care se produce consecutiv legrii sale cu A01 dublu catenar. 5>,C>#A3 activat este capabil s polimerizeze A;P i alte nucleotide n legturi 5>#C>. In molecula de 5>,C>#oligoadenozin, resturile de riboz sunt legate prin puni fosfo#diesterice 5>#C>. Acestea sunt legturi unice, deoarece toate polinucleotidele naturale conin legturi <>#C>. 5>,C>#oligoadenozina activeaz 01#aza ". 01#aza " este detectabil n toate celulele animale. @a%oritatea celulelor conin o fosfodiesteraz ce poate hidroliza 5#C6A7. 01#aza " poate cliva A01 celular i viral monocatenar la secvene specifice ,pA, ,p. i ,p,. 01#aza " poate manifesta efecte antivirale prin inducia apoptozei. Aceast cale este activ n inhibiia replicrii picornavirusurilor n celulele tratate cu IF1 $ei mai buni interferoni stimuleaz sinteza interferonilor, care la r'ndul lor activeaz ambele enzime 6adenilat#sintetaza i protein#Binaza7. Interferonii au aciune direct, prin inducerea modificrilor n membrana plasmatic a celulei, mrind rigiditatea stratului lipidic. Acesta poate fi mecanismul efectului inhibitor al interferonului asupra transformrii maligne a celulelor, sub aciunea virusurilor oncogene. -ac la nivel celular, efectele antivirale ale interferonilor sunt mediate n primul r'nd prin aciunea proteinelor antivirale intracelulare, n organism interferonii acioneaz prin alte mecanisme. Interferonii stimuleaz funcia imunitar. $elulele infectate de virusuri sunt lizate de celulele imunitare. 0ecunoaterea lor este mediat de moleculele $@O I, a cror e&presie este stimulat de interferoni. Interferonii sunt stimulatori ai enzimei nitric#o&id#sintetaz, care prin o&idul nitric6187 inhib replicarea virusurilor n anumite celule. *lte activiti biologice ale interferonilor. Interferonii e&ercit o gam larg de aciuni, cu efecte inhibitoare sau stimulatoare asupra celulelor sensibile 2fectele inhibitorii se e&ercit nu numai asupra multiplicrii virusurilor, ci i asupra creterii i multiplicrii microorganismelor parazite cu localizare intracelular, asupra unor activiti metabolice tisulare 6de e&emplu, prin inhibiia sintezei proteice, interferonul poate s induc procese de necroz celular7, asupra multiplicrii celulelor tumorale, asupra creterii i diviziunii celulelor normale, asupra reaciilor de hipersensibilitate nt'rziat. 2fectele stimulatoare ale interferonilor se e&ercit asupra nivelului de e&primare a unor molecule de suprafa a celulelor 6de e&emplu, moleculele $@O, receptorii de mare afinitate pentru regiunea Fc a Ig. pe suprafaa macrofagului, cu consecine importante pentru rata eliminrii comple&elor imune prin fagocitoz i asupra A-$$7.

1?<

(ig. ... (unciile I(H E sunt multiple! activitile antiviral i antiproliferativ sunt mai puin intense dec't ale IF1 Q i P, dar este cel mai puternic inductor al activrii macrofagelor i al e&primrii moleculelor $@O clasa II pe celulele tisulare, fiind sinergic cu ;1F Q i ;1F P. Interferonii stimuleaz activitatea citoto&ic a limfocitelor 1L i activeaz metabolismul o&idativ al macrofagelor, precum i activitatea lor antitumoral. Pe suprafaa limfocitelor ;, interferonii intensific e&primarea receptorilor pentru I"#5. 3timuleaz rspunsul imun, dac este administrat concomitent cu antigenul. 2fectul imunostimulator se poate atribui unei mai bune e&primri a moleculelor $@O, ceea ce condiioneaz o prezentare mai eficient a antigenului. "emnificaia biologic a interferonilor. Interferonii sunt componente ale reelei citochinelor. $itochinele sunt molecule active, produse de diferite categorii de celule, sub aciunea unor stimuli, inclusiv sub aciunea interferonilor. $itochinele interacioneaz cu receptorii altor celule i regleaz procesele lor de proliferare i difereniere. -eoarece limfocitele stimulate produc interferon \, aceast clas de molecule face parte din categoria limfochinelor. Adeseori, efectele biologice ale diferitelor categorii de citochine sunt antagonice. Oomeostazia celular este, probabil, rezultatul unui echilibru ntre efectele induse de o varietate de citochine. (ntre interferoni i hormoni, e&ist c'teva asemnri, cu privire la mecanismul secreiei i eliminrii din celulele productoare, al interaciunii cu celulele sensibile, al mecanismului de aciune asupra celulelor 6ca i hormonii, interferonii activeaz ciclazele .@P i A@P7, precum i n ceea ce privete efectele reglatoare i modulatoare ale celor dou categorii de molecule asupra reaciilor imunitare. Av'nd n vedere aceste asemnri, s#a propus ca interferonii s fac parte din grupul hormonilor )neclasici*, alturi de +'( 6+pidermal 'roKth (actor7, P$'( 6Platelet $erived 'roKth (actor7, H'( 6Herv 'roKth (actor7 etc. *er)pe%t vele prod"%er & "t l zr #ter+ero# lor

(n unele celule, sinteza interferonilor este indus spontan, n absena unui inductor detectabil. Interferonii Q i \ sunt produi de liniile celulare limfoblastice originare n celulele ;, n concentraii variabile, de la l la l999 ,Tml. Interferonii sunt produi prin biotehnologii moderne, n celule manipulate genetic. .enele codificatoare ale sintezei interferonilor au fost izolate, secveniate i inserate n vectori de clonare. Acetia au fost transferai n celula procariot 6+. coli7 sau eucariot. .enele codificatoare ale interferonilor sunt transcrise at't n celule bacteriene, c't i n celule eucariote. Pe aceast cale, in vitro sau obinut cantiti mari de interferoni 6utilizabili n clinic7, fiind sintetizai de celulele bacteriene, de levuri i de celulele de mamifere. Interferonii se utilizeaz pe scara larg n tratamentul infeciilor cu virus rabic i cu virusuri encefalitogene. 2fectul lor este ameliorarea sau chiar eliminarea infeciilor persistente, cu virusul hepatitei +, $, cu herpes#zoster sau cu citomegalovirus. Interferonii au proprieti antiproliferative i se folosesc n tratamentul unor stri neoplazice umane. ;umorile originare n limfocitele + sau n celulele plasmocitare sunt cele mai

1?:

sensibile. $ea mai eficient activitate antiproliferativ o are interferonul Q. Garietatea \ este activ n maladia OodgBin 6proliferarea malign a macrofagelor ganglionare7. ,tilizarea interferonilor n clinic este limitat de manifestarea unor efecte secundare! febr, hipotensiune, mialgie, bradicardie <@embranele biologice sunt depozite pentru precursorii mediatorilor derivai din lipide. 0spunsul celular este (nsoit de remodelarea rapid a lipidelor membranare sub aciunea lipazelor activate. "ipazele includ fosfolipaza A5, - i $. 3e genereaz rapid lipide bioactive, cu funcie de mediatori. P. formeaz o familie de acizi grai nesaturai cu caten de 59 atomi de $. Precursorul P. este acidul arachidonic 6nesaturat7, legat esteric de $5 al fosfolipidelor membranare de unde este eliberat sub aciunea fosfolipazei A5. Acidul arachidonic este precursorul sintezei compuilor icozanoidici 6P. i leucotriene A ";7 i este convertit la endopero&izi ciclici 6P.7 sub aciunea cicloo%igena ei. 3inteza acestei enzime este inhibat de aspirin i indometacin, substane cu efect antifebril. 2fectul lor antifebril se e&ercit prin inhibiia sintezei P.. P. se sintetizeaz (n monocite, macrofage, granulocite, dar i (n ma%oritatea celorlalte esuturi ale organismului uman i animal. -up sintez sunt eliberate (n circulaie i sunt inactivate (n ficat, rinichi i plm'ni. P. sunt inhibitori ai reactivitii imunitare, deoarece diminu reactivitatea limfocitelor i macrofagelor. :/incul este un element esenial pentru funcia imunitar. 3e gsete (n situsul activ a peste 599 metaloenzime, fiind foarte important pentru metabolism. 3inteza acizilor nucleici este dependent de metaloenzimele cu /n 6A01# i A-1 polimerazele7. -eficiena /n 6datorat ingestiei sczute sau malabsorbiei7 produce disfuncii ale limfocitelor ;, atrofia timusului, diminuarea numrului de limfocite ; (n organele limfoide secundare. In rspunsul inflamator acut febril6consecutiv unei infecii7, concentraia plasmatic a /n scade la %umtate din valoarea normal, fiind sechestrat (n hepatocite, timocite i (n mduva osoas. @ecanismul sechestrrii nu se cunoate. -eficienele /n sunt asociate cu malnutriia proteic sau cu malabsorbia.,nele fibre dietetice (mpiedic absorbia /n. In reaciile de faz acut ale strilor febrile, balana metabolic a azotului este negativ i este (nsoit de scderea /n, datorit sechestrrii tisulare. -AZELE CELULARE I MOLECULARE ALE MEMORIEI IMUNITARE

0spunsul imun are trei particulariti generale! 17 specificitateaN 57 diversitatea 6heterogenitatea anticorpilor7N <7 memoria. @emoria imunitar este caracterizat printr#un rspuns imun mai rapid i mai e&tins n timp. Argumentul direct este chiar timpul de laten mai scurt al rspunsului imun secundar, e&plicabil prin faptul c dup prima e&punere la antigen, rezult o populaie mai numeroas de celule cu receptori specifici fa de epitopii imunostimulatori. Aceste celule au parcurs de%a c'teva trepte ale diferenierii spre celulele productoare de anticorpi. Anticorpii rspunsului imun secundar au o afinitate mai mare de legare cu antigenul specific. In rspunsul imun secundar 6de memorie7, iniial se secret Ig@, dar i alte izotipuri, n special Ig.. @emoria imunitar implic tipuri funcionale specializate de limfocite ; i +, denumite celule de memorie.

1?C

0eceptorii de antigen ai limfocitelor + de memorie sunt n special molecule de Ig., iar ai limfocitelor neanga%ate sunt molecule de Ig@ i Ig-. Pe suprafaa altor celule de memorie s#au identificat i ali receptori! Ig@ i Ig., Ig@ i IgA, Ig@ i Ig2. Aceti marBeri asigur generarea izotipurilor corespunztoare de imunoglobuline n rspunsul imun secundar. "imfocitele + de memorie au localizri specifice i receptorii lor de antigen prefigureaz izotipul anticorpilor secretai! limfocitele care au ca receptor de antigen molecule de IgA i Ig2 sunt localizate n structurile limfoide asociate mucoaselor 6digestiv, respiratorie7. -e aceea, calea de administrare a antigenului influeneaz profund izotipul anticorpilor care se sintetizeaz, fiecare izotip av'nd o eficien optim ca mediatori ai funciilor efectoare particulare! IgA inhib aderena microorganismelor la suprafaa mucoaselorN Ig. i Ig@ sunt efectorii rspunsului imun humoral, iar Ig2 activeaz mastocitele. 0eceptorii de antigen ai limfocitelor + de memorie au afinitate mai mare de legare a antigenelor i de aceea sunt mai eficieni n captarea cantitilor mici de antigene i n prezentarea mai rapid a acestora. @ecanismul generrii limfocitelor + de memorie este ipotetic. ,na din teorii consider c at't plasmocitele 6productoare de anticorpi7 c't i celulele + de memorie deriv din acelai limfocit B precursor. $elulele rezultate din diviziunile succesive declanate de stimularea antigenic evolueaz diferit! unele se difereniaz n plasmocite, iar altele rm'n limfocite mici care se re ntorc la starea . 9 i devin limfocite de memorie. -escendenii clonei stimulate evolueaz spre plasmocit sau spre celula de memorie, n raport cu influenele pe care le primete de la diferite limfochine, de la celulele accesorii sau de la celulele ;h. -up alt teorie, celulele de memorie i plasmocitele provin din celule B diferite. "imfocitele + par fi preprogramate s devin plasmocite sau limfocite de memorie, nainte de e&punerea la antigen. 0spunsul imun secundar se caracterizeaz prin creterea afinitii anticorpilor. Afinitatea receptorilor i a anticorpilor fa de antigene este conferit de regiunea variabil a moleculei. $reterea afinitii este e&plicabil prin dou mecanisme! # stimularea selectiv a limfocitelor care au receptor GOTG" de mare afinitate, e&primat pe suprafaa limfocitelor + neanga%ate. Altfel spus, pe msur ce cantitatea de antigen scade, continu s se activeze numai celulele cu receptori de mare afinitate i s domine rspunsul imunN # dup stimularea antigenic, n centrii germinativi ai organelor limfoide secundare are loc procesul hipermutaiei somatice, printr#un mecanism necunoscut ce introduce mutaii punctiforme n regiunile G. @ecanismul memoriei imunologice pentru perioade lungi de timp 6luni, ani sau tot restul vieii7 nu este cunoscut. Populaia celulelor de memorie trebuie, prin definiie, s aib via lung i aceasta, teoretic, se poate realiza fie prin generarea celulelor care nu se divid i nu mor sau prin generarea unei populaii care se re noiete prin diviziuni care nlocuiesc celulele moarte. Primul model are avanta%ul c nu necesit un component reglator, iar al II#lea impune aciunea unui mecanism reglator al ratei de re noire. 2&istena unor limfocite cu via lung, dup unii autori, este cu totul improbabil, dar rezultatele analizei limfocitelor la om, dup e&punerea sever la radiaii, sugereaz c celulele individuale pot s persiste fr s se divid, un interval de ordinul c'torva decade. -up alte opinii,

1??

supravieuirea limfocitelor ; i + este dependent de prezena antigenului. 2&perienele de transfer adoptiv al celulelor de memorie 6; i +7 au artat o scdere a rspunsului de memorie, n <9#:9 de zile, ceea ce sugereaz c memoria imunitar nu este rezultatul diferenierii limfocitelor de memorie cu via lung. Pstrarea antigenului n organism pare s aib rol esenial n meninerea tuturor categoriilor de celule de memorie. Antigenul se depoziteaz i se pstreaz n organism pentru perioade de ordinul lunilor sau chiar un an, n asociaie cu celulele foliculare dendritice, sub forma comple%elor imune. 2le realizeaz stimularea continu a limfocitelor +, la un nivel sczut. $elulele foliculare dendritice sunt eseniale pentru memoria imunitar a celulelor +, a cror stimulare de durat o realizeaz cu antigenele pe care le poart pe suprafaa lor. $elulele foliculare dendritice nu prelucreaz i nu prezint antigenele, dar depoziteaz comple&ele antigen#anticorp pe suprafaa lor. 8 alt modalitate a pstrrii ndelungate a memoriei imunitare este consecina e%punerii periodice a limfocitelor B la antigene cu reacie ncruciat, la superantigene sau la mitogene, care prin intermediul interleuchinelor determin o e&pansiune limitat la c'teva cicluri de diviziune. 0eeaua idiotipic a lui Herne e&plic memoria imunitar! interaciunile idiotipice dintre diferiii constituieni moleculari i celulari ai reelei, iniiate de contactul cu antigenul, ar fi suficiente pentru pstrarea memoriei informaiei antigenice dob'ndit anterior. "imfocitele + de memorie nu se activeaz sub aciunea mitogenilor sau a activatorilor policlonali, ci rspund numai la antigenul specific. Activarea lor necesit o cantitate mult mai mic de antigen i este mult mai puin ;#dependent. ;elulele Dh de memorie sunt probabil generate n corte&ul ganglionilor limfatici, dar mecanismul nu este cunoscut. @ecanismul memoriei celulelor ; a fost propus dup modelul inducerii dermatitei de contact, o reacie de hipersensibilitate nt'rziat, mediat de celulele $-:. -in punct de vedere funcional, n contrast cu celulele ;h neanga%ate, celulele ;h de memorie primesc informaie antigenic nu numai de la macrofag, ci i de la limfocitele + localizate la interfaa dintre foliculi i corte&ul ganglionilor limfatici. $ele neanga%ate stimuleaz slab celulele +, iar celulele $-: de memorie mediaz rspunsul viguros al limfocitelor +. 0eceptorul de antigen al limfocitelor ; 60$;7 nu sufer fenomenul maturrii de afinitate. Aceasta nseamn c limfocitele ; de memorie nu leag epitopii antigenici cu afinitate mai mare, dar dup stimularea secundar, ele se activea mai rapid. $oreceptorul $-:C este prezent ntr#o izoform cu greutate molecular mai mic dec't al limfocitelor ; $-: neanga%ate. $aracteristica funcional definitorie a celulelor ;h de memorie este rspunsul lor mult mai amplu la stimulul antigenic, prin proliferare intens, comparativ cu celulele neanga%ate. -up stimulare, celulele ;h de memorie produc o gam mult mai larg de limfochine! I"#5, I"#:, I"#C, I"# ?, IF1 \, spre deosebire de limfocitele ;h neanga%ate, care la contactul cu antigenul sintetizeaz I"# 5. @ecanismul molecular al generrii limfocitelor Dc 6$;"7 de memorie nu este cunoscut. 0spunsul imun mediat celular fa de antigenele de transplantare i fa de antigenele celulare n general, are la baz aceleai caracteristici ale reactivitii imunitare! instalarea memoriei imunitare dup stimulul primar i o reactivitate intens i rapid dup ree&punerea la antigen. 0eactivitatea imun secundar mediat celular se evideniaz n dinamica respingerii alo# i &enogrefelor!

1?I

organismele liniei genetice A resping alogrefa primar de la linia inbred + dup dinamica rspunsului imun primar 619#1: zile7. A II#a gref de esut de aceiai provenien este respins dup dinamica rspunsului imun secundar 6C#? zile7, iar a II#a gref de la un organism al liniei inbred $ este respins de organismele liniei A dup dinamica rspunsului imun primar. $elulele ; $-D de memorie produc o gam larg de citochine, iar cele neanga%ate produc IF1 \. 0spunsul imun secundar 6de memorie7 este rezultatul cooperrii variatelor tipuri de celule de memorie. -e e&emplu, celulele ;h de memorie produc I"#5, cu efect stimulator asupra celulelor ;c i + de memorie. $ooperarea celular mrete eficiena rspunsului imun. 8 cooperare de tip special este aceea a limfocitelor + de memorie, care au capacitatea de a capta foarte eficient cantitile foarte mici de antigene specifice i de a le prezenta limfocitelor ;h. $aptarea antigenului prin intermediul receptorului imunoglobulinic specific de antigen este de circa 1999 de ori mai eficient dec't prin pinocitoz nespecific. Pe suprafaa limfocitelor ; de memorie nu apar molecule noi, dar se e&prim la un nivel superior, cele implicate n aderena la epiteliul venulelor. @oleculele de suprafa sunt implicate n recircularea limfocitelor la situsuri prefereniale 6homing7. $elulele ; de memorie recircul n primul r'nd n esuturile nelimfoide, a%ung n esuturile limfoide prin limfaticele aferente i se re ntorc n s'nge prin limfa eferent. -ovada este adus de faptul c in vivo, celulele care intr cu limfa n ganglionii limfatici, sunt e&clusiv celule de memorie. 1u se tie dac aceste celule recircul sau rspund la o stimulare antigenic. (n concluzie, cele mai ample diferene ntre celulele neanga%ate i cele de memorie sunt de ordin funcional i constau n primul r'nd n capacitatea celulelor de memorie de a secreta o gam foarte larg de citochine. Populaia celulelor de memorie are via lung, dar se pot divide cu o rat controlat de mecanisme homeostatice. $ondiiile pentru generarea i meninerea memoriei nu sunt clare. 0ee&punerea la antigenul specific nu pare a fi necesar pentru pstrarea memoriei.

REGLAREA RS/UNSULUI IMUN Pentru eficiena aciunii nu este suficient s posezi efectori foarte buni, ci performanele efectorilor trebuie monitorizateY.61. Fiener, 1J?17. Deoria seleciei clonale consider c organismul animal sau uman, n mod obinuit rspunde la stimularea cu orice substan antigenic natural sau artificial, deoarece sistemul imunitar este alctuit dintr#un numr imens de populaii de celule limfoide, fiecare av'nd receptori specifici pentru un epitop antigenic. 3istemul imunitar manifest o stare de toleran perfect fa de constituienii proprii organismului, dar e&ist situaii de e&cepie, n care anumite molecule self pot deveni imunogene.

1?D

Interaciunile reciproce ale reelei idiotipice, ca mecanism esenial al reglrii rspunsului imun, se bazeaz pe raionamentul c dup stimularea antigenic, rspunsul imun evolueaz pe dou direcii eseniale! # sinteza anticorpilor complementari fa de antigenul inductor, efectul fiind legarea i neutralizarea antigenuluiN # sinteza unor molecule care se combin specific cu moleculele de imunoglobuline libere, dar i cu receptorii limfocitelor ; i + i i blocheaz, inhib'nd funcia lor i stop'nd rspunsul imun. Aceste molecule au rol esenial n reglarea rspunsului imun. 3inteza moleculelor cu aciune specific fa de receptorii limfocitari se datoreaz faptului c moleculele de imunoglubuline, libere sau legate de celule, au determinani antigenici proprii care se comport ca imunogene chiar pentru organismul n care s#au sintetizat. $eterminani antigenici i otipici. @olecula de imunoglobulin poart n structura sa mai multe categorii de determinani antigenici, evideniai prin in%ectarea imunoglobulinei asociat cu ad%uvantul Freund, la animalele de laborator. Anticorpii se comport ca antigene fa de organismele altor specii i se sintetizeaz anticorpi fa de determinanii antigenici care definesc variantele izotipice, caracteristici diferitelor clase de imunoglobuline. -eterminanii antigenici izotipici se gsesc pe catena O 6\, U, Q, ], ^7 sau pe catena " 6c sau `7 i sunt invariani pe toate moleculele de imunoglobuline ale unei clase, la toi indivizii unei specii. $eterminanii alotipici se gsesc pe moleculele de imunoglobuline ale organismelor unei specii, care au acelai alotip, adic aceiai combinaie de gene alele codificatoare ale anticorpilor. -eterminanii alotipici sunt localizai n regiunile constante ale catenelor O i " i semnificaia lor este analog celei a antigenelor de grup sanguin. $eterminanii idiotipici sunt localizai n regiunile variabile ale moleculei de imunoglobulin i reflect particularitile biochimice ale acestei regiuni. Aici se gsesc determinanii antigenici cu caracter individual ai moleculei de imunoglobulin, denumii idiotopi, consecin a hipervariabilitii aminoacizilor. Fiecare determinant antigenic se numete idiotop, iar ansamblul lor formeaz idiotipul. Idiotopii sunt asociai cu secvenele hipervariabile ale moleculei! trei secvene ale catenei " i trei din cele patru secvene hipervariabile ale catenei O 6secvena a <#a nu intr n alctuirea paratopului7. Fenomenul idiotipiei semnific e&istena unor determinani proprii fiecrui organism, localizai pe moleculele de anticorpi. Prezena idiotopilor nu este limitat la moleculele libere de imunoglobuline, ci se gsesc i n structura receptorilor limfocitari de antigen, n special n structura moleculelor de imunoglobuline cu rol de receptor de antigen de pe suprafaa limfocitelor +. ;eoria reelei idiotipice consider c idiotopii sunt imunogeni chiar pentru organismul n care s#au sintetizat i induc sinteza anticorpilor specifici cu care se combin. Acetia se numesc anticorpi anti1idiotipici. "a r'ndul lor, anticorpii anti#idiotipici induc sinteza anticorpilor anti1anti1idiotipici. Astfel, reeaua idiotipic nu este numai o reea de interaciuni moleculare ntre imunoglobulinele libere, ci este o reea mi&t de interaciuni celulare i moleculare. (n conte&tul teoriei, distincia dintre idiotip i anti#idiotip este numai operaional. 8rice idiotip de pe suprafaa unui receptor de antigen6molecul liber sau ancorat n membrana limfocitelor ; i

1?J

+7 poate funciona simultan, ca imunogen6epitop7 stimulator al rspunsului imun, dar funcioneaz i ca paratop, capabil s se lege cu idiotipul complementar. 0epertoriul idiotipurilor este egal cu acela al specificitilor de legare. ;eoria reelei idiotipice a lui Herne se bazeaz pe faptul c ntr#un organism, fiecare molecul de anticorp este recunoscut de situsurile de combinare ale altor molecule de anticorpi cu configuraie spaial complementar. Astfel, idiotopii proprii anticorpilor sintetizai n faza iniial a rspunsului imun, se comport ca determinani antigenici i declaneaz un rspuns imun de faza II# a, n care se sintetizeaz anticorpi anti#anticorpi din faza I#a a rspunsului imun. Anticorpii din faza a II#a se numesc anticorpi anti1idiotip. "a r'ndul lor, acetia au un set propriu de idiotopi, care se comport ca epitopi antigenici i induc sinteza anticorpilor de faza a III#a .a.m.d. $a ntr#o sal a oglinzilor, acest proces se poate repeta continuu. Anticorpii sintetizai ntr#o astfel de cascad a rspunsului imun, sunt legai ntr#o reea de interaciuni specifice, care poate s implice ntregul sistem imunitar. Fig.DJ. 2lementele reelei idiotipice, n care receptorii de antigen ai unui limfocit recunosc reciproc un idiotip pe receptorii altui limfocit. "imfocitele ;h, ;s i + interacioneaz prin reacii idiotip#antiidiotip, produc'nd stimularea sau supresia. Interaciunile ;#; pot avea loc prin recunoaterea direct a unui 0$; de ctre altul sau mai frecvent, prin recunoaterea unui peptid 0$; prelucrat i asociat cu moleculele $@O. ,nul din seturile de anticorpi antiidiotipici, Ab5Q poate purta un idiotip asemntor cu antigenul 6adic este imaginea intern a acestuia7. Acelai idiotip 687 poate fi prezent pe receptorii cu specificiti distincte, astfel c anti#6anti#Id17 nu se leag n mod necesar de antigenul original 6Q = antiN Id = IdiotipN Ab1 = IdN Ab5Q = anti#Idiotip ce nu implic paratopulN Ab5 Q = anticorpi anti#Idiotip imaginea intern care implic paratopulN Ab< = anti6anti#Id 7. Anticorpii anti#idiotipici constituie fora reglatoare a sistemului imunitar. (n mod asemntor, reeaua de interaciuni specifice se creeaz ntre idiotopii moleculelor receptoare de antigen din membrana limfocitelor ;. 2i sunt recunoscui de situsurile de combinare ale receptorilor de pe un alt set de limfocite. ;eoria reelei idiotipice se bazeaz pe e&istena unei reele imense de interaciuni idiotip# antiidiotip, at't ntre anticorpi c't i ntre receptorii celulari, ce asigur controlul rspunsului imun. -up Herne, interaciunile reelei se produc nu numai ca rspuns la un stimul antigenic, ci i n starea de echilibru a sistemului imunitar. $aracterul de reea a sistemului imunitar decurge din faptul c fiecare molecul de anticorp sau de receptor, funcioneaz mai nt'i ca molecul efectoare a rspunsului imun, dar i ca molecul inductoare a sintezei altor efectori. Prin intermediul interaciunilor idiotip#antiidiotip, sistemul imunitar interacionea cu el nsui. (n absena stimulilor antigenici, sistemul imunitar este n stare de echilibru 6steadE state7 i reeaua idiotipic funcioneaz unitar. Interaciunile reelei activeaz limfocitele + i ele sintetizeaz mici cantiti de anticorpi. Astfel, sistemul imunitar este concentrat asupra componentelor proprii i

1I9

produce anticorpi#antiidiotipici fa de propriul su repertoriu de receptori. ;oate componentele reelei imunitare6celule, molecule7 sunt ntr#o stare de comunicare permanent i n stare de echilibru reciproc. $onsecina interaciunilor reciproce inductoare idiotip#antiidiotip este starea normal 6echilibrat7, represat, a sistemului imunitar. Ptrunderea unui antigen e%ogen n organism, stimuleaz c'teva clone de limfocite i astfel sistemul imunitar iese din starea de represie obinuit. 3e sintetizeaz Ac1, care au idiotipul 16I17. $a rspuns la determinanii idiotipici ai idiotipului 1, limfocitele + sintetizeaz anticorpi de faza a II#a 6anticorpi anti#idiotip I17. 2fectele declanate de un antigen se propag n tot sistemul imunitar, aa cum pe suprafaa unei ape, sub impactul unui oc mecanic se induc unde succesive tot mai mici, p'n se a%unge la starea de echilibru. ;eoria reelei idiotipice introduce un concept nou A al imaginii interne a antigenului, foarte important din punct de vedere teoretic i practic. In acord cu aceast concepie, anticorpii 6Ac17 fa de un epitop poart imaginea sa negativ. Idiotopii acestor molecule, asociai situsului de combinare, induc sinteza anticorpilor anti#idiotipici 6Ac57. Acetia poart imaginea negativ a anticorpilor 1 i vor reproduce imaginea intern a epitopului iniial. Anticorpii 5, care sunt imaginea intern a antigenului, pot fi stimulatori ai rspunsului imun fa de antigenul iniial. 1umrul imaginilor interne crete odat cu sinteza unui nou idiotip, pe msura ce influena antigenului se propag n reeaua sistemului imunitar. Fig. J9. Ilustrarea grafic a reelei idiotipice. Anticorpii generai ca rspuns fa de un antigen constituie primul val al rspunsului. Al II#lea val este iniiat de idiotipul anticorpilor din primul val i se numesc anticorpi anti1 idiotipici. 2i e&prim idiotipul care genereaz al III#lea val al rspunsului anticorpilor 6anticorpi anti1anti1idiotipici7. ;eoria consider c rspunsul idiotip#anti#idiotip continu indefinit, ns circuitul se ncheie c'nd unul din idiotipurile anticorpilor se aseamn cu unul din idiotipurile sintetizate ntr# un val anterior. $oncepia actual a funcionalitii sistemului imunitar presupune c acesta este format dintr# un numr mare de clone de limfocite, care poart receptori preformai fa de antigene. In acord cu reeaua idiotipic, imaginile interne ale diferiilor epitopi ai clonelor de limfocite, sunt prezente n reea, aa nc't nici un epitop din mediul e&tern nu este cu adevrat strin pentru sistemul imunitar, deoarece toi epitopii capabili s induc un rspuns imun, sunt reprezentai n sistemul imunitar de receptori limfocitari, prin imaginea lor intern. ,nii idiotopi ai reelei sunt chiar imaginea intern a moleculelor antigenice din propriul organism. In acord cu aceast concepie, maladiile autoimune sunt consecina perturbrii reelei idiotipice. 0eeaua idiotipic se stimuleaz i sintetizeaz anticorpi anti#idiotipici, numai c'nd idiotopii ating o concentraie limit. Herne compar cascada activrii idiotip#antiidiotip a sistemului imunitar, cu o sal a oglinzilor, n care iniial se formeaz imaginea negativ a structurii nonself 6anti#nonself7, apoi anti#anti# nonself, care la r'ndul lor reflect universul antigenelor e&ogene.

1I1

;eoria reelei idiotipice permite nelegerea sistemului imunitar ca un sistem global de interaciuni reciproce, n contradicie cu teoria clasic a clonelor de limfocite care ateapt pasiv nt'lnirea cu antigenul. 2lementul fundamental al teoriei este c sistemul imunitar formeaz o reea funcional de interaciuni ntre molecule de anticorpi i receptorii limfocitari, continuu echilibrat nainte de ptrunderea antigenului e&ogen. Interaciunile idiotipice sugereaz o legtur funcional permanent ntre limfocite, precum i ntre limfocite i alte categorii de celule din organism, stimul'nd pe unele, repres'nd pe altele, printr# un ansamblu de semnale interne.

TOLERAN%A IMUNITAR

;olerana este o stare fiziologic, caracterizat prin absena rspunsului imun fa de un antigen i prin pstrarea capacitii de rspuns imun fa de alte antigene. 3istemul imunitar este tolerant, n primul r'nd fa de componentele self, pe care a nvat s le recunoasc n timpul dezvoltrii embrionare. 3tarea de toleran este specific pentru un antigen dat i pentru cele nrudite din punct de vedere chimic, dar este asociat cu pstrarea reactivitii imunitare fa de toate antigenele care nu dau reacie ncruciat cu antigenul tolerat. ;olerana imunitar i reactivitatea imunitar prezint urmtoarele caracteristici comune! # sunt specifice fa de un antigen dat # se manifest dup contactul cu antigenul inductor # sunt mediate de limfocite. ;olerana se deosebete de starea de imunosupresie, ultima fiind consecina unei incapaciti congenitale sau dob'ndite de a rspunde la o varietate de antigene. Importana fenomenului de toleran fa de componentele proprii organismului a fost recunoscut de 2hrlich i @orgenroth 61J997, care au formulat conceptul )horror autoto&icus*, o consecin esenial a funciei normale a sistemului imunitar, ce semnific faptul c n mod normal, organismul i asigur protecia propriilor sale componente fa de autodistrugerea prin reactivitatea imunitar. 3tarea de toleran poate fi indus natural sau e&perimental. -up 1J59 s#a evideniat c tolerana poate fi indus e&perimental, fa de unele antigene administrate n doze mari! to&ina difteric, polizaharidul de streptococ 6la oarece7, \ globulina de cal 6la iepure7. Aceleai antigene, n doze mici sunt stimulatoare ale rspunsului imun.

1I5

(n 1J<D, ;raub a indus tolerana specific, prin inocularea oarecilor in utero, cu virusul coriomeningitei limfocitare 6"$@G7. (n 1J:C, 8Ken a evideniat c gemenii dizigoi de bovide 6aparin'nd unor alotipuri diferite7 i tolereaz reciproc antigenele tisulare, dac n cursul vieii embrionare, un proces de fuziune placentar a permis un schimb reciproc de elemente figurate. $ei doi gemeni resping grefele de esut de origine parental sau de la organisme cu aceiai ascenden. Aceti gemeni au elemente figurate sanguine proprii, dar i celule sanguine ale gemenului cu un alotip diferit i se numesc himere hematopoetice. $oncluzia a fost c, prin contactul timpuriu, n cursul vieii embrionare, al limfocitelor cu antigenele, se creeaz o stare de toleran specific fa de nonself i ulterior, antigenele inductoare ale toleranei vor fi recunoscute ca self i tolerate. Oimerele hematopoetice pot fi obinute artificial, la organismele adulte, prin iradiere sau prin imunosupresie sever medicamentoas, urmat de in%ectarea celulelor de mduv osoas strin. In clinic, pentru tratamentul unor maligniti ale s'ngelui se realizeaz eliminarea total a mduvei hematopoetice prin iradiere i imunosupresie, urmat de transplantul de mduv osoas uman. (n sens mai larg, himera biologic este un organism dotat n mod artificial cu componente celulare, cu esuturi sau organe, care provin de la alt organism. (n 1JC<, +illingham, +rent i @edaKar au descoperit faptul c maturarea limfocitelor parcurge un stadiu, n cursul cruia contactul cu antigenul, perturb acest proces, consecina fiind pierderea funciei imunitare, adic limfocitele devin tolerante fa de antigenul respectiv. 3tarea de toleran se induce e&perimental, la oarecii nou#nscui, fa de toate tipurile de antigene. 0evelatoare n acest sens sunt strile de toleran, induse la animalele nou#nscute, fa de celulele provenite de la organisme genetic diferite. Animalele in%ectate la natere cu celule alogenice, la v'rsta adult vor accepta grefele tisulare de la organismele donoare de celule.

Inducerea strii de toleran, prin contactul timpuriu cu antigenul, nainte de natere sau imediat dup aceea, se datoreaz faptului c, n stadiul embrionar i o perioad postnatal de durat variabil n funcie de specie, sistemul imunitar este imatur i n consecin, foarte sensibil la inducerea strii de toleran imunitar.

1I<

3tarea de toleran este specific fa de determinantul antigenic. ;olerana poate fi ncruciat, adic se manifest concomitent fa de mai multe antigene diferite, nrudite chimic, dac au cel puin un determinant antigenic comun. "imfocitele + imature sunt foarte sensibile la inducerea strii de toleran, datorit faptului c uneori, ele preiau informaia antigenic prin contactul direct cu epitopii specifici ai antigenului, dar dup maturare devin rezistente la acest proces. 3ensibilitatea limfocitelor ; fa de inducerea toleranei variaz n limite mai restr'nse n cursul ontogeniei lor. Mecanismele celulare i moleculare ale toleranei sunt ipotetice, dar probabil sunt dependente de momentul inducerii toleranei, n cursul ontogeniei lor. Dolerana indus n cursul vieii fetale este rezultatul contactului limfocitelor antigen#reactive, cu antigenul. $apacitatea de rspuns imun la stimulul antigenic specific este pierdut definitiv i ireversibil 6de e&emplu, tolerana oarecelui fa de "$@G dup inocularea in utero7. (n cursul vieii fetale, tolerana se instaleaz dup acelai mecanism al toleranei fa de componentele self, care este puin cunoscut. 3tarea de toleran a limfocitelor + mature este mai greu inductibil. @ecanismul toleranei este ipotetic. (n cursul vieii adulte, dup stimularea repetat cu un Ag timo#dependent, tolerana se instaleaz ca rezultat al epui rii limfocitelor B antigen1reactive . ;oate limfocitele + mature, capabile s reacioneze specific fa de un antigen, sunt stimulate i se difereniaz n celule productoare de Ac, astfel nc't o stimulare ulterioar cu acelai antigen rm'ne far rspuns. ;olerana imunitar poate fi mediat de celulele Ds. Acest mecanism a fost demonstrat e&perimental la oarece, dup in%ectarea unei cantiti mari de hematii de berbec. 3tarea de toleran este transferabil la organisme izogenice, prin intermediul limfocitelor splenice ;s. ;olerana poate fi indus de factori blocani din plasm, a cror natur nu este totdeauna cunoscut, dar uneori s#au identificat a fi anticorpi, care ndeplinesc funcia de specificitate, dar nu i funciile biologice efectoare. ,neori, starea de toleran indus de antigenele greu degradabile este aparent, deoarece se sintetizeaz anticorpi specifici fa de antigenul in%ectat. 3e formeaz comple&e imune cu antigenul care persist n organism i de aceea, n ser nu se detecteaz anticorpi liberi prin metodele obinuite. -a%tor %are %o#d ' o#eaz #d"%erea )tr de tolera#'

Inducerea strii de toleran este dependent de doza de antigen, de modul de administrare, de starea fizic a antigenului, de calea de administrare, de rata de catabolizare a antigenului, de v'rst, de factori genetici. -ozele inductoare ale rspunsului imun i ale toleranei variaz mult de la un organism la altul, dar adeseori, dozele foarte mici i foarte mari induc starea de toleran, iar dozele medii sunt inductoare ale rspunsului imun. -e e&emplu, albumina seric bovin, n doze mici 61 mgTBg corp,

1I:

de < ori pe sptm'n, timp de c'teva sptm'ni7 sau n doz mare 6199 mgTBg corp7 induce starea de toleran. Administrarea antigenelor fr ad%uvant favorizeaz instalarea toleranei imunitare. Administrarea intravenoas i chiar oral favorizeaz inducerea toleranei, iar in%ectarea subcutan, intradermic sau intramuscular stimuleaz rspusul imun. 3tarea fizic a antigenului influeneaz reactivitatea imunitar. Antigenele proteice n stare agregat sunt imunogene, iar forma monomeric 6solubil7 a acelorai antigene este, n funcie de doz, imunogen sau tolerogen. -ozele mari de antigene solubile favorizeaz tolerana, dar n asociaie cu ad%uvanii sunt imunogene. Pentru inducerea i meninerea strii de toleran este necesar persistena antigenului n organism. Antigenele care se catabolizeaz greu induc starea de toleran. $ea mai cunoscut stare de toleran e&perimental este cea indus de dozele mari de polizaharide 6antigene timo#independente, greu degradabile7. 2le produc paralizia limfocitelor +, dup legarea n e&ces de receptorii lor. $orespondentul clinic al acestei situaii e&perimentale este starea de toleran indus de microorganismele capsulate, care produc infecii pulmonare la persoanele v'rstnice. Pe fondul reactivitii imunitare sczute, esutul pulmonar este inundat cu polizaharide capsulare i sf'ritul este letal. -urata strii de toleran este variabil, n funcie de mecanismul celular care a mediat instalarea ei. ;olerana indus n timpul vieii embrionare, probabil ca rezultat al anulrii reactivitii clonei de limfocite specfifice, este ireversibil. ;olerana indus dup maturarea limfocitelor este o stare reversibil i revenirea la starea imunoreactiv normal este dependent de timpul necesar regenerrii limfocitelor mature imunoreactive. -urata toleranei indus prin fenomenul )inundaiei* antigenice este dependent de rata catabolizrii Ag. Tolera#'a +t"l"

Pentru organismul matern, ftul este o alogref, deoarece %umtate din zestrea sa genetic este de origine patern. -in punct de vedere imunologic, organismul matern nu este tolerant fa de antigenele fetale. $a dovad, grefa de esut fetal este respins. Pe toat durata sarcinii, organismul matern i pstreaz reactivitatea imunitar normal, dar prin intermediul placentei, ftul dispune de un sistem eficient de protecie. Placenta, ane& de origine embrionar, este o barier care neutralizeaz efectorii imunitari ai organismului matern. ;rofoblastul este nveliul celular al placentei i al al membranelor e&traembrionare ce acoper ftul i reprezint esutul fetal de interfa cu s'ngele matern i cu esutul endometrului. "a om, stratul trofoblastic e&tern al vilozitilor corionului placentar este

1IC

sinciiotrofoblastul, un strat celular continuu far %onciuni intercelulare. Prin sinciiotrofoblast, ftul se hrnete, respir i supravieuiete. Pe faa intern 6spre embrion7, placenta nu e&prim antigenele ma%ore de histompatibilitate, iar pe faa e&tern predomin antigenele minore. @oleculele $@O de origine fetal au o densitate mic. 8rganismul matern recunoate antigenele fetale ale placentei i reacioneaz prin mecanisme imunitare. Aa se e&plic faptul c n circulaia matern se detecteaz anticorpi antifetali la circa 1CM dintre gravide. -iferenele antigenice dintre mam i ft par a fi chiar benefice pentru dezvoltarea ftului. Aa se e&plic vigoarea hibrizilor, n contrast cu dificultile de propagare a liniilor inbred. .reutatea placentei i a embrionului este mai mare la femelele alogenice, fa de cele singenice n raport cu ftul lor. Pe fondul unei reactiviti imunitare normale a organismului matern fa de stimulii antigenici, la nivelul placentei, ca zon de interfa feto#matern, se produce o modelare a reactivitii imunitare, care favorizeaz tolerana fa de antigenele fetale. ;olerana fa de antigenele fetale se realizeaz prin urmtoarele mecanisme! # (n placent se secret i se concentreaz substane cu aciune imunosupresoare strict localizat, care inhib activarea limfocitelor ;c i 1LN # placenta secret factori care neutralizeaz local Ac antiplacent i i transform n anticorpi blocani, care la r'ndul lor au efect protectorN # (n placent s#au detectat limfocite cu efect imunosupresor 6;s7, iar numrul lor crete semnificativ n a II#a %umtate a sarciniiN # placenta are o rezisten deosebit. $elulele sale rezist efectului litic al celulelor ;c i1LN # placenta are o capacitate proprie de regenerare. 2ventualele sale leziuni provocate de efectorii I@$ i I@O sunt compensate prin proliferarea celulelor rezistente. Placenta supus atacului efectorilor imunitari este mai groas dec't n mod obinuitN # placenta are rolul de a minimaliza recunoaterea antigenelor fetale de ctre efectorii imunitari de origine matern, av'nd rolul unui *burete* imunitar. 3inciiotrofoblastul uman, dar i al altor specii, prezint receptori pentru regiunea Fc \, prin intermediul crora Ig. matern este transportat selectiv n circulaia fetal i confer imunitate pasiv tranzitorie postnatal ntr#un mediu ostil din punct de vedere antigenic. ;ransferul ma&im are loc n sptm'nile 59#55 de sarcin. $oncomitent pot fi transferai anticorpi materni specifici fa de antigenele fetale 6 n special anticorpi anti#O"A, care s#au sintetizat ntr#o sarcin anterioar7 i care ar avea efect defavorabil asupra dezvoltrii fetale, dac ar penetra bariera placentar. 2&ist mecanisme care prote%eaz ftul de Ig. matern. Alo#anticorpii materni specifici anti#O"A fetale sunt legai pe celulele netrofoblastice 6fibroblaste, endoteliale etc.7 din mezenchimul intravilar al esutului placentar i nu a%ung n circulaia fetal. Ig. matern cu potenial lezional 6Ig. anti - sau anti#plachetari7, care scap efectului neutralizant al placentei nt'lnesc inte antigenice foarte e&tinse 6pe eritrocite, pe plachete7N # sub aspect imunitar, placenta este )o zon neutr*, datorit nivelului sczut al moleculelor $@ON -ac toate aceste bariere de aprare sunt depite, se produce avortul imunitar.

1I?

SURSE DE GAMAGLO-ULINE OMOGENE

@oleculele de anticorpi ale unui ser imun sunt foarte heterogene din punctul de vedere al specificitii lor de combinare cu epitopii antigenici inductori, deoarece, at't antigenele moleculare, dar n special cele corpusculare 6virusuri, celule7, prezint o mare diversitate de epitopi. $hiar i antigenele moleculare cele mai simple sunt mozaicuri de epitopi. 3pecificitatea de combinare a moleculelor de anticorpi corespunde epitopilor fa de care s#au sintetizat. -iversitatea uria a specificitii de combinare a anticorpilor 6evaluat la 19 D#19J7 genereaz o heterogenitate biochimic de acelai nivel, materializat n variaia secvenei de aminoacizi, ceea ce a constituit un obstacol ma%or n calea studiului lor prin metode analitice, dei anticorpii se gsesc totdeauna n s'nge, cu e&cepia cazurilor patologice de agamaglobulinemie. Analiza biochimic a imunoglobulinelor a fost condiionat de e&istena unei surse omogene de molecule de anticorpi, cu o secven identic a aminoacizilor. $ondiia identitii secvenei de aminoacizi este ndeplinit de anticorpii care au aceiai specificitate de legare, nu fa de un antigen, ci fa de un singur epitop. / 'teine &e 4ie#'4

3ursa natural de molecule de imunoglobulin, omogene, identice din punct de vedere biochimic 6monoclonale7, este mielomul multiplu 6plasmocitomul7, o afeciune tumoral malign, iniiat n mduva osoas i rezultat prin proliferarea unui plasmablast. Plasmocitomul produce molecule de imunoglobuline identice din punct de vedere biochimic i al sarcinii electrice, denumite proteine de mielom, deoarece toate celulele tumorii sunt descendente ale unei singure celule productoare de anticorpi. @oleculele secretate de o tumor de mielom se numesc proteine M 6Mielom7 sau paraproteine i pot s reprezinte p'n la JCM din totalul gamaglobulinelor plasmatice. ;umorile de mielom apar spontan cu o frecven mic la om, c'ine, cal, obolan, oarece sau se induc e&perimental la oarecii liniilor inbred 1/+ i +A"+Tc. ;umora este transplantabil n serie. ,neori, proteinele @ au aceiai secven de aminoacizi ca i imunoglobulinele normale, dar adeseori, sinteza catenelor patologice este incomplet! lipsesc diferite secvene de aminoacizi, de diferite lungimi. 0areori, proteinele de mielom i pstreaz chiar proprietatea de a lega specific determinani antigenici cunoscui! de e&emplu, CM din proteinele @ ale unei linii inbred de oarece, leag determinani antigenici ai suprafeei celulelor bacteriene enterice, ceea ce sugereaz c tumora i are originea n descendenii limfocitelor +, care prolifereaz ca rspuns la stimularea specific cu antigene ale microbiotei enterice. ;umorile de mielom, de cele mai multe ori, secret molecule incomplete sau fragmente de molecule imunoglobulinice.

1II

(n celulele tumorilor de mielom, rata sintezei catenelor O i " este dezechilibrat. -e e&emplu, mielomul Bence1Aones, sintetizeaz catenele " n mare e&ces. Proteinele +ence#Hones sunt dimeri de lanuri " 6B sau `7. ,na din cele dou catene " are rolul catenei O i particip la formarea situsului de legare. @olecula patologic are activitate de anticorp fa de unele componente tisulare sau fa de antigene mici. Mielomul lanurilor grele \ sau U, ,sintetizeaz numai catenele O ale izotipurilor Q iar mielomul macroglobulinemiei Faldenstrom sintetizeaz molecule de Ig@. @a%oritatea mieloamelor produc proteine +ence#Hones. (n laboratorul clinic, diagnosticul de mielom se pune dup detectarea n ser, prin electroforez, a unei cantiti mari de molecule ale unui izotip de imunoglobulin 6circa C9 mgTml7. Proteinele de mielom precipit la C9#?9o, la pO :#?, se redizolv prin nclzire la D9#J9o i reprecipit prin rcire. "a pacienii cu mielom, n special la cei cu macroglobulinemie Faldenstrom, v'scozitatea s'ngelui crete mult, datorit cantitii e&cesive de proteine produse de mielom. 2liminarea proteinelor patologice se face prin procedeul plasmafere ei. Plasmafereza este tehnica de recoltare a unor volume mari de s'nge, urmat de reintroducerea n organism, a celulelor sanguine suspendate ntr#un nlocuitor de plasm. S* $e a ti!i"ia#e &e anti"' 2i 4'n'"#'na#i. Te(n'#'gia (i1 i&'4*#*i

@etoda clasic de obinere a anticorpilor necesari studiilor clinice i de diagnostic, const n stimularea repetat, prin in%ectarea antigenului ntr#un organism cu reactivitate imunitar optim. $'nd titrul anticorpilor specifici este ma&im, animalul este s'ngerat i se obine serul imun 6antiserul7, care este folosit n stare nativ sau este utilizat pentru purificarea anticorpilor. @etoda are c'teva dezavanta%e! # cantitatea i calitatea anticorpilor fa de un antigen variaz de la un organism la altul i chiar ntre s'ngerrile succesive ale aceluiai animalN # serul imun este un amestec foarte heterogen de molecule de anticorpi, chiar i n cazul n care imunizarea se face cu un antigen cu grad nalt de puritateN # oric't de simplu ca structur molecular, un antigen are mai muli epitopi care stimuleaz mai multe clone de limfocite, ce produc anticorpi cu specificiti i afiniti diferiteN # antigenele nalt purificate conin impuriti antigenice care induc sinteza anticorpilor specifici n cantiti disproporionat de mariN # chiar dup purificare A proces costisitor A antiserurile conin anticorpi cu afiniti diferite i cu reactivitate ncruciat.

1ID

-in aceste cauze, toate serurile imune sunt amestecuri de anticorpi policlonali, n cantiti variabile de la un organism la altul. 8binerea unor cantiti mari de anticorpi cu specificitate de legare fa de un epitop unic, prin metoda clasic este imposibil. ;ehnologia modern de obinere a anticorpilor omogeni, denumit hibridoma 6hibrid R mieloma7 a fost propus de Ldhler i @ilstein 61JIC7, se bazeaz pe urmtoarele principii metodologice i teoretice! 17 Antigenul purificat se in%ecteaz animalelor de e&perien. 57 "a momentul adecvat, din splin sau din ganglionii limfatici, se separ limfocitele. Fiecare limfocit i plasmocitele derivate sintetizeaz molecule omogene de anticorpi, cu specificitate unic de combinare pentru un singur epitop, denumii anticorpi monoclonali 6*M;7. <7 "imfocitele + triesc puin n afara organismului, iar plasmocitele care sintetizeaz cea mai mare cantitate de anticorpi, nu supravieuiesc in vitro i de aceea cultivarea sau clonarea lor nu este posibil. :7 $elulele de mielom sunt nemuritoare, datorit capacitii lor de a se menine un timp nelimitat n cultur. Fuziunea lor cu limfocitele + in vitro, le confer celor din urm proprietatea de )nemurire*, rezult'nd o celul hibrid6hibridom7, care sintetizeaz i secret anticorpi monoclonali 6A@$7. A@$ sunt considerai ca varianta in vitro a proteinelor de mielom, pentru c n ambele cazuri, o clon de limfocite prolifereaz i secret anticorpi cu o anumit specificitate C7 Oibridomul productor de anticorpi motenete caracteristici at't de la limfocit A adic secret anticorpi cu specificitate fa de un antigen, c't i de la celula de mielom, adic este nemuritor. ?7 $elulele hibridoma pot fi clonate individual i fiecare clon produce anticorpi specifici fa de un singur determinant antigenic. 2le pot fi meninute indefinit prin pasa%e in vivo sau prin cultivare in vitro. (ig.B7. +iotehnologia hibridomului de producere a anticorpilor monoclonali se bazeaz pe fuziunea limfocitului, cu celula tumoral de mielom de oarece. Antigenele membranare specifice ale celor dou celule, se distribuie n mozaic pe suprafaa celulei fuzionate heterocarion. Etapele o,' #er 4 ,r do!"l"

@etodologia obinerii unei linii celulare hibride, nemuritoare, productoare de A@$, parcurge mai multe etape. 1. Lbinerea celulelor de mielom. +aza tehnologiei hibridomului a fost obinerea unei linii celulare mutante de mielom, care nu secret anticorpi i este deficient pentru hipo&antin#guanozin# fosfo#ribozil#transferaz 6O.P0;7. @ielomul 6plasmocitomul7 este rezultatul diviziunilor necontrolate ale unui singur plasmablast sau ale unui precursor al su din linia limfocitar +. Proliferarea necontrolat este nsoit de sinteza

1IJ

unor cantiti mari de molecule omogene de imunoglobulin, cu proprieti biochimice uniforme. @oleculele sintetizate de tumorile de mielom se deosebesc de imunoglobulinele normale, prin aceea c nu prezint specificitate de legare cu antigenul. ;umorile de mielom apar spontan la multe mamifere, iar la om, 1M din tumori sunt mieloame. ;umorile de mielom se induc e&perimental la mai multe linii de oarece 6+A"+Tc i 1/+7, dup in%ectarea intraperitoneal a uleiurilor minerale, sau dup implantarea materialelor plastice, care produc o reacie inflamatorie cronic. ;umorile apar dup 159#1<9 de zile i se pot menine prin pasa%e seriate la oareci din aceiai linie inbred sau prin cultivare in vitro i produc cantiti suficiente de imunoglobuline pentru analiza biochimic. 1u s#au obinut mieloame care s sintetizeze anticorpi cu specificitate de legare fa de un antigen. Oibridoamele se obin din linii speciale de mielom, care au dou particulariti mutaionale! # nu sintetizeaz propria molecul de imunoglobulin, astfel c celula hibrid va produce e&clusiv molecule de imunoglobulin caracteristice limfocitului + normalN # sunt deficiente pentru sinteza enzimei O.P0;, necesar sintezei acizilor nucleici. # Pentru hibridare sunt disponibile linii celulare de mielom de oarece, de obolan, de om, dar cea mai folosit este linia P<#S?<#AgD, izolat de la linia +A"+Tc, cu urmtoarele caracteristici! A este O.P0;#N # este tumorigen pentru oareceN # are o frecven relativ nalt 61T19C#19?7 de fuziune cu limfocitele de oareceN # nu sintetizeaz imunoglobulina proprie i nu represeaz genele pentru sinteza imunoglobulinei n hibridomN # are o eficien nalt de clonare in vitro. -eoarece sunt deficiente pentru sinteza enzimei O.P0;, celulele sale nu deto&ific efectul aminopterinei, care se adaug n mediul de cretere. Aminopterina, un antagonist al reductazei acidului folic, blocheaz calea sintezei A-1 prin inhibiia sintezei purinelor 6A, .7 i a timidinei. In mediul cu aminopterin, celulele cu O.P0;# nu supravieuiesc. 9. Imuni area. 8binerea unei populaii mari de limfocite +, prin fenomenul e&pansiunii clonale, anga%ate n sinteza anticorpilor specifici fa de un anumit epitop, se realizeaz prin imunizare. Antigenul stimuleaz mai multe clone de limfocite. Fiecare clon de limfocite activate, sintetizeaz anticorpi specifici fa de unul din epitopii antigenului. Procedura de imunizare 6cantitatea de antigen, tipul de ad%uvant, calea de administrare7 este selectat empiric. $ea mai bun surs de limfocite rm'ne splina de oarece i de obolan, dar n special oarecele +A"+Tc, pentru c mielomul are aceiai origine i prin hibridare se evit incompatibilitatea $@O. Oibridoamele de obolan, obinute prin fuziunea limfocitelor splenice cu celule de mielom, sunt mai stabile i anticorpii pe care i sintetizeaz fi&eaz complementul.

1D9

$antitatea de antigen necesar pentru imunizare depinde de imunogenitatea acestuia. Antigenele celulare bacteriene sau ale celulei eucariote sunt foarte imunogene. Antigenele solubile 6polipeptide, glucide, hormoni7 sunt slab antigenice. Imunogenitatea lor crete dup cuplarea cu hemocianin de ,imulus 6L"O7 sau cu albumina. $ea mai bun imunizare se obine prin in%ectare intravenoas sau intraperitoneal repetat, timp de c'teva sptm'ni sau luni, a antigenului slab imunogen. 3plina se recolteaz nainte de atingerea titrului ma&im al anticorpilor serici. +lastele fuzioneaz mai uor dec't celulele n repaus. 8 alternativ a imunizrii este stimularea limfocitelor in vitro, prin incubarea n prezena antigenului. :. (u iunea se realizeaz n scopul )imortalizrii* celulelor productoare de anticorpi i este esena biotehnologiei hibridomului. 3copul )imortalizrii*este pstrarea capacitii limfocitelor individuale de a secreta un singur tip de A@$, prin creterea nelimitat n timp, fr senescen, in vivo sau in vitro, ca o consecin a transformrii, indus cu celule de mielom. "imfocitele sau imortalizat pe trei ci! # prin fuziune cu celule tumorale de mielom # prin infecie cu un virus transformant A-1 # prin transfecie cu A-1 transformant din celulele maligne sau cu A-1 al unui oncodnavirus. $ea mai utilizat metod de )imortalizare* este aceea a fuziunii cu o celul de mielom. Fuziunea limfocitelor viabile din splin, obinute prin dezagregare mecanic, cu celulele de mielom O.P0;# se realizeaz prin amestecul lor n proporie de 5#C celule spleniceTo celul de mielom. Procesul fuziunii este stimulat pe mai multe ci, dar cel mai adesea se folosete P2. cu gr. mol. de :999 -. Amestecul de celule se menine < minute n 9,59#9,C9 ml P2. :9M, la <I 9, pO I,C# D,9. Frecvena fuziunii crete sub aciunea impulsurilor electrice scurte, de mare intensitate. 1umrul i varietatea hibridoamelor obinute este mare, ceea ce impune selecia celor productoare de anticorpi cu specificitatea dorit. 0. "elecia celulelor de hibridom. Amestecul de fuziune conine celule splenice i celule de mielom nefuzionate, celule splenice fuzionate ntre ele, celule de mielom fuzionate ntre ele i celule hibridom, rezultate prin fuziunea splenocitelor cu celule de mielom. 3elecia are ca scop, separarea celulelor de hibridom i eliminarea din amestec, a celorlalte tipuri celulare, nefuzionate sau fuzionate neutilizabile. In acest scop, amestecul de celule se cultiv pe mediul selectiv 8*D 6hipo&antin#aminopterin#timidin7, n care splenocitele nefuzionate i fuzionaii splenocit & splenocit mor n 1#5 sptm'ni, copleite fiind numeric de celulele de hibridom, care se divid la fiecare 1I#5: de ore. @ediul selectiv OA; permite supravieuirea numai a fu ionailor mielom % splenocit i este inhibitor pentru celulele de mielom, ca i pentru fuzionaii mielom & mielom. Aciunea sa selectiv se bazeaz pe urmtoarele condiii e&perimentale!

1D1

a7 Aminopterina din mediul OA; blocheaz sinteza purinelor 6A, .7 pe calea inozin# monofosfatului i astfel blocheaz sinteza acizilor nucleici. In acest mediu, celulele O.P0; # devin dependente de surse e&terne de purine 6A, .7 i de timidin. Oipo&antina din mediul OA; poate fi convertit la inozin#monofosfat, de ctre enzima O.P0; i se formeaz adenozin#monofosfat i guanozin#monofosfat. ;imidina poate fi fosforilat la timidin#monofosfat i timidin#trifosfat, de ctre enzima ;L. Ambele enzime 6O.P0; i ;L7 se gsesc n splenocitele normale. b7 $elulele de mielom sunt O.P0;# i pe mediul selectiv OA; nu supravieuiesc nici celulele ca atare, nici fuzionaii mielom#mielom. Pe acest mediu supravieuiesc i se divid indefinit, celulele de hibridom, deoarece sunt O.P0;R 6codificat de genomul splenocitelor7 i sunt )nemuritoare*, calitate conferit de celulele de mielom. C. ;lonarea. $lona este o populaie de celule identice, genetic stabile, derivate din diviziunea unei singure celule. $lonarea se face prin diseminarea suspensiei celulare diluate, pe medii nutritive agarizate. Fiecare celul de hibridom, prin diviziuni succesive, produce o colonie, adic o clon celular. 8peraia de clonare se repet pentru a garanta o descenden omogen. -intre sutele de hibridoame clonate, este necesar selectarea celor cu capacitate de sintez a anticorpilor specifici fa de antigenul cu care s#a fcut imunizarea. Fig.J5. Ilustrarea schematic a etapelor producerii anticorpilor monoclonali 6A@$7. Animalele, de obicei oareci, sunt imunizate cu un antigen 6de e&emplu, un microorganism care conine : antigene de suprafa # a, b, c, d7. Fiecare antigen conine un numr de epitopi, de e&emplu molecula b conine epitopii b, b>, b*. 3erul animalelor imunizate este policlonal i conine anticorpi A, +, +>, +*, $, -. Prima treapt n producerea A@$ este obinerea suspensiilor de celule + i celule de mielom. In etapa urmtoare, cele dou populaii de celule 64 i $7 sunt puse n amestec, n prezena P2., ca agent de fuziune. 3uspensia se repartizeaz n godeurile unei plci pentru cultivarea celulelor, la o diluie adecvat astfel nc't, fiecare godeu s nu conin mai mult dec't o celul hibrid. $elulele se cultiv n mediu OA; pentru a inhiba creterea celulelor de mieloma nefuzionate. $elulele splenice nefuzionate nu se divid i mor dup c'teva zile. In procesul de selecie mor i fuzionaii s 1 s i m 1 m. 3upravieuiesc i prolifereaz fuzionaii am, bm, bSm, dm i %m. $lonarea se repet. Oibridoamele se cultiv i se determin specificitatea anticorpilor sintetizai. $ele care sintetizeaz anticorpi cu specificitatea necesar se propag n recipiente mai mari n care se obin 1#19 UlTml. $elulele pot fi in%ectate n cavitatea peritoneal de oarece, unde se multiplic sub forma ascitei i produc 1 mgTml anticorpi specifici. Oibridoamele productoare de anticorpi cu specificitatea dorit, se cultiv in vitro, n culturi cu perfuzie continu cu mediu proaspt sau n bioreactoare cu capacitate mare. $ea mai simpl tehnic este a cultivrii in vivo i const n inocularea intraperitoneal a circa 5 & 19? celule hibridoma, la organisme ale aceleai linii genetice 6pentru evitarea fenomenului de incompatibilitate $@O7. Oibridomul se dezvolt intraabdominal i lichidul de ascit care o nsoete, conine anticorpi n proporie de C9M din totalul proteinelor sale.

1D5

0andamentul producerii A@$ in vivo este de 199#1999 de ori mai mare dec't in vitro. Anticorpii din lichidul ascitic se purific prin fracionare cu sulfat de amoniu sau prin metoda cromatografiei cu schimb de ioni. Ava#ta7ele , ote4#olo$ e 4 ,r do!"l"

Producerea A@$ prin tehnologia hibridomului are un avanta% net fa de metoda convenional a obinerii serului imun, deoarece se pot obine anticorpi specifici produi de c'te un hibridom, pentru fiecare epitop al unui antigen natural. $lonarea individual a fiecrui hibridom, creeaz condiii ca fiecare clon celular s secrete anticorpi cu specificitate unic fa de un singur epitop al unui antigen. $elulele de hibridom prolifereaz rapid, ceea ce scurteaz timpul necesar obinerii A@$. Oibridoamele produc cantiti foarte mari de anticorpi, ce depesc de c'teva ori concentraia anticorpilor din serul animalelor imunizate. $lonele de hibridom se menin indefinit prin cultivare in vitro sau in vivo. Oibridomul ofer posibilitatea obinerii *M; marcai, prin adugarea precursorilor marcai radioactiv 6marcare intern7. Anticorpii marcai in situ 6 n timpul sintezei7 ofer un avanta% net n raport cu anticorpii marcai dup purificare 6marcare e&tern7. @arcarea e&tern cu I 15C implic purificarea imunoglobulinelor din antiserul convenional, dar presupune modificarea chimic i denaturarea parial, cu pierderea proporional a specificitii de legare. Pentru marcarea intern se folosesc elemente radioactive cu perioada de n%umtire mai lung dec't a I15C ! $1:, 3<C, O<. @arca%ul radioactiv intern este net superior celui cu pero&idaz i feritin, utilizat n tehnicile convenionale. ;ehnologia hibridomului este un model e&perimental care poate fi e&tins i la alte categorii de celule care sintetizeaz substane utile 6interferon, insulin7. 8binerea unor hibrizi dintre celula de mielom de oarece i un limfocit normal, de la aceiai specie, n scopul producerii A@$, a introdus un concept nou n biologia molecular # conceptul imortali rii funciilor specifice difereniate. Apl %a' pra%t %e ale AMC

A@$ reprezint un reactiv imunochimic bine definit i de aceea, rezultatele obinute prin utilizarea lor sunt reproductibile. A@$ se folosesc ca reactivi de mare specificitate n cercetare, n diagnosticul clinic, n farmacologie pentru profila%ia i terapia unor infecii la om i animale, n tehnicile de biochimie analitic pentru purificarea unor molecule. (n domeniul cercetrii imunocitochimice[, A@$ sunt reactivi cu nalt specificitate, utilizai pentru identificarea unor proteine care se gsesc n cantiti foarte mici. -e e&emplu, A@$ marcai cu fluorescein permit evidenierea moleculelor membranare, inaccesibile investigaiei cu metodele

1D<

clasice. A@$ au fost marBeri eficieni pentru identificarea diferitelor subpopulaii de limfocite ; i +, a antigenelor membranare ale celulelor seriei mieloide i monocitare. 3istemul $- 6 cluster differentiation7 este definit n ntregime pe baza utilizrii A@$ i cuprinde acum peste 599 de marBeri de suprafa. A@$ cu specificitate $- se folosesc pentru a detecta apariia sau absena populaiilor celulare n timpul stimulrii antigenice. Fig. J< 3tructura fluoresceinei. -atorit specificitii lor de legare, A@$ se folosesc pentru a evidenia diferenele antigenice minore ntre diferite variante moleculare. Astfel sau identificat variaiile compoziiei n aminoacizi ale spiculelor glicoproteice, consecutive driftului antigenic la virusul influenza A. A@$ se folosesc pentru identificarea moleculelor neurotransmitoare, a receptorilor sinaptici i a enzimelor de biosintez. 3#au obinut A@$ fa de receptorul de acetilcolin, dar dificultile sunt mari pentru c neurotransmitorii sunt antigene slabe. (n diagnosticul serologic, serurile imune obinute prin metoda clasic au avut adeseori inconvenientul ma%or al lipsei reproductibilitii rezultatelor. A@$ se folosesc ca reactivi de mare specificitate pentru diagnosticul rabiei pe seciunile de esut nervos al animalelor infectate, Anticorpul este marcat cu o molecul generatoare de semnal 6de e&emplu, un fluorocrom, o enzim productoare de culoare prin aciunea sa asupra substratului specific, ori o particul metalic7. 3ensibilitatea metodei, adic puterea semnalului poate fi mrit prin creterea raportului dintre molecula indicator 6anticorpul marcat7 i antigen. Imunocitochimia necesit producerea anticorpilor specifici i tratamentul adecvat al esuturilor, adic fi&area i histoprepararea pentru a favoriza interaciunea optim ntre reactiv i molecula int a hepatitelor virale +, $, -, a infeciei cu OIG 6prin determinarea prezenei antigenelor n ser7 i a unor infecii bacteriene. Pentru diagnostic se folosesc anticorpi marcai cu fluorescein sau metodele 2"I3A sau 0IA. A@$ se folosesc pentru diagnosticul neopla iilor, pe baza evidenierii antigenelor specific# tumorale. (n acest scop se utilizeaz A@$ marcai cu izotopi radioactivi, cu specificitate fa de $2A, AFP etc. A@$ se folosesc pentru detectarea hormonilor polipeptidici! ;3O, F3O, O$.. Oormonii sunt molecule cu un numr mic de epitopi. 3ubunitile Q ale diferiilor hormoni sunt foarte asemntoare, dar difer n special prin catenele P. 2&ist A@$ specifici pentru ambele subuniti i A@$ care recunosc epitopii conformaionali ai moleculei native. A@$ se folosesc n farmacologie. In scop profilactic se fac imunizri pasive fa de infeciile bacteriene care nu beneficiaz de preparate vaccinale i sunt rezistente la antibiotice! Pseudomonas, ;lostridium. (n scop terapeutic, A@$ se folosesc pentru tratamentul rabiei, pentru neutralizarea endoto&inelor 6"P37 produse de infeciile cu bacterii .ram negative, consecutive arsurilor. 3epticemiile sunt cauzate de o larg varietate de bacterii .ram negative, toate av'nd n comun lipidul A n structura chimic a "P3. Pentru tratamentul ma%oritii infeciilor bacteriene se utilizeaz antibiotice, la un pre de cost inferior n raport cu A@$.

1D:

A@$ se folosesc n controlul fertilitii! A@$ anti#O$. i anti#zona pelucida sunt folosii pentru imunizarea pasiv a femeilor fertile. 3perana utilizrii A@$ n tratamentul tumorilor s#a nruit. ,na din cauze este c ma%oritatea tumorilor umane i au originea n celulele epiteliale ale colonului, s'nului, plm'nului i prostatei, iar oncogenele activate codific proteine intracelulare, inaccesibile terapiei cu A@$. Frecvena acestor tumori nu crete la persoanele imunosupresate, ceea ce este un argument n favoarea codificrii antigenelor intracelulare, inaccesibile sistemului imunitar. $himioterapia ofer mult mai multe anse de succes, la un pre de cost inferior. (n sistemul hematopoietic i imunitar, A@$ se folosesc pentru a distruge toate populaiile celulare, cu e&cepia celulelor stem, cu scopul eliminrii celulelor malignizate i a precursorilor ei care poart oncogena activat. A@$ se folosesc pentru neutrali area nivelelor to&ice ale unor medicamente 6digo&ina7. A@$ se folosesc ca ageni imunosupresori. 0eceptorilor de gref li se administreaz A@$ specifici fa de comple&ul antigenic membranar $-<, n cazurile n care imunosupresia chimic 6cu ciclosporin7 nu reuete. (n maladiile autoimune, A@$ se administreaz pentru a realiza o imunosupresie parial, care s permit aprarea fa de infeciile cu ageni oportuniti. A@$ se folosesc pentru producerea imunoto%inelor 6con%ugate A@$#medicamente7. @edicamentele utilizate sunt ageni citoto&ici, care, prin intermediul situsului de legare a A@$, sunt destinate s se lege specific de celulele int6de e&emplu, celulele maligne7. In acest scop sunt necesari A@$ cu o afinitate nalt a specificitii de legare fa de antigene specific tumorale. A@$ se cupleaz cu to&ine 6difteric, ricin, abrin7, cu medicamente citostatice sau cu radionuclizi. A@$ se folosesc n tehnicile de biochimie analitic, n scopul purificrii proteinelor, sub forma coloanelor de afinitate imunoabsorbante. A@$ sunt imobilizai pe suporturi n coloane solide 6imunosorbeni7, prin care este trecut amestecul de proteine. In coloan sunt reinute specific, moleculele care se leag cu A@$. Astfel se purific proteine care se gsesc n amestec, n concentraii foarte mici 6IF17.

[Imunocitochimia este o tehnic de laborator care permite identificarea vizual a moleculelor int n esuturi i celule, prin interaciunea specific a anticorpilor marcai, cu antigenul. MECANISME DE A/RARE ANTIINFEC%IOAS

3istemul imunitar a evoluat i s#a comple&at structural i funcional, n condiiile presiunii selective permanente pe care o e&ercit agenii infecioi, ce tind s invadeze, s colonizeze i s se multiplice n esuturi. 3tructura sistemului imunitar este o reflectare direct a interaciunilor sale cu diversitatea agenilor infecioi care#l stimuleaz. $ele dou fore opozante s#au modelat reciproc,

1DC

ntr#un conflict constant. .azdele care nu neutralizeaz agentul infecios sunt sortite morii, iar cele care supravieuiesc sunt mai bine adaptate s reziste infeciilor ulterioare. Problema heterogenitii antigenice a virusurilor i bacteriilor patogene este important nu numai din punct de vedere teoretic, ci este esenial pentru aspectul practic al vaccinrii, deoarece e&ist riscul stimulrii rspunsului imun fr eficien protectoare. $onsecina stimulrii unui rspuns imun ineficient poate fi agravarea maladiei infecioase sau chiar activarea mecanismelor patogenitii autoimune. 2valuarea imunogenitii moleculelor structurilor suprafeei virusurilor i bacteriilor este dificil, deoarece o molecul n soluie poate avea o alt configuraie a epitopilor dec't n ansamblul structural nativ. -iferena deriv din raporturile sale spaiale cu moleculele vecine, pe suprafaa agentului infecios. -in aceast cauz, rspunsul imun al organismului, la stimularea cu un agent patogen, rm'ne un domeniu de studiu practic nelimitat. 8 alt complicaie este consecina faptului c specificitatea antigenic a unor molecule este, uneori, variabil de la o tulpin la alta, at't la virusuri c't i la bacterii. 0spunsul imun trebuie s contracareze nu numai diversitatea antigenelor la care este e&pus, ci trebuie s gseasc soluia de rspuns, pentru variaia biochimic a unei structuri, la diferite tulpini de microorganisme. RS/UNSUL IMUN S/ECIFIC ANTIINFEC%IOS 0spunsul imun antibacterian i antiviral are at't o component humoral c't i una celular. Prevalena unuia sau altuia dintre cele dou compartimente este diferit n funcie de natura agentului infecios. -e cele mai multe ori, predomin rspunsul imun mediat humoral, iar n cazuri mai rare 6de e&emplu, infecia cu M. tuberculosis sau cu M. leprae7 este preponderent rspunsul imun mediat celular. 0spunsul imun fa de diferite antigene ale agenilor patogeni are grade variate de protecie antiinfecioas, n funcie de natura agentului, de gradul su de virulen i de natura rspunsului imun pe care#l iniiaz. ,neori, rspunsul imun antiinfecios este puin benefic pentru gazd sau este chiar detrimental, din diferite cauze! # rspunsul imun este orientat fa de componente moleculare neeseniale ale agentului infecios. 3timularea antigenic activeaz un rspuns imun ineficient. Anticorpii nu au efect neutralizant al infeciozitii, pentru c structurile de care se leag specific nu constituie situsuri critice ale agentului patogen 6de e&emplu, anticorpii antiflagelari, care in vitro determin aglutinarea, in vivo au o eficien mai sczut, limitat la imobilizarea celulelor bacteriene7N # rspunsul imun poate produce leziuni mai puternice i mai e&tinse dec't nsui agentul infecios. Infecia propriu#zis produce leziuni minime, dar activarea imunitii mediate celular amplific leziunile tisulare i grbete evoluia procesului infecios 6de e&emplu, leziunile consecutive infeciei cu virusul corio#meningitei limfocitare la oarece i liza hepatocitelor infectate cu virusul hepatiei + umane7. $omponentele structurale antigenice ale unui agent infecios, care stimuleaz un rspuns imun protector se numesc situsuri critice sau structuri imunodominante.

1D?

,n rspuns imun eficient 6protector7 trebuie s aib ca rezultat final, lezarea structurii peretelui bacterian, fungic sau a nveliului viral, prin aciunea combinat a anticorpilor i a proteinelor complementului. Str"%t"ra a#t $e# % a %el"le ,a%ter e#e @ulte molecule bacteriene moduleaz activitatea sistemului imunitar, av'nd ori un efect stimulator 6ad%uvant7, ori diminu reactivitatea imunitar. 2le modific rspunsul celulelor imunitare competente, prin mecanisme de semnalizare. -e aceea se numesc molecule imunomodulatoare. 2fectele lor realizeaz un echilibru comple& ntre mecanismele de recunoatere i neutralizare a antigenelor i virulena bacterian. Imunomodulatorii pot avea efecte asupra limfocitelor ;, + i asupra macrofagelor, similare cu cele produse de citochine. Imunomodulatorii cu activitate mitogenic, induc activarea policlonal a limfocitelor ; i +, care se deosebete de activarea specific. 0ezultatul este sinteza anticorpilor cu specificiti multiple, dintre care, o fracie sunt specifici fa de agentul infecios. -ei fr specificitate, sinteza rapid a anticorpilor poate fi suficient pentru stoparea infeciei. @oleculele imunomodulatoare modific nu numai reactivitatea imunitar, ci i mobilitatea celulelor, n special a fagocitelor 6de e&emplu, pot inhiba migrarea macrofagelor din focarul inflamator7. -ac moleculele imunomodulatoare persist n esuturi, stimuleaz cronic sistemul imunitar, cu efecte patologice autoimune, cea mai cunoscut fiind artrita de ad%uvant. @ulte molecule imunomodulatoare de origine bacterian au efecte mai generale, care se e&tind asupra altor sisteme! ele produc febr, influeneaz sistemul de coagulare sanguin, concentraia ionilor, a Fe etc. @oleculele bacteriene cu rol imunomodulator sunt localizate pe suprafaa celulei. 2le sunt polimeri ai nveliului, dar i molecule e&cretate, cu efect to&ic. Pe de alt parte, eficiena rspunsului imun antibacterian, depinde de raportul dintre reactivitatea sistemului imunitar i mecanismele de autoprotecie ale bacteriei, menite s devieze rspunsul imun. -in punct de vedere antigenic, bacteriile interacioneaz cu gazda prin modaliti diverse. "a o e&tremitate sunt cele lipsite de atributul invazivitii, care produc cantiti mici de to&ine, iar la cealalt, sunt bacteriile care cresc cu o rat nalt n esuturi sau n s'nge i produc septicemii. ,nele bacterii prezint determinani antigenici asemntori ca structur chimic, moleculelor self ale organismului gazd. 0spunsul imun specific va fi absent ori nesemnificativ, sau efectorii imunitari dau reacii ncruciate cu moleculele self. Alteori, suprafaa bacterian posed determinani antigenici de natur proteic sau polizaharidic, inductori ai rspunsului imun. $ele mai semnificative structuri bacteriene din punct de vedere antigenic sunt cele parietale! peptidoglicanul din peretele .ram pozitiv i .ram negativ, peptidoglicolipidele din peretele comple& al micobacteriilor i structurile parietale ale spirochetelor. ;oate tipurile structurale de perete conin murein 6peptidoglican7, dar se deosebesc prin alte numeroase componente chimice cu semnificaie antigenic. ,nitatea minim a peptidoglicanului care pstreaz activitatea imunostimulatoare este 1#acetil# muramil#"#alanina#-#izoglutamina 6muramil dipeptid# @-P7. At't componenta glucidic c't i aminoacizii @-P au funcie imunomodulatoare.

1DI

A II#a clas de polimeri imunomodulatori sunt aci ii teichoici i lipoteichoici ai bacteriilor .ram pozitive. Proteinele de suprafa asociate peretelui celular au, uneori, semnificaie antigenic. $ea mai cunoscut este proteina M de la "tr. p!ogenes 6grup A7, care confer specificitate de tip. 3#au identificat peste D9 de variante antigenice, cu rol de factor de virulen. $omponentele antigenice eseniale ale membranei e&terne a bacteriilor .ram negative sunt lipopoli aharidele 6"P37, a cror specificitate este conferit de polizaharidul 8, o structur imunodominant care cuprinde p'n la :9 de uniti glucidice. 1umeroasele variaii structurale ale catenei glucidice determin e&istena unui numr corespunztor de variante antigenice bacteriene. "P3 este componentul principal al bacteriilor .ram negative, activator al rspunsului imun nscut, prin componentul su lipidic. ;ermenii )"P3* i )endoto&in* sunt frecvent utilizai cu acelai sens. "P3 trebuie s desemneze moleculele purificate, iar termenul de )endoto&in* semnific "P3 i proteinele asociate din membrana e&tern, eliberate din suprafaa celulei. "P3 sunt molecule amfifile, ceea ce condiioneaz interaciunea lor cu celulele organismului. 2le au o regiune hidrofob, capabil s stabileasc legturi cu lipidele membranare i o parte hidrofil, care poate rm'ne n faza apoas. 8 prim modalitate de interaciune este cea direct, dintre molecula amfifil i suprafaa celulei. @olecula "P3 poate fi inserat n membrana celulei, prin %umtatea hidrofob sau se leag de receptorii membranari prin %umtatea hidrofil. A II#a modalitate de interaciune a moleculei "P3 cu celulele este indirect, mediat de proteina care leag 6binding7 ,P3 6"+P7. @olecula de "P3 este recunoscut i legat de o glicoprotein plasmatic de ?9 B-, din categoria proteinelor de fa acut. 2ste sintetizat de hepatocite i are un situs de legare pentru lipidul A. Poli aharidele capsulare ale unor bacterii patogene .ram pozitive i negative, libere n supernatant sau legate de perete, sunt foarte imunogene dac conin lipide sau proteine terminale. Gariaia lor biochimic deriv nu numai din schimbarea ordinii unitilor glucidice componente, ci, n primul r'nd, din posibilitatea legrii monozaharidelor de oricare din cei ? atomi ai he&ozei adiacente. -iferenele de secven a monozaharidelor genereaz determinani antigenici care nu reacioneaz ncruciat cu anticorpii specifici fa de un alt determinant cu aceiai compoziie. Do%inele de natur proteic sunt imunogene i stimuleaz rspunsul imun cu efect protector. Peretele celular al micobacteriilor este foarte rezistent la aciunea factorilor litici. In alctuirea sa intr glicolipide, formate din resturi de acid micolic, legai covalent de resturile de arabino# galactan 6lipoarabinogalactan7 i arabinomanan 6lipoarabinomanan7. $omple&ul glicolipidic se leag de peptidoglican, prin puni fosfat. @embrana e&tern a spirochetelor este bogat n lipide i lipopeptide, stimulatoare ale rspunsului imun i ale reaciilor de hipersensibilitate. +acteriile to&igene, lipsite de invazivitate 6;. diphteriae, ;. tetani, clostridiile enterice7 stimuleaz rspunsul imun humoral antito&ic. +acteriile invazive determin infecii regionale sau generalizate 6sistemice7. @a%oritatea se multiplic n spaiile e&tracelulare, unele au localizare facultativ intracelular, iar altele sunt obligat intracelulare.

1DD

+acterii cu localizare e&tracelular +acterii facultativ intracelulare, intracelulare M!cobacterium tuberculosis "taph!lococcus sp M. leprae Heisseria sp Brucella sp. ,isteria +scherichia coli monoc!togenes Flebsiella sp. #ersinia sp. Proteus sp. "almonella t!phi Pseudomonas sp. ". parat!phi Bacteroides fragilis Dreponema pallidum 8aemophilus influen ae *ctinom!ces sp. "treptococcus sp )ic=ettsia ;hlam!dia

+acterii obligat

+acteriile cu localizare e%tracelular induc un rspuns imun mediat humoral. Activarea limfocitelor + este rezultatul cooperrilor celulare macrofag#limfocit +#limfocit ;h. In focarul de inflamaie, bacteriile cu localizare e&tracelular determin formarea abcesului, n care predomin polimorfonuclearele +acteriile cu localizare intracelular induc, preponderent, un rspuns imun mediat celular. Persistena lor n celulele fagocitare are ca rezultat final, formarea granulomului. $ele mai tipice pentru natura lor imunitar sunt granuloamele care se formeaz n infeciile cu M. tuberculosis i cu M. leprae. Me%a# )!e pr # %are ! %roor$a# )!ele ev t aprarea $azde

Infeciozitatea microorganismelor patogene este dependent de capacitatea lor de a coloniza esuturile gazdei i de a contracara mecanismele de aprare ale gazdei. $apacitatea de variaie rapid a moleculelor de suprafa este o trstur evolutiv comun n tot spectrul patogenilor. 3e cunosc e&emple de bacterii patogene care au elaborat mecanisme ce permit variaia antigenic rapid i eficient. @oleculele de suprafa prezint regiuni bine conservate, ancorate n membran, dar nu sunt niciodat e&puse contactului cu sistemul imunitar al gazdei. 0ata nalt de mutaie produce un numr mare de variante antigenice. Astfel, n patogeneza gonoreii i meningitei, cauzate de Heisseria sp, rolul fimbriilor este esenial pentru ataarea de celulele epiteliale. @oleculele de fimbrilin evideniaz secvene constante, semivariabile i hipervariabile. 0egiunile hipervariabile determin antigenitatea acestor structuri i tropismul fa de celulele epiteliale ale tractului urogenital uman. H. meningitidis este capsulat i numai fimbriile proemin dincolo de limitele stratului polizaharidic. -e aceea, pierderea fimbriilor inhib proprietatea de aderen. Polizaharidul capsular este repelent pentru fagocite, deoarece celulele fagocitare nu au receptori pentru polizaharidele capsulare. ,neori, acestea sunt asemntoare oligozaharidelor din moleculele glicoproteice proprii organismului, ceea ce e&plic slaba lor imunogenitate. ;ulpinile variante, necapsulate sunt mai puin virulente, dar au avanta%ul c nu sunt recunoscute de anticorpii

1DJ

specifici fa de antigenele capsulare. Absena capsulei, la 8aemophilus influen ae, confer celulei o capacitate sporit de a se ataa i de a invada celulele epiteliale ale gazdei. "a "tr. p!ogenes s#au identificat peste D9 de serotipuri diferite, ce rezult din mutaiile punctiforme ale genei ce codific proteina M, component a peretelui celular. "P3 prote%eaz fizic celula bacterian de aciunea complementului i a fagocitelor, constituind un strat protector, iar diversitatea glucidelor din oligozaharidul terminal, confer o variaie antigenic e&trem de larg. "a. ". t!phimurium s#au identificat peste 5999 de variante antigenice, cu tot at'tea specificiti serologice. "a spirocheta Borrelia hermsii 6agentul febrei recurente, caracterizat prin crize febrile, separate de intervale asimptomatice7, episoadele febrile semnific apariia i multiplicarea unei noi variante antigenice. Antigenul variant este o protein abundent a membranei e%terne 6G@P = variable ma%or protein7. ,nul dintre cele mai bine studiate e&emple de variaie antigenic i rolul ei n infecie, este al tripanosomelor africane care produc boala somnului. D. brucei produce o parazitemie, care crete i descrete, deoarece genereaz subpopulaii care sunt variante antigenice ale unei glicoproteine specifice 6G3. A variant#specific glEcoprotein7 a suprafeei celulei. ,ndele de parazitemie constituie trstura principal a infeciei cronice, care persist p'n c'nd individul tratat se vindec, ori netratat, moare. In stadiile terminale, agentul patogen invadeaz alte esuturi i capacitatea de aprare este depit. (n cursul infeciei, numrul mare de parazii, d natere la o subpopulaie care poart o G3. modificat biochimic i antigenic, ce scap controlului imediat al rspunsului imun. ,lterior, aceast variant nou este recunoscut de sistemul imunitar, dar generarea rapid a noilor G3. mpiedic eliminarea infeciei. $apacitatea parazitului de a se comuta la diferite G3. duce la epuizarea forelor de aprare ale gazdei n fazele terminale ale bolii. Infecia cu Plasmodium falciparum este persistent, recurent i se caracterizeaz printr#un tablou foarte variabil al manifestrilor clinice. Imunitatea specific se dezvolt lent i numai dup infecii ample i repetate, se consolideaz un rspuns imun protector fa de infecia sever, dar este o imunitate incomplet i incapabil s sterilizeze organismul. In ariile geografice cu o rat nalt de transmitere a parazitului, apar complicaii severe, cu mortalitate crescut, la copiii sub C ani. $opiii care depesc C ani, au imunitate adecvat pentru a controla infecia. 3tarea de protecie persist tot restul vieii, n condiiile inoculrii continue a sporozoiilor de la 'narii infectai. 0spunsul imun fa de antigenele parazitului este mediat de anticorpi 6Ig.7. "a pacienii cu 3I-A 6care e&acerbeaz dramatic evoluia tuberculozei sau infeciile oportuniste7, malaria nu are o evoluie mai sever, ceea se nseamn c sinteza Ig. este independent de celulele ;. 2ritrocitele infectate sunt ingerate de macrofage, independent de IF1. -iversitatea antigenic a tulpinilor de Plasmodium este argumentat de miniepidemiile de malarie sever, care apar n zonele endemice mari. ;ulpinile mai virulente au proprieti antigenice i de citoaderen modificate. -iferenele proprietilor de aderen produc manifestri severe, inclusiv malarie cerebral, iar modificrile de antigenitate permit parazitului s persiste i s produc infecii repetate.

1J9

@oleculele de suprafa ale eritrocitelor infectate cu P. falciparum prezint variaie antigenic, ceea ce condiioneaz citoaderena. Aderena eritrocitelor infectate, de esutul cerebral, renal sau hepatic, este cauza malariei severe. .enerarea continu a diferitelor populaii variante antigenice de parazii, cu diferite specificiti de aderen, este cauza infeciilor persistente caracterizate prin unde de parazitemie i manifestri clinice specifice malariei. -iversitatea fenotipic corespunztoare variaiei antigenice este o strategie foarte eficient pentru adaptarea la presiunea selectiv pe care o e&ercit efectorii rspunsului imun i la diversitatea de particulariti structurale i funcionale ale esuturilor gazdei. @ecanismele de variaie sunt deosebit de importante pentru succesul diseminrii unei infecii n populaia gazd. RS/UNSUL IMUN N INFEC%IILE VIRALE Infeciile virale constituie, nc, o cauz ma%or a morbiditii i mortalitii, dei vaccinarea a redus incidena infeciilor severe 6polio, oreion, ru%eol, rubeol7 i a eradicat variola. $unoaterea mecanismelor rspunsului imun antiviral este important pentru evaluarea problemelor clinice de fond 6de e&emplu, dinamica rspunsului imun7 i pentru cutarea unor noi metode de obinere a vaccinurilor. Interaciunea virusurilor cu organismele, este modulat de sistemele de aprare nscute i dob'ndite. Pentru a se perpetua ntr#o populaie, virusul trebuie s fie virulent, dar suficient de fle&ibil n modularea virulenei, pentru a se pstra n populaia sensibil. In perspectiv evolutiv, interaciunea virusului cu organismul sensibil trebuie s confere superioritate virusului. -ac este prea virulent i nu poate fi controlat de imunitatea gazdei, rezultatul poate fi moartea i n final dispariia gazdei. -ac este lipsit de virulen, virusul va fi eliminat prea rapid de sistemul imunitar al gazdei i poate s dispar prin incapacitatea de a se perpetua. Adeseori, virulena viral este diminuat prin mutaie i n acelai timp se selecteaz gazde mai bine adaptate imunitar, rezult'nd un echilibru fluctuant, n care coe&ist at't gazda c't i virusul. Proteinele virale, componente ale capsidei i peplosului, sunt imunogene i induc un rspuns imun intens n organismul infectat. 0spunsul imun antiviral este orientat at't fa de antigenele e&primate pe suprafaa virionilor, c't i fa de antigenele prezentate pe suprafaa celulei infectate. Antigenele e&puse pe suprafaa celulei infectate, difer n funcie de natura virusului 6nud sau acoperit7 i de mecanismul maturrii virionilor. $elulele infectate cu virusuri nude 6adeno#, reo#, enterovirusuri7 e&pun pe suprafaa lor proteine virale asociate cu moleculele $@O I, iar cele infectate cu virusuri nvelite, n special cu virusuri care se matureaz prin nmugurire la nivelul membranei, e&pun glicoproteinele peplosului, inserate n arii limitate ale membranei. In ambele cazuri, celula infectat devine inta mecanismelor de recunoatere imunitar. Antigenele e&puse pe suprafaa virionului sau a celulei infectate, stimulatoare ale rspunsului imun, se numesc antigene protectoare. Antigenele intrinseci ale virionului, au rol protector nesemnificativ, deoarece nu vin n contact cu sistemul imunitar, dec't n cazul n care se sintetizeaz n e&ces i se elimin din celula infectat. Antigenele virale libere sau asociate virionului, stimuleaz rspunsul imun humoral, iar cele prezentate pe suprafaa celulelor infectate, stimuleaz rspunsul imun celular.

1J1

Activarea unuia sau altuia dintre compartimentele imunitii, depinde de mai muli factori! de tipul de infecie 6primar sau secundar7, de rezultatul interaciunii virus#celul 6liz sau infecie persistent7 etc. Girusurile care produc infecii acute, determin o competiie ntre replicarea viral i efectorii rspunsului imun. 0ezultatul este nsntoirea sau moartea gazdei. Pentru virusurile care produc infecii cronice, scara de timp este mai lung. Girionii sau antigenele virale din s'nge sau din alte fluide, determin formarea comple&elor Ag#Ac, cu manifestri patologice secundare. Alteori, anticorpii antivirali i celulele ; activate, pot produce leziuni ale celulelor infectate. @a%oritatea manifestrilor clinice care nsoesc infeciile virale cronice, sunt consecina rspunsului imun al gazdei, stimulat de antigenele virale. R)p"#)"l !"# pr !ar @ecanismele de aprare nespecific 6interferonul, aciunea celulelor 1L, rspunsul mucociliar7 pot influena rezultatul infeciei. -up infecia viral primar sau dup administrarea vaccinului inactivat, se stimuleaz rspunsul imun mediat celular6citoto&ic7 i humoral. 0spunsul humoral, cu sinteza anticorpilor, are o dinamic lent. In stadiul acut al infeciei, titrul anticorpilor specifici este abia detectabil, dar atinge valoarea ma&im la 5#: sptm'ni i persist sptm'ni sau luni, n funcie de gazd, virus etc. Pentru virusul febrei galbene i cel ru%eolic, nivelul detectabil al anticorpilor persist tot restul vieii. -up infecia primar sau dup vaccinarea cu preparatul viral atenuat sau inactivat, se sintetizeaz anticorpi din clasele Ig@, IgA i Ig.. 3inteza anticorpilor este indus de marea ma%oritate a virusurilor, dar rolul protector al imunoglobulinelor este variabil de la un virus la altul, n funcie de sediul multiplicrii, care la r'ndul su condiioneaz manifestrile patologice ale infeciei. (n funcie de mecanismul patogenezei, se disting trei tipuri de virusuri! # virusurile care infecteaz mucoasele tractului respirator i digestiv i rm'n la poarta de intrare! rinovirusuri, influenza, parainfluenza, virusul respirator sinciial, enterovirusuriN # virusuri care infecteaz i se multiplic la nivelul mucoaselor, iar ulterior se diseminea pe cale sanguin, limfatic sau a&onal, pentru a infecta viscerele sau sistemul nervos central! virusul poliomielitei, ru%eolic, al oreionului, herpes simple&, po&, virusul hepatitei AN # virusuri inoculate direct n s6nge, prin muctur, neptur, prin traume, iar de aici se rsp'ndesc la organele int! OIG, virusul hepatitei +, virusul rabic, virusurile encefalitogene6alfa# i flavivirusuri7. Rol"l a#t %orp lor 0# !"# tatea a#t v ral

1J5

$ei mai importani anticorpi cu rol protector antiviral sunt cei care au specificitate de combinare fa de epitopii critici ai suprafeei virionilor. "egarea anticorpilor cu virionul se face dup modelul complementaritii spaiale ntre epitopii antigenelor suprafeei virale i situsul de combinare al anticorpilor. 2fectul principal al interaciunii anticorpilor cu particulele virale, n faza fluid, este neutrali area, adic pierderea infeciozitii virionilor. Pentru producerea efectului neutralizant, este necesar legarea mai multor molecule de anticorpi, care trebuie s recunoasc o structur esenial a virionului, denumit situs critic. -e e&emplu, fagii din seria ;#par au un singur situs critic i infeciozitatea lor este anulat de legarea anticorpilor specifici la nivelul fibrelor cozii. Girionul gripal are situsuri critice multiple! anticorpii anti#OA sunt neutralizani, cei specifici anti# 1A au efect neutralizant minim, iar anticorpii anti#protein @ sunt total ineficieni. "a adenovirusuri, situsurile critice sunt capsomerele he%onice i fibra pentonic. Anticorpii specifici fa de aceste structuri sunt neutralizani, iar anticorpii anti#penton nu diminu infeciozitatea. Pentru OIG, situsul critic este zona prin care virionul se ataeaz de moleculele $- : ale limfocitului ;h. Anticorpii specifici fa de situsul de legare al virusului 2pstein#+arr de receptorul pentru $<b al limfocitului +, au efect neutralizant. @oleculele de anticorpi legate pe suprafaa virionului nvelit formeaz comple&e, care, in vivo sau in vitro, iniiaz fi&area complementului. 0ezultatul final este li a virionilor nvelii. ,n alt efect al interaciunii anticorpilor cu virionii, in vitro, este agregarea. Fenomenul este dependent de un prag limit a densitii virionilorTunitate de volum. Agregarea virionilor este nsoit de diminuarea infecio itii, deoarece chiar n cazul unui mare e&ces al moleculelor de anticorpi, unele particule virale din interiorul agregatului, rm'n n afara contactului cu anticorpii neutralizani i i pstreaz infeciozitatea, denumit infecio itate re idual sau persistent. Agregarea viral fiind dependent de un prag al densitii virionilor, este un fenomen care se manifest numai in vitro. In vivo nu se realizeaz niciodat o densitate limit a virionilor care s produc acest efect. Anticorpii antivirali ce se sintetizeaz n cursul rspunsului imun primar, au energie mic 6afinitate7 de legare cu situsurile antigenice ale virionilor i se disociaz uor, ls'nd o infeciozitate rezidual. Alteori, moleculele de anticorpi nu acoper situsurile critice ale virionilor, care condiioneaz iniierea procesului infecios. 2fectul protector al anticorpilor circulani este demonstrat pentru infeciile cu faz viremic, av'nd o contribuie esenial la ncheierea procesului infecios. Anticorpii reduc ncrctura de virus i diminu infeciozitatea viral, consecina fiind scderea numrului de celule infectate, uur'nd astfel sarcina celulelor ;c de a elimina celulele infectate. (n cursul infeciei secundare, anticorpii se sintetizeaz rapid, la titru nalt. Anticorpii se folosesc pentru profila&ia i terapia infeciilor virale. Imunizarea pasiv cu ser imun, diminu riscul infeciei virale i se folosete n tratamentul infeciilor stabilizate. Protecia mucoaselor. "a nivelul mucoaselor, imunitatea antiviral este dependent, n primul r'nd de IgA. 3inteza local de anticorpi 6 n special IgA7 dup stimularea viral este relativ independent de rspunsul imun sistemic. Anticorpii sintetizai la nivelul mucoaselor au efect protector, n absena anticorpilor sistemici. Anticorpii din secreiile mucoaselor ndeplinesc dou funcii ma%ore fa de agenii patogeni virali! e%cluderea imun i neutrali area infecio itii virale.

1J<

+%cluderea imun este un mecanism protector foarte important la nivelul mucoasei respiratorii i pare a fi dependent nu numai de imunoglobuline, ci i de stratul de mucus care acoper epiteliul. Absena activitii ciliare este asociat cu infecii severe ale tractului superior, suger'nd importana barierei mucoase. sIgA neutralizeaz infeciozitatea virionilor, iar secreia mucoas este n primul r'nd o barier mecanic ce blocheaz adsorbia virionilor pe membrana celulelor epiteliale. IgA din secreii are rol esenial n rezistena la reinfecia cu virusurile care se multiplic e&clusiv n celulele epiteliale ale mucoaselor digestive i respiratorii. Gaccinarea oral cu virus polio inactivat are ca scop stimularea imunitii mucoasei. -ac au titru crescut, anticorpii serici 6Ig@7 difuzeaz n mucoase. 1u se tie n ce msur anticorpii din secreii sau din s'nge prote%eaz epiteliul tractului respirator inferior. (ig. B0. Mecanismele protectoare ale mucoasei tractului respirator, fa de infecia viral. -up inoculare, particulele virale sunt neutrali ate 617 de anticorpi, care a%ung la suprafaa mucoasei prin transport transepitelial 6IgA polimeric7, prin difuzie 6Ig.7 sau prin administrare artificial 6pictur spraE, aerosol7. Alt mecanism este ) e%cluderea imun* 657 i se produce c'nd particulele virale sunt legate de anticorpi, incluse n mucus i ndeprtate prin activitate mucociliar. Anticorpii pot difuza prin mucus pentru a neutraliza virusul progen i particulele care trec prin stratul de mucus. 1eutralizarea viral poate s se produc intracelular 6<7, n timpul transportului intracelular al IgA polimeric. "a suprafaa bazolateral a celulelor epiteliale infectate, Ig. se poate fi&a specific de proteinele membranare codificate de virus i mediaz li a celulei 6:7 dup fi&area complementului sau prin fenomenul A-$$. $elulele infectate de virus pot fi lizate sub aciunea limfocitelor ;c specifice. "iza celulelor epiteliale uureaz trecerea efectorilor imunitari n ambele direcii 6dup Feltzin, 1JJJ7. (n tractul respirator inferior, n secreia mucoas, se gsesc concentraii mari de IgA i Ig.. Anticorpii a%ung n secreii, n mare parte, prin difuzia printre celule sau prin ruperi ale epiteliului. -ei vaccinurile gripale se administreaz parenteral, este clar c anticorpii din secreii 6sIgA7 au rol ma%or n protecia antiinfecioas. sIgA confer o mai bun protecie ncruciat fa de variante antigenice rezultate prin drift antigenic, comparativ cu Ig. circulant. Pentru antigenele virale e&puse pe suprafaa celulelor infectate, studiile in vitro au evideniat c anticorpii antivirali i complementul se leag specific i pot s produc citoli a. $omplementul poate acoperi comple&ul Ag#Ac, bloc'nd eventualii receptori disponibili. $omple&ele sunt fagocitate de celule care au receptori pentru $<. $omplementul poate liza virionii nvelii. 0etravirusurile sunt lizate de complement, chiar n absena anticorpilor. $omplementul pare s aib rol n faza timpurie a infeciei, c'nd titrul anticorpilor este foarte sczut i au afinitate mic. Proteinele complementului sunt importante ca mecanism efector humoral fa de infeciile bacteriene, dar rezistena celor cu deficit al complementului, fa de infeciile virale este normal.

1J:

Imuni area pasiv a mucoasei respiratorii poate fi folosit n scop profilactic sau terapuetic. Are avanta%ul c efectul protector este imediat, iar efectele colaterale sunt rare. Anticorpii sunt mai eficieni fa de infeciile virale, c'nd se administreaz profilactic. Anticorpii administrai prin imuni are pasiv, n secreiile tractului respirator, pot s previn, s diminueze sau s vindece infecile virale. Imunizrile s#au fcut n special cu Ig. pentru c este mai uor de obinut. IgA are avanta%ul de a fi polimeric i teoretic, are activitate aglutinant superioar fa de Ig. i pentru c nu fi&eaz complementul, probabil nu stimuleaz reaciile inflamatorii. Are o perioad de activitate mai lung, deoarece componenta secretoare 6$37 l prote%eaz de aciunea proteazelor. (n concluzie, imunitatea mediat humoral reprezint modalitatea tactic, de neutralizare a virusurilor n faza e&tracelular. Anticorpii se sintetizeaz n rspunsul imun primar i secundar antiviral, dar activitatea lor protectoare este neesenial pentru controlul multor infecii primare sau secundare. $opiii cu agamaglobulinemie nscut de tip +ruton, nu au sensibilitate crescut fa de infeciile virale, cu e&cepia meningitei enterovirale, produs de echovirusurile J sau 11. Anticorpii sunt activi fa de antigenele virale din umorile organismului, dar nu penetreaz n celulele infectate. I!"# tatea a#t v ral !ed at %el"lar (n ciclul infecios al multor virusuri, antigenele sunt e&puse t'rziu pe suprafaa celulei. In aceste cazuri, rolul protector al anticorpilor este secundar. Imunitatea mediat celular 6I@$7 constituie mecanismul ma%or al aprrii specifice antivirale. -up infecia primar sau dup administrarea vaccinului viral atenuat, se activeaz rspunsul celulelor ;c, care are activitate ma&im la I#19 zile i scade la 5#< sptm'ni dup infecie. Pentru controlul infeciei virale, celulele ;c sunt eseniale. "a pacienii cu sindrom -i .eorge 6cu aplazie timic congenital7, la pacienii 3I-A, la cei leucemici sau la cei supui terapiei imunosupresoare prelungite, frecvena i severitatea infeciilor virale cresc semnificativ. 0olul I@$ n protecia antiviral este elocvent n cazul infeciei cu virusul ru%eolic. "a copiii normali, infecia produce erupia tegumentar caracteristic i ulterior virusul este eliminat. "a copiii cu deficien a celulelor ;, boala este adeseori fatal. @anifestrile eruptive sunt mediate de celulele ; i la copiii imunosupresai nu se produc. Apariia erupiei este indicatorul evoluiei favorabile. "a copiii agamaglobulinemici, erupia se produce i evoluia infeciei este nealterat de absena anticorpilor. 3e instaleaz imunitatea de memorie. I@$ precede sinteza anticorpilor n toate infeciile virale, dar n special n cazul infeciilor citolitice n care virusul se multiplic rapid. I@$ are rol important n aprarea fa de infeciile virale primare, deoarece se activeaz ntr#un timp scurt i rspunde nevoilor de aprare rapid fa de infeciile virale, nainte de edificarea rspunsului imun mediat humoral. In focarul inflamator indus de infecia viral se acumuleaz celule efectoare ale I@$, care ating valoarea ma&im la dou zile de la nceputul replicrii virale. I@$ se activeaz dup ce virusul a ptruns n celul i aceasta e&pune pe suprafaa ei, antigene virale. 2fectul su este li a celulelor infectate i are rolul de a limita diseminarea virusului n mediul e&tracelular. "iza celulelelor infectate cu virusuri citocide este protectoare numai dac se produce rapid, nainte de asamblarea virionilor progeni. "iza tardiv are

1JC

efect opus, deoarece favorizeaz diseminarea virusului. Pentru virusurile care produc infecii persistente, citoliza timpurie sau tardiv are efect protector.

(ig. B>. $ontrolul infeciilor virale citocide i necitocide de ctre celulele ;c. "iza celulei infectate poate s se produc n faza de eclips, nainte de asamblarea virionilor maturi sau n faza de mi%loc, c'nd numai o parte a virionilor s#a asamblat. In ambele cazuri, liza este protectoare fa de infecia cu virusuri citocide i necitocide. In contrast, liza relativ t'rzie n timpul ciclului de replicare viral este protectoare numai fa de virusurile necitocide. -ac celulele ;c nu produc liza, celulele infectate pot s supravieuiasc i s elibereze virioni infecioi perioade lungi de timp. In cazul infeciei citocide, liza tardiv nu diminu diseminarea virusului, deoarece asamblarea s#a ncheiat i virionii vor fi eliberai prin citoliza produs de efectorii imunitar 6dup Lagi, 1JJ?7. I@$ constituie modalitatea strategic de protecie antiviral, al crei efect este liza celulei nainte de ncheierea ciclului de replicare viral. 2fectorii imunitii mediate celular detecteaz celulele a cror suprafa este modificat din punct de vedere antigenic 6celule infectate cu virus, celule transformate malign, celule mbtr'nite sau celule nonself7. 8rice protein structural a virionului sau e&istent numai n celula infectat 6protein nestructural7 poate fi prelucrat de celulele infectate sau de celulele accesorii ale rspunsului imun. @oleculele nonself prelucrate sunt asociate cu moleculele $@O I 6sau $@O II7 i sunt e&puse pe suprafaa celulei. $omple&ele moleculare devin inte pentru aciunea limfocitelor ;c. $elula infectat este lizat sub aciunea factorilor litici eliberai de limfocitul ;c. $elulele ;c recunosc orice protein viral, structural sau nestructural, asociat cu moleculele $@O. "imfocitele ;c activate sunt specifice fa de virusul infectant. -e e&emplu, limfocitele ;c sensibilizate fa de virusul variolei, lizeaz numai celulele infectate cu acest virus. 1u lizeaz celulele normale i nici celule alogenice infectate cu virusul variolei. /incBernagel i -ohertE 61JI:7 au demonstrat e&perimental specificitatea aciunii limfocitelor fa de antigenele virale, dar i fenomenul de limitare 6restricie7 a interaciunilor celulei efectoare cu celula int, de identitatea moleculelor $@O. $elulele care prezint antigenul i cele care l recunosc trebuie s fie histocompatibile, adic s poarte pe suprafaa lor, molecule $@O I i II identice. (n infecia secundar, rspunsul celulelor ;c este rapid, mediat de celulele ;c de memorie. $elulele de memorie pot s persiste n absena antigenului specific, probabil datorit stimulrii sporadice nespecifice, de citochinele eliberate local n timpul reaciilor fa de antigenele ne nrudite. ;elulele HF nu au specificitate fa de antigen i nu produc memorie imunitar. $elulele 1L se activeaz rapid i la 5#< zile dup infecie ating activitatea ma&im, dup care diminu rapid. -eficienele pentru celulele 1L sunt rare, dar sunt nsoite de infecii severe cu virusul varicela zoster, cu virusul citomegalic, herpes simple& virus 1.

1J?

@ecanismul interaciunii celulei 1L cu celula infectat nu se cunoate. $elulele 1L lizeaz celulele care au pierdut moleculele $@O i astfel au devenit anormale. Activitatea celulelor 1L este stimulat de interferon. $elulele infectate cu virusuri pot fi lizate prin fenomenul *$;; 6antibodE dependent cell cito&icitE7, prin aciunea limfocitelor ;c sau 1L. 2le lizeaz celulele tapetate cu anticorpi. Fagocitele mononucleare 6monocitul sanguin, macrofagul tisular, celula dendritic7 au rol important pentru eliminarea virusului dintr#un proces infecios. Fagocitele mononucleare fagociteaz virionii inoculai prin neptur. @acrofagele au i activitate A-$$. Me%a# )!e pr # %are %el"lele #+e%tate ev t e+e%tor r)p"#)"l" !"# (n mediul e&tern, virusurile sunt instabile, datorit sensibilitii la factorii de mediu. -e aceea, pentru a se perpetua ntr#o populaie de organisme sensibile, virusul trebuie s rm'n c't mai mult n gazda infectat, ori s se transmit c't mai eficient de la o gazd la alta. Pe de alt parte, efectorii rspunsului imun humoral i celular nu sunt totdeauna eficieni n recunoaterea i eliminarea celulelor infectate cu virus, iar virusul eliberat din celul, trebuie s evite contactul cu efectorii rspunsului imun. (n ma%oritatea infeciilor persistente, virusurile infecteaz celulele sistemului imunitar! virusul hepatitei +, papovavirus, herpes, virusul 2pstein#+arr, virusul citomegalic, rubela, ru%eola, oreion, influenza, parainfluenza, O;"G I, II, OIG, diminu'nd potenialul reactiv al imunitii. 8 celul infectat care e&pune pe suprafaa ei un numr mic de situsuri antigenice poate s scape lizei, deoarece situsurile antigenice distanate nu permit legarea celor dou situsuri de combinare ale moleculei de anticorp, necesar activrii complementului. $elulele infectate persistent e&prim o cantitate limitat de antigene virale pe suprafaa lor, comparativ cu celulele n care ciclul de replicare viral este litic. Acesta pare a fi mecanismul de supravieuire a celulelor infectate cu virusul coriomeningitei limfocitare 6"$@7, cu virusul ru%eolei sau cu virusul hepatitei +. Antigenele virusului hepatitei + se sintetizeaz n mare e&ces i se elimin din hepatocite, sub forma unor particule fr genom. 3e consider c e&cesul cantitativ de antigene virale determin fenomenul de toleran imunitar. $elulele infectate persistent manifest fenomenul de fluctuaie cantitativ a antigenului viral, e&pus pe suprafaa lor. $elulele infectate cu virusul ru%eolic trec succesiv prin cicluri de dispariie i reapariie a antigenelor virale, asociate membranei citoplasmatice, n timp ce moleculele normale ale celulei nu au variaii cantitative semnificative. Fenomenul se numete modulaie antigenic. Anticorpii necitolitici pot masca antigenele virale e&puse la suprafaa celulei, devenind astfel inaccesibile celulelor efectoare litice 6limfocite ;c, 1L7. ,neori, virusurile infecteaz celule care nu e%prim molecule ;M8 I. 1euronii e&prim puin sau de loc moleculele $@O I i reprezint un situs preferenial al persistenei virale. Oerpesvirusurile infecteaz latent neuronii, iar virusul ru%eolic, virusul "$@ i alfavirusurile pot infecta aceste celule. Adenovirusurile codific o protein de 1J B-, care se asociaz cu moleculele $@O I i blocheaz transportul lor spre suprafaa celulei i astfel celula infectat care nu e&prim molecule $@O I nu este recunoscut de limfocitele ;.

1JI

Girusul influenza evit efectul neutralizant al anticorpilor specifici, prin rata nalt de mutaie a A01#polimerazei, gener'nd noi variante biochimice ale hemaglutininei 6OA7 i ntr#o msur limitat, ale neuraminidazei 61A7. 1oile variante antigenice ale OA i 1A trebuie s#i pstreze funcia, adic virionul trebuie s fie infecios, dar scap detectrii de anticorpii pree&isteni. Fenomenul variaiei antigenice limitate se numete drift antigenic. "hiftul antigenic corespunde unei noi variante genetice a virusului influenza i este rezultatul unei reasortri a genomului, care are loc cel mai probabil la psri, unde se produce co#infecia cu un virus uman 6ce infecteaz rareori psrile7 i cu o linie de virus aviar. Girusurile contracareaz aciunea citochinelor. Girusurile sunt at't inductori ai sintezei interferonilor 6IF17, c't i inta principal a aciunii lor. ,n virus care induce sinteza IF1 i este foarte sensibil la aciunea sa inhibitorie nu se poate propaga. 2voluia a favorizat virusurile care contracareaz efectele inhibitorii ale IF1 asupra ciclului de replicare viral. Girusurile cu virulen nalt, inhib sinteza A01 celular i sinteza proteinelor 6efect de ntrerupere7, ceea ce interfer cu capacitatea celulei de a produce IF1 i de a rspunde la aciunea lui. @ulte virusuri sunt rezistente la aciunea IF1. ,nele dezo&iribovirusuri codific proteine ce inhib cile ma%ore de transducere a semnalelor induse de IF1. -e e&emplu, proteina 21 a P sau \. Po&virusurile codific ,adenovirusurilor inhib semnalul indus de IF1 Q sinteza unor receptori solubili pentru citochine 6pentru ;1F i I"#17, denumii virochine. TI/URILE DE IMUNITATE DO-NDIT .ADA/TATIV0 Oomeostazia organismului uman i animal este asigurat de sisteme comple&e de aprare, ale cror particulariti funcionale au fost definite n primul r'nd, n raport cu modul de aciune fa de agenii infecioi. 8rganismele dispun de dou categorii de mecanisme de aprare! # mecanisme de aprare specific, reprezentate de sistemul imunitarN # mecanisme de aprare nespecific sau nscut, adic cele care asigur rezistena sau imunitatea natural. Prin imunitate )natural* sau nscut se nelege rezistena unui organism fa de un agent infecios sau fa de un parazit, n absena unui rspuns imun evident. $ele dou sisteme de aprare, specific i nespecific, se condiioneaz reciproc. 1u se poate evalua gradul n care mecanismele de rezisten natural sunt influenate dup e&punerea la contactul cu agenii infecioi, dar rspunsul imun detectabil sau chiar subliminal produce modificri ale strii de activitate a sistemului fagocitar mononuclear i a celulelor Biller. @ecanismele de aprare antiinfecioas sunt at't specifice 6adaptative, dob'ndite7 c't i nespecifice 6 nscute7. Imunitatea dob6ndit are un caracter specific i se definete ca o stare de rezisten antiinfecioas, cu caracter individual, condiionat de contactul anterior al organismului, ntr#un

1JD

proces infecios natural, cu agentul infecios virulent, cu to&inele sale native sau cu agentul atenuat i anato&inele sale administrate ca vaccin. Imunitatea dob'ndit, denumit i inductibil, este relativ, n sensul c, dei n general este foarte solid, poate fi nvins prin agresiunea e&ercitat de o cantitate mare de ageni infecioi sau de infecia cu o tulpin deosebit de virulent. (n funcie de originea i modul de instalare, imunitatea dob'ndit este de dou tipuri! dob'ndit pe cale natural i pe cale artificial. In ambele cazuri, imunitatea poate fi dob'ndit at't activ, prin rspunsul imun la stimulul antigenic, c't i pasiv, prin transferul de anticorpi e&ogeni. Imunitatea dob6ndit natural activ se instaleaz dup trecerea organismului printr#o stare de infecie aparent 6decelabil clinic7 sau inaparent. -urata strii de imunitate este variabil. ;recerea prin unele infecii asigur o protecie specific pentru tot restul vieii 6ru%eola, variola, varicela, oreionul7. Alte infecii 6difteria, scarlatina, tusea convulsiv etc.7 confer o protecie mai puin solid, astfel nc't la o nou e&punere6dup c'iva ani7, organismul poate face din nou boala ntr#o form mai uoar dec't prima mbolnvire. Imunitatea dob6ndit natural pasiv este rezultatul transferului transplacentar i prin secreia lactat, al anticorpilor de la mam la ft. Aceast form de imunitate este variabil din punct de vedere cantitativ i calitativ, n funcie de comple&itatea structural a barierei placentare i diversitatea antigenelor la care a fost e&pus organismul matern. ;recerea imunoglobulinelor prin filtrul placentar depinde de structura placentei, adic de numrul de straturi celulare ce se interpun ntre circulaia matern i cea fetal. ;ranzitul anticorpilor este restrictiv la speciile de bovine, cabaline, porcine, canine, care au placent de tip epiteliocorial, cu : straturi tisulare! endoteliul capilar matern, epiteliul corionic, esutul con%unctiv fetal, endoteliul capilar fetal. 1ou#nscutul este prote%at de imunoglobulinele din colostru. In primele 5: de ore, aparatul gastrointestinal este imatur din punct de vedere funcional i digestia proteic nu are loc. Imunoglobulinele din colostru rm'n intacte i sunt transportate n mediul intern prin celulele epiteliului intestinal. ;ransferul placentar al imunoglobulinelor este foarte intens la speciile cu placent hemocorial 6om, maimue, roztoare7, la care stratul endoteliului capilar matern lipsete i s'ngele matern scald esutul placentar fetal. 1ou# nscutul uman primete anticorpi materni i dup natere, prin colostrul bogat n imunoglobuline, provenite din circulaia matern. Imunitatea dob'ndit natural i pasiv asigur noului nscut o stare de nereceptivitate fa de agenii infecioi pentru care organismul matern este imun. Aceast imunitate scade treptat dup natere, pe msura catabolismului anticorpilor de origine matern, astfel nc't, dup o perioad de <# ? luni copilul devine sensibil fa de agenii infecioi. Imunitatea transplacentar e&plic raritatea maladiilor infecioase la copii, n primele luni de via. I!"# tatea do,8#d t art + % al a%t v Imunitatea dob6ndit artificial activ este consecutiv administrrii vaccinurilor. -enumirea de vaccin vine vine de la cuv'ntul latin vaca i semnific originea primului preparat pe care 2. Henner 61IJD7 l#a utilizat pentru controlul variolei. VACCINURI Gaccinurile sunt produse biologice care conin bacterii vii cu virulen atenuat, bacterii omor'te, to&ine modificate 6anato&ine7, virusuri infecioase dar cu virulen atenuat, respectiv virusuri inactivate i care, introduse pe o cale adecvat n organismul uman sau animal, stimuleaz reactivitatea imunitar, gener'nd o stare de protecie temporar fa de agentul infecios din care au fost preparate.

1JJ

Preparatul vaccinal trebuie s fie eficient, adic s induc un rspuns imun protector, a crui memorie s se pstreze n timp i, pe de alt parte, s prezinte un grad nalt de siguran, adic s nu determine efecte secundare defavorabile. Administrarea unui vaccin se face pe baza unei strategii bine definit. 3copul vaccinrii poate fi eradicarea, eliminarea sau limitarea unui proces infecios. +radicarea semnific dispariia agentului patogen, consecutiv aciunii de vaccinare. +liminarea corespunde dispariiei manifestrilor patologice, dei agentul patogen se pstreaz n populaia uman sau animal. ,imitarea semnific posibilitatea controlului unei maladii infecioase p'n la un nivel la care nu mai reprezint o problem de sntate public. (n general, vaccinurile se administreaz nainte de a se produce infecia cu tulpina slbatic a agentului patogen. Face e&cepie vaccinul rabic, care se administreaz dup ce s#a produs o presupus infecie. Faptul este posibil, deoarece infecia rabic are o perioad lung de incubaie i permite ca preparatul vaccinal s induc un rspuns imun eficient, care modific evoluia infeciei cu o tulpin de virus ade strada. -up coninutul lor, vaccinurile pot fi monovalente, adic includ antigenele unei singure tulpini bacteriene sau virale 6de e&emplu, vaccinul stafilococic7, bi1, tri1 sau polivalente, care conin antigene provenind de la dou, trei sau mai multe specii de microorganisme sau tulpini virale 6de e&emplu, vaccinul diftero#tetano#pertusis7. -up proveniena agenilor patogeni utilizai la prepararea unui vaccin, se disting autovaccinuri i stocvaccinuri. Autovaccinul este vaccinul preparat cu o tulpin a unui microorganism sau a unui virus, izolat de la un bolnav i destinat a fi folosit numai pentru vaccinarea pacientului de la care s#a fcut izolarea. 3tocvaccinurile se obin din amestecul mai multor tulpini de ageni infecioi i sunt destinate imunizrii ntregii populaii susceptibile. Va""in* i &e ' igine 1a"te ianE

&accinurile vii constau din suspensii de bacterii vii, dar cu virulen atenuat, astfel nc't s nu determine o infecie aparent, dar s rm'n capabile s iniieze un proces infecios inaparent, cu efect imunizant. Gaccinurile vii conin celule viabile, slab virulente i care, dup administrare, induc o imunitate solid, comparabil celei consecutive trecerii prin boal, dar produc cel mult semne minime de mbolnvire. Indiferent de locul inoculrii, agentul infecios din vaccinul viu nu rm'ne localizat, ci se rsp'ndete n organism, ptrunz'nd i multiplic'ndu#se n aceleai esuturi n care se localizeaz i n cazul infeciei naturale, dar infect'nd un numr mic de celule sensibile i multiplic'ndu#se lent, agentul infecios din vaccin nu declaneaz o boal clinic, ci numai o infecie de form atenuat, care este nsoit de modificri umorale i de reactivitate imunitar. Pentru prepararea vaccinurilor vii se utilizeaz mutante bacteriene cu virulen atenuat, selecionate prin cultivarea unor tulpini slbatice n condiii speciale! de e&emplu, cultivarea la o temperatur superioar celei optime n cazul bacilului crbunos A Bacillus anthracis, sau prin

599

aciunea unor substane chimice i utilizarea unor medii de cultivare care ofer condiii nefavorabile 6vaccinul +$.7. Gaccinurile omor'te constau din suspensii bacteriene omor'te prin nclzire la temperaturi ridicate 6?9o7, ori sub aciunea formolului sau a fenolului i care conin una din aceste substane ca prezervant. -in aceast categorie fac parte vaccinul tifo#paratific A i + 6;A+7, vaccinul pertusis 6din Bordetella pertusis7, vaccinul stafilococic. Proprietile imunogene ale vaccinurilor bacteriene omor'te se menin intacte. *nato%inele 6to&oizii7 sunt preparate biologice cu proprieti imnogene, derivate din to&ine. ,neori, to&inele se transform spontan n derivai lipsii de to&icitate, dar pstreaz proprietile de imunogenitate i specificitate ale to&inei native. @ecanismul molecular al inactivrii to&inelor nu este cunoscut. Inactivarea este un proces lent i progresiv, dependent de pO, temperatur, prezena ionilor sau a proteinelor contaminante, de procesul nvechirii preparatului. ,n factor ma%or al inactivrii pare a fi proteoli a parial a moleculelor de to&in sub aciunea proteazelor contaminante, dar i schimbarea conformaiei moleculei, polimerizarea sau clivarea unui fragment molecular pot aciona n acelai sens. Inactivarea to&inelor i transformarea lor n produse ato&ice are loc n condiii diri%ate, sub aciunea formolului :Mo, la <Io i rezult anato%ine. Fenomenul a fost descoperit de 0amon 61J5C7. +eta#propiolactona, 5#:#dinitrofluorbenzenul i glutaraldehida au aceleai efecte asupra to&inelor. Pentru a fi utilizat ca vaccin, o anato&in trebuie s ndeplineasc urmtoarele condiii! a7 s fie imunogen i s induc sinteza anticorpilor la un titru suficient pentru a neutraliza in vivo, to&ina nativN b7 s fie complet lipsit de to&icitateN c7 s nu aib proprieti alergizante. Anato&ina ideal ar putea fi produs de microorganisme manipulate genetic sau prin mutaii ale genei codificatoare a to&inei. 2a ar fi o protein neto&ic, dar cu aceleai proprieti de imunogenitate cu ale to&inei native, capabil s induc sinteza anticorpilor neutralizani. $ondiiile optime pentru obinerea anato&inelor sunt proprii fiecrei to&ine i au fost optimizate empiric, dar mecanismele moleculare ale inactivrii nu se cunosc. (n general, condiiile optime pentru obinerea anato&inelor sunt urmtoarele! # concentraia proteic trebuie s fie de 1 mgTml, iar cea de formol, de 1,< mgTmlN # temperatura de deto&ifiere este de <I#:9oN # pO#ul optim este de I,D#D,5 pentru to&inele difteric i tetanic i C,C pentru cea botulinicN # durata contactului cu formolul este de <#C sptm'ni. -eto&ifierea ncepe simultan cu adugarea formolului. Procesul de deto&ifiere este evident dup un minut i crete e&ponenial timp de 5: de ore, c'nd to&icitatea are valoare foarte sczut i tinde spre 9, la C zile. Forma neto&ic poate reveni total sau parial la forma to&ic. -e aceea este necesar prelungirea contactului cu formolul, o perioad mai lung de timp. @olecula de anato&in are o structur stabilizat, prin formarea legturilor noi ntre formol i resturile de aminoacil, dar n acelai timp, prin aciune prelungit, formolul are rolul unui agent de reticulare pentru c favorizeaz formarea legturilor ntre moleculele proteice identice, ceea ce e&plic polimerizarea unor anato&ine.

591

Anato&inele bacteriene, ca i e&oto&inele sunt foarte imunogene pentru om, cal, capr, iepure, cobai, n special dup asocierea cu ad%uvani 6fosfat de $a7. 2le se pot administra ca vaccinuri pentru imunizarea activ sau se folosesc pentru imunizarea animalelor n vederea obinerii serurilor imune utilizabile n seroterapie. Va""in* i +i a#e Gaccinurile virale sunt de trei categorii! 17 Gaccinuri cu virus activ 6infecios7 atenuatN 57 Gaccinuri cu virus inactivat 6neinfecios7. Ambele categorii sunt vaccinuri unitare. <7 Gaccinuri subunitare. Va""in* i *nita e Gaccinurile cu virus atenuat se obin din tulpinile virale atenuate, lipsite complet sau aproape complet de patogenitate, dar i pstreaz capacitatea de a induce un rspuns imun protector. Fiind infecioase, ele se multiplic n organismul vaccinat i produc o stimulare antigenic continu, ntr# un interval de timp. Gaccinarea cu virusuri atenuate confer o imunitate de durat, dup administrarea unei singure doze. Atenuarea virusurilor se obine pe mai multe ci. 17 ,tilizarea pentru vaccinare, a unui virus nrudit, de la o alt gazd. $el mai vechi vaccin viral 6Henner, lIJD7, utilizat n controlul variolei, este virusul vaccinal, recoltat din leziunile pustulare de pe ugerul vacii. Girusul vaccinal imunizeaz ncruciat cu virusul variolei 6smallpo&7 i este protector fa de infecia variolic. Girusul ru%eolei imunizeaz c'inele fa de virusul bolii $arre. Anticorpii fa de virusul ru%eolei neutralizeaz virusul bolii $arre, dar nu i invers. $alea de abordare a lui Henner pentru obinerea preparatelor virale utilizabile ca vaccinuri umane este folosit i astzi. 2a implic izolarea unor virusuri de la mamifere sau de la psri, nrudite antigenic cu diferite virusuri umane. Pasa%ul lor n celulele diploide umane 6$-,7 in vitro, echivaleaz cu procesul atenurii. $elulele diploide umane reprezint un substrat semipermisiv pentru virusurile umane i mamaliene i adeseori, multiplicarea lor este lipsit de eficien. .enele virusurilor mamaliene i aviare, care determin spectrul de gazd au o mare diversitate a secvenelor de nucleotide, fa de genele corespunztoare ale virusurilor umane. 2fortul de a realiza noi vaccinuri, pe calea clasic a lui Henner, trebuie s se spri%ine pe tehnicile de genetic viral, biologie molecular i imunologie. 57 Inocularea virusului patogen sau parial atenuat, pe o cale )nenatural*, adic alta dec't cea prin care virusul ptrunde n mod obinuit n organism. @etoda este folosit pentru vaccinarea

595

animalelor 6de e&emplu, virusul laringotraheitei psrilor, se administreaz prin instilare n ochi7. Pentru om, metoda nu se folosete, deoarece riscul infeciei este mare. <7 Pasa%ul virusului de origine uman ntr#un substrat )nenatural*, in vivo sau in vitro. $ele mai importante vaccinuri pentru om i animale s#au obinut pe aceast cale. Girusul se cultiv n mod repetat, prin inoculare la organisme sntoase sau n culturi primare de celule! virusul febrei galbene s#a inoculat la oarece i apoi n embrionul de ginN poliovirusul s#a inoculat n celulele de rinichi de maimuN virusul ru%eolei A n fibroblaste de embrion de gin. Pasa%ul ntr#un substrat celular )nenatural*, selecioneaz mutante printr#un cumul de evenimente mutaionale nt'mpltoare. In practica vaccinrii, se utilizeaz cele cu proprieti adecvate de atenuare i imunogenitate. @utantele care dup administrare rm'n localizate la poarta de intrare, sunt cele mai utile. ,nul din marile succese ale acestei metode de atenuare este vaccinul polio. Prin pasa%e succesive n culturile celulare de rinichi de maimu, s#a selectat o linie lipsit de neurovirulen, dup inocularea intracerebral sau intraspinal la maimu. Gaccinul rubeolic s#a obinut prin cultivarea virusului pe acelai substrat, iar liniile folosite ca vaccin ru%eolic i al febrei galbene s#au cultivat pe fibroblaste de embrion de gin. Gaccinarea cu un preparat viral atenuat echivaleaz cu o infecie uoar, asimptomatic. Gaccinurile virale atenuate au avanta%ul important al stimulrii ambelor compartimente ale rspunsului imun! celular i humoral, at't sistemic c't i local. Acest fapt este deosebit de important pentru infeciile virale n care imunitatea mediat celular are un rol esenial n eliminarea virusului, c't i pentru infeciile mucoaselor, n care at't imunitatea local c't i cea sistemic, sunt necesare pentru rezistena optim. Gaccinurile virale atenuate stimuleaz rspunsul imun fa de fiecare din antigenele protectoare ale unui virus. Imunitatea indus de aceste vaccinuri este mai durabil, mai eficient i are un spectru mai larg de reactivitate ncruciat, dec't cea indus de virusurile inactivate. 0eactivitatea ncruciat este foarte important pentru virusurile care sufer variaie antigenic progresiv. Girusurile atenuate din vaccinuri, pstr'ndu#i capacitatea de multiplicare n organismul vaccinat, se rsp'ndesc n populaie i imunizeaz chiar indivizi nevaccinai. Gaccinurile atenuate se produc cu un pre de cost mai sczut i se administreaz mai uor. In cazul vaccinului polio, o singur doz administrat oral este suficient pentru a crea o bun stare de protecie. -ezavanta%ele vaccinurilor virale atenuate sunt legate de riscul ridicat al contaminrii cu ageni infecioi supraadugai. -e e&emplu, loturile iniiale de vaccin polio, au fost contaminate cu 3G :o, din celulele de rinichi de maimu, dar nu s#a constatat creterea incidenei tumorilor la copiii vaccinai. Gaccinul atenuat al virusului febrei galbene, multiplicat n fibroblastele de embrion de gin, a fost contaminat iniial cu virusul leucozei aviare. ,nele virusuri atenuate 6ru%eolic, rubeolic, al febrei galbene7 pstreaz un nivel sczut de virulen rezidual, care determin infecii la copiii cu imunodeficiene. 8 problem important, legat de infeciozitatea vaccinurilor atenuate, este aceea a restaurrii unui grad variabil de virulen dup vaccinare, care determin infecii cu manifestri clinice la copiii imunodeficieni. Procesul infecios nu este consecina alterrii genetice a virusului din vaccin. -in aceast cauz, vaccinul nu se administreaz gravidelor.

59<

Gaccinurile atenuate ridic problema instabilitii genetice. Girusul ru%eolic atenuat este labil, n special la variaiile termice i de aceea necesit un regim termic constant 6R: o7, pe toat durata depozitrii. ,n alt dezavanta% const n faptul c virusul atenuat poate s produc o infecie persistent. -e asemenea, administrarea vaccinului atenuat poate s interfere cu virusul de tip slbatic care infecteaz natural i s domine p'n la anulare eficiena vaccinrii. -e e&emplu, virusul polio atenuat, se administreaz pe cale oral, dar poate s interfere cu o larg varietate de enterovirusuri. Gaccinurile inactivate conin virioni care, dup tratamentul cu agentul chimic inactivant nu pot s iniieze ciclul de multiplicare n substratul permisiv. Preparatul viral brut se obine prin cultivarea virusului ntr#un substrat permisiv! n oul embrionat de gin 6virusul influenza7, n culturi celulare de rinichi de maimu 6virusul polio7, sau n fibroblastele umane de embrion de gin 6polio, ru%eolic, rabic7. Preparatul brut se inactiveaz cu formol, acetil#etilenimina sau cu beta#propiolactona. Preparatele virale inactivate, utilizabile ca vaccin au avanta%ul riscului minim al infeciei. 0areori, preparatele inactivate conin virus infecios rezidual, care a rezistat tratamentului de inactivare, sau care provine din contaminarea cu un alt virus. Gaccinurile virale inactivate au c'teva dezavanta%e. ,neori, tratamentul cu un agent chimic anuleaz imunogenitatea unor proteine virale, astfel nc't rspunsul imun fa de virusul inactivat nu este protector. -e e&emplu, inactivarea cu formol a virusului ru%eolic anuleaz imunogenitatea proteinei de fuziune 6F7, iar vaccinul i pierde proprietatea protectoare. Gaccinurile inactivate nu stimuleaz imunitatea mediat celular 6mediat de limfocitele ;c7, care au rol decisiv n eliminarea celulelor infectate cu virus i n rezistena la infeciile cu o gam larg de virusuri. Preul de cost al vaccinurilor inactivate este mai mare. Preparatele virale inactivate, folosite ca vaccinuri, se obin din virusul rabic cultivat n $-, i n embrionul de ra, din virusul oreionului i din virusul influenza, cultivate n embrionul de gin, din virusul polio, cultivat n celulele de rinichi de maimu. ;oate sunt inactivate cu beta# propiolacton sau cu formol. Preparatul inactivat al virusului hepatitei + este o realizare recent, dar este foarte costisitor pentru c virusul nu se cultiv n sisteme celulare in vitro, iar tehnicile de purificare a virusului din serul pacienilor infectai cronic sunt foarte laborioase. Va""in* i $*1*nita e Iniial, vaccinurile s#au obinut din preparatele brute de virus, dup multiplicarea lor ntr#un esut 6in vivo7 sau n culturi celulare. Pe msur ce a fost posibil obinerea unor titruri nalte de virus, n scopul diminurii to&icitii vaccinului, s#a trecut la purificarea virusului i a unor componente virale. Gaccinurile subunitare conin proteine virale n care se gsesc localizate situsuri antigenice ma%ore i care se pot substitui virionilor n practica vaccinrii. -e e&emplu, pentru virusul influenza,

59:

vaccinul subunitar conine antigenele de suprafa OA i 1A. Preparatul este mai puin to&ic dec't virusul integral inactivat, dar este mai puin eficient n stimularea rspunsului imun. $elulele mamaliene reprezint un sistem optim pentru producerea proteinelor virale, utilizabile ca vaccinuri subunitare. $elulele n cultur se infecteaz cu virus i din lizatele celulare se purific antigene proteice. (n lizate se gsete o cantitate mare de proteine virale n e&ces, ne ncorporate n virioni. 8binerea vaccinurilor subunitare proteice, n culturile de celule animale ridic probleme dificile de purificare a proteinelor virale, din amestecul cu proteinele celulare. -ac se folosesc linii celulare continue, trebuie ndeprtat A-1 celular, potenial oncogen. Te(ni"i 4'&e ne &e '1,ine e a +a""in* i#' $*1*nita e -ezvoltarea biologiei moleculare i cunoaterea mecanismelor rspunsului imun, a stimulat preocuprile privind obinerea unor vaccinuri noi. ,tilizarea anticorpilor monoclonali a fcut posibil identificarea epitopior cu rol esenial n stimularea rspunsului imun, iar genele codificatoare ale antigenelor, au fost clonate prin tehnicile de inginerie genic. .enele codificatoare ale antigenelor protectoare, se pot izola dup fragmentarea genomului sub aciunea catalitic a enzimelor de restricie. Prin tehnologia A-1 recombinant, genele se inser n celula procariot 62. coli, +. subtilis7, sau n celulele eucariote 6levuri, celule mamaliene7. Fragmentarea genomului cu endonucleaze de restricie este posibil numai pentru dezo&iribovirusuri. .enomul A01 trebuie mai nt'i transcris n A-1c i ulterior poate fi utilizat n tehnicile de A-1 recombinant. .enomul A01 de polaritate pozitiv este adecvat scopului clonrii, dar nu a fost clonat A-1c al unei catene de A01 de polaritate negativ. $elulele de mamifere reprezint substratul optim pentru clonarea genelor i pentru producerea proteinelor virale, deoarece plierea, transportul celular i prelucrarea proteinelor sunt asemntoare celor ce au loc n celula infectat de virusul natural. $elulele produc cantiti mari de antigen viral, codificate de gena clonat. ;ehnicile de clonare genic se folosesc pentru sinteza proteinelor unor virusuri, care nu se multiplic in vitro, n sistemele celulare uzuale. -e e&emplu, gena pentru sinteza antigenului O+s a fost inserat ntr#o plasmid i clonat de levuri. Proteina viral este neglicozilat, dar este imunogen pentru om i induce sinteza anticorpilor protectori fa infecia natural. 3#au clonat genele codificatoare ale glicoproteinelor de O3G, G2+, OIG, G03 6virusul respirator sinciial7. Pentru purificarea glicoproteinelor virale din celulele infectate n care a fost clonat gena, s#a folosit tehnica cromatografiei de afinitate cu anticorpi monoclonali sau alte tehnici de separare 6cromatografia cu lectine, tehnici de separare fizic7. A-1 viral este funcional chiar n celula procariot, dup transferul prin intermediul unui vector 6plasmid sau fag7. Astfel s#au sintetizat antigene de poliovirus, antigenul O+s, antigenul virusului hepatitei A, OA i 1A ale virusului gripal.

59C

8 variant a tehnicilor de A-1 recombinant este aceea de obinere a vaccinurilor cu virusul vaccinal hibrid. .enomul po&virusurilor codific circa 599 de proteine. ,nele sunt eseniale pentru multiplicarea viral, dar un interes deosebit prezint genele neeseniale pentru ciclul de multiplicare. 2le reprezint circa <9M din genom i sunt grupate la e&tremitile genomului A-1 dublu catenar linear. In plus, genomul este mpachetat la& n virion. Aceste particulariti au permis obinerea, prin tehnicile de inginerie genic, a po&virusurilor recombinate, infecioase, capabile s e&prime genele strine inserate n genomul lor. A-1 viral este inserat n genomul virusului vaccinal prin recombinare la situsuri omologe. Girusul vccinal hibrid se multiplic n celulele permisive i genele inserate n genomul su codific antigenul O+s, antigenul rabic, antigenul O3G etc. Gaccinurile virale hibride sunt stabile i stimuleaz ambele compartimente ale rspunsului imun. 8 alt cale de producere a vaccinurilor virale atenuate, genetic stabile, implic obinerea mutantelor de deleie. Acestea au o capacitate diminuat de multiplicare, ceea ce echivaleaz cu atenuarea. @utantele prin deleie trebuie s#i pstreze infeciozitatea i imunogenitatea i s fie stabile genetic. Antigene peptidice sintetice. Producerea i utilizarea antigenelor sintetice s#au impus dup demonstrarea bazelor moleculare ale imunogenitii i dup studiile privind proprietile imunogene ale antigenelor artificiale. Pe de alt parte, s#a demonstrat ca macromoleculele proteice sau glicoproteice din structura virusurilor i a microorganismelor infecioase, au un numr mare de determinani antigenici, dar numai un numr limitat dintre acetia au semnificaie imunogen i un numr foarte mic sunt inductori ai rspunsului imun protector. 3inteza artificial a peptidelor a devenit posibil dup introducerea metodelor de secveniere a A-1. $unoaterea secvenei bazelor a permis diri%area secvenei de aminoacizi a proteinelor cu activitate biologic. Gaccinurile sintetice conin secvene polipeptidice sintetizate pe cale chimic. 2le includ determinani antigenici eseniali pentru inducerea unui rspuns imun protector fa de agenii patogeni corespunztori. $ondiia esenial pentru obinerea vaccinurilor sintetice este cunoaterea structurii chimice a determinanilor antigenici nativi ai virusului 6sau ai microorganismelor patogene7 i identificarea regiunilor imuno#dominante ale moleculei. ;ehnicile de cristalografie cu raze S, cromatografia n faza lichid, au permis identificarea situsurilor antigenice ma%ore ale unor virusuri foarte importante pentru clinic. -e e&emplu, s#a determinat structura tridimensional a hemaglutininei virusului gripal i s#au identificat regiunile calde ale moleculei, care, cu mare probabilitate, corespund determinanilor antigenici. 3#a stabilit secvena aminoacizilor, care a fost reprodus n proteinele sintetizate artificial. @area ma%oritate a peptidelor sintetice sunt secvene scurte, lineare de aminoacizi, care reproduc un fragment din structura primar a moleculei proteice. -ezavanta%ul ma%or este c secvenele sintetice nu reproduc configuraia spaial a determinanilor antigenici naturali, n special a celor discontinui. Acetia sunt alctuii din resturi de aminoacizi neadiaceni n structura primar a moleculei, dar pot fi %u&tapui n structura tridimensional a proteinei pliate. Astfel se e&plic slaba

59?

imunogenitate a peptidelor sintetice. Ameliorarea calitilor de imunogenitate ale peptidelor sintetice, utilizabile ca vaccinuri, depinde de gradul de asemnare a conformaiei lor, cu determinantul antigenic nativ. -imensiunile mici ale peptidelor sintetice impun cuplarea lor cu o molecul purttor, pentru creterea gradului de imunogenitate. 3#a folosit hemocianina de @egathura 6LO"7, cuplat prin intermediul glutaraldehidei sau a unei grupri tiol a unui rest de cistein, adugat la o e&tremitate a secvenei sintetice. 3#au sintetizat peptide care reproduc secvene de aminoacizi ale unor polipeptide ale virusului hepatitei +, cu diferite eficiene imunoprotectoare, precum i peptide care reproduc unele secvene ale hemaglutininei virusului gripal. Polipeptidele sintetice utilizate ca vaccinuri, au avanta%ul c nu conin alte componente care ar putea produce efecte secundare i stimuleaz rspunsul imun strict specific fa de epitopii antigenici critici ai agentului infecios. 3unt stabile indefinit i se produc la un pre de cost sczut. Au ns dezavanta%ul ma%or de a nu stimula rspunsul imun mediat celular. Gaccinurile care conin virioni inactivai i anato&inele se administreaz, n general, pe cale parenteral 6subcutan, intradermic, intramuscular7, n mod obinuit n trei in%ecii separate la intervale de C, I i respectiv 51 de zile. Gaccinurile bacteriene vii i cele virale atenuate se administreaz ntr#o singur doz, n general, pe cale parenteral. Gaccinul +$., ca i vaccinul polio infecios atenuat, la nou nscui se administreaz pe cale oral. Imunitatea consecutiv vaccinrii se instaleaz relativ lent, la circa 1C#59 de zile de la ultima in%ecie i are o durat variabil de la un vaccin la altul 6 n general, ntre 1 i I ani7, scz'nd treptat p'n la dispariia complet. Gaccinarea primar, ca i infecia, confer organismului o stare special de reactivitate imunitar # memoria imunitar # graie creia, orice contact ulterior cu agentul patogen respectiv, realizat pe cale natural6infecie i boal7 sau pe cale artificial6prin vaccinare7 declaneaz o )redeteptare* rapid a imunitii, care se manifest cu o intensitate mai mare dec't aceea a rspunsului imun postvaccinal. $ea de a II#a administrare a vaccinului declaneaz o reacie anamnestic 6de memorie7, cu o cretere brusc i masiv a titrului anticorpilor. -ei n general este solid, imunitatea postvaccinal este relativ, n sensul c unele persoane vaccinate pot totui s fac boala ntr#o form mai uoar, mai ales consecutiv unei infecii masive cu un agent patogen deosebit de virulent. -atorit faptului c se instaleaz lent, imunizarea prin vaccinare se folosete n scop profilactic pentru a evita riscul infeciei cu un agent patogen. I!"# tatea do,8#d t art + % al pa) v

3erurile imune sau terapeutice sunt produse biologice obinute din serul sanguin al unui animal imunizat prin vaccinare sau din serul unui convalescent imunizat prin infecie natural sau prin vaccinare. 3erul imun conine anticorpi specifici, capabili s neutralizeze aciunea antigenului corespunztor. Primele ncercri de folosire a serurilor n terapeutic dateaz din 1DDD, c'nd 0ichet

59I

i Oericourt au demonstrat c inocularea organismelor animale cu ageni patogeni, determin apariia n ser a anticorpilor, cu efect protector nu numai pentru organismul care i#a sintetizat, dar i pentru organismele crora li se in%ecteaz serul imun. (n general, serurile imune se prepar pe animale mari 6cal7, care sunt hiperimunizate, dup principiile imunizrii active, cu doze repetate cresc'nde de celule, virioni, anato&ine sau to&ine. 3erul sanguin obinut prin s'ngerarea animalelor imunizate este inactivat i tratat cu fenol 6ca prezervant7, controlat pentru sterilitate, inocuitate 6lipsa de nocivitate7 i pentru eficacitate 6titrul de anticorpi7. 3erul imun se administreaz sub form de in%ecii intravenoase, intramusculare sau subcutane, n special n scop terapeutic. -up cum specia organismului donor este sau nu aceiai cu a organismului receptor, serurile imune pot fi omologe 6serurile recoltate de la convalesceni sau de la voluntarii imunizai prin vaccinare7 sau heterologe 6serurile obinute prin imunizarea animalelor7. -up natura antigenelor folosite, se disting trei categorii de seruri imune! a7 seruri imune antimicrobiene, obinute prin administrarea antigenelor celulare 6de e&emplu, serurile antistreptococice i antimeningococice7N b7 seruri antito%ice, obinute prin imunizarea organismelor cu to&ine i anato&ine 6de e&emplu, serurile antidifteric i antitetanic7N c7 seruri imune mi%te 6antimicrobiene i antito&ice7, obinute prin imunizarea cu antigene celulare i cu to&ine 6de e&emplu, serul antigangrenos7. Imunitatea pasiv, consecutiv administrrii serurilor imune se instaleaz imediat dup in%ectarea intravenoas sau dup c'teva ore, pe msura resorbiei anticorpilor, n cazul administrrii pe alte ci. Imunitatea pasiv asigur o protecie de scurt durat 6circa <9 de zile7, datorit faptului c anticorpii primii n mod pasiv au un )timp de n%umtire* de 1: zile. Persistena lor este mai ndelungat dac serul este homolog. -up catabolizarea anticorpilor e&ogeni, organismul redevine receptiv la infecie. -atorit acestei particulariti, serurile imune sunt folosite n special pentru tratamentul unei maladii infecioase n evoluie 6seroterapie7. 3erurile imune 6antito&ice, antivirale, antibacteriene7 acioneaz prin opsonizarea moleculelor de to&in, a virionilor i a celulelor bacteriene. 2fectul este de neutralizare a to&inei i a infeciozitii virale, iar celulele bacteriene tapetate cu anticorpi devin sensibile la aciunea fagocitelor i a complementului. 3erurile imune pot fi folosite i n scop profilactic 6seroprofila&ie7, la persoane care au fost sigur n pericol de a se infecta i la care se urmrete prevenirea declanrii maladiei n forma clinic. Pentru a evita riscurile de infecie, care pot surveni dup epuizarea imunitii pasive, se recomand ca seroterapiei i seroprofila&iei s li se asocieze vaccinarea, pentru pstrarea strii de imunitate dup catabolizarea anticorpilor e&ogeni. -atorit riscului crescut al producerii reaciilor imune secundare 6alergie, oc anafilactic7, 8@3 recomand nlocuirea serurilor hiperimune obinute pe animale 6heterologe7, cu cele umane obinute de la donori hiperimunizai voluntar sau de la convalesceni 6homologe7. (n prezent se folosesc seruri imune concentrate i purificate, din care s#au eliminat circa <T: din proteinele serului sanguin, pstr'ndu#se numai fracia globulinic specific. Prin acest procedeu s#a redus foarte mult volumul serului in%ectat i se evit accidentele care ar putea rezulta din sensibilizarea organismului uman fa de proteinele nespecifice din serul heterolog.

59D

REZISTEN%A ANTIINFEC%IOAS NNNASCUT NES/ECIFIC

Prin imunitate sau re isten natural, nscut sau congenital se nelege capacitatea unui organism de a fi rezistent fa de un agent infecios, n absena unui rspuns imun detectabil. Aceast proprietate este nscut pentru organismele unei specii i n mod obinuit este absolut, adic toi indivizii speciei respective sunt rezisteni fa de un anumit patogen, chiar n cazul inoculrii cu doze mari ale agentului infecios. -e e&emplu, omul este rezistent la agenii patogeni care produc oono e 6agentul pestei bovine, al pestei porcine, al holerei ginilor etc.7, iar animalele sunt rezistente la gonoree, ru%eol, oreion, dizenterie, grip etc. 3tarea de rezisten natural nu este condiionat de contactul anterior cu agentul patogen respectiv, ci este consecina unei modaliti prompte de reacie a organismului. 3tarea diametral opus este aceea de receptivitate sau de sensibilitate 6susceptibilitate7, caracteristic organismelor care, ca rezultat al agresiunii unui agent patogen, reacioneaz prin apariia unui proces infecios. 3tarea de nereceptivitate este, uneori, relativ, n sensul c e&ist deosebiri individuale de reactivitate n cadrul speciei, unii indivizi fiind total rezisteni, iar alii prezint diferite grade de receptivitate. 0spunsul diferit al organismelor unei specii, la contactul cu un agent patogen, este rezultatul eficienei variabile a forelor de aprare a organismului, care, izolate sau n asociaie, opun agentului patogen o barier de neptruns, determin inhibarea multiplicrii sau distrugerea lui n esuturi sau umori, precum i neutralizarea i eliminarea substanelor to&ice eliberate. -iferenele sunt, probabil, rezultatul aciunii unor factori genetici. -e e&emplu, oile din Alger sunt mult mai rezistente la infecia crbunoas 6produs de B. anthracis7, dec't cele din 2uropa. "a primele, macrofagele conin un numr mai mare de lizosomi i enzimele componente au activitate hidrolitic mult mai intens. 3# au evideniat diferene de sensibilitate a raselor umane la tuberculoz! populaiile africane sunt mai sensibile. Influenele de ordin genetic asupra rezistenei naturale au condus la concluzii de ordin practic. Pe acest criteriu se face selecia populaiilor 6liniilor7 genetic pure ale animalelor de laborator, care au o rezisten foarte mare fa de un agent patogen sau o sensibilitate deosebit. 8ri de c'te ori un agent patogen vine n contact cu un organism neimunizat, iniierea procesului infecios este stopat, n primul r'nd prin intrarea n aciune a mecanismelor rezistenei constitutive, nespecifice, reprezentate de barierele mecanice 6tegumentul i mucoasele7, de componentele moleculare antiinfecioase a cror sintez este amplificat n reacia inflamatorie, de componentele celulare care au capacitatea de fagocito . ,lterior, dac barierele rezistenei nespecifice au fost depite, intr n aciune sistemul imunitar. @ecanismele de aprare antiinfecioas, specifice i nespecifice, sunt str'ns integrate funcional, astfel nc't, aciunea lor este totdeauna combinat. -e e&emplu, epiteliul tubului digestiv secret lizozim, ca factor al rezistenei nscute, iar n stratul de mucus care l tapeteaz se gsete IgA, ca factor al imunitii dob'ndite. Barierele mecanice de aprare a organismului sunt reprezentate de tegument i de mucoase. 2piteliul tegumentar i mucoasele sunt structurile care limiteaz accesul agenilor infecioi, constituind n primul r'nd bariere fizice, dar la acest nivel funcioneaz mecanisme moleculare i celulare cu rol neutralizant sau litic fa de microorganisme i virusuri. -ei contactul lor cu microbiota normal sau potenial patogen este permanent, aceste structuri sunt deosebit de eficiente ca bariere mecanice protectoare fa de infecii. Particularitile lor funcionale sunt conferite de integritatea anatomic, de secreiile proprii, de re noirea prin descuamare, de impermeabilitatea sau

59J

de permeabilitatea lor selectiv. Astfel, tegumentul intact este impermeabil pentru virusuri i microorganisme, dar alterarea structurii sale, n special dup arsuri, este urmat de infecii. (ig. B/. @ecanismele aprrii nespecifice a organismului. 3uprafaa tegumentului este acoperit cu o pelicul fin, format din produsele de secreie ale glandelor sudoripare i sebacee, cu pO acid 6pO = <,9#C,97, care au efect bacteriostatic. -up ndeprtarea 6prin splare7 peliculei de secreie, funcia protectoare antiinfecioas a tegumentului diminu. ;on3unctiva este prote%at prin aciunea mecanic i chimic a secreiei lacrimale, n care se gsete li o im. "izozimul este o protein cationic mic, prezent n toate fluidele organismului, cu efect enzimatic, hidroliz'nd legturile glicozidice ale peptidoglicanului parietal bacterian. Mucoasele sunt acoperite de secreii. "actoferina este o glicoprotein care leag Fe 5R. "a nivelul tractului respirator, rolul protector fa de agenii infecioi este ndeplinit de mucinele cu efect neutralizant, iar e&pulzarea lor este asigurat prin micarea cililor celulelor epiteliale i prin refle&ele de strnut i de tuse. @ucinele formeaz un strat mucos v'scos, ce tapeteaz mucoasele digestive i respirator. 2le capteaz microorganismele i antigenele, limit'nd penetrarea lor n esuturi. 8istatinele6peptide bogate n histidin7 formeaz o familie mic de peptide bazice de <#C B-, produse de celulele acinare salivare i pancreatice. 2le inhib dezvoltarea celulelor de ;. albicans, n forma infecioas sau neinfecioas. ;istatinele sunt fosfoproteine ce conin cistein, secretate de celulele acinare. Au efect inhibitor asupra creterii microorganismelor. Mucoasa gastric este prote%at de gelul mucos care o tapeteaz, ce formeaz un adevrat glicocali& i de aciditatea conferit de O$l, component al sucului gastric. +acteriile .ram negative sunt foarte sensibile la aciunea mediului acid gastric. -up neutralizarea aciditii gastrice cu substane alcaline, capacitatea sa protectoare diminu p'n la dispariie i infeciile se instaleaz rapid. ;otui, pe cale digestiv ptrund agenii patogeni a numeroase maladii infecioase, evit'nd bariera aciditii gastrice. +olul alimentar este protector fa de aciditate i n interiorul su e&ist condiii favorabile supravieuirii agenilor patogeni ingerai odat cu alimentele. 3ecreiile mucoase, n compoziia crora intr mucinele 6glicoproteine7, au rol important n aprarea antiinfecioas. @ucinele ader la suprafaa agenilor patogeni i a paraziilor, form'nd un strat molecular care mpiedic interaciunea lor cu celulele epiteliale. "or li se atribuie de asemenea, un rol neutralizant asupra to&inelor. (n acelai timp, secreiile formeaz o pelicul 6film7 protectoare, continu pe suprafaa mucoasei, constituind o barier greu de trecut pentru microorganisme n calea lor spre situsurile epiteliale de aderen. Pelicula elimin bacteriile care nu se pot adapta condiiilor de sub pelicul, la grania mucus#epiteliu. ,n alt mecanism nespecific care controleaz creterea microorganismelor la zona de contact cu mucoasa digestiv, este peristaltismul intestinal. @icroorganismele ader la mucoasa epitelial, prin intermediul unor molecule din categoria lectinelor, care realizeaz adevrate puni de legtur ntre suprafaa bacteriei i a celulei epiteliale. Peristaltismul intestinal mpiedic realizarea acestor interaciuni stabile, creind un flu& care deplaseaz microorganismele patogene, nainte ca ele s

519

colonizeze suprafaa epiteliului. 1umeroase infecii intestinale accelereaz peristaltismul. Anomaliile micrilor peristaltice sunt factori favorizani ai creterii e&cesive a populaiilor bacteriene ale microbiotei normale a tractului intestinal. In absena unui clearance mecanic normal al tractului digestiv, microbiota normal poate dob'ndi un rol patologic. )olul factorilor humorali n aprarea antiinfecioas nespecific . Oormonii au un rol esenial n reglarea unor mecanisme homeostatice. 2i nu modific specificitatea de reacie a celulelor limfoide. $oncentraiiile optime de hormoni determin o funcionalitate optim a sistemului imunitar, iar modificrile lor cantitative induc perturbri ale metabolismului limfocitelor. Pubertatea i sarcina se caracterizeaz prin creterea steroizilor plasmatici. $unoaterea multiplelor interaciuni dintre funcia imunitar i sistemul endocrin, precum i perfecionarea tehnicii de radioimunodozare 60IA7 a hormonilor, au condus la delimitarea unei noi discipline intermediare A imunoendocrinologia. Afeciunile de natur endocrin au un rsunet ma%or n raport cu rezistena nespecific fa de agenii patogeni. ,n e&emplu n acest sens este patologia infecioas asociat cu diabetul. +olnavii de diabet fac n mod frecvent infecii de tip tuberculos, infecii urinare i tegumentare de tipul furunculozelor. 2le se datoreaz fie unor dezechilibre locale provocate de lipsa insulinei, fie glicemiei crescute. Oormonii tiroidieni influeneaz rezistena fa de infecii. Oipotiroidismul mrete incidena infeciilor. ;orti olul are influen direct asupra limfocitelor. Oipofuncia corte&ului suprarenale mrete rezistena fa de agenii infecioi. glandelor

;apacitatea autosterili ant a umorilor este un factor decisiv al rezistenei nespecifice. In esuturi i n umori se gsesc substane cu rol antibacterian! lizozimul, lactoferina etc. Astfel se e&plic rezistena organismului fa de numeroasele agresiuni ale microorganismelor, care ptrund permanent n esuturi, pe diferite ci. @icroorganismele 6 n special bacterii7 trec din lumenul intestinal n s'nge, la toate animalele, inclusiv la om, datorit condiiilor speciale de permeabilitate a epiteliului, create n timpul absorbiei intestinale. Permeabilitatea mucoasei este mai accentuat la rumegtoare. "a om s#a evideniat c, postprandial, se produce o bacteriemie temporar, originar n cavitatea bucal, ca rezultat al masticaiei sau al peria%ului dentar. -up e&tracia dentar, e&ist chiar o perioad septicemic 6cu multiplicare bacterian7. -atorit strii de bacteriemie temporar, animalele nu trebuie hrnite o perioad de 19#59 de ore nainte de sacrificare. (n mod obinuit, strile de bacteriemie fiziologic nu sunt urmate de infecii clinice, datorit capacitii autosterilizante 6clearance7 a esuturilor i umorilor, care se manifest prin mecanisme variate! # condiiile tisulare improprii multiplicrii microorganismelor i n primul r'nd concentraia 85! microorganismele strict anaerobe nu se multiplic n esuturile bine o&igenate, ci numai n cele traumatizate sau devitalizate. -e e&emplu, ;. perfringens, agentul gangrenei gazoase crete n plgile musculare provocate de e&plozii, iar M. tuberculosis 6strict aerob7 se localizeaz preferenial la nivelul esutului pulmonar. -up distrugerea litic a granulomului, se formeaz un esut cazeos n care 85 nu difuzeaz. 3e creeaz condiii de anaerobie, improprii multiplicrii celulelor de M. tuberculosis i astfel evoluia infeciei este limtatN # substane din categoria lizinelor

511

# properdina # sistemul complement # interferonii # proteina $ reactiv 0olul acestor componente humorale n aprarea antiinfecioas i mecanismele aciunii lor vor fi prezentate n acest capitol. SISTEME CELULARE CU ROL N REZISTEN%A ANTIINFEC%IOAS NES/ECIFIC

0ezistena antiinfecioas a organismului uman i animal este rezultatul aciunii unor sisteme celulare cu aciune nespecific, independent de caracterul nonself al unei substane sau al unui agent infecios. Funcia principal a sistemelor celulare cu aciune nespecific este fagocito a. 2le intr n aciune dup ce agentul infecios a depit barierele mecanice protectoare ale organismului. "istemul fagocitar include celule de origine me odermic, cu distribuie difuz n organism, care au capacitatea de a ngloba molecule nonself, virusurile i celulele strine i de a le distruge prin procese enzimatice de digestie intracelular. Fenomenul fagocitozei 6phagein = a m'nca7 a fost descoperit de Ilia @etchniBoff 61DD57. 2l a dat denumirea generic de )fagocite*, celulelor libere sau fi&e din esuturi care au capacitatea de a ingera particule strine. Fagocitoza este cel mai prompt mecanism de aprare i, n filogenie, deriv din funcia de nutriie a protozoarelor i metazoarelor inferioare. "a organismele superioare, fagocitele ndeplinesc activiti fiziologice importante! # elimin moleculele organice proprii care au devenit nefuncionale i reintroduc n economia organismului, constituienii lor chimiciN # la vertebratele superioare, fagocitele ndeprteaz celulele mbtr'nite, au rol n remodelarea tisular n embriogenez, n remanierea osoas etc. I. @etchniBoff a clasificat fagocitele n dou categorii! # microfage 6P@17 A celule care fagociteaz particule mici # macrofage A celule care nglobeaz particule mari, chiar celule ntregi. (n 1J5:, Aschoff a creat conceptul de sistem reticulo1endotelial 63027, n care a inclus! # fagocitele propriu#zise # celulele reticulare ale sinusurilor venoase din splin i ganglioni

515

# celulele endoteliale ale vaselor sanguine i limfatice # fibroblastele din esutul con%unctiv. (n 1J5I, Goltera a propus denumirea de sistem reticulohistiocitar 630O7. (n 1JI9, fagocitele au fost mprite n dou categorii funcionale! # fagocite )profesioniste*, capabile s ingere particule strine tapetate cu Ig sau cu componente ale complementului 6$<7. 2le au receptori pentru regiunea Fc a Ig i pentru $<. .rupul include fagocitele mononucleare i polimorfonucleareN # fagocite )neprofesioniste*, cele care nu au astfel de receptori, funcia fagocitar fiind facultativ. Aceast categorie include fibroblastele, celulele reticulare i celulele epiteliale. $elulele nglobeaz materialele nonself particulate i solubile prin urmtoarele mecanisme! pinocito , endocito mediat de receptori 62@07 i fagocito . Pinocito a este procesul prin care o celul nglobeaz fluidele i soluiile i este foarte asemntoare cu 2@0, proces prin care celulele nglobeaz macromoleculele, virusurile i particulele mici. Pinocitoza i 2@0 au n comun mecanismul bazat pe clatrin i se produc independent de polimerizarea actinei. (agocito a semnific nglobarea particulelor mari6mai mari de 9,C Um7 i se produce printr#un mecanism activ, dependent de actin, dar independent de clatrin. Protozoarele fagociteaz pentru obinerea nutrienilor, iar la Meta oa, fagocitoza este funcia, n primul r'nd, a unor celule specializate 6macrofagele, neutrofilele7 i a evoluat ca un proces care susine o varietate de procese biologice! nglobarea i distrugerea agenilor infecioi i a celulelor senescente, remodelarea tisular n cursul dezvoltrii embrionare, rspunsul imun, procesul inflamator. Si$te4*# !ag'"ita 4'n'n*"#ea .S F M0

Fagocitele mononucleare se gsesc n toate esuturile, dar n condiii obinuite, proliferarea lor are loc numai n mduva osoas. 3 F @ reunete toate tipurile de celule cu capacitate fagocitar bine e&primat, precum i precursorii lor. $onceptul 3 F @ a fost elaborat de van Furth 61JI57, sub egida 8@3. $elulele 3 F @ i au originea n celula stem din mduva osoas. $elula stem nu s#a identificat, dar este nedifereniat, cu activitate mitotic nalt, este pluripotent. 2a genereaz nu numai precursorul macrofagului, ci i precursorul eritrocitului, al polimorfonuclearelor i megacariocitului. Pe msur ce se difereniaz, descendenii celulei stem i pierd potenialitatea i devin precursori separai ai liniilor monocitar, polimorfonuclear, eritrocitar i plachetar . Monoblastul este prima celul identificat, pe linia de difereniere a fagocitelor mononucleare. Are receptori pentru regiunea Fc a Ig, fagociteaz i, in vitro, ader de suport. @onoblastul se divide o singur dat n dou promonocite.

51<

Promonocitul, localizat ca i monoblastul n mduva osoas, este o celul mai mare 61C Um7, citoplasma este acidofil, bogat n poliribosomi. .ranulaiile azurofile conin mielopero&idaz. $ele dou celule rezultate din diviziunea unic a promonocitului sunt monocite. Monocitul rm'ne n mduva osoas timp de 5: de ore de la difereniere, trece n s'nge i devine celul circulant pentru alte 5:#I5 de ore. In condiii normale, celulele care circul la contactul cu endoteliul capilar, migreaz spre diferite esuturi i caviti, unde devin macrofage re idente sau migreaz spre un focar de inflamaie! # n plm'n, monocitul se difereniaz direct n macrofagul alveolar, fr maturare n esutul interstiialN # n sinusoidele ficatului, monocitul devine celul FupfferN # n cavitatea peritoneal, monocitul vine direct din capilare i devine macrofag al seroasei. (n condiii normale, puine macrofage rezidente se divid i rm'n viabile 1#< luni. 1u e&ist dovada c ele recircul prin limf spre vasele sanguine. Probabil c mor n esuturi sau migreaz spre ganglionii limfatici. In cazul unei infecii locale sau unui proces inflamator, factorii chimiotactici i ali mediatori ai inflamaiei A citochine i molecule icozanoidice A stimuleaz monocitele s migreze spre situsul lezat, unde se difereniaz n macrofagele e&udatului. -up migrarea n esuturile i cavitile organismului, macrofagele variaz n privina caracteristicilor morfologice i funcionale i au denumiri diferite! celule Lupffer n ficat, macrofage pulmonare i alveolare n plm'n, celule microgliale n 31$. -istribuia celulelor 3 F @ n cele trei compartimente este urmtoarea! ;ipul de celul # $elula stem # @onoblastul (n mduva osoas # Promonocitul # @onocitul # @onocitul circulant @acrofagul tisular 6rezident7 # Oistiocit (n s'nge (n esutul con%unctiv din tegument (n esutul limfoid secundar6ganglioni, @A";7 (n mduva osoas (n plm'n 6macrofage alveolare i tisulare7 (n membrana sinovial a cavitilor articulare (n membranele seroase ale cavitilor peritoneal, "ocalizare

51:

pleural, cardiac (n glande #8steoclastul 6rezultat prin fuziunea (n esutul osos monocitelor7 #@icroglia 6pare a fi de origine monocitar deoarece nu se evideniaz (n 3 1 $ nainte de formarea vaselor sanguine7 # @acrofagul intravascular $elulele Lupffer #@acrofagul %u&tavascular # @acrofagul din e&udat Oistiocitul din pulpa roie a splinei, din mduva osoas, din sinusurile ganglionare.

# $elulele epitelioide # $elulele gigante multinucleate 6se formeaz prin fuziunea macrofagelor e&udatului7. (n 3F@ nu sunt cuprinse!

(n focarul inflamator

# celulele reticulare, de origine a limfocitelor, din mduva osoas # celulele reticulare ale sinusurilor venoase din splin i ganglioni # celulele endoteliale ale vaselor sanguine i limfatice # fibroblastele # celulele "angerhans # celulele interdigitate #celulele dendritice din ganglionii limfatici. 8riginea celulelor dendritice nu se cunoate cu certitudine, dar pare a fi comun cu a monocitului. .lucocorticoizii induc o scdere rapid a monuclearelor circulante, inclusiv a monocitelor, dar i o dispariie rapid a celulelor dendritice din esuturi. Acesta este un argument care spri%in ipoteza c celulele dendritice deriv din precursori din mduva osoas. -ei ele endociteaz, prelucreaz antigenul i l prezint, nu pot fi considerate ca fagocite mononucleare, deoarece nu s#a stabilit cu fermitate originea lor monocitar. ;elulele ,angerhans deriv din celule mononucleare circulante care migreaz n tegument. In tegument, celulele "angerhans rm'n un interval scurt, nainte de a migra pe cale limfatic, sub

51C

forma celulelor interdigitate.

cu

voal,

spre

ganglionii

limfatici

unde

devin

celule

dendritice

Fagocitele mononucleare intravasculare i %u&tavasculare sunt celule care vin n contact direct cu s'ngele 6celule Lupffer, histiocitele din cordoanele pulpei roii splenice7 sau cu limfa 6macrofagele intra# sau e&trasinusoidale din ganglionii limfatici7. 2le supravegheaz aceste fluide pentru a capta materialele nonself, pe care le prelucreaz i le prezint limfocitelor. $elulele Lupffer sunt aezate n ntregime n lumenul sinusoidelor hepatice i nu au nici o cone&iune evident cu endoteliul sinusoidal. -atorit poziiei, macrofagele splenice %u&tavasculare, ca i cele din mduva osoas, trebuie s strbat endoteliul, nainte de a fagocita materialul nonself. @acrofagele intra i %u&tavasculare sunt fi&e. (ig. B@. $elulele sistemului fagocitar mononuclear. @acrofagele tisulare i cele asociate vaselor formeaz o populaie de 1I#59 miliarde, ntr#un organism de I9 de Bg. 2le i au originea n monocitul sanguin sau rezult prin proliferarea tisular a monocitelor imigrate. 3e pare c predomin cele de origine monocitar. -atorit localizrii lor diverse i a condiiilor fiziologice locale foarte diferite 6condiii cvasi# anaerobe pentru cele peritoneale i o bun aerare pentru cele pulmonare7, macrofagele sunt heterogene din punct de vedere morfologic, dar au caracteristici structurale i funcionale comune! # sunt bogate n lizosomi 6pentru digestia enzimatic a substanelor nonself7N # membrana citoplasmatic formeaz prelungiri fine denumite voaluri hialoplasmatice, cu dimensiuni de p'n la %umtate din diametrul macrofagului. In microscopia scanning, suprafaa macrofagului se aseamn cu petalele unui trandafir. -atorit mobilitii membranei, macrofagul are dou proprieti importante! # ader de suportul solid # endocitea 6pinociteaz i fagociteaz7. Fagocitele sanguine au proprietatea de a migra din patul vascular, n esuturi, unde devin macrofage rezidente, dar mobile n interiorul esutului. -eplasarea tisular a macrofagului este nt'mpltoare 6neorientat de stimuli chimiotactici7, i se numete chimiochine sau este orientat i se numete chimiota%ie. -eplasarea orientat este uurat de enzimele pe care macrofagul le secret, active la pO#ul tisular.

51?

Re%eptor

!e!,ra#ar

!a%ro+a$"l"

3istemul fagocitar mononuclear are capacitatea de a discrimina un numr mare de ageni patogeni, n raport cu selful, utiliz'nd un numr relativ restr'ns de receptori, dei agenii infecioi au tendina de a suferi mutaii. Aceast tendin este contracarat de e&istena unor receptori care recunosc componente antigenice bine conservate, care nu se gsesc la eucariotele superioare, dar ndeplinesc roluri eseniale n biologia agenilor patogeni i sunt supuse proceselor mutaionale cu o rat sczut 6mananii din peretele levurilor, peptidele formilate ale bacteriilor, "P3, acizii lipoteichoici7. @acrofagul este o celul multifuncional, care primete o multitudine de semnale din mediul e&tracelular, prin intermediul receptorilor membranari, capabili s recunoasc liganzi ai altor celule sau liganzi moleculari solubili. )eceptori pentru regiunea (c a tuturor izotipurilor de lan greu al Ig. $ei mai numeroi sunt receptorii pentru regiunea Fc a Ig. monomer 6Ig. citofil7, Ig. agregat i Ig. din comple&ele imune 6Fc \ 0 I, Fc \ 0 II, Fc \ 0 III7. Aceti receptori constituie legtura crucial dintre celulele fagocitare efectoare i limfocitele care secret imunoglobuline. Fc \ 0 I 6$-?:7 este receptorul de mare afinitate, leag Ig. monomer, iar e&primarea sa este stimulat de IF1. Aceti receptori mediaz A-$$. Fc \ 0 II 6$-<57 este receptorul de mic afinitate, leag slab Ig. monomer i are afinitate de 19 ori mai mic dec't Fc \ 0I, dar leag uor comple&ele imune. Fc \ 0 III 6$-1?7 au afinitate sczut pentru Ig. monomer i se gsete pe macrofagele tisulare, neutrofile i celulele 1L. Anticorpii citofili se cupleaz la suprafaa celulei, prin intermediul receptorilor pentru Fc, iar ulterior leag antigenul specific. 0eceptorii pentru Fc al Ig2 au o densitate semnificativ. "egarea ncruciat a receptorilor de Fc \, de ctre comple&ele imune care conin mai mult de o molecul de Ig., stimuleaz activitatea macrofagului. @acrofagele alveolare au un numr mare de receptori pentru Fc al Ig2. )eceptorii pentru complement 6$01, $0<, $0:7 leag fragmentele $<b, $:b, primul fiind foarte eficient ca opsonin, dar mai puin eficient ca mediator al ingestiei. )eceptorii pentru limfochine leag mediatorii moleculari secretai de limfocitele activate! @IF, @AF, IF1. 3ub influena acestor mediatori, macrofagele devin foarte active n prezena celulelor nonself. )eceptorii pentru glicoproteinele ?lectine5 care au glucide terminale resturi de fucozil, manozil, glucozil, acetil#glucozamin, sunt foarte importani pentru recunoaterea celulelor strine, a hematiilor mbtr'nite, a fungilor, a bacteriilor. )eceptorul de mano 6@07 este o lectin a membranei macrofagelor tisulare, dar lipsete pe monocitul circulant. Acest receptor pare a fi important pentru ingestia agenilor patogeni de ctre macrofagele tisulare. 0eceptorul de manoz recunoate i leag cu mare afinitate microorganismele

51I

care au pe suprafaa lor molecule cu resturi de mano i fuco , av'nd rol important n fagocitoza levurilor i protozoarelor parazite. @onocitele sanguine nu e&prim @0, ceea ce sugereaz c aceti receptori sunt eseniali pentru evenimentele inflamatorii. )eceptorii pentru fibronectin sunt implicai n aderena monocitelor la zonele de discontinuitate ale endoteliului vascular i n ingestia particulelor opsonizate cu fibronectin. )eceptori pentru proteinele care conin (e, ceea ce e&plic rolul macrofagului n metabolismul Fe. )eceptori pentru hormoni6de e&emplu, receptorul pentru insulin7. )eceptorii pentru antibacteriene nscute. ,P". $elulele 3F@ sunt eseniale pentru mecanismul imunitii

@acrofagul posed un mecanism fin de recunoatere a "P3. -e multe ori, 1 pgTml 6circa 199 f@7 stimuleaz un rspuns detectabil. In soluie apoas, "P3 formeaz comple&e macromoleculare, analoge miceliilor fosfolipidice. Aceste comple&e se pot insera direct n membrana plasmatic i altereaz fluiditatea ei, iar la concentraii mari, produc dezagregarea membranei celulare. -e aceea, s#a considerat c miceliile "P3 se pot insera direct n membrana plasmatic. -ar n condiii fiziologice, "P3 difer de varianta purificat, n soluii apoase. "P3 n plasm, n fluidul interstiial sau "P3 asociat suprafaei bacteriilor .ram negative, este legat de diferite proteine plasmatice, care uureaz clearance#ul lor. "P3 este opsonizat de o protein 6"+P7 care leag "P3 6,P3 binding protein7, iar comple&ul este recunoscut de receptorul opsonic al suprafeei macrofagului A $-1:. $-1: se asociaz cu suprafaa celulei printr#o legtur glicolipidic. $omple&ul ternar format din "P3#"+P#$-1: nu transmite semnalul activator, dar activeaz o caten proteic transmembranar. $aracterizarea comple&elor "P3#proteine plasmatice a fost esenial pentru nelegerea interaciunii "P3#macrofag. $oncluzia este c macrofagul leag "P3 nativ cu o eficien foarte sczut, dar leag foarte eficient comple&ele "P3#proteine plasmatice, pe calea receptorilor specifici. (ig. B.. ,P" sunt recunoscute de un receptor 6$-1:7, dup cuplarea lor cu o protein plasmatic 6"+P = ,P3 binding protein7 i formarea comple&ului "+P#"P3. Proteinele plasmatice care leag "P3 sunt anticorpii spe#cifici fa de antigenul somatic 687, complementul, lipoprotei#nele cu densitate nalt 6O-"7, albumina, proteina care leag "P3 6"+P7 i septina. "+P este produs de hepatocite i are valori normale medii de I UgTml, iar n faza acut, la om, de 559 UgTml. $hiar dac este un reactant de faz acut, "+P se gsete n concentraii suficiente n plasma normal, pentru a avea rol de aprare n timpul infeciei. de -iferiii receptori fagocitari trimit semnale spre citoscheletul de actin i iniiaz mecanismele internalizare.

51D

A%t varea

!a%ro+a$"l"

Activarea macrofagului are loc n condiiile stimulrii antigenice i este un proces care decurge stadial! # recrutarea monocitului imatur din s'nge i diferenierea n celul capabil s reacioneze n prezena limfochinelorN # dob'ndirea proprietii de citoto&icitate sub aciunea unor semnale secundare 6cantiti mari de limfochine, "P3 etc.7. "imfocitele ;h1 sunt principalele celulele activatoare ale macrofagului, prin intermediul interferonului E. Interaciunea dintre limfocitul ; i macrofag st la baza imunitii mediate celular i a hipersensibilitii nt'rziate. ,n alt factor, foarte potent, activator al macrofagului este lipopoli aharidul bacteriilor .ram negative 6"P37. @acrofagul activat prezint urmtoarele particulariti! # are dimensiuni mai mari, este mai mobil, voalurile membranare sunt mai evidenteN # metabolismul o&idativ al glucozei este mult mai activN # coninutul enzimatic lizosomal este crescut i crete secreia de proteazeN # crete rata procesului de endocitozN # crete activitatea antibacterian i antitumoral # crete sinteza de monochine! I"#1 i ;1F. Activarea este nespecific, ceea ce e&plic faptul c macrofagul activat de componente antigenice ale celulelor de M. tuberculosis, este mult mai eficient n activitatea de clearance a oricror celule nonself, bacteriene, fungice sau tumorale. Principala monochin mediatoare a aciunii locale sau sistemice a macrofagului activat este ;1F Q, iar intermediarii reactivi ai 85 i 15 au rol ma%or n liza bacteriilor parazite intracelular. ;1F poate avea rol determinant al efectului letal al "P3. Animalele care au primt o doz letal de +. coli, supravieuiesc dac li se administreaz A@$ ce neutralizeaz ;1F. Aceasta denot c efectul letal al "P3 se datoreaz hiperreactivitii gazdei fa de agentul infecios i infeciei sau efectului to&ic direct al "P3. -ac macrofagul este activat prin stimulare antigenic de durat sau nu reuete s elimine agenii patogeni intracelulari, poate deveni refractar la stimularea ulterioar. (ig. BB. Macrofagele sunt celule eseniale pentru funcia de aprare. 2le constituie o linie de aprare, nainte de activarea specific a limfocitelor ; i +. Particip la elaborarea rspunsului, n calitatea lor de celule care

51J

prelucreaz i prezint antigenul. @acrofagele sunt activate de limfochinele eliberate de celulele ; i elibereaz limfochine cu funcii stimulatoare ale funciei imunitare 6dup 0oitt, 1JJ<7.

E#do% toza 2ndocitoza este activitatea biologic a macrofagului, cea mai bine e&primat. Ingestia macromoleculelor dispersate n faz lichid se numete pinocito 6pinos, grec = a bea7. Pinocitoza are loc prin invaginarea membranei, rezultatul fiind formarea unor vezicule mici 69,5 Um7 i se numete micropinocito sau a veziculelor mai mari 6p'n la 1#5 Um7 i poart denumirea de macropinocito . @icropinocitoza este constitutiv 6adic are loc n absena unui stimul declanator din mediu7 i are o rat foarte intens. In <9 de minute se internalizeaz echivalentul ntregii suprafee celulare. @acropinocitoza are o rat minim n condiii de repaus, in vitro, dar este stimulat de serul adugat n mediu, de comple&ele imune, de mucopolizaharide etc. 2ndocitoza mediat de receptori este un proces specific prin care macromoleculele i antigenele particulate sunt nglobate dup asocierea lor cu un receptor membranar. $apacitatea de ingestie a macrofagului se materializeaz n urmtoarele funcii! # funcia citocateretic, adic de epurare sau de sechestrare a celulelor senescente6de e&emplu, hematii7. Prin mbtr'nire, hematiile i pierd acidul sialic din glicopropteinele membranare i e&pun componente care sunt recunoscute de macrofag. In focarul inflamator, macrofagele cur terenul de celulele moarte i asigur vindecarea leziunilor inflamatoriiN # funcia anti%enic 6clearance7, adic de ndeprtare a materialelor strine, prin fagocitozN # funcia imun, const n participarea macrofagului la elaborarea rspunsului imun, prin prelucrarea Ag i cooperarea cu limfocitele. -a$o% toza Fagocitoza este procesul de ingestie a materialelor particulate, mai mari de 9,C Um, printr#un mecanism dependent de actin i de obicei, independent de clatrin. Fagocitoza presupune aderena particulei la suprafaa macrofagului i ingestia ei. "a protozoare, funcia fagocitar are semnificaia ingestiei nutrienilor, dar la metazoare este un proces comple& realizat de celule specializate! macrofage i polimorfonucleare. Funcia fagocitar a macrofagului este esenial pentru nglobarea i degradarea moleculelor nonself, a agenilor infecioi i a celulelor senescente. @acrofagul este o celul esenial pentru elaborarea rspunsului imun i pentru rspunsul inflamator. Fagocitoza este foarte important n embriogenez, pentru remodelarea tisular. *derena semnific realizarea contactului fizic dintre particula strin i membrana fagocitului i este mediat de moleculele de suprafa ale particulei, de sarcinile sale electrice sau de opsoninele din umori. In funcie de mecanismul aderenei particulei strine la suprafaa celulei fagocitare se disting dou tipuri de fagocitoz!

559

# fagocito a nemediat de receptori, condiionat n principal de fore ionice. Astfel sunt ingerate particulele inerte 6de late&, de crbune, siliciu, azbest etc.7, moleculele agregate de albuminN # fagocito a mediat de receptori este un proces prin care antigenele particulate sunt nglobate prin intermediul unui receptor membranar i este activ n ingestia bacteriilor. 0eceptorii membranari pentru lectine, leag nespecific componentele glucidice ale celulei nonself. ,nele lectine ale suprafeei bacteriene pot s medieze legarea specific a bacteriilor de P@1 i macrofage, n absena opsoninelor, rezultatul fiind activarea fagocitului, ingestia i digestia bacteriei. Procesul a fost denumit lectino1fagocito . "ectino#fagocitoza este definit ca o fagocitoz non#opsonic, bazat pe recunoaterea dintre receptorii suprafeei fagocitului i glucidele suprafeei celulei fagocitate. "a nevertebrate, se crede c lectinele suprafeei fagocitelor au rol de recunoatere a moleculelor nonself. Pe suprafaa macrofagului se gsesc nu numai receptori de lectine, ci i lectine cu funcie endocitar, cu rol n clearance#ul glicoproteinelor plasmatice i chiar al eritrocitelor mbtr'nite sau al bacteriilor a%unse n mediul intern. -e e&emplu, lectina cu specificitate de mano de pe suprafaa macrofagului, are rol n aprarea antimicrobian nespecific. Aceast lectin leag celulele infecioase ce e&pun pe suprafaa lor grupri cu manoz, uur'nd fagocitoza i digestia lor intracelular. -e cele mai multe ori, interaciunea dintre fagocit i celula strin este mediat de receptori specifici pentru diferite opsonine! Ig, $, fibronectin etc. $ei mai importani sunt receptorii pentru Fc. 0eceptorii pentru regiunea Fc a imunoglobulinelor aparin la dou clase! cei implicai n funciile efectoare i sunt activatori ai funciilor macrofagului i cei care transport imunoglobulinele prin barierele epiteliale. Fagocitele recunosc i leag celulele opsoni ate. ;oate opsoninele mediaz legarea celulei strine de suprafaa fagocitului i stimuleaz ingestia sa. (ig. 722. "tadiile nglobrii unui patogen ipotetic de ctre macrofage. 0eceptorii cu rol n recunoaterea fagocitar sunt Fc0, $0, @F0 6manoz7, $O8 6glucidic7. FA#11 6macrosialina7 este o glicoprotein pan# macrofagic, e&primat abundent n fagosomi 6dup .ordon, 1JJD7. Lpsoninele. -enumirea 6opsein, grec = a aduce de m'ncare7 semnific o categorie divers de molecule care au rolul de a uura ingestia particulelor strine, funcion'nd ca puni de legtur ntre fagocit i particula nonself. 8psonina ma%or termostabil este Ig., iar cea termolabil este reprezentat de proteinele complementului. $ele mai importante opsonine sunt anticorpii specifici ai sublaselor Ig.1 i Ig.<, deoarece se leag cu cea mai mare afinitate de receptorii pentru Fc \. "egarea anticorpului pe particula nonself este mediat de fragmentul Fab al moleculei Ig., iar regiunea Fc interacioneaz cu receptorii Fc \ ai membranei fagocitului. Fagocitele umane pot e&prima < clase de receptori Fc \! Fc0I, Fc0II i Fc0III. Pentru interaciunea dintre Ig. i receptorul su este esenial ca Ig. s fie localizat pe suprafaa e&tern a particulei, pentru ca Fc s fie accesibil receptorului pentru Fc. IgM ca atare nu are rol opsonizant, deoarece fagocitele umane nu au receptori pentru Fc al Ig@. Ig@ fi&eaz complementul pe calea clasic, cu mare afinitate i particulele tapetate cu Ig@ pot

551

fi opsonizate cu peptidele derivate din fi&area $. @oleculele de $<b tapeteaz celula bacterian, form'nd n %urul ei o ptur molecular. Pentru iniierea ingestiei este necesar al II#lea semnal, transmis prin receptorii membranari ai macrofagului. Ig* favorizeaz fagocitoza microorganismelor i eritrocitelor. IgA activeaz calea altern a complementului i astfel capacitatea sa opsonizant crete prin legarea proteinelor complementului la suprafaa particulei. Ig+ nu are proprieti opsonizante. $omponentele opsonizante ale complementului sunt $1W, $:b, $<b, i$<b 6produsul de degradare al lui $<b7. Fragmentele derivate din $< sunt cele mai importante opsonine, generate prin activarea complementului pe calea clasic sau altern. Produsul ma%or al clivrii lui $< 6$<b7 se leag covalent pe suprafaa particulelor. M. tuberculosis leag fragmentele de $<b i $<bi, care uureaz nglobarea lor n celula fagocitar. Inglobarea pe aceast cale reduce e&punerea celulei bacteriene la compuii to&ici ai 85. $<b este opsonizant pentru bacteriile .ram negative ce cresc n forme coloniale 0, deoarece lipsesc catenele polizaharidice terminale ale "P3. "P3 este activator al cii alterne. Formele coloniale 3 sintetizeaz "P3 complete i dup opsonizare nu sunt fagocitate. $<b este opsonizant pentru celulele eucariote i mediaz interaciunea citoto&ic a macrofagului cu celula int. (n focarul de inflamaie se sintetizeaz o diversitate de proteine, multe dintre ele av'nd rol opsonizant. ;olectinele formeaz o familie de lectine plasmatice, cu activitate opsoni ant. Activeaz complementul i au rol n aprarea antiinfecioas. -omeniul lor lectinic mediaz legarea de structurile glucidice ale suprafeei microorganismelor, iar secvenele de tip colagenic sunt implicate n legarea de receptorul de colectin al suprafeei fagocitelor. Medicamentele induc modificri ale suprafeei bacteriilor i schimb specificitile opsonice ale microorganismelor. Antibioticele inhibitoare ale sintezei proteinelor sunt foarte eficiente n acest sens. Proteina @ pe suprafaa celulelor de "treptococcus p!ogenes inhib activarea complementului. -iminuarea cantitativ a proteinei @ 6dup tratamentul cu clindamicin i lincomicin7 determin o opsonizare crescut cu $< i o cretere a activitii fagocitelor. Acelai efect, atribuit sintezei sczute de protein A, s#a constatat fa de celulele de ". aureus. M. leprae posed capacitatea de a lega fibronectina, care apoi are rolul unei puni ntre bacterie i receptorul de fibronectin al celulei gazd. (a a de ingestie este condiionat de mobilitatea receptorilor membranari ai fagocitului. Gacuola format prin invaginarea membranei, se nchide asemenea unui fermoar. -ac receptorii membranari nu sunt suficient de mobili, sau dac particula strin nu are un numr suficient de grupri care s interacioneze cu receptorii fagocitului, ingestia nu are loc. Ingestia este un proces activ, dependent de energie. $apacitatea unui fagocit de a ingera comple&e imune 6ingestie mediat de receptorii pentru Fc i $<b7 se numete imunofagocito . -up ce s#a format, vacuola de fagocitoz este orientat spre aria perinuclear, unde fuzioneaz cu lizosomii i devine fagoli osom.

555

-up ingestia unei bacterii sau a unei particule inerte e&ist urmtoarele posibiliti de evoluie! # digestia # persistena bacteriei n fagocit # multiplicarea n celula fagocitar # liza fagocitului i pstrarea viabilitii celulei bacteriene. $igestia corespunde situaiei n care celulele bacteriene, inclusiv cele patogene, sunt degradate de enzimele lizosomale, active la pO acid. 3imultan sunt digerate i unele proteine membranare ale vacuolei de fagocitoz, iar receptorii membranari sunt recirculai spre suprafaa celulei pentru a#i relua ciclul. Persistena particulei ingerate are loc n dou situaii! # unele fiind inerte, nu pot fi digerate 6de e&emplu, pulberile7 # unele bacterii patogene 6M!cobacterium7 posed strategii de succes, care le permit s se multiplice n interiorul celulei fagocitare. Particulele inerte 6azbest, siliciu, crbune7 nu sunt atacate de echipamentul enzimatic al macrofagului i sunt pstrate mult timp. -ac acumularea lor depete o limit critic 6 n special n plm'ni7 se produc procese inflamatorii locale cu consecine patologice. "a mineri se cunosc afeciuni pulmonare profesionale! antracoza, silicoza, azbestoza 6stocarea pulberilor n macrofagele pulmonare7. 1efiind degradabile, acumularea e&cesiv a pulberilor n macrofage produce moartea celulei i eliberarea materialelor depozitate. $iclul nglobrii este reluat de alte macrofage. @acrofagul activat elibereaz enzime hidrolitice. 0ezultatul este reducerea progresiv a suprafeei respiratorii, ca o consecin a nlocuirii epiteliului alveolar, cu esut con%unctiv 6stare patologic denumit emfi em7. Rol"l !a%ro+a$"l" 0# aprarea +a' de ,a%ter le %" lo%al zare %el"lar

Practic, orice celul poate fi infectat, dar fagocitele mononucleare sunt infectate mult mai adesea, deoarece ele fagociteaz bacteriile, au via lung i capacitate sterilizant antibacterian limitat. -in aceast cauz, fagocitele mononucleare sunt colonizate de bacterii ca M. tuberculosis, M. bovis, M. leprae, ,. monoc!togenes. Pe de alt parte, monocitele fagocitare sunt efectori ai aprrii antibacteriene. Pentru a contracara aciunea fagocitelor, bacteriile cu localizare intracelular au elaborat modaliti strategice care le permit supravieuirea n mediul citoplasmatic ostil. @ultiplicarea agentului infecios este esenial pentru producerea infeciei i a manifestrilor patologice. @ulte bacterii patogene, cu localizare intracelular, nu numai c se multiplic, dar unele au mecanisme specifice de a scpa din celula gazd i de a se disemina spre celulele vecine, chiar fr s prseasc nia intracelular. +acteriile cu localizare intracelular au elaborat diferite strategii pentru supravieuire!

55<

# invazia fagocitelor neprofesioniste # localizarea n compartimente citoplasmatice bine delimitate # interferena cu reactivii intermediari ai reducerii 85 # inhibiia fuziunii fagosom#lizosom # rezistena la enzimele lizosomale # interferena cu maturarea fagosomilor prin inhibiia acidificrii. Fagocitele mononucleare reprezint habitatul ma%or pentru M. tuberculosis i M. bovis. "a interaciunea dintre fagosom i lizosomi se descriu trei rspunsuri poteniale! # fu iunea fagosom1li osom, proces n care microorganismele nepatogene i patogene sunt omor'te, iar patogenii cu localizare intracelular, supravieuiesc i se multiplic n interiorul fagosomului 6,. monoc!togenes, ,eishmania, ". t!phimurium7N # absena fu iunii i agenii patogeni se multiplic n fagosomii nefuzionai6 D. gondii, M. tuberculosis7N # ieirea agentului patogen din fagosom, n citoplasm 6D. cru i i posibil M. leprae7. @a%oritatea patogenilor internalizai sau fagocitai n vezicule de origine membranar, rm'n localizai n aceste structuri, dar au elaborat diferite strategii pentru a preveni aciunea mecanismelor celulare litice i le favorizeaz supravieuireaN # unii ageni patogeni au nveliuri protectoare 6capsula polizaharidic i "P37N # enzimele bacteriene neutralizeaz radicalii 85, iar enzimele proteolitice secretate, degradeaz proteinele lizosomale ale gazdeiN # unele bacterii patogene sunt dependente de factori ai fagolizosomului, ca semnale declanatoare ale multiplicrii intracelulare. -e e&emplu, ;. burnetii, ". t!phimurium necesit pO acid pentru a persista n mediul intracelular i pentru a iniia replicareaN # micobacteriile patogene i ,. pneumophila modific fagosomul primar ori mpiedic acidifierea. 2le pot fi incluse de la nceput n vacuola celular, la pO neutruN M. tuberculosis rm'ne localizat ntr#o vacuol delimitat de membran, care rezist fuziunii cu lizosomii i de aceea se acidific foarte puin. -ac fuziunea are loc, membrana vacuolar nu are A;P#az care s pompeze protonii n vacuol 6deoarece proteinele membranei sunt nlocuite cu proteine bacteriene7 i vezicula ce ncon%ur celulele de M!cobacterium nu se acidific. $hlamidiile sunt bacterii parazite, obligat# intracelulare, care rm'n ntr#o vacuol neacid, pentru c evit fuziunea cu lizosomii, n tot ciclul intracelular. $hlamidiile se difereniaz n dou forme! una ce crete activ n interiorul celulei gazd6corpul reticulat7 i forma infecioas # corpul elementar e&tracelular # ce nu se divideN

55:

# ". t!phimurium intr n macrofag prin ondularea membranei i formarea fagosomilor spaioi, n care se dilueaz enzimele lizosomale ale gazdei, ceea ce favorizeaz supravieuirea sa n macrofage. Alteori este posibil inhibiia fuziunii dintre fagosom i lizosomiN # ,. pneumophila este nglobat printr#un mecanism special, al fagocitozei )spiralate*. +acteria rm'ne n fagocitul pulmonar, n interiorul veziculei membranare multistratificate i pO#ul nu scade. Acelai mecanism prote%eaz celula bacterian i n gazda sa natural, amoeba. 3ursa nutrienilor utilizai de bacterii n interiorul vacuolei nu este cunoscut. 2ste posibil ca bacteriile internalizate s altereze vacuola gazdei ntr#o msur suficient, pentru ca nutrienii s difuzeze din citoplasm, spre lumenul vacuolei. Alt posibilitate 6probabil la ;hlam!dia7 este ca proteine de origine bacterian s se insere n membrana vacuolei i s aib rol de pori, prin care difuzeaz nutrienii. $'iva patogeni intracelulari au capacitatea de a sparge ve icula de fagocito i rm'n n citoplasm, unde se multiplic 6,. monoc!togenes, "higella7. ,nele specii de )ic=ettsia degradeaz enzimatic vezicula ncon%urtoare i deplasarea lor intracelular este orientat de componentele citoscheletului. Ieirea n citoplasm evit atacul mecanismelor antibacteriene i furnizeaz nutrienii necesari, dar este folosit de puini patogeni. 3upravieuirea i multiplicarea lor este rezultatul unei interaciuni echilibrate ntre celula gazd i bacterie 6+rett, 1JJI7. ,. monoc!togenes invadeaz celule fagocitare i nefagocitare. -up internalizare, vacuolele sunt acidificate i circa 1:M dintre celulele de ,isteria scap din vacuola fagocitar, prin mecanismul lizei, mediat de listerioli ina L 6o hemolizin7, activat la pO#ul acid al vacuolei. +acteriile care rm'n n vacuola acid, sunt omor'te. Adeseori, patogeneza acestor infecii nu este consecina virulenei bacteriilor, ci se datoreaz rspunsului imunitar al gazdei. 0olul limfocitelor ; este esenial pentru reactivitatea imunitar fa de aceti ageni patogeni i pentru generarea manifestrilor patologice. 0eacia tisular de rspuns la infecia cu aceste bacterii este formarea granulomului. +acteriile nu sunt eliminate complet din granuloame i din acest motiv infecia devine cronic. ;oate aceste condiii sunt ndeplinite de M. tuberculosis, M. bovis, iar ,. monoc!togenes se deosebete numai prin aceea c produce infecii acute. "almonella, "higella au doar o faz intracelular, la tranzitul din lumenul intestinal prin celulele epiteliale 6@7 ale plcii PeEer, dar rspunsul imun este predominant humoral. Funciile efectoare ale macrofagului se realizeaz prin urmtoarele mecanisme!
#

producerea intermediarilor reactivi ai o&igenului i ai azotului limitarea disponibilitii Fe acidifierea fagosomului prin fuziunea fagosom#lizosom producerea defensinelor.

55C

-up ingestia particulei strine are loc o cretere brusc a intensitii respiraiei macrofagului. $rete consumul de glucoz i 8 5, se activeaz o&idaza membranar dependent de 1A-P. 1A-P# o&idaza reduce 85 la 85A 6radicalul supero&id7, care este dismutat de 38-, dup reacia!

8 parte din O585 este descompus sub aciunea glutation#pero&idazei, reacie n care glutationul este o&idat, iar glutation#reductaza regenereaz glutationul redus. Fierul este un element esenial pentru supravieuirea bacteriilor. ;ransferina saturat cu Fe este preluat de macrofag pe calea receptorilor specifici. -iminuarea receptorilor macrofagului pentru transferin determin scderea intracelular a Fe. Fe este necesar macrofagului pentru activarea mecanismelor care genereaz intermediarii reducerii 85 i ai azotului, dar este i un nutrient esenial al celulei bacteriene. $ompetiia pentru Fe pare a fi decisiv, n raport cu care fagocitul este un efector al aprrii antibacteriene sau este un mediu protector pentru celula bacterian. Aceste bacterii nu produc invazine. 2le sunt fagocitate de macrofage cu mare uurin, deoarece secret i e&pun la suprafa cantiti mari de molecule care leag fibronectina, ceea ce favorizeaz fagocitoza prin intermediul receptorilor de fibronectin. M. tuberculosis activeaz $ i se tapeteaz cu $<, produce enzime care deto&ific intermediarii reducerii 8 5, iar 1O:R neutralizeaz pO#ul acid al vacuolei de endocitoz. (n concluzie, prin funcia fagocitar, macrofagul reprezint ultima barier protectoare fa de infecie. -ac aceast barier este depit, infecia se e&tinde i evolueaz spre septicemie i generalizare.

Alte +"#%' ale !a%ro+a$"l" @acrofagul este o celul care e&ercit efecte citoto&ice asupra celulelor care poart pe suprafaa lor molecule nonself 6celule tumorale7. $itoto&icitatea fa de celulele maligne se produce prin c'teva mecanisme distincte! # citoto&icitatea mediat de limfochinele 6@AF7 secretate de limfocitele stimulate. @AF se leag at't pe celulele int 6tumorale7 c't i pe macrofagN # citoto&icitatea natural, nespecific, se e&prim la un nivel mai sczut. 2fectul s#a demonstrat in vitro, prin contactul macrofagelor cu celule alogenice i se intensific dup stimularea nespecific a macrofagelor cu diferii factori chimici sau biologiciN # citoto&icitatea dependent de anticorpi 6A-$$7, mediat de moleculele de imunoglobulin fi&ate pe celula int. 0egiunea Fc a moleculei de Ig este recunoscut de macrofag prin intermediul receptorilor specifici. Punile moleculare ntre macrofag i celula int favorizeaz un contact spaial str'ns i transferul factorilor litici.

55?

(uncia secretorie a macrofagului este la fel de important ca i cea fagocitar. 3#au identificat circa IC de produi de secreie, in vitro, n mediul de cretere al macrofagelor sanguine i peritoneale, cu o mare diversitate structural i cu efecte biologice foarte diverse. ,nii produi de secreie sunt constitutivi! lizozimul, componente ale complementului. Alte produse de secreie sunt inductibile, adic se sintetizeaz sub aciunea semnalelor primite de la receptorii suprafeei, activai n procesul de endocitoz, sub aciunea endoto&inelor, a limfochinelor, a modificrilor de pO, a hidrolazelor acide, a metaboliilor acidului arachidonic. -up natura i funciile produselor de secreie ale macrofagului, se disting urmtoarele categorii! # produi en imatici. 3unt enzime lizosomale active la pO acid, din categoria hidrolazelor! colagena a i elasta a hidrolizeaz colagenul i elastina, dar i imunoglobulinele, fibronectina, fibrinogenul. Aceste enzime au rol important n patogeneza bolilor pulmonare distructive 6emfizem7, deoarece secreia lor crete dup activarea macrofagelor. @acrofagele secret proteina activatoare a plaminogenului la plasmin. Plasmina lizeaz fibrina din cheagul sanguin care se formeaz la periferia focarului de inflamaie. In focarul inflamator, macrofagul activat secret argina a. 2puizarea argininei produce inhibiia creterii tumoraleN # produi de secreie cu rol n reaciile de aprare . @acrofagul sintetizeaz i secret lizozim 6spre deosebire de granulocite care conin lizozim dar nu#l sintetizeaz, iar limfocitele nici nu conin i nici nu#l sintetizeaz7. 1ivelul seric al lizozimului este o reflectare a activitii fagocitelor mononucleare. $oncentraia seric i urinar a lizozimului crete n strile infecioase. "izozimul are efect antineoplazic prin aciunea sa direct asupra membranei celulelor tumorale. @acrofagul sintetizeaz i secret aproape toate componentele cii clasice i alterne a activrii $N # n procesul infecios viral, macrofagul sintetizeaz interferonN # proteine plasmatice. Q 5#macroglobulina inhib activitatea enzimelor proteolitice i astfel moduleaz efectele litice ale enzimelor lizosomaleN # proteine ale cascadei de coagulare sanguin 6tromboplastina7N # proteine structurale 6fibronectina, intr n alctuirea membranei bazale7N # compui cu efect reglator asupra altor celule! lipide bioactive 6prostaglandine7, factori reglatori ai rspunsului imun 6I"#17N # factorul stimulator al angiogenezei, n focarul inflamatorN (uncii metabolice ale macrofagului. @acrofagul intervine n metabolismul urmtoarelor categorii de substane! # metabolismul (e. Oematiile sunt distruse de macrofagele splenice, n momentul n care rezerva lor de A;P s#a epuizat. @acrofagul preia Fe din hemoglobin i l cedeaz transferinei, care l transport la mduva osoas. ;ransferina este sintetizat de macrofag! # metabolismul lipidelor. @acrofagul capteaz lipidele plasmatice i le degradeaz sub aciunea lipazelor propriiN

55I

# sintetizeaz colesterolul, unele substane carotenoideN # sintetizeaz un factor stimulator al diviziunii fibroblastelor i al biosintezei de colagen de ctre fibroblaste. Activitile mitotic i de biosintez ale fibroblastelor sunt foarte importante n procesul reparator tisular 6vindecarea leziunii7, ntr#un proces inflamator. @acrofagul particip n mod direct la vindecarea leziunii, prin nglobarea i distrugerea resturilor tisulare moarte, a bacteriilor, a leucocitelor nefuncionale. Si$te4*# !ag'"ita 2'#i4' !'n*"#ea Polimorfonuclearele 6P@17 sau granulocitele sunt celule fagocitare )profesioniste* de tip microfag, din s'ngele circulant. 2le se gsesc la toate organismele cu sistem circulator i au rol n eliminarea microorganismelor patogene cu localizare e&tracelular. Funcia lor se suprapune parial cu a sistemului fagocitar mononuclear. Acesta controleaz microorganismele parazite cu localizare intracelular, fa de care P@1 sunt ineficiente. -up caracterele tinctorilae ale granulaiilor se disting! P@1 neutrofile 6P@117, eo inofile 6P@127 i ba ofile 6P@1+7. P@1 sunt adevrate sisteme celulare de )asalt* n procesele de aprare antiinfecioas. -urata vieii este scurt 6c'teva zeci de ore7, dar numrul lor n s'ngele circulant este relativ constant, ceea ce denot c producerea este reglat de necesitile organismului. "a om se distrug C miliarde de leucocite i 1o miliarde hematii ntr#o or. 1umrul P@1 n s'nge este un indicator al strii de sntate. $reterea numrului de P@1 semnific e&istena unui proces infecios n organism, dar este indiciul unei evoluii favorabile, deoarece organismul se apr prin mobilizarea rezervei de P@1 medulare, care trec n circulaie. 3cderea numrului de P@1 n cursul unui proces infecios semnific, de cele mai multe ori, incapacitatea organismului de a se apra. N*4E *# a1$'#*t a# &i!e ite#' "ateg' ii &e "e#*#e 6n $Fnge#e "i "*#antG ;ip de celul 1umr 0aportul 1ou nscut < absolutTmm procentual C milioane la C#D Oematii brbat milioane :,C milioane la femeie "eucocite C999 A D999 199M 1C999 A 1C9 A :99 C9999 P@11 < <999 A ?999 nesegmentate A CM I999 A C9 A 599 <9999 P@11 C: A 1C A C9 segmentate ?5M 1C99 A <999 5DC A <99 P@12 1 599 999 A A <M P@1+ :99 999 9 "imfocite 5999 A 9,IC

55D

M @onocite ;rombocite 5C A <<M <AI M A D999

1umrul total al leucocitelor este de circa C & lo<Tmm< s'nge. "a adult, se remarc o tendin de scdere a numrului de leucocite circulante! o scdere mai accentuat a numrului de P@11 i o diminuare uoar a numrului de limfocite. $reterea numrului de leucocite se numete leucocito . 2a se realizeaz prin descrcarea n s'ngele circulant, a leucocitelor din mduva osoas. $el mai adesea, leucocitoza este nsoit de polinucleoz 6creterea numrului de P@117, care pot a%unge la C9 999Tmm < n cursul infeciei cu ageni piogeni. 1umrul leucocitelor crete n cazurile de septicemie, pneumonie, flegmoane, abcese, apendicite 619#1C 999 n formele uoare, p'n la C9 999 n formele grave7, n reumatism, n cazul tuturor distrugerilor tisulare 6 n infarctul miocardic7. $reterea este moderat n infeciile dentare, amigdaliene, urinare. 1umrul leucocitelor crete n neoplazii. 1ecroza esutului tumoral reprezint un stimul pentru aflu&ul de leucocite. $reterea numrului de P@11 este frecvent n infeciile cu localizare periferic. $reterea este rezultatul, at't al unei descrcri din depozite, c't i al hiperfunciei medulare. Oiperfuncia medular se manifest prin creterea numrului de celule tinere 6nesegmentate7 n s'nge. Pentru fiecare neutrofil circulant, n mduva osoas se gsesc C9 A 199 neutrofile mature. Arneth a stabilit proporia procentual a neutrofilelor n funcie de numrul segmentelor nucleare. -up numrul segmentelor nucleare, P@11 se mpart n C categorii!

16nesegm7 CM 51M

5 65 segm7 <CM ?CM

<6< segm7 :1M 1:M

:6: segm7 1IM 9M

C6C segm7 5M 6distribuie normal7 9M 6apendicit7

Formula deviaz spre st'nga, cu predominana celulelor tinere, ca semn al unei descrcri mai rapide i al hiperfunciei medulare. (n bolile parazitare 6cu protozoare i viermi intestinali7, n boli de piele, afeciuni alergice, leucocitoza este nsoit de acidofilie. "eucocitoza poate fi rezultatul unor maligniti hematologice 6leucemii7, cazuri n care predomin elementele tinere ale seriei afectate de transformarea malign. 3cderea numrului de leucocite 6leucopenie7 caracterizeaz infecia gripal, febra tifoid, infeciile grave, n care forele de aprare ale organismului au fost paralizate. In cazurile e&treme de leucopenie 6agranulocitoz7, numrul P@11 scade p'n la 599Tml, datorit epuizrii potenialului

55J

productor

al

mduvei

osoase.

3ensibilitatea

la

infecii

este

foarte

mare.

( +ere#' erea

#e"tro+ lelor

$irca <T: din celulele nucleate ale mduvei osoase sunt destinate producerii de leucocite, iar dintre acestea, 5T< sunt P@11. Mieloblastul este primul precursor recunoscut al seriei neutrofilului. 2ste de dou ori mai mare dec't neutrofilul matur. Promielocitul este de 5,C ori mai mare dec't neutrofilul matur. 2ste cea mai mare celul din seria de maturare a neutrofilului. -in suprafaa concav a cisternelor .olgi se matureaz granulaiile primare a urofile. 3e numesc a urofile deoarece se coloreaz albastru cu colorantul Fright i primare, deoarece sunt primele care apar n timpul maturrii neutrofilelor. 8dat cu diviziunea promielocitului, producerea granulelor nceteaz i granulele se distribuie n citoplasma celulelor fiice. Mielocitul rezult din diviziunea promielocitului. Are aceleai dimensiuni ca i mieloblastul. In mielocit apar granulaiile specifice sau secundare. $isternele aparatului .olgi i schimb polaritatea i pe faa conve& se matureaz aceste granulaii. 3e numesc granulaii specifice, deoarece se gsesc numai n neutrofile i sunt secundare deoarece apar dup cele primare. .ranulaiile primare 6azurofile, descrise de +ainton7 conin mielopero&idaz, hidrolaze acide degradative 6proteaze, fosfataze, nucleotidaze7 i substane cu aciune bactericid 6lizozim, lactoferin7. .ranulaiile secundare 6specifice ale lui +ainton7 sunt mai mici, mai puin electrono#dense i conin fosfataz alcalin i lizozim. 1u conin pero&idaz. @ielocitul se matureaz i rezult neutrofilul, fr diviziune celular. (n neutrofilul matur, adiacente membranei plasmatice se gsesc microfilamente 6actina i miozina7, ce genereaz forele contractile necesare locomoiei. 1eutrofilul segmentat nu se divide. $romatina este condensat, iar nucleolul lipsete. "obulaiile caracteristice ale nucleului nu se coreleaz cu v'rsta celulei. "a sf'ritul perioadei de maturare a neutrofilului, scade sarcina negativ de suprafa i crete gradul de deformabilitate a membranei. -up maturarea celular, un mare numr de neutrofile se depoziteaz n mduva osoas. Aici se gsesc circa J9M din neutrofile. -e aici neutrofilul migreaz n lumenul capilar, printre celulele endoteliale. .ranulaiile specifice fuzioneaz foarte repede cu vacuola de fagocitoz, n timp ce aceasta este nc deschis n spaiul e&tracelular. -in aceast cauz, peste J9M din coninutul lor se vars n mediul e&tracelular. .ranulaiile primare fuzioneaz mai t'rziu cu fagolizosomul. -e aceea, circa 1T5 din coninutul lor se pierde, iar restul rm'ne n fagolizosom. S )te!e ,a%ter % de a%t ve 0# *MNN

5<9

-up ingestia unui microorganism, n neutrofil se activeaz sistemele moleculare care omoar celula ingerat. In P@11 funcioneaz dou sisteme bactericide! unul independent de L9 i altul dependent de L9 . (ig. 727. *ctivarea neutrofilului. $ontactul microorganismelor opsonizate cu receptorii de suprafa ai neutrofilului 6receptori pentru Fc i $7 declaneaz fagocitoza, activarea 1A-PO#o&idazei i degranularea. In interiorul fagosomului, produsele o&idative pot interaciona cu proteinele din granule, pentru a omor microorganismele ingerate. @P8 = mielopero&idaza 6dup 0oos, 1JJD7. 3istemul bactericid independent de L9 cuprinde o gam larg de activiti enzimatice! hidrolaze acide, proteaze neutre, lizozim. "or li se adaug condiii fiziologice incompatibile cu supravieuirea bacteriilor ingerate! mediul acid al vacuolei de fagocitoz, lipsa substanelor nutritive. .ranulaiile neutrofilelor conin proteine bazice 6cationice7, bogate n lizin, cu activitate bactericid, denumite generic )fagocitine*. Protea ele neutre se gsesc n granulaiile azurofile i au pO optim al activitii lor, n %urul valorii I. $ea mai cunoscut este elasta a i are proprietatea de a cliva proteine foarte diverse! fibrinogen, colagen, elastin. ;atepsina ' face parte din aceiai categorie. Ambele au activitate bactericid. 8idrola ele acide, localizate n primul r'nd n granulaiile azurofile sunt reprezentate de catepsinele +, -, 2 i realizeaz digestia final a proteinelor. 2fectul lor se produce, n primul r'nd n mediul e&tracelular, deoarece n P@11, digestia celulei bacteriene nu atinge etapele finale. ,i o imul este o enzim bactericid din granulaiile primare i secundare ale neutrofilelor. 2ste o muramidaz cationic mic 61:,C B-7! atac mureina din peretele bacterian, prin scindarea legturilor glicozidice P 1#: din catenele polizaharidice ale mureinei, dintre resturile de 1# acetilglucozamin i acidul 1#acetilmuramic i rezult dizaharide alctuite din 1#acetilglucozamin i acid 1#acetilmuramic, la care se pstreaz ataate catenele peptidice. -up distrugerea structurii de rezisten a peretelui celular, celula bacterian aflat ntr#un mediu neprote%at osmotic, se lizeaz. @acrofagele secret cantiti mari de lizozim i l depoziteaz n granulaiile citoplasmatice, spre deosebire de celelalte tipuri care l secret pe msur ce l sintetizeaz. "izozimul se gsete n granulaiile neutrofilelor, macrofagelor, n celulele epiteliale ale glandelor e&ocrine 6celulele Paneth7. @acrofagele secret constitutiv lizozimul, dar rata sintezei crete n macrofagele activate. 1eutrofilele i celulele Paneth depoziteaz lizozimul n granulaiile citoplasmatice. 2fectul litic al lizozimului s#a evideniat asupra peretelui celular de Micrococcus l!sodei=ticus, la care mureina reprezint circa D9M din coninutul structurii parietale. Aciunea lizozimului este mai puin eficient asupra peretelui bacteriilor .ram negative i devine posibil dup tratamentul celulelor cu un amestec generator de radicali activi 6acid ascorbic, O5857. "izozimul are efect bacteriostatic. Perturb fenomenele de o&ido#reducere bacterian i blocheaz procesele de cretere i diviziune.

5<1

@ediul acid din vacuola de fagocitoz are efect bactericid. Galoarea pO scade n c'teva ninute, datorit producerii acidului lactic prin metabolizarea anaerob a glucozei. "a pO acid se activeaz hidrolazele acide din granulaii. ,actoferina este o protein uor bazic 6pI = D,I7 din granulele secundare ale P@11, sechestreaz Fe<R i astfel inhib activitile vitale bacteriene dependente de Fe, av'nd efect bacteriostatic. "actoferina se gsete n serul uman, n lacrimi, este abundent n lapte i n alte secreii. 3#au descris trei variante de lactoferin! \, primele dou av'nd activitate ,P ,Q 01#azic. $elulele intestinale i fagocitele mononucleare au receptori pentru lactoferin, dar n#o sintetizeaz. "actoferina leag Fe, fc'ndu#l indisponibil metabolismului bacterian. +acteriile .ram negative, n prezena lactoferinei, elibereaz "P3 i devin sensibile la lizozim, ceea ce denot c aciunea ei se e&ercit asupra membranei e&terne a peretelui celular. "actoferina are proprieti microbiostatice asupra microorganismelor cu necesiti mari de Fe 6coliformi, levuri7. (n focarul infecios, lactoferina nesaturat este eliberat din granulaiile specifice, n mediul e&tracelular. 2a leag Fe n condiiile unui pO acid, iar transferina l leag la un pO mai mare. $omple&ul lactoferin#Fe este endocitat de macrofage, pe calea receptorilor pentru lactoferin. Astfel, lactoferina produce hipoferemie localizat la focarul infecios. $efensinele sunt peptide mici de <,C B- 65J#<: aminoacizi7, bogate n cistein, moderat cationice6cu <#19 sarcini pozitive nete7, cu aciune antimicrobian. 3unt asemntoare unele cu altele, p'n la identitate, cu e&cepia aminoacizilor 1#terminali. In P@1 umane, ele formeaz <9# C9M din totalul proteic al granulaiilor primare 6azurofile7. In vitro, au spectru larg de activitate fa de bacteriile .ram pozitive i .ram negative, fungi 6;andida, ;r!ptococcus neoformans7, celulele maligne i fa de virusurile nvelite. 2le acioneaz form'nd canale n membranele artificiale i probabil n cele naturale. L%idul nitric 6187 rezult prin aciunea nitric#o&id sintazei, dependent de dezaminarea "# argininei. 18 are efecte citoto&ice semnificative asupra unui spectru larg de ageni patogeni facultativi i obligat intracelulari! M. tuberculosis, Plasmodium, ,eishmania, ;. neoformans, D. gondii, M. leprae, ;hlam!dia trachomatis etc. 3istemul bactericid dependent de L9 este comple& i esenial pentru funcia neutrofilelor i a macrofagelor. Imediat dup ingestia unei bacterii, n neutrofil se produce o intensificare brusc a respiraiei, o adevrat e&plozie a metabolismului o&idativ. 8 mare parte a 85 este convertit la intermediarii reactivi ai reducerii sale, care sunt to&ici pentru organismul ingerat, dar i pentru intele e&tracelulare. 3timularea poate fi fizic 6aderena la substrat7 sau chimic, cu ageni solubili 6esterii de forbol, formil#metionil#leucil#fenilalanina produs de bacterii, $Ca, $on A, "P3, ";+:, ;1F#Q7 sau particulai. 3ursa reductoare pentru producerea intermediarilor reducerii 85, pare a fi o o&idaz comple& cu FA-, legat de membrana P@11. 8&idaza se reduce prelu'nd electronii de la o piridin# nucleotid redus 61A-PO sau 1A-O7 i se o&ideaz prin transferul electronilor la molecula de 8 5! 1A-PO R 585 f 585# R R 1A-PR R 5 OR

5<5

Prin reducerea parial a 85, rezult intermediarii reactivi. -up ce molecula de 8 5 accept un singur electron se formeaz anionul supero&id 685#7 6forma ionizat7 sau radicalul perhidro&i 6O85.7. 85# acioneaz fie ca reductor, fie ca o&idant. $'nd acioneaz ca reductor al unui substrat, pierde electronul suplimentar i este convertit la 85. $'nd acioneaz ca o&idant al unui substrat, formeaz O585. $ei doi radicali ai 85, O85. i 85# interacioneaz ntr#o reacie de dismutaie, n care unul se reduce iar cellalt se o&ideaz i rezult 85 i O585, dup reacia! (ig. 729. (n fagocite, inter1mediarii reactivi ai reducerii o%igenului sunt eliminai de supero&id dismutaz, de glu#tation o&idaz, de catalaz, de taurin. O@3 = untul he&ozo#monofosfatului. 5 O85. R 85# f 5 85 R O585 . "a pO alcalin predomin 85#. -ismutaia este catalizat de 38-. O585 este redus de anionul supero&id 685#7, dup reacia! 85# i O585 sunt bactericide. O585 este i substrat al mielopero&idazei 6@P87, eliberat din fagolizosom. 2fectul bactericid o&idativ este atribuit 8 5#, o&igenului singlet61857, O585, 8O. i acidului hipocloros generat de mielopero&idaz. 85 se formeaz dup ce molecula de 85 absoarbe energie. In molecule, n general, electronii apar n perechi stabilizate cu spini de direcie opus. 8 5 este o molecul neobinuit prin aceea c spinii electronilor au aceiai direcie. Absorbia enegiei schimb unul din electroni pe un orbital cu energie mai nalt i concomitent se produce inversia spinului. O585 este principalul produs al reducerii 85 6dependent de electronii rezultai din o&idarea glucozei7, sau prin dismutarea O85. i a 85# 85# R 85# R 5OR f O585 R 85 Activitatea antibacterian a O585 crete cu multe ordine de mrime n combinaie cu mielopero&idaza i cu un halogen. Pero&idazele se disting prin structura primar, prin grupul prostetic hem i prin halogenul necesar pentru activitatea microbicid. Pero&idaza neutrofilelor i a monocitelor 6mielopero&idaza7 se gsete n granulaiile azurofile 6primare7 i este descrcat n fagosom printr#un proces de degranulare, consecutiv fagocitozei. Mielopero%ida a 6neutrofil#pero&idaza = verdopero&idaza, datorit culorii sale verzi7 este o protein bazic de 1C9 B- i catalizeaz o&idarea substraturilor donoare de O R sau de electroni , de ctre O585. @ielopero&idaza, alturi de O585 6agent o&idant7 i de un halogen 6$l sau I7 formeaz un sistem to&ic pentru bacterii, fungi protozoare, viermi, dar i pentru eritrocite, leucocite, plachete, celule tumorale. @P8 i O585 formeaz un comple& cu substratul, cu efect o&idant asupra halogenului i rezult un compus o&idant 6acidul hipocloros7!
1

5<<

O8$l este o&idantul puternic, foarte to&ic pentru microorganisme. O8$l poate reaciona cu diferii compui azotai pentru a forma monocloramine i dicloramine. Fagocitele produc 8O. prin reacia 85# cu O8$l sau cu 18! O8$l R 85# f 8O. R 8O# R $l# 18 R 85#8188 f# 6anion pero&initrit7 8188# R OR f 8188O 6acid pero&initros7 8188O f 8O. R 185 3istemul @P8 poate fi eliberat la e&teriorul celulei i s devin to&ic pentru microorganismele adiacente 6bacterii, fungi, protozoare7, pentru virusuri, pentru helmini, pentru celulele normale i maligne. Pero&idaza eozinofilelor poate utiliza $l, dar este mai puin eficient dec't @P8. $omple&ul MPL T 89L9 T Iod formeaz un sistem de iodurare a bacteriei ingerate. Ionul 68O#7 i radicalul hidro&il 68O.7 au efecte citoto&ice puternice. 2i se formeaz prin interacia O585, cu srurile de Fe! Fe5R R O585 f Fe<R R 8O# R 8O.

$'nd concentraia Fe este limitant, este necesar reducerea Fe<R pentru formarea 8O. Fe<R se reduce prin reacia Fe<R R 85# f Fe5R R 85. 8&igenul singlet revine la starea obinuit cu emisiune de lumin 6chemiluminiscen7. 85 pare s se formeze n sistemul @P8#O585#halogen. Acest sistem emite lumin, ceea ce sugereaz formarea 185 n fagocite. "eucocitul P@1 este supradotat cu o gam larg de mi%loace bactericide. P@1 combin mai muli factori antibacterieni, n sisteme comple&e cu o putere bactericid superioar fiecruia izolat. $el mai eficace sistem bactericid este @P8 A O585 A halogen. -iferitele sisteme bactericide nu au o distribuie egal la toate speciile de mamifere. "a om, @P8 are activitate ma&im. Aciunea predominant a unuia sau altuia dintre sistemele bactericide depinde i de natura celulei fagocitate. (e+ % e#'e +"#%' o#ale ale ) )te!"l" *MNN 3istemul P@11 este esenial pentru aprarea organismului fa de microorganismele infecioase. -eficienele sale numerice sau funcionale se rsfr'ng asupra rezistenei antiinfecioase a organismului. $ele mai cunoscute anomalii ale sistemului P@11 sunt neutropeniile, de diferite grade. $'nd numrul P@11 scade sub 1999 celuleTmm <, riscul infeciilor crete mult, iar n cazul unei scderi
1

5<:

accentuate 6599 P@11Tmm<7 nu mai e&ist posibilitatea unui rspuns protector eficient. 1eutropenia se datoreaz fie unei producii medulare sub nivelul normal, fie unei distrugeri periferice e&tensive a neutrofilelor. -eficienele funcionale ale neutrofilelor sunt foarte numeroase i diverse! deficiene de aderen, de chimiota&ie, de fagocitoz, de activitate bactericid. $eficienele de aderen se datoreaz absenei unor glicoproteine membranare 6de 119 i 1D9 B-7, ceea ce mpiedic migrarea lor e&travascular. Pacienii sufer infecii bacteriene i fungice recurente. Maladia cronic granulomatoas este datorat mutaiei unei gene lincat pe cromosomul S, fiind cea mai cunoscut deficien a activitii bactericide a neutrofilelor. $apacitatea de ingestie este normal, dar omor'rea bacteriilor care nu elibereaz O 585 6". aureus, "eratia marcescens7 este foarte mult diminuat, datorit unei defect al o%ida ei respiratorii, care nu determin e&plozia o&idativ a fagocitului dup fagocitoz. 2fectul bactericid se menine fa de bacteriile care produc O 585 6streptococi, lactobacili7. Fagocitele acestor pacieni au un metabolism o&idativ deficitar. Ingestia nu este urmat de intensificarea metabolismului o&idativ i din aceast cauz nu se genereaz intermediarii reactivi ai reducerii 85. $rete incidena infeciilor cu bacterii aerobe catalazo#pozitive, care inactiveaz O585 rezultat din propria lor activitate metabolic. Infeciile cu bacterii, levuri 6;andida7, fungi filamentoi 6*spergillus7 sunt trenante i nsoite de reacii inflamatorii ample, care evolueaz n granuloame, ca o reflectare a incapacitii de a inactiva chemoatractanii i de a degrada antigenul. -eficiena enzimatic esenial este o&idaza care transfer electronii de la 1A-PO la 8 5, pentru a forma anionul 85#. Maladia congenital ;hedia=18igashi se caracterizeaz printr#o activitate fagocitar mult diminuat a macrofagelor i a P@1, deoarece lizosomii lor nu fuzioneaz cu fagosomii. -in aceast cauz, bolnavii sufer infecii repetate cu microorganisme oportuniste. Aceste maladii pun n eviden importana mecanismelor de fagocitoz pentru aprarea organismului, fa de infeciile cu microorganisme oportuniste. (n concluzie, fagocitoza contribuie decisiv la rezistena organismului uman i animal fa de agenii infecioi. Aproape D9M din materialele nonself 6bacterii, molecule7 sunt epurate la primul pasa% al s'ngelui prin ficat, plm'ni i splin. -up ce trece de c'teva ori prin aceste organe, s'ngele se sterilizeaz. Aciunea opsoninelor este foarte important pentru stimularea fagocitozei. Ig@ este cea mai eficient opsonin fa de bacteriile .ram negative, iar Ig. are o eficien opsonizant de C99 A 1999 de ori mai mic. $reterea ratei fagocitozei comple&elor imune i a particulelor tapetate cu componente ale $ 6$<b7 este consecina prezenei receptorilor pentru Fc i pentru $<b, pe membrana fagocitelor )profesioniste*, ceea ce le permite intensificarea specific a activitii de endocitoz. 2le se deosebesc de fagocitele )amatoare*6celulele reticulare7, lipsite de astfel de receptori. REAC%II IMUNITARE IN VIVO

5<C

-e cele mai multe ori, n special n procesele infecioase, reaciile imunitare au o finalitate benefic, av'nd un rol determinant n eliminarea agenilor patogeni. ,neori, dup contactul cu antigenele 6 n special moleculare7, activarea funciei imunitare are rol pre%udiciant, defavorabil asupra organismului, deoarece rspunsul imun se instituie drept cauz i mecanism pentru producerea diferitelor maladii 6alergii, boli autoimune7. 0eaciile Ag#Ac in vivo, cu consecine defavorabile pentru organism, fac obiectul de studiu al unui domeniu bine conturat, denumit Imunopatologie. Activarea neadecvat a funciei imunitare determin dou categorii de manifestri clinice! a7 strile de hipersensibilitate b7 maladiile autoimune -iminuarea activitii sistemului imunitar, genereaz o categorie special de manifestri clinice, cunoscute sub denumirea generic de imunodeficiene. 2le pot fi nscute 6primare7 sau dob6ndite 6secundare7. Imunopatologia studiaz reactivitatea funciei imunitare n strile neopla ice, reactivitatea consecutiv transplantului de esuturi i organe, n maladiile infecioase virale, bacteriene, fungice i n maladiile para itare. ;. STRILE .REAC%IILE0 DE HI/ERSENSI-ILITATE 3trile de hipersensibilitate sunt reacii teriare, consecutive reaciilor Ag#Ac in vivo. 2le sunt o consecin a faptului c procesul de imunizare dup contactul primar cu antigenul i generarea efectorilor imunitari 6anticorpi i limfocite efectoare7 nu confer totdeauna o stare favorabil, de rezisten a organismului. $ontactul primar cu antigenul creeaz, uneori, o stare de sensibili are fa de antigenul respectiv. 3ensibilizarea este o stare fiziologic duntoare organismului i se manifest, n special dup contactul organismului cu antigene proteice 6din ou, din ser7, cu antigenele din polen i mai rar dup contactul cu antigenele corpusculare 6hematii de berbec7. "a contactul secundar cu antigenul sensibilizant, organismul rspunde prin strile patologice de hipersensibilitate. 3trile de hipersensibilitate sunt consecina unui rspuns de intensitate prea mare sau a unui rspuns imun neadecvat, care st la originea leziunilor tisulare. 2chivalentul termenului de hipersensibilitate, folosit n mod curent, este cel de alergie 6allos, ergon = alt energie7. ;ermenul de alergie a fost introdus de von PirWuet 61J9?7 i semnific o reacie imunitar care se e&prim cu energie diferit de cea normal, dup e&punerea secundar la un antigen. Ambele denumiri se refer la o reactivitate imunitar de intensitate anormal crescut, fa de un antigen. In sens tiinific, noiunea de alergie include toate manifestrile care decurg din reactivitatea imunitar, cu o alt energie dec't cea fiziologic! reaciile hiperergice, hipoergice i anergice. (n mod curent, alergia se definete ca o stare de hipersensibilitate, ce rezult din e&punerea la un alergen i se distinge prin supraproducia componentelor imunitare. Cla) + %area )tr lor de 4 per)e#) , l tate 3trile de hipersensibilitate au fost clasificate n raport cu promptitudinea cu care se manifest! # reaciile de hipersensibilitate imediat au o dinamic rapid. 3e declaneaz n c'teva secunde sau minute de la contactul secundar cu alergenul i diminu rapid, n c'teva ore, fr semne vizibile, cu e&cepia celor foarte grave. 4esutul suport al reaciei este diferit de la o specie

5<?

la alta. Aproape totdeauna va rezulta distrugerea celulei int. 0eaciile imediate se desfoar n esuturi vascularizate i, de obicei, se manifest local, dar pot produce i efecte sistemice. 8ipersensibilitatea imediat este cea mai rsp'ndit dezordine imunitar la om. 2ste cea mai frecvent maladie cronic, ce afecteaz circa 5CM din populaie n rile dezvoltate, cu severitate variabil, de la o simpl iritare, p'n la periclitarea vieiiN # reaciile de hipersensibilitate subacut sunt acelea care ncep s se manifeste dup 1#< ore de la contactul secundar cu antigenul i nceteaz dup 19#1C ore. 3unt mediate de Ig. sau Ig@N # reaciile de hipersensibilitate nt6r iat se evideniaz la 1#5 zile dup contactul secundar cu alergenul. Persist un interval de c'teva zile, p'n la c'teva sptm'ni. Aceste reacii sunt mediate de limfocitele ; i de macrofage. 1u sunt dependente de factori humorali circulani i de aceea se pot produce i ntr#un esut nevascularizat. 3ingura condiie este ca esutul s fie situat n apropiere de sistemul vascular, pentru ca limfocitele i macrofagele s poat migra spre locul unde a fost in%ectat antigenul. 0eaciile de hipersensibilitate imediat i nt'rziat se deosebesc prin urmtoarele trsturi! # mecanismul inducerii 6humoral sau celular7 # dinamica desfurrii n timp # particularitile manifestrilor patologice # posibilitatea combaterii. .ell i $oombs au definit : tipuri de reacii de hipersensibilitate! # reacii de tip I! reaciile de anafila%ie 6anafila&ia generalizat, reaciile de anafila&ie local, denumite i stri atopice1 ! astmul bronic alergic, febra de f'n, urticaria, reacia Arthus, maladia serului7. # reacii de tip II! reacii de citoto%icitate mediate de anticorpi # reacii de tip III! reaciile de hipersensibilitate induse de comple%ele imune # reacii de tip IG! reaciile de hipersensibilitate nt6r iat, mediate de limfocitele ;6reacia la tuberculin, brucelin, lepromin etcN dermatitele de contact, reacia de respingere a grefei7. 0eaciile de tip I, II i III sunt mediate de anticorpi, iar cele de tip IG sunt mediate de celule. -ovezi pentru natura imunitar a reaciilor de hipersensibiltate! # reaciile de hipersensibilitate necesit stimularea prealabil 6sensibilizarea7 organismului uman sau animal cu antigenul inductor 6alergenul7N # ntre momentul contactului cu doza sensibilizant i momentul administrrii dozei declanatoare este necesar o perioad de timp 6C#19 zile7, pentru sinteza efectorilor reaciei 6anticorpi7 sau pentru e&pansiunea clonelor de limfocite. -up acest interval, organismul devine sensibil la declanarea strii de hipersensibilitate, numai la contactul cu acelai alergen care a creat starea de sensibilizare sau cu un antigen nrudit, care d reacie serologic ncruciat cu alergenul inductor. Intre antigenul sensibilizant, cel declanator i starea de hipersensibilitate este o relaie specificN # organismele sensibilizate prezint un rspuns imun de tip humoral sau celular. 3tarea de hipersensibilitate este mediat de efectorii rspunsului imunN

5<I

# reaciile de hipersensibilitate imediat se transfer prin ser de la un organism hipersensibil la unul sntos. Pentru ca reacia de hipersensibilitate s se manifeste, serul trebuie s se in%ecteze ntr#un esut vascularizat. 0eaciile de hipersensibilitate nt'rziat se transfer prin intermediul limfocitelor viabile. Rea",ii#e &e (i2e $en$i1i#itate i4e&iatE &e ti2 I 0eaciile de hipersensibilitate de tip I, denumite i reacii anafilactice au cea mai mare frecven i se manifest foarte diferit, at't n ceea ce privete intensitatea, c't i a organului int al reactivitii. (ig. 77>. 0eprezentare schematic a particularitilor de evoluie a celor patru tipuri de reacii de hipersensibilitate. (e%la#&ator Antigenele care induc manifestrile reaciilor anafilactice se numesc alergene. 2le se gsesc n polenul unor plante, n praful de cas, n veninul insectelor sau n produse alimentare. Alergenele sunt un set de antigene, stimulatoare ale sintezei de Ig2. 1atura lor chimic este foarte heterogen. ,n studiu german recent, relev c organismul uman vine n contact cu circa 1:999 de substane chimice! unele sunt substane alimentare, altele sunt ingerate odat cu alimentele, fiind adugate n procesul industrial al prelucrrii. 8 categorie larg o formeaz substanele poluante. -in punct de vedere chimic, alergenele sunt glicoproteine i poli aharide de origine vegetal sau animal sau molecule mici, cu rol de haptene. Oaptenele sunt molecule organice sau anorganice, cu greutate mic, insuficient pentru a fi antigene, dar devin alergene dup cuplarea lor cu macromoleculele tisulare. -e cele mai multe ori, haptenele alergice sunt substane de uz farmaceutic, de C99#1999 -. -up legarea covalent ireversibil cu proteinele serice, rezult un con3ugat hapten1protein, cu specificitate antigenic modificat i adeseori alergic. ;oate medicamentele n stare nativ, dar i derivaii lor de degradare parial pot s se comporte ca haptene i s devin alergene. Intensitatea reaciilor de hipersensibilitate este dependent de calea de ptrundere n organism, de doz, de frecvena e&punerii i de caracteristicile moleculare ale alergenului. $el mai adesea, alergenele se clasific n funcie de calea de ptrundere n organism. In raport cu calea de ptrundere a alergenelor, se disting! # alergene inhalate # alergene ingerate # alergene inoculate *lergenele inhalate sunt glicoproteine din polen, din fungi, din praful animalelor de cas. .reutatea molecular nu depete C9 B-, deoarece moleculele mai mari nu strbat membranele mucoase ale tractului respirator. ,n alergen inhalat poate determina simptome respiratorii! rinit, astm. $rizele se produc numai n prezena alergenului. ,nele alergene sunt sezoniere 6polen7, altele sunt perene 6praful de cas7. Polenul este, din punct de vedere cantitativ, cea mai important surs de alergene. Plantele din familiile 'ramineae, ;ompo itae, Betulaceae, (agaceae produc polen alergic. ;oate polenurile alergice provin de la plante polenizate de v'nt 6anemofile7. 2le produc cantiti mult mai mari de polen dec't plantele entomofile i n perioada nfloririi l elibereaz n atmosfer.

5<D

Alergenele din polen sunt glicoproteine nrudite chimic i dau reacii ncruciate. 3erul imun de iepure, fa de un alergen din polen precipit o diversitate de alergene polenice. "porii fungilor se gsesc n aer, n cantitate de circa C ori mai mare dec't granulele de polen, dar produc mai puine stri alergice. In regiunile temperate, numrul sporilor fungici este ma&im n timpul verii i scade n sezonul rece. Alergiile sunt produse de sporii a peste D9 de genuri de fungi! *lternaria, Penicillium, *spergillus. 3ingura substan alergic de origine fungic, izolat n stare pur, este penicilina. $antitile de alergene care ptrund pe cale respiratorie, sunt foarte mici! sub 1 UgTan. 0eaciile alergice la alergenele fungice apar la <9 de minute de la e&punere, iar cele to&ice, la ?#D ore dup ingestie. 0eaciile to&ice nu au substrat imunologic. @icoto&inele au greutate molecular mic 6sub 1 B-7 i pot fi eliminate din e&tractele de alergene fungice, prin dializ. $ele mai multe particule inhalate 6mai mari de 19 Um7, ca de e&emplu, polenul i sporii mari sunt depozitate n nazofaringe i sunt asociate cu manifestri locale, nazale iTsau oculare, denumite generic )febr de f'n*. Particulele mai mici de 19 Um 6dar n special cele mai mici de C Um7 sunt antrenate cu curentul de aer inspirat, n cile inferioare, unde reaciile alergice tind s se manifeste sub form de astm. 3porii fungici difer ca dimensiuni i determin reacii alergice ale tractului respirator superior i inferior. *lergenele ingerate se gsesc n compoziia unor alimente! n ou, ciocolat, cpuni, ciree, uleiul de ficat de pete, n seminele de 'l!cine ma% 6soia7, n fina unor cereale 6gr'u, orz7, n seminele de *rach!s h!pogea 6alun de pm'nt7 etc. "a copii, laptele de vac i soia sunt cauzele ma%ore ale reaciilor alergice, urmate de cereale, ou i pete. G'rsta manifestrilor este variabil! dup primele zile de via6fa de laptele de vac7, p'n la doi ani. "a J9M din cazuri, intolerana dispare dup trei ani. $ele mai comune manifestri sunt voma, diareea, colicile abdominale, ce apar ntr#un interval variabil, de la c'teva minute, p'n la 1#5 ore dup ingestie. Alergia la laptele de vac i la pete este mai frecvent la populaiile care consum cantiti mari ale acestor produse. Alergenele alimentare traverseaz lumenul intestinal, la nivelul mucoaselor digestive. +ariera mucoasei gastrointestinale este e&pus la un grup heterogen de antigene. 2&perienele cu molecule marcate cu pero&idaz de hrean sau cu feritin, au evideniat c unele antigene intacte i fragmente de antigene particulate din tubul digestiv, dob'ndesc accesul la esuturile limfoide ale gazdei, n special la persoanele cu deficit al sintezei de IgA. Antigenele ce a%ung n contact cu structurile limfoide ale mucoaselor, stimuleaz rspunsul imun al gazdei. Penetrarea antigenelor la nivelul tractului digestiv se face pe dou ci! # prin endocito de ctre celulele intestinale absorbante, la polul luminal. 3e formeaz fagosomi, n interiorul crora se produce digestia materialului endocitat, dar cantiti mici rm'n nedigerate i sunt e&ocitate n spaiul e&tracelular, la polul bazal. 3trile de hipo# sau aclorhidrie favorizeaz tranzitul proteinelor prin mucoasa intestinal. # ptrunderea antigenelor alimentare la nivelul celulelor epiteliale M, ce acoper plcile PeEer, foarte numeroase n regiunea distal a intestinului subire. Aceste celule funcioneaz ca adevrate )sonde de antigen*, adic au capacitatea de a ngloba antigenele derivate n special din microorganisme i ntr#o msur mai mic, antigene de origine alimentar. ;elulele M reprezint un sistem de avertizare timpurie pentru sistemul imunitar al organismului. 2le sunt acoperite de un strat subire de mucus, au microvili scuri, dar au capacitatea

5<J

de a endocita antigene luminale, prin mecanismul pinocitozei. $elulele @ sunt difereniate, conin lizosomi i nu degradeaz antigenele pe care le pinociteaz, dar le transfer macrofagelor din foliculii subiaceni. -ei au evoluat ca o modalitate strategic protectoare fa de antigenele luminale, totui celulele @ reprezint poarta de intrare pentru microorganismele patogene, care la acest nivel i dob'ndesc accesul la esuturile subiacente mucoasei. 3tudiile electrono#optice cu molecule marcate cu pero&idaz de hrean, au artat c acestea sunt transportate din lumenul intestinal i a%ung n spaiul subiacent celulelor @, unde se gsesc limfocite i macrofage. 3e stimuleaz astfel rspunsul imun local. 3tructurile limfoide asociate mucoaselor constituie prima barier de protecie fa de antigenele tractului digestiv. ,neori, cantitile relativ mari de antigene de origine bacterian i alimentar, nu sunt anihilate local, de structurile limfoide ale mucoaselor i trec n mediul intern, a%ung'nd la cea de a II#a barier ma%or de protecie fa de antigene, care este ficatul. $irca <9M din numrul total de celule ale ficatului au capacitatea de a fagocita i epureaz s'ngele adus de vena port din teritoriul digestiv. *ntigenele inoculate sunt proteine din veninul de insecte, n special 8!menoptere 6albin, viespe7, care conine I#19 antigene. Alergenele din venin sunt diferite forme ale fosfolipazei A. Geninul de albin conine fosfataz acid, hialuronidaz, dopamin i norepinefrin i un peptid care produce degranularea mastocitelor. "erurile imune obinute pe diferite specii de animale 6heteroantiseruri7, dup in%ectare la om, adeseori activeaz rspunsul imun al organismului receptor. @uli diabetici tratai cu insulin de origine animal sau cu insulin sintetizat n celule reprogramate prin metodele ingineriei genice, sintetizeaz anticorpi anti#insulin. *genii farmacologici, administrai n scop terapeutic sau diagnostic, pot cauza o varietate de dezordini imunitare, deoarece acioneaz ca haptene care se cupleaz cu diferite proteine tisulare, conferindu#le imunogenitate. "egarea covalent a unui medicament ori a unui metabolit reactiv derivat prin metabolizarea lui, de o macromolecul, creeaz un con3ugat hapten1macromolecul, inductoare a rspunsului imun specific. "egarea covalent a celor dou molecule se numete haptenare. 3e descriu dou tipuri de haptenare! # haptenarea direct a celulelor 6a moleculelor membranare7 i a moleculelor e&tracelulare, sub aciunea compuilor chimici cu reactivitate nativ 6intrinsec7. -e e&emplu, penicilinele de semisintez 6benzil#penicilina, cefalosporinele7, dar i alte medicamente se cupleaz cu diferite proteine serice, form'nd con%ugate cu funcie de alergene. $irca 19M din moleculele de penicilin in%ectat, se leag covalent prin gruparea A1O5, de proteine plasmatice sau membranare. $elula poate lega mii de haptene P#lactamice, n c'teva minute dup tratament. # haptenarea indirect a moleculelor membranare sau libere, cu derivaii rezultai din catabolizarea parial a unor molecule, care n stare nativ sunt puin reactive sau areactive. @etabolizarea are loc n hepatocite, cheratinocite 6i n alte celule7 i poate crea intermediari reactivi ce formeaz legturi covalente cu molecule carrier.

5:9

,neori, catabolismul medicamentelor este concomitent cu sinteza proteic. 3e produce haptenarea moleculelor n cursul sintezei 6haptenare intern7 i pot fi e&puse ca antigene pe suprafaa celulei.

a = inel P#lactamic b = inel tiazolidinic -up fisiunea inelului P#lactamic rezult gruparea peniciloil, principalul inductor al reaciilor anafilactice la om. @etaboliii reactivi pot fi secretai n spaiul e&tracelular i se leag cu proteine e&tracelulare. ,nii indivizi sunt predispui la reaciile alergice fa de diverse medicamente, n special antiinfecioase. -ac un individ manifest fenomene alergice fa de un compus antimicrobian, riscul alergiei fa de o alt clas de compui farmacologici crete de J ori. $irca 19M dintre aduli sunt alergici fa de o clas de compui i intr n categoria celor cu risc crescut fa de ali compui farmacologici. 0eaciile de hipersensibilitate imediat de tip 1, induse de medicamente, se manifest variat! anafila&ie, urticarie, angioedem. ,nele substane pot produce mai mult de un tip de reacie, la un organism sensibil. -e e&emplu, penicilina poate cauza o reacie anafilactic de tip I, o anemie hemolitic datorat reaciei citoto&ice de tip II, dezordini funcionale de tip III cu comple&e imune sau o reacie de hipersensibilitate nt'rziat. 0eaciile de hipersensibilitate apar, de cele mai multe ori, n esuturile bogate n mastocite! tegument, mucoase, mucoasa lingual, plm'n, tractul gastrointestinal. -ac reacia de hipersensibilitate imediat este localizat n mucoasa nazal i n con%unctiva ocular, simptomele includ rinoree, lcrimare, strnut, congestie nazal, creterea numrului eozinofilelor n s'nge. ;itrul Ig2 seric poate s creasc sau s rm'n sczut. -ac reacia de hipersensibilitate imediat este localizat n bronhii, manifestarea clinic este astmul alergic, caracterizat prin scurtarea i ngreunarea respiraiei. Med ator rea%' e de 4 per)e#) , l tate !ed at de t p I 0eaciile de hipersensibilitate imediat de tip 1 se datoreaz sintezei unor izotipuri de anticorpi cu proprieti particulare. -in punct de vedere funcional, anticorpii sunt convenionali i citofili. Anticorpii convenionali 6Ig A, Ig., Ig@7 din ser se detecteaz in vitro, prin reacia de aglutinare, precipitare sau de fi&are a complementului. In vivo, anticorpii convenionali se combin

5:1

cu antigenul i l neutralizeaz. 0eaciile de hipersensibilitate de tip 1 se datoreaz sintezei anticorpilor citofili, cu proprieti funcionale particulare. Anticorpii citofili au proprietatea de a se fi&a pe suprafaa unor celule care au receptori pentru regiunea Fc i n primul r'nd pe mastocite, dar i pe bazofile, eozinofile, macrofage. 1u produc reacii secundare de aglutinare, precipitare sau de fi&are a complementului. Anticorpii citofili declanatori ai reaciilor de hipersensibilitate imediat se numesc reagine, deoarece produc modificri ale reactivitii tisulare! mresc permeabilitatea vascular prin intermediul histaminei, eliberat din mastocite. "a om, reaginele ma%ore sunt Ig2 i Ig. :. Ig2 este termolabil 6se inactiveaz la C?o, timp de <9 de minute7, iar Ig. : este termostabil. Ambele izotipuri se sintetizeaz dup imunizri naturale. Ig2 nu traverseaz bariera placentar. ;impul de n%umtire este de dou zile. 3inteza lor se face dup mecanismul clasic! dup ce alergenul vine n contact cu mucoasele 6respiratorie sau digestiv7, penetreaz pelicula de mucus i celulele epiteliale, este fagocitat de macrofage, prelucrat i prezentat n asociaie cu moleculele $@O II, limfocitelor ;h. "imfocitele ;h sintetizeaz I"#5 care produce e&pansiunea clonal a limfocitelor +. 3ub aciunea stimulatoare a I"# 5, limfocitele + se transform n plasmocite ce sintetizeaz Ig2. "a persoanele normale, sinteza Ig2 este supresat de limfocitele ;s, iar concentraia de Ig2 seric variaz ntre 1I#:C9 ngTml, adic 9,995M din totalul cantitii de imunoglobuline serice. "a indivizii atopici 6cu predispoziie genetic pentru manifestarea reaciilor alergice7, dup contactul cu o doz mic de alergen, aproape totdeauna se sintetizeaz Ig2, iar titrul seric crete de 1999 de ori. 1ivelul seric crescut al Ig2 este o modalitate de diagnostic al strilor alergice, dar nivelul normal al Ig2 nu e&clude starea alergic. Ig2 se sintetizeaz local, n structurile limfoide, la poarta de intrare a antigenului, n plasmocitele din corionul mucoasei. 2&cesul de Ig2 trece n circulaie i se de mare afinitate ai bazofilelor, neutrofilelor,leag pe receptorii pentru Fc ai celulelor endoteliului vascular, ai celulelor epiteliale alveolare pulmonare. 3'ngele transport Ig2 la masocitele tisulare din tot organismul. Ig2 fi&at pe celule reprezint o proporie important din Ig2 total. -ei Ig2 liber 6din ser7 are timpul de n%umtire de dou zile, Ig2 fi&at pe suprafaa celulelor este foarte stabil. @astocitele rm'n sensibilizate luni de zile, datorit afinitii foarte nalte a receptorilor lor pentru Fc al Ig2. (n stare legat, Ig2 este prote%at de atacul proteazelor. $elulele mediatoare ale reaciilor de hipersensibilitate imediat sunt n primul r'nd mastocitele i ba ofilele. +azofilele sunt celule circulante, dar pot ptrunde n focarul inflamator. @astocitele sunt celule mononucleate i au dou localizri principale! # n esutul con%unctiv, n special n %urul vaselor sanguine din ficat, rinichi, splinN # n mucoasele digestive i cea respiratorie. (n creierul uman sunt dou surse de histamin! mastocitele i neuronii histamiergici. @astocitele se gsesc n zonele cele mai vascularizate 6eminena median, glanda pineal, meninge7 i controleaz circulaia s'ngelui i permeabilitatea vaselor 31$. 1euronii histaminergici sunt limitai e&clusiv la nivelul nucleului tuberomamilar din hipotalamusul

5:5

posterior. $olateralele a&onale se proiecteaz n toate zonele corte&ului. Astfel, sistemul histaminergic central controleaz activitatea ntregului creier. "ocalizarea strategic a mastocitelor se coreleaz cu alterrile patologice care se produc la nivel vascular gastrointestinal, bronic, cutanat, cerebral, ocular. (n citoplasma bazofilelor i mastocitelor, la microscopul electronic se observ granule electrono#dense, ce reprezint p'n la :9M din volumul celular. 2le conin mediatori preformai, cei mai importani fiind aminele biogene 6histamina i serotonina7. @astocitele conin histamin 6amina tisular7, detectat iniial n tegument. In vivo, histamina se sintetizeaz prin decarbo&ilarea histidinei, reacie catalizat de histidin# decarbo&ilaz 6o enzim citoplasmatic7 i este depozitat n granule. 8 celul uman conine 5#< pg de histamin. Oistamina este larg distribuit n esuturile organismului uman. "a om, neuronii histaminergici ai 31$ reprezint o surs nemastocitar de histamin. Oistamina acioneaz asupra unei varieti largi de tipuri celulare! celule musculare netede, neuroni, celule endocrine, e&ocrine, celule sanguine, celulele sistemului imunitar. 2fectele variate se produc prin receptori distinci! O1, O5, O<. "erotonina 6C#hidro&i#triptamina7 se formeaz prin decarbo&ilarea moleculei de triptofan hidro&ilat. @astocitele umane nu conin serotonin. 3erotonina s#a izolat iniial din ser 6tonina din ser7, deoarece are efect vasoconstrictor. Produce edem i are rol important n reaciile anafilactice.

Oistidina Oistamina 3erotonina 6C#hidro&i#triptamina7 Me%a# )!"l %el"lar & !ole%"lar al rea%' lor de 4 per)e#) , l tate !ed at de t p I 0eaciile de hipersensibilitate imediat de tip 1 se desfoar n mai multe stadii. Faza I a este legarea anticorpilor citofili 6Ig2, care s#a sintetizat dup contactul primar cu antigenul7, de receptorii pentru Fc ^ ai mastocitelor locale. Ali factori activatori ai mastocitelor sunt! # alergenul specific sau unul nrudit cu cel inductor al sintezei Ig2N # diferite lectine # anticorpi anti#Ig2, anticorpi anti#idiotipici, anticorpi anti#receptor Fc ^N (ig. 77/. *ctivarea masto1citelor este mediat de legarea ncruciat a recep#torului Fc ^. Aceasta poate fi realizat de legarea antigenului de Ig2 fi&at pe receptorii pentru Fc ^, de anticorpii bivaleni care recunosc determinanii izo#tipici ai regiunii Fc a Ig2, de anticorpii anti#idiotipici ai

5:<

regiunii Fab ai Ig2, de anticorpii anti#receptor care se fi&eaz direct pe recep#torul pentru Fc ^, de dimerii bivaleni de Ig2 obinui cu ageni chimici de polime#rizare sau de lectinele care se leag de resturile glu#cidice ale Ig2. Antigenele i anticorpii monovaleni nu activeaz mastocitele, deoa#rece nu realizeaz legarea ncruciat a receptorilor 6dup 0oitt, 1JJ<7. # neuropeptide endogene, fapt care e&plic alergia determinat de stimularea sistemului nervos # anafilato&inele $<a i $Ca # peptidele bacteriene ce conin formil#metionin # ageni fizici 6de e&emplu, temperatura sczut7 # diferite medicamente. (n faza a II#a se produce activarea mastocitelor i degranularea lor. Alergenul declanator trebuie s fie multivalent pentru a lega ncruciat dou molecule de Ig2 fi&ate pe celula efectoare. -up legarea ncruciat a receptorilor pentru Fc ^, membrana granulelor fuzioneaz cu membrana citoplasmatic i elibereaz coninutul. (ig. 77@. Ali stimuli activatori ai mastocitelor. Anafilato&inele $<a, $Ca sau substanele medica#mentoase 6ionoforii de $a5R, codeina, morfina, A$;O sintetic7 activeaz mastocitele pe o cale direct. ;oate aceste substane induc ptrun#derea $a5R n mastocit, declanatoare a fenome#nelor biochimice care duc la degranularea i eliberarea mediatorilor.

2liberarea mediatorilor preformai # histamina # triptaza # activeaz $< # heparina

@oleculele de Ig2 pot fi legate ncruciat de lectine 6POA, $on A7, prin asocierea lor cu resturile glucidice ale regiunii Fc. Astfel se e&plic urticaria produs de cpuni i ciree, care conin cantiti mari de lectine.

5::

3timulul activator al mastocitelor este transmis prin receptorii pentru Ig2. Activarea se datoreaz legrii ncruciate a dou situsuri Fab, printr#o molecul de alergen. , care leag Ig. cu afinitate mult mai@astocitele au i receptori pentru Fc mic. -egranularea mastocitelor este precedat de influ&ul masiv de $a5R. .ranulele pline cu mediatori preformai, migreaz la periferia celulei, fuzioneaz cu membrana e&tern i elibereaz coninutul! histamina, protea e neutre6triptaz, chimaz, carbo&ipeptidaz7, proteoglicani 6heparina, condroitin#sulfatul7. (ig. 77.. Inducerea i mecanismele efectoare ale hipersensibilitii de tip I. Prelucrarea antigenului se face la nivelul mucoaselor. 0ee&punerea la alergen declaneaz degranularea mastocitelor i producerea mediatorilor ce determin simptome alergice 6dup @iraBian, 1JJD7. Dripta a 6prezent n mastocite, dar absent n bazofile7 produce constricia muchilor netezi ai bronhiilor, iar chima a stimuleaz secreia mucoasei bronice. Proteoglicanii din granulele mastocitelor au rol n mpachetarea mediatorilor preformai n granule. 8eparina este proteoglicanul predominant n mastocitele pulmonare umane. @astocitul este singura surs endogen de heparin la om i la roztoare. Oeparina are efect anticoagulant. @astocitele conin 38- i pero&idaz. -egranularea activeaz o lipa care mobilizeaz acidul arachidonic din membrana mastocitului. Prin metabolizarea acestuia se sintetizeaz mediatori noi ai reaciei de hipersensibilitate imediat. Astfel, din acidul arachidonic, pe calea lipoo&igenazei se sintetizeaz leucotriene, iar pe calea cicloo&igenazei se formeaz prostaglandine i trombo%an. E+e%tele !ed ator lor !a)to% tar @anifestrile reaciilor alergice, inclusiv alergia respiratorie, pot s se produc n dou faze! T fa a timpurie, care se desfoar n c'teva minute, datorit eliberrii mediatorilor preformaiN T fa a tardiv se produce la <#: ore dup e&punerea la alergen, datorit infiltratului celular, ca rspuns la mediatorii fazei timpurii. n prima etap, aciunea histaminei const n contracia muchilor nete i ai tractului respirator i digestiv. Oistamina produce constricia celulelor endoteliale i crete permeabilitatea vaselor mici. Acelai efect l are serotonina. Prin constricia celulelor endoteliale i creterea permeabilitii capilare, se produce edemul tisular. n etapa a II1a, histamina produce dilatarea vaselor periferice i rezultatul este scderea brutal a tensiunii arteriale. gocul hipotensiv este una din manifestrile dramatice ale anafila&iei generalizate. Ali mediatori ai fazei a II#a sunt chininele. 2le se formeaz din chininogenul plasmatic i sunt polipeptide mici! A metionilchinina 6@et#"Es#Arg#6Pro75#.lE#Phe#3er#Pro#Phe#Arg7 A bradichinina6Arg#6Pro75#.lE#Phe#3er#Pro#Phe#Arg7 A calidina 6lisil#bradichinina7! "Es#Arg#6Pro75#.lE#Phe#3er#Pro#Phe#Arg. $hininogenul este alctuit din 11 aminoacizi i 6acid sialic7n, la una sau la ambele e&tremiti. 2ste o Q#globulin 65 mgTml ser7.

5:C

$hininele au efect vasodilatator i mresc permeabilitatea capilar, produc'nd edem. n fa a a III1a se sintetizeaz ali mediatori, care ntrein n timp diferitele efecte iniiate de mediatorii eliberai din mastocite, prin efectul chimiotactic fa de celulele sanguine! 2$F 6eozinofil#chemotactic factor7 determin aflu&ul de eozinofile 1$F 6neutrofil#chemotactic factor7 PAF 6factorul activator al plachetelor7. "eucotrienele 6"$:, "-:, "+:, "2:7 determin contracia de durat a muchilor netezi, edem al mucoaselor i stimularea secreiei lor. E/e!ple de rea%' de 4 per)e#) , l tate de t p I Prima reacie de hipersensibilitate imediat a fost descris de Prausnitz i Lustner. 0eaciile de hipersensibilitate imediat pot s se produc la orice organism al unei specii i se numesc reacii anafilactice sau se manifest numai la anumii indivizi predispui genetic i se numesc atopii 6stri atopice7. )eaciile anafilactice ?ana = opusN ph!la%is = protecie7 se caracterizeaz printr#o dinamic e&ploziv a manifestrilor, n decurs de <#: minute. $linic, termenul de anafila&ie semnific sindromul care rezult din eliberarea unor mediatori preformai i generai de novo n mastocite, care determin o stare opus celei de protecie. @anifestrile clinice ale reaciilor de hipersensibilitate sunt dependente de calea de ptrundere a alergenului i de cantitatea de histamin eliberat. 0eaciile cutanate medii, cu eritem, urticarie, prurit, dureri de cap, sunt asociate cu un nivel sczut al histaminei plasmatice 6sub 1 ngTml7. -ac alergenul este in%ectat intravenos, rspunsul este sistemic, adic are loc o anafila%ie generali at, care poate duce la oc vascular hipotensiv i asfi&ie secundar prin constricie bronic i laringian. -ac sf'ritul nu este letal, recuperarea funcional se poate face ntr#o or. gocul vascular se datoreaz ieirii plasmei n spaiul e&travascular, rezult'nd scderea volumului sanguin. 3cderea debitului cardiac duce la hipo&ie i acidifierea mediului intern, antren'nd i insuficiena respiratorie. -ac alergenul este in%ectat n piele, reacia este limitat la locul in%eciei i se numete anafila%ie cutanat, nsoit de eritem 6urticarie7, angioedem, edem laringian, bronhoconstricie, hipotensiune, aritmie cardiac. *nafila%ia generali at 6sistemic7 este forma cea mai grav a hipersensibilitii imediate. @ult timp s#a considerat c anafila&ia generalizat este o manifestare patologic, indus numai n condiii e&perimentale la animalele de laborator. In realitate, at't la om c't i la animale se produc ambele tipuri de reacii anafilactice, at't generali ate, c't i locale. Prima reacie de anafila%ie generali at a fost descris la c'ine. (n 1J95, 0ichet i Portier studiau biologia meduzelor i to&icitatea e&tractelor apoase i glicerinate din celenterate, asupra mamiferelor. Administrate n doze mari, e&tractele produc moartea imediat a c'inelui, datorit ocului to&ic, dar dozele mici sunt suportate. 8 in%ecie secundar la c'teva sptm'ni mai t'rziu, produce o reacie anafilactic generali at, cu paralizia muchilor respiratori i ocul fatal. Instalarea strii de oc este accelerat de in%ectarea intravenoas a dozei secundare. "a autopsie se observ edemul mucoasei intestinale, a esutului pulmonar, congestia ficatului.

5:?

"a cobai, anafila&ia se induce prin in%ectarea intravenoas a unei doze mici 61mg7 de albumin seric bovin. "a D zile dup in%ectarea do ei sensibili ante, animalul devine sensibil la ocul anafilactic i are sensibilitate ma&im la 51 de zile. -oza declanatoare a ocului este mai mare. 0spunsul anafilactic este prompt i manifestrile ncep n primele zeci de secunde! piloerecie dorsal, agitaie motorie, strnut, tuse zgomotoas, cianozarea mucoaselor, pierderea refle&elor de miciune i defecaie, bloca% respirator, convulsie, moarte. ;abloul acestor modificri patologice se succede n c'teva minute. @uchii netezi bronici ai cobaiului sunt foarte sensibili la histamin i bronhoconstricia fatal este caracteristica anafila&iei la aceast specie. )eaciile anafilactice generali ate la om se manifest n primul r'nd fa de alimente i se e&teriorizeaz prin urticarie generali at. ,rticaria afecteaz 1C#5<M din populaie 3uportul manifestrilor patologice care nsoesc aceste reacii, este tegumentul. Anafila&ia generalizat la om, este declanat i de ali factori! penicilin, aloseruri, heteroseruri, veninul insectelor 6albin, viespe7 i se manifest prin urticarie generalizat, spasmul muchilor bronici, edem laringian, dispnee sever, cianoz, oc hipotensiv. Intensitatea manifestrilor este dependent de gradul de sensibilitate. 3ensibilitatea alergic a pacienilor variaz n limita a circa 1T1999. 0spunsul sistemic cu reacii tegumentare generalizate, tulburri gastrointestinale, tahicardie, aritmie cardiac, hipotensiune medie, este asociat cu creterea concentraiei plasmatice a histaminei peste nivelul de baz. 0eacia ampl care pericliteaz viaa, cu hipotensiune sever, fibrilaie ventricular, spasmul muchilor bronici, stop cardiac i respirator, este asociat cu n