Sunteți pe pagina 1din 290

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE

CUPRINS
Capitolul 1. OBIECTUL IMUNOLOGIEI Capitolul 2. ISTORICUL IMUNOLOGIEI.. 11 12 16 17 17 18 20 21 22 24 26 27 30 30 31 31 34 35 41 47 49 51 56 56 57

Mihai CARP-CRARE
Capitolul 3. SISTEMUL IMUNITAR.... Dorina TIMOFTE 3.1. Conceptul de self i non self.. 3.2. Conceptul de repertoriu..... 3.3. Rspunsul imun ca o reacie adaptativ a organismului... 3.4. Implicaiile sistemului imunitar n patologie. Capitolul 4. ELEMENTELE SISTEMULUI IMUN..

Dorina TIMOFTE
4.1. Organele limfoide primare (centrale).... 4.2. Organele limfoide secundare (periferice) 4.3. Dezvoltarea i maturarea esuturilor limfatice 4.4. Circulaia limfocitelor... Capitolul 5 DIFERITE ASPECTE ALE IMUNITII..

Mihai CARP-CRARE, Dorina TIMOFTE


5.1. Definiia imunitii i clasificarea strilor de imunitate.. 5.2. Imunitatea natural sau esenial 5.3. Factorii implicai n imunitatea natural.. 5.3.1. Barierele naturale.. 5.3.2. Factorii umorali...... 5.3.3. Factorii celulari....... 5.3.4. Modificarea imunitii naturale.... Capitolul 6. IMUNITATEA DOBNDIT.

Mihai CARP-CRARE
6.1. Imunitatea materno-fetal Capitolul 7 ANTIGENELE....

Mihai CARP-CRARE, Dorina TIMOFTE


7.1. Structura unei molecule de antigen. 7.2. Condiiile antigenitii.....
1

7.3. Clasificarea antigenelor... 7.4. Principalele categorii de antigene naturale.... 7.4.1. Antigenele bacteriene..... 7.4.2. Antigenele virale.... 7.4.3. Antigenele parazitare..... 7.4.4. Antigenele de grup sanguin si Rh. 7.4.5. Antigenele de histocompatibilitate.... 7.4.6. Antigenele sechestrate .. Capitolul 8. RSPUNSUL IMUN (IMUNOGENEZA)..

60 64 64 66 66 67 68 70 71 72 73 73 83 84 85 88 89 91 91 92 96 96 97 97 98 99 100 101 103 105 110 115 118 120 121 128 130

Mihai CARP-CRARE, Dorina TIMOFTE


8.1. Efectorii umorali ai rspunsului imun (anticorpii) 8.1.1. Structura imunoglobulinelor.. 8.1.2. Clasele de imunoglobuline... 8.1.3. Biosinteza i catabolismul imunoglobulinelor. 8.1.4. Dinamica imunoglobulinelor n rspunsul imun umoral... 8.1.5. Unele particulariti privind imunoglobulinele la animale.... 8.1.6. Anticorpii monoclonali. Teoria hibridomului. 8.1.6.1. Tehnici de preparare a anticorpilor monoclonali.... 8.1.6.2. Aplicaiile n practic a anticorpilor monoclonali...... 8.1.7. Citokinele ( monokine i limfokine)... 8.1.7.1. Interleukinele..... 8.1.7.2. Interferonii... 8.1.7.3. Factorii de necroz tumoral.... 8.1.7.4. Neuroleukinele.. 8.1.7.5. Factorii de stimulare ai coloniilor celulare.... 8.1.7.6. Prostaglandinele... 8.1.7.7. Factorii de transformare a creterii (TGF). 8.2. Efectorii celulari ai imunitii.. 8.2.1. Ontogeneza limfocitelor.... 8.2.2. Ontogeneza limfocitelor B.... 8.2.3. Ontogeneza limfocitelor T.... 8.2.4. Metode de identificare a celulelor limfoide... 8.2.5. Macrofagele ( Mcf).... 8.2.6. Celulele Killer... 8.2.7. Celulele Natural- Killer... 8.3. Dinamica rspunsului imun 8.3.1. Reglarea genetic a rspunsului imun.. Capitolul 9. SISTEMUL IMUN N ACIUNE...

Mihai CARP-CRARE, Dorina TIMOFTE


2

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE
9.1. Imunitatea antibacterian. 9.2. Imunitatea antiviral 9.3. Imunitatea antimicotic...... 9.4. Imunitatea antiparazitar.. 9.5. Imunitatea anti-gref 9.6. Gestaia: o relaie special gazd-gref..... 9.7. Imunitatea antitumoral.... Capitolul 10. IMUNITATEA LOCAL.... 130 133 141 142 148 153 155 163 163 167 170 172 174 181 183 184 187 188 191 191 195 196 197 198 199 200 202 202 203 204 204 207

Mihai CARP-CRARE
10.1. Imunitatea tractusului digestiv... 10.2. Imunitatea tractusului respirator.. 10.3. Imunitatea tractusului uro-genital.... 10.4. Imunitatea glandei mamare.. 10.5. Imunitatea pielii.... Capitolul 11. TOLERANA I AUTOIMUNITATEA..

Mihai CARP-CRARE
11.1. Relaia dintre toleran i antigene... 11.2. Relaia limfocite- toleran. 11.3. Factorii care favorizeaz instalarea unei boli autoimune. 11.4. Mecanismele ruperii toleranei... 11.5. Boli autoimune .....

Mihai CARP-CRARE, Dorina TIMOFTE


11.5.1. Lupusul eritematos diseminat (LED). 11.5.2. Poliartrita reumatoid. 11.5.3. Reumatismul articular (febra reumatismal. 11.5.4. Tiroidita Hashimoto..... 11.5.5. Orhita autoimun... 11.5.6. Diabetul zaharat.. 11.5.7. Miastenia gravis... 11.5.8. Sindromul Good Pasture. 11.5.9. Uveitele..... 11.5.9.1. Uveita recurent ecvin ( oftalmia periodic)... 11.5.10. Anemia pernicioas.... 11.5.11. Anemia hemolitic autoimun (AHAI)... Capitolul 12. SINDROAME DE IMUNODEFICIEN I

IMUNODEPRESIE Mihai CARP-CRARE


12.1. Imunodeficiene primare (IDP) prin afectarea celulelor limfoide.. 12.2. Deficite primare ale fagocitelor i complementului.... 12.3. Imunodeficiene secundare (IDS)..
3

208 215 218

Capitolul 13. STRILE DE HIPERSENSIBILITATE..

226 227 233 237 244 245 247 247 248 249 250 252 254 257 258 259 260

Mihai CARP-CRARE
13.1. Strile de hipersensibilitate imediat ( SHI)... 13.2. Reacii citotoxice sau citolitice.... 13.3. Reacii mediate de complexele imune..... 13.4. Strile de hipersensibilitate tardiv ( HST)..... 13.5. Hipersensibilitatea stimulatoare de tip V..... Capitolul 14. IMUNOPROFILAXIA..... Mihai CARP-CRARE, Dorina TIMOFTE 14.1. Vaccinuri: definiie i clasificare... 14.2. Vaccinuri vii i neatenuate. 14.3. Vaccinuri vii atenuate 14.4. Vaccinuri vii inactivate i anatoxine..... 14.5. Vaccinurile obinute prin tehnologii moderne... 14.6. Modul de aplicare al vaccinurilor... 14.7. Serurile imune ...... 14.8. Modul de preparare al unui ser... 14.9. Modul de aplicare al serurilor. Capitolul 15. SUBSTANE IMUNOMODULATOARE, IMUNOSTIMULATOARE I IMUNOADJUVANTE Mihai CARP-CRARE 15.1. Termenii folosii pentru desemnarea substanelor cu efect asupra sistemului imunitar. 15.2. Clasificarea substanelor imunomodulatoare 15.3. Modul de aciune .... 15.3.1. Aciuni asupra antigenului... 15.3.2. Aciuni asupra organismului gazd.... 15.4. Modul de aciune al unor imunoadjuvani specifici.. 15.5. Produse chimice definite, bacteriene sau micotice 15.5.1. Micobacteriile.. 15.5.2. Lipopolizaharidele i polizaharidele.. 15.5.3. Propionibacterium acnes (Corynebacterium parvum).... 15.5.4. Endotoxinele bacteriene mixte.. 15.5.5. Avipox i Parapoxvirusurile. Alte virusuri.. 15.5.6. Saponinele... 15.6. Produsele biologice ale sistemului imun i analogi sintetici.... 15.6.1. Interferonii. 15.6.2. Hormonii timici i limfokinele... 15.6.3. Homopolimerii ARN complementari dublu torsadai... 15.7. Substane i preparate chimice... 15.7.1. Compuii de cupru. 15.7.2. Vitamina E i seleniul...
4

260 261 263 263 264 265 265 265 267 267 268 268 269 269 269 270 270 271 271 272

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE
15.7.3. Compuii de zinc..... 15.7.4. Compuii de aluminiu.. 15.7.5. Emulsiile uleioase... 15.7.6. Levamisolul.... 15.7.7. Dinitroclorbenzenul (DNCB) 15.7.8. Azimexon i Tufstin... 15.7.9. Lipozomii..... 15.8. Inocuitatea adjuvanilor. BIBLIOGRAFIE SELECTIV. 272 272 273 274 275 275 275 275 277

PREFA
Imunologia este poate domeniul cel mai dinamic al biologiei, motiv pentru care completarea manualelor de specialitate cu date noi, devine necesar i n acelai timp destul de dificil de realizat. Trecerea a aproape ase ani de la prima ediie a manualului de Imunologie i Imunopatologie face simit nevoia reeditrii manualului ntr-o form actualizat. Discuiile purtate ntre timp cu specialitii sau studenii, cu referire la acest manual, au oferit numeroase sugestii ce au fost luate n considerare la redactare. Ca urmare s-au fcut o serie de modificri care, sperm, vor face mai uoar nelegerea mecanismelor imunologice i imunopatologice. Astfel, unele capitole au fost rescrise, adaptate sau reorganizate cu scopul crerii unei mai bune continuiti a textului. De asemenea au fost introduse numeroase imagini noi, au fost mbuntite cele deja existente, iar stilul redactrii ncearc s uureze lectura unui text dificil prin specificul su. Exprimm sperana c aceast nou ediie va rspunde ateptrilor celor interesai i n primul rnd al studenilor i medicilor veterinari, crora li se adreseaz . Aducem mulumirile noastre referenilor tiinifici pentru amabilitatea cu care au rspuns invitaiei de a face parte din comisia de analiz i pentru contribuia adus la finalizarea acestei lucrri.

AUTORII

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE

CAPITOLUL 1 OBIECTUL IMUNOLOGIEI


Imunologia este o ramur a biologiei care se ocup cu studiul imunitii i a tuturor tipurilor i mecanismelor de rspuns imun. Noiunile de imunogenetic, imunochimie, imunopatologie, imunoprofilaxie i imunoterapie, constituie, de asemenea, obiectul imunologiei. Ca tiin, imunologia a aprut la sfritul sec. XIX, prin descoperirea metodelor de serologie, care au permis analizarea detaliat a reaciilor de tip antigen - anticorp i deriv de la latinescul immunis = scutit, aprat i logos = tiin, doctrin. La nceputurile ei, imunolgia se ocupa cu studiul mecanismelor de rezisten antiinfecioas, acestea constituind n ansamblul lor starea de imunitate. n urma descoperirii implicaiei fenomenelor imunologice ntr-un numr mare de procese, optica asupra coninutului acestei discipline s-a schimbat n bun msur. Obiectul de studiu al imunologiei este privit astzi, n raport de comportarea organismului fa de structurile proprii (self) i improprii (non-self). Organismul are capacitatea de a recunoate i de a deosebi selful de non-self, reacionnd diferit fa de aceste dou structuri, dup cum urmeaz: selful este recunoscut i acceptat, iar non-selful este respins (ndeprtat, distrus, neutralizat) sub aciunea unor efectori imuni. n sfera de studiu a imunologiei au fost cuprinse, de asemenea, toate modalitile de aciune a organismului att fa de structurile nonself ct i fa de selful modificat sub aciunea diferiilor factori nocivi.

CAPITOLUL 2 ISTORICUL IMUNOLOGIEI


Imunologia, ca disciplin medical, se difereniaz abia la sfitul secolului al XIX- lea, dei observaii asupra rezistenei fa de bolile difuzabile au existat nc din timpuri imemorabile. n evoluia imunologiei se disting dou perioade: Perioada observaiilor i remediilor empirice; Perioada tiinific. Perioada observaiilor i a remediilor empirice Este cert c pentru cresctorii de animale, epizootiile au prezentat o preocupare i o team permanent. Scrierile din antichitate evoc epizootii extinse i pguboase, dar descrierile simpotomatologice sunt vagi i nu putem identifica, cu certitudine, care anume boli evoluau n acele timpuri. n general, epizootiile erau percepute ca pedepse pe care zeii le aplicau oamenilor. Egiptenii clasificau pedepsele aplicate de IEHOVA n zece categorii punitive, din care, a cincea i a zecea pedeaps, se referea la ciuma animalelor care se abtea, deopotriv, peste cai, mgari, cmile, boi i oi (Exodul 9.3), precum i asupra noilor nscui, la oameni i animale (Exodul 11.5). HOMER (Iliada II,1; 49-50) arta c n timpul rzboiului Troiei, Apollon i-a pedepsit pe greci prin mbolnvirea n mas a animalelor, care a dus la moartea lor, boala cuprinznd ulterior i oamenii. Observaiile acumulate n timpul marilor epidemii i epizootii au dus la desprinderea ctorva concluzii care au stat la baza tacticii aplicate n prevenirea bolilor infecioase. Astfel, popoarele din antichitate au recunoscut rolul contagiunii, fie direct, fie indirect, prin intermediul agenilor de contaminare. Rolul
8

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE rezistenei antiinfecioase este evocat de TUKIDIDE (II,51,6), n descrierea faimoasei peste de la Atena din anii 430 - 420 .e.n. Istoricul a remarcat faptul c subiecii trecui prin boal i care au supravieuit au putut fi folosii ca transportori de cadavre sau gropari, fr riscul de a se rembolnvi. Observaiile empirice au fost aplicate i asupra animalelor i au dus la unele concluzii profilactice, care i pstreaz utilitatea pn n zilele noastre. n acest sens, n caz de mbolnviri, se recomand izolarea animalelor bolnave, transportul cirezilor pe alte puni, ct mai departe de locul contaminat, mprirea turmelor n grupuri mici, controlul meticulos al alimentelor i a apei, sacrificarea animalelor n caz de eec terapeutic. Introducerea variolizrii a reprezentat o metod de profilaxie cunoscut i aplicat de chinezi nc din sec. X - XI e.n. Variolizarea const n inocularea de puroi variolic sau inhalarea de cruste variolice, fiind aplicat i la abisinieni, prin administrarea de cruste variolice, n siropuri, la asirieni prin scarificare sau prin flagelare cu nuiele infectate cu puroi variolic la vechii slavi. Prima vaccinare deliberat, n Europa, a fost fcut n 1720 de ctre LADY MARY MONTAGU (16891762), soia ambasadorului britanic de pe lng nalta Poart, care i-a vaccinat cei patru copii prin scarificare, ei fcnd la locul de inoculare o pustul variolic i nembolnvindu-se ulterior de variol.
http://www.library.unt.edu/rarebooks/exhibits/women/Images/Montagubig.jpg

Perioada tiinific Dup cum se observ din concepiile perioadei empirice, fenomenele de imunitate au fost privite ca strict legate de procesele infecioase. Imunologia are ns, astzi, o arie de cercetare mult mai vast. Prin fenomen imunologic se nelege orice reacie de rspuns a unui organism fa de structuri morfologice i biochimice strine de organism. Cel care a fcut prima vaccinare tiinific a fost medicul englez EDWARD JENNER (1749-1823).
9

Imunizarea preconizat de acesta se baza pe observaia c fermierii care contractau variol de la bovine fceau o boal benign i c deveneau rezisteni la variola uman, foarte rspndit n acele vremuri. El i-a confirmat observaia prin inocularea experimental a unui lot de deinui din nchisoarea Newgatte (1798), experiment ncheiat cu deplin succes. (http://www.bbc.co.uk/history/historic_figures/jenner_edward.shtml) Secolul al XIX-lea reprezint, ns, pasul decisiv al metodelor de imunizare prin cercetrile marelui savant francez LOUIS PASTEUR (1822-1895). Prima observaie tiinific n acest sens a fost fcut asupra rezistenei fa de holera aviar, boal contagioas a galinaceelor cu o mortalitate ridicat. PASTEUR a pstrat o cultur virulent de Pasteurella spp., timp de cteva luni, n condiii de laborator. Inocularea la gini sntoase a culturii nvechite, nu numai c nu a produs boala, dar, a conferit acestora o rezisten fa de o inoculare ulterioar cu o cultur proaspt i cu o nalt virulen (1878).
http://www.britannica.com/EBchecked/topic-art/445964/3094/Louis-Pasteur

Cu aceast ocazie L. PASTEUR a propus termenul de vaccinare (lat. vacca = specia de la care s-a recoltat primul antigen), termen care a fost adoptat i s-a impus n lumea medical. Aceast prim vaccinare a reprezentat un imens progres n imunologie, ntruct, fa de variolizare i aftizare, care utilizau tulpini slbatice i care nu puteau fi controlate, L. PASTEUR a utilizat o cultur atenuat, lipsit de patogenitate, care nu a reprezentat nici un pericol pentru animalele inoculate. Cercetrile lui L. PASTEUR n domeniul imunitii au culminat cu celebra experien de la Pouilly-le Fort (5 mai 1881) n care s-a demonstrat fr echivoc valoarea metodei vaccinrii anticrbunose. Utilizarea vaccinului antirabic (1885) a ncununat definitiv era imunizrilor cu ajutorul vaccinurilor cu tulpini atenuate. SALMON i THEOBALD SMITH (1887) au demonstrat c pentru imunizarea artificial se pot utiliza i germeni omori, sensul termenilor vaccin i vaccinare, fiind extins n mod
10

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE corespunztor.


http://www.mentalfloss.com/blogs/archives/15843, http://en.wikipedia.org/wiki/Theobald_Smith

n aceeai perioad au aprut i lucrrile lui ILIA ILICI MECINIKOV (1845-1916) care, n 1883 1884, a descoperit fenomenul de fagocitoz i a semnalat rolul leucocitelor n mecanismele imuntii naturale sau dobndite. Sfritul sec. al XIX lea a adus o serie de observaii care au permis elucidarea modalitilor de interacie ntre antigen i anticorp i specificitatea acestor reacii. G.H.F. NUTTAL, n 1888, a descoperit proprietile bactericide ale serului sanguin, iar un an mai trziu H. BUCHNER (1889) a descoperit alexina.
http://ro.wikipedia.org/wiki/Ilia_Ilici_Mecinikov

n 1890 E. BEHRING i S. KITASATO au descoperit toxinele tetanic i difteric i au recomandat seroterapia n bolile respective. Descoperirea aciunii specifice a serurilor i-a gsit imediat aplicare n terapie i diagnostic.
http://www.cartage.org.lb/fr/themes/Biographies/mainbiographie/B/behring/behring.htm http://nobelprize.org/nobel_prizes/medicine/articles/behring/index.html

EHRLICH (1891) a demonstrat c toxinele vegetale pot fi antigenice i J. BORDET (1898) a reuit imunizarea la animale, cu hematii provenite de la alt specie.http://www.immunotherapy-inoncology.com/gateway.aspx?sc=1 http://nobelprize.org/nobel_prizes/medicine/laureates/1919/

GASTON RAMON (1886-1963) a preparat anatoxina tetanic i a descoperit rolul substanelor adjuvante n mrirea capacitii imunogene a vaccinurilor. Aceste observaii au dus la reconsiderarea noiunii de imunologie, lrgindu-i mult sensul i devenind tiina despre antigene i anticorpi care nu se reduc strict
11

la rezisten antiinfecioas. http://www.gettyimages.com/detail/2666199/Hulton-Archive Strile patologice ale mecanismelor imunogenice ca anafilaxia (PORTIER i RICHET, 1902; RICHET, 19071911), anafilaxia local (ARTHUS, 1903), reacia la tuberculin (KOCH, 1891), boala serului (PIRQUET i SCHICH, 1905) s-au dovedit a fi consecine ale unor reacii de tip antigen-anticorp.
http://www.historiadelamedicina.org/richet.html http://clendening.kumc.edu/dc/pc/p.html

Explicaiile i teoriile asupra mecanismelor imunitii au ncercat s demonstreze c imunitatea este un rspuns activ al organismului fa de o substan strin de organism (EHRICH, 1807; HAUROWITZ, MUDD, ALEXANDER, 1932; BURNET, 1958). Cercetrile din ultimele decenii ale sec. XX, cu ajutorul microscopului electronic, difuziunii n geluri, electroforezei i imunoelectroforezei, cromatografiei anticorpilor fluoresceni au dus la extinderea considerabil a cunoaterii antigenelor i anticorpilor i a reaciilor dintre acestea. tiina romneasc a adus contribuii substaniale la evoluia imunologiei. VICTOR BABE i M.C. LEPP (1889) au fcut cercetri asupra vaccinrii antirabice i au formulat principiul imunitii pasive umorale. Una dintre cele mai remarcabile descoperiri fcute de V. BABE n domeniul imunologiei este utilizarea serovaccinrii (1895).
http://www.medicalstudent.ro/personalitati/victorbabes.html

A. BOIVIN i L. MESROBEANU (1933-1935) au extins n mod considerabil cunotinele asupra structurii chimice a antigenelor, prin descoperirea antigenelor glucido-lipidopolipeptidice.
http://www.pasteur.fr/ip/easysite/go/03b-000026-04a/history

12

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Prof. PAUL RIGLER (1867-1936), unul dintre colaboratorii apropiai ai lui V. BABE este considerat pe drept cuvnt ntemeietorul imunologiei veterinare n ara noastr, att prin lucrrile sale n domeniul utilizrii vaccinurilor la animale i a seroterapiei, ct i prin rolul determinant pe care l-a avut n nfiinarea primului institut de preparare a vaccinurilor i serurilor din ara noastr, Institutul Pasteur (1909) din Bucureti. n jurul lui PAUL RIGLER s-a format o valoroas coal de microbiologie i imunologie veterinar, care onoreaz tiina romneasc, din care amintim: AL. CIUC (1880-1972), I. POPOVICI (1902-1982), N. MUNIU (1909-1977), N. STAMATIN (1905-1992) i alii.

13

CAPITOLUL 3 SISTEMUL IMUNITAR


n concepia moder (Jerne, 1973,1985), sistemul imunitar poate fi considerat ca un organ difuz, celular i molecular, alctuit dintr-un numr mare de limfocite (aprox. 2 x 1012) i molecule de anticorpi. Aa cum organismele vii selecionate n cursul evoluiei i menin integritatea de specie, graie sistemului lor genetic, sistemul imunitar asigur integritatea organismelor individuale fa de agresiunea diferiilor ageni patogeni sau de ptrunderea unor substane nedorite, meninndu-le individualitatea i homeostazia. Sistemul imun este alctuit din ansamblul celulelor i moleculelor, ale cror aciune i interaciune permit organismului s discearn, n mod specific, cu promptitudine i sensibilitate, substanele proprii (self) de cele strine (nonself). n acest proces, sistemul imunitar acioneaz ca un dispozitiv de recunoatere (Recognito machineJerne, 1977). n mod normal, manifest o toleran perfect fa de constituienii proprii i reacioneaz mpotriva celor nonself, n sensul neutralizrii, distrugerii i eliminrii lor din organism. n ansamblu, sistemul imunitar este unul dintre cele mai complexe din organism. Complexitatea sa deriv din structura de reea complicat de comunicaii, celular i molecular, din ubicvitatea constituienilor si, din capacitatea de a determina efecte multiple, bazate pe un numr relativ puin numeros de tipuri diferite de celule, care interacioneaz direct sau prin intermediul unor mediatori moleculari biologic activi. Celulele i moleculele acestei reele defensive menin permanent supravegherea organismelor. Ele recunosc o varietate aproape fr limite de celule i molecule strine, deosebindu-le de cele ale organismului nsui. Cnd un agent patogen (virus, bacterie, etc) ptrunde n organism, l detecteaz i se
14

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE mobilizeaz pentru a-l neutraliza i/sau a-l ndeprta. Ele i amintesc fiecare infecie i la a doua expunere, la acelai agent patogen, reacioneaz cu mult mai mare eficien. Remarcabil, dup Tonegawa (1985) este faptul c sistemul imunitar face toate acestea cu un foarte mic buget de aprare, respectiv utiliznd numai o mic parte a genomului i, n general, a resurselor organismului.

3.1. CONCEPTUL DE SELF I NONSELF


Termenii self i nonself au fost propui de Burnet i Fenner (1945) cu scopul de a facilita discuiile asupra capacitilor de recunoatere ale sistemului imunitar. Capacitatea organismelor de a deosebi substanele proprii (eng. self= identic, personalitate, fcut din acelai material) de cele strine (non-self) a fost semnalat nc din anul 1597, de chirurgul italian Tagliocozzi. Iniial, conceptul de nonself se referea exclusiv la substanele strine exogene. Ulterior, numeroase observaii au evideniat capacitatea sistemului imunitar de a rspunde prin producerea de anticorpi sau prin reacii de hipersensibilitate fa de unii constituieni proprii organismului gazd. Acesta este cazul unor substane aflate, n mod normal, prin poziia lor anatomic, la dpost de contactul cu celulele sistemului imunitar (antigenele sechestrate) sau care au suferit o serie de modificri, n special calitative, ale suprafeei celulare (self alterat, transformare malign, etc.). Sistemul imunitar poate reaciona i fa de molecule strine, care, n principiu, nu sunt duntoare, aa cum sunt unele proteine din alimente, dac nu sunt, n prealabil, degradate de enzime la aminoacizi.

3.2. CONCEPTUL DE REPERTORIU


Sistemul imunitar dispune de un repertoriu imens de uniti de recunoatere i de legare a antigenelor, codificate genetic sub forma

15

receptorilor celulari i a situsurilor active de combinare (paratopi) ale moleculelor de anticorpi. Dup cum s-a demonstrat, fiecare limfocit individual are pe suprafa o populaie de receptori, avnd situsurile de combinare identice. O subpopulaie sau o clon de limfocite difer de alta prin natura receptorilor i, astfel, prin natura substanelor antigenice de care pot fi stimulate. Capacitatea organismului de a rspunde la toate antigenele pe care virtual le poate ntlni n cursul existenei sale este consecina repertoriului imens, de clone diferite, fiecare purtnd receptori specifici pentru un antigen distinct. Repertoriul teoretic este imens i apreciat de unii cercettori la aprox. 1030 entiti, cu specificiti diferite. Teoretic, acest repertoriu d organismelor posibilitatea de a recunoate nu numai orice antigen natural, dar chiar orice alt substan sintetizat artificial pn n prezent sau care ar putea fi obinut n viitor. Cel mai adesea, combinarea specific dintre antigen i anticorp a fost descris ca rezultatul potrivirii dintre o cheie (determinantul antigenic) i o regiune complementar a lactului, corespunztoare sistemului activ de combinare al anticorpilor. n felul acesta, repertoriul receptorilor i anticorpilor este echivalentul unui set imens de chei, pregtite dinainte, ntre care exist o cheie potrivit pentru orice lact teoretic posibil. Dup Coutinho i colab. (1980), repertoriul imunitar ar avea caracterul de complet(completness i oarecum nchis). Aceasta nseamn c, teoretic, organismul poate rspunde cu producere de anticorpi specifici, fa de molecula strin existent n natur sau sintetizat artificial, inclusiv fa de moleculele pe care nu le-a ntlnit niciodat mai ninte.

3.3. RSPUNSUL IMUN CA REACIE ADAPTATIV A ORGANISMULUI


Spre deosebire de mecanismele de rezisten sau de imunitate nnscut (Innate immunity), care asigur protecia nespecific a
16

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE organismului fa de diferite agresiuni externe, rspunsul imun are caracter adaptativ. Acest caracter decurge din orientarea specific a reaciilor sale spre un anumit agent patogen sau o anumit substan nonself. Ele sunt determinate de mobilizarea unor celule programate, care ateapt s fie activate de un anumit agent specific, corespunztor specificitii lor. Rspunsul adaptativ are o serie de particulariti eseniale, care, n ansamblu, determin eficiena sa att de marcat: 1. Acioneaz strict specific, pe baza capacitaii sistemului imunitar de a deosebi substanele self de cele nonself i de a recunoate o diversitate enorm de substane nonself. 2. Acioneaz cu o mare economie de mijloace, deoarece selecioneaz i activeaz numai subpopulaiile celulare corespunztoare substanei nonself respective, toate celelalte celule i molecule rmnnd disponibile pentru alte interaciuni. 3. Reaciile adaptative asigur i protecia descendenilor unui organism imun, prin transferul transplacentar al anticorpilor i/sau prin lapte i au, n plus, o proprietate fundamental unic, memoria imunologic. n ansamblu, funcionarea sistemului imunitar i evoluia rspunsului adaptativ sunt caracterizate printr-o mare suplee i o foarte mare eficien, asigurate prin punerea n aciune a mai multor strategii diferite, menite s neutralizeze diferite substane strine sau devenite strine.(Fig.1) ntreaga activitate este controlat genetic i supus unui numr mare de macanisme de reglare, care moduleaz interaciunile constituienilor i/sau ale moleculelor de mediatori, amplificndu-se enorm sau, din contr, atenund sau chiar represnd rspunsul imun, n funcie de nevoile organismului.

17

Fig.1. - Prezentarea schematic a interaciunii dintre mecanismul imunitii


naturale (nespecifice) i ale imunitii specifice (adaptative).

3.4. IMPLICAIILE SISTEMULUI IMUNITAR N PATOLOGIE


Exist un acord unanim n a considera existena unui sistem imunitar integral reactiv, ca o premis esenial pentru supravieuirea organismelor n lupta cu diferii ageni patogeni infecioi (viroizi, virusuri, bacterii i alte microorganisme), toxici sau oncogeni. Numeroase stri patologice consecutive deficienelor imunitare reprezint confirmarea cea mai elocvent a acestei necesiti. Cu toate acestea, n anumite circumstane, rspunsul imun poate fi dezavantajos. Imunopatologia reprezint, n prezent, unul dintre domeniile importante i de mare dificultate ale tiinelor medicale,

18

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE prin complexitatea mecanismelor patogenetice, a dificultilor de diagnostic i mai ales a implicaiilor terapeutice. Mai multe exemple ilustreaz importana i semnificaia acestui domeniu. Diferite stri patologice consecutive reaciilor de hipersensibilitate, alergia la polen i la substanele chimice (colorani, medicamente, etc.), bolile consecutive depunerii complexelor antigenanticorp la nivelul unor organe (de exemplu, rinichiul) sunt exemple foarte familiare, care ilustreaz efectele unui rspuns imun nedorit. Reaciile imunitare anormale ca intensitate i/sau natur pot sta la baza unor boli autoimune, care afecteaz grav diferite esuturi i organe. Un alt exemplu de implicare a sistemului imunitar n patogenia unei boli este reprezentat de accidentele de tipul eritroblastozei fetale (maladia hemolitic a nou-nscutului) determinat de anticorpii materni. n sfarit, respingerea imunitar a transplantelor de esuturi i organe, corelate, n unele cazuri, cu funcii vitale, reprezint nc un exemplu dramatic dintr-o gam foarte larg de situaii asemntoare.

19

CAPITOLUL 4 ELEMENTELE SISTEMULUI IMUN


Rspunsul imun este expresia conflictului dintre AGRESOR, pe de o parte (bacterii, virusuri, parazii, toxine, etc) i ORGANISMUL AGRESAT, pe de alt parte. Agresorul, prin antigenele sale (non-self), deranjeaz funciile normale ale gazdei i genereaz reacii de aprare din partea acesteia, care vizeaz neutralizarea aciunii lui. Meninerea funciilor organismului n limite normale este realizat de cre un sistem specializat n acest sens, denumit SISTEMUL IMUN (SI) alctuit din organe, molecule i celule.(Schema nr.1)
SISTEMUL IMUN

ORGANE LIMFOIDE

CELULE

MOLECULE

PRIMARE

SECUNDARE

Granulocite

Monocite

Limfocite

Imunoglobuline

Alte molecule

-Timus -Maduva osoas -Bursa lui Fabricius (la psri) -Ficatul embrionar

-Limfonoduri -Neutrofile -Splina -Eozinofile -Apendicele cecal -Bazofile -Amigdalele -Placile Payer -esuturi limfoide asociate mucoaselor

-Macrofage -Celule dendritice -Celule NK

-LT -LTB

-IgG -IgM -IgA -IgD -IgE

Complement -Limfokine -Monokine

Schema nr. 1 Elementele sistemului imun

20

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE

4.1. ORGANELE LIMFOIDE PRIMARE (CENTRALE)


Sunt reprezentate de mduva osoas, ficatul embrionar, timusul i bursa lui Fabricius la psri. n aceste organe, limfocitele, macrofagele i celelalte celule implicate n realizarea rspunsului imun, se formeaz i se dezvolt ca elemente celulare, devin active n urma unor procese de maturare i citodifereniere, fr intervenia antigenelor. Mduva osoas La mamifere i la om, celulele su multipotente apar n etapele timpurii ale embriogenezei, n insulele hematopoetice din mezodermul sacului vitelin, apoi n ficatul fetal i n mduva osoas. n condiii normale, n viaa extrauterin, mduva osoas reprezint singurul organ furnizor de celul su multipotent. Deci, mduva roie hematoformatoare este sediul genezei celulei cap de serie, numit i celula precursoare, celul stem, su sau pluripotent. Celulele stem au dou caracteristici principale: diferenierea spre una din seriile sangvine; autoreplicarea pentru meninerea constant a numrului celulelor stem; Populaia de celule stem nu este uniform, att din punct de vedere morfologic, ct i funcional. Din punct de vedere funcional se disting dou grupe: celule stem pluripotente (mielo-limfopoietice) celule stem unipotente, orientate spre o serie sangvin. La nivelul mduvei hematoformatoare, n afar de celula su, se mai gsesc toate treptele de maturare, inclusiv pentru hematii, polimorfonucleare, monocite, megacarionocite. n ceea ce privete limfocitele, n afar de celulele su i precursorii limfocitelor, la nivelul mduvei se mai pot ntlni, limfocite mature B i chiar plasmocite. Celulele purttoare ale markerilor
21

limfocitelor T nu se gsesc n mod normal dect sub form de celule progenitor (celule precursoare pretimice). Limfocitele sunt n general amestecate cu celelalte celule, dar pot fi observate i sub form de aglomerri focale. Limfocitele circul din mduv n alte organe limfoide pentru ai exercita funcia imun. Celulele su care se vor diferenia n limfocite T vor trece n timus, iar celulele care vor deveni limfocite B, dup unele opinii, rmn i se matureaz la nivelul mduvei iar dup altele, trec n esuturile limfoide, asociate mucoaselor. Ficatul embrionar n etapele timpurii ale dezvoltrii embriofetale, ficatul embrionar este singurul furnizor de celule su pentru toate elementele figurate ale sngelui. Se consider c dup natere, rolul ficatului embrionar este preluat de ctre mduva hematogen. Timusul Este un organ limfoepitelian, format din doi sau mai muli lobi, situat n mediastinul inferior la om, n toracele anterior dispus ventral la mamifere, iar la psri este dispus sub forma unor lobi nirai de-o parte i alta a vertebrelor cervicale. Timusul este esenial la nceputul vieii, pentru a asigura maturarea imunologic normal a limfocitelor T (LT), iar la organismele adulte reaprovizionarea anatomic i funcional a sistemul de aprare celular. O dat cu mbtrnirea, timusul involueaz, dar nu dispare complet, el asigurnd organismului necesarul de celule T virgine pentru toat viaa, dar ntr-o cantitate redus. Limfocitele T capt competen imun numai dup ce au prsit timusul. Ele asigur imunitatea mediat celular (antigref, antitumoral, contra unor boli infecioase, etc) acionnd direct, citotoxic sau indirect, prin intermediul limfokinelor. n afara de imunitatea celular, limfocitele T au i un important rol n elaborarea rspunsului imun umoral, prin procesul de cooperare celular cu limfocitele B. Bursa lui Fabricius
22

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Este un organ limfoepitelial, pericloacal, prezent numai la psri i cu structur lobular, asemntoare cu timusul. Organul involueaz dup maturizarea sexual a psrilor.(Fig.2)

Fig. 2. Sistemul limfoid la psri (dup Pastoret i col.) 1. Timusul 2. Glanda Harder 3. Splina 4. Plcile Payer 5. Bursa lui Fabricius 6. Diverticulul Meckel 7. Forma]ii limfoide cecale 8. Mduva osoas Seciune prin bursa lui Fabricius 1. Pliuri bursale 2. Lumenul bursal 3. Foliculii limfoizi

Stroma epitelial a bursei este populat cu celule limfoide precursoare, provenite din sacul vitelin, ficatul fetal i mduva osoas. La nivelul Bursei lui Fabricius, celula su multipotent sufer un proces de citodifereniere i maturare analog celui care are loc la nivelul timusului, dar care confer limfocitelor nsuiri calitativ deosebite de cele ale limfocitelor T. Ubicvitina este un factor umoral, cu rol citodifereniator manifestat asupra limfocitelor, notate cu simbolul B. Dup formare n organele limfoide primare, LB migreaz n organele limfoide secundare, devin capabile s reacioneze la stimulul antigenic prin transformri blastice n plasmocite productoare de anticorpi (Ig), care sunt efectorii imunitii umorale. La mamifere, organul limfoid primar pentru limfocitele B nu este pe deplin cunoscut. Echivalentul bursei la mamifere sunt considerate esuturile limfoide, asociate mucoaselor: amigdalele faringiene, plcile Peyer, apendicele ileo-cecal. Dup alte cercetri, echivalentul bursei la mamifere ar fi mduva osoas i ficatul embrionar
23

(B de la bone marow = mduva osoas).

4.2. ORGANELE LIMFOIDE SECUNDARE (PERIFERICE)


Limfocitele T i B, dup maturare i instruire n organele limfoide centrale, le prsesc i populeaz organele limfoide periferice, reprezentate de: limfonoduli, splin, esuturile limfoide asociate mucoaselor i glanda Harder (la psri). Limfonodulii Sunt formaiuni limfoide localizate pe traseul vaselor limfatice, n hilurile unor organe sau n anumite zone anatomice, regionale. Limfonodurile sunt organe conectate direct la circulaia limfatic. Prin vasele limfatice aferente, aflueaz limfa din teritoriul de drenaj. O dat cu limfa, sunt transportate i diferite antigene, limfonodurile reprezentnd adevrate sisteme de filtrare i de reinere a elementelor strine (non self). La nivelul limfonodulilor se gsesc trei categorii de celule: celule limfoide (LT, LB i plasmocite), care sunt celule imunocompetente i care, sub influena stimulilor antigenici, devin apte de expansiune clonal i difereniere, fiind capabile s produc efectori ai imunitii specifice att umorali ct i celulari; celule ale sistemului fagocitic mononuclear, care asigur aprarea i clearence-ul organismului de antigenele strine i autologe alterate, prin procesul de fagocitoz; ele intervin n cooperarea macrofag LB - LT, n elaborarea rspunsului imun; celulele ale esutului conjunctiv (fibrocite, fibroblaste, celule reticulare i celule reticulare dendritice). Limfonodulii cresc mult n volum n caz de inflamaie sau de stimulare antigenic, datorit proliferrii limfocitelor. n cazul unui rspuns imun mediat umoral, prolifereaz limfocitele B din zona centrilor germinativi, n timp ce n cazul unui rspuns imun mediat
24

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE celular are loc o proliferare a limfocitelor din aria timodependent paracortical. Splina Este organul limfoid periferic cel mai mare, conectat direct la circulaia sangvin. Nu are vase limfatice aferente sau eferente, de aceea antigenele acced la splin exclusiv pe calea sangvin, fiind reinute i prelucrate. Splina, ca i limfonodurile, pe lng funcia imun, are i rol de distrugere a elementelor mbtrnite sau patologice, ca i de depozitare a rezervelor de fier. Din punct de vedere imunologic, materialul antigenic ca atare sau prelucrat, activeaz LB din centrii germinativi foliculari. Anticorpii produi la nivelul splinei au specificitate mai ales fa de antigenele corpusculare adiministrate pe cale sangvin. O alt particularitate o constituie faptul c sngele, pe calea venei splenice, circul din splin n ficat, fiind stimulat astfel i activarea celulelor Kuppfer. esutul limfoid asociat tubului digestiv n submucoasa tubului digestiv, n diverse locuri, se gsesc sub forma unor aglomerri locale, colecii limfocitare. Aceste aglomerri limfocitare, n anumite locuri, sunt destul de mari, cptnd aspectul organoid aa cum sunt: amigdalele faringiene, palatine, linguale i tubale, formnd aa zisul inel Waldayer. De asemenea, formaiuni linfoide dezvoltate se gsesc n special n ileon, aa zisele plci Payer i esutul limfoid apendicular sub forma unor centri germinativi mari n mucoas. n mod sigur, esutul limfoid asociat tubului digestiv are un rol de prim importan n imunitatea mpotriva agenilor infecioi cu poart de intrare digestiv. Dovad este i faptul c secreiile gastrointestinale conin mai mult IgA produs de plasmocitele de la acest nivel dect secret celulele din ganglionii limfatici. Att imunoglobulinele ct i celulele limfocitare, pe lng eliminarea lor n lumenul gastrointestinal sunt drenate prin limfatice i n circulaia general. n aceste formaiuni limfoide se gsesc att limfocite T ct i limfocite B, n proporii variate.
25

4.3. DEZVOLTAREA I MATURAREA ESUTURILOR LIMFATICE


Rspunsul imun al unui animal la un imunogen depinde de existena seturilor de limfocite normal dezvoltate i funcional competente, posesoare de receptori, genetic determinai, pentru a reaciona cu imunogenul respectiv. n acest sens, funciile imune normale (imunocompetena i imunoreactivitatea) depind de dezvoltarea i maturarea complet a esuturilor limfoide. Eecul dezvoltrii i maturrii limfocitelor, n oricare din etapele succesive ale procesului, pot conduce la o imunodeficien (deficit al funciei imune). Celula su primitiv apare n sacul vitelin (n primul trimestru de sarcin), migreaz n ficatul i splina fetale (trimestrul II), apoi colonizeaz mduva osoas a oaselor lungi (trimestrul III), unde rmne s funcioneze i postnatal. Asemenea celule su se pstreaz multicompetente, adic au capacitatea de a se diferenia n precursorii liniilor de celule limfocitare, mielocitare, eritrocitare i megacariocitare. Exist indici c celulele limfoide din mduva osoas, care se difereniaz din celulele su, sunt deja programate pentru a deveni celule T sau B. Aceste celule sunt denumite protimocit i respectiv, precursor B. Protimocitele migreaz n timus, unde capt caracteristicile de celule T. Precursori B se matureaz n celule B n mduva osoas i, probabil i n splin (la psri n bursa lui Fabricius). n acest stadiu de dezvoltare, ambele tipuri de celule sunt morfologic identice, dar sunt deja programate pentru antigenul fa de care vor putea reaciona. Moleculele receptor de pe limfocitele B mature sunt identice cu imunoglobulina particular pe care o va sintetiza celula dup transformarea ei n plasmocit. n cursul maturrii ns, tipul de Ig receptor de pe membran se modific: iniial, este IgM, apoi IgD i la maturitate devine tipul pentru care celula a fost programat s-l secrete
26

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE (de ex. IgG), consecutiv stimulrii cu determinantul specific. (Exist date care arat c celulele aflate n curs de maturare, posednd receptori IgM i IgD funcioneaz ca celule latente n rspunsul imun primar i ca celule memorie n rspunsul secundar).

4.4. CIRCULAIA LIMFOCITELOR


Dup maturare n organele limfoide centrale (timus, mduva osoas), LT i, respectiv, LB migreaz, intr n circulaia sanguin i se mprtie n ntreg organismul, populnd organele limfatice periferice (limfonodurile, esuturi limfoepiteliale) n care se constituie lotul sechestrat de limfocite, la care se adaug lotul de limfocite recirculante prezente n snge i, uneori, n canale limfatice, lot format din celule aflate n drumul ntre organul limfoid central i cele periferice, ori migrnd ntre sau n interiorul organelor periferice. n organele periferice, cele dou tipuri de celule se acumuleaz n arii anatomice diferite. Astfel, n limfonoduri, limfocitele B, ptrund prin venulele postcapilare i se localizeaz n ariile corticale, iar descendenii lor, plasmocitele, migreaz n direcie invers spre medular (traversnd, probabil, aria timus-dependent). Limfocitele T vin, de asemenea, pe cale circulatorie i se aglomereaz n ariile paracorticale.
Venulele postcapilare predomin n zona de jonciune ntre cortex i paracortex i posed un tip particular de celule endoteliale, denumit endoteliu nalt. Limfocitele T i B pot traversa rapid acest endoteliul dinspre circulaia sanguin n ganglion, circul n ganglion de-a lungul sinusurilor i pot prsi ganglionul prin sinusurile medulare, reintrnd n canalul limfatic eferent prin care pot ptrunde n ganglionul urmtor sau din nou n circulaia sanguin via canalul toracic. (Fig.3)

27

Fig.3 Circulaia n ganglionul limfatic

n splin, LT se aglomereaz formnd manoane n jurul arterelor mici centrale ale corpusculului lui Malpighi. LB tind s se plaseze excentric n raport cu zona T i, ocazional, formeaz foliculii cu centru germinativ (coninnd limfocite tinere, cu talia mare), nconjurai de macrofage care fagociteaz antigene venite pe cale venoas. n sngele periferic, aproximativ 80% sunt LT i 15-20% LB. n decursul unei zile, datorit procesului de recirculare, numrul total de limfocite circulante este de 10-12 ori mai mare dect numrul real existent. LT circul, de asemenea, i n esutul interstiial, extravascular al unor organe ca: tegument, rinichi, ovar, uter, testicul i altele. LB nu circul extravascular. Distribuia topografic i traficul limfocitar asigur supravegherea imunologic a tuturor ariilor organismului gazd, cu excepia unor zone segregate anatomic de accesul acestor celule imunocompetente.
Celule hematopeotice (eritrocite, mielocite, megacariocite)

Imunitatea celular (hipersensibilizare)


LT memorie

Timocit Protimocit (timus)

(Atg + mcf)
LT

Celula T activat

Celule matc

LT helper sau LT supresor

Precursor B Mduv osoas Bursa lui Fabricius

LB

Antigen

Plasmocit

Anticorpi Ig M Ig G Ig A Ig D Ig E

LB memorie

Imunitate umoral

28

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE

CAPITOLUL 5
DIFERITE ASPECTE ALE IMUNITII

5.1. DEFINIIA IMUNITII I CLASIFICAREA STRILOR DE IMUNITATE


Imunitatea este o stare de rezisten, graie creia, organismul sntos se afl protejat parial sau total contra aciunii patogene a microorgansimelor i a toxinelor. Aceast definiie se refer la ansamblul de factori umorali i celulari care protejeaz organismul contra aciunii infecioase sau toxice a microorganismelor patogene. Imunitatea este un fenomen general observat la toate speciile vii: la animale (vertebrate i nevertebrate), plante i microorganisme (fa de bacteriofagi, etc.). Starea de rezisten sau imunitate se clasific dup urmtoarele criterii: 1. Dup natura imunitii: imunitate natural sau esenial, care poate fi absolut sau relativ; imunitate dobndit natural n timpul vieii prin mbolnvire sau provocat experimental prin vaccinare (activ) sau serumizare (pasiv); 2. Dup specificitatea imunitii: imunitate specific fa de un antigen (imunitatea anticrbunoas, antirabic);
29

imunitatea paraspecific fa de un antigen nrudit (virusul fibromului lui SHOPE pentru Myxomatoz, virusul herpetic de curc pentru boala lui MAREK).

5.2. IMUNITATEA NATURAL SAU ESENIAL


Este o rezisten nscut, transmis ereditar, determinat de structura morfofiziologic a speciei creia i aparine organismul considerat. Imunitatea natural este o proprietate pe care o posed organismul de a fi refractar la diferii ageni patogeni. Se consider c aceast imunitate este nespecific deoarece, ea se manifest chiar i atunci cnd organismul nu a venit n prealabil n contact cu antigenul. Imunitatea natural este la originea rezistenei fa de majoritatea microorganismelor anodine cu care organismul este n contact, permind n acelai timp i lupta contra agenilor patogeni foarte agresivi. Imunitatea natural absolut corespunde unei rezistene care acioneaz n orice condiii i se pune n funcie, n boli unice, viroze i protozoze, n timp ce imunitatea natural relativ o ntlnim n mai multe boli bacteriene i poate fi nvins prin diferite artificii. Exemple: PASTEUR reproduce crbunele la gin prin scderea temperaturii corporale CHARRIU i ROGER reproduc crbunele la obolanii surmenai, iar broasca devine sensibil la M. tuberculosis la 38C. Principalele caracteristici ale imunitii naturale sunt urmtoarele: are un caracter de specie, cuprinznd toi indivizii unei specii; reprezint un fenomen general, aprnd la cele mai simple vieuitoare (bacterii, protozoare) pn la organismele superioare (plante i animale); apare pe o anumit treapt de evoluie filogenetic a speciei; are un caracter genetic stabil i transmisibil ereditar;
30

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE efectorii imunitii naturale sunt constituii din structuri i funcii normale a organismului, a cror aciune este nespecific i nedifereniat indiferent de natura selfului; n determinismul imunitii naturale nu sunt implicate mecanismele de memorie imunologic;

5.3. FACTORII IMPLICAI N IMUNITATEA NATURAL


Una din primele condiii ale realizrii unei infecii este trecerea barierelor anatomice, boala fiind rezultatul multiplicrii agentului etiologic n organism, fr a fi distrus de factorii umorali, celulari ai acestuia. Factorii imunitii naturale la organismele superioare se pot clasifica dup mai multe criterii: a) localizarea lor n organism: interni externi; b) felul n care particip la determinismul strii de imunitate: predominant pasivi predominant activi; c) nivelul lor de organizare biologic sau biochimic: compui chimici, n marea lor majoritate prezeni n umori (factorii umorali) diferite celule rspndite n aproape toate organele i esuturile care acioneaz prin nsi activarea lor biologic (factorii celulari); d) complexitatea structurii sau funciei constituiente a factorului de rezisten factori cu un grad redus de complexitate (factorii menionai anterior) factori compleci, reprezentai de caracteristici constituionale, constante morfologice sau fiziologice

31

organismului, cum sunt: structura genetic, presiunea sanguin, temperatura normal, etc. e) natura factorului n raport cu normalul i patologicul (hipertermia, inflamaia, producia de interferoni). Acetia din urm acioneaz dup ce non-selful a reuit s se instaleze n organism i pot avea dou tipuri de consecine, posibile pentru organism: unul salutar, n cazul cnd non-selful este fcut inofensiv, altul nociv, cnd meninerea non-selfului duce la o amplificare a procesului patologic agravnd evoluia bolii. Lund n considerare criteriile de clasificare amintite factorii i mecanismele imunitii naturale pot fi sistematizate conform tabelului nr.1: Tabel nr. 1 pielea mucoasele capcanele anatomice (corneii nazali) pereii vaselor esuturile dense membranele celulare regenerarea i exfolierea epiteliilor micarea cililor epiteliilor ciliate splare, includere n mucus urmat mecanic Mecanisde eliminare mele de aciunea acidul undecilenic (piele) potenare a secreiilor acidul clorhidric (sucul gastric) rolului glandelor chimic factorii umorali diveri prezeni n barierelor lacrimi, lapte etc. antagonismul microbian ntre flora normal autohton i cea patogen autohton sau alohton

externe Barierele naturale interne

32

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE

Factorii umorali

lizozimul complementul (C) proteine de faz acut (ex. PRC=proteina C reactiv) polipeptidele bazice beta-lizina opsoninele anticorpii naturali diveri interferonii (IFN) microfagele leucocite polimorfonucleare n general i mai ales cele neutrofile mobile histiocitul monocitul celulele Kuppfer macrofagele osteoclastele celule nevroglice splenice peritoneale alveolare din ganglioni limfatici din endoteliile vasculare

Factori celulari

macrofagele fixe

fiziologice Mecanisme complexe fiziopatologice Factori constituionali i genetici

temperatra normal circulaia sanguin i limfatic presiunea sanguin hipertermia inflamaia elaborarea de interferoni Specie, ras, linie, individ

5.3.1. Barierele naturale

33

a. Pielea i mucoasele se opun ptrunderii germenilor patogeni n organism printr-o protecie mecanic funcional i chimic. Protecia mecanic i funcional este determinat de integritatea lor morfofuncional (cu excepia virusurilor, leptospirelor, brucelelor, ankilostomelor care pot ptrunde chiar prin pielea intact), prin capcane anatomice i mobilitatea ciliar, care ndeprteaz continuu secreiile mucoaselor, ncrcate cu diferite particule strine i microorganisme, de pe suprafat acestora. Protecia chimic la nivelul pielii i mucoaselor se realizeaz prin reacia acid a secreiilor acestora (acidul undecilenic la piele, acidul clorhidric la mucoasa gastric, acidul lactic la mucoasa vaginal, etc) i prin prezena n coninutul lor a unor substane cu rol bactericid cum ar fi: lizozimul, mucoproteinele i altele. Lizozimul este o enzim mucolitic care produce liza bacteriilor Gram (+) i a crei aciune la nivelul mucoaselor este potenat de IgA secretorie. Mucoproteinele sunt mai active contra diferiilor virui iar acidul clorhidric are un efect bactericid foarte important la anumite psri de prad (vulturul pleuv, pitulicea) care consum adesea cadavre n descompunere. El permite distrugerea tuturor bacteriilor n stomac, permind i meninerea sterilitii din duoden i jejun la anumite specii. b. Antagonismul microbian ntre flora normal autohton i cea patogen alohton se manifest prin efectul de barier (secreia unor bacteriocine active fa de alte bacterii patogene, competiia nutriional i de ocupare a spaiului vital prin viteza de multiplicare, etc.). Flora bacterian saprofit acioneaz asupra agenilor patogeni n doua moduri: competiie pentru elementele nutritive eseniale; secreia unor substane bactericide; Astfel, la nivelul intestinului se gsesc bacterii saprofite care secret substane cu rol bactericid. De exemplu: Escherichia coli secret substane numite colicine care se inser la nivelul membranei bacteriei patogene i modific potenialul energetic , determinnd moartea acesteia; Bacteriile saprofite de la nivelul epiteliului vaginal metabolizeaz glicogenul (produs de celulele epiteliale vaginale) i l transform
34

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE n acid lactic. Acidul lactic scade pH-ul vaginal crendu-se un mediu nefavorabil dezvoltrii bacteriilor patogene. c. Spaiul extracelular, prin gelul de mucopolizaharide bogat n acidul hialuronic, se opune prin vscozitatea sa la mobilitatea bacteriilor cu excepia celor productoare de hialuronidaz. d. Tensiunea local de oxigen acioneaz prin nivelul ei ridicat sau sczut. Nivelul ridicat n pulmon permite, de exemplu, dezvoltarea bacilului tuberculozei (a bacteriilor aerobe) n timp ce diminuarea oxigenului din esuturi atrage dup sine germinarea sporilor de germeni anaerobi (Clostridium) dup intervenii chirurgicale.

5.3.2. Factorii umorali


Factorii umorali sunt reprezentai de: complement (alexina), lizozimul, interferonii, polipeptidele bazice, opsonine nespecifice, beta lizine, proteina C reactiv i anticorpii naturali diveri. Complementul sau alexina reprezint un sisterm seric complex de 26 de substane proteice din plasm (C1-C26) denumite componente care se activeaz succesiv una pe cealalt ntr-o ordine dat (activare n cascad). Acestea se gsesc ntr-o concentraie relativ constant n serul normal. Cantiti mai mari de complement se gsesc n serul de cobai, iepure i nurc. Componentele complementului sunt sintetizate att de macrofage i monocite ct i de ctre celulele hepatice (cu excepia C1 care ar fi sintetizat la nivelul epiteliului gastrointestinal i urogenital). Elementul central const n activarea fraciunii C3. Enzimele activatoare (convertazele) sunt nscrise cu linie continu. nchiderea buclei autocatalitice de activare a lui C3 pe cale alternativ este marcat cu linie ntrerupt. Pentru simplificarea schemei s-a omis marcarea inactivatorilor i a inhibitorilor sistemului C' i alte detalii ale activrii finale. Proteinele sistemului complement reprezint 3 - 4% din totalul proteinelor plasmei (cca. 300 mg/ 100 ml).

35

Activarea complementului este declanat prin dou mecanisme (ci): 1. calea clasic amorsat de complexe moleculare rezultate din cuplarea anticorpilor cu antigenele (complexe imune). 2. calea alternativ care este daclanat n afara complexului antigenanticorp la care particip factorii: agregate moleculare de anticorpi, polizaharide, bacterii Gram pozitive sau Gram negative, parazii (ex. Tripanozoma), endotoxine bacteriene, levuri (ex. Candida albicans). 1. Calea clasic de activare a complementului Moleculele de imunoglobulin dup ce au fixat antigenul sufer modificri conformaionale care descoper situsul de legare cu C situat n zona Fc. Odat descoperit situsul de legare pentru C, leag fragmentul C1q din complexul proteic C1 al C. Acesta are forma unui buchet de lalele.(Fig.)-de introdus Extremitatea globuloas se leag la situsul pentru complement de pe molecula de Ig, iar tija (n prezena Ca2+ )activeaz fragmentele C1s i C1r . Dup activare, C1s i C1r s sunt convertite n enzime proteolitice numite convertaze (Fig.4)

36

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE

Fig.4. Modelul de activare enzimatic n cascad a complementului

Ambele ci produc enzime specifice convertaze care vor aciona asupra componentei a 3-a a sistemului (C3) rupnd-o n dou fragmente C3a i C3b. C3a este un agent inductor de inflamaie, iar C3b se depune pe bacterii sau pe alte celule - int, pe care le elimin prin dou mecanisme: imunoaderena i liza. O serie de fagocite (granulocite, neutrofile, macrofagele i celulele dendritice) exprim pe suprafa receptori specifici pentru C3b (denumii CR1). C3b mijlocete pe aceast cale ataarea celulelor - int pe fagocite (imunoaderen) i nglobarea lor ulterioar. Aceast nvelire cu C' a intelor care faciliteaz fagocitoza a fost denumit opsonizare. C3b poate media, totodat, continuarea activrii n cascad a sistemului care se va finaliza prin asamblarea unui complex enzimatic C5,6,7,8,9 pe suprafaa celulei - int. Acest complex a fost denumit unitate de atac a membranei, deoarece, provoac soluii de continuitate care duc la liza celulei atacate. Mecanismul este foarte eficient deoarece o singur molecul de C'3 - convertaz poate activa sute de molecule de C'3 pe suprafaa celular. Este de subliniat faptul c C'3 nativ din plasm este o molecul instabil. Ea genereaz continuu i aparent spontan C'3b cu o rat foarte sczut. Aceast autoactivare poart riscul formrii convertazei cii alternative i de aici pe acela al declanrii secvenelor nscrise mai sus (activarea autocatalitic a lui C'3). Organismul este protejat mpotriva acestei activiti potenial devastatoare prin mai muli inactivatori plasmatici i celulari care acioneaz n diverse puncte ale cascadei, ncepnd cu dezasamblarea convertazei. Evaluarea n clinic a complementului poate fi fcut prin dozri radioimune ale componentelor, prin titrarea componentelor cu ajutorul ELISA sau prin aprecierea global a activitii sistemului, care are ca principiu evaluarea capacitii serului de cercetat de a liza 50% dintr-o suspensie standard de eritrocite de oaie, nvelite cu anticorpi specifici. Aceast determinare a complementului hemolitic (CH50) apreciaz global activitatea cii clasice de activare i servete ca test de triaj pentru detectarea unor anomalii mai pronunate ale sistemului.
37

Complementul prezint n mare, urmtoarele aciuni: provoac liza antigenelor dup fixarea pe complexele antigenanticorp; activeaz fagocitoza; are aciune flagogen; activeaz chimiotaxia; mrete imunoaderena; produce conglutinare. Lizozimul (muraminidaza) este un ferment glucidolitic (FLEMING, 1922), prezent n lichidele organice ale diverselor specii de animale, n special la mamifere i psri i care are o aciune dezintegrant asupra celulei bacteriene. Modul de aciune const n liza componentelor mucopeptidice (mureina) ale peretelui celulei bacteriene i consecutiv, a distrugerii acestora. Activitatea optim a lizozimului se desfoar la pH 7,2 i temperatura pn la 50C, n condiii de anaerobioz i aerobioz. Rspndirea lizozimului n organism este mare, prezena lui fiind semnalat n secreiile care umecteaz mucoasele conjunctival, bucal, nazal i vaginal. De asemenea, se gsete n umori ca n lichidul pleural, plasma sanguin i ntr-o serie de organe, stomac, ficat, amigdale, intestin, precum i n albuul de ou. Lipsete din urin, fecale, i lichidul cerebro-spinal. Activitatea lizozimului este mai marcat asupra bacteriilor Gram pozitive saprofite (Micrococcus, Sarcina, Staphylococcus, Bacillus) i mai puin marcat asupra Gram - negativilor. Interferonii (IFN) reprezint o familie de glicoproteine moleculare provenite din mai multe surse: IFN alimfocitea, produi de leucocite (IFN leucocitari); IFN beta, produi de fibroblati i celulele epiteliale (IFN fibroblastici); IFN gamma, produi de limfocitele T (IFN imuni).(Fig.5) Dup ptrunderea un virus, celulele parazitate produc i secret IFN. Acesta se ataeaz pe receptori specifici exprimai pe membrana
38

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE celulelor nvecinate crora le induce o stare de rezisten antiviral, care stnjenete diseminarea virusurilor. Moleculele de interferon, se leag la receptorul pentru interferon (RIFN) de pe celulele nvecinate celulei infectate. Complexul IFN RIFN este endocitar i interferonul acioneaz prin dou mecanisme pentru a mpiedica infectarea acestor celule:

Fig.5. - Tipurile de interferoni

activarea unei gene care blocheaz sinteza proteinelor virale; activarea unei enzime (endoribonucleaza) care fragmenteaz ARN viral. Producia IFN apare foarte repede dup ce s-a produs infecia. Se presupune c celula reacioneaz fa de acizii nucleici virali prin derepresia genelor pentru IFN. Speciile cele mai eficiente n aprarea antiviral sunt IFN alimfocitea, IFN beta. IFN gama joac un rol important n reglarea sistemului imun: activeaz macrofagele, limfocitele B i T, celulele NK
39

i indirect, regleaz producia de anticorpi. IFN prezint specificitatea de specie (au activitate maxim asupra celulelor speciei care i-a produs). n prezent, IFN, care pot fi produi in vitro prin inginerie genetic, sunt utilizai n tratamentul mai multor afeciuni neoplazice sau inflamatorii. Polipeptidele bazice acioneaz asupra bacteriilor Gram pozitive, mecanismul fiind asemntor cu a detergeniolor cationici fr a aciona asupra lui Listeria i Pneumococcus. Anticorpii naturali (opsonine nespecifice) Se numesc anticorpi naturali, componentele serice care exist n serul indivizilor normali n afara tuturor imunizrilor specifice de origine infecioas sau vaccinal. n realitate, aceti anticorpi naturali sunt produi dup acelai proces ca i anticorpii imuni rezultai dintr-o imunizare specific. Totui trebuie menionat existena lor n cadrul imunitii nespecifice din moment ce prezena lor n umori este natural, deci neconsecutiv unei imunizri voluntare sau postinfecioase. Plecnd de la anticorpii naturali, transmii eventual, de la mam la nou - nscut pe cale transplacentar sau colostral i care dispar n prima perioad de via extrauterin, acetia sunt produi ulterior de acelai individ n numr i n concentraie crescut, pentru a atinge un maxim la sfritul perioadei de cretere. Sinteza lor este datorat resorbiei intestinale a antigenelor florei bacteriene normale sau alimentelor ingerate (de origine vegetal n principal). Animalele axenice, crescute n boxe sterile i private de flor intestinal nu produc aceti anticorpi dect foarte puin i apar numai ca un rspuns la antigenele de origine alimentar. Aceti anticorpi naturali sunt IgM produse de limfocitele B purttoare a markerului CD5. Numrul crescut de antigene existente n lumea vie, st la baza cuplrii nespecifice a anticorpilor naturali din serurile normale cu bacteriile, globulele roii, celulele animale sau vegetale ce urmeaz a fi captate prin endocitoz. Fagocitoza majoritii antigenelor necesit n prealabil, opsonizarea (sensibilizarea) lor prin intermediul anticorpilor naturali i a complementului (C').
40

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Opsonizarea const n legarea opsoninelor de antigene solubile sau corpusculare, reacie care permite, aderena acestora de suprafaa celulelor fagocitare purttoare de receptori Fc sau C' cu rol majoritar n inducerea fagocitozei (imunoaderen). Anticorpii naturali provoac, de asemenea, aglutinarea antigenelor bacteriene n suspensie, motiv pentru care mai sunt cunoscui i ca aglutinine naturale. Dar, puterea aglutinant a serurilor normale se poate exercita i asupra hematiilor. Sunt calificate drept heterohemoaglutinine naturale, anticorpii serului unei specii care aglutineaz hematiile unei alte specii. De exemplu, serul de gin conine numeroase heterohemoaglutinine pentru globulele roii ale unor diverse specii de animale. n cazul n care globulele roii ale anumitor indivizi sunt aglutinate de ctre serul altor indivizi din aceeai specie, se vorbete de izohemoaglutinine. Ele au fost n mod particular demonstrate de serul uman (izohemoaglutinine contra antigenelor de grup A i B). Serul a numeroase specii de animale domestice nu conine izohemoaglutinine naturale cu excepia celui de la cine de grup sangvin DEA - 7 (care conine izohemoaglutinine anti DEA - 7 naturale) i a celui de la pisic de grup B care conine izohemoaglutinine anti - A. ncrucirile antigenice sunt, de asemenea, frecvente ntre bacterii i explic de ce anticorpii naturali ndreptai mpotriva bacteriilor banale din flora digestiv pot juca un rol benefic n mod natural i contra bacteriilor patogene nrudite antigenic. Beta lizinele Este recunoscut faptul c plachetele sangvine constituie sursa unei mici proteine bazice (6 KDa) care este eliberat atunci cnd se produce agregarea lor n cursul coagulrii. Aceast protein este stocat n granulele plachetelor sangvine. Ea s-a denumit B - lizin de origine plachetar pentru a o distinge de o alt protein diferit, care posed aceleai activiti, izolat din lizozomii leucocitari i cunoscut sub numele de B - lizin neplachetar. Probarea originii plachetare a betalizinei rezult din constatarea c serul, obinut prin coagularea plasmei, nu conine beta - lizine.
41

Beta - lizinele sunt n egal msur gsite n saliv i n lacrimi unde prezena lor este asigurat printr- o sintez a celulelor secretoare ale glandelor salivare i canalului lacrimal. Efectul lor asupra bacteriilor sensibile const ntr-o liz asupra peretelui acestora, dup contactul cu serul activ, liza bacteriilor Gram pozitive are loc n cteva minute. Aceast eficacitate bacteriolitic remarcabil a lizozimului i beta-lizinelor, capabil s neutralizeze milioane de bacterii saprofite care vin n contact continuu cu esuturile organismului la nivelul rnilor, face parte din mecanismele naturale de defensiv nespecific. Proteina C reactiv (PCR) i trage numele de la faptul c reacioneaz, printre altele, cu proteina C a pneumococului. PCR se ataeaz pe unele bacterii sau fungi i promoveaz nvelirea acestora cu moleculele de C'. Acoperirea antigenelor cu C' (opsonizarea) produce facilitarea fagocitrii acestora. (Fig.6)

Fig.6. Modele de cooperare ntre factorii imuni umorali i celulari n aprarea nespecific

42

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE

5.3.3. Factorii celulari n aceast grup de factori sunt ncadrate toate celulele din sistemul fagocitar mononuclear i polimorfonuclear (polimorfonucleare neutrofile), microfage (monocite), macrofagele mobile i fixe care se gsesc rspndite n toate organele i esuturile, precum i celulele NK.(Fig.7). Una dintre funciile de baz ale acestui sistem celular este reprezentat de fagocitoz, respectiv pinocitoz.

Fig 7: a. Polimorfonucleare neutrofile; b. Monocite (microscopie optic).

1. Fagocitoza i pinocitoza (gr. fagien = a mnca, Mecinikov, 1905) sunt mecanisme cunoscute n cele mai fine detalii. Termenul de fagocitoz este utilizat pentru particule cu o talie mai mare i o structur de regul corpuscular (o celul bacterian sau animal sau un fragment din acestea), iar cel de pinocitoz pentru materialele fagocitabile, al cror nivel de organizare este molecular (macromolecule proteice sau complexe, endotoxine bacteriene etc). Ambele fenomene au aceeai dinamic, ele desfurndu-se n patru faze :

43

faza de apropiere care presupune congestie, marginaie leucocitar i deplasarea prin pseudopode; faza de fixare a materialului fagocitabil, pe fagocit, realizat pe fondul chimiotactismului determinat de complementaritile de natur electrostatic i stereochimic dintre receptorii memebranei fagocitului i gruprile chimice de la periferia particulei fagocitabile; faza de fixare este mediat i de intervenia unor factori umorali din categoria opsoninelor sau anticorpilor naturali; faza de nglobare, iniiat prin formarea unei invaginri a membranei care se adncete treptat, pn cnd se nchide deasupra moleculei sau particulei, incluznd-o ntr-o vacuol intracitoplasmatic, ce poart numele de fagozom; faza de digestie a matarialului fago(pino)citat, prin enzime de tip lizozomal, debuteaz prin apropierea i apoi contopirea fago(pino)zomului cu un lizozom. La nivelul acestuia se produce degradarea materialului fago(pino)citat prin procese enzimatice n care predomin reaciile oxidative i cele de hidroliz. Majoritatea enzimelor decelate n cursul digestiei intrafagocitare sunt de tipul oxidazelor, al mieloperoxidazei i a hidrolazelor acide. (Fig. 8)

Fig. 8. Prezentarea schematic a fagocitozei

44

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE n faza de digestie se poate constata o destul de mare diversitate n comportarea materialului fagocitat n funcie de starea imunologic n care este implicat, procesul de fago(pino)citoz: digestia complet, constnd n degradarea materialului fago(pino)citat pn la produi finali, este un fenomen constant, n cazul leucocitelor polimorfonucleare i, frecvent, n cazul macrofagelor; metabolizarea total a particulelor ingerate este un mecanism nespecific caracteristic imunitii naturale; digestia parial a non-selfului n proporie, ajungnd pn la 90% , dar cu pstrarea la suprafaa macrofagului a aproximativ 10% din non-self i purtarea acestuia la exteriorul celulei, timp de cteva sptmni. Este un mecanism care intervine n imunitatea dobndit i n fenomenele de alergie. Acest tip de fagocitoz poate fi numit i fagocitoz imun. Ea este un atribut exclusiv al macrofagelor, iar non-selful fagocitat este antigenic. n fixarea antigenului pe suprafaa macrofagului intervin i anticorpii citofili. Prezena acestor anticorpi este confirmat i prin evidenierea receptorilor Fc la nivelul membranei macrofagelor. Elementele antigenice pstrate pe suprafaa celulei sunt ulterior oferite limfocitelor, dup unul din modelele care vor fi descrise la capitolul de imunogenez. persistena nealterat i meninerea viabilitii unor bacterii patogene. Exemplul clasic este cel al bacililor tuberculozei, care nu numai c nu sunt digerai, dar rmn vii, se multiplic, determin transformarea fagocitelor n celule gigante, iar acestea devin un mijloc de vehiculare a germenilor n organism; digestia unor tipuri de non-self pe care fagocitele organismelor neimunizate n mod normal nu le diger. n organismul animalelor cu imunitate antituberculoas apar macrofagele capabile s digere bacilii tuberculozei. Aceste fagocite au, prin urmare, o comportare de sens contrar cu cele menionate anterior. Noua nsuire dobndit de aceste macrofage, numite acum imunofagocite, poate fi considerat ca un mecanism al imunitii dobndite, cu toate c gradul de specificitate al acestei transformri calitative celulare este redus. Imunofagocitele
45

obinute cu bacilii tuberculozei manifest aceleai proprieti i fa de brucele, salmonele sau listerii, germeni caracterizai i ei prin rezisten la digestia intrafagocitar. Pinocitoza se deosebete de fenomenul de fagocitoz prin cteva caractere difereniale (MESROBEANU i BONA, 1968): a) n timp ce inductorul de pinocitoz este solubil cel al fagocitozei este ntotdeauna o particul solid. b) Inductorul de pinocitoz trebuie s posede o anumit ncrctur electric, pe cnd corpusculul fagocitat poate fi neutru. c) Pinocitoza, spre deosebire de fagocitoz nu implic chemotactism. d) Aspectul citologic al celor dou fenomene difer: n fagocitoz apar modificri ale membranei celulare sub form de pseudopode, n pinocitoz apar invaginri, vezicule sau canalicule ale suprafeei celulare. ncorporarea particulelor virale, printr-un fenomen similar pinocitozei se numete viropexie.
Tabelul 2 Caracterele distinctive ntre fagocitoza normal i cea imun Caracterul distinctiv Celule implicate Categoria de nonself Factorii care faciliteaz fixarea pe celul Tipul de digestie Soarta materialului nedegradat Imunitatea natural Microfagele polimorfonucleare i macrofagele Toate categoriile Numai opsoninele (anticorpii naturali) Total Este eliminat Imunitatea dobndit Numai macrofagele Numai antigenele i anticorpii citofili fixai pe receptorii Fc ai macrofagului Parial Este transmis limfocitelor

46

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Celulele NK (natural killer cells) recunosc modificri de suprafa care apar la celulele infestate cu virusuri. Celulele NK sunt activate de IFN produs de acele celule pe care le ucid printr-un mecanism de citotoxicitate direct. Morfologic, sunt asemntoare cu limfocitele, dar au talia mai mare i granulaiile azurofile n citoplasm (large granular lymphocytes) - LGL. Dup infecia viral, celulele infestate sunt induse s exprime pe suprafa o serie de structuri glicoproteice macromoleculare care ar fi recunoscute de celulele NK cu ajutorul unor receptori. Dup alipirea la celula-int are loc eliberarea mai multor proteine active din granulaiile celulelor NK. Cea mai important dintre aceste substane este perforina (citolizina) care-i trage numele de la faptul c produce pori n membrana celulei-int, ntocmai ca i componenta a 9-a a C', cu care de altfel, are unele analogii structurale. Perforinele se ataeaz pe membrana celulei int i, n prezena ionilor de Ca2+, vor polimeriza i vor forma canale care strbat membrana intei de la exterior spre interior. Se creeaz o diferen de presiune ntre interiorul i exteriorul celulei ceea ce face ca prin aceste canale s intre ap i ioni de Na+ , celula int fiind n cele din urm lizat. Celulele NK au pe suprafaa membranei un proteoglican numit CONDROITIN SULIMFOCITEAT A, care protejeaz celulele NK de activitatea perforinelor. n concluzie, celula NK ndeplinete urmtoarele roluri: distruge celulele infectate cu virus; distruge celulele tumorale; are rol n supravegherea hematopoezei deoarece distruge celulele defecte rezultate din hematopoez; reglarea rspunsului imun prin secreia de citokine (interleukina 2 i interferon gamma) care intervin n cooperrile intercelulare.

5.3.4. Modificarea imunitii naturale

47

Imunitatea natural nespecific poate fi modificat prin mecanisme complexe fiziologice, fiziopatologice i de factorii constituionali i genetici. Temperatura normal circulaia sanguin i limfatic i presiunea sanguin contribuie la activitatea normal a imunitii umorale i celulare nespecifice. Temperatura sczut, diminuarea circulaiei sanguine i limfatice duc la scderea indicelui opsono-citofagic (a fagocitozei), la lipsa de oxigenare i nutriia esutului. Hipertermia sau reacia febril are un rol benefic n aprarea nespecific natural, prin activarea circulaiei periferice i centrale, creterea catabolismului celular i a oxido-reducerilor celulare n urma unor activiti intense a hormonilor tiroidieni i steroizi. La acestea trebuie adugat i contribuia reaciei febrile la mobilizarea celulelor implicate n procesul de fagocitoz i a activrii factorilor serici ai reactivitii nespecifice (lizozimul, complementul, interferonii, etc). Hipertermia poate aciona i direct asupra unor virusuri reci care nu suport temperaturi mai mari de 38,5C. Principalele substane piretogene (lipopolizaharidele bacteriene, amidele, endotoxinele, interleukina 1. etc) acioneaz asupra centrului de termoreglare din hipotalamus ducnd la hipertermie. Reacia inflamatorie prin efectele ei, mecanismele i caracterele histologice precum i evoluiile ulterioare poate influena imunitatea natural nespecific. Manifestarea mai aparent sau mai puin aparent a unui proces infecios, semnific puterea de aprare a organismului respectiv. Inflamaia reprezint o reacie local a organsimului fa de invazia microorganismelor n esuturi. Ea limiteaz diseminarea germenilor i reduce considerabil mortalitatea prin septicemie. Clinic, procesul inflamator local se caracterizeaz prin congestie (rubor), edem (tumor), cldur (calor), durere (dolor) i tulburri funcionale (funciolesa). Microorgansimele ptrunse ntr-un esut, produc la poarta de intrare o alterare iniial att prin prezena lor fizic ct i prin produsele lor metabolice. n aceast alterare iniial (ncetinirea circulaiei, vasodilataiei, creterea permeabilitii vasculare, diapedeza
48

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE leucocitelor etc), un rol important joac histaminele care determin aceste modificri. Granulaiile din mastocite, bazofile, eozinofile, neutrofile (celule specializate care nsoesc inflamaia) conin n majoritate histamin i ali principii activi: heparina, serotonina, bradichinina, leucotriene, tromboxani, prostaglandine etc. n continuare, exudatul inflamator se mbogete n diveri principii activi (leucotoxine i factorul de iniiere a leucocitozei - LPF), care i au originea n celulele care particip la inflamaie (limfocite, plasmocite, histiocite). Sistemul nervos intervine n mecanismele de vasodilataie prin reflexul de axon pus n eviden de stimularea captului periferic a unui nerv secionat, care determin o vasodilataie n teritoriul inervat de acesta. Fibrele simpatice stimuleaz frnarea reaciei inflamatorii, iar simpatectomia intensific vasodilataia. Evoluia ulterioar a inflamaiei n funciei de agresivitatea agentului patogen duce la constituirea focarului inflamator i la localizarea infeciei. Cantitatea crescut de acid lactic din focarul inflamator, consecina gliucolizei anaerobe, este susceptibil de exercitarea unei aciuni nocive printr-un pH sczut, asupra diverilor ageni infecioi (ex. bacilul tuberculozei). Factorii care modific imunitatea natural nespecific sunt: a) factorii diminuani: neintegritatea barierelor anatomice, anastezicile, iradiaiile, imunodepresoarele i unele boli ca: silicoza, diabetul, obezitatea, etilismul cronic, etc. b) factorii favorizani: endotoxinele bacteriene, micobacteriile (M. avium, M. kansasii), BCG, Corynebacterium parvum, poliadjuvantul din peptidoglicani i adjuvantul complet Freund.

49

CAPITOLUL 6 IMUNITATEA DOBNDIT (INDUCTIBIL)


Imunitatea dobndit (inductibil) este starea de rezisten a organismului fa de factorii non-self antigenici, realizat prin structuri i funcii de neoformaie cu un nalt grad de specificitate pentru antigen. Principalele caracteristici ale imunitii dobndite sunt urmtoarele: are un caracter individual, sfera ei de cuprindere referindu-se numai la unii indivizi dintr-o specie; prima treapt filogenetic pe care apare este reprezentat de vertebrate; momentul apariiei este dependent de ptrunderea n organism a antigenelor i poate fi oricnd n cursul dezvoltrii ontogenetice a individului matur imunologic; are un caracter netransmisibil ereditar numai n unele cazuri se poate transmite vertical de la mam la ft; efectorii imunitii dobndite sunt constituii din structuri i funcii de neoformaie de natur umoral (anticorpi sau imunoglobuline) i celular (limfocitele sensibilizate specific i alte tipuri de celule); aciunea efectorilor este specific i difereniat n funcie de antigen; n determinismul imunitii dobndite sunt implicate mecanisme cu memorie. Imunitatea dobndit se poate clasifica dup mai multe criterii:
50

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE 1. Prezena antigenului i participarea organismului la elaborarea efectorilor imuni, criteriu dup care imunitatea dobndit poate fi mprit n: a) imunitate activ, n care antigenul ptrunde n organism pe ci naturale, de regul printr-o infecie natural, sau pe ci artificiale, n mod voit prin vaccinare. Imunitatea activ se instaleaz n 6 - 10 zile, timp necesar producerii efectorilor imuni i este de lung durat, n funcie de capacitatea imunogen a materialului imunizant, poate dura de la cteva sptmni, luni, ani i chiar toat viaa. b) imunitatea pasiv, n care antigenul nu vine n contact cu organismul, care nu-i produce singur efectorii imuni, primindu-i ns prin transfer de la un organism donator cu o stare de imunitate activ. Prin analogie cu imunitatea activ, imunitatea pasiv poate fi dobndit pe ci naturale, prin transferul efectorilor, de cele mai multe ori a celor umorali de la mam la ft, transplacentar la speciile cu placent hemocorial i colostral, la speciile cu alte tipuri de placent nepermeabil sau pe ci artificiale prin serumizare sau transfer de celule. Imunitatea pasiv se instaleaz chiar n momentul transferului efectorilor imuni i este de scurt durat de la cteva zile la dou - trei sptmni. 2. Tipul predominant de efectori imuni, criteriu dup care pot fi deosebite urmtoarele tipuri de imunitate: a) imunitatea de tip umoral n care responsabilitatea strii de rezisten revine anticorpilor (imunoglobulinelor), care predomin i au capacitatea de a anihila efectul nociv al antigenului; b) imunitatea de tip celular n care starea de rezisten se datorete diferiilor efectori celulari. Sunt relativ puine antigenele care determin imunitate de tip exclusiv umoral sau celular, n majoritatea cazurilor, cele dou categorii de efectori imuni coexist i acioneaz cooperant n realizarea strii de imunitate. 3. Persistena antigenului viu ca factor condiionant al strii de imunitate. Dup acest criteriu, imunitatea se poate clasifica n:
51

a) imunitate steril n care starea de imunitate nu este dependent de persistena antigenului viu n organsim; b) imunitatea nesteril, numit i premuniie sau stare premunitiv, care implic necesitatea prezenei antigenului viu n organsim. Mecanismele prin care organismul recunoate antigenul, organele n care se produc efectorii imuni i n care acetia pot reaciona cu antigenul, sunt tratate pe larg n capitolele urmtoare. 6.1. IMUNITATEA MATERNO FETAL Maturarea sistemului imunitar la fetus i nou-nscut este un fenomen complex. El se desfoar ntr-un context particular i trebuie s in seama de numeroase aspecte, uneori contradictorii, i de interaciuni variate: construcia unui sistem imunitar eficace, care s permit organismului n mod progresiv o defensiv autohton, contra agresiunilor ulterioare; schimburile imunologice ntre mam i progenitura sa; la mamifere tolerana fetusului de ctre mam n cursul gestaiei; achiziionarea toleranei tnrului organism n ceea ce privete antigenele proprii. Achiziionarea competenei imunitare se face progresiv pentru toate speciile de animale. Ca o regul general, mamiferele, specii care au o scurt perioad de gestaie, prezint la natere un sistem imunitar mai matur faa de cel al speciilor cu durat lung de gestaie. Celulele sue ale sistemului hematopoietic apar la nivelul sacului vitelin n momentul debutului gestaiei. Ele produc celule din toate liniile hematopoietice i, n particular, limfocite, care migreaz dup aceea din sacul vitelin ctre ficatul fetal, apoi ctre mduva osoas, puin nainte de natere. Din mduva osoas i asum rolul pe toat durata vieii animalului. Timusul este primul organ limfoid primar care se difereniaz, acesta este responsabil de maturarea LT la toate speciile. La psri,
52

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE bursa lui Fabricius este n legtur cu diferenierea LB, neexistnd ca organ anatomic comparabil la mamifere. Primele rspunsuri imune umorale sumt limitate la clasele de IgM, apoi intervine rapid IgM i IgG i n final IgM, IgG, IgA. IgD sunt ca i la aduli ataate suprafeei limfocitului. Nu exist practic niciodat anticorpi circulani din clasa IgD. Fetusul este, n principiu, steril, neavnd plasmocite. Prezena acestor celule la fetus sau la nou-nscut sunt ntotdeauna rezultatul unei infecii fetale. Studiile practicate pe oarece au demonstrat c n absena tuturor influenelor exterioare, LB capabile s rspund la diversele stimulri antigenice apar de un ordin dat i imuabil: achiziionarea repertoriului exprimat este prin urmare sub control genetic. Ca o regul general, reaciile imunitare mediate celular apar relativ devreme n cursul gestaiei. Animalul nou-nscut sau noueclozionat, care provine dintr-un mediu protejat, este brusc confruntat cu mediul exterior i cu o mare varietate de microorgansime potenial patogene. Nou-nscuii sunt, totui, capabili din punct de vedere imunologic s rspund la agresiuni, rspunsul lor fiind de tip primar, caracterizat printr-o lung perioad de laten i printr-o sczut sintez de anticorpi. Nou-nscutul este aadar protejat numai de o hain imunitar pasiv, de origine maternal, pentru a nu fi expus la infecie. Protecia maternal, exclusiv umoral, se poate exercita la nivel general (sistemic) sau local. Dup natere, la mamifere protecia local la nivelul tubului digestiv este conferit prin secreii colostrale i lactate. Din contr, imunitatea pasiv sistemic poate fi deja, achiziionat nainte de natere (la primate), n mare parte dup natere (la carnivore i roztoare) sau integral dup natere (la rumegtoare, suine i equine) n funcie de tipul de placentaie. Aceste modaliti de transmitere a imunitii maternale furnizeaz animalului tnr un nivel de anticorpi circulani echivalent celui de la mama sa. Imunitatea maternal face parte din imunitatea dobndit pasiv, ntruct anticorpii gata formai trec de la mam la ft, fie prin
53

filtrul placentar (imunitate congenital, diaplacentar, transplacentar), fie prin lapte (imunitate trofogen, colostral, lactogen), fie prin vitelus (imunitate vitelin la psri). Transmiterea anticorpilor n timpul vieii intrauterine este legat de tipul de placentaie al speciei respective. La speciile cu placentaie de tipul sindesmocorial (cal, bou, oaie, capr, mgar, cmil) trecerea substanelor protectoare de la mam la ft nu este posibil. Placentaia de tip hemocorial, prezent la om, maimu i roztoare, uureaz trecerea anticorpilor. Placentaia endotelial (carnasierele, cerbul) ocup un loc intermediar ntre cele dou tipuri, lsnd s treac numai o parte de anticorpi. Astfel, n funcie de placentaie, de transferul de anticorpi, de la mam la ft, animalele pot fi clasificate astfel: a) specii la care transferul de anticorpi este complet la natere (iepure i cobai); b) specii la care transferul de anticorpi se face att n timpul vieii uterine, ct i dup ftare (obolani, oareci, carnasiere ); c) specii la care transferul de anticorpi se face exclusiv dup ftare prin colostru i n unele cazuri prin lapte (rumegtoare, porcine, cabaline, etc.) (fig.9 i fig.10). Laptele maternal constituie, aadar o surs de IgG care se leag de un receptor FcRn al celulelor epiteliale de la nivelul intestinului. Acest receptor exist sub form de monomeri i de dimeri. Prin procesul denumit transcitoz, moleculele de IgG sunt transportate prin traversul epiteliului intestinal i intr n circulaie. Complexele rezultate din legtura dintre receptori i Ig sunt localizate n depresiunile membranei plasmatice, fiind situate preferenial la baza microvililor. Receptorul FcRn se leag deregiunea Fc format de al doilea i al treilea domeniu constant al celor dou lanuri de IgG. Acest receptor posed o proprietate unic, fiind n msur s se lege pe IgG la un pH acid (6,0), aa cum este cel existent la nivelul lumenului intestinal, i s pun n libertate imunoglobulina la pH de 7,4, prezent n snge. Aceast proprietate asigur transportul unidirecional al Ig din lumenul intestinal ctre snge.
54

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE

Studiile au demonstrat c receptorul FcRn prezint o strns analogie de secven cu moleculele de CMH din clasa I. Sinteza acestui receptor este tranzitorie i nu este prezent dect n perioada de achiziie a imunitii pasive, care la obolan merge pn la trei sptmni. La artiodactile, n special, colostrul este n mod evident mai bogat dect sngele n IgG (suinele) sau IgG1 (rumegtoarele). Totalitatea acestor Ig deriv din sngele maternal. Originea aproape exclusiv seric a IgG1 din colostru la rumegtoare este atestat prin observarea unei importante scderi a concentraiei acestei subclase de Ig n sngele maternal. Originea aproape exclusiv seric a IgG din colostru la rumegtoare este atestat prin observarea unei importante scderi a concentraiei acestei subclase de IgG n sngele maternal, plecnd de la a doua sptmn ce precede ftarea la oaie (de la 15 mg/ml la 6 mg/ml).

55

Fig.10 Diferite tipuri de placent la mamifere

BOHL (1975) a observat c la scroafa care alpteaz nu se elaboreaz IgA specifice virusului gastroenteritei transmisibile a porcului dect dac stimulii se exercit la nivelul intestinal. El demonstreaz apoi c la roztoare majoritatea plasmocitelor productoare de IgA, recunoscute n mamel, deriv din intestin. Aceste rezultate aduc proba experimental a existenei unei legturi imunologice ntre intestin i mamel i permite explicarea faptului c IgA din secreiile lactate sunt n spe specifice agenilor patogeni recunoscui n lumenul intestinal. Variaii specifice sunt observate n resorbia intestinal a Ig. La primate nu exist aproape nici un fel de pasaj, n timp ce intestinul purcelului nou-nscut absoarbe nespecific diferitele clase de Ig, cu excepia IgA secretorie, care rmne fixat pe epiteliul intestinal. La vielul nou-nscut nu exist aparent nici o selecie, toate Ig ingerate
56

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE inclusiv IgA secretorie traverseaz epiteliul intestinal. Acestea nu subzist de obicei mai mult de dou zile n circulaie dup care ele sunt eliminate printr-un proces de transudaie invers la nivelul epiteliilor secretorii. La roztoare absorbia se face graie receptorilor pentru IgG din regiunea proximal a intestinului, unde activitatea lizozomal a celulelor este mai puin dezvoltat. Absorbia IgG la aceste specii se continu pn la 18 - 21 de zile. La rumegtoare, cal i porc, absorbia Ig este maximal n primele ore de la natere apoi decade rapid, probabil din cauza activitii lizozomale a celulelor epiteliale. Dup natere, aceast activitate crete progresiv, antrennd digestia enzimatic a Ig, absorbia ncetnd dup 24 ore la bovine i cabaline i 36 ore la porc. Nivelul anticorpilor maternali diminu apoi gradual cu o vitez dependent de timpul de njumtire al anticorpilor la specia considerat i cu viteza de cretere a acesteia. Pe lng anticorpii specifici, principalii factori antimicrobieni nespecifici din colostru sunt: lizozimul, lactoferina i lactoperoxidaze (BRUNO - REITER, 1978). Colostrul vacilor conine 200 - 500 mg de lactoferin la 100 ml. Lactoferina are proprietatea de a lega Fe. Unele bacterii i, n special, E. coli, au nevoie de Fe ca factor de cretere. Prin fixarea Fe pe lactoferina colostral, germenii sunt lipsii de acest factor i ca atare creterea lor este inhibat (KOLB, 1981). Progresiv secreia mamar evolueaz de la colostru ctre lapte. La speciile domestice, aceast evoluie este cu att mai rapid cu ct rasa a fost selecionat pentru producia de lapte.

57

CAPITOLUL 7
ANTIGENELE, DEFINIIE, STRUCTUR, CLASIFICARE I CONDIIILE ANTIGENITII
Antigenele (Atg) sunt substane care induc un rspuns umoral sau celular. 7.1. STRUCTURA UNEI MOLECULE DE ANTIGEN Din toat molecula de Atg., numai unele arii mici, cu suprafaa de aproximativ 7 m2, situate obligatoriu la suprafaa moleculei, i confer specificitate antigenic. Aceste arii sau situsuri antigenice alctuiesc gruprile determinante sau epitopii moleculei de antigen. Deci, epitopii nu sunt altceva dect nite segmente mai mari sau mai mici din lungimea unui lan polipeptidic, la nivelul creia aminoacizii se succed ntr-o secven particular, care difer de cele din lanurile proteice ale gazdei i care genereaz formarea de situsuri antigenice recunoscute ca non-proprii de ctre sistemul imun al acesteia.

Fig 11 Diagrama ilustrnd diferena dintre antigene imunogene i neimunogene.

58

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE

Pe suprafaa unei singure molecule poate exista un numr diferit de epitopi cu specificiti multiple, molecula nefiind de fapt, un antigen unic, ci un mozaic de antigene, cu un numr mai mare sau mai mic de epitopi. De exemplu, pe o molecul de ovalbumin care are greutatea molecular de cca 40.000 Da., exist 5 epitopi diferii, iar pe una de tiroglobulin cu greutatea molecular 70.000 Da., exist 40 de epitopi. Epitopul are deci o funcie haptenic simpl, reacioneaz specific cu anticorpul, dar singur nu poate declana sinteza acestuia.(Fig. 11 ) Pentru aceasta, este necesar intervenia unei componente care s-l poarte conferind complexului format o anumit dimensiune care-l face vizibil pentru limfocite. Aceast component molecular se numete grupare purttoare sau carrier i este dat de ctre restul moleculei. Schematic, un imunogen este alctuit dintr-o grupare purttoare care-i confer dimensiuni i o grupare determinant sau epitop care-i confer specificitatea antigenic. (Fig.12).

Fig.12. Prile componente ale unei molecule de antigen: a) gruparea purttoare (carrier); b) determinantul antigenic (epitopul);

Gruparea purttoare poate purta un singur epitop sau un numr multiplu de epitopi cu una sau mai multe specificiti antigenice. Pentru fiecare dintre aceti epitopi, n populaia de celule limfoide, exist un corespondent reprezentat de un grup restrns (clon) de limfocite care exprim pe suprafaa lor receptori unici i specifici. 7.2. CONDIIILE Atg Antigenele posed dou caliti definitorii: imunogenitatea i specificitatea.
59

A. Imunogenitatea depinde de: A.1. Dimensiunea moleculei: cea mai mic molecul cunoscut care este capabil s induc rspuns imun (RI) este Vasopresina (gr. mol. 1000 Da). Se admite ns, ca factor general, c o molecul poate avea proprieti antigenice dac greutatea sa molecular este mai mare de 5000 Da. O astfel de molecul poate conine n structura sa mai muli epitopi identici sau diferii. n funcie de numrul i diversitatea epitopilor, o macromolecul antigenic va reaciona cu mai muli anticorpi diferii. Numrul de molecule de anticorpi cu care poate reaciona o molecul de Atg. reprezint valena antigenului. Exist ns molecule foarte mici care, prin forma lor primar, nu ntrunesc condiia de mrime care s le confere proprieti imunogenice (haptene). Ele vor deveni antigenice numai dup ce se vor combina cu macromoleculele gazdei. Combinaiile respective se numesc haptenice. Fa de aceste combinaii, organsimul rspunde prin formare de Atc mpotriva moleculei mici. Moleculele - carrier confer numai proprietatea de antigenicitate haptenei prin prezentarea acesteia ctre LB sub form multivalent capabil s le provoace activarea. Cruii pot fi molecule solubile circulante (ex. serum albumina) sau molecule constitutive ale membranei unei molecule (de ex. eritrocite, granulocite sau trombocite). n anumite mprejurri, penicilina se poate fixa pe membrana eritrocitelor cu care formeaz complexe haptenice. Atc. anti - penicilin se vor fixa pe hapten i vor nveli eritrocitele. n trecerea acestor eritrocite prin splin, Mcf. splenice vor ataa anticorpii prin intermediul RFc de pe membrana lor (imunoaderen i ncercnd s elimine complexele imune Atc + P (fenomenul de clearance) vor fagocita totodat i eritrocitele purttoare. Prin urmare, eritrocitele vor fi distruse prematur numai prin faptul c au devenit purttoare de haptene (procesul a fost denumit mecanismul spectatorului inocent i este implicat n liza indus de droguri pentru mai multe categorii de celule sanguine).

60

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE A.2. Calea de ptrundere: o substan care s-a dovedit antigenic, dac a fost administrat intradermic, poate fi nonimunogenic dac este introdus intramuscular. A.3. Asocierea Atg. cu un adjuvant ntrete imunogenicitatea n anumite condiii experimentale. Adjuvanii ar produce o captare mai mare a Atg. de ctre Mcf i o eliberare mai lent combinat cu producerea unei reacii inflamatorii la locul injectrii. Adjuvantul cel mai utilizat experimental este o emulsie de ulei mineral, de bacili Koch omori (adjuvantul Freund complet). A.4. Natura chimic a Atg.: proteinele sunt mai antigenice ca polizaharidele care la rndul lor sunt mai antigenice dect lipidele. Macromoleculele de ADN sunt foarte slab antigenice. A.5. Repertoriul imunologic al individului reprezint ansamblul antigenelor pe care le poate identifica un individ dintr-o specie. Specii diferite sunt programate s recunoasc anumite Atg. Aceast programare este controlat genetic. Ex. Atg. Rh de pe suprafaa Er. umane produc un rspuns imun energic la om, dar nu produc nici un fel de rspuns la iepure i cobai. La om, repertoriul imunologic ar nsuma aproximativ 108 posibiliti calculate. B. Specificitatea Un Atg. este n principiul identificat de un Atc specific. Aceast identificare este realizat de receptorii pentru Atg. de pe suprafaa limfocitelor.

Fig. 13 Specificitatea antigenic

61

Fig.14. Reacii ncruciate

n cazuri rare, Atg. diferite pot avea epitopi similari sau identici dnd natere la producerea unor Atc. crossreactivi. Legarea Atc. pe Atg. (recunoaterea Atg.) este un proces fizic care nu difer de acela prin care se asociaz ntre ele dou macromolecule chimic nrudite. Acest proces implic o potrivire reciproc complementar ntre configuraia spaial a epitopului i cea a situsului combinativ al anticorpului (paratopul) i o solidarizare a celor dou molecule partenere prin 4 tipuri de legturi nespecifice: electrostatice, puni de hidrogen, legturi hidrofobe i legturi Van der Waals.(Fig. 13,14) 7.3. CLASIFICAREA ANTIGENELOR Totalitatea antigenelor existente n natur alctuiesc un sistem foarte complex i divers, un adevrat univers antigenic, cruia sistemul imunitar al organismelor i se opune prin mecanisme adecvate de recunoatere, discriminare, neutralizare i eliminare, cu ajutorul efectorilor imuni, n scopul meninerii homeostaziei normale. Marea varietate a antigenelor face dificil o clasificare care s corespund tuturor cerinelor. Din raiuni didactice, n prezentarea diferitelor tipuri i categorii de antigene, adpotm urmtoarele criterii de clasificare: Dup origine, Atg. pot fi clasificate n patru grupe (Fig.15):

62

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE 1. Atg. heterofile - comune mai multor specii de animale, plante i microorganisme.

n 1911 J. FORSSMAN a observat c injectarea unor antigene de rinichi de cobai la un iepure duce la apariia unor Atc. care vor aciona i cu Atg. rinichiului de cobai i cu Atg. ale eritrocitelor de oaie. Aceste tipuri de Atg. care induc apariia unor Atc. care reacioneaz i cu Atg. speciei inductoare i cu Atg. altor specii au fost denumite heterofile. Indiferent de sursa lor, Atg. heterofile au ca element comun o grupare heptenic similar, care determin activitatea lor imunologic comun. Ele sunt prezente pe eritrocitele unui mare numr de specii (oaie, capr, cal, cine, cobai) ca i la unele microorganisme, ns sunt absente la iepure i bou. La om sunt prezente numai la indivizii de grup sanguin A i AB. Antigenele heterofile de tip Forssman indiferent de originea lor, s-au dovedit a avea o grupare haptenic similar, care asigur reactivitatea lor imunologic comun. Haptenele antigenelor heterofile au structur lipopolizaharidic, ns structura chimic a antigenului global variaz de la o specie la alta i chiar de la un organ la altul. Cercetrile ulterioare au demonstrat c distribuia antigenelor heterofile nu este uniform. Astfel, la unele specii (de exemplu: oaia)
63

sunt prezente att n esuturi ct i pe eritrocite, pe cnd la altele (de exemplu: cobai) se gsesc numai esuturi. Demonstrarea prezenei antigenelor Forssman se poate efectua prin inocularea de titrurat de rinichi de cobai de iepure. Se obine astfel un ser ce conine anticorpi hemolizani fa de hematiile de oaie (ser Forssman). Cercetrile au dovedit c antigenul rinichi de cobai nu este identic cu antigenul hematii de oaie. Din acest punct de vedere s-a precizat c un ser hemolitic antioaie este activ i pentru hematiile de bou, pe ct vreme serul Forssman este activ numai fa de hematiile de oaie. n consecin se apreciaz c hematia de oaie are o structur antigenic mai complex, prezentnd un antigen termolabil la 1000C, specific i izofil i un antigen termostabil la 1000C, nespecific, heterofil, care este de fapt haptena Forssman. 2. Atg. heterologe (xeno Atg.) = provin de la indivizi de alt specie. 3. Atg. izolage (allo Atg.) = provin de la indivizi de aceeai specie i exprim polimorfismul genetic n cadrul unei specii. Doi indivizi ai unei specii sunt diferii din punct de vedere antigenic. 4. Atg. autologe (auto Atg.) = Atg. exprimate de celulele proprii ale unui individ. Dup gradul de complexitate al moleculei de antigen se deosebesc: antigene complete - sunt considerate acele antigene care posed att suportul coloidal, ct i gruprile de specificitate (epitopii). Acest tip de antigene determin formarea de anticorpi i reacioneaz specific cu acetia in vitro. Cele mai multe din antigenele naturale sunt antigene complete; antigene incomplete (haptene) - sunt considerate ca fiind fragmente ale moleculei de antigen complet, care nu sunt capabile s induc formarea de anticorpi specifici, atunci cnd sunt inoculate singure la un organism primitor. Ele au ns capacitatea de a reaciona cu anticorpii, proces finalizat prin producerea unor reacii vizibile. Haptenele pot, deci, interaciona cu anticorpii specifici (posed antigenitate), dar nu pot induce formarea lor (nu sunt imunogene). Haptenele sunt n general compui chimici cu greutate molecular mic,
64

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE ce se pot ataa de o molecul purttoare, fiind restabilit astfel funcia antigenic primar. Dup structura chimic se deosebesc urmtoarele tipuri: Antigene proteice - constituie grupa cea mai numeroas de substane care ndeplinesc, de cele mai multe ori, condiii de imunogenitate i antigenitate. Dup intensitatea rspunsului imun se disting proteine cu imunogenitatea ridicat (exemplu: albuminele, glicoproteinele serice, etc) i proteine cu imunogenitate slab (exemplu: hemoglobina i polipeptidele cu mas molecular mic). Tratarea termic sau chimic a unor proteine poate modifica imunogenitatea lor. Este important de subliniat c formaldehida abolete activitatea biologic (patogen) a unor proteine, fr a afecta imunogenitatea lor. Aceast proprietate este deosebit de important i are aplicabilitate practic la prepararea vaccinurilor. Dimpotriv, tratamentul cu glutaraldehid confer moleculei (exemplu: albumina seric uman) noi determinani antigenici constituii probabil din nuclee piridinice, rezultate din reacia glutaraldehidei cu gruprile amino ale lizinei. Antigene polizaharidice - constituie o grup important de substane ntlnite n natur, dar care sunt dotate cu proprieti imunogene mai puin marcante dect proteinele. Cu toate acestea, numeroase substane polizaharidice sunt active n cadrul unor compui compleci. Trstura caracteristic a celor mai multe polizaharide este structura lor regulat repetitiv, n care uniti monozaharidice sunt legate n lanuri lungi lineare sau ramnificate. Att compuii polizaharidici lineari ct i cei ramnificai au proprieti antigenice evidente, desigur, cu modificrile corespunztoare de specificitate, determinate de structur. O serie de polizaharide prezente n structura bacteriilor au un rol n determinarea specificitii rspunsului imun fa de acestea. Aa este cazul compuilor glucidici ai pneumococilor, salmonelelor, colibacililor, etc. Antigenele de pe suprafaa eritrocitelor, care confer specificitatea de grup sangvin (O, A, B, AB) sunt de natur glicoproteic, specific. Substanele glucidice au proprieti imunogene care se manifest
65

i prin inducerea i declanarea strilor de hipersensibilizare mediate umoral (prin anticorpi). Astfel de fenomene se realizeaz prin unele polizaharide, ca atare, ct i prin haptenele lor glucidice, componente ale unor antigene. Strile de hipersensibilizare mediate celular pot fi induse i declanate numai de ctre haptene polizaharidice cuplate pe macromoleculele proteice purttoare. Polizaharidele purificate au putere imunogen slab, unele dintre ele (acidul hialuronic) fiind neimunogene sau imunogene doar pentru unele specii de animale (exemplu: polizaharidul de tip III din capsula pneumococului este imunogen pentru oarece i om, dar nu i pentru cobai i iepure). Antigene nucleice - reprezentate de acizii nucleici, ADN i ARN, care, dei sunt macromolecule, au slabe proprieti imunogene. Pot interveni n unele procese imunologice, dar mai frecvent ca haptene, dect sub forma unor antigene complete. Pot induce formarea de anticorpi, atunci cnd formeaz complexe cu unele polizaharide sau proteine. ncercrile de a demonstra imunogenitatea acizilor nucleici liberi au dat rezultate contradictorii. Imunizarea cu ADN a indus rspunsuri mai constante n urma asocierii sale cu adjuvant Freund. Dovada imunogenitii lor este dat de existena anticorpilor anti-ADN mono sau dublu catenar, n lupusul eritematos sistemic (uman sau murin) sau n alte boli autoimune. Antigenele lipidice - includ diferite lipide, singure sau n asociere cu alte substane. Lipidele ca atare sunt lipsite de proprieti imunogene, dar pot avea caliti de haptene, mai ales dac se cupleaz cu proteine. Astfel, se pot obine anticorpi anticolesterol, antilecitin, anticefalin, etc. Mai bine studiate sunt proprietile antigenice ale cardiolipinei, o hapten folosit n reacia Wasserman, reacie utilizat n diagnosticul serologic al sifilisului la om. Cardiolipina (rspndit n esuturile animalelor, plantelor i chiar la unele bacterii) reacioneaz pozitiv numai cu anticorpii oamenilor infectai cu Treptonema pallidum. Lipidele confer proprieti antigenice i funcionale lipopolizaharidelor, endotoxinelor i altor complexe antigenice. Dup modul de formare, antigenele se clasific n naturale, artificiale i sintetice: antigene naturale - reprezentate de diferii constituieni
66

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE naturali, ntlnii la animale, plante i microorganisme. Pot fi substane solubile (proteine, polizaharide, acizi nucleici) sau diferite particule insolubile, corpusculare (celule, bacterii, virusuri, parazii). antigene artificiale - formate din macromolecule naturale cu rol de purttor, pe care se leag n condiii artificiale diferite haptene, care vor imprima caracterul de specificitate. antigenele sintetice - ntlnite n condiii de laborator i care sunt produse prin diferite procedee de sintez. Sunt reprezentate de polipeptide sintetizate n mod artificial, prin polimerizarea unor derivai ai L sau/i D- aminoacizilor (anhidridele N-carboxiaminoacizilor). Dup capacitatea de a stimula limfocitele T sau B, antigenele se clasific n antigene T-independente i antigene T-dependente. antigene T-independente (timus independente) sunt antigene capabile s induc maturarea limfocitelor B purttoare de receptori pentru antigen, fr a necesita intervenia limfocitelor. antigene T-dependente (timus dependente) sunt antigene care induc formarea de anticorpi de ctre descendenii celulelor B, purttoare de receptori pentru antigen, numai prin cooperare cu limfocitul T ajuttor (LTh), fiind necesar existena unor stimuli adiionali.

7.4. PRINCIPALELE CATEGORII DE ANTIGENE NATURALE 7.4.1. Antigenele bacteriene O bacterie nu este unic de punct de vedere antigenic, fiind de fapt constituit dintr-un mozaic de antigene. Acestea sunt reprezentate de diferite componente chimice prezente n structuri bacteriene. Astfel se disting: Antigenele somatice O sunt antigene extrase din corpul bacteriilor, avnd localizarea preponderent n peretele celular. Sunt de natur polizaharidic, termostabile i posed nsuiri biologice complexe:
67

a. sunt imunogene, asigurnd specificitatea de specie la bacteriile Gram-negative i de grup la cele Gram pozitive; b. dezvolt hipersensibilitatea imediat i de tip SanarelliScwartzmann; c. stimuleaz sistemul mononuclear fagocitar i imunitatea nespecific; d. manifest activitate anticomplementar. La bacteriile Gram negative antigenul somatic este reprezentat de endotoxine, iar la bacteriile Gram pozitive de ctre acizii lipoteichoici. Antigenele flagelare H sunt obinute din flagelii (cilii) celulelor bacteriene. Abrevierea H provine de la cuvntul hauch care nseamn vl. Din punct de vedere chimic sunt de natur proteic, iar imunologic stimuleaz mai ales LB. Antigenele flagelare au fost bine studiate la bacteriile din familia Enterobacteriaceae, ndeosebi la cele din genul Salmonella, avnd un rol important n identificarea (tipizarea) serologic a acestor bacterii. Antigenele fimbriale F se obin din fimbriile bacteriilor. Prezint specificitate corelat cu specia bacterian, ns pot da reacii ncruciate. Mai bine studiate sunt antigenele F la E.coli i anume F4 (K88) prezente la tulpinile ce mbolnvesc purceii i F5 (K99) ntlnite la tulpinile patogene pentru viei. Aceste antigene au o importan deosebit n mecanismul patogenic al colibacilozei, favoriznd fixarea colibacililor la suprafaa eritrocitelor. Antigenele de nveli K sunt prezente n structura capsular a bacteriilor capsulogene. Din punct de vedere chimic, capsula prezint diferene de la o specie bacterian la alta sau chiar n cadrul aceleai specii. De exemplu, la Streptococcus pneumonie este de natur polizaharidic i se disting 83 de tipuri antigenice, la Bacillus antharcis are o structur polipeptidic, iar la Klebsiella pneumoniae este de natur poliglucidic i se dinsting 83 de tipuri capsulare. Antigenele capsulare au rol mai ales n mecanismul patogenic inhibnd fagocitoza. Antigene de suprafa Vi definesc capacitatea de virulen a bacteriilor care posed astfel de antigene. Sunt situate n celula bacterian, exterior antigenului somatic, mpiedicnd aglutinarea cu seruri anti-O (inaglutinabilitate). Prezena lor se coreleaz cu virulena tulpinilor respective i au fost descrise la unele salmonele (S. tiphy, S.
68

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE hirschfeldi, S. typhimurium) dar i la alte specii bacteriene (Citrobacter). Sunt antigene termolabile, dar insensibile la alcool i formol. Pentru a elimina fenomenul de inaglutinabilitate, tulpinile testate se supun nclzirii. 7.4.2. Antigenele virale Capacitatea imunogen a virusurilor rezid n structura lor chimic complex. n general, componentele proteice ale capsidei i pericapsidei virale ndeplinesc condiii de antigenitate i imunogenitate, declannd rspunsuri imune satisfctoare, pe cnd acizii nucleici au o slab capacitate imunogen. Unele virusuri sunt unice din punct de vedere antigenic, fiind puternic imunogene (exemple: virusul IBR/IPV, virusul bolii lui Aujeszky, virusul pseudopestei aviare, etc), pretndu-se la prepararea unor vaccinuri eficiente. Alte virusuri prezint un accentuat fenomen de variaie antigenic, caracterizat printr-o mare labilitate antigenic i, mai ales, imunogenetic, care duce la apariia de noi variante antigenice, chiar pe parcursul aceleai epidemii (exemple: virusul febrei aftoase prezint 7 tipuri cu urmtoarele subtipuri sau variante: A-32, O-11; C-5, SAT1-7, SAT2-3. SAT3-4 i Asia1-3; virusul pestei porcine africane prezint 20 variante imunologic distincte; virusul exantemului veziculos al porcului are 11 variante, etc.). Aspectele particulare sub raportul variaiei antigenice se ntlnesc la virusurile din familia Orthomyxoviridae (gripale). Acestea posednd un genom segmentat, exist posibilitatea apariiei unor rearanjri a segmentelor genomice provenite de la virusuri diferite, ct i ntre virusurile gripale umane, cu cele ecvine, porcine i aviare. La virusul anemiei infecioase se descrie aa numita deriv antigenic determinat de modificarea antigenitii anvelopei virale sub aciunea anticorpilor formai n organism, astfel, c noii progeni aprui n procesul de replicare se deosebesc antigenic de suele parentale. Variaia antigenic creaz dificulti n obinerea unor vaccinuri eficiente, ca urmare a faptului c prin schimbarea periodic a profilului antigenic se evit neutralizarea prin intermediul anticorpilor produi
69

fa de suele parentale. 7.4.3. Antigenele parazitare Paraziii prezint, de asemenea, o structur antigenic complex. Ei reuesc s se menin n organism prin intermediul unor organite de fixare sau acoperirea cu substane prin care se evit rspunsul imun din partea organismului. La o serie de parazii, cum ar fi plasmodiul malariei, tripanosomele i boreliile, ca urmare a mutaiilor genice spontane cu implicaii asupra structurii lor antigenice, pot supravieui rspunsului imun dezvoltat de gazd, fa de populaia parazitar iniial, care posed o structur antigenic diferit de cea a mutanilor lor. Antigenele pot fi solubile sau particulate. n infeciile cu parazii intracelulari, imunitatea celular este necesar pentru a conferi rezisten fa de agresiunea parazitar, pe cnd n infestaiile cu parazii extracelulari (nematozi, trematozi, etc) rmne o problem deschis dac se dezvolt sau nu imunitatea protectiv fa de aceti parazii. Se cunoate c n organismul parazitat cu diveri helmini sau alte categorii de parazii, se dezvolt anticorpi de tip reagenic (IgE) i stri de hipersensibilizare imediat. Aceti anticorpi sunt produi de stimulare cu antigene, fie somatice, fie produse de metabolism ale paraziilor. n principiu este acceptat faptul c paraziii care n ciclul lor evolutiv dezvolt larve ce invadeaz esuturile gazdei, determin un rspuns imun, iar cei cu localizare intestinal nu determin rspuns imun protectiv. Din paraziii aduli sau diferite stadii larvare au fost obinute antigene cu utilizare n reacii serologice (hemaglutinare pasiv, RFC, seroprecipitare, ELISA, imunofluorescena, etc) sau alergice. Astfel de antigene au fost obinute din Cystricercus celulose, Cysticercus bovis, Anaplasma sp., Trichinella spiralis, Toxoplasma gondii, Tripanosoma equioerdum, Hipoderma bovis, etc. 7.4.4. Antigenele de grup sanguin i Rh Conform sistemului antigenic A,B,O, oamenii pot fi clasai n 4
70

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE grupe distincte i anume: - grupa I sau 0, cu aglutinine, dar fr aglutinogeni; - grupa II sau A, cu aglutinogen A i aglutinine beta; - grupa III sau B, cu aglutinogen B i aglutinine alimfocitea; - grupa IV sau AB, cu aglutinogeni AB dar fr aglutinine. Transfuzia interindividual este posibil numai n cadrul aceleai grupe, cu excepia grupei 0, care nu ridic asemenea probleme. n caz contrar, transfuzia poate fi letal pentru receptor, deoarece aglutininenele proprii vor aglutina hematiile transfuzate, producnd obstruarea vaselor sangvine. Aglutinogenii sistemului A, B i 0 se transmit ereditar, fiind sub controlul genelor A i B cu 3 alele (A,B,O), 6 genotipuri (AA, AO, BB, BO, OO, AB) i 4 fenotipuri (A, B, O, AB). Grupa O este ntotdeauna hemozigot (OO), iar grupa IV este heterozigot (AB). Antigenele de grup sangvin sunt determinate genetic. Exemple: 1. Antigenele de grup sanguin din sistemul ABO sunt produse la comanda unor gene plasate pe cromozomul 9. Ele sunt exprimate att la suprafaa eritrocitelor ct i pe alte celule tisulare. Uneori pot exista i n lichide biologice (saliv) la indivizii denumii secretori. 2. Antigenele de grup din sistemul Rh sunt produse la comanda unor gene plasate pe cromozomul 1. Ele sunt exprimate numai pe eritrocite. Sistemul RH a fost semnalat de ctre Lansteiner i Wiener (1940), care au constatat c serul iepurilor imunizai cu eritocitele maimuelor Macaccus rhesus aglutineaz eritrocitele a 85% din oameni. Acetia au fost numii Rh pozitivi, ceilali fiind Rh negativi. Folosirea de antiseruri, obinute prin izoimunizare, a dus la identificarea a 26 de antigene Rh, deci un adevrat sistem. Cel mai frecvent se ntlnesc urmtoarele antigene: D, d, C, c, E, e. Grupul genic ce coordoneaz sinteza antigenelor Rh se transmite ereditar dup legile mendeliene i este responsabil de eritroblastoza fetal. Astfel, o mam Rh- care poart un fetus Rh+ (caracter motenit de la tat), va fi imunizat de hematiile fetale. Anticorpii aprui produc aglutinarea eritrocitelor fetale i moartea produsului de concepie.
71

Spre deosebire de aglutininele alimfocitea i beta ale sistemului A, B, O, n sistemul Rh nu exist anticorpi naturali, aprnd numai dup imunizarea mamei de ctre hematiile fetale sau dup transfuzii cu eritrocitele subiecilor D (Rh+) sau de la cei D (Rhv). Antigenele ce reprezint grupele sanguine sunt constituite din molecule membranare prezente la suprafaa celulelor sanguine circulante, unele dintre ele fiind puternic imunogene. Toate antigenele grupelor sanguine stimuleaz producerea de anticorpi specifici. Acestea se identific n laborator cu ajutorul anticorpilor specifici. Este vorba de o reacie de aglutinare, dar, adesea, pentru a deveni vizibil se impune uneori efectuarea unor artificii, cum ar fi mediul macromolecular, adugarea unor enzime, aplicarea testului Coombs. 3. Antigenele leucocitare (Human Leukocyte Antigens HLA) sunt produse de gene grupate ntr-o zon a braului scurt al cromozomului 6 denumit complexul major de histocompatibilitate (CMH). 7.4.5. Antigenele de histocompatibilitate Antigenele de histocompatibilitate (AHC) sunt reprezentate de structuri moleculare situate la suprafaa tuturor celulelor unui organism. Ele nu difer de la un organ la altul sau de un esut la altul, ci difer de un individ la altul, n funcie de linia genetic din care provine. AHC s-au dovedit a fi controlate de gene de histocompatibilitate situate pe cromozomi. CMH conine mai muli loci, care la rndul lor codific trei familii de proteine. Locii A, B, C codific proteinele exprimate pe suprafaa tuturor celulelor nucleate i a trombocitelor. Aceste proteine (A, B, C) sunt denumite proteine din clasa I. Regiunea D cuprinde locii DP, DQ i DR. Produsele acestor gene au fost denumite proteine din clasa a II-a.

72

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE

Fig.16 Complexul major de histocompatibilitate i antigenele HLA

Sunt exprimate de un numr mai restrns de celule i anume cele care sunt interesate funcional n transmiterea informaiei antigenice: macrofagele care prezint antigenele i din partenerele lor care recepteaz aceast informaie: limfocitele B i limfocitele T activate. Proteinele din clasa I i a II-a formeaz sistemul antigenelor HLA. Pe lng genele ce codific sistemul HLA, CMH mai cuprinde ali trei loci care controleaz producerea unor componente din sistemul complement C2, C4 i Bf. Aceste proteine foarte slab antigenice au fost grupate sub numele de proteine de clasa a III-a .(Fig.16). 7.4.6. Antigenele sechestrate Prin cercetrile lui Burnet i ale lui Medawar i col. s-a dovedit c
73

exist o toleran imun nnscut fa de toate antigenele de organe, care au venit n contact cu sistemul limfoid. Pentru structurile tisulare care rmn topografic n afara contactului cu limfocitele circulante, nu exist o toleran imunologic nnscut. Asemenea structuri se gsesc n anumite esuturi, cum ar fi tiroida, creierul, testiculul i unele componente oculare i care n condiii fiziologice nu sunt vehiculate n organism. n cazuri patologice are loc deversarea lor n circulaie, iar n contact cu celulele imunocompetente, acestea le recunosc drept non-self i vor produce mportiva lor efectori imun, avnd drept consecin inducerea de boli autoimune. Se amintete n acest sens tiroidita autoimun, oftalmia simpatic, aspermia autoimun, etc.

74

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE

CAPITOLUL 8 RSPUNSUL IMUN (IMUNOGENEZA)


Rspunsul imun sau imunogeneza este reacia organismului prin care acesta produce efectorii imuni consecutivi unui stimul antigenic. Prima condiie a dezvoltrii unui rspuns imun este recunoaterea nonselfului. Ca i n cazul imunitii naturale, organsimul acioneaz n sensul distrugerii, al ndeprtrii sau anihilrii efectelor nocive ale nonselfului. n timp ce mecansimele imunitii naturale acioneaz n mod egal, nedifereniat, mpotriva non-selfului, indiferent de compoziia lui chimic i indiferent dac acesta are sau nu proprieti antigenice, rspunsul imun are loc numai fa de structuri non-self dotate cu atributele antigenitii i se caracterizeaz printr-un nalt grad de specificitate. n cazul rspunsului imun, organismul elaboreaz efectori imuni, reprezentai de structuri de neoformaie, inexistente anterior ptrunderii antigenului. Acestea pot fi, ca nivel de organizare, molecule sau celule. Efectorii imuni cu nivel de organizare molecular se numesc anticorpi, denumirea subliniind complementaritatea lor fa de antigen sau imunoglobuline, termen mai modern, care precizeaz compoziia chimic corelat cu intervenia lor n procesele imune. Efectorii imuni cu nivel de organizare celular poart denumiri diferite, n funcie de natura celulelor efectoare, de modul lor de formare i de aciune. Starea de imunitate instalat pe baza rspunsului imun poate fi considerat ca fiind de tip umoral sau celular, n funcie de predominana uneia din cele dou categorii de efectori imuni; mprirea aceasta, este arbitrar ntruct i efectorii imunitii umorale sunt de fapt tot rezultatul unor activiti celulare.
75

Trstura esenial a rspunsului imun const n faptul c att n recunoterea non-selfului ct i n procesul de elaborare a efectorilor imuni organismul reuete s diferenieze detalii fizico-chimice de extrem finee ale antigenului i s determine negativul acestuia sub forma unor complementariti de o extrem de riguroas specificitate. Capacitatea de discernere i difereniere a detaliului de ctre organism este elocvent demonstrat de exemplul clasic n care, n elaborarea anticorpilor specifici unor antigene artificiale preparate prin cuplarea unei proteine cu acidul tartric, gradul de specificitate al anticorpilor merge pn la sesizarea tipului de rotaie al luminii polarizate. Astfel, anticorpii a cror formare este determinat de antigenul ce conine acid tartric dextrogir nu reacioneaz dect cu acest antigen i sunt incapabili s reacioneze cu antigenul n care gruparea determinant este reprezentat de acidul tartric levogir. Producerea efectorilor imuni este determinat de acea nsuire a unor sisteme morfofuncionale ale organismului numit imunocompeten. ntr-un sens mai larg, imunocompetena este atribuit tuturor organelor, esuturilor, celulelor care contribuie ntr-un fel sau altul la realizarea rspunsului imun. ntr-un sens mai ngust, imunocompetena este recunoscut numai elementelor morfofuncionale care produc prin biosintez sau din care rezult prin transformare blastic efectori imuni. ntr-o concepie mai modern, inspirat din lucrrile imunologului VICTOR GHETIE, imunocompetena ar putea fi definit ca nsuirea unor celule din organism de a recunoate, cu ajutorul receptorilor imunologici de pe suprafaa lor, semnalele antigenice, de a le traduce i de a le amplifica intracelular, determinnd celula s produc efectori imuni, sau s ndeplineasc ea nsi acest rol. Treapta filogenetic la nivelul creia apare imunocompetena o reprezint vertebratele. Petii sunt, prin urmare, vieuitoarele cele mai evoluate, capabile s dezvolte un rspuns imun. Suind pe scara filogenetic se constat o strns corelaie ntre superioritatea treptei i complexitatea rspunsului imun.

76

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE 8.1. EFECTORII UMORALI AI RSPUNSULUI IMUN (ANTICORPII) Rspunsul imun umoral se realizeaz prioritar fa de urmtoarele antigene: eritrocite heterologe, bacterii, virusuri, proteine plasmatice heterologe, parazii care determin infestaii cu evoluie acut, etc. Veriga efectoare a rspunsului imun umoral o reprezint nite proteine specifice numite anticorpi (Atc.) sau imunoglobuline (Ig) sintetizate n urma stimulrii cu un anumit antigen, capabile s se uneasc cu antigenul inductor formnd aa numitele reacii antigen anticorp. Anticorpii sunt molecule complexe cu 2 poli funcionali: Un pol servete pentru recunoaterea antigenelor. Este o zon cu structur molecular foarte variabil, adaptat pentru recunoaterea i cuplarea cu enorm de multe structuri antigenice din mediu (se admite c numrul maxim de structuri elementare recunoscute de ctre anticorpi este de ordinul 1017). Cellalt pol denumit efector are o structur constant. Servete pentru amorsarea activrii complementului prin calea clasic i pentru ataarea (imunoaderena) la macrofage. Din punct de vedere biologic, atc. sunt molecule adaptative bifuncionale, servind ca piese de legtur care mijlocesc ataarea atg. pe fagocite. Atc. nu distrug antigenele, dar convertesc diversitatea material a antigenelor ntr-un semnal unic i accesibil mecanismului ancestral de aprare care este fagocitoza. 8.1.1. Structura imunoglobulinelor (Ig) Ig sunt formate din combinaii de lanuri polipeptidice cu lungimi diferite: unele lungi, denumite lanuri grele sau H (de la Heavy), celelalte scurte - lanuri uoare sau L (de la Light). Exist cinci tipuri de lanuri H (gama, alimfocitea, miu, delta i epsilon) i dou tipuri de lanuri L (kapa i lambda). Lanurile H definesc clasa imunoglobulinelor (ex. gama pentru IgG, alimfocitea pentru IgA, miu pentru IgM, delta pentru IgD,
77

epsilon pentru IgE.). Genele care comand producia de lanuri H i L sunt plasate pe cromozomi diferii (cromozomul 14 pentru lanurile H, cromozomul 2 pentru lanurile K i cromozomul 22 pentru lanurile lambda). Ig sunt elaborate de LimfociteB. O celul produce un singur tip de lan uor (kapa sau lambda). Lanurile grele i cele uoare se formeaz pe poliribozomi diferii, dup care se asambleaz 2 cte 2 pentru a forma molecula de Ig. 8.1.2. Clasele de Ig. IgG - Structura acestei Ig este considerat modelul tip pentru toate clasele de Ig.: 2 perechi de lanuri formate fiecare din ele din cte un lan H plus un lan L. Cele patru lanuri sunt legate ntre ele prin puni disulimfociteidice. Configuraia general a moleculei schematizat dup imaginea observat la microscopul electronic, amintete forma literei Y, n care cele dou brae reprezint extremitile aminoterminale, iar coada, extremitile COOH- ale lanurilor. Dup compoziia n aminoacizi, lanurile H i L sunt formate din dou domenii: variabil (V), la extremitatea aminoterminal i constant (C) la extremitatea carboxilic. Secvena de aminoacizi din compunerea domeniilor V difer de la o molecul la alta. Diferenele sunt maxime n trei puncte ale secvenei - zonele hipervariabile care formeaz situsul combinativ cu antigenul. Domeniile C sunt cele care caracterizeaz lanurile gama, kapa sau lambda. Exist patru variante de lanuri gama (gama 1 ...... gama 4) care definesc patru subclase de IgG (IgG1.......IgG4). Papaina atac moleculele de IgG n amonte de legatur -S-S- care unete cele dou lanuri H. Rezult dou fragmente Fab (ab = antigen binding) care conine secvene combinative cu Atg. i un fragment Fc (c = cristalizabile) care constituie elementul efector al moleculei (fixarea complementului i fixarea pe celule care posed receptori specifici pentru Fc). (Fig. 17).

78

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE

Fig. 17 Schema unei molecule de imunoglobulin G

Locul activitii proteolitice a pepsinei este plasat n aval de puntea disulimfociteidic dintre lanurile H. Rezult un rest F (ab)2 format din cele dou Fab - uri unite prin puntea -S-S- i care se comport ca un anticorp, plus 2 resturi ale CH care sunt degradate n peptide mici. IgG pot strbate barierele endoteliale. Ele difuzeaz n spaiile extravasculare unde particip activ la reacia de aprare antibacterian. Dup ataarea pe corpii microbieni, IgG mijlocesc prin segmentul efector Fc, imunoaderena i, uneori, activarea complementului. Prin abilitatea de a traversa placenta ele protejeaz nou-nscutul (al crui sistem imun

79

este incapabil de reacii eficiente) mpotriva infestrii cu microbi. (Tabelele nr. 3 i 4) IgM au dimensiuni mult mai mari (macroglobuline) rezultate din asocierea a 5 uniti monomerice compuse i ele din mperecherile de lanuri H (aici lanuri miu) cu lanuri L (kappa sau lambda). Exist dou feluri de lanuri miu (miu 1 i miu 2). Cele 5 uniti monomerice se unesc ntre ele prin extremitile distale ale segmentelor Fc formnd imaginea unei stele cu cinci brae.

Fig. 18 Structura imunoglobulinei M

n consecin molecula pentameric conine 10 Fab-uri (10 situsuri combinative cu antigenul. (Fig.18). Sinteza IgM precede pe aceea a IgG n rspunsul imun primar. Din cauza dimensiunilor lor foarte mari, IgM nu poate prsi uor spaiul intravascular, unde joac un rol important n combaterea bacteriilor. Prin multiplele lor valene combinative cu antigenul, ele pot lega simultan, mai muli corpi bacterieni (fenomen care este denumit aglutinare), iar prin abilitatea lor marcat de activare a complementului (o molecul de IgM fixat pe un Atg. declaneaz calea clasic) produc liza acestora.

80

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Tabel nr. 3 Caracteristicile imunoglobulinelor


Perioada denjumt ire (zile) Concentraia medie n zer de adult mg/100 ml 1 45-150 (125) 23 720-1500 (1200) 6 2 3 90-325 (210) 0,04-0,1 3 81 Greutate molecular Proprieti imunologice Apar procese n rspunsul imun eficient. Opsonizeaz, aglutineaz, fixeaz C. Anticorp principal pentru polizaharide, bacterii G(-) Cel mai frecvent anticorp, mai ales extravascular. Apare n lichide biologice, trece prin placent; subolasele 1,2 i 3 fixeaz C. Anticorp principal pentru toxine, virusuri, bacterii. Ig principal n secreia sero-mucoas a mucoaselor. Prezent n secreii seromucoase. Indicator al infeciei parazitare. Nu se cunosc. Lanuri supliment. Clase de Ig Nr de subuniti Coeficient de sediment 19 S 7S 7-15 S 8S 7.S Lan greu Subclase IgM1 IgM2 IgG1 IgG2 IgG3 IgG4 IgA1 IgA2 Lanuri uoare

IgM

900.000

IgG

150.000

IgA IgE IgD

J SC

1,2,3 1 1

170.000 200.000 180.000

Legend:

J= lan de legare (Joing) C = complement

SC= componenta secretorie

Tabel nr. 4 Tipuri de reacie A. Dependente de Atc 1. Anafilactic (reaginic, atopic) 2. Mediate de complement activat de a. Complexe imune (cu Atg liber sau ncorporat n membrana celulei inte) b. Imunoaderen 3. Citotoxic ( reacia CMCDA a celulei K) Tipuri de leziune imunologic ( dup Nakamura i Tucker, 1973) Debut Atc Celule Sediul reaciei Bazofile Reacia local variaz n Rapid Mastocite raport cu poarta de intrare; (sec.IgE (posed receptor poate fi sistematic min) pentru Fc al IgE) (generalizat) IgM Neutrofile ntre 30 Variaz cu localizarea IgG min i 2 tisular a complexelor ori cu ore sediul reaciei ntre anticorpi i constituientul (antigenul) tisular Min.-ore Intermediar ntrziat 18-48 ore IgM IgG IgG Celule SRE (poses. de recep.pt C3b) Mononucleare celule K ( nule) , posesoare de receptor pentru Fc -cel. T-efect (secretorii) -monocite, macrofage (recrutate) - celule T-efector (ucigae) Sinusuri vasculare a SRE Variaz cu sediul tisular al celulei int acoperit cu anticorpi -variaz cu esutul unde este localizat antigenul recunoscut Mediatorii biochimici Histamin, heparin, serotonic, SRS-A i ECF - factori complement chemotactici; - enzime lizozomale hidrolitice liberate de neutrofile - complement: C3b - receptor pentru Fc; - factor citotoxic liberat de celula K - fagocitoz Liberare de limfokine solubile din limfocit T activat de Atg.

B. Mediate de limfocit T 1. Granulomatoas 2. Citotoxic-citolitic

ntrziat -variaz cu localizarea 18-48 Factor citotoxic liberat de celulei int ore limfocitul T-killer SRS-A- Slow reacting substance of anaphylaxis ( sub. lent reactiv a anafilaxiei) SRE: Sistem reticulo-endotelial ECF: Eosinophil chemotactic factor (fact. chemotactic al eosinofilelor) CMCDA: Citoliza mediat de celule dependent de Atc 82

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE

IgA se prezint sub dou forme: IgA seric i IgA secretorie. Structura de baz este o combinaie de 2 lanuri alimfocitea cu dou lanuri L (kappa i lambda).

Fig. 19 Structura imunoglobulinei A Exist dou subclase de IgA (alimfocitea 1 i alimfocitea 2). IgA seric poate fi monomeric, dimeric sau polimeric. Rolul su nu este bine cunoscut. IgA secretorie este prezent n concentraie ridicat n saliv, lapte, lacrimi, sput sau secreii digestive. Este format din dou uniti monomerice unite ntre ele printr-o pies secretorie i un mic polipeptid (lanul J). (Fig.19) IgA secretorie este produs local de elemente limfoide specializate din submucoase, sub form de dimeri stabilizai prin lanuri J.

83

Acetia se unesc cu un receptor expus pe membrana celulelor epiteliale cu care formeaz un complex care traverseaz aceste celule ctre suprafaa lor extern sau luminal. La acest nivel molecula receptorului se scindeaz, iar fragmentul care rmne legat cu dimerul de IgA formeaz piesa secretorie. Aceasta din urm ar avea rolul de a apra de proteoliz IgA expus pe suprafee. IgA secretorie asigur protecia antibacterian la nivelul suprafeelor care vin n contact cu mediu extern. Ea inhib aderena microorganismelor la mucoase, prevenind n acest mod strbaterea barierelor externe de ctre agenii microbieni. IgD este la fel ca IgG o structur monomeric cu formula delta2 + L2 (kapa sau lambda). Concentraia seric a IgD este foarte redus (0,025 g/l). La fel ca i IgM, IgD sunt frecvent exprimate pe suprafaa limfocitelor B unde opereaz ca receptori specifici pentru Atg. IgE sunt produse n titruri mari n cursul reaciilor alergice, cnd se fixeaz pe receptorii Fc de pe memebrana granulocitelor bazofile i a mastocitelor declannd eliberarea de histamin i de alte amine vasoactive. Au fost denumite i reagine. Sunt compuse din lanuri epsilon i L. Urme de IgE exist i n serul normal. Rolul fiziologic al IgE ar fi cel de protecia suprafeelor mucoaselor externe. Microbii care depesc aprarea local mediat de IgA i se combin cu IgE, induc prin intermediul unor mecanisme mediate de acestea, o recrutare local de efectori solubili (de ex. complement i IgG i de celule n special de fagocite).
Ig sunt produse de LimfociteB sub dou forme (fig.20):

1. Ig exprimate pe suprafaa membranei LB: moleculele respective sunt ncastrate n membrana Limfocite printr-o pies de legtur (secvena de aminoacizi de la nivelul carboxiterminal al moleculei). Extremitatea aminoterminal (care conine situsul combinativ) proemin n afara membranei. Ig de suprafa (sIg) joac rolul de receptor pentru Atg. al LB. Interaciunea specific sIg - Atg. produce un semnal care activeaz LB. 2. Ig secretate de ctre LB activate i transformate n plasmocite se gsesc ca molecule libere n plasm, n secreii i lichidele
84

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE extravasculare unde joac rol de anticorpi care se cupleaz cu antigenul recunoscut n prealabil de sIg.

Fig.20. Formele sub care sunt produse Ig. a. exprimate la suprafaa limfocitului B (Igs) b. molecule libere

a b Aceast dubl recunoatere i interaciune cu Atg. este posibil deoarece sIg. i Atc., ca produi ai aceleiai celule sau ai unei clone de celule, au situsul combinativ cu structur molecular identic. Spre deosebire de sIg moleculele de Atc. nu au pies de legtur. Extremitatea lor carboxiterminal posed un situs de combinare cu componenta C1q a complementului. C1q se ataeaz pe Atc. dup cuplarea acestora cu Atg. Ataarea C1q la Atc. declaneaz secvenele activrii C' prin calea clasic.

Fig. 21 Modul de eliminare a Atg prin fagocitoza imun

Macrofagele exprim receptori prin care ataeaz pe suprafaa lor segmentul carboxiterminal (Fc) al Atc. Prin intermediul Atc. care ader la
85

suprafaa sa, macrofagul i apropie Atg. fixat la cellalt pol al moleculei anticorpului. Se creaz astfel, condiia optim pentru fagocitarea Atg. Fixarea i activarea complementului mpreun cu ataarea i fagocitarea complexelor Atg - Atc reprezint cele dou mecanisme prin care se realizeaz eliminarea Atg. (Fig.21). Ig reprezint o situaie unic n biologie pentru c sunt n acelai timp i anticorpi i antigene (prin natura lor proteic se comport ca imunogene care provoac apariia unor Atc anti - Ig). Acetia recunosc diveri epitopi ai moleculelor de lanuri H i L.

Fig. 22 Antigenitatea imunoglobulinelor (Ig)

Exist trei feluri de epitopi (determinani antigenici) distribuii n anumite zone precise ale moleculei (Fig.22). 1. Epitopi care determin specificitatea de specie (izotipic): clasele de Ig sunt identice din punct de vedere antigenic pentru toi indivizii speciei. Izotipurile sunt determinate de lanurile H. Antigenicitatea izotipic poate fi exploatat n practic pentru prepararea de reactivi. Ig umane injectate unui iepure se comport ca antigene. Animalul dezvolt o reacie imun n urma creia se va
86

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE produce anticorpii anti-Ig umane. Serul animalului imunizat a primit numele de antiser deoarece reacioneaz in vitro (prin anticorpii si anti-Ig) cu Ig din serul uman. Cu ajutorul unui astfel de antiser se poate evidenia prezena Ig umane n diverse umori sau fixate pe suprafaa unor celule. Pe acest principiu funcioneaz testul Coombs direct (TCD) care evideniaz Atc. fixai pe Atg eritrocitare. n practica medical TCD servete pentru identificarea unor imunizri posttransfuzionale sau pentru diagnosticul anemiilor hemolitice autoimune i al bolii hemolitice a nou-nscutului. 2. Epitopii specifici pentru indivizii unei specii (allotipuri) (gr. allos = altul + tupos) sunt exprimai pe regiunile constante ale lanurilor gama (sistemul A2m) sau kapa (sistemul Km). Allotipurile sunt comandate de gene somatice i se transmit dup legile mendeliene. Datorit expresiei acestor allotipuri, Ig difer din punct de vedere antigenic de la un individ la altul: administrate la ali indivizi ai speciei, Ig unei clase (izotip) pot genera n anumite condiii sinteza de anticorpi anti-allotip. Foarte rar, incompatibilitatea dintre allotipuri pot genera reacii post transfuzionale. 3. Epitopi care sunt specifici numai pentru moleculele de Ig, elaborate de o clon celular (idiotipuri): un individ va elabora familii de molecule de Ig care exprim fiecare alt idiotip. JACQUES OUDIN (1963) a demonstrat existena idiotipurilor ntrun experiment pe iepuri cu identitate allotipic. El a administrat unui iepure un Atg. (X), apoi a separat Atc. anti-X i i-a administrat la alt iepure. n mod neateptat, cel de-al doilea animal a dezvoltat Atc. antianti-X, sugernd c moleculele anti-X posed structuri antigenice particulare i individuale, altele dect specificitatea allotipic. Determinanii idiotipici sunt plasai la nivelul regiunilor hipervariabile ale lanurilor H i L. S-a demonstrat ulterior c un individ normal ar dispune de mai multe sute de mii de idiotipuri diferite. distribuite pe Ig serice i pe receptorii pentru antigen ai limfocitelor B i T. Rspunsul la antigenul X nu s-ar limita numai la producia de Atc. specifici, deoarece acetia, prin determinanii lor idiotipici (care se comport ca antigene), ar declana i producia unor anticorpi antiidiotip (anti-Id1). Acetia, la rndul lor, vor genera molecule de anti-anti87

idiotip (anti -Id2) care, n continuare, vor duce la producia unor anti -Id3, .a.m.d. Dac admitem foarte schematic c situsurile combinative ale unui Atc. (paratopii) reproduc n negativ configuraia spaial a Atg. i c aceleai situsuri combinative conin i idiotipurile generatoare de antiId, putem concepe dou aspecte caracteristice ale acestei reacii n lan: a) anti-Id2 pot prezenta un grad mare de identitate cu Atc. iniiali anti-X i deci posibilitatea de recunoatere a Atg; b) configuraia paratopilor ce intr n compunerea anti-Id1 ar putea fi extrem de asemntoare cu Atg. nsui. Atc. anti-Id1 s-ar comporta deci ca un fel de imagine intern a Atg., ceea ce nseamn c n interiorul sistemului imunitar sunt reproduse elemenete ale lumii exterioare organismului. Aceast reea de interaciuni, n care mai sunt implicate i celulele limfoide B i T (prin idiotipurile exprimate de receptorii lor pentru Atg.) creaz un sistem de reglare foarte flexibil (teoria reelei idiotipurilor conceput n 1974 de NIELS JERNE). 8.1.3. Biosinteza i catabolismul imunoglobulinelor Biosinteza imunoglobulinelor se realizeaz n interiorul plasmocitului, prin formarea independent a lanurilor H i L la nivelul ribozomilor, fiecare lan fiind codificat de o gen separat n interiorul celulei secretoare. Poliribozomii cu 7-8 uniti ribozomale sintetizeaz lanurile. Asamblarea lanurilor polipeptidice se face la nivelul reticulului endoplasmatic plasmocitar. Procesul de sintez a imunoglobulinelor se supune legii cibernetice a conexiunii inverse (Feedback), n sensul c la un prag nalt de concentraie biosinteza este inhibat, iar n cazul scderii nivelului de imunoglobuline n umori, procesele de sintez sunt accelerate. Degradarea moleculelor de imunoglobuline sau catabolizarea lor, exprimat ca timp de njumtire (T 1/2) este un proces fiziologic care permite nlocuirea permanent a moleculelor mbtrnite cu altele tinere, cu meninerea unui nivel constant al lor n organism. Exist o relaie direct proporional ntre rata de catabolizare (K), concentraia de imunoglobuline (A) i timpul (T) exprimat n zile, relaia fiind K=A/T, n care K este rata de catabolizare ntr-o singur zi. Deci T 1/2 este cu att mai lung cu ct rata sa de catabolizare este mai mic. Dar, n afar de rata de catabolizare, T 1/2 mai este dependent i de clasa de
88

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE imunoglobuline, de specia animal, de viteza de sintez a moleculelor, respectiv de nivelul concentraiei lor n ser, etc. Pentru determinarea valorii acestui timp, moleculele sunt marcate radioactiv, de regul cu I125, dup care se urmrete prezena iodului n organism. Aa s-a determinat c la om T 1/2 a IgM este de 5,1 zile, iar la IgG de 22 zile. La oarece, animal cu greutate corporal mic i cu o activitate metabolic intens, T 1/2 a IgG este de numai 3,9 zile, n timp ce la animalele cu greutate corporal mare, valoarea lui este mult mai mare. Procesul de degradare al Ig se realizeaz la nivelul ficatului, precum i la nivelul altor organe bogate n sistem reticulo-histiocitar. Mecanismele care stau la baza catabolizrii moleculelor de imunoglobuline nu sunt bine cunoscute fapt pentru care au fost emise diferite ipoteze prin care se ncearc explicarea lor. O ipotez a catabolizrii selective susine c molecula de imunoglobulin, atunci cnd mbtrnete, i modific conformaia devenind strin de organism. Acesta are preformai anticorpii care recunosc moleculele modificate, se combin cu ele, formnd complexe care sunt fagocitate i eliminate din organism de ctre celulele din seria monocitar-macrofagic. O alt ipotez, a receptorilor de protecie, susine c celulele din seria monocitar care catabolizeaz imunoglobulinele, au receptori de membran pentru Fc. Celulele pot lega moleculele din ser fie direct, fie prin intermediul acestor receptori. Moleculele fixate la receptori sunt trecute prin filtrul celular i eliminate extracelular fr a fi distruse de ctre celul. Moleculele fixate, odat ajunse n celul, n lipsa proteciei pe care o confer receptorii, sunt atacate de ctre protein-disulimfociteidreductaz, o enzim care desface legturile dintre lanurile H sau dintre H i L. Lanurile odat eliminate devin susceptibile la aciunea catepsinelor care le vor descompune n continuare pn la nivel de aminoacizi. La hipergamaglobulinici, deci n exces de molecule de imunoglobuline, T 1/2 scade la jumtate fa de valoarea normal (cca. 12 zile), iar la hipogamaglobulinici crete de aproximativ 3 ori fa de normal (cca 70 zile). Catabolizarea claselor IgM i IgA nu este influenat de concentraia lor n ser.
89

8.1.4. Dinamica imunoglobulinelor n rspunsul imun umoral n cazul unei stimulri antigenice, organismul va reaciona prin sintez de Atc., acest rspuns fiind cunoscut sub denumirea de rspuns primar. Prima categorie de anticorpi specifici care apar sunt anticorpii IgM, a cror cretere este de 80 molecule/sec. i au tendin de epuizare rapid. Ulterior, apar IgG a cror cretere este lent i progresiv, cu tendin deseori de descretere. Dac organismul revine n contact cu acelai Atg. apare rspunsul secundar (reacia anamnestic) n care creterea IgM este neglijabil i se epuizeaz rapid, n timp ce anticorpii de tip IgG cresc intens i rapid, atingnd un nivel ridicat i persistent, urmat de scderea lent pn la un anumit prag de protecie imun rezidual. Diferenele ntre rspunsul imun primar i cel secundar constau n scurtarea timpului de apariie a efectorilor imuni i titrul mult mai ridicat al acestora, indiferent de doza de antigen reinoculat. (Fig.23).

Fig. 23 Dinamica imunoglobulinelor n rspunsul imun primar i secundar

Rspunsul secundar se bazeaz pe persistena n organism a limfocitelor de memorie care, la al doilea stimul antigenic, sunt responsabile de promtitudinea i intensitatea rspunsului imun.

8.1.5. Unele paticulariti privind imunoglobulinele la animale


90

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE La diferite specii de animale, imunoglobulinele nregistreaz variaii n ce privete antigenicitatea, greutatea molecular, viteza de sedimentare, proporia lor n diferite umori, variaii condiionate de o mare diversitate de factori ca: specia, rasa, vrsta, starea de ntreinere, anotimpul, etc. Taurinele i ovinele au urmtoarele caracteristici n ce privete imunoglobulinele. NORHEIM i col. (1985) au cercetat relaia ntre coninutul n imunoglobuline i vrst, zon geografic, anotimp, tehnologia de cretere i starea epizootologic a efectivelor i au observat valorile maxime ale IgG serice n perioada august-octombrie i minime primvara (martie-mai). Efectul anotimpului asupra cantitii de imunoglobuline a fost mai pregnant la viei n vrst de 31-90 zile. Coninutul n imunoglobuline a fost influenat n sens pozitiv la creterea vieilor n grup i pe aternut i n sens negativ la inerea lor n boxe individuale, alturi de vacile mame i de absena aternutului. Zona geografic a influenat n mod constant concentraia serului n imunoglobuline. Autorii opineaz c titrul de IgG seric ar putea constitui un indicator uzual al influenei factorilor ecologici asupra sntii vieilor. La vrsta de 100 zile, concetraia serului n IgG se stabilizeaz tructva la 18 mg/ml, fiind mai puin supus variaiilor n funcie de factorii de mediu. Dei s-a reuit izolarea i identificarea clasei IgE de origine bovin, totui, la bovine i ovine clasele IgE i IgD au fost puin studiate.

Tabelul 5
91

Imunoglobulinele la bovine Caractere i proprieti IgG1 Numr subclase Greutatea molecular Constanta de sedimentare (S20 W) Mobilitatea electroforetic Procent hidrai de C Concentraia de ser * Concentraia n saliv* Concentraia n colostru* Timp de njumtire (zile) Fixarea complementului Fixarea la piele * g/100 ml; 2 IgG IgG2 2 1 IgM Ser 1 IgA Secreii ?

165000 150000 900000 163000 400000 6,3 i 1-2 % 18,4 4,0 40-60 9,6 + + 1-2 % 18,4 4,0 40-60 9,6 ? ? 6,6 1,9 2 6% 2,6 1,0 4,9 17,7 + 0 6,7 2 1,21,5% 0,3 56,0 4,5 2,0 0 0 10-12 2 5-9% 0,3 56,0 4,5 2,0 0 0

+ = reacie pozitiv; 0 = reacie cu caracter absent; ? = necunoscut.

Tabelul 6 Imunoglobulinele la ovine


92

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Caractere i proprieti IgG1 Numr subclase Greutatea molecular Constanta de sedimentare (S20 W) Mobilitatea electroforetic 2 IgG IgG2 2 1 IgM Ser 2 IgA Secreii ?

150000 150000 900000 170000 420000 6,5 i 6,7 19 2 4,0 1,2 1,0 4,1 3,0 + 7,0 2 4,1-4,2 0,25 56,0 ? ? 0 10,8 2 4,1-4,2 ? 56,0 2,0 6,0 0

Procent hidrai de C 1,7-1,8 1,7-1,8 (%) Concentraia de ser* Concentraia n saliv* Concentraia n colostru* Concentraia n lactoser* Fixarea complementului * g/100 ml; 2,1 10,0 60,0 30,0 + 2,1 10,0 60,0 30,0 +

+ = reacie pozitiv; 0 = reacie cu caracter absent; ? = necunsocut.

Bubalinele sunt apropiate n ce privete clasele i subclasele de imunoglobuline de taurine. Cabalinele au acelai echipament n imunoglobuline existent la om i celelalte specii animale, dar cu unele deosebiri caracteristice

93

pentru aceast specie. Cabalinele par s aib mai multe izotipuri, fiind astzi admise la aceast specie cel puin ase clase. IgT reprezint o clas specific ecvinelor, care a fost iniial considerat ca fiind analoag cu IgA a altor specii, de aceea poate fi ntlnit n lucrri mai vechi i sub notaia IgAT. Ulterior, s-a dovedit ns a fi mai apropiat de IgG dect de IgA; lanurile ei uoare sunt antigenic identice cu cele ale IgG; n privina compoziiei n aminoacizi a fraciunilor Fc se constat ns o diferen faa de IgG (14 aminoacizi la IgT, fa de 19 la IgG). Masa molecular a IgT este de 150000 da. IgB, descris i sub simbolul AI (agregating imunoglobulinis), reprezint, ca i IgT, o alt imunoglobulin specific ecvinelor, creia forele inonice i asigur un slab grad de agregare. Masa ei molecular este de 160 000 da., iar coeficientul de sedimentare variaz ntre 7 S i 19 S. Datele privind IgD i IgE la cabaline sunt sumare i neconcludente. Suinele posed n umorile organismului izotipurile clasice de imunoglobuline, studii mai detaliate fiind realizate asupra IgG,IgM, IgA i, ntr-o msur mai redus, IgE. Psrile conin n umori aceleai clase de imunoglobuline ca i mamiferele. IgG i IgM au fost identificate n snge ca principalii anticorpi serici, iar IgA n secreii, majoritatea lucrrilor referindu-se la prezena ei n bil. Valorile imunoglobulinelor, relev faptul c IgA i IgM sunt prezente n tubul digestiv al embrionului i provin mai degrab din albu dect din glbenu. IgG din intestin pare s-i aib originea n glbenu i s ajung n embrion prin lichidul amniotic, n care n a 12-a zi este nc absent, dar poate fi detectat n a 17-a zi de via. Datele de mai sus sugereaz o analogie ntre modalitile de transfer vertical pasiv a imunoglobulinelor la psri cu cea de la mamifere.

8.1.6. Anticorpii monoclonali. Tehnica hibridomului


94

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Serurile conin mai muli anticorpi n funcie de determinanii (epitopii) antigenului. Deci, serurile convenionale clasice sunt policlonale, avnd i anticorpi inutili de balast. Inconvenientul serurilor policlonale care conin mai muli Atc. const n nespecificitatea unor reacii i imposibilitatea de a recunoate antigenii comuni. De asemenea, mai intervin i alte dificulti: dificultatea de a discrimina diversele tipuri de virusuri sau bacterii (virusul herpetic I de virusul herpetic II); dificultatea de a discrimina hormoni care au fragmente comune (hormonul foliculostimulant hipofizar -FSH, de hormonul gonadotrop corionic uman-HCG); dificulti n dozajul imunologic al medicamentelor (digoxin i teofilin) care dau reacii ncruciate datorit produilor lor de metabolism; lipsa de omogenitate din cauza reactivitii individuale a productorului de ser. S-a nscut n felul acesta ideea unui ser monospecific. 8.1.6.1. Tehnici de preparare a anticorpilor monoclonali G. KOHLER i C.MILSTEIN (1975 Cambridge), cutnd structura sau modalitatea fuzionrii celulare in vitro ajung printr-o fericit ntmplare s descopere principiul preparrii anticorpilor monoclonali. n formarea anticorpilor monoclonali intervin dou celule: limfocitul B luat din splina de oarece, imunizat contra hematiei de oaie care se cloneaz i se ajunge la o clon specific i celula mielomatoas de oarece (linia P3). Principiul producerii anticorpilor monoclonali const n fuzionarea acestor dou celule. n ceea ce privete necesitatea de fuzionare i de participarea fiecruia dintre celule la edificarea anticorpilor monoclonali, limfocitul B vine cu informarea antigenic iar celula mielomatoas vine cu dou proprieti: celula mielomatoas produce Ig, dar totdeauna de un singur tip (de obicei IgG); aceast celul are capacitatea de diviziune practic infinit (nu i se deceleaz modificri de cariotip nici dup 20 de generaii).
95

Se obine n acest mod o celul nou de tip himer denumit hibridom (Fig.24). Pentru obinerea LB utilizat n reacia de fuzionare sa utilizat ca Atg. hematia de oaie, care a fost purificat de o serie de epitopi ce nu erau specifici lsndu-i-se numai epitopii ce confer specificitatea strict pentru acest Atg. S-a inoculat acest Atg. direct n splin la oarece. Dup un anumit timp, necesar formrii de Atc. (7 - 14 zile) se preleveaz limfocite din splin. Celulele mielomatoase se obin prin inocularea oarecilor cu uleiuri minerale intraperitoneal obinndu-se mieloame (cancere ale sistemului imunitar) i implicit linii mielomatoase murine (linii X63; NS1; MSO1; etc.).

Fig. 24 Schem simplificat de producere a anticorpilor monoclonali

Urmeaz partea cea mai dificil, hibridarea, adic punerea n contact a limfocitului normal cu celula mielomatoas. Fuziunea celular se face prin dou modaliti: n prezena polietilenglicolului; prin electrofuziune. Prin metoda cu polietilenglicolul numai un limfocit dintr-o populaie de 200 000 este capabil de fuzionare.
96

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE n metoda electrofuziunii rata de fuzionare crete la 80% i aceasta presupune existena unui ecran microscopic n care se evalueaz apropierea celulelor limfocitare de cele mielomatoase. n momentul n care n cmpul microscopic se observ mai multe apropieri se face o descrcare de curent electric n lichid, producnd fuzionarea celulelor. Momentul urmtor const n clonarea celulelor fuzionate pentru a gsi i a alege numai ser monoclonal cu Atc. specifici. Celula hibridom are motenire de la celula mielomatoas capacitatea de a sintetiza un singur Atc. Clonarea celulelor fuzionate are loc pe mediul HAT (hipoxantin aminoterin - timidin). Celulele hibridom se menin n condiii de laborator pe culturi de esuturi i se inoculeaz intraperitoneal la oarecii nuzi care sunt lipsii de timus i nu au pr. Acetia nu au nici un fel de aprare imunologic. n urma inoculrii celulelor menionate, acetia fac tumori limfomatoase iar lichidul ascitic recoltat de la subiecii n cauz este foarte bogat n anticorpi monoclonali. n esen modelul Kohler-Milstein de obinere a celulei hibridom propune urmtoarele etape: purificarea antigenelor cu obinerea epitopilor specifici; inocularea antigenului purificat la oareci; scoaterea splinei i recoltarea limfocitelor B la 7 - 14 zile de la inoculare; hibridarea ( fuziunea limfocitului cu celula mielomatoas); clonarea celulelor fuzionate pe mediul HAT. 8.1.6.2. Aplicaiile n practic ale Atc. monoclonali Anticorpii monoclonali prezint o serie de avantaje deosebite n diagnosticul foarte divers imunologic. De ex.: diferenierea tipurilor de bacterii sau virusuri, strns nrudite; identificarea chlamidiilor; identificarea rapid i specific a germenilor din diareile nounscuilor; identificarea salmonelelor n timp scurt (2 ore) din alimente (procedeul clasic durnd 6 zile); identificarea virusurilor respiratorii sinciiale;
97

dozarea progesteronului; depistarea i supravegherea unor celule maligne n special din colon i rect; pentru identificarea populaiilor i subpopulaiilor de limfocite, etc. n vederea diagnosticului se prepar kitt-uri cu Atc. monoclonali specifici unor antigene specifice diferiilor ageni patogeni sau elemente ce urmeaz a fi identificate sau titrate. Dificultile obinerii Atc. monoclonali, pe lng cele tehnice, sunt legate n primul rnd de gsirea epitopilor specifici. 8.1.7. Citokinele (monokine i limfokine) Efectul de cooperare T-B poate fi demonstrat n culturi n care cele dou populaii celulare sunt separate de o membran cu pori foarte fini. Suplimentarea mediului de cultur cu diverse populaii celulare induce activarea sau inhibiia acestora. Reiese c celulele implicate n reacia imun pot comunica ntre ele prin factorii solubili care posed anumite activiti biologice. Mcf. i LT sunt surse principale de citokine. De aceea produsele acestor celule mai sunt denumite i monokine sau, respectiv, limfokine. Monokinele i limfokinele sunt secretate numai de celule activate fie specific (n urma contactului cu Atg.), fie nespecific (de ctre diverse citokine). Activarea prin citokine a celulelor implicate n rspunsul imun atrage dup sine recrutarea unui numr mare de celule la locul conflictului cu Atg. i, implicit, amplificarea reaciei de aprare. Aceast interaciune ntre diferite celule a dus la formarea termenului de interleukine pentru regruparea acestor limfokine i monokine care induc relaii reciproce de stimulare ntre celulele partenere. Citokinele sunt glicoproteine i, cu toate c exist anumite familii de substane care au un precursor comun, ele se deosebesc de Ig, deoarece nu posed nici aceeai structur molecular de baz i nici nu demonstreaz o homologie important a secvenelor lor de aminoacizi cu acele ale Ig. Citokinele nu sunt specifice: mai multe celule diferite pot secreta dup stimularea antigenic sau nespecific o aceeai substan;
98

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE substana respectiv poate aciona pe mai multe tipuri celulare crora le induce activiti biologice diferite. Majoritatea citokinelor acioneaz asupra celulelor-int de o manier analoag celei a hormonilor peptidici: fixarea pe un receptor specific membranei, activarea unui mesager secundar intracelular care transmite semnalul la nucleu i induce astfel apariia efectului biologic specific. Numrul i densitatea receptorilor pe suprafaa celulelor int sunt bine determinate. Efectul biologic al citokinelor nu este n mod necesar corelat cu numrul receptorilor exprimat pe celul. Afinitatea receptorului pentru ligandul sau fiziologic poate avea un rol important n acest sens. 8.1.7.1. Interleukinele Principalele substane din aceast clas sunt: IL 1 secretat de celule prezentatoare de Atg. (Mcf., celule Langerhans), granulocite. Producia de IL 1 crete substanial dup activarea celulelor monocito-macrofage. Aceast activare poate fi indus dup endocitarea Atg. (n cadrul procesului de prezentare a acestuia) sau prin aciunea altor citokine asupra Mcf. (IL2, IFN gama). IL 1 acioneaz pe mai multe substraturi celulare. Contribuie la activarea limfocitelor B i T. Pentru ca aceast activare s se produc este nevoie ca asupra limfocitelor s opereze simultan mai multe semnale. IL 1 ar furniza unul dintre acestea. Ca rspuns la stimulare, limfocitele vor secreta i alte limfokine (IL2, IL3, IFN gama). Stimuleaz producia de prostaglandin din celulele endoteliale prin intermediul creia induce febr. Stimuleaz hepatocitele s produc proteine de faz acut cu rol n aprarea nespecific cum ar fi proteina C-reactiv. Mrete capacitatea funcional a granulocitelor i mobilizarea lor chemotactic. IL 2 (T-cell growth factor) este produs n special de LTh. Secreia IL 2 necesit dou semnale: Atg. (prezentat pe suprafaa Mcf.) i IL 1. n stare de repaos LTh exprim pe membran un numr mic de receptori pentru IL2. Dup receptarea semnalelor de activare se produce
99

iniial o cretere rapid a numrului R IL2, dup care are loc secreia de IL 2. Aceasta va aciona asupra propriei celule productoare (efect autocrin) i asupra altor LT pe care le activeaz nespecific. Se pare c IL2 activeaz toate tipurile de subpopulaii T (Th, Ts, Tc) care rspund identic prin exprimare R IL2 i proliferare. n plus, IL2 activeaz i alte celule (LB, Mcf., celulele NK) i ar determina creterea activitii killer a limfocitelor. Glucocorticoizii inhib producia de IL2, prin intermediul inhibrii secreiei de IL1 de ctre Mcf. IL 3 este produs de LT activate de Atg. i are efecte funcionale multiple. Din cauz c promoveaz proliferarea in virto a celulelor stem multipotente i eritroide (din care rezult formarea de colonii celulare) a primit i numele de multi-CSF (CSF - colony stimulating factor). Rolul su n imunitate este neclar: se pare c ar contribui indirect la diferenierea LT i la creterea activitii citotoxice a macrofagelor. La acestea se mai adaug efectele asupra sistemului hematopoietic care furnizeaz majoritatea celulelor auxiliare cu rol n aprare. IL 4 ar aciona ca factor de proliferare a LB (de aici i vechea denumire a substanei: BCGF1-(B-cell growth factor 1). Acioneaz ntr-o etap a activrii LB, cnd aceste celule exprim receptorii si specifici i poate induce secreia de IgG1 (o subclas de IgG care apare rareori n rspunsul imun). n plus, ar putea conferi activitate citotoxic macrofagelor normale i ar induce proliferarea mastocitar. IL 5 (BCGF II-B cell growth factor II) ar induce la oareci proliferarea LB i secreia de IgM, IgG i IgA. La om rolul IL5 este incomplet elucidat. Este un produs al LT (un astfel de factor a fost izolat din culturile de LT umane stimulate cu HTLV-1 (Human T-cell lymphoma/leukemia virus I). IL 6 produs de Mcf. acioneaz sinergic cu IL3 asupra celulelor stem multipotente ale hematopoiezei. Este implicat n activarea LT i n inducerea produciei proteinelor de faz acut. Sinteza IL6 este stimulat de IL1. IL7 este produs de celulele stromale ale mduvei osoase. Induce diferenierea limfocitelor foarte tinere (pre-B), dar nu are efecte asupra LB mature.
100

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE IL8 a fost cunoscut la nceput ca un factor proteic de activare a neutrofilelor, face parte din familia chemokinelor (citokine proinflamatorii). Astzi se tie c IL8 este o citokin produs de monocite, macrofage, neutrofile, LT, celulele endoteliale, epiteliale i fibroblaste ca rspuns la o varietate de stimuli care include LPS, TNF-alimfocitea, IL1, IL7 precum i n cazurile de hipoxie. Are rol chemotactic asupra neutrofilelor, bazofilelor, LT, efecte proinflamatoare (degranularea neutrofilelor i bazofilelor, stimularea metabolismului oxidativ i aderenei PMN) i angiogenetice (neoformare de vase sanguine). De asemenea, determin sporirea actrivitii enzimelor lizozomale i exprimarea receptorilor pentru complement. IL9 este un factor de proliferare pentru LT i mastocite, fiind secretat de LT activate (CD4+) i LT cu memorie. Rolul biologic este multiplu, prin aciunea asupra LB, LT, precursorilor hematopietici i mastocitelor. Stimuleaz producia de IgG, IgE (sinergism cu IL4), amplific proliferarea LT din sngele periferic, fiind totodat un stimulator al precursorilor eritropoietici (alturi de EPO), hematopoietici i al diferenierii mastocitelor (mai ales n parazitozele intestinale). Aciunea IL9 se manifest mpreun cu alte limfokine produse de LTh2 ca IL3, IL4 i IL10. Receptorii pentru IL9 sunt prezeni pe diferite celule cum ar fi LTh, clone celulare de limfoame, macrofage i mastocite. IL10 a fost descris n 1989, fiind produs de clone de LTh2 ce inhib sinteza de citokine de ctre un alt set de clone Th1. Cnd a fost identificat, i s-a atribuit rolul de factor inhibitor al sintezei unor citokine proinfalamtorii produs de LTh2. n prezent se tie c IL10 este produs de mai multe tipuri de celule: LTCD4+ i LTCD8+ (n repaus i cu memorie), LB, monocite, eozinofile, mastocite, celule epiteliale bronice, unele tipuri de celule canceroase etc. Efectele biologice sunt pleiotrope imunomodulatoare: pe de o parte antiinflamatoare i imunosupresoare, iar pe de alta imunostimulatoare. Se poate spune c principalele aciuni biologice ale IL10 sunt cele inhibitorii asupra activitii monocitelor/macrofagelor, ale LTh1 i antiinflamatorii.
101

IL11 a fost identificat n supernatantul unei linii celulare de mduv osoas. Este secretat de LT i are efecte stimulatoare asupra LB. Exist date care sugereaz c IL11, n conjuncie cu IL3, induce formarea precursorilor megacariocitari prin creterea lor numeric i n dimensiuni. De asemenea, este activat proliferarea i producia de Ig de ctre LB. IL12 a fost izolat n 1989 i reunete structural elemente ntlnite la alte citokine. IL12 este o citokin heterodimeric de 70 kDa, produs de APC profesioniste (macrofage, celule dendritice, LB activate) i are o dubl aciune, proinflamatorie i imunoreglatoare. IL13, descoperit aproape concomitent cu IL12, are funcii de tip IL4 , dar mai puin pregnante. Este o protein de 10 kDa produs de LTCD4+ (Th0, Th1, Th2) i LTCD8+activate, care acioneaz la nivelul LB i monocitelor/macrofagelor. IL14, identificat n 1991, este produs de LT i stimuleaz LB activate ( dar nu i pe cele n repaus). n schimb, inhib sinteza de Ig n cazul n care LB este activat de mitogeni (ConA, PHA). IL15 a fost descris n 1994, independent, de dou grupe de cercettori ca analog funcional al IL2, capabil s stimuleze LT i NK. Sursa principal de IL15 n organism o constituie placenta, dar este exprimat consecutiv i n alte esuturi (pulmon, ficat, rinichi, cord, muchi striai) sau celule (monocite/macrofage, celule stromale medulare, epiteliale). Asemntor situaiei ntlnite la IL13, IL15 ar putea fi o form alternativ a IL2 necesar n limfopoiez i/sau modularea rspunsului imun, avnd n plus activitate de proliferare a mastocitelor. IL16, produs de LTCD8+, LTCD4+, mastocite, eozinofile, celule epiteliale din cile respiratorii, are aciune proinflamatorie i imunomodulatoare. Ea este chemoatractant pentru celulele LTCD4+ i eozinofile, recrutndu-le la locul inflamaiei. Stimuleaz exprimarea RIL2, IFN i a celulelor de adeziune la matricea extracelular a monocitelor i eozinofilelor. IL17 este o citokin identificat recent, care are activitate de stimulare a secreiei de citokine proinflamatoare, chemokine i prostaglandine de ctre fibroblati, celule epiteliale i endoteliale i a exprimrii moleculelor de adeziune de ctre aceste celule. Efectele ei
102

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE inflamatoare sunt similare cu cele ale TNF i LT. n plus are efecte hematopoietice, argumeteaz producerea de IL6, G-CSF i de neutrofile. IL18 sau factorul inductor al sintezei de IFN gamma (IGIF-IFN gamma- inducing factor, IL-1 gamma), descoperit de echipa lui Okamura n 1995 ca o consecin a capacitii acesteia de a induce producerea de IFN gamma la oarecii cu oc endotoxic, este o protein cu greutatea molecular de 18,3 kDa. IL18 este exprimat larg, dar nu universal, pe diferite tipuri tisulare, fiind detectat n pancreas, rinichi, muchi scheletic, ficat, pulmon, os (osteoblaste) i piele (keratinocite). A fost identificat i receptorul pentrul IL18 (IL18R) care este exprimat mai ales n splin, timus, leucocite, ficat, pulmon, cord, intestin, prostat i placent (dar nu i n creier), muchi scheletici, rinichi, pancreas. IL18 acioneaz asemntor IL12, ca un factor stimulator asupra LTh1 i are un efect de activare a celulelor NK. 8.1.7.2. Interferonii IFN gama, produs de LT, face parte dintr-o familie de substane cu activitate imunomodulatorie, antiviral i antitumoral. IFN gama acioneaz sinergic cu alte citokine n inducerea produciei de Atc. i sporete activitile de tip citotoxic ale Mcf, LT i celulelor NK asupra celulelor transformate.(Fig.25) 8.1.7.3. Factorii de necroz tumoral Limfotoxina (TNF beta), nrudit cu factorul precedent, este produs de LT activate i are efecte citolitice asupra celulelor int (tumorale, strine sau alterate de agresiunea antigenic). Factorul de necroz tumoral (TNF alimfocitea = tumor necrosis factor alimfocitea) sau caectina este produs de macrofage. Pe lng efectul de distrugere a celulelor tumorale in vitro, TNF alimfocitea coopereaz sinergic cu IL2 n activarea chimiotaxiei i a funciei de bactericidie a granulocitelor, activarea LT (care la rndul lor vor produce IL2 i IFN gama i ali factori stimulatori), reglarea produciei de anticorpi, eliberarea activ de proteine de faz acut din hepatocite.
103

Fig.25. Schematizarea efectelor IFN asupra mai multor categorii de celule.

8.1.7.4. Neuroleukinele sunt substane care permit examinarea noilor interaciuni ntre sistemul nervos i reeaua de citokine. Proteina murin matur, comportnd 588 acizi aminai este un factor de cretere pentru anumii neuroni. Ea este produsul glandelor salivare, muchiului striat, creierului, dar mai ales al LT stimulate prin lectine. Din punct de vedere imunologic, n mod cert, neuroleukina joac un rol mpreun cu IL4 i IL5 n activarea expansiunii clonale a LB. n mod curios, ea prezint o foarte mare homologie cu o enzim (fosfoexoz izomeraz) important n glicoliz. 8.1.7.5. Factorii de stimulare ai coloniilor celulare CSF (Factorul stimulator de colonii) Numeroase citokine sunt capabile, printre alte activiti s stimuleze creterea uneia sau mai multor linii hematopoietice. Acest lucru este evident n cazul IL3, dar i n cazul IL1, IL6, IL7. Ultimele 3 sunt considerate n acest caz drept CSF, avnd acelai titru ca i IL3, dar fr a fi disociat dect dintr-o raiune de nomenclatur. GM -CSF (factorul stimulator al coloniilor de granulocite i macrofage) se definete ca o citokin care stimuleaz proliferarea

104

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE liniilor precursoare pentru macrofage i granulocite. El activeaz n mod egal i polimorfonucleare mature. La om, reprezint un lan polipeptidic de 127 acizi aminai, cu care proteina murin prezint 50% homologie. Gena corespondent comport 3 introni i a fost localizat pe regiunea q23-q31 a braului lung al cromozomului 5 de la om. Este produs n principal, de macrofage, putnd fi n mod egal produs de ctre anumite linii de celule tumorale, de celule stromale ale mduvei osoase prin LT activate, fibroblaste i celulele endoteliale. G-CSF (factorul stimulator al coloniilor de granulocite) stimuleaz n mod particular linia precursoare de granulocite. Se prezint ca un lan de 177 aminoacizi, fr s prezinte homologii cu GM CSF sau IL3. Gena corespondent este localizat pe braul lung (q11,2-q21) al cromozomului 17 la om. M-CSF sau CSF-1 (factorul stimulator al coloniilor de macrofage) stimuleaz proliferarea liniei precursoare a monocitelor. Proteina matur conine 224 aminoacizi. Homologia cu proteina murin este probabil crescut (de ordinul 78% pe o parte a secvenei). Gena corespondent comport 10 exoni la om i este localizat la nivelul regiunii q33 ml al braului lung al cromozomului 5. M-CSF poate fi produs de fibroblaste, celule endoteliale sau macrofage. 8.1.7.6. Prostaglandinele sunt compui biologici activi, produi practic de ctre toate esuturile i celulele care au suferit un proces de stimulare la nivelul membranei plasmatice. Sunt sintetizate local n cantiti foarte mici i acioneaz scurt timp datorit metabolizrii lor rapide. Sunt printre cele mai rspndite i active substane din natur, prezena lor fiind semnalat de la vieuitoare inferioare pn la specii din lumea vegetal. Pe baza structurii i activitii lor biologice s-au descris mai multe clase de PG: PGA, C, D, E, F, H, I, iar n cadrul acestor clase exist molecule cu una sau dou duble legturi notate ca molecule de tip 1 sau 2. De exmplu, se vorbete de PGE1 i PGE2. O surs important de PG sunt acizii grai nesaturai, hidrolizabili i polioxigenai, care conin un inel de ciclopentan i au un
105

schelet de baz alctuit din acid prostanoic. Acesta, sub influena fosfolipazelor, se transform n acid arahidonic care este un precursor al tuturor moleculelor de prostaglandine. Sub influena lipooxigenazelor, are loc formarea de leucotriene, substanele cu implicaii majore n desfurarea proceselor inflamatorii. Iniial s-a considerat c PG au efect fiziologic predominant asupra muchilor netezi i n inducerea proceselor inflamatorii. Ulterior, s-a demonstrat clar c au multiple funcii biologice: intervin n fiziologia muchilor netezi, n transmiterea influxului nervos, n interaciuni hormonale i implicit n procesele imune. Prostaglandinele influeneaz comportarea celulei, inducnd schimbri n funciile membranei, creia i altereaz compoziia n lipide, proteine i glicoproteine, inducnd schimbri n fluiditatea i permeabilitatea membranei. 8.1.7.7. Factorii de transformare a creterii (TGF) formeaz o familie de citokine produse de LT activate de ctre antigene i de ctre celulele mononucleare activate bacterian. Cuprind dou tipuri de proteine notate cu i , formnd citokinele TGF- i TGF-. TGF- este implicat n creterea i diferenierea celulelor mezenchimale i epiteliale. TGF- este principalul factor de transformare a creterii avnd o aciune stimulatoare sau inhibitoare asupra celulelor int, n funcie de tipul celular i de interaciunea cu ali factori celulari. TGF- moduleaz creterea, diferenierea i activitatea LB, LTh, LTc, celulelor NK i LAK. TGF- inhib activarea celulelor NK precum i producia de citokine a LT, fiind considerat o citokin important cu rol imunosupresor al expansiunii celulare excesive n cadrul rspunsului imun. Descoperirea citokinelor are o mare importan fundamental, demonstrnd c n cadrul rspunsului imun se produce de fapt o comutare de la un mecanism dirijat n mod specific de Atg. la un sistem universal de reglare de tip hormonal.

106

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Deoarece citokinele acioneaz ca imunomodulatori, dirijarea activitii lor ar putea conastitui noi linii de terapie mai dezvoltate la boala neoplazic. adminstrarea de IL2 ar duce n anumite condiii la selectarea unor celule cu potenial citotoxic antitumoral (lymphokyne activated killer cellsm= LAK). n ciuda unor rezultate promitoare la bolnavi cu cancer avansat, metoda rmne limitat de efectele toxice ale IL2 (produce grave tulburri ale permeabilitii capilare cu anazarc); diveri IFN preparai prin inginerie genetic sunt utilizai cu succes n mai multe afeciuni neoplazice: leucemia cu celule proase, limfoame cutanate, leucemia granulocitar cronic, sarcomul Kaposi secundar sindromului SIDA; n hepatita cronic activ tratamentul cu IFN, grbete eliminarea virusurilor HBs i HBc; n asociere cu acyclovir IFN constituie tratamentul de selecie al keratitei herpetice; unele boli autoimune ar fi corelate cu o activare dezorganizat a LT. Recent s-a descoperit o substan extras dintr-o ciuperc (Cyclosporina A) care este capabil s inhibe selectiv LT fr efecte secundare asupra hematopoiezei. Pe aceste baze s-a conceput administrarea Cy-A n aplazia medular idiopatic. Cy-A mai are un domeniu de aplicare major: la receptorii de grefe de organ pentru stpnirea fenomenelor de respingere.

8.2. EFECTORI CELULARI AI IMUNITII


Celulele limfocitare sunt responsabile de specificitatea reaciilor imunologice. n snul populaiei limfocitare se disting dou subpopulaii cu funcii distincte: LT care asigur imunitatea celular i LB care asigur imunitatea umoral. n favoarea limfocitului ca celul omniprezent n procesul de imunitate specific, pledeaz o serie de argumente de ordin filogenetic, ontogenetic, clinic i experimental.

107

Argumente de ordin filogenetic. Procesele de aprare specific, nu apar dect la speciile de animale la care apar celule, care morfologic pot fi identificate ca limfocite (ncepnd cu ciclostomii). Argumente de ordin ontogenetic. n cursul dezvoltrii embrionare, fetusul la vertebrate nu ctig imunitate specific, dect n momentul cnd apar primele celule limfocitare. La cine de exemplu, rspunsul imun apare n a 40 zi de via fetal, cnd limfocitele apar n timus i n alte organe limfoide (mduva osoas i ganglionii limfatici). Argumente de ordin clinic. S-a constatat c n sindromul de deficit imunitar secundar la om (Sindroamele Glazmann-Riniker i Good), nu pot fi decelate, la individul bolnav, celulele cu aspect limfocitar. Sindromul de deficit imunitar, se traduce prin lipsa oricrui rspuns imunitar, dup o stimulare antigenic. Argumente de ordin experimental. oarecii expui n mod experimental unei iradieri (Rx) cu doze subletale, fac o aplazie limfocitar, consecutiv iradierii. Aceast aplazie este nsoit de lipsa oricrui rspuns imunitar faa de o incitaie antigenic. 8.2.1 Ontogeneza limfocitelor Diferenierea LB i LT are loc n OLC i parcurge mai multe etape care se caracterizeaz prin apariia succesiv a unor molecule funcionale n citoplasm sau sprafaa celular. Celulele maturate prsesc OLC i se distribuie n zonele B, respectiv T-dependente din OLP (homing), graie unor receptori specifici de suprafa. Fenomenul de homing caracterizeaz limfocitele pe toat durata vieii lor: un LB, de exemplu, care prsete un ganglion i circul n organism se va aeza n alt teritoriu limfoid, dar tot ntr-o zon B-dependent. Celulele mature imunocompetente, care au prsit OLC i nu au ntlnit nc Atg. specific sunt denumite virgine. Dup ntlnirea cu Atg. aceste celule sufer o serie de transformri morfologice i structurale care se finalizeaz cu o mitoz. Celulele transformate au o talie foarte mare i citoplasma intens bazofil. Ele au fost denumite celule blastice (deoarece au o nfiare asemntoare cu elementele medulare tinere -blastice- din care se formeaz celulele sanguine) sau imunoblati. Prin mitoz, imunoblatii genereaz 2 celule-fiice diferite: una va parcurge pn la completare programul de maturaie al liniei celulare
108

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE respective i va deveni celul efectoare a rspunsului imun (RI), cealalat va rmne identic cu celula-mam persistnd ca celul de memorie. Compartimentul celulelor de memorie au o importan funcional deoarece asigur meninerea clonelor specifice pentru Atg. Fenomenul transformrii blastice poate fi reprodus in vitro dac limfocitele cultivate sunt incubate cu Atg. sau cu lectine vegetale (denumite i substane mitogene). Fitohemaglutinina i Concanvalina A stimuleaz transformarea blastic a LT. Pokeweed mitogen produce transformarea i a LT i a LB. Testul de transformare blastic este curent utilizat n clinic pentru testarea funciei limfocitelor. Mduva osoas este sediul CSL care provin din diferenierea CS multipotente. CSL sunt bipotente: genereaz LB i LT. La mamifere i la om joac un rol de organ burso-echivalent de difereniere i de maturare a LB. (Fig. 26)

Schema general a distribuiei celulelor limfoide Compartimentul de difereniere i de maturare Mduva osoas (M.O.) Timus LimfociteT Celule stem limfoide (CSL) M.O. LimfociteB Organe limfoide centrale (OLC) (primare) Organe limfoide periferice (OLP) (secundare) Compartimentul funcional Ganglioni limfatici Splina Structurile limfoide asociate tractului digestiv i respirator, inelul limfatic Waldeyer, plcile Peyer, apendicele, ptura submucoas. Altele: stratul dermic, etc.

109

apariia precoce n cursul dezvoltrii embrionare; centrele limfopoiezei: iniial difereniere CSL* n celulele B i T imature: n continuare maturarea LimfociteB i T i migrarea celulelor devenite imunologic competente n OLP; procesele de diferenierematurare sunt independente de Atg.; extirparea sau iradierea lor precoce, atrag dup sine lipsa formrii Limfocite mature i imunodeficiene grave. Repopularea lor poate fi realizat numai cu celule stem
*

se formeaz n urma OLC; sediile unde se distribuie LimfociteB i T imunologic competente formate n OLC; LimfociteB i T se repartizeaz preferenial n zone microanatomice, distincte Bdependente (foliculii limfoizi) i T-dependente (zonele paracorticale din ganglioni i tecile periarteriale din splin); trafic permanent de Limfocite ntre diversele OLP; dup iradiere corporal total pot fi repopulate cu Limfocite mature; sedii ale rspunsului imun;

CSL - celule stem limfoide

110

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE

Fig26. Ontogeneza limfocitelor B i T

8.2.2. Ontogeneza limfocitelor B a) etapa medular (independent de Atg). Evenimentul iniial care anun angajarea CSL n diferenierea ctre linia B este rearanjarea genelor pentru lanurile H de Ig, care se materializeaz prin apariia de lanuri miu intracitoplasmatice (c). Rearanjrile ncep pe ambii cromozomi 14, dar se finalizeaz numai pe unul singur mpiedicnd astfel producerea de lanuri cu specificiti diferite n aceeai celul. Ulterior se rearanjeaz i genele pentru lanurile L (K) i astfel se asambleaz n citoplasm molecule complete de IgM (cIgM). Celulele c+ i cIgM+ au fost denumite pre-B. ntr-o etap ulterioar, IgM devine exprimat pe suprafa (sIgM) (celulele B imature). sIgM poate funciona ca receptor pentru Atg. i se presupune c celulele B imature pot reaciona cu Atg. proprii dac moleculele de Ig exprimate pe suprafa sunt corespunztoare. Aceast interaciune nu ar reproduce modelul celulelor mature (transformarea blastic, mitoz, etc.), ci ar fi urmat de desprinderea IgM de pe suparafa. Deoarece LB imature nu pot reface aceste sIg, ele vor rmne n continuare inactive. Acest fenomen de selecie negativ ar preveni
111

dezvoltarea unor clone autoreactive i ar putea sta la baza tolerrii selfului. Celulele care nu au fost fcute nereactive continu s se maturizeze. n cursul maturrii sunt achiziionate pe suprafa i ali markeri: Atg. CMH de clasa I i II (DR), CR1, CR2,, RFc. LB virgine care prsesc MO exprim pe suprafa 2 molecule de sIg: IgM + IgD. Unele celule B sufer n procesul de maturare o comutare a sintezei IgM n alt clas de Ig. n acest caz, grupul de gene VDJ care fuseser asamblate anterior cu o gen CH miu, ajunge s se cupleze cu alte gene CH (Cgama sau Calimfocitea, de exemplu). Noua Ig produs de celul are deci acelai idiotip cu IgM original. Procesul de comutare explic variatiile sintezei Atc. n rspunsul imun: n rspunsul primar domin secreiile de IgM; n rspusurile secundare, Atc. dominani aparin altor clase cu aceeai specificitate (IgG sau IgA n exemplele citate). b) etapa dependent de Atg. Dup ntlnirea cu Atg. specific, LB mature sufer procesul de transformare blastic n urma cruia vor genera celule de memorie i plasmocite efectoare.

Plasmocitul reprezint stadiul terminal al ontogenezei LfB(Fig.27). n acest proces LfB pierd sIg i vor exprima n schimb ali markeri de suprafa ("plasma cell antigens"): PCA1 i PCA2. Celulele de memorie sunt celule de repaos, ns se activeaz rapid dup orice rentlnire cu Atg. specific relund ciclul de mai sus (Fig.28 i 29).

Fig.27. Veriga final a imunitii umorale: sinteza anticorpilor de ctre plasmocite

112

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE

Fig. 28 Etapa dependenei de Atg.

Fig. 29 Exprimarea markerilor n cursul diferenierii limfocitelor B

8.2.3. Ontogeneza limfocitelor T a) n etapa timic celulele stem migrate din mduva osoas (protimocitele) se dispun n zona cortical unde vin n contact cu celulele epiteliale ale stromei i cu celulele fagocitice (dendritice) localizate n timus. Toate aceste celule secret factori stimulatori (hormoni timici - timo-poietina, timulina, timozina, factorul timic seric113

care sunt secretai de celulele epiteliale i IL1 care este produs de celulele dendritice) i exprim antigenele condificate de CMH. Sub influena acestor molecule protimocitele se vor diferenia ireversibil n LT. Procesul diferenierii implic dou serii de evenimente care se ntreptrund: maturaia i diversificarea n subseturi (subpopulaii) funcionale; dobndirea toleranei fa de self (educaia LT). Ca i n cazul LB, maturaia LT conduce n final la exprimarea pe suprafa a receptorului specific pentru Atg. (Ti) i a altor molecule funcionale care asigur imunocompetena. Pe msur ce se matureaz,limfocitele intratimice (timocitele) migreaz din corticala timic n medular. De-a lungul acestui parcurs ele vor trece prin trei stadii de difereniere (Fig.30)

Fig. 30 Exprimarea markerilor n cursul diferenierii limfocitelor T

Stadiul I de protimocit cortical este iniiat de exprimarea pe suprafa, a receptorului pentru eritrocitele de oaie (CD2 sau T11)i de sinteza de molecule CD3 care rmn localizate intracitoplasmatic. ncepe rearanjarea genelor pentru lanurile beta i ceva mai trziu aceea a lanurilor alimfocitea ale receprorului pentru Atg. (Ti). Aceste lanuri vor rmne n acest stadiu cantonate n citoplasm.
114

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Stadiul II de timocit comun: pe suprafaa celular apar nc trei Atg.: CD1 sau T6, un Atg. efemer care se exprim numai n acest stadiu, CD4 i CD8 (care apar ca coexprimate pe aceeai celul). Stadiul III de timocit matur. Timocitele migreaz n medular i segreg n dou grupe: celulele CD4+ i celulele CD8+. Paralel cu aceast selecie apar pe suprafa trei molecule noi: Ti, CD3 i CD8. Din acest moment timocitele au ajuns s completeze exprimarea pe suprafa, a tuturor moleculelor implicate n recunoatere i activare: receptorul pentru Atg. (Ti) care se asociaz fizic cu CD3 (i formeaz complexul de recunoatere Ti-T3), moleculele CD4 i CD8 (exprimate fiecare pe cte un subset specific de LT) i moleculele CD2 (care se menin pe suprafaa LT). Devenite deci, imunocompetente cele dou subseturi de LT (CD4 i CD8) prsesc timusul i se distribuie n zonele T-dependente al OLP. Etapa timic de la celulele stem pn la eliberarea LT mature dureaz circa 3 zile. Activarea LT, mediat de moleculele de suprafa semnalate mai sus, implic dou mecanisme: activarea specific de Atg i cuplat respectiv cu recunoaterea moleculelor codificate de CMH. LT pot recunoate Atg. numai dac acesta este expus pe o suprafa celular i asociat n mod obligatoriu cu moleculele CMH. Pentru acest model de recunoatere, LT opereaz cu dou grupe de molecule de suprafa: complexul Ti-T3 i moleculele de legare CD4 i CD8. Interaciunea LT cu celulele care expun Atg. ar ncepe prin formarea unor legturi ntre moleculele CD4 i CD8 cu moleculele CMH expuse pe celula partener (perechile de molecule partenere sunt CD4 - CMH clasa a II-a i CD8 - CMH clasa I; memotehnic 4x2=8 i 8x1=8. Ulterior receptorul Ti recunoate Atg., iar semnalul de recunoatere este amplificat i transmis n interiorul LT prin intermediul lui CD3. n acest sistem, CD4 i CD8joac un rol asociativ n recunoaterea Atg. care este ndeplinit specific de ctre Ti. activarea independent de Atg. i de moleculele CMH este mediat de CD2. Aceast molecul a fost semnalat ca o protein care mediaz formarea rozetelor de eritrocite de oaie dar efectul de activare a
115

LT i formarea rozetelor sunt independente, deoarece sunt mijlocite de epitopi diferii. Activarea prin CD2 este independent de complexul macromolecular Ti-T3 i ar funciona ca o cale alternativ de recrutare nelegat de Atg. i care ar avea rol de augmentare (amplificare) nespecific a reaciei imune moleculare. Activarea prin CD2 este controlat de receptorul Ti: dup ce o celul a fost stimulat prin intermediul acestuia, activarea nespecific prin CD2 este blocat. Activarea prin CD2 poate fi indus in vitro cu AcMo speciali, dar triggerii, care acioneaz in vivo, nu au fost nc identificai. Deoarece moleculele CD2 apar nc n stadiul I al diferenierii intratimice, calea alternativ de activare poate aciona n etapele dinaintea exprimrii complexului Ti-T3 i ar servi la colectarea i eliminarea clonelor LT autoreactive. Comportamentul LT vis-a-vis de Atg. i de proteinele codificate n CMH prezint urmtoarele particulariti: recunosc i rspund dac li se prezint: 1. un Atg. strin asociat cu proteinele codificate de CMH-ul propriu (proteinele CMH); 2. proteinele CMH non-self, n absena antigenului, ca de exemplu n situaia allogrefelor (respingerea grefelor s-ar datora faptului c proteinele CMH caracteristice esutului transplantat se comport i apar la nivelul molecular ca un Atg. strin); nu reacioneaz impotriva: 1. proteinelor selfului codificate n CMH, n absena Atg. (tolereaz) selful; 2. Atg. strine prezentate mpreun cu proteinele CMH non-self. Rolul timusului n ontogeneza LT ar avea deci o dubl valen: organ de difereniere i maturare; organ de educare a LT pentru recunoaterea selfului. Deoarece n cursul maturizrii intratimice, majoritatea celulelor limfoide prolifereaz intens i sunt lizate n numr foarte mare, s-a propus c procesul de educare ar consta n eliminarea selectiv a celulelor care reacioneaz mpotriva selfului (antigenele codificate n CMH, asociate eventual cu alte Atg. proprii). Aceast reacie care ar determina proliferarea intens a clonelor autoreactive ar duce n final la epuizarea (erodarea) lor. n acest proces, celulele destinate s
116

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE recunoasc Atg. strine nu sunt eliminate n aceast faz deoarece nu au aproape deloc anse s ntlneasc aceste antigene. Ele i perfecioneaz maturarea, trec n sistemul limfoid periferic, unde vor stabili contactele cu Atg. strine. Rolul major al educrii l-ar juca celulele stromei timice care exprim Atg. CMH proprii i cu care timocitele n curs de maturare stabilesc contacte intercelulare strnse. n esen mecanismele discriminrii selfului nu sunt descifrate. Se presupune c LT posed nativ un repertoriu de posibiliti de a produce molecule de receptori pentru Atg. strine i pentru o gam larg de Atg.CMH (i proprii i strine). Epiteliul timic ar seleciona numai acele celule limfoide care posed receptori pentru moleculele CMH autohtone exprimate pe suprafaa celulelor epiteliale. Dei, este logic, modelul presupus nu explic paradoxul comportrii LimfociteT mature: cu toate c sunt tolerante faa de moleculele CMH-self posed un aparat de recepie prin care se recunoasc Atg. strine numai dac sunt asociate cu Atg. CMH proprii. b) Etapa posttimic (dependent de Atg.) Subpopulaiile T mature au fost grupate n dou mari categorii cu funcii distincte: celule cu funcii efectoare LTc = LT citotoxice, implicate n distrugerea celulelor infectate cu virus a celulelor tumorale i n respingerea grefelor. celule cu funcii de reglare LTh = LT helper sau auxiliare, au rol esenial n stimularea apariiei plasmocitelor i activarea celulelor Tc i Ts. LTs =LT supresoare, moduleaz rspunsul imun umoral i celular n sens limitativ. LTh sunt T4+ (exprim markerul CD4+). Populaia CD4+ cuprinde, ns, pe lng LTh i LT inductoare. Acestea favorizeaz selecia celulelor corespunztoare Atg. i induc maturarea LTc i Ts. La fel, populaia CD8+ include att LTc ct i LTs. O subpopulaie aparte ar fi aceea a LTHD implicate n reaciile de hipersensibilitate ntrziat.
117

n plus LTs sunt expuse i ele unui sistem de reglare negativ exercitat de un subset auxiliar de limfocite contrasupresoare (LTcs) care au capacitatea de a elibera LB de sub influena negativ a LTs. LT n repaos exprim pe suprafa, moleculele implicate n cele dou ci de activare: CD2 i complexul Ti-T3. Numrul moleculelor Ti-T3 este maxim. n schimb, RIL2 este absent sau slab exprimat. Dup recepia semnalului eliberat de Atg. are loc urmtoarea secven de evenimente celulare: internalizarea (modularea) complexului Ti-T3; exprimarea rapid a RIL2 pe suprafa celular; secreia IL2; diviziunea celular. n inducerea fenomenelor iniiale este necesar intervenia IL1 eliberat de Mcf. Reamintim calea alternativ de activare prin CD2 care este independent de IL1. Rolul acestuia rmne de precizat. Dup ncetarea stimulrii prin Atg., receptorii Ti-T3 revin pe suprafa paralel cu dispariia RIL2. 8.2.4. Metode de identificare a celulelor limfoide Principalele seturi de elemente limfoide sunt reprezentate de: LB: Secreia de Atc., dup transformarea n plasmocite (efectorii de RI umoral); TT cu mai multe subpopulaii: Tc - citotoxice (elemente efectoare ale RI celular) Th - auxiliare (helper) Ts - supresoare elemente ale reglrii RI LGL (large granular lymphocytes) - asigur funcia NK (natural killer): citotoxicitate direct K (Killer) - celule mononucleate asemntoare cu limfocitele care ndeplinesc funcia de citotoxicitate mediat cu Atc. (ADCC = antibody dependent cellular cytotoxicity).

118

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE a) Identificarea prin anticorpii monoclonali (AcMo) n prezent, s-a elaborat un numr extrem de mare de AcMo care servesc la identificarea multor tipuri de Atg. Pentru evitarea confuziilor generate de diferenele de terminologie dintre acei AcMo produi de firme diferite dar care recunosc epitopi comuni, s-a introdus nomenclatura CD (Cluster Designation) pentru definirea markerilor. Markerii au semnificaii diferite: Unii sunt exprimai pe toate celulele unei serii celulare i n toate treptele de maturaie ale acestor celule (panantigene), servind pentru diagnosticul acelei serii (ex. CD2 exprimat de LT; CD24 apare pe LB). Alte Atg. sunt exprimate numai ntr-o anumit treapt a maturaiei celulelor unei serii, permind identificarea etapei de maturaie sau a vrstei celulare (ex. CD1 este exprimat pe LT imature din timus, iar CD3 pe LT adulte). Exist i markeri care definesc subseturi funcionale ale unei populaii. CD4 este markerul LT helper, iar CD8 este markerul LTc. Muli markeri au putut fi asociai cu o stare funcional a celulei (ex. CD25 reprezint RIL2 care apare dup activarea LTh). Exist i markeri comuni pentru celulele ce aparin unei serii celulare diferite: CD35 este exprimat pe LB i LT, dar i pe monocite, neutrofile, eozinofile sau eritrocite i joac rol de receptor (R) pentru componenta C3 a complementului. Exemplele citate arat c pentru unii dintre markeri s-a descifrat rolul funcional. Ei pot fi receptori pentru semnalele diferite din mediu. CD3 este strns asociat cu R pentru Atg al LT (RACT) mpreun cu care particip la recunoaterea Atg. CD4 i CD8 particip la procesul de recunoatere a Atg. ca molecule de legtur. Celulele prezentatoare de Atg.exprim pe suprafaa Atg cuplat cu molecule ale complexului major de histocompatibilitate. LT exprim pe suprafaa lor receptorul pentru Atg. (denumit convenional Ti) mpreun cu moleculele CD3 cu care formeaz un complex funcional de recunoatere (Ti-T3). (Fig.31) Pe suprafaa LTh complexele Ti-T3 sunt exprimate alturi de moleculele CD4, n timp ce LTs exprim complexul Ti-T3 alturi de CD8.

119

Fig.31 Ti-T3 (Ti-CD3): unitatea funcional de recunoatere a Atg. de ctre limfocitele T. Ti este receptorul pentru Atg. Semnalul receptat este preluat de CD3 i prin intermediu unor relee proteoenzimatice membranare (proteina G, fosfolipaza C) provoac generarea mesagerilor secundari (inositol trifosfatul i diacil glicerolul). I3P i DC induc cre[terea Ca+ intracelular. Anumite proteine specifice transportatoare de Ca+ de exemplu Calmodulina) mediaz n continuare activarea unor gene nucleare care comand activarea celulei ( exprimarea R.IL 2, secre]ia IL2, proliferare)

Recunoaterea Atg. este condiionat de legturile care se creaz ntre aceste 4 molecule partenere. CD4 se asociaz cu molecule CMH de clasa a II-a, iar CD8 cu moleculele CMH de clasa I-a. Aceste asocieri apropie celulele, crend condiiile analizrii Atg. de ctre Ti. Dac semnalul antigenic este acceptat, el va fi transmis cu ajutorul CD3 n celula limfoid, provocnd activarea acesteia. Dac semnalul Atg. nu este recunoscut de Ti, cele dou celule se desprind urmnd s-i caute alte partenere (Fig.32).

Fig.32 Interaciuni moleculare care se stabilesc ntre Mcf i LimfociteT

cu ocazia prezentrii Atg.

120

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Receptorii sunt determinai genetic. mpreun cu ceilali markeri (a cror semnificaie funcional nu o cunotem) alctuiesc fenotipul specific pe baza cruia pot fi identificate celulele limfoide.
b) Identificarea LfT i B prin metoda de rozetare Eritrocitele de oaie incubate mpreun cu LfT se ataeaz formnd un complex celular n care LfT apare nconjurat de Er. (rozet). Ataarea este mediat de dou molecule: CD2 (Th) de pe suprafa]a LfT (care prezint unele similitudini structurale cu sIg) i LFA 3 de pe memebrana eritrocitelor de oaie. LFA 3 (Lymphocyte Function Associated Antigen) este o glicoprotein din familia mare a proteinelor de adeziune i deci difer de Atg. eritrocitare "de grup sanguin". Aceste rozete au fost denumite "directe" sau "E" (Fig.33.)

Fig. 33 Formarea rozetelor cu Er. de oaie

LB exprim pe suprafa R pentru fragmentul Fc al IgG i R pentru C3b. Ele ataeaz pe aceti receptori eritrocite nvelite cu IgG (rozete EAerytrocyt-antibody) i respectiv, eritrocite nvelite n molecule de complement care au fost fixate prin intermediul unor Atc. IgM, care servesc ca piese de legtur (rozete EAC - erytrocyte-antibodycomplement). (Fig.34). Prin urmare, dintr-o cohort de celule limfoide neidentificate, cele care vor fi EA+ i EAC+ aparin populaiei B.

Fig. 34 Rozete EA i EAC


121

Fig. 35 Principiul formrii rozetelor EAC, utilizate pentru studiul receptorilor pentru C

n sngele periferic circul 1500 -3000 limfocite/mmc. Dintre acestea, aproximativ 15-20% sunt LB (EACH), iar aproximativ 80% sunt LT (E+), cca 60% sunt LTh i aproximativ 30% LTs. Raportul normal Th/Ts este aproximativ 2. Circa 1-2% dintre limfocitele circulante sunt Ei EAC- (non-B non-T). Printre aceste celule nule unele demonstreaz activitate NK i K. Fenotipul LimfociteB mature - sIg (Ig de suprafaa) = R pentru Atg: servete la recunoaterea Atg - RFc = R pentru segmentul Fc al IgG - CMH.DR = Atg de histocompatibilitate de clasa a II-a - CD35 (CR1) = R.C3b - CD21 (CR2) = R.C3b - M (mouse) = R pentru eritrocite de oarece: exprimat pe LB incomplet mature - CD19 = pan B. - CD20 = pan B. Fenotipul LimfociteT mature - YT35 (Ti) = R pentru Atg al LimfociteT - CD3 (T3) = indic maturarea, este asociat funcional cu Ti - CD2 (T11) = R pentru eritrocite de oaie - CD25 (Tac) = R pentru interleukina 2 (IL2) - CD4 (T4) = este exprimat numai pe LT helper i inductoare (Th/i) - CD8 (T8) = este exprimat numai pe LT citotoxice i supresoare (Tc/s) - CMH.DR = este exprimat numai de LimfociteT activate

122

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE c) Identificarea LB i LT dup receptorii pentru Atg. Receptorul pentru Atg. al LB este sIg, exprimat pe LB mature i care poate fi identificat prin tehnici de imunofluorescen. Se prepar un ser anti-Ig uman prin imunizarea specific a unui animal. Atc. anti-Ig uman din acest antiser se concentreaz, se purific i apoi se cupleaz cu fluorescein. Dup incubarea cu LB, anticorpii marcai se ataeaz pe sIg. Preparatele se examineaz la un microscop cu surs de UV. Pe fondul ntunecat al cmpului microscopic LB apar nconjurate de un nimb strlucitor de culoare verzuie. Cu metode similare de marcare a unor AcMo s-a putut observa c LB imature (celulele pre-B) nu exprim receptorii imunoglobulinici pe suprafa, dar prezint n schimb Ig intracitoplasmatic (cIg). Prin urmare, decelarea cIg i sIg permite aprecierea maturrii celulei (a vrstei) i apartenea la populaia B. Pe suprafaa a peste 95% dintre LT exist un receptor specific pentru Atg. (RACT sau Ti) format din 2 lanuri alimfocitea i beta de mrime inegal. Structura primar a acestor lanuri amintesc de aceea a lanurilor H i L din care sunt formate moleculele de Ig: toate conin o poriune variabil (V) unde este plasat situsul de combinare cu Atg. i o poriune constant (C). Celelalte 5% dintre LT exprim un receptor diferit, format prin combinarea unor lanuri gama i delta. Ca i sIg, RACT reacioneaz specific cu Atg. Specificitatea este asigurat de diferenele extrem de mari ale secvenei de aminoacizi din poriunea variabil a moleculelor receptorilor. O celul matur exprim pe suprafa receptori cu o singur specificitate. O astfel de celul este membr a unei clone (o familie de celule identice care provin dintr-un precursor comun). Prin urmare, organismul conine o multitudine de clone dotate fiecare cu specificitate reactiv pentru un Atg. dat. Se admite ideea c ar trebui s existe tot attea clone cte antigene. Aceasta ar nsemna construirea unui numr imens de modele moleculare de receptori pentru Atg. Variabilitatea structural a receptorilor este comandat genetic.

123

8.2.5. Macrofagele (Mcf) Mai multe metode experimentale au demonstrat existena unei cooperri ntre Mcf i limfocite n rspunsul imun. ntr-unul dintre acestea s-a lucrat cu o suspensie pur de limfocite (din care s-au nlturat Mcf) preparat de la un oarece imunizat n prealabil cu un Atg. (n acest experiment s-a folosit complexul gamaglobulin + dinitrofenol) ( gamaglobulina DNP).

Fig 36. Macrofagul microscopie electronic n baleiaj

a) incubarea limfocitelor sensibilizate cu gamaglobulin-DNP nu este urmat de secreie de Atc. b) amestecul limfocite + gamaglobulin-DNP + Mcf. provenite de la oarecii singenici neimunizai n prealabil cu gamaglobulin-DNP, produce un rspuns anticorpic moderat. c) limfocite + gamaglobulin-DNP + Mcf. preincubate cu gamaglobulin produce un rspuns energic. d) Mcf. care au fagocitat Atg. l pot transfera la un animal nesensibilizat. Mcf. sunt necesare pentru declanarea rspunsului imun. Mcf fagociteaz Atg., dar l degradeaz doar parial meninnd intaci determinanii (epitopii) pe care-i va expune pe suprafa oferindu-i pentru recunoatere, limfocitelor (fenomenul prezentrii Atg).( Fig.37) Captarea Atg. de ctre Mcf. ar fi deci prima treapt necesar pentru declanarea rspunsului imun. Dup administrarea unui Atg. n
124

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE circulaie, se observ dispariia lui treptat (fenomen denumit clearance prin care Atg. este captat de Mcf., care-l transport n organele limfoide). Fenomenul de clearance a fost demonstrat prin administrarea de flagelin de Salmonella adelaide marcat cu I125. Autoradiografierea organelor limfoide a evideniat Atg. legat selectiv de macrofagele migrate n aceste organe. Mcf. provin din precursori care se difereniaz i se matureaz n MO. Celulele maturate n MO sunt monocite. Acestea sunt eliberate n circulaie de unde migreaz n diverse esuturi unde-i vor ndeplini funciile. Mcf. sunt monocite stabilite n diverse esuturi, unde ndeplinesc dou activiti: fagocitoz i secreie de substane funcionale solubile. n rspunsul imun sunt implicate mai multe asemenea celule ale sistemului macrofagic: Mcf. tisulare, celulele Kupffer (n ficat), celulele Langerhans (n piele), celulele dendritice (n foliculii limfoizi), celulele interdigitate (n zonele paracorticale, T-dependente din ganglionii limfatici). Unele sunt specializate numai n funcie de prezentare a Atg.: celulele Langerhans, celulele dendritice i interdigitate. Altele intervin numai ca elemente fagocitante: celulele Kupffer care sechestreaz i fagociteaz eritrocite nvelite cu anticorpi i molecule de complement. n fine, Mcf. tisulare ndeplinesc ambele activiti: de prezentare a Atg. i de eliminare prin fagocitoz a resturilor conflictului imun. Mcf. activate secret substane solubile denumite generic monokine, dintre care cea mai important este IL1 capabil s produc activarea nespecific a altor celule aflate n proximitatea zonei n care a ptruns Atg.: Mcf.,LT i LB. Se produce o activare n lan care mrete eficiena rspunsului local. n plus, IL1 are i efecte generale: febr, anorexie, somnolen.

125

Fig.37. Prezentarea schematic a funciilor macrofagelor

n afar de IL1 Mcf activate secret i alte substane capabile s moduleze secreia imun: o variant de interferon, constitueni ai sistemului complement (C1, C3, C4, factorul B), prostaglandinele, TNF alimfocitea (induce febr, stimuleaz secreia unor limfokine, activeaz Mcf. i posed capacitatea de liz a unor celule tumorale). Mcf. posed pe suprafaa receptori pentru C' i pentru segmentul Fc al moleculelor de Atc. Cu ajutorul acestor receptori capteaz Atg. pe care s-au ataat C' i/sau Atc (imunoaderen). Graie imunoaderenei Mcf. elimin Atg. din organism. Mcf. intervin n dou momente ale reaciei imune prin valorificarea funciilor lor principale: fagocitoza i secreia de substane
126

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE active. Cu ajutorul fagocitozei, Mcf. intervin att la polul aferent (inductor) al rspunsului imun (ca celule prezentatoare de Atg.), ct i ulterior, la polul eferent (efector) al rspunsului cnd elimin Atg. din organism. Exist o relaie dubl ntre Mcf. i limfocite: prin oferta de Atg. i prin secreia de interleukine (care creaz n plus efecte reciproce de activare). Astfel, ca rspuns la IL1, LTh secret o substan stimulatoare (IL2) care produce activarea Mcf, a LB i a diverselor subpopulaii de LT (Th, Ts, Tc). Modul general de reacie al limfocitelor, ca rspuns la o activare, este secreia unor substane care mediaz rolul acestor celule n aprare. LB secret Atc. care se ataeaz pe Atg., permind macrofagelor s elimine aceste Atg. prin intermediul fenomenelor de imunoaderen. LT secret alte tipuri de molecule (limfokinele). LTc care vin n contact cu celulele strine sau infectate secret moleculele toxice cu ajutorul crora ucid celulele-int (limfotoxina, o substan nrudit din punct de vedere structural cu TNF alimfocitea produs de Mcf.). LTh i ndeplinesc multiplele lor funcii de reglare prin intermediul interleukinelor. Acestea joac rolul unor adevrai hormoni ai mecanismelor imunitare. 8.2.6. Celulele K intele celulare cele mai variate, nvelite prin concentraii sczute de IgG, devin sensibile la efectul citotoxic al anumitor celule mononucleate, celulele K (de la engl. killer). Aceasta este citotoxicitatea celular dependent de anticorpi (ADCC - antibody dependent cellmediated cytotoxicity).(Fig.38) Nu exist o categorie unic, ci numeroase tipuri de celule sunt capabile de a exercita o activitate ADCC. Ca o caracteristic comun aceste celule posed pe suprafaa lor receptori de nalt afinitate pentru fragmentul Fc (FcR) al IgG, dup legarea de acetia devenind capabile s exercite o activitate citotoxic. Celulele cele mai bine cunoscute pentru activitatea lor ADCC sunt polinuclearele, macrofagele, plachetele sangvine, celulele ficatului fetal i, mai ales, celulele mononucleare, prezente n organele limfoide lipsite
127

de markeri i proprieti ale LB i LT crora de obicei li se rezerv termenul de celule K. Natura i mecanismele de aciune al acestor celule K nu sunt fundamental diferite de cele ale altor celule capabile de ADCC.

Fig. 38 Schematizarea fenomenului de citotoxicitate celular dependent de Atc

Definiia celulelor K este n mod esenial negativ. Celulele K nu prezint Ig de membran i sunt lipsite de markeri ai LT (n particular receptorii de rozetare E i antigenele de difereniere recunoscute prin anticorpii monoclonali). Acest fenotip de celule nule le apropie de efectorii NK. n ultim instan nu exist markeri specifici care s permit distingerea de o manier viabil a celulelor K i NK. Experienele funcionale de competiie au demonstrat c anumite celule nule prezint simultan o activitate K i NK, n timp ce altele sunt fie K, fie NK. 8.2.7. Celulele NK Anumite celule mononucleate prezint o activitate citolitic aparent nespecific unui antigen, dirijat contra anumitor celule-int, n general reprezentate de linii de celule tumorale, independent de o sensibilizare prealabil i de restricia CMH. Celulele n chestiune sunt denumite ucigae naturale prin analogie cu anticorpii naturali produi fr imunizare intenionat (NK pentru natural killer). Linia celular la care aparin celulele NK rmne nc obiect de dezbatere. Celulele NK pot fi reprezentate de o nou familie de celule
128

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE limfoide, derivate din mduva osoas, fie de un stadiu particular de difereniere celular proprie uneia sau mai multor linii hematopoietice. Ele se regsesc n organele limfoide (cu excepia timusului) i n snge. Att la oarece ct i la om, celulele exprim antigenele de difereniere proprii celulelor limfoide. Mai multe argumente sugereaz legtura cu linia celular T: prezena anumitor markeri ai LT (antigene Thy -1, de densitate mic la oarece, fixarea anumitor anticorpi monoclonali anti-T i formarea de rozete E la om: sensibilitatea la IL2). Prezena unui nivel crescut de activitate NK la oarece ca i modularea prin hormonii timici, sugereaz c celulele NK par s reprezinte LT ntr-o faz imatur a diferenierii lor n timus. Celulele NK se disting de monocite prin absena fixrii anticorpilor Mo 2 i LeuM1, de LB prin absena imunoglobulinelor de suprafa i a receptorilor pentru complement i de LT mature prin absena anumitor antigene (Lyt 2 la oarece, CD3, CD4 i CD6 la om). Ele se apropie totui de LT prin prezena pe o proporie important dintre ele, a antigenelor Lyt1 i Thy-1 la oarece, CD8, CD11, Leu5 i CD10 la om i de celulele fagocitare prin reactivitatea lor cu anticorpii OKM1 ca i cu anticorpii dirijai contra receptorilor Fc. Anumite limfocite mari granulate de 16-20 m i care asigur n mod esenial activitatea NK au fost observate n sngele circulant la om. Aceste celule purttoare de granule citoplasmatice azurofile, care reprezint lizozomi sau filamente de ectin posed un nucleu reniform. Ele pot fi purificate prin centrifugare n fraciuni mai uoare. Aproximativ jumtate dintre ele formeaz rozete E i sunt recunoscute prin diveri anticorpi monoclonali specifici LT, prin anticorpi OKM1 (specific monocitelor) i Leu7, dar nu prin OKT3. Ele sunt n egal msur purttoare de receptori Fc i sunt nzestrate cu activitate citotoxic ADCC. Aceste limfocite la care par s existe numeroase subpopulaii, sunt regsite ntr-un nivel ridicat n snge (7%), ntr-un procentaj mai sczut n splin (4%), n ganglioni (1%) i n epiteliile mucoase. Ele nu se gsesc n timus. Interferonii de toate originile, cresc foarte evident activitatea NK, la toate speciile testate. IL2 stimuleaz, de asemenea, activitatea NK i
129

poate determina apariia unei activiti citotoxice de tip NK n celule LTc autentice. Asemenea celule care i-au pierdut stricta lor specificitate de LTc sunt denumite Lymphokine activated killer (LAK). Pe de alt parte, celulele NK sunt sensibilizate de aciunea mecanismelor supresoare n care intervin LT. Nivelul activitii este controlat prin factorii genetici, din care unii sunt asociai CMH.

8.3. DINAMICA RSPUNSULUI IMUN


Imunitatea este definit ca ansamblul fenomenelor prin care organismul recunoate i neutralizeaz structuri celulare sau necelulare agresoare, care sunt strine de organismul respectiv. Rspunsul imun are 3 caractere fundamentale: este xenofob ( anti-non-self), implicnd o discriminare a selfului (totalitatea constituienilor proprii) de non-self (molecule, macromolecule sau celule strine de organismul respectiv). Reamintim c selful este definit de moleculele CMH pe care LT sunt educate s le recunoasc. Moleculele CMH de clasa I (exprimate pe toate celulele nucleate) permit limfocitelor s recunoasc celulele proprii i s le deosebeasc de structurile mpotriva crora trebuie s reacioneze: agresori exogeni care nu posed Atg. CMH (de ex, microbi); molecule CMH non-self, exprimate pe celule strine (ca n cazul grefelor); molecule CMH proprii modificate (self alterat), exprimate pe celule proprii infestate cu virus sau transformate malign. este specific: rspunsul imun este declanat numai dac o substan strin se unete cu receptorii pentru Atg. exprimai de limfocite i numai dac exist o potrivire structural ntre Atg. i situsul combinativ al receptorului (specificitate nseamn receptor pentru antigen sau un tip de receptor/o celul, sau o clon de celule pentru un anumit Atg). Imunitatea stabilit mpotriva unui agent strin se exercit numai mpotriva acelui agent.

130

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE este memorizat: rentlnirea cu un Atg. fa de care organismul a fost imunizat n prealabil va declana un rspuns mai precoce i mai intens ( rspuns secundar sau anamnestic). Exist dou modele de rspuns imun (RI): A. RI cu mediere umoral declanat n condiiile n care Atg. au reuit s se rspndeasc n organism; se desfoar departe de locul unde au ptruns Atg; este mediat de Atc. circulani care in vivo, demonstreaz capacitatea de neutralizare a toxinelor, opsonizarea bacteriilor, inactivitatea virusurilor; este activat n infecii bacteriene, n reinfeciile virale; rspunsul aberant duce la reacia de hipersensibilitate imediat (anafilactic). B. RI cu mediere celular declanat n general de Atg. care rmn cantonate la poarta de intrare (ex. grefelor) sau care sunt fixate n celule ale gazdei (ageni patogeni cu dezvoltare intracelular ca: virusuri, fungi, B.K., Brucella, Atg. tumorale); se desfoar la locul unde este cantonat Atg. (de ex. la poarta de intrare); se constutie lent (rspunsul ntrziat); este ndreptat n special mpotriva unor celule (strine, tumorale, infestate cu ageni patogeni) care exprim Atg.; este mediat de LTc specifice, sensibilizate care acioneaz asupra celulelor-int direct sau asistate de producerea unor mediatori solubili. Derularea unui rspuns imun poate fi sistematizat n urmtoarele etape: ntlnirea cu Atg. activarea Limfocite specifice; eliminarea Atg. supresia rspunsului;
131

ntlnirea cu Atg. Antigenele ptrund n organism strbtnd barierele naturale care separ organismul de mediul nconjurtor dintre care cele mai importante sunt pielea i mucoasele care tapiseaz arborele respirator i tractul digestiv. La acest nivel Atg. sunt interceptate de mecanismele de aprare nespecifice, sunt captate de celulele sistemului monocitarmacrofagic i dirijate ctre ganglionii regionali sau ctre alte structuri ale sistemului organelor limfoide periferice (OLP) care sunt intercalate n acest circuit (amigdale i alte struturi Waldeyeriene, plci Peyer, etc.). Atg care depesc bariera limfatic i ptrund n snge (sau cele care accidental, intr direct n snge), interacioneaz n plasm cu anticorpii specifici preexisteni (rezultai n urma unui rspuns anterior fa de Atg. dat.) i sunt vehiculate spre splin. n OLP, Atg. sunt reinute de macrofage i de celulele dendritice i interdigitate. OLP sunt sediile n care se declaneaz rspunsul imun. Aici Atg. persist un timp suficient de lung ( zile sau luni) pentru a putea fi nglobate, prelucrate i reexpuse pe suprafaa celulelor dendritice i interdigitate, condiie necesar pentru a putea fi prezentate limfocitelor. Pe suprafaa acestor celule, determinanii antigenici sunt reexpui n asociere cu proteinele CMH de clasa I-a i clasa a II-a. Se pare c, ntocmai ca macrofagele, i LB sunt capabile s nglobeze s prelucreze i s reexpun pe suprafaa Atg., mpreun cu moleculele CMH de clasa II-a, putnd servi n anumite condiii, ca celule prezentatoare de Atg. Recunoaterea Atg. de ctre limfocite este condiionat de particularitile funcionale ale receptorilor specifici pentru Atg: receptorul pentru Atg. al LB (sIg) poate recunoate Atg. ca atare; receptorul pentru Atg. a LT (Ti) poate recunoate Atg. numai dac este prelucrat i asociat cu proteine CMH. Restricia CMH pentru recunoaterea Atg. este difereniat: celulele CD4+ recunosc Atg. asociat cu proteinele CMH de clasa II-a (CMHDR) (aceste proteine sunt prezente numai pe celule care coopereaz n rspunsul imun: macrofagele, LB i unele LT activate).
132

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE LTCD8+ recunosc Atg. asociat cu proteinele CMH de clasa I-a (virtual prezente pe toate celulele nucleate). Activarea celulelor specifice Activarea LTh (CD4+) ocup locul central al rspunsului imun. Iniial LTh primete dou semnale de activare de la macrofagul care-i prezint Atg., semnale pe care le asimileaz cu ajutorul a trei molecule receptoare. Cooperare Mcf - LimfociteT.CD4 Semnale Il1 Atg + CMH II Molecule receptoare R.IL1 Ti + CD4

Recepia acestor semnale provoac activarea limfocitelor, care este urmat de secreia de IL2, care se adaug ca al treilea semnal de autoactivare a celulei respective (stimularea autocrin). IL2 se deverseaz n mediul nconjurtor unde se asociaz altor aciuni al LTCD4+ activate. Activarea LTh are mai multe consecine funcionale: 1. Proliferarea clonal a LT auxiliare (cu producere de celule fiice activate care secret diverse limfokine cu efecte stimulatoare) i diferenierea unor subseturi de celule CD4+ capabile s induc rapid capacitatea T citotoxic de a rspunde la Atg. (LT inductoare) (Fig.39). 2. Proliferarea i activarea LTc.

133

Fig. 39 Activarea limfocitelor T-helper

3. Activarea reciproc a Mcf. prin IL2: Mcf. activate secret pe lng IL1, IFN i prostaglandine; 4. Recrutarea de noi Mcf. n focarul de recunoatere a Atg. i activarea lor prin efectul unor limfokine: MIF (factorul de inhibiie a migraiei macrofagelor), MCF (factorul chemotactic pentru excitarea Mcf.). MAF (factorul de activare a Mcf); 5. Stimularea LB specifice la Atg., declanat prin dou semnale: interrelaia celular direct LT-LB i IL2; 6. Amplificarea activrii, a proliferrii i a transformrii LB, n plasmocite secretoare prin intermediul mai multor limfokine: IL2, factorul de stimulare, factorul de proliferare, factorul de difereniere; 7. Inducerea maturrii i activrii LTs i activarea prin IFN a celulelor NK. Activarea LB Selectarea LB este iniiat de ataarea Atg. pe sIg. Aceast legtur nu este capabil s provoace singur activarea LB specific dect n cazul Atg. timo-independente (molecule mari-polimerice, cu multipli
134

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE determinani identici i dispui n serie sub form de uniti repetitive care se leag concomitent pe mai muli receptori sIg declannd o sumaie de semnale care depesc pragul de activare a LB). n majoritatea cazurilor ns, activarea LB este timo-dependent. Atg. sufer degradarea limitat urmat de reexpunerea epitopilor n conjuncie cu molecule CMH II att n Mcf. ct i n LB preselectate. Captarea Atg. de ctre Mcf. este nespecific. n schimb, Atg. va fi endocitat i prelucrat numai de acele LB care exprim molecule de sIg specifice pentru Atg. n cauz. Complexele Atg.+ CMH II exprimate pe suprafaa Mcf i a LB se leag pe cuplurile de molecule partenere pe care LTh le exprim pe membran (Ti+CD4). Se concepe realizarea unui model de cooperare ntre 3 celule: Mcf - LTh i LTh - LB. n cooperarea Mcf - LTh recunoaterea CMH II de ctre CD4 permite transmiterea semnalului antigenic de la Mcf. la LTh prin intermediul RTi. n cooperarea LTh - LB interrelaii simultane CD4 + CMH II i Ti + Atg. fixeaz cele dou celule i elibereaz un semnal helper care induce excitarea LB. Acest semnal se nsumeaz cu primul semnal produs prin cuplarea Atg. pe sIg. i se asociaz cu efecte stimulatoare ale IL2i a altor interleukine emise de LT. n acest model Atg. servete ca o punte de legtur ntre celulele partenere iar rspunsul este specific deoarece este condiionat de recunoaterea Atg. de ctre receptorii specifici ai celor dou celule. Activarea LB se soldeaz cu transformarea acestora n plasmocite care vor secreta Atc. cu aceeai specificitate ca aceea a sIg. Aceast similitudine asigur reactivitatea Atc. cu Atg. Funcia principal a Atc. este legarea sa pe Atg. Atc. fixai pe Atg. contribuie la eliminarea acestora prin intermediul asa-numitei funcii efectoare a Atc.: ataarea componentei C1q a complementului urmat de activarea cascadei prin calea clasic i aderarea lor la celule care posed receptori pentru segmentul Fc (Mcf. i celulele K). Imunoaderena la Mcf. este urmat de fagocitarea i digestia complexelor Atg-Atc., indiferent c Atg. sunt corpusculare (celulare) sau solubile (macromolecule).(Fig.40)
135

Ataarea complexelor formate din celule-int + Atc. la RFc exprimai de celulele K produce un efect citotoxic exercitat de acestea din urm asupra celulei-int (ADCC= antibody- dependent cell mediated cytotoxicity). ADCC ar fi o reacie de aprare ndreptat mpotriva celulelor tumorale sau asupra unor celule proprii alterate.

Fig. 40 Rspunsul B Timodependent

Activarea LTc necesit dou semnale. Semnalul specific este eliberat de Atg. expus mpreun cu molecula CMH de clasa I pe o suprafa celular prezentatoare i este recepionat de LTc prin intermediul complexului Ti+CD8. Activarea mediat pe aceast cale este specific. Al 2-lea semnal este furnizat de IL2 secretat de LTh prin mecanismul descris mai sus. intele LTc sunt celule infectate cu virus sau celule strine care sunt distruse printr-un efect citotoxic direct. Spre deosebire de citoliza mediat de celulele K i NK citoliza produs de LTc este foarte specific, graie dublei recunoateri a intelor. Din acest motiv LTc nu recunosc celulele care exprim numai antigenele specifice n absena moleculelor CMH, ca de ex. hematiile sau bacteriile.

136

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Recent s-au izolat cteva cazuri care se caracterizeaz prin deficiena formrii (sau exprimrii) Atg.CMH (sindromul limfocitelor dezgolite). Aceasta se traduce clinic printr-o imunodeficien grav cu infecii severe i repetate. (Fig.41)

Fig. 41 Rspunsul celular

Activarea LTs se produce, cronologic ca un eveniment tardiv al lanului activrii LB i LT. Aceasta permite desfurarea rspunsului imun. Au fost descrise 2 tipuri de LTs: LTs specifice pentru Atg. care reacioneaz numai cu Atg. corespunztor, suprimnd rspunsul imun exclusiv fa de acesta i LTs nespecifice pentru Atg. care suprimeaz rspunsul imun n general i care ar avea specificitate pentru receptorii LT i LB (i deci i prin idiotipurile acestora). Maturarea lor este stimulat de LTCD4 inductoare, iar activarea lor ar fi dependent de un helper al LTCD4 auxiliare. n dinamica rspunsului normal LTh stimulate de Atg. ar emite mai nti semnalele de difereniere pentru LB i mult mai trziu pe cele de producere a LTs. Cnd acestea ajung ntr-un numr suficient de mare, induc o inhibiie
137

retroactiv a celulelor auxiliare care le-a stimulat, realizndu-se un circuit imunologic de reglare. Efectul supresor ar putea fi mediat de un factor solubil supresor. Memoria imunologic este procesul biologic datorit creia, la orice rentlnire cu un Atg., rspunsul imun se instaleaz mai rapid i este mai energic (rspunsul secundar sau anamnestic). Ambele populaii de LB i LT produc celule de memorie. Tratarea oarecilor cu ser anti-B respectiv anti-T suprim capacitatea acestora de a determina un rspuns secundar in vitro i n vivo. LT de memorie sunt activate mai rapid dect celulele virgine n prezena Atg. specifice. Activarea este urmat de conversia lor mai rapid n celule efectoare. Dup ce s-au format, celulele de memorie prsesc locurile lor de natere (splin, ganglioni, etc.) i ptrund n circulaie ca celule de via lung (luni, ani) care patruleaz (recircul) pe traiectul vaselor de sngeesuturi-vase limfatice-ganglioni-conexiuni limfatice interganglionareduct toracic-snge. Unele din ele ptrund n limfonodurile limfatice prin arteriolele aferente i ajunse n venule post capilare strbat pereii acestora trecnd astfel n esutul limfatic ganglionar. Mecanismul formrii celulelor de memorie nu este bine descifrat. Dup una din ipoteze, Limfocite de memorie s-ar forma printr-o difereniere asimetric a celulelor activate de Atg.: dup mitoz, una din celulele fiice se transform n celul efectoare iar cealalt rmne ca limfocit mic de memorie. Aceasta s-ar produce paralel cu expansiunea clonei respective. 8.3.1. Reglarea genetic a rspunsului imun Exist animale care rspund viguros la unele Atg. i altele incapabile s produc Atc dup stimularea cu Atg. respective. Fenomenul a fost studiat de BENACERRAF i MC DEVIT pe sue de oareci cu ajutorul unor substane antigenice simple care conin cte un singur determinant. S-au utilizat oareci din dou rase (A i B) cu puii de prima generaie rezultai din ncruciarea lor, (hibrizii F1). oarecii A i B rspund n mod diferit (+ sau -) la diversele Atg. Hibrizii F1 rspund la Atg. recunoascute de oricare dintre cei doi prini. n concluzie,
138

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE aptitudinea oarecilor de a rspunde la Atg. este controlat de gene dominante. Rspunsul este mediat de limfocite: Limfocite recoltate de la animale reactante transfer capacitatea de rspuns la animale nonreactante preparate prin iradiere letal. Genele respective au fost denumite Ir (Immune response). Genele Ir ar fi plasate n subregiunea CMH care codific proteinele de clasa II-a. Produsele genelor Ir (immune response associated antigens) sunt exprimate pe aceleai celule care exprim Atg.HLA de clasa II-a. Drept urmare ele ar putea fi implicate n procesele de recunoatere a Atg. Date fiind, analogiile observate ntre CMH murin i uman se admite ca prealabil existen a genelor Ir i la om. Acestea ar fi plasate n regiunea D i ar putea fi chiar gene DR. Genele rspunsului umoral. Rspunsul anticorpic al oarecilor dup administrarea unor antigene (eritrocite de oaie) este diferit: exist oareci care rspund printr-o mare secreie de Atc. i alii la care se nregistreaz rspunsuri slabe. Selecia riguroas a acestor animale a demonstrat c aceast capacitate de rspunsuri ample este ereditar i nespecific: rspunsurile sunt ample att vis-a-vis de Atg. inductoare ct i dup administrarea altor Atg. T-dependente i T-independente. Genele care controleaz intensitatea rspunsului umoral sunt diferente de genele Ir. Localizarea lor nu este nc stabilit.

139

CAPITOLUL 9
SISTEMUL IMUN N ACIUNE
n concepia modern (JERNE,1973-1985), sistemul imunitar poate fi considerat ca un organ difuz, celular i molecular alctuit dintrun numr mare de limfocite (cca. 2 x 1012) i molecule de anticorpi (cca 1020), avnd funcia esenial de supraveghere a identitii organismului. Aa cum organismele vii selecionate n cursul evoluiei i menin integritatea de specie, graie sistemului lor genetic, sistemul imunitar asigur integritatea organismelor individuale faa de agresiunea diverilor ageni patogeni sau de ptrunderea unor substane nedorite, meninndu-le individualitatea i homeostazia. Sistemul imun n aciune include: aprarea antiinfecioas; respingerea grefelor; imunitatea antitumoral;

9.1. IMUNITATEA ANTIBACTERIAN Soarta bacteriilor ptrunse n organism depinde de: calea de ptrundere; localizarea lor extracelular sau intracelular; starea funcional a mecanismelor de aprare. Cea mai mare parte a bacteriilor sunt rapid eliminate la poarta de intrare prin mecanisme nespecifice (lizozim, proteina C reactiv, intervenia fagocitelor, amplificat ulterior de ctre produse ale rspunsului imun nespecific: anticorpi opsonizani i limfokine). Germenii care subzist pot fi neutralizai i eliminai de elemente reziduale ale unui rspuns, specific recent (de ex. de ctre Atc. de clasa IgG care au o durat de via de aproximativ o lun). n fine, acea parte a bacteriilor invadante care reuesc s depeasc toate mecanismele descrise se multiplic i provoac boala clinic. Ele vor fi eliminate n urma rspunsului imun specific sau, uneori, pot persista n ciuda unei reacii imune continue mpotriva lor.
140

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Mediul intern al organismului este separat de lumea exterioar prin piele i mucoase (respiratorie, digestiv, vaginal). Acestea constituie bariere naturale care sunt colonizate continu de microorganisme. Pielea i mucoasele constituie barierele fizice care mpiedic ptrunderea bacteriilor n organism. Unul dintre mecanismele locale eficiente este descuamarea continu a celulelor care formeaz ptura superficial a acestor nveliuri. Acest mecanism care ndeprteaz un numr mare de bacterii este mai eficient la nivelul epidermului, n alctuirea cruia intr mai multe straturi celulare i este suplimentat, la nivelul suprafeelor mai vulnerabile ale mucoaselor prin alte activiti fizice (micarea cililor din mucoasa bronic, peristaltismul intestinal, fluxul unor secreii, lacrimi, urina care spal suprafeele respective), biochimice (aciditatea gastric, vaginal sau urinar, prezena lizozimului n secreii sau a enzimelor proteolitice n sucurile digestive) sau ecologice (competiia bacteriilor nepatogene din tubul digestiv). Tot la acest nivel periferic, organismul se apr prin reacii inflamatorii nespecifice care sunt induse chiar de bacteriile care au reuit s depeasc bariera nveliurilor externe. Acestea sunt amorsate de celule ale aprrii nespecifice i de o serie de proteine ale plasmei care exudeaz i se concentreaz n zona conflictului. Proteinele complementului sunt activate direct (calea alternativ) se fixeaz pe bacterii (opsonizare) i le lizeaz prin aciunea complexului de atac al membranei. Lactoferina eliberat din polimorfonucleare, fixeaz fierul care este indispensabil celulelor bacteriene. Kininele i alte amine vasoactive care provoac vasodilataie local, creterea permeabilitii vasculare i chimiotaxia, atrag n zona conflictului fagocitele (polinucleare i monocite). Fagocitoza bacteriilor este potenat de opsonizarea lor prin C' care ancoreaz corpii microbieni la RC3b de pe membrana fagocitelor. Aceasta incit aceste celule s emit falduri ale membranei sau pseudopode care nglobeaz bacteriile opsonizate ntr-o vacuol intern n care sunt deversate apoi enzime proteolitice coninute n granulaiile din citoplasma fagocitelor. Polimorfonuclearele ucid bacteriile ingerate printr-un mecanism suplimentar care le este propriu: deversarea n vacuola de fagocitoz a unor metabolii toxici, de oxigen activat (ionul superoxid, ap oxigenat), mpreun cu o enzim specific, mieloperoxidaza (MPOX). Aceast enzim produce hipoclorit din ap oxigenat i cloruri care atac bacteria fagocitat. Macrofagele, lipsite de MPOX atac bacteria cu alte substane: oxid nitros, proteine cationice,
141

defensine, lizozim, etc. Paralele cu aceste activiti, macrofagele activate emit n mediu, interleukine, TNF alimfocitea sau expun pe suprafa determinani antigenici provenii din degradarea bacterian. n acest mod se face trecerea la mecanismul imun de aprare specific i mult mai flexibil. Bacteriile pot amorsa ambele tipuri de rspuns imun. Rspunsul umoral este declanat de bacterii cu dezvoltare extracelular i de exotoxine bacteriene. Principalele sedii de producie de Atc. sunt splina i limfonodurile. Bacteriile care rmn cantonate n mucoase bronice i digestive produc o imunitate local mediat de Atc.IgA, urmat de neutralizarea bacteriilor la suprafaa epiteliilor, activarea complementului pe calea alternativ i opsonizare. Efectele generale ale anticorpilor: fixarea pe toxine care mpiedic ptrunderea acestora n celulele-int (ex. n difterie, tetanos, botulism etc); Atc. de clasa IgM, pot produce, uneori, aglutinarea unor bacterii (prin care mpiedic difuziunea acestora) sau alteori, liza bacteriilor prin activarea C' pe calea clasic, mecanism ndreptat cu precdere mpotriva germenilor Gram negativi); Atc. de clasa IgG acioneaz mai ales prin opsonizare, imunoaderen i fagocitarea bacteriilor. Rspunsul celular este amorsat mai ales mpotriva bacteriilor cu multiplicare intracelular: mycobacteriile (bacilul Koch, bacilul leprei), brucele, listerii, etc. nglobate n celulele fagocitice ele sunt protejate mpotriva aciunii anticorpilor din plasm, iar anumii factori parietali care le acoper le face relativ rezistente la aciunea enzimelor celulare. Drept urmare, aceste bacterii scap (se furieaz) de aciunea litic a fagocitelor i supravieuiesc timp ndelungat. Ele provoac infecii cronice greu nvinse de mecanismele de aprare ntre care rspunsul imun celular joac un rol nc incomplet elucidat. Unele dintre aceste aspecte au fost recent explicate n infecia tuberculoas. Mcf. infestate cu BK (i incapabile s distrug organismele invadante) sunt ucise de LTc, iar bacilii eliberai sunt fagocitai de alte celule efectoare mult mai eficiente: Mcf activate (armate). n legtur cu acest proces, cercetrile aduc n ultima vreme dou precizri: 1. LTc care ucid Mcf infestate aparin unui set aparte de LT care prezint un alt tip de receptor pentru Atg. alctuit din dou lanuri alimfocitea i delta ( diferit de receptorul Ti); 2. Atg.BK care provoac activarea LTc alimfocitea/delta+ sunt membrele unei familii de proteine larg rspndite n natur, denumite HSP (heat shock proteins).
142

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE LT gama/delta+ se pot comporta ca celule helper sau citotoxice. Dup stimulare ele prolifereaz i secret IL2. HSP sunt larg rspndite la plante, la unele ciuperci, bacterii i n regnul animal, ca o familie de polipeptide implicate n reglarea conformaiei altor proteine (plicaturare-netezire, asamblare i dezasamblarea complexelor proteice). HSP constituie Atg. majore ale multor bacterii cu care organismul uman vine cvasi permanent n contact. Din acest motiv n circulaia indivizilor normali exist n permanen clone activate de LTc gama/delta+ specifice pentru aceste proteine. S-au descris lungi secvene homologe n structura HSP care au proveniene diferite (de ex. 60% din secvena de aminoacizi a HSP 65 a bacilului Koch este identic cu o HSP prezent n celulele umane). Aceste similitudini structurale creaz posibilitatea unor reacii ncruciate. n infecia tuberculoas s-au descris clone preformate de LT gama/delta+ care reacioneaz ncruciat i cu HSP 65 tuberculoas i cu HSP 65 uman, exprimat de Mcf. stresate n prezena bacteriilor intracelulare.

9.2. IMUNITATEA ANTIVIRAL Avnd un genom extrem de simplu (ntre 3 i 250 gene) virusurile nu sunt capabile s elaboreze un numr de proteine i enzime importante (de ex. enzime necesare catabolizrii glucidelor sau enzime necesare replicrii acizilor nucleici). n consecin, ele sunt obligate s paraziteze diverse gazde celulare, pentru ca, folosind mainria biochimic a acestora, s poat supravieui i prolifera. Un numr de virusuri care ptrund n diverse celule umane sau animale produc tulburri patologice cu un spectru clinic foarte variat: boala acut, subclinic, recurent, latent sau cronic. Rspunsul organismului gazd este i el foarte divers implicnd toate componentele nespecifice ale aprrii, dar cu o nuan proprie (Fig.25): cu preponderena imunitii celulare legat de dezvoltarea intracelular a virusurilor i relativa ineficien a rspunsului umoral. Eficiena global a rspunsurilor poate fi deplin (ducnd la eliminarea virusurilor i stabilirea unei imunizri durabile) sau parial cu persistena virusului n organism. n fine, n anumite situaii nsui mecanismul imun de aprare poate avea efecte adverse, producnd manifestri patologice.
143

n forma sa obinuit, infecia viral ncepe cu invazia unuia dintre nveliurile epiteliale de grani: tegumente, mucoase respiratorii i digestive. Unele virusuri rmn cantonate la acest nivel. Altele, se rspndesc n organism pe cale sanguin (faza viremic a infeciei) i se stabilesc n organele int. Pe parcursul acestui traseu aceste virusuri expun Atg. proprii i amorseaz mecanismele de aprare nespecific mpreun cu iniierea rspunsului imun umoral. n cazul infeciei primare, Atc. virali se elaboreaz ns prea trziu pentru a putea fi operativi.

Fig. 42 Mecanisme de aprare n viroze

Ei vor juca un rol mai activ n infeciile secundare sau n interaciunea cu celulele care exprim Atg. virale. La comanda stimulilor virali celulele gazd pot fabrica proteine. Drept urmare, n celulele parazitate coexist att Atg. virale codificate de genomul viral ct i Atg. celulare codificate de gene celulare activate de virus. Toat aceast zestre de Atg. apare risipit n nucleu, n citoplasm sau pe suprafaa celulei gazd. Atg. de suprafa codificate de celula gazd au potenial redus de a induce rspunsul imun. n schimb, servesc clinicianului ca markeri care dezvluie persistena infeciei. Atg. virale exprimate pe suprafaa celulei sunt ns imunogene. Rspunsul declanat de aceste Atg. este T-dependent. (Fig.43) Mecanismele de aprare umoral Mecanismele de aprare umoral au rolul s neutralizeze i s inactiveze virusurile. Inhibiia nemijlocit a infectivitii virale prin interaciunea anticorpilor cu antigenele virale de suprafa, este un mecanism esenial de aprare a gazdei. Anticorpii previn absorbia i
144

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE penetrarea virusului n celula gazd, iar ulterior difuzarea infeciei este limitat tot de ctre anticorpi.

Fig. 43 Exprimarea Atg virale pe suprafaa membranei celulare i recunoaterea lor de efectorii imunitii umorale i celulare

Anticorpii antivirali sunt capabili s se lege direct de virusuri n faza extracelular sau pe Atg. virale exprimate pe celule. IgM i IgG intercepteaz virusurile vehiculate n plasm i fluidele tisulare, n timp ce IgA din secreii protejeaz suprafeele mucoaselor porilor de intrare. Legarea pe virusurile extracelulare cu efectul su protectiv antiviral reprezint baza seroterapiei profilactice. Prin ataarea pe virusurile extracelulare, Atc. pot neutraliza capacitatea infectant a acestora deoarece ar mpiedica ptrunderea lor n celule. Complementul i interferonul acioneaz sinergic cu Atc. pentru a preveni infestarea celular. Complementul poate sprijini aciunea neutralizant a Atc. prin nvelirea virusurilor sau prin provocarea lizei unei particule virale. Sistemul complement activat este capabil s medieze o serie de activiti biologice, dintre care cea mai cunoscut este capacitatea de a media distrugerea litic a virusurilor cu nveli lipidic. Mecanismul
145

este probabil legat de capacitatea sistemului de a produce un rspuns inflamator acut, care are drept scop, s localizeze substana care a activat complementul. Virusurile i celulele infectate cu virusuri, nvelite cu anticorpi, se comport ca i complexe imune tipice, activnd complementul. Mecanismele de inactivare pot fi litice i nelitice. Mecanismele litice intervin cnd sistemul complement este activat de virusuri cu nveliuri, care au lipide celulare nglobate n aceast structur. Cercetrile de microscopie electronic au demonstrat c modificrile structurale rezultate din aciunea sistemului C pot fi de la distrugeri minore, pn la pierderea integritii virale. Aceste modificri de permeabilitate, permit liza osmotic sau influxul de proteine plasmatice i nucleaze n interiorul virusului. Modificri mai extinse duc la pierderea nveliului i la eliberarea acidului nucleic viral. Dintre virusurile ce sunt sensibile la liza mediat de sistemul C amintim pe cele din genurile Retrovirus, Myxovirus, Paramyxovirus i Alimfociteavirus. Mecanismele nelitice au un rol important n activarea virusului prin acumularea de proteine ale sistemului complement pe nveliul viral, care pot interfera cu adsorbia sau cu penetrarea virusului n celul, reducnd astfel infectivitatea. S-a demosntrat c ndeosebi fraciunile complementului cu un mare numr de molecule (C1q, C4b, C3b) mascheaz situsurile necesare pentru ataarea virusului la suprafaa celulelor potenial sansibile. Un alt mecanism prin care sistemul complement incativeaz virusurile este agregarea. Un astfel de mecanisam este realizat, ndeosebi, de componenta C3b pentru care virusul posed receptori localizai la nivelul infeciei virale. Interferonii. Mai multe specii moleculare de IFN (alimfocitea i beta) sunt secretate de celulele infestate de virus, foarte rapid dup debutul infeciei nc naintea apariiei Atc. Combinarea acestor molecule de IFN cu membrana celulelor neinfectate din vecintate iniiaz traducerea unui ARNm care codific o protein antiviral care mpiedic invadarea acestor celule, iar monocitele i macrofagele dobndesc sub influena IFN capacitatea de a se mpotrivi replicrii virusurilor. n acest mod IFN contribuie la eliminarea focarelor primare ale infeciei. Mai trziu, n cursul infeciei dup stimularea specific a LT, apare IFN gama produs de acestea, care va amplifica mai multe modele de reacii citotoxice ndreptate mpotriva celulelor infecatate, reacii efectuate de LTc, celulele NK i K, Mcf. activate. Ataarea Atc. pe Atg. exprimate pe celula infectat poate produce efecte diferite de la un tip de infecie la altul:
146

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE activarea complementului pe celula-int i citoliz; atragerea i activarea celulelor K urmate de efect citotoxic indirect (ADCC); modularea Atg. virale sau despuierea celulelor de Atg. ar permite celulei infectate s evite distrugerea prin mecanisme citotoxice. ATC -BLOCAREA SITUSURILOR CRITICE ATC+C'LIZA VIRUSURILOR CU LIPIDE MEMBRANARE ATC+C' NVELIRE - ELIMINARE VIA R.C3 ATC+C' (CALEA ALTERN|) LIZA CELULELOR INFECTATE NEUTRALIZARE NEUTRALIZARE POATE INFECTA FAGOCITELE -POATE DEZGOLI VIRUSUL CU PROTEJARE CELULELOR

Schema nr. 4 Efectele antivirale ale anticorpilor

Mecanismele de aprare celular n erarhia formelor de aprare antiviral mecanismele imunitii celulare joac un rolul dominant. (Fig.44) Imunitatea mediat celular joac un rol important n rezistena fa de anumite infecii virale. Ca regul general, virusurile care se asambleaz la nivelul celulelor infectate sau care determin n cursul replicrii neoantigene n zona periferic a celulei, induc imunitatea celular. Mecanismul efector al imunitii celulare urmeaz un model simplu, care asigur i participarea mecanismelor nespecifice, ca auxiliar indispensabil. Limfocitele sensibilizate lansate n circulaie, devin capabile s sintetizeze o gam larg de produse biologice active, n momentul contactului cu celulele infectate, tumorale sau celulele alogrefelor. Asemenea celule sunt denumite celule int, ele purtnd pe membrana lor antigene specifice, n raport cu care limfocitele cu fost sensibilizate. Atg. virale exprimate pe suprafaa celulelor infectate mpreun cu Atg.CMH de clasa I stimuleaz LTc specifice care vor produce liza celulei infestate. Rspunsul este ns mult mai amplificat prin stimularea concomitent i a LTCD4+ care induce prin intermediul secreiei de citokine urmtoarele efecte:
147

a) recrutarea i activarea Mcf. (care dobndesc capaciti citotoxice nespecifice asupra celulelor infectate); b) activarea i cooperarea cu LB ( care primesc semnale helper de recunoatere a Atg. virale i produc Atc. specifici fa de acestea ca i anticorpi care pot interaciona cu particule virale eliberate din celula gazd distrus prevenind pe aceast cale ptrunderea virusurilor n alte celule); c) activarea LTc; d) activarea mediat a IFN i a celulelor NK.

Fig. 44. Rspunsul imun n imunitatea antiviral

Nu ntotdeauna mecanismele de aprare reuesc s elimine complet virusul infectant care poate persista luni (sau uneori) ani de zile. Se accept trei forme de infecii persistente: cronice, latente i lente. infecii cronice (modelele: infecia cu virus citomegalic, hepatita B) se caracterizeaz prin persistena virusului n ciuda unei reacii imune
148

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE destul de ample, care ns nu influeneaz evoluia cronic a bolii. Serul bolnavilor conine titruri ridicate de Atc. IgM specifici, dar imunitatea de tip celular pare serios afectat aa cum o demonstreaz scderea rspunsurilor, in vitro, a LT n diverse modele de stimulare. Mecanismele acestei stri de imunodeficien nu sunt bine cunoscute. infeciile latente (modelele: virusuri herpetice-herpes simplex I i II, varicella-zoster) se caracterizeaz clinic prin secvena: boala acut, remisiune (vindecare aparent), recdere, remisiune. n remisiunea clinic virusul persist de fapt, n celulele organului-int. Exist o producie de Atc. IgG serici care ns nu confer protecie deoarece virusurile sunt localizate strict intracelular. Rspunsul celular controleaz infecia i o menine n stare latent dar nu o poate eradica. Recderile sunt posibile dac apare o deficien a controlului infeciei: unele medicamente, stri pasagere de imunosupresie sau bolile limfoproliferative cronice pot facilita recrudescena puseelor de boal; infeciile lente au evoluie incentinit att n incubaie ct i n cursul bolii manifestate. Un astfel de exemplu este leucoencefalopatia multifocal (produs de un virus extrem de rspndit n rndul populaiei umane de toate vrstele, denumit SV 40). Boala se dezvolt ca o infecie oportunist pe terenul unei imunodeficiene de lung durat care nsoete bolile limfoproliferative cronice (limfoame maligne de ex.) sau imunosupresia terapeutic aplicat la purttorii de gref pentru prevenirea fenomenului de respingere. n anumite mprejurri, rspunsul imun antiviral provoac gazdei alterri patologice. Mecanismele T-dependente provoac uneori leziuni severe i progresive celulelor infectate. Infestarea experimental a oarecilor cu virusul coriomeningitei limfocitare produc moartea animalelor n urma unor leziuni cerebrale inversibile. Supresia cu Ciclofosfamid (CFA) a animalelor inoculate previne moartea acestora, dar duce la o infecie persistent. Efectul produs de CFA poate fi anihilat dup administrarea de LT recoltate de la un oarece imunizat n prealabil, sugernd c moartea animalelor restaurate se datorete efectului citopatic al LT. Un mecanism similar a fost incriminat n hepatita cronic activ uman: Limfocite citotoxice recunosc Atg. exprimate pe suprafaa hepatocitelor parazitate i produc o hepatocitoliz persistent. Anumite virusuri infecteaz celulele limfoide cu efecte extrem de severe. Virusul HTLV I (human T leukemia/lymphoma virus I) infecteaz LTCD4+ i produce o proliferare continu a acestora (imortalizare) a crei urmare este apariia unui limfom malign foarte grav (limfomul T endemic). Aceleai LTCD4+sunt inta predilect a virusului HIV care are
149

efect citopatic: distrugerea progresiv a zestrei LTCD4+ este unul din mecanismele de baz care explic instalarea sindromului imunodeficienei dobndite (AIDS sau SIDA).(Fig.45)

Fig.45 Activarea rspunsului imun n infecia viral B = LimfociteB; Mcf = macrofage; NK = celule natural killer; T4h = LimfociteT4 helper; T4ind = LimfociteT inductor; T8sup= LimfociteT8 supresor; T8cit = LimfociteTh citotoxic; IL1-IL2= interleukina 1 i 2; IFN = interferon; FAB,FPB i FDB = factori de activare, proliferare i difereniere ai LimfociteB; Atg = antigen; RAtg = receptorul pentru Atg. al LimfociteT; CMH = proteine de clasa II-a din complexul major de histocompatibilitate; CD4 = markerul LimfociteT4

9.3. IMUNITATEA ANTIMICOTIC La indivizii normali micetele nu se manifest ca organisme foarte invazive. Ca regul general aprarea antimicotic se realizeaz prin mecanisme celulare nespecifice (naturale) i specifice (imune)
150

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE interdependente: primele sunt capabile n anumite condiii s realizeze eliminarea complet a agenilor invadani. n alte situaii, ns, mecanismele naturale pot doar mpiedica diseminarea organismelor pn ce dezvoltarea rspunsului imun specific capt suficient amploare pentru a realiza eliminarea miceilor. La gazdele imunocompromise ns, infecia se poate generaliza i duce la sfrit letal. n cadrul reaciei nespecifice miceii sunt atacai de 3 tipuri de celule: granulocite, neutrofile, macrofagele i celulele NK. Polimorfonuclearele joac un rol important n aprarea mpotriva unor specii (Candida albicans, Aspergillus fumigatus). Ataarea PMN pe corpusculii micotici poate fi mediat de o opsonizare prealabil dac speciile respective posed receptori pentru anumite fragmente ale componentei C'3 (de ex. Candida albicans). Monocitele i macrofagele exprim receptori pentru unii ageni fungici (de ex. Candida). Comportamentul Mcf. vis-a-vis de intele ataate difer ns n funcie de starea lor funcional: capacitatea de a ucide anumite specii crete foarte mult dac Mcf. sunt expuse n prealabil la interferon gama sau IL3. Celulele NK pot provoca reacii de citotoxicitate direct mpotriva unor specii de ciuperci (Criptococcus neoformans). Celulele NK venite n contact cu Candida albicans sunt provocate s produc TNF care, la rndu-i, activeaz PMN care pot elimina mai eficient corpusculii micetici. Celulele NK activate pot oferi protecie eficient mpotriva infeciei cu Candida albicans: dup expunere, oarecii cu deficien imun combinat (lipsii deci de LT i LB) dar care demonstreaz activitatea NK crescut s apar la fel de bine ca oarecii normali. Intervenia mecanismelor nespecifice este adesea suficient pentru stpnirea micozelor superficiale. n cazul infeciilor sistemice principala form de rezisten este produs de imunitatea celular. (Fig.46) n sngele indivizilor umani normali s-au evideniat LT specifice pentru micei. LTCD4+ murine, sensibilizate in vivo faa de o anumit ciuperc, recoltate i injectate unor oareci singenici induc eliminarea mai eficient a respectivului organism iar celulele reactive produc interferon gama cu efecte descrise mai sus. Pe lng aceste LT capabile s transfere imunitatea specific antifungic recent (1988) s-a descris i un subset de LT amplificatoare ale rspunsului, care sunt induse tot prin imunizare.

151

Mai multe observaii experimentale sugereaz c anumite specii micetice (printre care Criptococcus, Candida) pot induce i o activare a LTs care vor inhiba rspunsul imun celular.

Fig.46 Aprarea antimicotic mediat celular

Imunosupresia indus de micei permite meninerea i/sau diseminarea microorganismelor. Mecanismele acestei inhibiii nu sunt cunoscute. Dou ipoteze sunt prezumabile: inhibarea inducerii de celule protective sau blocarea produciei de limfokine de ctre aceste celule. 9.4. IMUNITATEA ANTIPARAZITAR Paraziii animali produc procese patologice larg rspndite pe glob, n special n rile tropicale. Aceti parazii pot fi mprii n dou mari categorii: organisme unicelulare (protozoare) care determin de obicei, infecii intracelulare; organisme pluricelulare (metazoare) care induc, de regul, infecii extracelulare. mpotriva acestor ageni infestani, organismul-gazd reacioneaz prin variate mecanisme umorale i celulare ale aprrii. Eficiena acestor reacii de aprare este extrem de divers: reacia energic cu eliminarea parazitului, reacie parial eficient care
152

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE nu duce la eliminarea complet a parazitului dar care se opune cu succes reinfestrilor, reacie cvasi-absent care permite persistena ndelungat a parazitului. Antigenicitatea parazitar este complex. De fapt, fiecare parazit este un adevrat mozaic antigenic. S-au recunoscut mai multe antigene parazitare: Atg. specifice parazitului; Atg. comune mai multor parazii nrudii; Atg. exprimate n toate stadiile evolutive ale parazitului sau Atg. specifice pentru un anumit stadiu; Atg. somatice sau Atg. secretate (detectabile n serul bolnavului) Anumite particulariti de antigenicitate permit supravieuirea unor parazii: variaia antigenic (efectul unei rearanjri de gene), exprimarea unor Atg. nrudite cu Atg. gazdei, prezena de Atg. circulante i formarea de complexe imune. Infecia este foarte specific. De exemplu, exist mai multe specii de parazii ai malariei, fiecare cu gazda sa specific (psri, animale, om). Relaiile parazit-gazd sunt foarte complexe: gazda se opune invaziei prin mai multe mecanisme sinergice: parazitul bine adaptat la gazda sa, reuete s supravieuiasc contracarnd aceste mecanisme prin diverse procese adaptative de evaziune imunologic. Mecanismele de aprare umoral n diferite infestaii parazitare se nregistreaz o sintez activ de anticorpi cu specificitate fa de diveri determinani antigenici ai parazitului invadator. Acetia au o mare importan n infestaiile parazitare cu localizare extracelular, n prevenirea reinvaziei, atunci cnd paraziii se afl n afara celulei, dar i pierd posibilitatea de intervenie atunci cnd acetia ptrund n celul, fr exprimarea la suprafaa ei de determinani antigenici sau fr alterarea membranei celulare. Mecanismele prin care anticorpii pot aciona asupra paraziilor sunt destul de diverse. Astfel ei pot aciona mpreun cu sistemul complement, direct asupra paraziilor, provocnd alterri ireversibile la nivelul acestora sau pot bloca ataarea lor la celulele sau de esuturi pe care le paraziteaz de predilecie. Se mai precizeaz c anticorpii pot activa funciile fagocitare ale neutrofilelor i macrofagelor, acestea intervenind mai eficient n uciderea paraziilor prin mecanisme anticorp-dependente. Diferite tipuri de celule efectoare pot
153

aciona n asociere cu diferite clase de imunoglobuline, acionnd selectiv fa de parazii. Sinteza activ de IgE n infestaiile cu unele nematode, contribuie la activarea i sensibilizarea mastocitelor i bazofilelor, care la rndul lor elibereaz amine vaso-active, capabile s provoace perturbri att parazitului, ct i locului de cantonare a acestuia. Antigenele parazitare pot aciona i ca activatori policlonali, activnd nespecific proliferarea LB i sinteza imunoglobulinelor, fr specificitate de anticorp, ceea ce explic hipergamaglobulinemia nespecific i o slab reactivitate imunologic a organismului fa de ali stimuli antigenici. Prezena anticorpilor cu specificitate fa de parazii poate fi pus n eviden prin reacii de aglutinare, precipitare, liz, RFC, imunofluorescen, neutralizare, imobilizare, etc. Mecanisme de aprare celular Controlul infeciilor parazitare este dependent n special de implicarea LT: infestri non-letale la animale normale evolueaz progresiv pn la exitus la oarecii timectomizai i iradiai. Reconstituirea animalelor cu LT prelevate de la oarecii singenici imunizai mpotriva parazitului n cauz restaureaz rspunsurile. Printre aceste LT sensibilizate s-au decelat LTc i celulele productoare de limfokine. Acestea stimuleaz Mcf. s exprime receptorii Fc i C3 i s secrete enzime i ali metabolii cu ajutorul crora dobndesc capaciti citotoxice antiparazitare. Mecanismul ar fi deosebit de activ n cazul paraziilor care n mod obinuit se multiplic n Mcf. (Leishmania donovani, Toxoplasma gondii). Un alt mecanism T-dependent deosebit de activ mpotriva unor parazii pe care organismul nu reuete s-i elimine complet este incapsularea acestora: iniial are loc o acumulare local de celule inflamatorii (cu formarea unui granulom). Mcf. activate local produc factori fibrogenici prin care stimuleaz constituirea unei capsule fibroase. Astfel de granuloame fibrotice pot izola oule unor helmini (ex. oule de Schistosoma) sau nsi organismele parazitare (Trichinella spiralis, Echinococcus granulosus). Granulocitele eozinofile par a fi celule efectoare majore n cazul infeciilor helmintice. Recrutarea eozinofilelor este mediat de factorii humorali chemotactici eliberai de parazit (ECF-P = Eosinophil chemotactic factor- Parasite) i de mastocite iar activarea lor este stimulat de o limfokin eliberat de LT (ESP = Eosinophil stimulating promotor). Efectele LT nu se limiteaz numai la eliberarea sa. Ele
154

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE elibereaz i IL5 care stimuleaz puternic eozinofilopoieza. mpreun cu Mcf. activate, LT stimuleaz (prin intermediul IL4) anumite clone de LB. s produc IgE cu specificitate antiparazitar. IgE activeaz mastocitele (o populaie de celule care ar deriva din monocitele circulante) s produc molecule efectoare: ECF, histamin i alte substane vasoactive (prin care controleaz permeabilitatea vascular i reacia inflamatorie local) i heparina.

Fig. 47 Aprarea antihelmintic de tip celular

ntre mastocite i eozinofile se stabilesc interrelaii de control reciproc: eozinofilele sunt atrase de ECF iar degranularea lor este limitat de heparina mastocitar. Prin intermediul histaminazei i a altor enzime coninute n granule, eozinofilele controleaz reacia
155

inflamatorie indus de mastocite. Eozinofilele exercit efecte citotoxice asupra parazitului n colaborare cu Atc. specifici prin intermediul unei reacii de tip ADCC. Eozinofilia sanguin este deosebit de ridicat n cazul infestrilor cu helmini cu dezvoltare intratisular. (Fig. 47) n concluzie efectele anticorpilor antiparazitari sunt: alterare direct sau prin citoliz mediat de inducerea activrii C', n cazul unor protozoare cu dezvoltare extracelular; blocheaz situsurile de ataare ale parazitului pe celulele-gazd: previne diseminarea infestrii de la o celul la alta (ex. n cazul infeciei malarice); faciliteaz imunoaderena la celulele fagocitice care exprim R.Fc. Captarea organismelor de ctre Mcf. este mai eficient dac Mcf au fixat moleculele de C'. Reamintim c Mcf activate exprim un numr mare de RFc i RC3. Fagocitoza joac un rol important n infestrile cu plasmodium i cu tripanosome;

Fig. 48 Efectele anticorpilor n parazitoze

ADCC, important n unele tipuri de infestri (tripanosomiaze, trichineloze, fillarioze, schistomiaze) implic Atc. specifici i variate celule cu potenial citotoxic care exprim RFc (Mcf, PMN, Eo). Efectele citotoxice ale Eo sunt mediate de IgG. Ele se exercit ndeosebi asupra helminilor prin intermediul unor enzime-proteine coninute n granulaii denumite MBP (Major basic protein); MBP atac

156

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE tegumentul unor larve producnd moartea acestora. Atc.IgE acioneaz prin intermediul Mcf. Mecanismul a fost descris mai sus. Paraziii se protejeaz mpotriva presiunii mecanismelor imune agresoare elaborate de gazd, prin diverse ci de evadare (Fig.49)

Fig. 49 Mecanisme de evaziune parazitar

habitat specific: stabilirea n lumenul intestinal (diverse nematode); cuibrire n unele celule-gazd care le apr de aciunea Atc. (tripanosome, leishmanii, plasmodii); formarea de nveliuri chistice (Trichinella, Entamoeba histolytica, Echinococcus); evitarea recunoaterii: modificarea Atg. proprii (variaia antigenic) de ctre unii parazii expui la atacul anticorpilor; mascarea propriilor Atg. prin achiziionarea de Atg. de la gazd (ex. Atg. de grup sanguin A,B i H sau Atg. de histocompatibilitate); supresarea nespecific i specific a rspunsului imun al gazdei: alterarea Limfocite prin factorii limfocitotoxici (Trichinella), clivarea moleculelor de IgG (Schistosoma), stimularea LTs prin factorii solubili (Leishmanii). Uneori imunosupresia poate fi n avantajul ambilor adversari. De ex., intensitatea fenomenelor care duc la formarea de granuloame n jurul oulelor de schistosoma apare limitat de imunosupresie. Prin aceasta se previne o serie de alterri ale organului care gzduiete aceste granuloame fibrogene (ficatul) dar, totodat, se reduce i agresiunea mpotriva parazitului.
157

Cronicizarea infestaiilor parazitare, conduce deseori la consecine imunopatologice secundare incluznd formarea complexelor imune i dezvoltarea unor imunopatii i autoimunopatii, cum ar fi: imunodeficiene secundare, ca urmare a colonizrii celulelor imunitare; fenomene de hipersensibilitate de tip I ( reacii anafilactice, atopice), demonstrate de concentraia ridicat de IgE; fenomene de hipersensibilitate de tip II, n urma modificrilor induse n structura eritrocitelor; fenomene de hipersensibilitate de tip III, consecin a formrii i depunerii de complexe imune n diverse esuturi i organe; hipersensibilitate de tip ntrziat ( IV), inclusiv prin reacii granulomatoase, boli autoimune n special n infestaiile cu protozoare. Toate aceste reacii imunologice i imunopatologice au permis n ultimii ani n urma cunoaterii lor folosirea tehnologiilor moderne n scopul realizrii unei profilaxii specifice, precum i utilizarea unor tehnici imunologice noi pentru diagnosticul parazitozelor la animale. 9.5. IMUNITATEA ANTIGREF n funcie de relaiile de nrudire genetic dintre receptorii i donatorii de grefe putem deosebi urmtoarele categorii: autogrefa (transplantul autolog): esutul grefat provine de la individul care va primi grefa (ex. autogrefa de piele la marii ari cu soluii de continuitate ntinse ale tegumentelor; izogrefa (transplantul singenic): receptorul i donatorul sunt identici din punct de vedere genetic- gemeni univitelini, animale experimentale de rase pure; allogrefa (homogrefa sau transplantul allogenic): receptorul i donatorul aparin aceleeai specii, dar sunt neidentici din punct de vedere genetic - situaia obinuit a grefelor realizate la om. xenogrefa (heterogrefa): cei doi parteneri provin din specii diferite. Mecanismele acceptrii sau respingerii unei grefe au o baz genetic, demonstrat de SNELL n anii '30 prin ncruciarea pe mai multe generaii a unor oareci de ras pur. Concluziile lui SNELL sunt considerate adevrate legi ale geneticii rspunsului antigref. (Fig.50)

158

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE

Fig. 50 Legile lui Snell

izogrefele nu sunt respinse; allogrefele sunt totdeauna respinse; hibrizii F1 tolereaz grefele provenite de la oricare dintre cei doi prini. Prinii nu tolereaz grefele de la descendenii lor de prim generaie (hibrizii F1); grefa provenit de la un animal A transplantat la un hibrid F2 (descendent de a 2-a generaie F1 x F1) sau de la un animal rezultat din ncruciare invers F1 (A x B)+ B prinde doar ntr-un numr mic de cazuri; grefa provenit de la animale F2 i de la indivizi produi prin ncruciarea invers este acceptat de receptori F1.

159

Concluzia general: genele care controleaz transplantarea esuturilor se transmit de la o generaie la alta dup legile mendeliene, ca gene autosomale-codominante. Destinul unei grefe depinde de diferenele de compatibilitate dintre cei doi parteneri: respingerea este provocat de o reacie imunologic (specific) a gazdei mpotriva antigenelor grefonului pe care le recunoate ca non-self. Reacia de respingere rezult din mpletirea unor mecanisme celulare i umorale aa cum argumenteaz urmtoarele observaii: oarecii nuzi i oarecii timectomizai neonatal sunt incapabili s resping allogrefele; restaurarea oarecilor timectomizai aduce dup sine redobndirea capacitii de respingere; 60% din celulele de reacie ale gazdei, care infiltreaz un grefon ( de ex. un rinichi) sunt LT activate; capacitatea de respingere a unui esut allogen poate fi transmis, de la un oarece presensibilizat (printr-o expunere prealabil la esutul respectiv) la un oarece sntos, cu ajutorul limfocitelor primului. Aceast transmitere este specific; cocultivarea a dou populaii de limfocite allogenice una provenit de la un animal A i cealalt de la un animal B, duce dup aproximativ 5-6 zile, la transformarea blastic i la proliferare. Aceast inducere de blastogenez este reciproc (mutual). Iradierea poate suprima capacitatea de proliferare a oricrei din aceste dou populaii. Prin acest procedeu celulele tratate rmn vii dar nereactive, devenind doar nite crui ineri de antigene. Populaia partener, indemn, va prolifera. Acest model de reacie in vivo a fost denumit reacie limfocitar mixt (unidirecional) (RLM). Majoritatea celulelor proliferante sunt LTCD4+ productoare de IL2. Prelungirea cocultivrii duce n final la citoliz direct mediat celular (CML= cell mediated lympholysis). CML este ndeplinit de LTc specifice, care se difereniaz n urma semnalelor helper emise n cursul etapei blastogenice. RLM este incitat de diferenele dintre produsele regiunii CMH D care sunt exprimate pe suprafaa celor dou populaii de limfocite. Recunoaterea acestor diferene CMH D. reprezint semnalul de activare a celulelor citotoxice efectoare din CML. Acestea vor ucide celulele-int pe baza recunoaterii Atg.CMH de clasa I exprimate pe suprafaa acestora. RLM i CML apar ca reproducerea in vivo a fenomenului de respingere a grefelor. dac un animal va primi o gref ( de ex. de piele) de la un animal A, el va distruge grefonul dup o laten de aproximativ 12 zile. n
160

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE primele zile grefonul evolueaz normal i se vascularizeaz. n perioada de rejecie grefonul se ncarc cu un puternic infiltrat limfo-plasmocitar, iar vasele apar obstruate cu trombi trombocitari i depuneri de fibrin. Repetarea experienei dup ctva vreme duce la eliminarea mai rapid a fragmentului de piele, iar a 3-a, a 4-a sau a 5-a grefare va fi rejectat din ce n ce mai repede, ajungnd pn acolo nct grefonul se va necroza i va fi eliminat nainte s apuce s se vascularizeze (grefa alb sau rejecia supraacut). n acest experiment animalul receptor sufer imunizri succesive n urma crora apar Atc. specifici de tip citotoxic care, fixnduse pe celulele endoteliului vaselor grefonului mpreun cu C', vor determina endarterita evocat mai sus. Complexitatea rspunsurilor declanate dup transplantare este legat de structura organului grefat: n cazul grefelor de organe vasculare reacia de respingere este unilateral: este o reacie a gazdei contra grefei; n cazul allotransplantului de mduv osoas (MO) respingerea este bilateral i simultan: o reacie a gazdei contra grefei dublat de o reacie a grefei contra gazdei (GVH= graft versus host). Allotransplantul de MO conine att celulele hematopoietice ct i celulele limfoide imunologic competente. Acestea din urm se sensibilizeaz mpotriva celulelor receptorului. Reacia gazdei contra grefei poate fi disociat n dou faze: inducerea (sensibilizarea); destrucia (respingerea) Prima faz este legat de recunoaterea Atg. de histocompatibilitate prezente n grefon de ctre Limfocite receptorului. Grefonul conine att Atg.CMH de clasa I (exprimate n general pe celulele tisulare i endoteliale) ct i Atg. CMH de clasa II-a (exprimate de celulele dendritice, de alte leucocite denumite pasagere- care exist n vasele grefonului- sau de celulele endoteliale vesculare). n cazul izogrefelor aceste molecule sunt identice cu cele ale receptorului. Respingerea nu se va produce dect dac, accidental, receptorul a fost presensibilizat mpotriva aa-numitelor Atg minore de histocompatibilitate ale donatorului.

161

Fig. 51 Mecanismele efectoare ale respingerii unei grefe

n cursul reaciei antigref se elaboreaz i diveri Atc. specifici, Atc. citotoxici cu urmtoarele efecte: au aciune antigrefon, se fixeaz pe Atg. de suprafaa i pot antrena C' (cu necroz celular) sau armarea celulelor K (cu inducerea unei reacii citotoxice de tip ADCC). Atc. blocani (facilitani) se ataeaz pe Atg. grefei pe care-i mascheaz fcndu-i inaccesibili recunoaterii de ctre Limfocite efectoare ale gazdei. n final mai multe mecanisme citotoxice pot aciona concentrat asupra celulelor-int: specifice - prin LimfociteT cit; nespecifice - prin celulele NK, Mcf i prin mecanismul ADCC (Fig.51).

9.6. GESTAIA: O RELAIE SPECIAL GAZD-GREF Fetuii sunt la mamifere, grefonii semi-allogenici n raport cu mama care i poart. Ftul i componentele sale difer genetic fa de mam dar eliminarea fetusului are loc numai dup trecerea termenului de gestaie, aspect care nu face altceva dect s confirme existena unei tolerane imune materno-fetale. Prin tehnica transferului de embrioni s-a putut n prezent obine nateri n totalitate allogenice la organsimul maternal. De asemenea, s-au transferat embrioni ai unei specii n uterul altei specii: de la zebr la iap (zebra 46 cromozomi i calul 64 cromozomi). Tehnica mai poate fi utilizat pentru ameliorarea reproduciei la anumite specii i pentru salvarea speciilor pe cale de dispariie. Aceste transfere heterospecifice sunt imunologic acceptate, aa cum este un zigot normal, semiallogenic. Este prin urmare nclcat principiul discriminrii selfului de non-self.
162

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Totui tolerana imunologic a produilor de concepie este proprie numai gestaiei, ntruct transplantele cu alte esuturi efectuate la femelele gestante sunt n mod frecvent respinse. 1. Imunitatea materno-embrionar Cercetrile efectuate cu ajutorul microscopului electronic, au artat c celulele trofoblastului sunt nconjurate de un strat amorf de natur mucoproteic care mascheaz antigenii. Aceast barier nu permite expunerea antigenelor ntre trofoblast i organismul matern, asigurnd din punct de vedere imunologic, fixarea grefonului semiallogenic. O mare proporie de celule ale trofoblastului prezint rezisten la liz, fie de origine celular, fie dependent de anticorpi. Mecanismul acestei rezistene constituionale este nc puin cunoscut. Meninerea gestaiei n primele stadii de dezvoltare embrionar se explic prin aciunea a dou tipuri de semnale embrionare, primul fiind n legtur cu activitatea antiluteolitic a embrionului, i al doilea cu activitatea luteotrop a acestuia. Primul semnal embrionar, a fost numit trofoblastin i are efect de inhibare a aciunii PGF2 alimfocitea printru-un mecanism local. Ea este sintetizat de trofoblast ncepnd cu ziua a 8-a de gestaie, titrul semnalului diminund dup ziua a 16-a la oaie i a 20-a la vac. Trofoblastina prezint o mare analogie structural cu alimfociteainterferonul, lucru care explic proprietile antivirale i antiproliferative ale trofoblastinei. Al doilea semnal embrionar este reprezentat de PGE, care exercit o aciune luteotrop, mrind sinteza de progesteron. Oprirea induciei acestor semnale are loc n momentul contactului ntre celulele trofoblastului i epiteliului uterin maternal legat de procesul de nidaie- inplantare. 2. Imunotolerana materno-fetal n imunotolerana materno-fetal intervin dou categorii de mecanisme: mecanisme regulatoare sistemice i mecanisme regulatoare locale. a) Mecanisme regulatoare sistemice Mecanismele sistemice care intervin n urma instalrii strii de gestaie sunt: apariia unor Atc. blocani i necitotoxici din clasa IgG4 n serul matern fa de Atg. de histocompatibilitate ale ftului, i a LTs,
163

sugerat de inhibiia reaciei de limfocitotoxicitate a mamei vis-a-vis de produsul de concepie cu ajutorul serului matern; rolul posibil a unor factori serici imunosupresori neoanticorpici (alimfociteafetoproteine) care sunt elaborai n cursul gestaiei; b) Mecanisme regulatoare locale Majoritatea autorilor atribuie actualmente un rol cheie mecanismelor regulatoare locale dintre care semnalm urmtoarele: anti-IL2 secretat de decidual i placent care blocheaz exprimarea receptorilor IL2 pe LT; prezena unui factor chimiotactic i difereniar al celulelor deciduale secretat de placent; secreia placentar a unor proteine inhibante ale celulelor K i NK; rezistena celulelor placentare la liza dependent de anticorpi i complement; existena unui imunodepresor alimfocitea-2 macroglobulina care servete la meninerea gestaiei i care n iminena grav de avort este sczut; uromodulina, prezent n cantitate mare n urina femelei gestante i care se comport ca un antagonist a IL-1; EPF - Early Pregnancy Factor-, un factor care inhib formarea rozetelor E la limfocite; rolul de barier protectoare al placentei fa de Atc. i celulele maternale; celulele placentei sunt nvelite cu o cantitate mare de glicocalix care mascheaz Atg. de histocompatibilitate.

9.7. IMUNITATEA ANTITUMORAL Circumstanele n care se produce reducerea eficienei aprrii imune reprezint o important situaie de risc pentru dezvoltarea unor boli maligne. Astfel de exemple pot fi gsite att n patologia uman ct i n cea animal: agamaglobulinemia ereditar legat de sex, sindromul Wiskott-Aldrich (boal ereditar legat de sex cu deficien grav a imunitii celulare i umorale menifestat prin triada infecii iterative, eczem i trombocitopenie), subiecii imunosupresai terapeutic (de ex. pentru meninerea unei grefe de organ); oarecii de ras NZB (New Zealand Black) prezint o multime de anomalii ereditare ale imunitii i o mare susceptibilitate la dezvoltarea unor limfoproliferri maligne
164

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE spontane. Deasemenea apariia mai frecvent a tumorilor maligne la vrstnici poate fi corelat cu instalarea unei imunodeprimri care este caracteristic acestei perioade a vieii. Invers, animalele cu reactivitate imun normal se poate opune la dezvoltarea unor grefe tumorale singenice. Acest gen de observaii a generat ideea c celulele tumorale sunt supuse controlului sistemului imun al gazdei, control care se exercit permanent ca un mecanism de supraveghere antitumoral (BURNET, 1967). Conceptul supravegherii imune se sprijin i pe argumente filogenetice: cancerul se dezvolt n aparen numai la vertebrate, la care apare i se perfecteaz i imunitatea specific. S-a postulat ipoteza c dezvoltarea imunitii ar putea fi expresia necesitii de a rezista mpotriva celulelor maligne. n 1943, LUDWIK GROSS aduce un puternic argument experimental in favoarea ipotezei controlului imun asupra tumorilor, lucrnd pe o su de oareci singenici la care a indus sarcoame cu ajutorul unei substane iritante (metilcholantren): oarecii la care s-a produs regresia tumorii resping celulele sarcomatoase vii la orice ncercare de reinoculare a acestora. Experimentul amintete ncercrile de transplantare cu celulele normale, dar cu diferena c n respingerea celulelor sarcomatoase nu pot fi incriminate Atg.CMH (deoarece oarecii sunt singenici) ci alte Atg. induse de transformarea malign, care se comport la fel cu Atg. de transplantare. Aceste neoantigene tumorale au fost denumite TSTA (tumor specific-transplantion-antigens). Ulterior s-au identificat pe suprafaa celulelor tumorale ale animalelor experimentale i alte tipuri de Atg. O parte din aceste Atg. sunt specifice agentului oncogen utilizat n experimente (Atg. induse de virusuri oncogene sau carcinogene chimice). Alte Atg. care apar pe suprafaa unor celule tumorale sunt aa-zisele Atg. onco-fetale (Atg. exprimate n mod normal pe celulele embrionare i fetale, care dispar n viaa postnatal, dar care sunt reexprimate dup malignizarea unor celule). La om, la care transplantarea sau inducerea experimental de tumori maligne nu poate fi utilizat, din motive etice nu a putut fi demonstrat existena antigenelor de tipul TSTA. Celulele maligne umane ar exprima conform mai multor observaii, neoantigene specifice pentru fiecare tip particular de tumor, iar anumite tumori umane exprim i Atg.fetale: Atg. carcinoembrionare Gold (n tumori colorectale i pancreatice), alimfocitea-fetoproteina (n hepatomul primar, seminom), sulimfociteoglicoproteina fetal (n cancerul gastric), fosfataza alcalin feto-placentar (n seminoame i teratoame). Aceste
165

Atg. au antigenicitatea slab i servesc mai ales ca markeri utili pentru diagnosticul n clinic al respectivelor tumori. Tumorile pot suscita o reacie complex de respingere la care iau parte att Atc. specifici ct i diverse tipuri de celule cu activitate citotoxic (Fig.52, fig. 54) Mecanisme de aprare umoral Atc citotoxici ar putea provoca moartea celulelor tumorale prin dou mecanisme: activarea C'; ataarea celulelor K (mecanismul ADCC); Anticorpii antitumorali au fost evideniai la bolnavii purttori de diferite tipuri de tumori. De regul aceti anticorpi sunt specifici pentru antigenele MHC ale celulelor tumorale. n funcie de gradul de imunogenitate al celulelor tumorale, producia de anticorpi specifici poate fi masiv sau slab. Anticorpii de mare afinitate pot mpiedica reapariia de noi clone tumorale, cu aceeai specificitate antigenic. Anticorpii cu afinitate redus nu sunt la fel de eficieni n blocarea antigenelor tumorale. Ei nu pot forma complexe cu antigenele tumorale eliberate, iar aceste complexe Atg-Atc pot constituit factori circulani blocai, care au capacitatea de a inhiba aciunea celulelor T efectoare. Anticorpii cu afinitate redus se pot fixa pe celulele tumorale, fr a realiza citoliza dependent de complement a acestor celule. n astfel de cazuri, ei pot totui contribui la citoliza prin celulele K sau prin macrofage.

Fig. 52 Mecanisme citotoxice antitumorale nespecifice


166

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Mecanismele de aprare celular n acest proces intervin n mod deosebit LTc, celulele NK i macrofagele. ntr-o prim faz, LT recunosc ca non-self, celulele tumorale. Aceast recunoatere se face n prezena i cu contribuia macrofagelor, care de altfel particip i la reacia inflamatorie tisular local.Asemenea procese inflamatorii activeaz macrofagele, care devin capabile s distrug nespecific celulele tumorale. LTc sunt considerat ca deosebit de eficiente n supravegherea imunologic. Uciderea celulelor int aparinnd grefelor sau tumorilor, este una din cele mai importante funcii efectoare ale imunitii celulare. (Fig. 53) LTc sunt derivate din precursorii antigen reactivi, care au proliferat i s-au difereniat n timpul rspunsului imun, fa de antigene de transplantare sau tumorale. Dup al 2-lea contact in vivo sau o expunere la celulele int, LTc devin capabile s ucid celulele care poart antigenul cu care au fost sesnsibilizate.

Fig. 53 Liza celulei tumorale prin limfocite T activate ( T citotoxice)

Efectul citotoxcic al LTc asupra unor celule int este specific i necesit un contact intim ntre efector i int avnd ca rezultat injectarea n celulele tumorale de substane cu efect citotoxic. Dup uciderea unei celule int, LTc se pot desprinde i pot aciona asupra altor celule tumorale. Dup modul de aciune se consider c uciderea intei se face n mod direct i nu prin intermediul unor mediatori solubili. Celulele NK sunt capabile s lizeze, n absena complementului, un mare numr de celule int normale i mai ales tumorale. Ele pot s recunoasc o gam variat de specificiti pe celulele tumorale, avnd o activitate citotoxic spontan, fr o sensibilizare prealabil. Prin
167

capacitatea de a fi prezente i active citotoxic, fr o imunizare o prealabil. celulele NK pot fi considerate a priori capabile s recunoasc celulele tumorale foarte timpuriu, n cursul dezvoltrii acestora i s-i exercite rolul de supraveghere prin calitatea de celule efectoare. Activitatea celulelor NK este necesar, n special, pentru a controla apariia metastazelor hematogene. Mecanismul lizei celulare ar implica 4 faze distincte: a. faza de recunoatere a celulei-int i formarea de contacte cu aceasta; b. faza de programare pentru liz, consecutiv legrii; c. faza de declanare a loviturii letale prin formarea unui complex litic; d. faza de liz a celulei-int, independent de celula efectoare. Se consider c celulele NK ar aciona printr-un proces de degranulare, cu eliberarea unor substane cu activitate citolitic rapid i puternic. La aceasta se mai adaug i secreia unor factori solubili citotoxici (NK cytotoxic factors). Prbuirea activitii celulelor NK, poate fi cel puin n parte, rspunztoare de lipsa unei frne n dezvoltarea tumorilor. Macrofagele au o activitate antitumoral demonstrabil, contribuind la producerea necrozei celulare ca i a altor fenomene asociate procesului tumoral. Participarea macrofagelor la fenomenele de rejecie a grefei nu este imunologic specific, activitatea lor nefiind condiionat de prezena antigenelor tumorale dect n prima faz, de iniiere a rspunsului imun, atunci cnd coopereaz cu limfocitul T pentru recunoaterea celulelor tumorale. Deoarece n etapa clinic, tumorile maligne umane evolueaz inexorabil, progresnd continu i dezvoltnd metastaze, trebuie admis o pierdere a controlului exercitat de supravegherea imunologic indiferent care ar fi substratul celular al acesteia. Mai multe mecanisme ar putea s concure la aceast pierdere a controlului asupra dezvoltrii tumorale: paralizia imun a gazdei, indus de copleirea aparatului imun de o cantitate enorm de Atg. tumorale; furiarea (sneaking-through) pe lng supravegherea imun a unui numr redus de celule tumorale la care, prin condiiile anatomice locale, accesul elementelor imunocompetente este redus; imunosupresia gazdei prin activarea LTs; imunodeficiena gazdei;
168

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE exprimarea slab a Atg. tumorale sau mascarea lor cu diverse substane prezente pe suprafaa celulei mutante, de ex. sialomucina (glicocalixul) care le protejeaz mpotriva atacului imunologic; modularea Atg. tumorale (internalizarea intracelular a Atg) sau desprinderea Atg. de pe suprafaa celular care ar bloca Atc. citotoxici departe de celulele-int; facilitatea imunologic : nvelirea Atg. tumorale,exprimate pe suprafaa celulelor maligne, cu Atc. care le izoleaz de componentele celulare ale aparatului imun; eliberarea de celule tumorale a unor substane solubile care ar inhiba migrarea Mcf. spre tumor.

Fig. 54 Rspunsul imun antitumoral i actiunea efectorilor umorali i celulari asupra celulei maligne

Descifrarea mecanismelor imunitare, n general i a mecanismelor imunitii antitumorale deschide n prezent mai multe ci de tratament al bolii canceroase, care utilizeaz anticorpi specifici, citokine sau celule imunologic competente:
169

a) anticorpi monoclonali (AcMo) specifici antitumorali pot fi folosii n terapeutic sub 3 forme: ca atare; cuplai cu ageni citotoxici sau bispecifici. Iniial s-au utilizat AcMo ca atare, n ideea c, dup fixarea lor pe celulele tumorale, pot stimula prin segmentul lor efector (Fc) elemente ale sistemelor distructive ale gazdei (complementul, macrofagele, celulele K). Rezultate ncurajatoare au fost obinute n unele limfoame limfocitare cu celulele B. Acestea sunt proliferri monoclonale de celule limfoide de fenotip asemntor limfocitelor mature. Date fiind aceste caractere, celulele limfomatoase exprim pe suprafa receptori imunoglobulinici cu idiotip unic. Pentru aceste tratamente s-au construit n laborator AcMo anti-idiotipici care se vor fixa selectiv pe celulele maligne mediind prin cile amintite, eliminarea lor. n mielomul multiplu, n care creterea plasmocitelor mielomatoase este stimulat de IL6, blocarea proliferrii tumorale poate fi obinut cu AcMo anti-IL6. Efectele AcMo n tumorile solide au fost mai vagi. Particularitile vascularizaiei intratumorale, exprimarea slab a antigenelor asociate tumorii, modularea antigenelor, neutralizarea Atc. n snge de ctre Atg. desprinse de pe tumor sunt cauze probabile care explic aceste semieecuri. AcMo cuplai cu dorguri citotoxice sau cu izotopi radioactivi ar servi ca vehicole pentru o terapie intit. Unele rezultate ncurajatoare au fost observate n limfoame. Recent a devenit posibil construirea unor molecule de AcMo hibride, care conin Fab-uri cu specificiti combinatorii diferite: pentru Atg. ale celulei tumorale i pentru markeri ai unei celule citotoxice. Asemenea Atc. bispecifici au fost ncercai n tratamentul melanomului metastazat. O limit major a tratamentelor cu AcMo este antigenicitatea acestora: fiind produi de linii celulare murine ei trezesc rapid sinteza de anticorpi neutralizani la pacienii care urmeaz aceste scheme. n prezent se ncearc prin metodele de inginerie genetic crearea unor anticorpi terapeutici mai puin imunogenici prin sudarea unor Fab-uri de provenien murin cu resturi de Ig umane. b) Terapia cu citokine Interferonii prezint activitate antineoplazic, mediat de unele dintre efectele lor anticelulare (modificarea ciclului celular, interferarea fenotipului oncogenelor) i imunomodularea (modificarea expresiei Atg.CMH, activarea Mcf i a celulelor NK). IFN este activ n leucemia cu tricoleucocite (hairy cell leukemia), leucemia limfatic cronic, limfoame, leucemia granulocitar cronic, mielom multiplu, melanom metastazat,
170

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE sarcomul Kaposi secundar sindromului de imunodeficien dobndit (SIDA). IL2 (singur sau asociat cu IFN gama) este un activator major a trei categorii de celule efectoare (LTc., Mcf i celulele NK), cu ajutorul crora este capabil s stpneasc proliferarea unor limfoame, neoplasme renale sau colonice sau a melanomului diseminat. c) Terapia cu celulele imunocompetente Are ca principiu izolarea unor subseturi purificate de celule, cultivarea lor cu citokine ( de ex. cu IL2) n vederea activrii lor n vitro i reinjectarea lor ulterioar la bolnavul de la care au fost recoltate. n prezent sunt utilizate n acest model elemente denumite convenional LAK (Lymphokine activated killers), provenite din celulele NK, MAK (Macrophages activated killers) derivate din monocite circulante i TIL (Tumour-infiltrating lymphocytes). Primele sunt izolate din snge. TIL se recolteaz din fragmente tumorale rezecate chirurgical. Sunt celule limfoide care infiltreaz tumora. Dup activarea lor in vitro dobndesc prioprieti citotoxice asupra tumorii. Reinjectate la bolnavii donatori ele migreaz preferenial n teritoriile tumorale unde-i desfoar aciunile lor citotoxice. n plus, ele pot fi transformate prin diverse manipulri, n ageni vectori de substane antineoplazice.

171

CAPITOLUL 10
IMUNITATEA LOCAL
Sistemul imunitar local al organismelor superioare are scopul de a proteja spaiile, n mod particular vulnerabile, ale organismului, piele i mai ales mucoasele. Acestea sunt locuri de trecere sau de schimburi importante. n starea normal, anumite spaii aa cum sunt intestinul i pielea, adpostesc o flor considerabil i variat, altele sunt sterile, aa cum este poriunea profund a tractusului respirator, glanda mamar sau uterul. Toate pot deveni sediul populaiilor bacteriene sau parazitare, a multiplicrii virale i, din acest punct de vedere, al agresiunilor mai mult sau mai puin severe. Sistemul imunitar secundar local trebuie s combat aceste atacuri dar n acelai timp este necesar s fac distincia ntre antigenele potenial duntoare aa cum sunt cele ale organismelor patogene i cele care nu sunt prejudiciabile pentru organism, aa cum sunt cele alimentare sau ale florei comensale. Organele expuse la agresiunile exterioare posed toate mecanismele de aprare specific i nespecific. Primele care se disting sunt cele ale imunitii generale cu urmtoarele particulariti: o imunitate umoral avnd la baz anticorpii de izotip A, anticorpii avnd proprieti biologice proprii i o imunitate celular cu un numr mare de populaii celulare. De asemenea, circulaia limfatic i cea anticorpic permite conexiuni ntre diversele componente ale sistemului imun. 10.1. IMUNITATEA TRACTUSULUI DIGESTIV Mucoasa tractusului digestiv i n special cea intestinal sunt sedii rezideniale pentru numeroase celule izolate, provenite din circulaia sanguin, care vin s-i stabileasc domiciliul permanent n aceste locuri. Majoritatea acestor celule sunt limfocite i plasmocite. La om, proporiile de plasmocite pentru IgA, IgE, IgG se situeaz aproximativ la nivelul de 85,10% din numrul total de plasmocite.
172

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Plasmocitele pentru IgD i IgE sunt n numr foarte limitat: acestea pot uneori s creasc de o manier semnificativ n anumite alergii sau parazitoze. La numeroase specii, numrul de plasmocite pentru IgA domnin lejer n comparaie cu alte izotipuri. Aceste celule imune provin n mare parte din imunoblastele canalului toracic i ntr-o oarecare msur, din plcile lui Peyer (Fig. 55)

Fig. 55 Placa Peyer

Timpul de njumtire al plasmocitelor intestinale este relativ scurt, de 2-5 zile la oareci. Lamina proprie a mucoasei intestinale conine n egal msur numeroase LT, mai ales auxiliare (CD4), dar i citotoxice/supresoare (CD8). Cele 5 clase de imunoglobuline care se cunosc la om i animale, se regsesc, practic, n toate lichidele biologice ale organismului. Totui, concentraia lor variaz n anumite limite n funcie de localizarea lor. n secreiile interne, raportul IgG/IgA se situeaz aproximativ la valoarea 4, ca i n serul sangvin. Din contr, n secreiile externe, aa cum sunt cele din pulmon sau lumenul intestinal, raportul IgG/IgA este egal sau inferior cifrei 1. Aceste raporturi demonstreaz cu claritate c Ig gsite n secreiile externe nu sunt rezultatul unor simple filtraii a plasmei sangvine, sinteza IgA secretorii fiind realizat la nivelul mucoaselor. Caracteristicile proprii ale moleculelor IgA sunt:

173

- rezistena lor la depolimerizare prin ageni capabili s rup legturile disulimfociteurice; - polimerizarea lor i prezena lanurilor proteice suplimentare; - piesa de jonciune i componentul secretor. Acestea le confer IgA secretorii determinani antigenici suplimentari i o greutate molecular superioar celei a IgA serice. Proprietatea cea mai interesant atribuit anticorpilor IgA este puterea lor neutralizant asupra toxinelor i virusurilor prin blocarea receptorilor membranari. Enorma acumulare de plasmocite n mucoasa tractusului intestinal pare dependent n mod esenial de stimulrile antigenice provenite de la flora intestinal, n timp ce acestea practic lipsesc la animalele axenice. Antigenul introdus pe cale oral, induce rspunsul imun la nivelul mucoasei intestinale i care se caracterizeaz printr-o abunden de plasmocite precursoare pentru IgA. n anumite circumstane este deasemenea, posibil inducerea rspunsurilor imune pentru IgE. O alt categorie de fenomene declanate prin ingestia oral a antigenului o reprezint tolerana. Mai muli autori au demonstrat c adminsitrarea pe cale oral a unui antigen la obolan sau la oarece, aa cum este ovalbumina, conduce rapid la o toleran sau cel puin, la o net hiporeactivitate faa de acelai antigen, inoculat pe cale general. Aceasta este dat probabil de numeroasa populaie de LTs existent n plcile Peyer al epiteliului intestinal, dar i de alte mecanisme care au fost descrise. S-au descris la nivelul tractusului intestinal, att o serie de mecanisme nespecifice de protecie ct i o serie de mecanisme specifice. Mecanisme nespecifice Bariera constituit din epiteliul intestinal opune cu certitudine o rezisten important la invazia mediului intern. Acest rol este cu att mai dificil de jucat cu ct acesta trebuie s fie i selectiv. Epiteliul intestinal este continu renoit. Celulele su se divid in fundul criptelor Lieberkuhn i se distribuie apoi n lungul vilozitilor. Ajunse la extremitatea lor ele sunt dispersate n lumenul intestinal. Diverse substane bactericide exist n egal msur i la nivel intestinal, unele fiind deversate n intestin, iar altele sintetizate local. Sucul gastric cu pH foarte sczut i secreiile biliare, pot anihila n mod particular virusurile cu anvelop lipidic, mucusul cu rol important n protejarea suprafeei intestinale contra variaiilor de pH i a microorganismelor, lizozimul, lactoperoxidaza i uneori, lactoferina, au roluri antibacteriene.
174

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE n principal mecanismul de aprare nespecific este asigurat de flora bacterian intestinal. Bacteriile sunt considerate ca autohtone cnd ele pot crete n anaerobioz, sunt totdeauna prezente la adultul normal, colonizeaz anumite poriuni din intestin, implantndu-se de la natere i sunt intim asociate epiteliului intestinal. Aceast flor bacterian ofer o rezisten important i eficace prin antagonism bacterian fa de toate modificrile produse n intestin i mai ales, n cazul contaminrii cu specii bacteriene patogene. Mecanisme specifice Sistemul imunitar intestinal este stimulat de flora intestinal (vezi sch.traficului antigenelor i a limfocitelor B i T de la intestin la intestin) (Fig.56).

Fig. 56 Drumul parcurs de antigene i de limfocitele B i T de la intestin la intestin

Bacteriile patogene din intestin nu pot s-i exprime patogenitatea dect dup adeziunea lor la epiteliul intestinal (E. coli, Vibrio cholerae) sau dup penetrarea acestuia (Shigella, Treponema, Salmonella). Rolul anticorpilor din clasa IgA n mpiedicarea adeziunii bacteriilor patogene la epiteliul intestinal a fost demonstrat de FUBARO i FRETER. Moleculele anticorpilor IgM i IgA pot neutraliza toxinele bacteriene n interiorul mucoaselor intestinale, iar sub forma secretorie
175

n exteriorul mucoaselor. Mai mult, ele pot aglutina virusurile i bacteriile i s mpiedice deasemenea diviziunea acestora din urm. Se pot decela i anticorpi de izotip IgE n mucoasa intestinal i uneori n sucul intestinal n cazul alergiilor digestive sau parazitozelor helmintice. Aceti anticorpi IgE sunt susceptibili s antreneze reacii alergice locale care particip la eliminarea paraziilor. Anticorpii IgE mpreun cu macrofagele i eozinofilele exercit o aciune citotoxic anticorpodependent care distruge paraziii. Reaciile celulare la nivelul intestinului sunt relativ puin cunoscute. Lamina proprie conine numeroase LT. Funciile acestor celule sunt nc puin studiate, dar ele includ fenomene de hipersensibilitate ntrziat (tipul IV), citotoxicitate, de citotoxicitate anticorpodependent precum i de citotoxicitate mediat de celulele NK. 10.2. IMUNITATEA TRACTUSULUI RESPIRATOR Pulmonul este nainte de toate organul unde se efectueaz schimburile gazoase ntre aerul ambiant i organism. El particip deasemenea, n mod activ la defensiva acestuia din urm contra agresiunii din mediu, putnd fi sediul reaciilor imune locale sau sistemice. n ultim instan, tractusul respirator este n mod continu, expus particulelor i microorganismelor prezente n aerul ambiant. Particulele mai mari (peste 15 ) sunt interceptate n partea superioar a cilor aeriene cuprinse ntre narine i bronhiile de calibru intermediar, iar strnutul, tusea clearence-ul mucociliar i anticorpii din clasa IgA n forma lor secretorie constituie principalele mecanisme de eliminare. Dimpotriv, cile aeriene inferioare i alveolele sunt lipsite de sistemul de epurare mecanic i depind aproape exclusiv de sistemul fagocitar pentru eliminarea celor mai mici particule care se pot depune. n condiii normale, macrofagele constituie majoritatea fagocitelor din alveole i din interstiiul pulmonar. Se disting mai multe tipuri de macrofage n pulmon, macrofage alveolare, macrofage bronhice, macrofage interstiiale i macrofagele intravasculare. n afara de funcia de fagocitoz, macrofagele pulmonare particip activ la reaciile imune locale. Aceast participare se explic pe deoparte prin bogia lor n receptori membranari i pe de alt parte prin eliberarea mai multor mediatori. Dintre aceti mediatori se pot reine n mod particular metaboliii oxigenului, enzimele, monokinele i lipidele bioactive. Derivaii de oxigen n particular, radicalul hidroxil (OH) i peroxidul de hidrogen (H2O2) sunt puternici ageni bactericizi i tumoricizi. Monokinele sunt hormoni care permit celulelor s comunice
176

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE ntre ele. Astfel, factorul necrozant al tumorilor (TNF) i interleukina 1 (IL1), au un larg spectru de aciune, favoriznd aderena fagocitelor la celulele endoteliale, recrutarea i activarea limfocitelor T i a polinuclearelor, promovnd creterea fibroblastic. n sfrit, derivaii de acid arachidonic i factorul activator al plachetelor (PAF) sunt principalele lipide bioactive. Aceast capacitate a macrofagului alveolar de a rspunde la o ntreag serie de stimuli (factori ai complementului, imunoglobuline, complexe imune, endotoxine, citokine, lipide, etc.) i de a elibera un larg evantai de mediatori confer fagocitozei un rol de pivot n reaciile inflamatorii i imune de la nivelul pulmonului. Limfocitele sunt localizate n diferite spaii anatomice ale pulmonului. n primul rnd ele se gsesc n ganglionii limfatici de la nivelul marilor bronhii, apoi n nodulii limfoepiteliali ce se afl n relaie strns cu endoteliul bronhic. Aceti noduli corespund plcilor Peyer din tractusul digestiv i au fost denumii esut limfoid asociat bronhiilor, sau sub abrevierea de BALT n literatura anglo-saxon. n final, se gsesc limfocitele izolate n lumenul alveolar. Polimorfonuclearele neutrofile sunt prezente n bronhii dar sunt virtual absente n alveole. n anumite circumstane patologice acestea pot ptrunde i n alveole. Polinuclearele eozinofile, graie receptorilor Fc sunt capabile de citotoxicitate dependent de anticorpi. O cretere a numrului de eozinofile n secreiile pulmonare survine n cursul reaciilor de hipersensibilitate, rezultat a infestaiilor parazitare, fie a inhalrii de alergeni.n secreiile cilor respiratorii se gsesc i numeroi factori umorali nespecifici cu activitate antibacterian. Neutrofilele, macrofagele i celulele epiteliului glandular produc lizozine care degradeaz peretele celular al bacteriilor Gr+. Macrofagele, LT i epiteliul cilor respiratorii produc interferoni care posed proprieti antivirale. Se mai evideniaz lactoferina, transferina i componeni ai complementului care sunt capabili de activitatea antibacterian. Imunoglobulinele detectate n secreiile cilor respiratorii la numeroase specii de animale sunt IgA, IgG i IgM. IgA i IgG predomin dar raportul lor variaz n funcie de diferitele spaii ale tractusului respirator. IgA sunt majoritare n cile respiratorii superioare, n timp ce IgG cresc n poriunea distal a tractusului pentru a deveni predominante la nivel bronho-alveolar. Prezena IgM este totdeauna discret n cile respiratorii superioare (anterioare), dar mai marcat n bronhiole i alveole.
177

Vaccinurile pe cale nazal sau infeciile la acest nivel antreneaz o concentraie mare de IgA specifice n cile respiratorii superioare, ce constituie o bun protecie contra virusurilor i bacteriilor ce se ataeaz la mucoasa respiratorie. Imunitatea bronhic Inhalarea constant de antigeni constituie un factor favorizant a rspunsurilor imune, mai nti la nivel nazal apoi bronhic. Depunerea antigenelor i formarea complexelor imune la suprafaa epiteliului bronhic sunt etape cruciale n patogenia astmului extrinsec sau alergic. Fiziopatologia astmului caracterizat prin bronhoconstricie, edem submucos i hipersecreie bronic este nc imperfect cunoscut. Imunoglobulinele i mastocitele tisulare din submucoasa bronic sunt protagonitii majori ai reaciei reaginice sau a hipersensibilitii imediate din astm. n timpul crizelor de astm, eozinofilele i neutrofilele se acumuleaz n bronhii atrase de marile cantiti de ageni chimiotactici eliberai de mastocite. Mastocitul conine i mari cantiti de ageni bronhoconstrictori aa cum sunt: histamina, prostaglandina D2, leucotrienele C4, D4, E4 etc. Imunitatea pulmonar Reaciile imune fac parte din mecanismele de defensiv ale pulmonului contra tuturor antigenelor, microorganismelor sau virusurilor care afecteaz cile aerofore terminale i alveolare. Un depozit excesiv de antigene pot antrena o reacie imun intens asociat sau nu fenomenelor lezionale. Reacia imuno-acut se acompaniaz n mod obinuit de un edem interstiial alveolar i de un aflux de polimorfonucleare neutrofile din capilarele pulmonare n spaiul alveolar. Pneumopatiile de hipersensibilitate sunt deseori citate ca exemple de reacii imune cu complexe imune, care se acompaniaz de o intens reacie inflamatorie iniial, urmat de o faz subacut i evolund spre cronicizare n cazul cnd stimularea imun persist. n cazul alveolitelor extrinseci, antigenul este deseori cunoscut (de ex. IgA de porumbel n boala cresctorilor de porumbei sau proteinele derivate din Thermoactinomyces faeni pentru pulmonul de fermier). Testele de provocare realizate prin inhalarea antigenului declaneaz o reacie imun imediat caracterizat printr-o acumulare de polimorfonucleare neutrofile n cile aeriene distale i alveole. Aceast reacie imediat este urmat de o faz subacut asociat unui aflux de limfocite, uneori de tip supresor/ citotoxic. Se ajunge n ultim
178

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE instan la o remaniere de tip fibros la nivelul interstiiilor alveolare cu depuneri de colagen de tip I la nivelul stromei interstiiale, proliferarea fibroblastelor stromei i nlocuirea celulelor epiteliale alveolare aplatizate de tip I prin celulele cubice de tip II. Aceast fibroz antreneaz o mai slab difuziune a gazelor prin traversul membranei alveolo-capilare. Acest tip de leziuni fibrozante se regsesc n egal msur n patologia strict pulmonar aa cum este fibroza pulmonar idiopatic ct i n imunopatologiile sistemice aa cum sunt anumite boli autoimune i reumatismale, sau mult mai rar sarcoidioza. 10.3. IMUNITATEA TRACTUSULUI UROGENITAL Tractusul urogenital joac un rol important n aprarea organsimului, bazat pe mecanisme specifice sau nespecifice. Simplul flux urinar i pH-ul urinei asigur o anumit protecie. Prezena unui epiteliu pluristratificat, bogat n glicogen,la nivelul vaginului furnizeaz prin descuamare un substrat abundent pentru dezvoltarea florei specifice care intr n competiie cu germenii patogeni (rezisten la colonizare). Flora vaginal normal, constituit n principal din Lactobacillus acidophilus, produce cantiti mari de acid lactic care scade pH-ul vaginal i contracareaz proliferarea anumitor microorganisme patogene. Nivelul de glicogen al celulelor epiteliale este sub control estrogenic la femele, infeciile vaginale aprnd mai frecvent nainte de pubertate i mai ales dup menopauz. Estrogenii provoac n acelai timp un aflux de polimorfonucleare neutrofile la nivelul mucoasei uterine, ce contribuie la eliminarea germenilor prin fagocitoz. Aceasta explic rezistena mai mare la infecii a uterului n faza folicular. Progesteronul, dimpotriv, exercit o aciune invers. n afara acestor mecanisme neimunologice, anticorpii din diferite clase, mai ales din clasa IgA sunt regsii n urin i n mucusul cervico-vaginal. Aceste imunoglobuline protejeaz n mod eficace mucoasele, n special prin prevenirea adeziunii anumitor virusuri, bacterii i levuri pe suprafaa epitelial. Totui, pot fi detectate n urin mucusul cervic-vaginal, sperm i imunoglobuline din clasele IgE, IgG, IgM. Concentraia IgG crete foarte mult atunci cnd apar reacii inflamatorii. Mai mult, prezena celulelor sangvine n mucusul vaginal i reaciile de hipersensibilitate ntrziat de tipul IV, observate n cazul infeciilor cu Campylobacter fetus denot c i imunitatea
179

celular particip n egal msur la defensiva imun a tractusului urogenital. Tractusul genital mascul Prezena anticorpilor n secreiile prepuiale este frecvent n cazul infeciilor cu microorganisme, dar rolul lor exact nu este cunoscut. Dimpotriv, prezena anticorpilor antispermatici n plasma seminal i n ser, paote fi la originea anumitor cazuri de infertilitate la om i animale. Prezena acestor anticorpi rezult dintr-o autoimunizare sau este consecina unei rupturi a barierei hematotesticulare n urma traumatismelor, inflamaiilor, obstruciei tubare sau vasectomiei. n medicina veterinar, rolul lor este mai puin cunoscut, dar poate explica anumite cazuri de infertilitate. Tractusul genital femel Existena unui rspuns imun, datorat infeciei tractusului genital femel, a fost studiat n situaia de infertilitate la vac. Astfel, infecia acesteia cu Mycoplasma bovigenitalium sau M. bovis se asociaz cu prezena aglutininelor n mucusul cervico-vaginal, putnd s promoveze de o manier semnificativ, fagocitoza, aspect descris in vitro s mpiedice adeziunea micoplasmelor la suprafaa mucoaselor, sau s inhibe creterea lor. n infeciile cu Trichomonas fetus i Trichomonas vaginallis, rspunsul imun local este dat n principal de IgE, cel puin la femeie. Reacia de hipersensibilitate local care rezult st la baza simptomatologiei, dar afecteaz i permeabilitatea vascular cu creterea concentraiei locale n IgG. Rspusnul imun la infeciile cu Candida albicans a fost n particular studiat la specia uman. Aceast levur este un microorganism comensal, prezent n tractusul digestiv al omului i animalelor; ea este considerat din aceast cauz ca un microorganism endosaprofit. n caz de modificare a sistemului hormonal (graviditate), schimbri n flor intestinal (antibioterapie), imunodepresia (administrarea de glucocorticoizi) sau n prezena altor factori favorizani, Candida albicans se dezvolt i poate invada diferite organe ale corpului. La nivelul mucoasei vaginale, fagocitoza este mecanismul de aprare nespecific principal. Aici se gsesc polimorfonuclearele neutrofile, i n msur mai mic macrofagele, care fagociteaz i distrug Candida albicans dup opsonizarea prin anticorpi. Polimorfonuclearele
180

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE neutrofile ader n egal msur la formele hifale ale levurii, care sunt fagocitate i distruse datorit enzimelor lizozomale proprii. n stadiul de dezvoltare hifal defensiva organismului este n general insuficient, dar o intervenie terapeutic conduce n general la vindecare. Mai mult, au fost descrise i mecanisme specifice ale defensivei imune n care LT par s joace un rol importnat. n sfrit prezena aglutininelor n mucusul cervico-vaginal poate fi detectat n vederea unui test de diagnostic. Aceast situaie este asemntoare i pentru bruceloz, campilobacterioz i trichomonoz. 10.4. IMUNITATEA GLANDEI MAMARE Ameliorarea condiiilor de cretere i igien, alturi de o antibioterapie adecvat au permis reducerea incidenei mamitelor; cu toate acestea numeroase infecii intramamare subzist endemic. n defensiva glandei mamare fa de diveri ageni microbieni, intervin att mijloace de aprare nespecifice ct i specifice. Prima linie de aprare a glandei mamare contra agenilor patogeni este reprezentat de canalul papilar. Muchiul sfincterului ce nconjoar canalul, mpiedic contaminarea bacterian prin meninerea n poziie nchis a orificiului acestuia. Pierderea tonusului muscular al sfincterului conduce la creterea sensibilitii la infecii intramamare. Mulsul contribuie deasemenea, la expulzarea bacteriilor ce pot exista n orificiul sau interiorul canalului. n mod normal, cheratina, care se gsete la suprafaa canalului papilar, obstruiaz parial deschiderea acestuia, mpiedicnd penetrarea bacteriilor. n cartierele sensibile, acest strat de cheratin este mai subire, mai puin dens i se deta mai uor de epiteliu, dect cel ce acoper interiorul cartierelor mai rezistente. n plus,cheratina care provine din cartierele mai rezistente conine o concentraie semnificativ de acizi lauric, miristic i palmitic, n timp ce n cartierele sensibile sunt mai crescute concentraiile n acid stearic, linoleic, oleic. Proteienele cationice, aa cum este ubicvitina, izolat din cheratin mpiedic creterea lui Streptococcus agalactiae i Staphylococcus aureus. Concentraia lizozimului n lapte este de aproximativ 1,3 g/ml i ea crete n decursul infeciilor intramamare. Aceast protein distruge bacteriile prin liza peretelui, reprezentat de peptidoglicani. O deficien n lizozim predispune glanda mamar la infecii. Lactoferina este o substan bacteriostatic, care reine fierul ce este absolut necesar pentru dezvoltarea bacteriei. Este prezent n
181

laptele normal n cantitate sczut fiind secretat de celulele epiteliale i leucocite. Prezint eficacitate n defensiva contra stafilococilor i coliformilor intervenind totodat i n modulaia funcional a macrofagelor, limfocitelor i polinuclearelor neutrofile. Sistemul lactoperoxidaz/tiocianat -H2O2 din lapte mpiedic creterea lui Staphylococcus aureus, a mai multor specii de streptococi i a califormelor. n ceea ce privete activitile celulare din glanda mamar, este binecunsocut n prezent faptul c celulele somatice cel mai adesea ntlnite n secreiile mamare sunt neutrofilele, macrofagele, limfocitele, plasmocitele, eozinofilele i celulele epiteliale. Proporia acestor celule variaz n funcie de stadiul lactaiei, specie i individ. Dup ce au depit prima barier de aprare, reprezentat de canalul papilar, bacteriile ntlnesc o a doua, reprezentat de leucocitele cu rol fagocitar. Majoritatea leucocitelor prezente n colostru i n caz de inflamaie a glandei mamare sunt reprezentate de polimorfonucleare neutrofile. Acestea fagociteaz i omoar bacteriile de aceeai manier ca i macrofagele care reprezint majoritatea leucocitelor n laptele neinfectat. Macrofagele au ca origine probabil populaiile din esutul conjunctiv interalveolar i din epiteliu. Macrofagele intervin n fagocitoza i liza bacteriilor precum i n inducerea imunitii mediate celular prin prezentarea antigenului prelucrat limfocitului. ntre celulele limfocitare prezente n lapte, pe durata lactaiei, aproximativ 45% sunt LT, 20% LB i altele sunt celule nedifereniale. LT sunt responsabile de reacia citotoxic i de producia limfokinelor. Aceste limfokine sunt chimiotactice pentru polimorfonucleare neutrofile i macrofage; ele servesc,deasemenea, la stimularea activitii leucocitare. Contactul LB cu antigenele bacteriene favorizeaz multiplicarea clonelor sensibile i maturarea lor n plasmocite. n ceea ce privete efectorii umorali, s-au evideniat n secreiile glandei mamare toate clasele de imunoglobuline. La rumegtoare imunoglobulinele predominante n lapte sunt IgG, urmate de IgG2. IgM i IgA sunt prezente n cantiti mai sczute. Majoritatea IgG sunt derivate din ser, n timp ce IgM i IgA sunt secretate local. Concentraia anticorpilor n lapte este sczut (1 mg/ml) i depinde de gradul de permeabilitate vascular a esuturilor glandei mamare. Cnd permeabilitatea crete, concentraia de anticorpi poate atinge 50 mg/ml, nivel care se regsete n colostru i n laptele provenit dintr-o gland mamar infectat. Rolul principal al anticorpilor din lapte este opsonizarea bacteriilor invadante i facilitarea fagocitrii lor de ctre
182

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE polimorfonucleare neutrofile. Imunoglobulinele mai importante pentru fagocitoza bacterian par a fi IgG2, polimorfonuclearele neutrofile avnd mai muli receptori pentru IgG2, dect pentru IgG1. Alte studii efectuate la bovine au demonstrat c IgM constituie cele mai bune opsonine pentru stafilococi, ele crescnd eficacitatea fagocitozei i implicit a proporiei lizei bacteriilor fagocitate. IgM activeaz complementul i favorizeaz formarea fraciunii C3b, care se depune la suprafaa bacteriilor determinnd fagocitarea acestora de ctre neutrofile. IgA din lapte nu are rol opsonizant, dar ea previne aderena bacteriilor la membranele epiteliale, aglutineaz i inhib multiplicarea acestora sau le neutralizeaz toxinele. Un serios handicap al glandei mamare este concentraia sczut a tuturor izotipurilor de Ig din lapte, comparativ cu serul. Infeciile intramamare sunt mai frecvente n absena lactaiei. Intervine n acest caz creterea presiunii interne n glanda mamar care provoac dilataia canalului papilar, favoriznd penetrarea bacteriilor, producndu-se totodat i o acumulare a citotoxinelor bacteriene, n glanda mamar. Utilizarea antibioticelor precum tetraciclinele, cloramfenicolul, gentamicina, novobiocina i penicilina poate diminua pn la 54% capacitatea de fagocitoz n glanda mamar dar efectele banefice legate de utilizarea lor contrabalanseaz efectele negative. Dimpotriv, dac bacteria este rezistent la antibiotice, efectele negative pot fi serioase i necompensate. 10.5. IMUNITATEA PIELII Pielea, tegumentul extern sau nveliul cutanat, ca organ de acoperire al corpului animal, exercit prin poziia sa rolul de intermediar intre mediul extern i intern. Aceast poziie privilegiat determin relaii funcionale strnse cu organele protejate, crora le asigur mediul normal de activitate. La rndul lor, organele protejate influeneaz integritatea morfologic i funcional a pielii. Dintotdeauna s-a insistat asupra rolului protector al pielii fa de numeroasele ingerine din partea mediului extern prin factorii mecanici, fizici i biotici. Cercetrile ultimilor ani vin s completeze rolul protector al pielii prin relevarea unei noi funcii, aceea de organ imunitar (Fig.57) Ca barier a mediului extern, asemntor altor bariere, pielea este dotat cu o vascularizaie i o inervaie bogat, ct i cu sistem imunitar complex, capabil nu numai s capteze informaiile antigenice, ci i s le transmit organelor imunoformatoare i s reacioneze promt n
183

procesele de aprare local i general a organismului. Dei reactivitatea deosebit a stratului papilar al dermului (stratul cel mai reactiv din structura pielii) este cunoscut de mai mult timp, abia din 1970, studiul markerilor i a funciunilor imunologice ale celulelor lui Langerhans a permis consacrarea pielii ca organ imunitar.

Fig. 57 Seciune schematic prin piele

Cercetrile i observaiile clinice n legtur cu limfoamele pielii au sugerat c aceasta ar avea o funcie analoag timusului. Ipoteza legturii strnse dintre timus i piele este confirmat de existena, mai ales la animalele de laborator, a numeroaselor mutante care afecteaz concomitent pielea i timusul. Astfel, la oareci este cunsocut mutanta nu. (nude mutation recissive), plasat pe cromozomul 11, care n stare homozigot determin absena complet a prului i agenezie mai mult sau mai puin total a timusului. Aceti oareci sunt incapabili s matureze unele LT. Ei pot fi parial normalizai prin transfuzie de LT. Separarea genelor responsabile de absena prului de cele responsabile de agenezia timusului a fost imposibil, fapt care dovedete c cele dou seturi de gene sunt fie identice, fie strns legate pe acelai cromozom.

184

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Mutante care dovedesc absena nveliului pilos i diferite leziuni congenitale ale timusului (pn la absena total a acestuia) au mai fost descrise la obolani, cobai, hamsteri. La oarece a mai fost descris mutanta bg (beige), gen mutant recisiv plasat pe cromozomul 13, care antreneaz o profund modificare a culorii pelajului i o diminuare important a rezistenei la infecia indivizilor homozigoi. Este echivalentul la oarece a maladiei Chediak-Higashi de la om. La obolan este descris mutanta mK, indus prin iradiere, caracterizat prin anomalii ale prului i o mare sensibilitate la infecii. Studii electronomicroscopice au dovedit unele asemnri ultrastructurale ntre timus i epiderm. Astfel, unele celule epiteliale timice sunt dotate cu structuri granulare specifice care par s fie identice cu granulele din cheratinocitele epidermului. Cercetri cu anticorpi monoclonali fluoresceni au dovedit existena unor cantiti de cheratin (protein considerat proprie celulelor epidermice) n celulele epiteliale timice. Un alt punct de legtur ntre timus i piele este enzima dinucleotidiltransfarez, detectat n limfocitele ajunse ntr-un anumit stadiu de maturaie n timus, dar care nu apare n limfocitele T mature. Dac LT sunt puse n cultur mpreun cu cheraticite, enzima i face apariia n cultura celular. Ulterior s-a dovedit intervenia cheratinocitelor n maturarea parial a LT, prin intermediul unui hormon analog timopoietinei (hormonul timic cu rol principal n maturarea LT). Cercetri cu anticorpi monoclonali fluoresceni au identificat pe suprafaa celulelor epiteliale timice productoare de timopoietin, trei receptori specifici TE4, A2Ba i q19. Aceti receptori au fost gsii i pe suprafaa membranei cheratinocitelor din stratul bazal al epidermului care produc hormonul asemntor timopoietinei. Un alt argument n favoarea rolului imunitar al cheratinocitelor ar fi faptul c vieii cu paracheratoz congenital au o susceptibilitate crescut la infecii. La vieii respectivi se constat o hiperplazie a timusului. Legtura funcional dintre piele i sistemul imun este susinut i de constatarea faptului c o substan exogen care ptrunde n organism pe cale cutanat nu poate deveni imunogen, dect dac este prezentat limfonodurilor de ctre limfocitele cantonate n tegument. Substanele foarte imunogene, ca dinitrofluorbenzenul, aplicate pe tegumentul unui oarece care a fost expus n prealabil la radiaiile ultraviolete nu induc rspuns imunitar. Areactivitatea este remanent i
185

trasferabil la alt oarece prin transfuzie de LT de la oarecele iradiat. Aceste date dovedesc c pielea ar dispune de o clas de celule care au proprietatea de a prezenta antigenul T-celule prezentatoare de antigen a cror funcie poate fi anihilat prin expunere la radiaiile aultraviolete. Dac antigenul trece etapa acestor celule( scoase din funcie prin iradiere cu ultraviolete) el induce o areactivitate remanent, datorit stimulrii LTs. Investigaiile fcute n scopul identificrii celulelor implicate n acest proces s-au oprit la celulele lui Langerhans. Sunt celule imunocompetente provenite din mduva osoas i rezidente n epiderm, unde reprezint 2-4% din populaia local. Nu exist o coloraie de rutin pentru evidenierea acestor celule. Cu hematoxilin-eozin celula lui Langerhans apare ca o celul dendritic, putndu-se confunda cu melanocitul. De altfel mult timp celulele lui Langerhans au fost considerate, eronat, ca fiind melanocite epuizate, pe cale de eliminare. Spre deosebire de melanocite ns, acestea sunt aurofile i dopanegative. Totui cu clorura de aur, care a permis lui LANGERHANS n 1861 s descopere aceste celule d rezultate inconstante. Alte coloraii ( cu iodur de osmiu sau albstru de metil) nu sunt specifice, colornd i melanocitele. Parafenilendiamina i dopamina au o specificitate bun, dar necesit tehnici laborioase. n ultimii ani s-au pus la punct tehnici histoenzimatice, dintre care tehnica de evideniere a adenozintrifosfatazei este specific i permite obinerea unei bune imagini a celulelor lui Langerhans. Totui, SCHLEGER i BEAN constat c o trastur aparent unic pentru celulele lui Langerhans din pielea bovinelor, negativitatea reaciei pentru adenozintrifosfataz utiliznd pentru identificarea acestora reacia pentru fosfataza alcalin. Specificitatea acestor reacii este ns discutat. La microscopul electronic celulele lui Langerhans apar lipsite de tonofilamente i desmozomi. Au un nucleu lobulat iar citoplasma conine o zon Golgi bine marcat, reticul endoplasmatic dezvoltat, lizozomi, vacuole, picturi de lipide, glicogen, melanozomi fagaocitai. n toat citoplasma, dar cu precdere n vecintatea aparatului Golgi i a membranei citoplasmatice, conin nite granule considerate markeri ultrastructurali specifici. Acestea mbrac aspectul unor bastonae sau rachete, formate din organite emisferice cu structur membranoas. Membrana lor periferic se dilat de obicei la o extremitate, pentru a forma o vezicul. S-au descris dou tipuri morfologice de celule Langerhans:
186

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE celule de tip I, aezate deasupra stratului bazal al epidermului, care au citoplasma foarte clar, cu numeroase dendrite, granule Langerhans i care dau o reacie adenozintrifosfatazic intens; celule de tip II, localizate n stratul bazal, care au citoplasma dens, slab dendritic i sunt srace n granule specifice, fiind considerate celule mezenchimale pe cale de difereniere. MASUTAMI a artat c la oarece celulele prelangerhansiene nedeterminate dobndesc, sub aciunea sensibilizrii de contact, granule Langerhans. Investigaiile imunologice au permis identificarea la nivelul celulelor Langerhans a antigenilor din grupul complexului major de histocompatibilitate (CMH) clasele I i II-a, a antigenilor notai CD1 i considerai cei mai buni markeri ai LTh. De asemenea s-au identificat receptori pentru regiunea Fc a IgG i pentru fraciunea C3b a complementului. Celulele lui Langerhans sunt capabile s capteze antigenii exogeni ptruni n epiderm ca haptene sau antigeni infecioi, s-i prelucreze i s-i prezinte LT. Aceast funcie de prezentare a antigenilor este dependent de CMH clasa II-a care sunt asociai antigenului n momentul cooperrii celulelor Langerhans cu LTh. Acesta constituie primul semnal al activrii LT. Un al doilea semnal este, deasemenea, indispensabil activrii LT. Acesta este reprezentat de IL1, secretat adesea de macrofage. La nivelul epidermului productorul de IL1 poate induce producerea de substane amiloide de ctre hepatocite i fibroblaste ca i chimiotactismul pentru neutrofile. LT se gsesc, la nivel cutanat, n special sub form de populaii celulare situate n stratul papilar al dermului i avnd rol analog populaiilor limfoide din corionul mucoaselor mpreun constituind aanumitul esut limfoid asociat mucoaselor i pielii. La animalul cu pielea intact, n momentul ptrunderii unui antigen prin piele, acesta este ntmpinat de celulele Langerhans, care l vor prelucra i l vor prezenta LTh, care la rndul lui va stimula limfocitul capabil s produc rspuns specific mpotriva antigenului respectiv. Cea mai important este activarea LB, care va evolua spre stadiul de plasmocit, capabil s produc imunoglobuline. n funcie de particularitile antigenului, LTh mai poate determina activarea LTc, implicate n distrugerea celulelor infectate de particule virale i n reacia de respingere a grefelor sau activarea celulelor NK cu rol n distrugerea celulelor tumorale.
187

LT conectate de antigen mai primesc un al doilea semnal prin IL1 produs de cheratinocite i celulele Langerhans i rspund acestui semnal prin secreia deIL2. Din acest moment, limfocitele astfel sensibilizate vor migra cu imaginea antigenului n organele limfoide, unde vor prolifera intens genernd o clon celular capabil s rspund promt antigenului care a declanat formarea ei i care se va rspndi n ntreg organismul. Experienele pe oareci iradiai cu ultraviolete, la care celulele lui Langerhans sunt scoase din funcie, au sugerat existena la nivelul epidermului i a unui al doilea tip de celule prezentatoare de antigen, rezistente la radiaiile ultraviolete. Aceste celule au fost descoperite de ctre GRANSTEIN n 1984. Ele sunt tot celule dendritice, ca i celulele lui Langerhans, dar spre deosebire de acestea, ele prezint antigenul LTs. Spre deosebire de LTh, care recunosc antigenul cu ajutorul CMH clasa I, LTs intervine n modularea rspunsului imun, limitnd rspunsul fa de un antigen dat, att n reaciile mediate umoral (prin exprimarea transformrii LB n plasmocit), ct i n cele mediate celular. Acestea ar explica reactivitatea remanent (i trasferabil) a oarecilor iradiai cu ultraviolete la dinitrofluorbenzen. n cazul unor traumatisme cutanate minore i repetate, nsoite de smulgerea epidermului ca i la animalele iradiate cu ultraviolete, antigenii vor lua contact cu celulele Granstein. Exist i antigeni care prin proprietile lor intrinseci prefer contactul cu celulele Granstein. n procesele de aprare cutanat, un rol important revine mastocitelor (pzitorii porilor de intrare). Membrana celular a acestora prezint receptori pentru IgE i numeroase prelungiri fine, utilizate pentru ncorporarea materialului brut, necesar sintezei de mediatori chimici. Mediatorii chimici stocai n granulele mastocitare sunt reprezentai de: histamin, serotonin, substana de atragere a eozinofilelor din procesele anafilactice (EAS-A sau ECF-A) i arilsulimfociteataz, enzim care distruge leucotrienele C4 sau substane de reacie lent a anafilaxiei. Diveri factori patogeni i n mod special, antigenii capabili s cupleze IgE, determin degranularea mastocitelor (eliberarea mediatorilor), cu efect asupra microcirculaiei. Un alt efect notabil este chemotactismul pentru eozinofile. Acestea intervin n procesele alergice, avnd o afinitate deosebit pentru IgE (reagine) i pe de alt parte, au un potenial antihistaminic ridicat, observndu-se n teritoriile bogate n acest mediator. n plus, este bine cunoscut eozinofilia n bolile parazitare.
188

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Fa de reaciile la antigenii exogeni, cele n care sunt implicai antigenii endogeni au un caracter particular. Astfel, n bolile autoimune din grupul penfigus la suprafaa cheratinocitelor se elaboreaz anumii antigeni de natur glicoproteic, fa de care organismul imun va reaciona. Autoanticorpii se leag de antigenii de suprafa i determin sinteza activatorului de plasminogen. Creterea local a plasmei determin pierderea coeziunii celulelor, prin proteoliz rezultnd vezicule i bule intermediare. Tegumentul rspunde prin reacii imune nu numai la alergenii ptruni pe cale cutanat ci i la cei ptruni n organism pe cale digestiv, respiratorie, etc. Mucoasa digestiv este n contact cvasipermanent cu alergenii, constituii din proteine alimentare sau molecule de mas mic susceptibile de a se comporta ca haptene. Majoritatea acestor proteine sunt hidrolizate de ctre enzimele proteolitice digestive. O parte sunt complexate de IgA. Totui o mic parte din aceste proteine alergice pot ptrunde mucoasa intestinal intact, determinnd producerea de anticorpi circulani. Pasajul proteinelor alergice prin mucoasa intestinal este favorizat de leziunile inflamatorii sau degenerative ale acesteia. Pe de alt parte, insuficiena hepatic are drept consecin insuficienta degradare a proteinelor cu potenial alergizant sau a altor molecule care pot juca rolul de haptene. Din cele prezentate reiese faptul c n realizarea rolului protector al pielii, n special fa de agenii biotici, o importan deosebit o deine funcia imunitar a acesteia. Legturile ultrastructurale, biochimice i imunologice dintre timus i piele ca i existena esutului limfoid asociat pielii vin s justifice considerarea pielii ca organ imunitar.

189

CAPITOLUL 11
TOLERANA I AUTOIMUNITATEA
n anumite condiii experimentale se poate observa o lips de rspuns imun fa de unele Atg. cu care organismul avusese deja un contact prealabil. Aceast stare de areactivitate sau de toleran este specific pentru c: tolerana este pregtit printr-o expunere iniial la un Atg., ea constatndu-se dup readministrarea Atg. respectiv, dei la aceast readministrare s-au ndeplinit toate condiiile corespunztoare pentru declanarea unui rspuns imun; un organism devenit tolerant fa de un Atg. pstreaz capacitatea de rspuns imun fa de toate Atg. care nu dau reacii ncruciate cu acel Atg. care a indus starea de toleran. Experiena clasic n acest domeniu aparine lui BILLINGHAM BRENT i MEDAWAR (1953) care au artat posibilitatea tolerrii grefei allogenice de piele dup o preparare adecvat a animalelor receptoare. oarecii din rasa A au fost inoculai n perioada neonatal cu celule splenice vii recoltate de la animalele adulte de ras B. Dup ce au devenit aduli, oarecii A au primit grefa de piele prelevat de la un oarece de ras B. Grefa B a fost tolerat, n schimb o grefa recoltat de la oarecii de alt ras (C) a fost respins. (Fig.58) FREI, THORBECKE i BENACERRAF (1963) au imunizat iepuri cu albumin seric bovin (ASB), administrat i.v. Dup dou zile de la injecie au recoltat plasm de la iepure din care au izolat urme de ASB. Aceast fraciune de ASB posed capacitatea de a induce toleran, pierznd n schimb proprietile sale imunogenice native (Fig.59) Experiena sugereaz c o macromolecul antigenic poate poseda n structura sa determinani imunogenici i determinani tolerogenici.

190

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE

Fig. 58 Tolerana imun.

(BILLINGHAM BRENT, MEDAWAR, 1953) WEIGLE i col. au obinut toleran fa de gamaglobulin uman (gamma GU) prin injectarea unor oareci singenici cu forma "dezagregat" (tolerogen) a gamma GU. Limfocitele T i B izolate de la oarecii tolerani, mpreun cu limfocitele T i B preluate de la animalele martor au fost utilizate n diverse mixturi pentru reconstituirea unor animale iradiate. Toate loturile de animale reconstituite au primit cte o doz imunogen de gamma GU.
Fig. 59 Experiena lui FREI, THROBECKE i BENACERRAF

oarecii restaurai cu LB i T provenite de la donatorii tolerani au rspuns prin toleran dup administrarea de gamma GU nativ i
191

prin reacie imun dup administrare de gamaglobulin de curc (GC) (Fig.60)

Fig. 60 Experiena lui WEIGLE i colab.

Cele trei modele experimentale sugereaz 3 trsturi principale: 1. Tolerana este un fenomen biologic activ i specific fa de o administare adecvat de Atg. 2. Anumite proprieti ale Atg. sunt rspunztoare de inducerea toleranei. Macromoleculele antigenice au o latur imunogen i alta tolerogen. Dup administrarea fraciunii tolerogene, tolerana obinut se manifest i fa de fraciunea imunogenic. 3. Tolerana este mediat de LB i LT capabile s transfere aceast stare la receptorii singenici. ncercarea de restaurare a capacitii de rspuns prin transferarea de celule normale unui animal care posed limfocite tolerante este dificil. 11.1. RELAIA DINTRE TOLERAN I ATG diferite substane antigenice au capacitatea tolerogen sau imunogen foarte variabil;
192

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE anumite proteine care se comport ca imunogene sub form agregat i polimeric devin tolerogene sub form monomeric i solubil; Atg. nemetabolizate (nedegradabile) persist mult timp n organismul receptorului. Aceast persisten mpreun cu lipsa unor Atc. specifici n circulaie au fost interpretate ca dovezi de tolerabilitate. n realitate s-a putut demonstra existena de celule care elaboreaz anticorpi specifici. Atc. formeaz complexe cu Atg. respective, complexe rapid ndeprtate din circulaie. Acest clearance al complexelor imune explic aparenta absen a Atc. Tolerana n aceast situaie este doar aparent (pseudotoleran); n funcie de doza de Atg. se pot distinge 2 aspecte ale toleranei: a) tolerana de doz joas, care este indus prin injectarea continu sau repetat de doze mici, inferioare celor care produc rspuns imun. Unele date experimentale sugereaz c tolerana de doz joas este controlat de LTs (care ar fi stimulate de dozele mici de Atg., n timp ce activarea LTh ar necesita doze mai mari). b) tolerana de doz nalt, care este indus de doze foarte mari supraimunogene de Atg. Deoarece Atg. timo-independente nu produc n general toleran de doz nalt se concepe c acest model de rspuns implic att LTh ct i LB. 11.2. RELAIA LIMFOCITE-TOLERAN Tolerana poate fi indus mai uor la animalele imature imunologic. Animalele adulte sunt rezistente la inducerea toleranei dac aparatul lor imun este normal. Prin comparaie cu aceasta, tolerana poate fi indus mai lesne la indivizii aduli care prezint unele deficiene ale sistemului imun fie c acestea sunt nscute, fie c sunt provocate de diveri factori imunosupresivi (iradierea limfoid total, administrarea de droguri citostatice, cum ar fi ciclofosfamida, azatioprina, 6mercaptopurina, etc. sau de droguri care blocheaz activitatea IL2, ca de exemplu Cyclosporina A). Ambele tipuri de limfocite (B i T) pot fi nscute tolerante fa de Atg. Tolerana LT este indus mai rapid i este mai durabil dect tolerana LB. Experienele de transfer a limfocitelor normale la gazde tolerante sau a celulelor limfoide tolerante la gazde normale au subliniat rolul LTs n inducerea toleranei. LTs sunt specifice pentru tolerogen i determin instalarea toleranei numai faa de acesta. Dozele mici de Atg. care stimuleaz preferenial LTs induc mai uor tolerana imun.
193

Modelele experimentale de inducere a toleranei au oferit baza nelegerii toleranei selfului. Tolerana self este un fenomen natural care apare timpuriu n ontogenez, prin procesul de educaie a LT. n primele stadii ale dezvoltrii lor intratimice, limfocitele imature sunt extrem de susceptibile la inducerea toleranei, cu o doz de Atg. relativ joas. Iniial s-a crezut c limfocitele specifice pentru Atg. self (limfocite auto- sau self-reactive) sunt eliminate n cursul acestui proces. Ulterior s-a descoperit existena unor clone de LB i LT autoreactive la indivizii aduli normali. Se presupune c ele ar rmne linitite deoarece nu primesc semnale de activare din partea LTh. Excluderea (deleia) funcional a LTh ar fi susinut de ctre LTs. Rolul LTs n meninerea self toleranei a fost sugerat de experimente de transfer ale LTs prin care puteau fi blocate rspunsuri imune mpotriva unor auto-Atg. (tiroglobulin, proteina bazic a mielinei, Atg. eritrocitare). Anumite experimente sugereaz n plus c dozele tolerogenice de Atg. induc LTs, dar meninerea activitii supresoare este asigurat de dezvoltarea unor LTs, de memorie. Ruperea toleranei fa de self provoac o stare autoimun. Atg. care reprezint inta atacului autoimun sunt Atg. normale, exprimate pe celulele tisulare sau reprezentnd epitopi din structura unor produse normale de secreie (Ig., factori de coagulare, etc). Reacia autoimun poate fi de tip umoral, celular sau o asociere a celor 2 rspusuri i conduce n general la o stare de boal. Autoanticorpii (AAC) pot fi specifici pentru determinani ai unui organ (ex. insulele Langerhans, suprarenale, miocard) sau pentru determinani prezeni n mai multe organe (ex. ADN). Pe aceste baze ROITT mparte bolile autoimune n boli specifice i nespecifice de organ (tabelul nr. 7). Rolul patogen al AAC n generarea bolilor autoimune (BAI) poate fi demonstrat n situaii n care este posibil transferarea BAI de la omul bolnav la un oarece sntos prin intermediul unui purificat de Ig preparat din serul pacientului (ex. n miastenie) sau n situaii n care AAC de clas IgG (care pot strbate placenta) transfer temporar o BAI de la mam la ft (ex. gravidele cu purpur trombicitopenic autoimun care transfer pasiv boala la nou-nscut; trombocitopenia acestuia dureaz cca.3 sptmni pn se catabolizeaz AAC transferai de la mam). n anumite situaii experimentale s-a putut realiza transferul unei BAI prin intermediul unor suspensii purificate de LT (ex. n encefalomielita alergic experimental). Clonele de LT autoreactive au putut fi izolate la oarece. De ex. LT murine sensibilizate in vitro prin
194

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE cultivarea cu celulele tiroidiene izologe pot provoca tiroidit la oarecii sntoi la care se practic injecii intratiroidiene cu astfel de celule. Tabelul 7 Evantaiul bolilor autoimune (BAI) dup ROITT (1989) A. BAI specifice de organ Tiroidita Hashimoto Mixedemul primar Tireotoxicoza Anemia pernicioas Biermer Gastrita atrofic autoimun Maladia Addison B. Forme intermediare Miastenia, diabetul juvenil, sindromul Goodpasture, pemfigusul comun, oftalmia simpatic, uveita. Anemia hemolitic autoimun (AHAI), purpura trobocitopenic ideopatic, (PTI), neutropenia autoimun. Ciroz biliar primitiv, hepatita cronic activ, colit ulceroas, sindromul Sjgren C. BAI sistemice (non- Lupus eritematos diseminat (LED) specifice de organ) Dermatomiozita Sclerodermia Poliartrita reumatoid Aceast clasificare nu este strict deoarece exist multe situaii intricate (tabelul 8). Tabelul 8 Exemple care ilustreaz modul de aciune al AAC Citoliza direct complementului: AHAI tiroidita Indirect - opsonizare: PTI, AHAI Blocarea funciilor unor molecule: - circulante: AAC anticoagulani receptori: miastenia gravis, diabet insulinodependent Stimularea unor receptori: boala Basedow Depunerea de complexe imune n arganism: vasculite
195

prezena

- n prezena celulelor K (ADCC):

Adesea ns leziunile organice constatate n modelele experimentale de provocare a unor BAI demonstreaz infiltrarea organelor int cu celulele mononucleare i prezena unor reacii de hipersensibilitate ntrziat vis-a-vis de autoantigenele respective, care coexist cu AAC specifici, sugernd asocierea mecanismelor celulare i umorale n multe BAI. 11.3. FACTORII CARE FAVORIZEAZ INSTALAREA UNEI BOLI AUTOIMUNE vrsta: BAI apar mai frecvent la tineri; la vrstnici se constat frecvent apariia de AAC cu diverse specificiti fr instalarea unei stri de boal; sexul: sexul feminin este mai expus pentru apariia unor BAI (LED, poliartrita reumatoid, miastenia) datorit mpregnrii cu hormoni sexuali specifici. Administrarea de androgeni la oricioaicele NZB bolnave de LED atenueaz gravitatea bolii; infecii intercurente (virale, bacteriene, parazitare) pot fi la originea unor BAI. Se pot discuta mai multe mecanisme posibile: reacii ncruciate cu auto-Atg; activarea policlonal a LB sau LT; inducerea unei alterri a Atg.CMH; perturbarea reelei idiotipice. starea funcional a aparatului imun: strile de imunodepresie ereditare sau dobndite, sau neoplasmele limfoide, se nsoesc adesea de BAI i invers, anumite stri autoimune sunt urmate de apariia unor boli limfoproliferative, maligne. n patologia uman asemenea asocieri reciproce apar frecvent n leucemia cronic i n limfoamele non-Hodgkin. oarecii NZB prezint cu vrsta o suscesiune spontan de astfel de evenimente care ncep cu formarea de AAC urmat de instalarea unei glomerulonefrite prin complexe imune i sfresc cu constituirea unui limfom malign. Exist asocieri nentmpltoare ntre diverse BAI: anemie Biermer / tiroidit Hashimoto; asocierea LED cu AHAI i/sau PTI; asocierea AHAI cu PTI (sindromul Evans); forme de trecere ntre LED i PR sau dermatomiozit. S-a remarcat existena unui control genetic al autoimunitii: exist rase de oarece la care pot fi induse uor BAI experimentale i altele rezistente la asemenea ncercri
196

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE oarecii NZB i rasa puilor obezi (care produc spontan antitireoglobulin) reprezint exemple de control genetic al BAI. Tireoglobulina puilor obezi are structur normal, iar injectarea de tireoglobulin provenit de la pui de ras Leghorn normali provoac la puii obezi secreie de AAC. Totul sugereaz rolul important al terenului. Este posibil ca rspunsul autoanticorpic s fie controlat tot de genele Ir care ar aciona de o manier analoag celei n care-i exercit influena asupra formrii Atc. reactivi normali. Este posibil n acest context instalarea unei asocieri anormale ntre auto Atg. i Atg. CMH de clasa II-a pe suprafaa celulelor-int. De ex. n unele cazuri de boal Basedow pe suprafaa celulelor tiroidiene apar Atg.CMH de clasa II-a (care n mod normal nu sunt exprimate). n patologia uman s-au remarcat dou tipuri de asocieri: frecven mare de tulburri autoimune n anumite familii n care unii consanguini fac BAI n timp ce alii sunt numai purttori de anomalii fr manifestri de boal. corelarea anumitor profile CMH cu unele maladii cu patogenie autoimun dovedit sau presupus. Corelaiile cele mai frecvente sunt observate cu Atg. de clasa II-a DR i DQ. Exemplul tipic n acest sens l ofer asocierea spondilitei ankilopoietice cu Atg. CMH-B27 n care riscul relativ este de aproximativ 80 (Riscul relativ este o noiune bazat pe o formul de calcul, care exprim ansa de a face o anumit maladie de ctre subieci care posed un Atg. CMH n raport cu riscul de mbolnvire al indivizilor care nu posed respectivul Atg.). Alte exemple ilustrative ar fi diabetul insulinodependent D/DR3/44 (R.R.=47) i maladia celiac D/DR3/7 (R.R.=70) 11.4. MECANISMELE RUPERII TOLERANEI Rspunsurile autoimune par a fi identice n derularea lor cu rspunsurile dirijate mpotriva Atg.conveninale. Din acest punct de vedere pot fi discutate: 1. Recunoaterea auto-Atg. Aa cum am ilustrat n exemplul referitor la rasa de pui obezi, auto-Atg. nu sunt anormale la subiecii cu tulburri autoimune. Mai mult, n mod normal prezena auto-Atg. este necesar pentru meninerea toleranei faa de self. Afirmaia se sprijin pe exemplul aa-ziselor Atg sechestrate: Atg. cristalinului i Atg. spermatozoizilor (aceste Atg. sunt izolate prin bariere anatomice de restul organismului: eliberarea lor n organism produce imediat o reacie
197

imun). Majoritatea auto-Atg. coabiteaz panic cu celulele imunologic competente i probabil sunt de tip timo-dependent, adic solicit pentru a declana un rspuns prezentarea lor de ctre Mcf. i cooperarea dintre LTh i LB autoreactive specifice. Mecanismul implic obligatoriu o prezentare restrictiv mpreun cu moleculele CMH de clasa a II-a. Importana moleculelor CMH de clasa II-a n genez BAI este sugerat de dou fapte de observaie: exprimarea aberant a acestor Atg. pe esuturi care n mod normal nu le exprim. Aceast exprimare ar putea fi indus de unele infecii virale (prin intermediul sintezei de IFN) i ar putea explica apariia unor BAI. prevenirea inducerii unor BAI experimentale (ex. encefalomielita sau miastenia gravis) prin injectarea n vivo de Atc. anti-Ia (anti CMH DR). Unii ageni infecioi pot prezenta determinani comuni cu epitopi ai auto-Atg. Infeciile respective provoac un rspuns autoimun printr-o reactivitate ncruciat. De exemplu, unele tulpini de streptococ hemolitic au determinani comuni cu miocardul, cu endocardul sau cu celulele cerebrale. Pe aceste baze se explic atingerea cardiac sau de choree care se observ n reumatismul acut streptococic. 2. Activarea limfocitelor - Existena clonelor autoreactive este n prezent unanim acceptat. Circa 1% dintre limfocitele normale circulante prezint molecule de tireoglobulin ataate pe receptorii lor specifici fr s existe semne de agresiune autoimun. Mai mult, s-au decelat n circulaia subiecilor normali diveri auto-Atc. naturali. Aceste observaii, culese dintre multe altele asemntoare, sugereaz existena LB autoreactive, dar nefuncionale la indivizii normali. Raportat la ansamblul mainriei imune aceast inerie a LB autoreactive ar implica inhibiia global a mecanismului de activare a LB, inhibiie care intereseaz n special LTh i care ar fi controlat de LTs. Activarea sistemului (reacie autoimun) ar putea surveni n urmtoarele mprejurri: suprimarea supresiei: administrarea Ciclofosfamidei ( inhibitor selectiv al diferenierii LTs) la oarecii din sue nativ-rezistente la inducerea de BAI experimentale, permite obinerea unei tiroidite alergice;

198

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE ocolirea (by pas-ul) supresiei (Fig.61)

Fig. 61 Ipoteza lui I.M.Roitt (1985) prin care consider c ruperea toleranei poate aprea prin ocolirea mecanismelor supresoare de reglare

activarea direct a LT; activarea direct a LB i LT efectoare; activarea LT contrasupresoare 3. Dereglarea produciei de AAC. AAC care se asociaz cu BAI sunt extrem de heterogeni: IgM, IgG, IgA sau chiar IgE. Ei posed diverse idiotipuri publice i private ca diferene ntre speciile de molecule ale unei clase de Ig care sunt plasate n regiunile variabile - Fab - ale situsului combinativ. Controlul sintezei de AAC este exercitat de LTh i de LTs, iar dereglrile acestui control au fost amintite n seciunea precedent. Reamintind 2 elemente fundamentale (a)sIg- receptorul pentru Atg. al LB -are aceeai compoziie molecular n poriunea variabil cu Atc. produi de celula respectiv i (b) receptorii pentru Atg. ai LB i LT prezint poriuni variabile, preciznd c att receptorii celulelor limfoide autoreactive ct i AAC exprim determinani idiotipici privai (proprii fiecrei clone de AAC) i publici (comuni mai multor clone de molecule care reacioneaz cu aceleai auto-Atg). Aceste idiotipuri reprezint de fapt o varietate imens de autoantigene care ar putea constitui motivele
199

unei autoimunizri. Recent s-a demonstrat existena unor idiotipuri comune ntre Atc. anti-Klebsiella i auto-Atc. anti-ADN. Aceasta duce la presupunerea posibilitii instalrii unei reacii ncruciate ntre idiotipul unui Atc. specific pentru un Atg. exogen i un determinant corespunztor din structura unui auto-Atg. 11.5. BOLI AUTOIMUNE Ca orice fenomen biologic i cel autoimun nu este ns unul cu efecte exclusiv nocive asupra organismului. Exist i fenomene autoimune benefice, cu caracter fiziologic. Astfel, cooperrile intercelulare eseniale n dinamica rspunsului imun sunt posibile numai datorit recunoaterii de ctre celulele imunocompetente a propriilor antigene ale CMH clasa 1 i a 2-a. n fenomenele de imunoreglare, un rol de baz l au autoanti-anticorpii, numii anticorpi antiidiotipici, care asigur alturi de alte mecanisme meninerea titrului de anticorpi la nivel optim; astfel, se evit hipergammaglobulinemia care produce dezordini n organism; tot un fond autoimun l au i mecanismele de eliminare a celulelor senescente. n urma mbtrnirii, eritrocitele, leucocitele, trombocitele, hepatocitele, celulele renale, etc. i schimb structura antigenic de suprafa prin clivarea enzimatic a unei proteine din membrana celular, rezultnd moleculele recunoscute ca non self, care dup cuplarea lor cu anticorpi din clasa IgG, sunt fagocitate de macrofage, organismul debarasndu-se astfel de ele. Atenia imunopatogeniei este ns n mod firesc centrat ctre studiul efectelor defavorabile pentru organism al reaciilor dintre self i anticorpii antiself. 11.5.1. LUPUSUL ERITEMATOS DISEMINAT (LED) Lupsul eritematos diseminat (LED), cunoacut i sub numele de lupus eritematos sistemic (LES), boal lupic sau sindroamele lupice este boala imun cea mai bine studiat i dovedit ca afeciune autoimun sistemic a esutului colagen. Numele de lupus a fost atribuit acestei afeciuni n evul mediul, pare-se datorit aspectului evocator al acestui animal, pe care-l reprezint unii pacieni cu leziuni cutanate. Prima semnalare la animale i se datoreaz lui Lewis i col.1965 (cit. Gherghariu) care o diagnostic la cini. Ulterior se semnaleaz la pisici i la o linie de oareci (NZB) care au o predispoziie genetic. O asemenea predispoziie a fost observat i la unele rase de cini, cum ar fi Ciobnescul german i Beagle. n funcie
200

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE de sex, se pare c boala este prevalent la femele. Au fost raportate cazuri familiale, de obicei la gemeni, dar i la generaii succesive. Factorul imunologic pare s creeze predispoziie, facilitnd instalarea sindroamelor lupice. Particularitatea imunologic cea mai semnificativ, const n exacerbarea imunitii umorale, asociat cu deprimarea imunitii celulare. Un numr considerabil de anticorpi au fost pui n eviden n serul i esuturile bolnavilor de LES: anticorpi antieritrocitari, antileucocitari, antitrombocitari, antimuchi neted, etc. Aceti anticorpi aparin principalelor clase de imunoglobuline (IgA, IgM, IgG). Cte odat ei aparin unei singure clase ( de regul IgG), dar de obicei aparin mai multora. n centrul imunopatogenezei se situeaz fenomenul LE, ce const n formarea de celule de lupus eritematos, cunoscute sub numele de celule LE. Acestea sunt de fapt polimorfonucleare care conin n citoplasm, alturi de nucleul propriu i nucleii alterai ai altor celule. Din aceast cauz celulele LE sunt mai mari dect celelalte neutrofile. Formarea celulelor LE depinde de prezena unor anticorpi antinucleari, capabili s reacioneze cu nucleoproteinele. Asceti anticorpi aparin clasei IgG i sunt anti-AND i antinucleoproteine (factorul LE). Celulele LE sunt considerate drept caracterisrtice pentru diagnosticul pozitiv al LES, ns pot s apar inconstant i n alte boli cu component imun. Boala lupic este considerat o colagenoz, fiind inclus n grupul bolilor autoimune ale esutului conjuntiv. Clinic se manifest ca o boal general cu manifestri foarte variate. Din multitudinea de leziuni nregistrate, 4 sunt n mod deosebit importante: cutanate, renale, sinoviale i serozite. La cini sunt mai bine exprimate leziunile de poliartrit i dermatit. Acestea din urm evolueaz cu producerea unor zone de alopecie (mai ales la extremitatea cefalic) nsoit de hiupercheratoz, uneori de aspect verucos. Din multitudinea de autoanticorpi descrii n LED tipurile cele mai frecvente i cele mai semnificative pentru diagnostic sunt cele ale anticorpilor antinucleari. Dup specificitile demonstrate, aceti anticorpi sunt: antinucleoproteina, anti-ADN nativ (bicatenar) sau denaturat (monocatenar), anti-ARN, anticentromer, antihistone. n afara de Atc. antinucleari, n lupus sau mai descris anticorpi antieritrocitari, antitrombocitari, anticoagulantul lupic, factorul reumatoid sau anticorpii anticardiolipinici (care produc reaciile fals-pozitive pentru sifilis).
201

Prezena anticorpilor antinucleari poate fi pus n eviden prin mai multe metode: - examenul frotiurilor de snge periferic, evideniaz n 70-90% din cazuri prezena clonelor Hargraves (celulele LE): polimorfonucleare care au fagocitat nuclei alterai ai altor polimorfonucleare. Aceti nuclei se prezint sub forma unor mase amorfe palid-liliachii (corpi hematoxilinici). Fenomenul nucleofagocitozei poate fi reprodus n vitro prin incubarea leucocitelor normale cu ser bolnav (fenomenul Hazerick). Formarea corpilor hematoxilinici este rezultatul aciunii Atc. antinucleoproteinici asupra nucleilor-int, iar fagocitarea lor (cu formarea celulelor LE) este facilitat de fixarea secundar a complementului. Uneori pot fi surpinse imagini de rozete: corpi hematoxilinici pe suprafaa crora au aderat mai multe polimorfonucleare. Corpii hematoxilinici pot fi observai i n cupe tisulare. Celulele LE reprezint un criteriu major de diagnostic. - imunofluorescena evideniaz existena mai multor categorii de anticorpi antinucleari. Serul bolnavilor este aplicat pe celule hepatice sau renale de obolan. Fixarea autoanticorpilor pe nuclei este demonstrat cu ajutorul unui antiser fluorescent. Pot fi observate 4 modele de distribuie a fluorescenei: omogen (traduce prezena de anticorpi anti-dezoxinucleoproteine), periferic (evoc Atc. anti-ADN), ptat (evideniaz Atc. solubili anti-nucleari) i nucleolar. Prezena Atc. anti-nucleari este cvasi-constant n puseul acut, evolutiv al bolii. Testul poate fi pozitiv i n alte boli autoimune: poliartrita reumatoid, sclerodermie, hepatita lupoid, ciroza biliar primitiv, miastenie, anemie hemolitic autoimun, unele limfoame. De aceea diagnosticul de LED nu se poate sprijini n exclusivitate pe acest test. - dozarea radioimun (testul Farr) este metoda cea mai specific. Preparate marcate (cu C14 sau cu I125) de ADN-nativ, de ADN denaturat sau de ARN sunt incubate cu serul bolnavului. Complexele formate de aceste substrate cu Atc. specifici sunt separate, iar msurarea radioactivitii evalueaz concentraia Atc. respectivi. - hemaglutinarea evideniaz Atc. anti-antigene nucleare solubile noncromatiniene (Atg.Sm). Aceti anticorpi sunt foarte specifici pentru lED, dar incidena lor nu depete 30% din cazuri. Este de reinut c Atc. antinucleari (AAN) nu sunt specifici pentru LED. Ei pot exista n titruri mici, fr rsunet clinic, la vrstnici, pot nsoi alte colagenoze sau boli cu substrat autoimun (lupusul discoidal, poliartrita reumatoid, sindromul Sjogren, sclerodermie, hepatita cronic activ) sau pot surveni dup unele tratamente (hidralozina,
202

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE izoniazida, procainamida, beta blocantele; care induc aa numitul lupus iatrogen). Mecanismele care stau la baza acestor alterri imune sunt imperfect cunoscute. Dou argumente ar sprijini ipoteza asocierii LED cu un anumit teren genetic: frecvena mai mare a LED la persoane purttoare ale Atg. CMH DRw2 i DRw3 i modelul natural al oarecilor de ras NZB, care dezvolt spontan pe msur ce avanseaz n vrst, o succesiune de tulburri autoimune printre care anemie hemolitic cu test Coombs pozitiv, anticorpi anti-ADN i anticorpi anti-LT cu deprimarea funciei supresoare. Aceasta explic augmentarea rspunsurilor anticorpice printre care s-ar plasa i producia auto-Atc. semnalat mai sus. Existena hipergamaglobulinemiei n asociere cu scderea numrului LT circulante sugereaz c lupusul uman reproduce n bun parte pe cel murin. LB sunt hiperactive n puseele clinice ale LED: proliferarea lor n cultur este de 10 ori mai mare dect aceea a LB normale. Cultivarea LT normale n prezena unor seruri fluorescente (normale i lupice) arat o marcare puternic a limfocitelor incubate cu ser bolnav, demonstrnd existena de anticorpi anti-LT. Aceti anticorpi ar explica reducerea numrului de LT din fazele active ale evoluiei. Alte observaii au obiectivat c aceast depleie afecteaz LTs. n felul acesta se nchide un cerc vicios: hiperactivitate B (semiautonom nativ)disfuncia reglrii T (prin scderea Ts)- pierderea controlului asupra limfocitelor B (cu autontreinerea procesului) i asupra clonelor autoreactive ( cu apariia auto-Atc.descrii). Factorii declanatori posibili ai acestui mecanism circular ar putea fi infeciile (mai ales cele virale) asistate de profilul hormonal (hormonii feminini accentueaz rspunsurile imune i explic de ce aproape 90% din pacienii cu LED sunt femei). Sarcina este un factor agravant major al evoluiei n strns legtur cu oscilaiile cortizolemiei. Creterea acesteia n ultima jumtate a sarcinii ar avea rol protectiv. n schimb prbuirea sa dup delivren explic agravrile care survin frecvent n postpartum. n privina tratamentului se precizeaz c nu exist o terapie etiologic. Se administreaz produse care s diminueze producerea de anticorpi i combaterea proceselor inflamatorii (corticosteroizi, medicamente imunosupresive). La acestea se pot asocia levamisolul i hormonul timic. Ameliorarea spectaculoas a leziunilor din LES se obine prin plasmoforeza, procedeu ce duce la ndeprtarea din ser a unor componente i a complexelor imune, considerate ca principal
203

factor lezant. Cu toate acestea LED rmne o boal cu un prognostic nefavorabil. 11.5.2. POLIARTRITA REUMATOID Numit i poliartrita cronic evolutiv, artrita reumatoid este o boal autoimun cu localizri mai frecvente la nivelul articulaiilor i tecilor sinoviale. Boala ncepe cu o inflamaie cronic nesupurativ, ce duce cu timpul la instalarea de leziuni distructive i deformante ale articulaiilor. n aceast perioad leziunile distructive care erodeaz suprafeele articulare sunt de aspect histologic granulomatos, iar sinoviala se ngroae i este puternic infiltrat cu limfocite i plasmocite. Inflamaiile articulare au caracterul unei reacii granulomatoase, n care sunt bogat reprezentate infiltratele limfoplamsocitare i macrofagele. Leziunile nearticulare constau din vasculit cu localizri viscerale i tisulare diverse, precum i miocardit, serozit i chiar leziuni de neuropatie periferic. Modificrile morfologice tisulare sunt nsoite de perturbri complexe i severe ale mecanismelor umorale i celulare. Anomalia imun cea mai semnificativ i cu rol n geneza leziunilor, o constituie autoanticorpii anti-Ig, denumii n trecut, factorul reumatoid. Anticorpii anti-Ig, sunt de tip IgM i IgG. n aceast boal se precizeaz c imunoglobulinele, care au n mod normal funcie de anticorpi, joac rol de antigen i provoac un rspuns imun, prin producerea de anticorpi anti-Ig. Cantitatea mare de factor reumatoid din lichidul sinovial, comparativ cu cea seric, precum i prezena lui n cavitatea articular, chiar n absena sa din ser, sugereaz c articulaia este sursa principal a acestui factor. Atc. antinucleari care se asociaz mult mai rar, sunt de 2 tipuri: comuni (antinucleoproteine sau anti-ADN nativ) n 80% din cazuri i particulari (RAP+ Rheumatoid arthritis precipitin) cu o specificitate pentru un Atg., oarecum caracteristic PR (Rheumatoid arthritis nuclear antigen). Factorii reumatoizi sunt anticorpi de clasa IgM (curent) sau IgG (rar) cu specificitate mpotriva determinanilor Fc ai IgG (umane sau animale). FR de tip IgM pot fi diagnosticai prin reacii de aglutinare in vitro a unor particule nvelite cu IgG. Aceste particule pot fi eritrocite de oaie (testul Waaler-Rose) bentonit sau latex. FR de tip IgG pot fi detectai prin aglutinarea unor Er Rh.+, sensibilizate prin incubarea lor cu serul bolnavului i puse n contact cu un antiser anti-D. FR pot fi prezeni i n alte boli imune sau infecioase (lepr, tuberculoz, leishmanioz) sau pot fi indui experimental cu antigene bacteriene (streptolizin S)
204

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE sau cu alte microorganisme. Cele de mai sus sugereaz o relaie cauzal ntre PR i o stimulare imun cronic produs la rndul ei de o presiune antigenic de lung durat. Diagnosticul pozitiv se stabilete prin: determinarea factorului reumomatoid n ser i sinovie (testul Waaler-Rose); evidenierea se face prin reacii de aglutinare a unor particule (eritrocite, latex), nvelite n IgG; se precizeaz c 60-75% din cini cu artrtit reumatoid reacioneaz pozitiv cu titruturi mai mari de 1/16; examenul citologic al lichidului sinovial; se constat 1000040000 leucocite/ml, ntre ele fiind menionat prezena ragocitelor, celule din categoria polinuclearelor, care conin incluzii intracitoplasmatice, rotunjite de culoare verzuie, asemntoare boabelor de strugure (Pouchelon-1976, cit.Ghergariu). Tratamentul se bazeaz pe medicaie antiinflamatorie i n unele situaii imunosupresiv. Salicilatul, asociat cu doze mici de corticosteroizi, poate avea un efect benefic. Se apreciaz c salicilatul ar reduce prostaglandinele care n mod constant sunt crescute n sinoviala reumatoid. Corticosteroizii sunt constraindicai, datorit accenturii distruciilor asupra cartilajului articular. 11.5.3. REUMATISMUL ARTICULAR (FEBRA REUMATISMAL) Numit i artrita reumatismal, boala este definit ca un proces inflamator cu evoluie acut sau cronic, cu afectarea n princial a esuturilor articulare i periarticulare dar i cu implicarea altor esuturi, mai frecvent cel cardiac. La animale boala poare a fi frecvent la miei, cini, porci i taurine, dei cazuri de artrit generalizat sunt destul de frecvent semnalate i la alte animale. Etiologic, reumatismul articular, este singura boala inclus n categoria bolilor de colagen, la care pn n prezent se recunoate intervenia unor ageni infecioi. Un rol deosebit se pare c l au diferite specii de streptococi hemolitici.Din leziunile ntlnite la porc se izoleaz Streptococcuis suis i Erysipelothrix insidiosa. Nu se exclude i posibila intervenie a unor virusuri. n patogenez intervenia unui ecanism imun a fost de mult timp pesupus. S-au evideniat anticorpii fa de componentele streptococice (antistreptolizin, antistreptokinaz, antistreptodornaz, antiproteina M) i s-a dovedit c unii din aceti anticorpi reacioneaz cu esutul miocardic. La om s-a dovedit c
205

exist o nrudire antigenic ntre constituienii streptococului i respectiv o glicoprotein n valvulele cardiace, cartilajul articular i aorta, ceea ce ar determina o reacie imun ndreptat deopotriv i contra streptococcului sar i mpotriva propriilor esuturi (Gruis 1979, cit. Ghergariu). Leziunile se instaleaz ca urmare a producerii de complexe imune, ct i a interveniei hialuronidazei i sunt sterile sub raport bacteriologic. Clinic se constat disfuncie locomotorie, articulaiile fiind tumefiate, calde, direroase. Concomitent pot fi suprinse simptome de tonsilit, endocardit, mamit, glomerulonefrit sau altele. La om se descriu, i tulburri nervoase, consecutiv reaciei dintre autoanticorpi cu celulele din ganglionii bazali, anticorpi ce au specificitate fa de antigenele din peretele streptococilor. Diagnosticul pozitiv clinic se delimiteaz la precizarea unei artrite acute. Diferenierea de alte artrite septice, se face prin examen bacteriologic. Trebuie menionat c infecia poate iniia leziuni articulare, care ulterior se dezvolt pe un fond de reacie alergic. Se mai pot efectua investigaii imunologice (dozarea complexelor imun) i examen histopatologic care poate releva infiltraii focale cu limfocite, plasmocite i macrofage. Indiferent de modalitatea de producere a leziunilor, important este c toate aceste manifestri apar n relaie direct cu o infecie, cel mai adesea streptococic i c printr-o terapie intensiv cu anticobioptice de tip penicilinic, regreseaz semnificativ leziunile cardiace i se amelioreaz sau se previn cele articulare. n stadiile tardive, nsoite de anchiloze articulare i endocardite cronice, rezultatele terapeutice sunt iluzorii. 11.5.4. TIROIDITA HASHIMOTO este o boal autoimun caracterizat prin prezena mai multor tipuri de anticorpi antitiroidieni: antitireoglobulin, antimicrosomiali, anticoloidali, antimembranari. Glanda apare larg infiltrat cu celule limfoide. Acestea ar desfura o activitate citotoxic, posibil de tip ADCC i ar produce remanierea glandei cu efecte funcionale severe: mixedem sau mai rar, hipertiroidie. O boal spontan cu mecanism identic a fost observat la puii obezi, ridicnd problema unui control genetic. La om, boala este asociat cu antigenele CMH-B8 i CMH-DR3. Cazurile familiare sunt relativ frecvente. Exist o corelaie semnificativ cu anemia Biermer: 30% din bolnavi cu tiroidit au autoanticorpi anticelule parietale gastrice sau anti-factor intrinsec i jumtate din biermerieni produc anticorpi antitiroidieni. S-au citat
206

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE perechi de gemeni homozigoi n care un frate sufer de tiroidit autoimun i cellalt de boal Basedow. Aceasta sugereaz c n aceste 2 boli opereaz mecanisme autoimune relativ nrudite. Serul bolnavilor cu tireotoxicoz induce in vitro formare i acumulare de coloid n celulele tiroidiene cu care este incubat. Copii nscui de mame basedowiene prezint manifestri transitorii de tireotoxicoz. Autoanticorpii de clas IgG din sngele mamei, strbat placenta i determin manifestari de boal nou-nscutului o perioad de timp egal cu durata lor de via n plasm. Atc. antitiroidieni din boal Basedow produc un efect asemntor celui al hormonului tireostimulant hipofizar. Deoarece in vitro durata aciunii lor asupra substratului este mult mai lung dect aceea a TSH, aceti Atc. au primit numele de long acting thyroid stimulators (LATS). La animale sunt mai bine cunoscute tiroiditele autoimune la cini i la linia obez de gini Leghorn. La psri tiroida este infiltrat masiv cu celule limfocitare , ntre care predomin plasmocitele, n timp ce n ser se gsesc anticorpi antitireoglobulinici. Psrile sunt subdezvoltate, producia de ou este sczut, dar au n schimb depozite mari de grsime subcutanat i abdominal. 11.5.5. ORHITA AUTOIMUN Capacitatea imunogen omolog i autolog a spermatozoizilor este cunoscut nd de la nceputul acestui secol. Faptul c spermatozoizii ndeplinesc condiii de antigenitate a fost demonstrat de Marica i col. (1977-1980) care reuesc s obin anticorpi n urma inoculrii experimentale la animale (iepuri i vaci), ct i evidenierea existenei anticorpilor antispermatici la vaci cu nsmnri repetate, aspect care justific acceptarea ideii de instalare a unei infecunditi de natur imunologic. Chiar i unele avorturi pot s se produc prin mecanisme imunologice. Pe de alt parte, se cunoate c n testicul se gsesc componente (macromoleculele claustrate n anumite zone), care n condiii fiziologice nu sunt vehiculate n organism. n cazuri patologice are loc deversarea lor n circulaie i n urma interaciunii cu celulele limfocide, care nu recunosc drept self aceti antigeni, se declaneaz fa de ei un rspuns autoimun. La om orhita posturlian (dup oreion-paratidita epidemic produs de Myxovirus parotiditis sau virusul urlian) este considerat ca o afeciune autoimun, deoarece debutul coincide cu rspunsul imun
207

maxim la virus, iar virusul nu este detectabil n esutul testicular afectat. Incidena orhitei este mai mare la aduli (20% din cazurile de parotirodidit urlian) fa de biei (1,5%), fenomen atribuit diferenei de maturitate sexual i a unei probabiliti crescute a apariiei clonelor interzise la adult fa de copil. S-a prespusu c legtura cu parotidita ar putea fi rezul;tatul unui antigen specific de esut cu determinani comuni pentru cele dou glande (parotid i testicul), astfel nct un stimul antigenic de la parotida bolnav ar activa o clon interzis latent antitesticul, atunci cnd aceasta exist. Cercetrile clinice cu ajutorul tehnicilor de aglutinare au pus n eviden autoanticorpi antispermatici n snge i plasma seminal, de tip IgG i IgA. 11.5.6. DIABETUL ZAHARAT (tipul I de diabet insulinodependent) La om, diabetul zaharat (afeciune a pancreasului endocrin, care se manifest prin incapacitatea de a metaboliza glucoiza) poate fi de dou tipuri I i II. Tipul I reprezint forma insulino-deopendent, ntlnit i la cine. Att la om ct i la cine, diabetul are un caracter familial, transmisibil ereditar. La om, s-a stabilit chiar o relaie ntre diabetul de tip I i un anumit marker antigenic leucocitar HLA, pe baza cruia boala ar putea fi diagnosticat. Patogeneza diabetului de tip I presupune distrugerea celulelor beta din pancreasul endocrin i incapacitatea organismului de a le regenera. n serul bolnavilor se deceleaz autoanticorpi anticelule beta, chiar cu mai muli ani naintea manifestrii clinice a diabetului. S-a emis i o ipotez dup care factorul declanator al diabetului de tip I ar fi un virus. Natura autoimun a diabetului a fost, mai nti, suspectat pe baza infiltraiei masive cu mononucleare a insulelor lui Langerhans, ca n 1974, s fie pui n eviden prin imunofluorescen autoanticorpii antitisulari. Aceti anticorpi reacioneaz cu antigenele citoplasmatice ale celulelor , i din insulele lui Langerhans. Diabetul zaharat este, la fel ca bolile precedente, expresia unor tulburri autoimune sub control genetic. Existena terenului genetic predispozant este argumentat de urmtoarele observaii: asocierea frecvent ntre diabet i alte boli autoimune (anemia Biermer, tiroidita i boala Basedow, miastenie); concordana apariiei diabetului la gemeni monozigoi. Efectele acestei predispoziii genetice ar fi instalarea unei stri de autoreacie latent antitisular n care ar fi implicate iniial mecanisme de tip celular. In vitro, extractele pancreatice induc activarea
208

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE i transformarea blastic a LT izolate de la subieci susceptibili. LT recoltate de la oarecii NOD (Non-obese diabetic), o ras de oareci care fac o boal asemntoare cu diabetul uman de tip I, transferate la oarecii sntoi, preparai corespunztor produc alterri imune celulare, infiltraii limfoide masive n insulele Langerhans (insulit) i n final diabet. Toate aceste fenomene sunt blocate dac animalele sunt tratate cu ciclosporin -A (care inhib selectiv LT). Insulita a fost observat i la om n faza latent a diabetului n care studiile cu AcMo au relevat o stare de activare critic a limfocitelor expresie crescut a moleculelor CMH-DR i a mai multor receptori funcionali pentru IL2, pentru transferin, pentru insulin. In vitro aceste LT au capacitatea s inhibe secreia de insulin a celulelor tisulare. Diabetul insulino-dependent pare deci o tulburare cu dezvoltare lent. Un argument suplimentar n acest sens l-ar aduce observaia conform creia consanguinii normoglicemici ai diabeticilor reproduc aceleai alterri ale LT. Un prim efect al imunitii celulare este ngustarea paletei de rspunsuri insulinice demonstrat prin probe de hiperglicemie provocat. Explicaia acestei alterri ar fi o erodare progresiv a celulelor beta produs prin efecte citotoxice tisulare. Cu timpul acest mecanism devine secondat de apariia unor anticorpi antitisulari anticelule beta cu diverse specificiti (anticitoplasmatici, antimembranari). n aceast etap boala este declarat, iar evoluia ei natural duce la distrugerea cvasi complet a celulelor beta. n era terapiei preinsulinice durata medie de supravieuire a bolnavilor era de circa 6 ani. Tratamente recente, nc n faza de studiu, cu droguri imunosupresoare (azatioprin) sau imunomodulatoare (ciclosporina A) au adus rezultate ncurajatoare n stpnirea evoluiei. 11.5.7 MIASTENIA GRAVIS Sub denumirea internaional unanim acceptat de Myasthenia gravis este desemnat o autoimunopatie neuromuscular, identificat pn n prezent la om, cine i pisic. Ea const ntr-o slbire progresiv a musculaturii scheletice, ca urmare a unei defeciuni n transmiterea comenzii nervoase muchilor striai. La cine, exist o predispoziie de ras i s-au descris i cazuri de transmitere congenital i ereditar a bolii. La aceste rase (Terrier Kack Russell, Foxterrier i Spaniel Springer), exist un deficit genetic care se exprim printr-un numr redus de receptori pentru acetilcolin, la nivelul jonciunilor neuromusculare.
209

Fondul autoimun al bolii const n elaborarea de anticorpi fa de receptorii pentru acetilcolin, de la nivelul plcilor neuromusculare. Fig.62) Transmiterea influxului nervos de la nervi la muchi se realizeaz ns tosmai prin acetilcolin. Dac acest mediatir nu se mai poate fixa pe fibra muscular din cauza blocrii prin anticorpi a receptorilor care-i sunt destinai, comanda nervoas nu mai este receptat la nivelul muchiului. Autoanticorpii induc leziuni postsinaptice ale membranei musculare prin activarea complementului i distrugerea receptorilor. Anticorpii mai pot provoca acest efect distructiv printr-o legare ncruciat a receptorilor din placa motorie, urmat de distrugerea lor prin lizozomi celulari. Consecutiv agresiunii autoimune, s-a constatat la om reducerea receptorilor, din numrul lor iniial, rmnnd funcionali numai 3050%. Efectul blocant al anticorpilor asupra receptorilor poate fi contracarat prin administrarea de anticolinesteraz.

Fig. 62 Mecanismul patogenetic n Myastenia gravis , constnd n blocarea prin autoanticorpi a receptorilor pentru acetilcolin de la nivelul jonciunilor neuromusculare.

La animalele cu Myastenia gravis se constat de obicei o hiperplazie a medularei timusului cu formarea de centri germinativi sau transformarea malign a esutului timic cu dezvoltarea unui timom. Aceste fenomene din partea timusului pot fi explicate pe baza faptului c n timusul normal se gsete o populaie de celule mioide, precursoare ale celulelor musculare striate, dotate cu receptori pentru acetilcolin, iar atacul autoimun mpotriva acestora poate provoca leziunile timice menionate. n sens opus, modificrile hiperplazice sau neoplazice de la nivelul timusului poteneaz , la rndul lor, mioastenia prin timopoetin, hormon cu efect blocant asupra activitii
210

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE neuromusculare. n caz de hiperplazie sau timom, excesul de timopoetim va duce la agravarea bolii. Aceast intercondiionare a leziunilor timice cu cele neuromusculare este argumentat i de ameliorarea miasteniei la om n urma timectomiei. Manifestarea clinic a bolii const n obosela i slbiciune, chiar dup efectuarea unui efort minim. La cine, myastenia are o tendin de autolimitare i o evoluie mai puin grav dect la om, cu toate c exist mai multe anse de a se complica cu citopenie, megaesofag, miozit i miocardit. Diagnosticul este relativ uor de stabilit pe baza slbiciunii musculare i a redresrii spectaculoase a acesteia prin administrarea de anticolinesteraze cu efect rapid, cum este cazul tensilonului (clorurii de edrofonium). Tratamentul trebuie s aib n vedere administrarea unei medicaii anticolinesterazice de lung durat. Substane cu bun efect terapeutic sunt piridostigmina i neostigmina. n medicina uman, s-au obinut unele rezultate cu corticosteroizi , ciclofosfamid i prin plasmaferez. La cine, se prefer tratamentul cu piridostigmin i prednisolon. 11.5.8. SINDROMUL GOODPASTURE este o glomerulonefrit asociat cu o pneumonie hemoptizant. Imunofluorescena efectuat pe cupe de esut renal evideniaz depunerea unor depozite liniare pe suprafaa membranei bazale glomerulare (MGB). Depozitele sunt formate din Atc. anti-MGB +C'. Aceeai anticorpi sunt depistabili i n serul bolnavilor prin radioimunometrie. Atingerea pulmonar se explic prin existena unor determinani comuni ntre MGB i MB pulmonar. Un factor de teren este incriminabil n apariia acestor Atc. nefrotoxici: majoritatea bolnavilor exprim Atg.CMH DR2. 11.5.9. UVEITELE reprezint un grup de afeciuni care pot cuprinde irisul, corpii ciliari i choroida. Leziunile inflamatorii pot fi independente sau pot apare n asociere cu alte boli cu substrat imunologic (LED, maladia Behcet, sarcoidoza). Asocierea cu un Atg.CMH B27 este frecvent n formele primitive. Patogeneza autoimun a acestor uveite a fost ntrevzut dup ce au fost descifrate mecanismele implicate n alte afeciuni oculare nrudite. Injectarea unui animal, ntruun punct ndeprtat de ochi, cu extracte retiniene suplimentate cu un adjuvant produce o uveit autoimun experimental (UAE), manifestat cu edem i o reacie granulomatoas compus iniial din limfocite T inductoare i polinucleare, iar ulterior din limfocite citotoxic-supresoare.
211

Principiul uveitogen din aceste extracte ar fi o glicoprotein retinian, denumit proteina S. Oftalmia simpatic este o uveit granulomatoas uman, care apare dup o plag penetrant ocular. Este corelat cu o hiperreactivitate a rspunsului celular fa de Atg. oculare. Tulburarea imun este demonstrat de provocarea unor intradermoreacii extrem de intense la locul de administrare a Atg. specific. n plus s-a demonstrat n serul obolanilor cu UAE sau al pacienilor cu oftalmie simpatic prezena unor Atc. antiprotein S. Rolul exact al acestei proteine rmne de demonstrat, dar faptul c reaciile majoritare antioculare sunt mediate de limfocite T a incitat introducerea ciclosporinei n terapia uveitelor. Rezultatele par a fi ncurajatoare. 11.5.9.1. Uveita recurent ecvin (Oftalmia periodic) Cunoscut mai bine sub denumirea mai mult vehiculat de oftalmie periodic, este cea mai important afeciune ocular a cabalinelor i cea mai frecvent cauz a cecitii la aceast specie. Etiologia ei, mult timp controversat i considerat ca polifactorial, s-a dovedit n ultim instan a avea o baz autoimun determinat de mimetismul antigenic dintre esutul cornean i mai multe bacterii i parazii, dintre care pe primul loc se afl unele serotipuri ale speciei Leptospira interrogans. Argumentele care au permis admiterea leptospirelor ca factor etiologic esenial au constat n observarea paralelismului dintre perioadele de agravare i remisie ale bolii, cu creterea i diminuarea titrului anticorpilor antileptospirici din serul; cailor i n faptul experimental c n urma inoculrii culturilor inactivate de leptospire, aparinnd mai multor serovariante, s-au produs n interval de 10 zile leziuni de opacifiere a corneei, paralel cu apariia anticorpilor antileptospirici n ser. Ulterior, prin imunodifuzie i ELISA, s-a putut stabili nrudirea antigenic parial ntre esutul cornean i serotipurile respective de L. interrogans. n etiopatogenia bolii, autogresiunea pornete de la reacia ncruciat ntre cornee i leptospire. Dar afar de leptospire, efecte similare cu aceasta o poate avea i o alt spirochet- Borrelia burgdorferi, dup cum i nematosul Onchocerca cervicalis. Sub aspect anatomic, boala are caracterul unei uveite anterioare (iridociclite) recurente. Animalele manifest fotofobie, blefarospasm i o secreie lacrimal abundent. De la un atac la altul, care se succed periodic, gravitatea simptomelor i profunzimea leziunilor este crescnd i cuprinde progresiv celelalte esuturi oculare pn se ajunge la orbire. Histologic, se observ infiltrarea
212

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE irisului i a corpului ciliar cu limfocite i neutrofile, dup cum i depuneri masive de fibrin. Tratamentul simptomatic trebuie combinat cu administrarea de corticosteroizi pe cale general i sub forma de incoulri subconjunctivale. 11.5.10. ANEMIA PERNICIOAS: deficit al absorbiei intestinale a vitaminei B12 din cauz gastric. Tulburarea primar ar fi atrofia mucoasei gtastrice care ar avea substrat autoimun. Sunt lezate n principal celulele care secret acidul clorhidric i factorul intrinsec (F.I.). Absena F.I. care protejeaz vitamina B12 mpotriva aciunii enzimelor enterale, explic deficitul absorbiei. Scderea absorbiei poate fi demonstrat prin testul Schilling care se execut cu vitamina radiomarcat administrat p.o. Corectarea absorbiei dup o nou adminstrare p.o. de vitamin marcat plus F.I., precizeaz natura exact a tulburrii. n serul bolnavilor s-au evideniat anticorpi anticelule parietale gastrice (aproximativ 90% din cazuri) i anticorpi anti-F.I.. Acetia din urm sunt specifici pentru anemia pernicioas. Ceilali au fost depistai la normali (ntr-o proporie de cazuri care crete cu vrsta, de la 2% sub 20 ani la 15% peste 60 de ani), la consanguinii anemicilor, la basedowieini sau la mixedematoi. n submucoasa gastric exist infiltrate celulare n citoplasma crora pot fi detectate prin imunofluorescen imunoglobuline. O intervenie posibil a asocierii mecanismelor celulare este sugerat de inducia transformrii blastice in vitro a limfocitelor bolnavului n prezena unui extract gastric. 11.5.11. ANEMIA HEMOLITIC AUTOIMUN (AHAI). Auto-Atc interacioneaz cu Atg normale de grup sanguin de pe suprafaa eritrocitelor (Er). Atc. pot avea afinitate optim n vitro pentru Atg. eritrocitare la temperatura corpului (Atc. la cald) sau la +4oC (Atc.la rece). Atc. la cald sunt de clas IgG, nefixatori de C' i au, n general, specificitate anti-Rh. Ei nvelesc i provoac hemoliza prin fenomenul de imunoaderen + fagocitoz mediat de macrofage purttoare de receptori pentru Fc care rezid n splin. Atc. la rece se ataeaz pe eritrocite la temperaturi sczute mpreun cu fraciuni C1q activate ale sistemului complement. La temperaturi mai ridicate aceti Atc. se desprind de pe Er. dar las pe loc molecule de C' care amorseaz calea clasic a activrii acestui sistem biologic. Soarta eritrocitelor depinde de evoluia mecanismului complementului. Atc. la rece pot fi de clas IgM sau IgG. Atc. la rece IgM au specificitatea anti-Ii. Dup desprinderea lor de pe aceste Atg. ei las la suprafaa Er. molecule de C'3 activat (C'3b). Er.
213

nvelite cu C'3b se ataeaz (imunoaderen) pe celulele fagocitare care exprim receptori pentru aceste molecule. Eritrofagocitoza mediat de C'3b are loc n special n celulele Kupffer din ficat. Totodat moleculele de C'3b sunt degradate activ de un inactivator specific care le scindeaz n 2 fragmente: C'3c i C'3d. Moleculele de C'3d rmn ataate n continuare pe receptorii pentru C' de pe membrana Er. C'3d exercit o dubl protecie a Er pe care le mbrac: nu este recunoscut de nici o specie de fagocite (deoarece aceste celule nu posed R.C'3d) i blocheaz permanent receptorii eritrocitari, mpiedicnd ataarea de noi molecule de C'3. Prin aceasta ErC'3d pot circula nestingherite. Al 2-lea mecanism prin care acioneaz auto-Atc. IgM este aglutinarea care este mai activ la rece. Temperatura pn la care IgM rmn ataate pe Er desemneaz un prag denumit amplitudine termic. n general acest prag este mai mic de 20oC. IgM cu amplitudine termic ridicat por produce aglutinare i n vivo (moleculele stelate de IgM ataeaz mai multe Er i formeaz o reea de puni care conecteaz ntre ele un numr mare de hematii). Aglutinarea in vivo are loc la periferia corpului i mai ales dac bolnavul este expus la temperaturi sczute. Ea provoac obstrucii vasculare, manifestate prin acrocianoz, parestezii sau/i degenerri trofice tegumentare. Atc. la rece IgG au specificitatea anti-Er. Ei se ataeaz la rece pe Er mpreun cu C'. La temperaturi mai nalte imunoglobulina se desprinde iar complementul si continu activitatea pn la constituirea complexului litic final (C'5...C'9). Acesta va provoca hemoliza intravascular a Er. manifestat prin hemoglobinurie denumit a frigore, deoarece apare n crize de expunerea bolnavului la temperaturi joase. Diagnosticul AHAI se bazeaz pe testul Coombs direct. n AHAI la cald testul este pozitiv cu ser antiglobulinic (total) i cu ser monospecific anti-Ig. n AHAI la rece cu Atc. IgM diagnosticul se bazeaz pe demonstrarea fenomenului de aglutinare la rece i pe evidenierea Er.C'3d+ care subzist n snge, cu ajutorul testului Coombs direct cu ser anticomplement. Atc. la rece de tip IgG se evideniaz prin testul DonathLandsteiner; serul bolnavului, C' i eritrocite normale incubate mpreun la ghea timp de 60 minute. Dup nclzirea probei la 370C apare brusc hemoliza. Datorit acestui comportament n 2 timpi aceti auto-Atc. au fost denumii i hemolizine bifazice. AHAI pot fi boli idiopatice sau secundare. Formele secundare apar asociate n general, cu infecii, colagenoze sau boli limfoproliferative maligne (limfoame, leucemie limfatic cronic, mielom multiplu....).

214

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE

CAPITOLUL 12
SINDROAME DE IMUNDEFICIEN I IMUNODEPRESIE
Confruntarea organismului animal cu o varietate larg de microorganisme unicelulare (bacterii, virusuri, levuri) sau cu diveri parazii pluricelulari este permanent. Imediat dup natere, nounscutul ncepe s fie invadat de microorganisme ambientale n general nepatogene, care solicit intervenia mecanismelor de aprare nespecifice i specifice. Aceast colonizare cu flor nepatogen nu reprezint de fapt o infecie. n schimb contactul cu un microorganism patogen va duce la o stare de boal care va putea fi nvins numai dac mecanismele de aprare sunt eficiente. Deficiena mecanismelor de aprare duce n mod inevitabil la contractarea unor infecii severe, din mediul exterior, dar de multe ori i cu germeni purtai de pacient. Germenii care nu reuesc s produc infecii dect la gazdele imunocompromise (de ex. Listeria monocytogenes sau Pneumocystis carinii) sunt denumii germeni condiionat patogeni sau oportuniti. O condiie asemntoare o prezint unele infecii virale latente (de exemplu herpetice) care se redeteapt (se reacutizeaz) mai frecvent la subiecii cu imunodeficen dect la populaia general (a normalilor). Gravitatea infeciilor este dependent de virulena patogenilor respectivi, de cantitatea de germeni, intensitatea inoculului, de modul prin care sunt depite porile de intrare, de influena rezistenei organismului-gazd (de exemplu citomegalovirusul sau virusul HIV care induc imunosupresie), de starea biologic a bolnavului (organismele malnutrite sunt mult mai predispuse la infecii dect cele eutrofice). Deficiena aprrii trebuie deci suspectat la toi subiecii care, indiferent de vrst, prezint infecii recurente,persistente sau neobinuite. Aceast deficien poate fi primar (ereditar) sau secundar (dobndit) i poate interesa elementele componente ale
215

imunitii specifice (limfocite) sau pe acelea ale aprrii nespecifice (fagocitele i complementul). 12.1. IMUNODEFICIENE PRIMARE (IDP) PRIN AFECTAREA CELULELOR LIMFOIDE Se recunosc mai multe mecanisme care afecteaz funciile celulelor limfoide: blocarea diferenierii ntr-un anumit stadiu; tulburri ale activrii celulelor difereniate; alterarea interaciunilor dintre celulele care coopereaz n rspunsul imun. Lista entitilor morbide provocate de aceste anomalii nu este definitiv, deoarece cu ajutorul tehnologiilor de studiu recent introduse au fost identificate noi tipuri de IDP caracterizate prin tulburri la nivelul molecular (absena exprimrii unor receptori sau a Atg.CMH pe limfocite, alterarea mecanismelor de transmitere intracelular a semnalului eliberat de Atg. la nivelul receptorului specific, tulburarea unor gene reglatoare sau a unor enzime implicate n rearanjarea unor gene.). n general, anomaliile diferenierii duc la scderea grav a produciei celulelor funcionale (aceast scdere poate fi observat n organele limfoide ca depleie celular sau n snge ca limfopenie). (Fig.63)

216

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE
Fig. 63 Schema localizrii leziunilor celulare n cazul unor imunodeficiene primare HG-XL = hipogammaglobulinemie legat de sex (boala Bruton); ADA = adenozin-dezaminaz

Programul genetic al diferenierii limfoide poate fi stopat foarte prococe (la nivelul celulelor stem, nainte ca acestea s se diferenieze n LB i LT sau n etape mai avansate ale ontogenezei liniilor de LB sau LT. Anomaliile diferenierii celulelor stem produc sindroamele de imunodeficien combinat sever deoarece mpiedic concomitent formarea LB i LT (disgenezia reticular, agamaglobulinemia helvetic). (Fig.64)

Fig. 64 AGAMMAGLOBULINEMIA Bruton Anomaliile celulelor deja angajate n difereniere afecteaz doar una din cele dou populaii de limfocite, dar rspunsul funcional este
217

diferit. Deficitele de LB produc hipogamaglobulinemie. LB pot fi oprite n difereniere dintr-o etap extrem de timpurie ca n agamaglobulinemie legat de sex (Boala Bruton). Alte defecte ale maturrii LB care afecteaz celulele mai mature se nsoesc de perturbarea fenomenului de comutare izotipic (switching) care se exprim prin hipoagamaglobulinemie selectiv: deficit de IgG cu hiper-IgM, deficit izolat de IgM, deficit izolat de IgG i deficit izolat de IgA. Deficiena de IgA este cea mai frecvent hipoagamaglobulinemie selectiv. Tulburrile imune sunt complexe i asociaz frecvent formarea de auto-Atc: anti-IgA, anti-eritrocitari (cu anemie hemolitic autoimun), anti-nucleari (cu sindrom de tip LED), factor reumatoid (cu sindromul reumatoid). Fenomenele alergice, asociate cu o cretere a IgE, sunt frecvent citate. Absena IgA care contribuie la protecia mucoaselor explic frecvena mare a infeciilor respiratorii i digestive la aceti bolnavi. Deficiena diferenierii LT, secundar ageneziei timice (sindromul di George), este redat n figura 65.

Fig. 65 Sindromul DI GEORGE (Atrezia timic congenital)


218

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Leziunile moleculare care provoac alterarea unor funcii cum ar fi activarea sau cooperarea intercelular nu se soldeaz n general cu depleie celular la nivelul organelor limfoide sau cu limfopenie sanguin. S-au descris recent mai multe leziuni moleculare: deficiena de ADA (adenozin dezaminaz). Absena enzimei permite acumularea intracelular a unor metabolii (adenozin, AMP, ADP, ATP) i a derivailor lor, care au efecte toxice asupra fenomenului de activare i de multiplicare ale LimfociteT i B. ID care rezult este sever i afecteaz ambele sisteme (humoral i celular). Pentru aceast boal au fost imaginate 2 modele de terapie biologic specific: administrarea repetat a enzimei, care intercepteaz adenozina difuzat n spaiul extracelular i o transform n dezoxiinozin netoxic i injectarea bolnavilor cu limfocite autologe n care s-a inserat o gen ADA normal (BLAESE i ANDERSON, 1990). deficiena exprimrii moleculelor CMH de clasa I-a i II-a este secundar lipsei producerii tipurilor specifice de ARNm. Antreneaz un defect de cooperare celular cu absena rspunsurilor de tip celular. S-au descris 2 modele moleculare: deficiena izolat a exprimrii Atg.CMH de clasa I (sindromul limfocitelor dezgolite) i deficiena asociat a moleculelor de clasa I i a II-a. n mod normal, exprimarea genelor CMH este reglat de productele altor gene care sunt plasate la distan n genomul celular (transactivare). Deficiena transactivrii reprezint leziunea molecular din aceast boal. Infeciile apar repede dup natere (candidoz oral, pneumonii, diarei rebele). Funciile limfocitelor T sunt deprimate. Aceasta explic aspectele care caracterizeaz populaia B: absena plasmocitelor tisulare, n contrast cu un numr normal de limfocite B circulante, scderea titrurilor serice de IgM i IgA i rspunsurilor anticorpice dup stimulare. deficiena de exprimare a receptorului pentru IL2 pe suprafaa LimfociteT, care altereaz mecanismele activrilor celulare la mai multe niveluri. deficiena exprimrii unor molecule de adeziune (LIMFOCITEA1= lymphocyte function-associated antigen). LIMFOCITEA1 mpreun cu alte proteine de adeziune formeaz o familie de proteine funcionale denumite integrine. Ele sunt formate dintr-un lan alimfocitea care difer de la o protein la alta i un lan beta care este identic pentru toate proteinele familiei. Deficiena const n tulburarea producerii lanului beta. Deoarece proteinele de adeziune sunt
219

exprimate i de Limfocite i de leucocite deficitul de aprare este complex, perturbnd att cooperarea celular n cadrul rspunsurilor T efectoare ct i aderena, chimiotactismul i fagocitoza polinuclearelor; alterarea exprimrii pe Limfocite. a complexului funcional format din receptorul pentru Atg.(Ti) + CD3 produce o incapacitate a LimfociteT de a recepiona semnalele emise de Atg. specific. Aspecte clinice generale observate n IDP ale limfocitelor Practic vorbind, toate deficienele primare ale LimfociteB, ct i o mare parte a deficienelor primare ale LimfociteT se exteriorizeaz printr-o hipogamaglobulinemie (hG). Aceast hG care nsoete deficienele LimfociteT reflect de fapt perturbarea macanismului de cooperare T - B, necesar producerii de Atc. mpotriva Atg. timodependente. Deficitul produciei de Atc. poate fi global (pan-hG) sau selectiv (limitat la o clas sau subclas de Ig). Manifestrile clinice ale hG sunt infeciile recurente, care, n imensa majoritate a cazurilor, afecteaz tractul respirator. Agenii patogeni cei mai frecveni izolai sunt bacteriile piogene (Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae). Pacienii cu anticorpogenez deficitar nu prezint o susceptibilitate deosebit pentru infecii virale sau fungice dac nu au concomitent i o alterare a imunitii celulare. Imediat dup natere, noinscuii imunodeficitari sunt aprai de Atc. materni (IgG) care au strbtut placenta. Din acest motiv infeciile severe i recurente ncep s se manifeste de abia dup ce nceteaz aceast protecie imunologic pasiv. Deficienele izolate ale imunitii de tip celular (T-dependent) sunt rare. Ele se caracterizeaz prin dominana infeciilor cu ageni intracelulari (mycobacterii, virusuri, fungi, parazii), muli dintre ei fiind condiionat patogeni (oportuniti). Redeteptarea unor infecii latente (de ex. cu virus zosterian) este de asemeni posibil. Spre deosebire de cazurile cu ID umoral, n tulburrile primare T-dependente protecia transferat pasiv de la mam nu este posibil: infeciile pot debuta din acest motiv la foarte scurt timp dup natere. Formele de boal infecioas sunt severe i adesea fatale. Imunizarea cu vaccinuri din germeni vii atenuai este formal contraindicat la aceti bolnavi deoarece poate fi urmat de infecie postvaccinal fatal ca urmare a neeliminrii patogenilor respectivi.
220

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Bolnavii cu ID T-dependent se debaraseaz cu dificultate de celulele strine. Acest comportament specific explic 3 situaii: posibilitatea (din fericire rar) ca transfuziile cu snge integral s provoace reacia de gref - contra-gazd, generat de LimfociteT transfuzate, care reuesc s supravieuiasc, s prolifereze i s reacioneze mpotriva Atg. de histocompatibilitate ale gazdei receptoare ( de aici ideea practic de a nu recurge la transfuzii pentru corectarea unei anemii dect n cazuri bine selectate i numai sub forma administrrilor de eritrocite splate sau, i mai bine, a transfuziilor cu suspensii de eritrocite deleucocitizate prin filtrarea pe vat sau pe acetat de celuloz); riscul crescut (n comparaie cu subiecii normali) de apariie a unor boli maligne; eliminarea lent sau acceptarea allogrefelor. Acest aspect este exploatabil, ca metod de investigare n clinic a ID mediate celular, sau n scop terapeutic ncercri de grefare de timus fetal sau de celule stem limfoide. Elementele de baz pentru diagnostic sunt: 1. Evaluri globale: numrul absolut de limfocite circulante, titrul G serice; 2. Evaluarea rspunsului umoral: dozarea Ig serice: evideniaz hG globale sau unele hG selective grosiere (N.B.: niciodat nu apare absena complet a Ig: chiar i n scderile cele mai severe persist urme detectabile de IgG, IgM sau IgA); nu evideniaz cu exactitate anumite hG selective. De ex. 70% din nivelurile globale ale IgG serice se datoresc subclasei de IgG1; n timp ce activitatea de Atc mpotriva unor anumite Atg. poate fi legat de alt subclas. Subiecii cu deficiena produciei de IgG2 de ex. vor face infecii pneumococice frecvente (Atc. IgG2 domin printre speciile de Atc. antipneumococ), dar diagnosticul acestei deficiene selective poate fi ratat la investigarea global, dac nu sunt sczute concomitent i nivelurile IgG1. Metoda curent pentru dozare Ig serice se numete imunodifuzie radial simpl Mancini (IDRS). Principiul acestei metode este imunoprecipitarea (atunci cnd un Atg. i Atc. su specific sunt incubate mpreun in vitro, formeaz precipitate dac concentraiile lor reciproce sunt optime). n IDRS Mancini cei doi reactani sunt Ig din serul bolnavului (care joac rol de Atg) i un antiser antilanuri grele de Ig umane (antigama, antimiu i antialimfocitea). Antiserul este nglobat n agar. Mixtura antiser agar este ntins n strat subire i egal pe fundul
221

unei plci Petri. Se lucreaz n paralel cu 3 plci Petri: agar + antigama, agar + antimiu, agar + antialimfocitea. n stratul de agar se sap din loc n loc un numr de godeuri. Un godeu (martorul) va fi umplut cu un ser standard (cu o concentraie cunoscut de Ig specific antiserului nglobat n stratul de agar al plcii respective). Celelalte godeuri vor fi umplute cu seruri ale bolnavilor de testat Atg., (aici Ig seric) difuzeaz radiar n agarul care mrginete godeul respectiv. n punctul n care se realizeaz concentraiile echivalente cu Atc. din antiser se produce imunoprecipitarea. Aceasta va avea aspect circular. Msurarea diametrelor inelelor de precipitare i compararea lor cu diametrul standard poate fi convertit cu ajutorul unei scale n uniti de mrime pentru determinarea cantitii de Ig din serul de cercetat. IDRS este o metod relativ sensibil (simte diferene de aprox. 5 mg/l) i destul de fiabil: determinarea titrurilor unor Atc. permaneni: ASLO izoaglutininelor naturale alimfocitea i beta; determinarea rspunsului anticorpic dup administrarea unui antigen nenociv; aprecierea procentului de LimfociteB circulante (testul rozetelor EAC); 3. Determinarea tulburrilor n linia celular T: testul rozetelor E evaluarea LimfociteTh i Ts circulante (testri cu anticorpi monoclonali anti-CD4 i respectiv anti CD8). intradermoreacii cu Atg. specifice rspunsului celular (PPD, candidin, tricophiton). teste de transformare blastic in vitro dup stimularea cu PPD sau ali mitogeni. Elemente de terapie: identificarea germenilor i antibioterapia intit; substituia specific: aport de Ig: - perfuzii cu plasm proaspt congelat 1015 ml/Kg corp ( repetat la 3 spt.) administrare de preparate speciale de Ig injectabile i.v. (ncrcare cu 50 mg/Kg/zi x 5 zile apoi 25 mg/Kg sptmnal pentru meninerea unui titru de IgG peste 2g/l). aport de factori timici solubili (alternativ a grefei de timus)
222

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE restaurarea imunitii: grefe de MO (n hipogamaglobulinemia Bruton sau n ID severe combinate); grefe de timus sau de ficat fetal (n ID timice pure). Risc major reacie de gref-contra-gazd.

12.2. DEFICITE PRIMARE ALE FAGOCITELOR I COMPLEMENTULUI Imunitatea umoral este reprezentat de anticorpo-sintez i de mecanismele efectoare prin care sunt eliminate complexele Atg-Atc: fagocitarea complexelor imune liza Atg- int cu ajutorul C' Aceast strns interdependen ntre imunitatea umoral specific i mecanismele efectoare nespecifice explic similitudinele clinice observate n cazul anomaliilor celor dou condiii. Anomaliile neutrofilelor pot fi cantitative (frecvent) sau calitative (rar). Neutropenia este definit prin valori absolute mai mici de 1,5 x 109/1 (N.B.= valorile mai mici de 0,5 x 109/1 reprezint condiii critice de risc maxim pentru contractarea unor infecii fatale). n practica clinic, imensa majoritate a neutropeniilor sunt dobndite (secundare leucemiilor acute, dup administrarea de medicamente citostatice mielodepresive, n cadrul aplaziilor medulare de diverse etiologii, neutropenii autoimune, etc.). Formele primare de neutropenie sunt foarte rare: neutropenia cronic benign, neutropenia clinic sunt entitile mai bine conturate. Anomaliile funcionale (calitative) primare ale neutrofilelor pot afecta motilitatea, chimiotactismul, capacitatea de fagocitoz i de bactericidie. Aceste tulburri se pot asocia n diverse combinaii. Afeciunea cea mai bine caracterizat este granulomatoza septic cronic. Sub aceast denumire sunt incluse mai multe condiii cu transmitere genetic diferit dar care au n comun un defect de producie de radicali peroxidici n cursul fagocitozei. Se presupune c aceast tulburare metabolic este rezultatul deficienei de NADPHoxidaz. Rezultatul final este scderea capacittii de a ucide bacteriile peroxidazo-negative fagocitate. Acestea supravieuiesc i prolifereaz n mediul intracelular, care le protejeaz mpotriva aciunii Atc. i a majoritii antibioticelor. Manifestrile clinice curente sunt infecii prelungite i recurente, n general stafilococice, care afecteaz cel mai frecvent pielea i mucoasele, dar pot fi nsoite de adenite supurate sau
223

de abcese cronice i care sunt prost influenate de antibioterapie. Diagnosticul se bazeaz pe demonstrarea inabilitii neutrofilelor activate de a reduce srurile de tetrazolium. Aceast reducere se nsoete de virarea culorii substanei din galben n albstru i necesit formarea intracelular a peroxizilor. (Testul NBT= nitroblue tetrazolium). Anomaliile complementului. Sistemul complementului (C') este format din circa 20 de proteine plasmatice (componente) produse n marea lor majoritate de ctre Mcf hepatice sub form inactiv. Toate componentele sistemului se comport ca proteine de faz acut: rata sintezei lor se accentueaz n cursul infeciilor sau al altor injurii care promoveaz activarea sistemului. Din punct de vedere molecular activarea unui factor al C' nseamn o clivare enzimatic n dou fragmente: fragmente mici (a) sunt n general implicate n producerea unei reacii inflamatorii locale n timp ce fragmentele mari (b) posed un situs de ataare (pe membrane celulare sau pe complexe formate din asocierea mai multor componente ale C') i un situs enzimatic care produce clivarea (activarea) altui component al C'. Aceste activri se produc ntr-o ordine predeterminat (n cascad), Elementul crucial al cascadei este activarea lui C'3 cu scindarea sa n dou fragmente: C'3a cu proprieti chemotactice i anafilatoxice (degranularea mastociteloreliberarea histaminei- creterea permeabilitii vasculare) i C'3b cu proprieti enzimatice care declaneaz activarea secvenelor distale (C'5- C'9). Activarea complet a C' se finalizeaz cu liza celulei-int (bacterie, celul infestat cu virus sau alte organisme invadatoare). Activarea lui C' este promovat de 2 macromolecule proteoenzimatice (convertaze). Fiecare din aceste convertaze se formeaz din precursori proprii n cadrul unor secvene separate denumite calea clasic i calea alternativ. Calea clasic este declanat de Atc. fixai pe Atg. Ea implic ataarea C'1q care asociaz C'1r i C'1s. Complexul C'1qrs are activitate enzimatic (=C'1- esteraz) i cliveaz pe C4 i pe C'2: C'4b i C'2b se cupleaz i formeaz convertaza cii clasice a lui C'3; C'4a i C'2a se diasociaz i trec n plasm (un peptid desprins din C'2 va juca rolul de substan kinin-like). Trigger-ii cii alternative nu sunt anticorpi, ci endotoxine bacteriene i elemente ale pereilor bacterieni care pot genera spontan urme de C'3b. Aceasta va forma convertaza cii alternative prin cuplare cu factorii proprii ai acestei ci (factorul B i D). Diversele elemente ale sistemului complement ar ndeplini 4 funcii n cadrul proceselor de aprare.

224

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE prin nvelirea (opsonizarea) cu molecule de C'3b a microorganismelor faciliteaz imunoaderena acestora la Mcf i procesele de fagocitoz; produc liza celulelor-int prin complexul litic final (denumit complexul de atac al membranei deoarece produce perforaii n membrana celular); mediaz procese inflamatorii locale prin fragmentele mici (C'3a, C'5a, C'2kinin-like): mrirea permeabilitii vasculare atragerea de noi fagocite n focar capabile s nglobeze alte celule opsonizate; interacioneaz cu alte procese fiziologice: coagularea, fibrinoliza, sistemul kininelor. Controlul cascadei complementului este realizat de mai muli inhibitori i inactivatori. Unul dintre inhibitorii cei mai importani este C1.INH. Trei sindroame principale se asociaz cu deficiene nscute ale componentelor sistemului (Fig.66)

Fig. 66 Principalele sindroame clasice care se asociaz cu dificienele ereditare ale diverselor componente ale C' (EAE=edem angioneurotic ereditar)

1. un sindrom asemntor cu LED (eritem facial, artralgii, glomerulonefrit, febr, vasculit) apare n deficienele C'1, C'4 sau C'2.
225

Anticorpii antinucleari sunt, de regul, abseni dar apar frecvent complexe imune circulante. 2. o cretere a susceptibilitii generale la infecii bacteriene n deficiena de C'3 sau o tendin la infecii recurente cu Neisseria gonococcus sau N. meningitidis n deficiena de C'5, C'7 sau C'8. 3. edemul angioneurotic ereditar (EAE) apare n deficiene de C'1. Substratele acestui inhibitor sunt C'1r, C'1s, kalicreina, plasmina i factorul XII al coagulrii (Hageman). Deficiena C'1.INH permite o stare de activare lent-continu a C'1-esterazei care scindeaz C'4 i C'2 genernd peptide C'2kinin-like. Stresuri fizice, infecii, traume, ciclul sexual pot aciona ca triggere care amplific aceste activri cu consumarea excesiv a inhibitorului. Substanele necontracarate de tip kinin-kalicrein induc atacurile acute manifestate prin edem subcutanat, laringian (risc de asfixie) sau intestinal (cu dureri abdominale atroce, vrsturi provocate de edemul jejunal sau diarei apoase prin edem colonic). Crizele pot dura ore-zile. Diagnosticul se bazeaz direct pe demonstrarea scderii titrului cu activiti C'1.INH sau indirect prin constatarea scderii fraciunilor C'4 i C'2 (aceast scdere apare obligatoriu n criz i facultativ n perioade de linite). Criza de EAE este o mare urgen medical i cere administrare imediat de plasm proaspt sau de preparate concentrate de C'1.INH, terapie cu androgeni (ex. Danazol care stimuleaz sinteza inhibitorului) i inhibitori ai formrii plasminei (acidul epsilon-aminocaproic) pentru reducerea consumului de C'1.INH pe alt strat (plasmin). 12.3. IMUNODEFICIEN}E SECUNDARE (IDS) Deficitele imunitare dobndite sau secundare pot fi observate n cursul a numeroase afeciuni, unele atingnd mai frecvent imunitatea celular, altele pe cea humoral. Ele joac un rol important n bolile cu care sunt asociate, fie modificnd evoluia lor, fie stnd la originea lor. Deficitele imunitare secundare pot fi grupate la rndul lor n cinci categorii: a) deficite asociate hemopatiilor maligne i cancerului; b) deficite asociate tulburrilor metabolice; c) deficite asociate factorilor stresani; d) deficite de origine iatrogen sau imunodepresia chimic; e) deficite asociate bolilor infecioase; f) alte deficite imunitare secundare (Tabelul nr.9) a) Deficite asociate hemopatiilor maligne i cancerului
226

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Deficitele imunitare celulare sunt observate n numeroase afeciuni care ating sistemul limfoid. Dintre acestea amintim: leucozele, leucemiile, n special leucemia limfoid cronic; boala lui Hodgkin; subiecii atini de aceast boal prezint o frecven anormal la diverse infecii bacteriene virale i micotice; paralimfoame (lymphoma-like) sau limfoproliferri de grani, recunoaterea acestor forme de grani, n care persistena unui antigen n organism duce la o hiperstimulare imun cu histio-limfoproliferare, care dup o anumit perioad se transform n proliferare malign conturat ca boal Hodgkin, mielom, limfom malign, leucemie limfoid cronic; cancerul- n aceste cazuri deficitul imunitar se aseamn cu starea de cancer; b) Deficite asociate tulburrilor metabolice Prevenirea apariiei unor afeciuni nutriionale i metabolice, acioneaz mai ales indirect dar i direct asupra creterii rezistenei indivizilor. n acest caz dezechilibrrile nutritive, consecutive dezechilibrelor alimentare (prin diminuarea sau n exces) nu se manifest la exterior, dar creaz o stare de labilitate, de predispoziie la agresiunea unor ageni infecioi. Infeciile survin mai frecvent la indivizii malnutrii proteinocaloric sau invers toate infeciile sunt susceptibile a fi declanate pe indivizi subnutrii. Deficitele asociate cu dezechilibrele nutritive i tulburrile metabolice pot fi grupate i ele n dou categorii: deficite prin caren i deficite prin exces. Deficitele prin caren pot fi: 1. strile de subnutriie proteino-caloric; 2. carena n aminoacizi; 3. carena n vitamine; 4. carena n oligoelemente; Deficite prin exces: 1. exces de iod; 2. exces de vitamine; 3. exces n lipide; 1. Strile de malnutriie proteic pot fi la originea unor deficite imunitare complexe. n asemenea situaii se constat o scdere a titrului
227

de gamaglobuline din ser precum, i o diminuare a numrului i funciei LT. 2. Carena n aminoacizi. S-a constatat o relaie direct asupra carenei n A.A. i raspunsului imun. Astfel, carena n fenilalanin, triptofan, lizin, atinge sinteza de anticorpi i fagocitoza (macrofagele) iar carena de valin, arginin i metionin au o aciune mai specific asupra LT. De asemenea, procentul de valin i raportul cistein/metionin este necesar meninerii unui numr normal de limfocite i fagocite i raportul valin/glicin permite controlul carenei proteico-calorice. 3. Carena n vitamine. Vitaminele particip la rspunsul imunitar prin activitatea lor coenzimatic sau prin aciunea lor asupra membranei celulare (vitamina A,E i C) sau prin participarea lor la metabolismul celular i n particular la cel proteic (vitamina B). Aciunea imunitar a vitaminelor este legat de rspunsul imun humoral (vitamina E, acidul pantotenic i biotina) dar trebuie reinut deasemenea aciunea vitaminei B6 i acidul folic asupra mediatorilor celulari (a LT), a vitaminei E i C asupra fagocitozei, iar vitamina A asupra proteciei epiteliilor i mucoaselor. 4. Carena n oligoelemente. Oligoelementele sunt egal implicate n reaciile imunitare. Prezena ionilor de Mg, Ca, K, Co, Cu, sunt necesari funciilor de fagocitoz i activitii sistemului complement properdinic. Carena n Zn deprim profund imunitatea celular iar cea n Mg preferenial asupra imunitii humorale. Prezena Fe n organism este necesar pentru blocarea creterii bacteriilor. Deficite prin exces de I, Fe, Zn duc la creterea susceptibilitii la infecii, inhibarea fagocitozei prin polimorfonucleare iar excesul de vitamina A i C duce la scderea activitii complementului, a rspunsului imunitar i a activitii polimorfonucleare neutrofile (PNN). Excesul de lipide determin creterea sensibilitii organismelor la infecii. c) Deficite asociate factorilor stresani Stresul i imunodepresia. Stresul se caracterizeaz (H. SELYE) prin stimularea axului hipotalamo-hipofizo-suprarenal, care are drept consecin secreia unei cantiti crescute de TSH, ACTH, deci corticosteroizi i de STH (reacie postagresiv neuro-endocrin). Aplicarea stresului experimental (stimulatori vizuali, auditivi, manipulri repetate, supraaglomerarea, transportul, frigul, cldura, etc.) (Tabelul nr.10) diminueaz sinteza de anticorpi (Atc) la numeroase specii. Imunitatea celular este n egal msur diminuat de stresul
228

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE experimental care influeneaz hipersensibilitatea ntrziat, transformarea limfoblastic i rejecia de grefe. Mrirea sensibilitii omului la infecii sub efectul factorilor stresani a fost adesea expus n literatur dar anumite rezultate sunt contradictorii. La animalele stresate experimental (oc electric, oc termic, constrngere fizic) crete sensibilitatea la infecii virale (herpes, polio, encefalomiocardit). Pentru infeciile bacteriene i parazitare rezultatele sunt controversate. Efectul stresului asupra apariiei cancerului a fost demonstrat prin experienele lui RILLEY care a provocat apariia tumorilor mamare la 80 - 100% din oarecii purttori ai unui genom viral (provirus), stresndu-i prin manipulare i brutalizare alalong timp de 8 - 18 sptmni. d) Deficite de origine iatrogen i sau imunodepresia chimic Numeroase medicamente sunt susceptibile de a antrena o perturbare a rspunsului imun. Agenii terapeui cel mai adesea pui n cauz, sunt radiaiile ionizante care pot provoca aplazii medulare, antimicoticele, corticosteroizii, agenii alchilani sau o serie de medicamente imunodeprimante care se utilizeaz n tratamentul bolilor autoimune sau n prevenirea rejeciilor de grefe. Thiopurinele deprim producerea de anticorpi i reaciile de hipersensibilitate ntrziat. Agenii alchilani (cyclophosphamida, clorambucilul) reprezint imunosupresoare chmice foarte puternice care suprim producerea de anticorpi i permite introducerea unei tolerane fa de numeroase antigene, utilizndu-se pentru a mpiedica respingerea grefelor. Corticoizii produc o supresie celular a rspunsului imun i au un rol important n aciunea antiinflamatorie. Ciclosporina A este un peptid ciclic extras din ciuperci care s-a dovedit a fi un puternic supresor a reaciilor imunitare mediate de limfocitele T. n particular, ciclosporina A, suprim rspunsul proliferativ al limfocitelor, mitogeneza specific a celulelor T i ntrzierea rejeciilor alogrefelor. Poluanii i imunodepresia. Poluarea cu metale grele (mercur, plumb, cadmiu), organofosforice (paration), organoclorurate (DDT, PCB Dioxine), aflatoxine i ali ageni chimici au efecte imunodepresoare acionnd fie asupra imunitii umorale fie asupra celei celulare (Tabelul nr.11).
229

Antibioticele. Unele antibiotice au efect imunodepresor dar efectul lor inhibitor observat in vitro nu se coreleaz totdeauna cu cel in vivo. De exemplu tetraciclina in vivo nu modific rezistena puilor imunizai contra maladiei de Newcastle. Alte antibiotice accelereaz evoluia maladiei Marek cum ar fi penicilina i streptomicina, n schimb tetraciclina, gentamicina, ampicilina rmn fr efect. Este deci contraindicat utilizarea unor diluani cu antibiotice pentru vaccinurile vii atenuate.

e) Deficite asociate bolilor infecioase Anumite boli infecioase (tuberculoza, paratuberculoza, lepra, sifilisul, infecia cu pneumococi i meningococi) la animale,pot fi la originea unui deficit imunitar, n special al imunitii prin mediere celular. n diminuarea rspunsului imun intervin n egal msur paraziii (protozoare, helmini) i virusurile. Fenomenele imunodepresive consecutive infeciilor virale sunt bine cunoscute att la om ct i la animalele de laborator. Infecia viral poate induce n anumite cazuri anomalii selective ale limfocitelor T, ale limfocitelor B sau ale macrofagelor. Lista virusurilor care pot perturba rspunsul imun este redat n tabelul nr.12. Imunodepresia viro-indus are un caracter pasager, dar poate deveni permanent cnd infecia prinde esutul limfoid i devine persistent. f) Alte deficite imunitare secundare Alte afeciuni foarte diverse pot fi la originea deficienelor imunitare globale sau limitate la un antigen particular. Dintre aceste afeciuni amintim: supraalimentaia, ciroza etilic, anemia prin caren n Fe, diverse maladii metabolice, etc. n sfrit se spune de mult timp c mbtrnirea organismului este la originea unui deficit imunitar. Foarte adesea acest deficit este gsit la persoanele i animalele btrne i se atribuie frecvenei mari a unor afeciuni cronice, ca i procentajul crescut al cancerului. Acest deficit imunitar este atribuit mbtrnirii timusului. De fapt testele in vitro pe limfocitele T permit asocierea deficitului funcional la subiecii vrstnici. n practica curent testele cutanate la diveri antigeni permite demonstrarea negativitii rspunsului imun prin mediere celular la 2/3 din subiecii peste 75 ani. La aceti subieci toate maladiile, dar mai ales cele virale au o gravitate ridicat.
230

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE

Tabelul 9 Deficite imunitare secundare - sub- i supranutriia proteic, obezitatea; - carene n aminoacizi, vitamine, oligoelemente, etc.; Tulburri metabolice - deshidratare prin arsuri, diaree i alte afeciuni; - boli cronice cum ar fi: diabetul, ciroza, insuficienele renale, etc. - Bacteriene: tuberculoza, lepra, paratuberculoza, etc.; - Parazitare: malaria, toxoplasmoza, Maladii infecioase babezioza, demodecia, etc. - Virale: retrovirozele, herpesvirozele, parvovirozele, etc. - limfosarcoame la cal, carcinoame la Hemopatii maligne cine - anestezice, antibiotice, Maladii de origine antiinflamatoare, chimioterapice, iatrogen imunodepresoare, poluani Stresul - lotizri, vaccinri, tratamente, etc Tabelul 10 Factorii extrinseci care afecteaz sistemul imunitar Factori Rspunsul extrinseci Frigul Crete receptivitatea la infecii bacterien
231

Cldura

Contenia animalelor Transportul

e primare i secundare, sinteza de interferon scade, sinteza de anticorpi crete, dar timpul de njumtire a imunoglobulinelor scade, testele utanate i de proliferare a celulelor T in vitro indic o diminuare a acestora. Crete rezistena la unele virusuri i timpul de njumtire a imunoglobulinelor; testele cutanate, testele de proliferare a limfocitelor i absorbia imunoglobulinelor colostrale indic o scdere a acestor activiti Ridic sensibilitatea la infeciile bacteriene, parazitare i virale i scade sinteza anticorpilor Sensibilitatea la anumite virusuri i tumori crete, iar sinteza de interferon i funciile limfocitelor scade Tabelul 11

Poluanii

Aciunea imunodepresiv a poluanilor Concluzii Modele experimentale Infecia oarecilor cu S. Mercur typhimurium Aujeszky la iepure Aujeszky la iepure Plumb Hematii de oaie la oarece Hexamit Cadmiu murin Bovine Pui Marek, candidoz) {oareci (Listeria) {oareci
232

DL 50/10

METALE GRELE

Scade titrul de Ac din ser Scade titrul de Ac din ser Scade receptivitatea LB la PHA Crete sensibil IgM i IgG scade Scade puterea bactericid a serului (holer, Crete sensibilitatea

AFLATOXINE

Scade rezistena Atrofia timusului

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE ESTROGENI Scade rezistena umoral i celular (scade activitatea limfocitelor Ts) ORGANOFOSFORICE Parathi {obolan Scade capacitatea de on rozetare a celulelor B i T Iepure Aplazie limfoid cu scderea rezistenei umorale i celulare Scade titrul de Ac n Iepure, obolan special IgG D.D.T Crete sensibilitatea Pui la histomonoz i scade Ac din ser ORGANOCLORURAT Crete sensibilitatea {oarece E la endotoxine Crete receptivitatea Ra P.C.B la virusul hepatitei Scade titrul de Ac din Pui, iepure ser DIOXINE Scade rezistena celular Tabelul 12

Principalele virusuri imunodepresoare Familia viral Virusul i boala determinat TOGAVIRIDAE

PARAMIXOVIRIDAE

CORONAVIRIDAE

Virusul pestei porcine clasice Virusul diareei bovine (BVD) Virusul encefalomielitei equine din Venezuela Virusul dehidrogenazei lactice la oareci Virusul rujeolei Virusul bolii lui Carr Virusul pestei bovine Virusul oreionului Virusul pneumoniei oarecilor Virusul SENDAI la oarece Virusul bolii de Newcastle Virusul hepatitei oarecilor
233

ARENAVIRIDAE REOVIRIDAE RETROVIRIDAE

PARVOVIRIDAE

PAPOVAVIRIDAE HERPESVIRIDAE

IRIDOVIRIDAE POXVIRIDAE

Virusul peritonitei infecioase a felinelor Virusul choriomeningitei limfocitare Virusul bolii Gumboro Virusul leucemiei Friend Virusul leucemiei Rauschers Virusul leucemiei Moloney Virusul leucemiei Gross Virusul leucemiei Rowson-Parr Virusul leucozei feline Virusul leucozei bovine Virusul anemiei infecioase bovine Virusul Visna-Maedi Virusul SIDA la maimu i om Virusul bolii aleutine la vison Virusul panleucopeniei feline Virusul parvovirozei cinelui Virusul parvovirozei obolanului Virusul SV-40 la hamster Virusul bolii lui Marek Citomegalovirus mai ales la oarece i om Virusul varicelei (zona zoster) Virusul Epstein-Barr Herpesvirus 1, a rinotraheitei bovine Herpesvirus 1, a rinopneumoniei eqvine Virusul timic la oarece Citomegalovirus Virusul pestei porcine africane Virusul vaccinal

234

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE

CAPITOLUL 13
STRILE DE HIPERSENSIBILITATE
Reaciile imune umorale i celulare, care n mod normal servesc ca arme de aprare mpotriva infeciilor sau a tumorilor pot n anumite mprejurri, s provoace leziuni organismului gazd. Aceste stri patologice au fost denumite stri de hipersensibilitate sau alergice. Termenul de alergie a fost creat de von PIRQUET (1907) pentru a defini o reactivitate alterat dup expunerea la un Atg. Antigenele care declaneaz o reacie alergic au primit numele de alergene. Alergenele nu se deosebesc de Atg. care declaneaz reaciile imune normale (protective). Ele pot fi macromolecule sau haptene de diverse proveniene: polenuri, acarienii (moliile de stof) sau mucegaiurile din praful de cas, pr de animale, veninuri de insecte (viespe de ex.) produse alimentare (lapte de vac, ou, carne de pete, cpuni, zmeur...) medicamente (penicilina n primul rnd). Un element de predispoziie genetic ar putea s fie incriminat n potenarea apariiei acestor rspunsuri aberante (de tip alergic) dup contactul cu Atg. specifice. Datele nu sunt foarte sigure n acest domeniu, dar unele observaii sunt invocate ca argumente n favoarea implicrii acestor factori de teren: transmiterea la urmai a tendinei la rspunsuri alergice;
235

coexistena pe orizontal a mai multor consanguini care prezint diferite manifestri alergice; asocierea unor manifestri alergice cu anumite profiluri CMH: de ex. CMH A3, B7, DR2 se asociaz frecvent cu unele forme de alergie mediate de IgE, ca rspuns la alergene multiple. Strile de hipersensibilitate (HS) au fost mprite de GELL i COOMBS n 4 modele reactive. Ele pot fi mediate fie de Atc.(HS de tip imediat) fie de LimfociteT sensibilizate (HS de tip ntrziat sau tardiv).

13.1. STRILE DE HIPERSENSIBILITATE IMEDIAT (SHI) Se mpart n 2 grupe dup tipul Atc. i dup modul de aciune a Atg.: 1. HSI mediat de IgE = reacii anafilactice i atopice. 2. HSI mediat de alte clase de Ig (IgG de ex.) reacii citotoxice i/sau citolitice; reacii mediate de complexe imune circulante sau depuse n esuturi; HSI mediate de IgE pot fi mprite n reacii sistemice (anafilactice) i locale (atopice). Ele produc starea de boal prin aa numita reacie de tip I din clasificarea GELL i COOMBS. Anafilaxia (= contrariu proteciei) este n general o reacie sistemic grav i indus de ptrunderea direct n circulaie a alergenelor. n patologia uman ea se observ dup administrarea parenteral de medicamente (penicilin de ex.), dup serumizri cu seruri xenogenice (ser de cal) sau dup ruptura chisturilor hidatice. Manifestrile clinice sunt dominate de dispnee asfixic (provocat de o bronhoconstricie) i de o stare de oc (secundar unui colaps vascular periferic). Aceast situaie grav denumit oc anafilactic apare numai la subiecii sensibilizai, adic la persoane care au suferit n prealabil o expunere la alergenul respectiv. ocul anafilactic a fost indus experimental pentru prima oar de RICHET i PORTIER (1902) care au vrut s testeze reactivitatea unui cine fa de Atg. unor molute (Fig.67) Dup o prim injectare (preparatoare) a Atg., n urma creia nu au observat efecte notabile, readministrarea Atg. a produs o stare de oc fatal i nu o reacie anticorpic de aprare aa cum se anticipase ca prezumie a experimentului. Fenomenul a fost ulterior reprodus de
236

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE SCHULTZ i DALE (1913) n vitro, pe organe izolate: un fragment de intestin prelevat de la animalele sensibilizate la un alergen i suspendat n soluie fiziologic, se contract puternic dac alergenul respectiv este introdus n soluia de suspensie. n 1921 PRAUSNITZ a demonstrat posibilitatea transferului pasiv de anafilaxie: el i-a injectat i.d. ser recoltat de la un donator (care se numea Kustner) presensibilizat fa de Atg. de pete. Dup 48 ore de la prima injecie, PRAUSNITZ i-a administrat i.d. o cantitate mic de Atg. extrase din pete mpreun cu un colorant (albastru Evans). La locul injeciei a aprut o pat albastr, secundar unei puternice hiperemii locale dublat de vasopermeabilitate, care a permis difuziunea colorantului. Fenomenul Prausnitz- Kstner a fost iniial interpretat ca o reacie vasomotorie mediat de o eliberare local de histamin. Ulterior s-a dovedit c fenomenul este specific i c ar fi legat i de un factor seric prin intermediul cruia s-ar transmite alergia. Acest factor seric este IgE.

237

Fig. 67 Descoperirea anafilaxiei

IgE exist n mod normal, n titruri mici, n serul tuturor indivizilor, iar sinteza lor sporete ca rspuns normal de aprare faa de unele agresiuni, cum ar fi infestarea cu unii parazii. IgE se comport ca Atc. citofili: ele sunt ataate selectiv pe celule care exprim pe suprafat receptori specifici pentru segmentul Fc (RFc ) (mastocite i polinucleare bazofile). Alergenele induc producia unor IgE specifice (denumite generic reagine) care se ataeaz pasiv pe celulele RFc +. Ataarea reaginelor pe mastocite este durabil (aprox. 2-3 luni) i duce la activarea mastocitelor purttoare. Evenimentele descrise (producia IgE specifice i ataarea lor pasiv i durabil pe mastocite) au loc dup primul contact cu alergenul (etapa sensibilizrii organismului). n momentul n care alergenul ptrunde din nou n organismul presensibilizat, el se va cupla cu IgE ataate pe mastocite i va declana un semnal n urma cruia coninutul granulaiilor acestor celule va fi deversat n mediul ambiant. (Fig.68) Fenomenul este descris sub numele de degranulare a mastocitelor iar substanele eliberate sunt mediatorii reaciei anafilactice (Tabelul 13). Aceti mediatori produc n principal: contracia muchilor netezei (histamina, serotonina, ARS-A) creterea permeabilitii capilare (histamina, serotonina, PAF); chimiotaxia eozinofilelor (ECF-A); agregarea plachetar (histamina);

238

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE

Fig. 68 Reacii de tip I: anafilaxia i atopia

Este de reinut c, pe lng mastocite i bazofile, o parte din aceti mediatori sunt elaborai i de alte celule care pot fi antrenate n reacia anafilactic (neutrofile, monocite/macrofage, trombocite).

Tabelul13 Mediatorii chimici ai anafilaxiei


Substana 1. Histamina Sursa M. B. Tr Funcii VD VP VC BC Ch Altele + + + Prurit. Secreie de mucus

2. Serotonina

M. Tr. Celule + enterocromafine

+ +

3. NCF (Neutrofil M chematoactic factor) 4. ECF-A M


239

(Eusinophil chemotactic factorA) 5. VIP (Vasoactive M. N. Ramuscule + intestinal peptide) nervoase cutanate Potenea z edemul indus de bradikini n i de C'5a + + Agregare plachetar

6. Tromboxan A2

N. Mo. Mcf

7. Prostaglandine E2 Idem i D2 8. PAF (Platelet N. B. Mo. Mcf activating factor) 9. SRSA (Slow M. N. Mo. Mcf reacting substance of anaphylaxic). Este format din leucotriene C i D

+ +

+ + + Agregare plachetar

Legend:

M = mastocite; N = neutrofile; VD = vasodilataie; VC = vasoconstricie; Ch = chimiotaxie; B = bazofilie; Mo = monocite; Tr = trombocite; Mcf = macrofage; VP = vasopermeabilitate; BC = bronhoconstricie

Atopia se produce printr-un mecanism identic cu reacia anafilactic, dar se deosebete de aceasta prin 2 aspecte: Atg. ptrunde n organism de regul pe cale digestiv sau respiratorie; reacia alergic este localizat la nivelul unui organ int i produce un anumit tablou de mbolnvire: mucoasa nazal (rinit alergic, febr de fn), mucoasa respiratorie (edemul Quincke, astmul alergic), mucoasa digestiv (urticaria atopic, unele forme de diaree), piele (eczem atopic). Este de subliniat existena unor reacii care mimeaz att circumstane ct i simptomatologia afeciunilor alergice: dermografismul, urticaria afrigore, urticaria actinic, edemul
240

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE angioneurotic, alte tipuri de astm bronic, etc. n nici una din stri nu este implicat mecanismul mediat de IgE. Elemente de diagnostic: teste in vitro transformarea blastic a Limfocite indus prin coincubare in vitro cu alergenul (este crescut); determinarea titrului IgE n circulaie: RIST (radio-immune sorbent test); serul de testat se incubeaz cu IgE marcate i cu Atc. anti-IgE ataate pasiv prin fragmentele lor Fc pe suporturi solide (de ex. pe mici particule de Sephadex). IgE din serul bolnavului i IgE marcate se ataeaz competitiv pe situsurile combinative ale Fab-urilor, moleculelor de anti-IgE fixate pe suporturi. Cu ct exist o cantitate mai mare de molecule de IgE n serul de testat i ocup mai multe situsuri combinative ale reactivului anti-IgE, cu att mai puin moleculele de IgE marcate vor fi ataate. Dac dup centrifugare se arunc supernatantul care conine toate moleculele de IgE rmase nelegate, msurarea redioreactivitii sedimentului va exprima indirect cantitatea de IgE din serul bolnavului (Fig.69) RAST (radio-allergo-sorbent-test). Alergenul incriminat fixat pe un suport solid este incubat cu serul bolnavului. IgE serice se vor fixa pe Atg. Dup ndeprtarea excesului de IgE rmas nefixat se adaug reactivul cu anti-IgE marcat. Testul permite att dozarea IgE ct i identificarea Atg. determinarea eliberrii de histamin de ctre Mcf. sensibilizate: dup incubarea lor cu alergenul specific se apreciaz fie degranularea, fie c se msoar cantitatea de histamin eliberat. teste in vivo: aplicarea intracutanat a mai multor alergene ( de ex. depunerea unei picturi de alergen pe tegumentul nepat foarte superficial cu un instrument special). O reacie local este considerat ca test pozitiv. Testul cutanat prezint ns riscul declanrii unei anafilaxii sistemice; de aceea este necesar pregtirea unei truse cu medicamente antioc i anafilactice care s existe la ndemn.

241

Fig. 69 Metode de dozare a IgE

Elemente de terapie terapia strilor acute - combaterea ocului Hidrocortizon hemisuccinat 500 mg sau Urbason 250 mg (i.v., lent) Adrenalin 1 mg s.c. sau Dopamin 5-15 micrograme Kg/min i.v. Tavegyl 1-2 fiole i.v. terapia strilor cronice identificarea i eliminarea contactului cu antigenul desensibilizarea specific: alergenul identificat se administreaz i.d. la 48 de ore interval in doze progresiv crescnde. Doza iniial este de aproximativ 1/100 - 1/10 din cea mai mic doz care a produs o reacie cutanat pozitiv la testul de identificare a alergenului.
242

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Dozele terapeutice nu trebuie s determine reacii alergice locale sau generale. Dozele desensibilizante de Atg. ar stimula producia unor Atc. specifici de clas IgG. Acetia persist mult timp n irculaie (circa 4 sptmni) i pot intercepta (bloca), prin formare de complexe imune, orice noi doze de alergen care depesc porile de intrare. Blocarea alergenelor mpiedic ataarea lor pe IgE fixate pe mastocite. Complexele alergen IgG sunt eliminate (clearing) de ctre Mcf. droguri antihistaminice: Tavegyl, Romergan (p.o.) inhibitori ai degranulrii mastocitelor: Zaditen (p.o.), (Ketotifene); Cromoglicat de Na (aerosoli) glicocorticoizi (Prednison) sau ACTH. medicamente cu aciune asupra bronhospasmului; simptomatice: Adrenalina, Efedrina; baze xantinice: Teofilina; corticoizi fluorinai cu aciune cutanat local (pomezi cu Fluocinolon sau Pivalat de flumetazone).

13.2. REACII CITOTOXICE SAU CITOLITICE (reacii de tip II dup clasificarea lui GELL i COOMBS) n acest tip de reacii de HS determinantul antigenic se gsete pe suprafaa unei celule-int. Atc. specifici care se cupleaz cu Atg. fixeaz i activeaz C' care produce citoliza (Fig. 70). Atg. - pot fi Atg. care sunt componente ale structurii membranei celulei-int; - pot fi Atg. (n general haptene) din plasm care se ataeaz pe suprafaa celulei-int. Atc. - pot fi de clas IgM sau de clas IgG - activatoare de C'. Celulele care devin inta principal a acestui model de reacii de HS sunt componente ale sistemului circulator:

243

Fig. 70 Reacii de tip II (Citotoxice/Citolitice)

a) Elemente figurate ale sngelui: eritrocite, granulocite i trombocite. Entitile clinice principale sunt: anemiile hemolitice prin allo-Atc incompatibilitatea feto-maternal accidente hemolitice posttransfuzionale anemiile hemolitice induse de medicamente granulocitopenii imunoalergice agranulocitoza trombocitopeniile produse de medicamente b) Celulele endoteliului vascular Entitile clinice principale sunt: unele purpure vasculare unele glumerulonefrite Alloimunizarea este consecina introducerii ntr-un organism de allo-Atg. eritrocitare sau trombocitare. Trei situaii clinice pot duce la alloimunizare 1. sarcina 2. transfuziile: pot produce allosensibilizarea mpotriva Atg. de grup sanguin sau a Atg.HLA. 3. grefele

244

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Alloimunizarea de sarcin. Din punct de vedere antigenic ftul este semiidentic cu mama sa. Atg. fetale motenite de la tat sunt strine pentru sistemul imun al mamei. Aa cum s-a artat, ftul este tolerat de mam prin mai multe mecanisme. n cursul sarcinii, cantiti mici de snge fetal pot strbate placenta ajungnd astfel n circulaia gravidei. Aceste microtransfuzii aduc n general o cantitate mic de Atg. fetale pentru a stimula un rspuns al mamei. n cursul travaliului ns (i mai ales dac se recurge la manevre obstetricale traumatizante) cantitatea de snge fetal care trece la mam crete suficient de mult pentru a provoca sensibilizarea acesteia. Dac Atc. produi sunt de clas IgG pot strbate placenta. Cu ocazia sarcinilor ulterioare ei vor produce distrucia celulelor fetale purttoare ale Atg. sensibilizatoare. (Fig.71)
Alloimunizarea de sarcin poate fi indus de Atg. eritrocitare, leucocitare sau trombocitare. Consecinele clinice cele mai importante sunt asociate cu alloimunizarea antieritrocit. Atc. materni produc hemoliza eritrocitelor fetale. Dac aceast hemoliz este deosebit de sever n uter, ftul nu va supravieui. Dac hemoliza este de mic intensitate sarcina va fi dus pn la capt, dar n cursul travaliului o cantitate mai mare de Atc materni vor trece n circulaia fetal.

Fig. 71 Alloimunizarea de sarcin

Drept urmare fetusul expulzat va face un puseu sever de hemoliz la cteva ore dup natere. Distrucia excesiv de eritrocite produce anemie i hiperbilirubinemie foarte important cu icter intens deoarece ficatul nou-nscutului este incapabil s conjuge i s elimine bilirubina care se acumuleaz progresiv n snge. Creterile foarte mari ale bilirubinemiei prezint riscul impregnrii nucleilor cerebrali (icterul nuclear Schmorl). Aceasta este o complicaie foarte grav deoarece muli fetui mor iar supravieuitorii rmn cu sechele neurologice permanente. Icterul hemolitic al nou-nscutului este o urgen medical. El necesit nlocuirea imediat a sngelui (care conine anticorpii materni agresori) cu snge normal de izogrup (exsanguinotransfuzie). Alloimunizarea feto-maternal pe linie eritrocitar la om poate fi indus teoretic de oricare dintre Atg. eritrocitare, dar cel mai frecvent
245

imunizarea mamei se produce n sistemele ABO (2/3 din cazuri) i Rh (circa 1/3 din cazuri). Imunizarea anti-A sau anti-B apare exclusiv la mame de grup O. Accidentele hemolitice sunt ns rare, deoarece substanele A i B sunt exprimate nu numai pe eritrocite ci i pe alte esuturi (chiar i pe celulele endoteliului placentar) sau pot fi prezente n umori. Toat aceast mas de Atg. neutralizeaz Atc. maternali nainte ca acetia s vin n contact cu eritrocitele copilului. Trebuie precizat ns c femeile pot fi uneori imunizate dinaintea sarcinii prin stimulri nespecifice cu substane exogene alimentare sau bacteriene (vaccinuri, infecii) care conin determinani identici cu substanele A i B. Aa se explic posibilitatea, rar, ca anemia hemolitic s apar chiar de la prima sarcin incompatibil. Imunizarea anti-Rh apare la mame Rh negative dup sarcini cu fei Rh pozitivi. n mod normal, persoanele Rh negative nu au Atc. antiRh preformai. Sensibilizarea mamei se produce cu ocazia primei sarcini incompatibile, iar primii nscui nu fac anemie hemolitic. n schimb, dup sarcin cu fei Rh pozitivi, mama se imunizeaz tot mai intens i urmtorii copii fac o boal hemolitic din ce n ce mai grav. Este de subliniat c Atg. Rh sunt exprimate numai pe eritrocite care astfel suport tot impactul anticorpilor. Aa se explic de ce boala hemolitic a nou-nscutului este mult mai sever n incompatibilitatea anti-Rh dect n incompatibilitatea anti-A,B,O. Alloimunizarea posttransfuzional Reaciile imune se produc ntre Atc. prezeni n sngele primitorului i Atg. exprimate pe celulele transfuzate (Atg. de grup sanguin sau Atg.CMH). Manifestrile clinice cele mai importante sunt puseele de hemoliz (n cazul transfuziilor incompatibile n sistemul ABO i Rh) i reacii febrile (legate de Atc. anti-leucocitari i antitrombocitari).

13.3. REACII MEDIATE DE COMPLEXELE IMUNE (reacii de tip III dup clasificarea lui GELL i COOMBS) Complexele imune se formeaz n mod normal n cursul rspunsului humoral prin unirea Atc. cu Atg.. Proporia moleculelor de Atg i Atc. n aceste complexe variaz n timp, deoarece cantitatea
246

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE global a Atg. scade progresiv n timp ce titrul Atc. crete. Iniial exist un exces de Atg. Complexele sunt mici i n cantitate redus. Dup cteva zile, cnd Atc. ajung n exces, complexele apar ca agregate macromoleculare insolubile i precipitabile care sunt ndeprtate rapid de fagocite. ntre aceste dou extreme exist o perioad n care Atg. sunt n exces moderat. n cursul acestei perioade se formeaz complexele solubile de talie intermediar care pot activa complementul (Fig.72)

Fig. 72 Reacia de tip III Hipersensibilitatea mediat de complexe imune

Complexele de acest tip pot fi patogene n anumite mprejurri, producnd o RHS cu leziuni vasculare i tisulare (Fig.73) n patologia veterinar antigenele participante la formarea de complexe imune patogene pot fi heterologe (virusuri, bacterii, fungi, parazii animali, seruri animale) sau autologe, iar Atc pot fi de clas IgG sau mai rar IgM. n funcie de tipul de agresiune antigenic activarea complementului poate fi indus pe calea clasic sau prin cea alternativ. Complexele imune patologice se pot forma la nivelul unor organeint (in situ) pe seama unor Atg. ale acestora, sau n circulaia sistemic cu depunere tisular secundar. Dou modele experimentale ilustreaz aceste situaii: fenomenul Arthus i boala serului.

247

Fig.73

Fenomenul Arthus (modelul de reacie prin CI formate n situ). A fost descris n 1903 la iepurii sensibilizai prin injecii subcutanate cu Atg, solubile (ser de cal). Dup mai multe administrri se observ la locul injeciei o bul edematoas dur, nsoit de eritem i de mici hemoragii punctiforme care atinge maximul dup 4-8 ore. Evoluia este uneori efemer (aproximativ 10-12 ore) sau alteori se nsoete de necroz local. Reacia poate fi declanat i pasiv la animalele nesensibilizate: prin administrarea amestecului de Atg. i Atc. preparat in vitro; prin administrarea s.c. a Atg. i i.v. a Atc. (reacie pasiv direct); prin administrarea s.c. a Atc. i i.v. a Atg. (reacie pasiv indirect); Microscopic se observ leziuni arteriolare cu edem i extravazare de hematii n spaiul perivascular i agregate intraluminale de trombocite i de polimorfonucleare neutrofile (PMN). Folosirea experimental de complexe Atg. Atc. marcate radioactiv, a permis
248

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE evidenierea prezenei acestora mpreun cu PMN n peretele vascular ntre stratul endotelial i membrana bazal (Fig.74).

Fig. 74 Fenomenul Arthus

Elementul central care produce leziunile din reacia Arthus este formarea complexelor imune (CI) la nivelul peretelui vascular. CI produc 2 relee de activare: activarea complementului activarea unor elemente figurate: trombocite, bazofile. Activarea C' duce la formarea anafilatoxinelor C3a i C5a cu efect chemotactic intens asupra polimorfonuclearelor neutrofile (PMN). PMN infiltreaz puternic peretele vascular unde inger o parte din CI i elimin enzime care produc leziuni necrotice vasculare. Activarea celulelor duce la eliberarea de enzime vasoactive care produc creterea debitului sanguin (cu aducerea de noi participani la

249

conflict) i a permeabilitii vasculare locale (cu producerea edemului local). Trombocitele se ataeaz pe CI prin intermediul unor receptori Fc. Trombocitele astfel activate secret numeroase substane active i agreg ntre ele cu formarea de microtrombi care obstrueaz vasele respective. Fenomenul Arthus se deosebete de anafilaxie: nu necesit fixarea prealabil a Atc. n esuturi, nu este mediat de IgG, necesit activarea C' i a PMN, necesit mai multe ore pentru a se manifesta, etc. (tabelul 14) Tabelul 14 Compararea ntre anafilaxie i fenomenul Arthus Anafilaxia Elemente anatomo-clinice - instalare - minute - durat - scurt - caractere contracia muchilor netezi, permeabilitate vascular Atc. - izotipul - IgE - legarea pe celule -++ - formarea de complexe cu - Atg - participarea C' -Fenomenul Arthus - ore - lung (ore-zile) - edem infiltrat celular, ischemie, necroz

Participarea mastocitelor Participarea PMN

Esenial -

Inhibiia antihistaminice

prin +

- IgG -- Da, n peretele vasului lezat Esenial: ndeprtarea C' stopeaz evoluia Accesorie Esenial: ndeprtarea lor stopeaz evoluia _

Fenomenul Arthus apare ca un exemplu de patologie local prin complexe imune. Tulburrile pulmonare de tip Arthus pot fi observate printre persoane care practic anumite profesii prin care se expun la
250

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE inhalarea repetat a unor antigene: n cazul alveolitei fermierilor antigenul este o specie de mucegai al fnului; aa numita maladie a cresctorilor de psri este provocat de Atg. din excrementele unor psri ca porumbei, papagali sau mai rar, pui de gin. Reaciile de hipersensibilitate se manifest prin crize de tuse cu dispnee sever care apar dup circa 6- 8 ore de la inhalarea antigenului, fr asocierea unui bronhospasm (ca n astmul alergic) dar cu depunere de Ig i C' n peretele alveolar urmate de fenomene locale de tipul celor descrise mai sus. Diagnosticul etiologic poate fi afirmat prin teste de provocare constnd fie din inhalarea unei soluii apoase de Atg. purificat (reproduce fenomenul clinic) fie din injectarea i.d. a Atg. (produc o reacie cutanat). Boala serului (model de reacie de HS prin CI circulante) A fost descris la iepuri de ctre von PIRQUET n 1911, ca o reacie sistemic aprut dup injecii i.v. cu doze mari de proteine xenogenice (ser de cal, serum-albumin bovin, etc). n perioada cnd vaccinrile umane se fceau cu heteroseruri imune (de ex. serul antitetanic sau antirabic) boala serului era observat destul de frecvent. Semnele clinice apar dup 14-21 zile de la injecie cu febr, urticarie generalizat, edem facial, poliadenopatie, artralgii, hematurie. Fenomenele clinice se nsoesc de neutropenie i de hipocomplementemie. n aceast reacie Atg. persist n circulaie unde se cupleaz cu Atc. pe msura apariiei acestora. Complexele circulante se depun n vasele diverselor esuturi unde determin hiperplazia endoteliului, hiperpermeabilitate i leziuni necrotice. Patogeneza leziunilor o amintete pe aceea a reaciei Arthus (Fig.75): fixarea i activarea C' cu afluxul ulterior al PMN; ataarea i activarea trombicitelor; Consecinele acestor activri sunt: hiperemie; vasopermeabilitate crescut i edem; leziuni vasculare induse de PMN; Fenomenele se sting pe msura creterii titrului Atc., care se nsoete de inversarea raportului Atg/Atc din circulaie i de formarea de CI macromoleculare care sunt reinute rapid de Mcf. din ficat i din splin. Dup epuizarea Atg. din circulaie formarea CI nceteaz i prin aceasta i inducerea de noi leziuni, iar leziunile vechi regreseaz.
251

Modelul de mai sus ilustreaz o reacie acut indus de o doz masiv i unic de Atg. Repetarea injeciilor cu Atg. va ntreine formarea de CI patogene n exces de Atg. i va duce la o reacie cronic a crei int principal va deveni glomerulii renali

Fig. 75 Boala serului

Depunerea CI i a unor componente ale C' poate fi evideniat prin imunofluorescen: complexele solubile de talie mic se depun prefernial pe versantul extern al membranei bazale, producnd o glomerulonefrit cu depozite extramembranoase. Accesul CI la membrana bazal glomerular (MGB) este facilitat de 2 factori care permit un contact nemijlocit intre MGB i sngele glomerular; existena normal a unor pori n stratul de celule endoteliale (reamintim c celulele endoteliale care formeaz pereii capilarelor glomerulare sunt dispuse pe faa intern a MGB) i contracia celulelor endoteliale produs de amine vasoactive, care mrete spaiile dintre aceste celule (Fig.76)
252

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE CI cu talie intermediar se depun mai ales n mesangium. Boala seric cronic poate avea o evoluie sever dac injeciile cu Atg. sunt prelungite, cu instalarea unei insuficiene renale cu sfrit fatal. Bolile renale n care leziunile sunt produse de CI circulante constituie ponderea majoritar n cadrul afeciunilor renale cu componenta imun din patologia uman.

Fig. 76 Leziuni renale (glomerulare) provocate de complexe imune circulante

Atg. poate fi heterolog (bacterii- ca de ex. streptococul, virusuri sau parazii) sau autolog (acizi nucleici ca n cazul LED, Ig...). Depunerea de CI poate fi observat pe oricare din feele MGB: subendotelial sau subepitelial (ntre MGB i podocite) atunci cnd CI au traversat MGB. Astfel de complexe au fost de exemplu n LED (complexele ADN antiADN). Consecinele acestor depuneri sunt ngroarea MGB, proliferarea endotelial i alterarea filtrrii glomerulare.

13.4. STRILE DE HIPERSENSIBILITATE TARDIV (HST) Corespund reaciilor de tip IV dup GELL i COOMBS i sunt mediate de LimfociteT sensibilizate i de limfokine emise de acestea. Reacia se dezvolt lent - dup 24-48 de ore de la introducerea Atg. la locul de introducere a acestuia. SHT poate fi transferat pasiv la un subiect neimunizat prin injectarea de Limfocite. vii sau a unui extract
253

dializabil al acestuia denumit factor de transfer. Specificitatea pentru Atg. este absolut. n practica clinic cercetarea reaciei de HT servete ca mijloc de testare in vivo a rspunsului imun celular. Metodele cele mai uzitate sunt intradermoreacia (IDR) la tuberculin sau la derivatul proteic purificat al acesteia (PPD) sau reacia cutanat de contact fa de DNCB (dinitroclor-benzen) care se leag covalent cu proteine ale tegumentului. IDR la tuberculin (reacia Mantoux) este considerat ca cel mai bun model ilustrativ al unei HT: dup 48 de ore de la adminstrarea i.d. a substanei, se formeaz la locul injectrii o papul eritematoas care dispare dup 1-2 zile. Examenul histologic al leziunii arat edem tisular i un infiltrat inflamator polimorf iar examinarea ganglionilor locoregionali, de drenaj, evideniaz o hiperplazie a zonei paracorticale (T-dependente). Cercetrile cu celule marcate au artat c LimfociteT care reacioneaz specific cu Atg. reprezint doar un procent foarte mic (aproximativ 4%) dintre celulele prezentate n leziune. Aceste celule T specifice care, ca rspuns la stimularea Atg., determin RHT aparin unui subset special de LimfociteTCD4+, (diferit de celulele TH, TS i Tc) i care au fost denumite TDH (DH = delayed hypersensitivity). Se presupune c celulele nemarcate ale infiltratului inflamator sunt atrase n focar i activate prin intermediul limfokinelor emise de LimfociteTDH specifice: MIF (factorul de inhibiie a migraiei Mcf, factorul chemotactic, factorul de activare a macrofagelor, factorul mitogen (care induce proliferarea Limfocite i a Mcf), factorul de transfer (induce eliberarea MIF i a IRN din Limfocite nespecifice). Toi aceti factori cu rol amplificator atrag un numr impresionant de celule la locul conflictului: LimfocitePMN, bazofile, eozinofile i (n special) Mcf. RHT reprezint mecanismul efector principal n variate condiii clinico-patologice: reacii fa de virusuri, fungi, parazii animali i bacterii cu localizarea intracelular n unele boli autoimune i n respingerea grefelor (Fig.77) Hipersensibilitatea de contact reprezint o reacie de HT a pielii la contactul cu unele substane chimice simple cum ar fi unele metale (Ni, Hg, Cr), bicromatul de K (utilizat n industria pielriei) unele cosmetice, fibre vegetale (bumbac), extracte din plante (Primula). Reacia apare dup circa 7 zile de la contactul cu Atg. sub forma unor papule eritematoase care se acoper ulterior cu vezicule care decoleaz epidermul. n aceast reacie Atg. este prezentat de celulele Langerhans care se deplaseaz n ganglionii regionali unde interacioneaz cu LimfociteT
254

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE specific. Acest model de reacie reprezint substratul unor dermatite de contact denumite eczeme alergice.

Fig. 77 Reacia de tip IV: Hipersensibilitatea tardiv mediat celular

13.5. HIPERSENSIBILITATEA STIMULATOARE DE TIPUL V Cadrul conceptual al acestui tip de hipersensibilitate contestat de mai muli cercettori (WELLS, 1984) a fost elaborat pentru a explica stimularea secreiei hormonului tiroidian din boala Basedow de la om i cine i care se caracterizeaz printr-o stare de tireotoxicoz. n mod normal, hormonul stimulator al tiroidei elaborat de hipofiz (HST) se fixeaz pe receptorii specifici complementari, de pe suprafaa celulelor toridiene determinnd un semnal activator. Acest semnal transmis n celul activeaz adenilat ciclaza din membrana celular care mrete concentraia de adenozin monofosfat ciclic (AMPc) i, prin intermediul acestuia, creterea sintezei i secreiei de hormon tiroidian. n paralel cu acest mecanism poate funciona, un al doilea, reprezentat de un factor stimulator cu aciune ndelungat (LATS= Long acting thyroid stimulator). Acesta este reprezentat de un autoanticorp,
255

aparinnd izotipului IgG, dirijat de un antigen de pe suprafaa celulei tiroidiene i capabil s mimeze, aciunea ligandului natural. El se cupleaz cu receptorul HST sau cu o molecul asemntoare inducnd deasemeni, creterea sintezei i secreiei de hormon tiroidian. Legarea anticorpilor de celula tiroidian poate declana i alte tipuri de rspuns: 1. blocarea receptorilor pentru HST; 2. creterea excesiv a foliculilor tiroidiene fr stimularea creterii secreiei de hormon; 3. blocarea efectului de stimulare a creterii foliculare. n acelai context efectele prezentate au fost confirmate i pentru alte tipuri de anticorpi antireceptori (receptorii de insulin, acetilcolin somatostatin, etc.) n concluzie se poate spune c legarea anticorpilor de receptorii specifici de pe suprafaa celulelor nu determin numai un rspuns unic, caracteristic, ci mai multe, cum ar fi : 1. blocarea situsului de recunoatere a receptorului; 2. stimularea activitii receptorului prin mimarea efectului ligandului natural (ca n cazul LATS); 3. lezarea receptoruui i/sau a celulei prin activarea complementului sau a unor celule efectoare; 4. degradarea accelerat a receptorului; 5. alterarea capacitii de legare a receptorului de ligandul su natural. Aceste date au dus la concluzia c reaciile de tip stimulator pot fi ncadrate ca o categorie aparte de tipul II de hipersensibilitate propus de GELL i COOMBS (1968), existena unui tip aparte (V) fiind creat artificial.

256

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE

CAPITOLUL 14
IMUNOPROFILAXIA 14.1. VACCINURI: DEFINI}IE I CLASIFICARE
Vaccinurile sunt produse biologice, obinute din microorganisme sau toxinele acestora i care aplicate unui organism i confer imunitate activ fa de microorganismul din care a fost preparat. Vaccinurile se pot clasifica dup urmtoarele criterii: n funcie de natura antigenului din care se prepar vaccinurile pot fi: vaccinuri vii atenuate, vaccinuri inactivate (omorte) vaccinuri preparate cu fraciuni imunogene purificate (vaccinuri subunitare). Dup coninutul lor n antigeni, vaccinurile pot fi: monovalente, preparate cu o singur specie bacterian sau viral, bi, tri sau polivalente, care conin corpi bacterieni sau toxine provenind de la dou, trei sau mai multe microorganisme. Dup provenien i folosirea lor, vaccinurile pot fi: autovaccinuri cnd se prepar cu o tulpin bacterian izolat de la un individ i folosit n imunizarea acestuia, stock-vaccinuri, preparate din mai multe tulpini izolate din focar i destinate a fi folosite n imunizri n focar ; vaccinuri unice cu tulpini standardizate, pentru imunizarea tuturor animalelor dintr-o specie animal. Prin vaccinuri se obine o imunitate antiinfecioas specific, numit i imunitate activ sau inductibil. Imunitatea activ se obine

257

prin trecere prin boal sau prin vaccinare i are urmtoarele caracteristici: are un caracter strict individual, apare la indivizi maturi i este dependent de intrarea unui antigen n organism; imunitatea inductibil implic o restructurare a organismului prin apariia de imunoglobuline sau/i limfocite active; aciunea efectorului imun este specific i difereniat n funcie de natura antigenului; imunitatea inductibil prin vaccinare nu este transmisibil ereditar, se instaleaz n 6-21 zile i dureaz un timp variabil n funcie de antigen. 14.2. VACCINURI VII I NEATENUATE Germenii vii care se inoculeaz sub form de vaccinuri vii, dau o imunitate solid, dar au dezavantajul c pot da mbolnviri mortale prin aplicare greit i creaz purttori de germeni. Pentru aceste motive, utilizarea vaccinurilor vii neatenuate este limitat i se practic numai n condiii epizootologice speciale n intervenii de necesitate, ca serovaccinri i seroimunizri. Folosirea vaccinurilor cu germeni vii, se bazeaz n principiu pe receptivitatea diferit a esuturilor fa de un anumit antigen. Astfel, virusul variolic produce pe cale subcutanat boala; administrat sub form de vaccin viu pe cale intradermic produce ns o imunitate solid. n ultimul timp se folosesc aa numitele vaccinuri vii paraspecifice sau heterotipice, care se bazeaz pe folosirea n imunizare a unor germeni vii nemodificai, pentru a conferi protecie fa de ali germeni nrudii antigenic cu cei vaccinali. Astfel n imunoprofilaxia difterovariolei la galinacee se folosete virusul variolic columbar, iar n prevenirea bolii lui Marek se utilizeaz un herpes virus viu izolat de la curc. Inoculat la pui de o zi, acesta din urm, induce o rezisten satisfctoare pentru a-i proteja de infecia spontan cu virus Marek. 14.3. VACCINURI VII ATENUATE Vaccinurile vii atenuate constau din suspensii de bacterii sau virusuri vii, dar cu virulen atenuat n aa fel nct s nu mai poat determina boala la animale, dar s rmn capabile s iniieze o infecie inaparent, imunogen.
258

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Prin urmare, vaccinurile vii sunt produse care conin corpi microbieni viabili dar slab viruleni i care administrate la animale ntr-o singur injecie, determin o imunitate solid, comparabil acelei consecutive trecerii prin boal, fr a fi provocat ns, dect cel mult semne minime de boal. Indiferent de locul inoculrii, agentul infecios din vaccinul viu atenuat nu rmne localizat, ci se rspndete n organism, ptrunznd i multiplicndu-se n aceleai esuturi n care se localizeaz i n cazul infeciei naturale. Singura deosebire fa de agentul patogen virulent este aceea c, infectnd un numr mai mic de celule sensibile i multiplicndu-se lent, agentul infecios din vaccin nu declaneaz o boal clinic, ci numai o infecie de form atenuat, care este ns nsoit de modificrile umorale i de reactivitate, necesare pentru stri de imunitate. Condiia cea mai important n prepararea vaccinului viu este aceea c, atenuarea virulenei agenilor patogeni s fie stabil i ireversibil, pentru ca vaccinurile s nu duneze animalelor i s nu creeze focare noi de infecie n colectivitate. Atenuarea bacteriilor poate fi uneori corelat cu unele modificri ale caracterelor morfologice i culturale ale germenilor (apariia de variante S sau R). Exemple de boli bacteriene n care se folosesc tulpini atenuate la prepararea vaccinurilor: antrax tulpina 1190 R ( apatogen, acapsulogen, sporogen i edematogen ); rujet tulpina VR2 (este o tulpin de tip N, atenuat n mod natural, total apatogen pentru porc, dar la om poate produce uneori erizipeloid ); tuberculoza BCG (bacil Calmette- Guerin, obinut prin pasaje succesive pe mediu cu bil-cartof biliat- a tulpinii de origine bovin lait Nocard, timp de 11 ani, prin efectuarea a 198 pasaje ); listerioza- tulpinile R1 i R2; bruceloz - tulpina B19: salmoneloza aviar - tulpina 9R; holera aviar - tulpina CU (Clemons University), .a. Atenuarea virusurilor se poate realiza prin mai multe modaliti: prin pasaje n serie pe culturi de celule; prin adaptare la anumite esuturi i schimbarea tropismului caracteristic n generarea infeciei; prin adaptarea pe specii de animale, care n condiii naturale nu sunt receptive. Vaccinurile obinute din tulpini atenuate prin embriopasaje sau prin adaptare la specii nereceptive natural, au fost denumite avianizate, lapinizate, caprinizate. Exemple de boli virale n care se folosesc tulpini atenuate la prepararea vaccinurilor: pesta porcin - tulpina C (chinez) care este total apatogen; tulpinile Hudson i Koprowschy care au o patogenitate rezidual accentuat,
259

fiind folosite numai de necesitate n focarele de boal; pesudopesta aviar - tulpina La Sota (lentogen), tulpinile H i Roakin (mezogene); turbare tulpina Flury n dou variante (Flury LEP- low eggs passage i Flury HEP -high eggs passage); tulpina Kelev avianizat; boala lui Aujeszky- tulpina avianizat Buk (Bucureti); jigodie- tulpina avianizat Onderspoort Haig; laringotraheita infecioas aviar tulpina avianizat LS-79/2; encefalomielita infecioas aviar - tulpina avianizat Calnek 1143, etc. Vaccinurile vii atenuate au avantajul de-a conferi animalelor inoculate o imunitate solid, pot fi produse de biofabrici n cantiti apreciabile i la un pre convenabil. Ca dezvantaj semnalm c vaccinurile vii atenuate pot genera reacii post-vaccinale nedorite, mai ales la animalele tarate sau/i carenate alimentar. Tulpinile vaccinale, necesit o supraveghere i verificare periodic privind meninerea capacitii lor imunologice i pstrarea gradului de mitigare (atenuare).

14.4. VACCINURI INACTIVATE I ANATOXINE Vaccinurile inactivate constau din suspensii microbiene omorte prin utilizarea unor factori fizici (cldur, ultrasunete, raze ultraviolete) ori sub aciunea formolului (0,5%) sau a altor substane chimice (fenol, chinozol, cloroform, etc.). n practic sunt utilizate sub forma a numeroase vaccinuri ca: vaccin contra crbunelui enfizematos, vaccin contra enetrotoxiemiilor, vaccin anticolibacilar, antisalmonelic, vaccin pestos porcin inactivat cu cristal violet, etc. Vaccinurile inactivate au o inocuitate bun, putnd fi aplicate la animalele debile, tarate, la care vaccinurile vii atenuate sunt contraindicate, sau n cazul unor boli la care nu s-au obinut vaccinuri cu tulpini vii atenuate. Au dezavantajul c duc la apariia mai tardiv a rspunsului imun, imunitatea este mai puin solid i de durat scurt. Imunitatea trebuie consolidat cu o revaccinrae (vaccinare de rapel) la 1-2 sptmni de la prima vaccinare. Anatoxinele sau toxoizii sunt produse imunizante obinute prin tratarea exotoxinelor cu formol 0,5% i cldur (37C). n aceste condiii, toxinele i pierd complet toxicitatea, dar i pstreaz proprietatea imunologic reprezentat de capacitatea de-a stimula formarea de anticorpi protectori. Preparate de acest fel sunt de exemplu: anatoxina tetanic, anatoxina stafilococic, anatoxina botulinic, etc.
260

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Vaccinuri subunitare (purificate) reprezint vaccinuri inactivate n care principii activi sunt constituii numai din fraciunile imunologic active ale virusurilor, bacteriilor sau metaboliilor lor. n acest scop, prin purificarea fracionat, n vaccinurile subunitare se introduc exclusiv fraciunile protectoare dintr-un antigen, cum ar fi: glicoproteinele peplosului viral, proteinele capsidei virale, aparatului piliar, polizaharidele capsulare i Vi, exotoxinele, etc. Ca la orice vaccin inactivat, fraciunile separate, pot fi asociate cu o substan adjuvant n vederea potenrii capacitii imunogene. Vaccinurile subunitare prezint avantajul unei perfecte inocuiti prin eliminarea reaciilor adverse cum ar fi reaciile locale sau generale, hipersensibilizarea, etc. Imunitatea indus este comparabil cu a vaccinurilor clasice inactivate, dar are un grad de specificitate mult mai nalt. O substan adjuvant care are o larg ntrebuinare n prepararea vaccinurilor de uz veterinar este hidroxidul de aluminiu (Al.(OH)3) substan coloidal, de culoare alb-lptoas, care are proprieti adsorbante fa de virusuri filtrabile, toxinele bacteriene i proteinele serice. Capacitatea imunizant a hidroxidului de aluminiu este remarcabil putnd s mreasc capacitatea imunizant a toxinei tetanice, de exemplu, pn la 100 ori fa de toxina neadsorbit. Substanele adjuvante acioneaz prin inflamaia local i prin eluia treptat a particulei antigenice adsorbite. Unele substane adjuvante prezint i inconveniente n sensul c produc reacii locale mari sau pot mri capacitatea alergizant a organismului. Vaccinurile se prepar n institute specializate numite biofabrici. Principiile de preparare ale unui vaccin constau n urmtoarele: selecionarea tulpinii (a antigenului) vaccinale i testarea imunogenitii ei; cultivarea tulpinii pe medii optimale pentru obinerea unei mase antigenice bogate; inactictivarea i eventual adiionarea pe o substan adjuvant, n cazul vaccinurilor inactivate; controlul sterilitii vaccinului; controlul inocuitii pe animale de laborator i pe speciile pentru care este destinat; Un vaccin pentru a putea fi utilizat n practic trebuie n mod obligatoriu s ndeplinesc o serie de condiii:

261

s nu fie nociv, adic s nu produc mbolnviri animalelor inoculate n conformitate cu principiul hipocratic primum non nocere; s fie activ antigenic, n sensul c odat administrat s provoace apariia masiv de anticorpi protectori; s poat fi preparat n condiii i cantiti industriale fiind n acelai timp i convenabil din punct de vedere economic; s aib o valabilitate de lung durat. Beneficiarul are obligaia de a pstra produsul biologic n condiii adecvate de temperatur (+2C - +4C) i la ntuneric s respecte instruciunile de aplicare.

14.5. VACCINURILE MODERNE

OB}INUTE

PRIN

TEHNOLOGII

Vaccinurile obinute prin recombinare genetic se bazeaz pe separarea i inseria genelor responsabile de sinteza fraciunilor imunologic active. Cu ajutorul enzimelor de restricie, nucleaze i ligaze, se separ o gen care codific un anumit epitop care apoi se inser ntrun sistem vector. Sistemul vector poate fi de regul o plasmid sau alt vector adecvat, care introduce i integreaz gena n genomul unor celule de mamifere, urmat de cultivarea celulelor hibride pe medii adecvate; sinteza substanei dorite care va fi n continuare izolat i purificat prin diferite metode. Antigenele obinute prin tehnici de inginerie genetic au o serie de avantaje decurgnd din puritatea i stabilitatea lor, absena efectelor secundare i a riscului de infeciozitate. Vaccinurile sintetice folosesc ca determinant antigenic, un lan polipeptidic scurt, care este adesea slab imunogen i care este cuplat la o protein de transport (carrier) i adsorbit pe un adjuvant mineral sau uleios adecvat. Vaccinurile sintetice se utilizeaz cu succes n inducerea de anticorpi neutralizani contra diverselor tipuri i subtipuri de virus aftos. n acest caz, se utilizeaz peptidele a ctorva acizi aminai care corespund determinanilor antigenici majori a unei proteine a capsidei virale (proteina VP1) care se cupleaz cu o molecul de transport i o substan adjuvant. Se obine un vaccin, care inoculat la animale (bovine, oi, porci) induce apariia unor anticorpi neutralizani. Vaccinuri antiidiotipice
262

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Vaccinurile antiidiotipice se bazeaz pe principiul dualismului imunoglobulinelor. Cele dou faete care confer caracterul dual al imunoglobulinelor sunt determinate de abilitatea acestora de a ndeplini n organism att funcia de anticorpi ct i funcia de antigeni. Cu alte cuvinte, un anticorp Ig1 aprut n urma contactului cu un antigen poate s stimuleze sistemul imunitar i s determine la rndul su sinteza unui nou anticorp (Ig2). Anti-anticorpii (Ig2) pstreaz amintirea antigenului primar, cu care va reaciona specific n toate situaiile. Se ajunge n felul acesta la posibilitatea de a induce prin intermediul anticorpilor Ig1 de anti-anticorpi Ig2 capabili de a se lega de epitopul, prin intermediul cruia sunt n mod indirect formai. Principiul tehnicii de obinere a anticorpilor antiidiotip este urmtorul:

Epitop Anticorpi Ig1 (idiotipuri) purttori de structuri antigenice n regiuni hipervariabile (idiotopi).

Anticorpi Ig2 (antiidiotipuri) n care ei reprezint imaginea intern a epitopului.

Anticorpi Ig3 corespund anticorpilor iniiali Ig1 i prezint specificitatea de legare pentru epitop

Prepararea vaccinurilor antiidiotipice a fost facilitat prin folosirea anticorpilor monoclonali, a cror capacitate imunogen este limitat i deci trebuie potenat prin substane adjuvante. Vaccinurile antiidiotipice prezint avantajul unei mari specificiti i se dovedesc foarte utile pentru a obine rspunsuri imune fa de antigeni slab imunogeni (antigeni polizaharidici, antigeni lipopolizaharidici). Prezint dezavantajul unor reacii adverse mai ales atunci cnd se folosesc anticorpii monoclonali provenii de la alt specie. Vaccinuri antiparazitare. n profilaxia bolilor parazitare se ncearc prepararea unor vaccinuri utiliznd ca antigeni parazii, atenuai, omogenizat din parazitul integral, parazii omori sau antigeni parazitari solubili.
263

n protecia contra protozoarelor sanguine s-au preparat vaccinuri folosind ca antigeni parazii atenuai sau omori prin ngheri i dezgheri succesive, tratate cu formol sau betapropiolacton sau iradiere cu raze X. n profilaxia helmintozelor s-a reuit prepararea unui vaccin contra dictiocaulozei, folosind antigeni larvari din Dictiocaulus viviparus i D. filaria. n ectoparazitoze, n imunoprofilaxia infestaiilor cu Ixodidae se utilizeaz experimental folosirea de antigeni obinui din extracte parazitare totale. Profilaxia specific prin vaccinri n bolile parazitare este nc n faza experimental urmrindu-se n mod special purificarea numeroilor antigeni parazitari n vederea selectrii epitopilor specifici. n cazul vaccinurilor preparate, imunitatea este adesea incomplet i nu s-a reuit dect fa de un numr limitat de infestaii, profilaxia n bolile parazitare fiind dominant nespecific. Vaccinuri antihormonale Vaccinurile sunt utilizate, pe scar larg n prevenirea bolilor infecioase sau de invazie, dar pot fi folosite i n scopul reglrii imunologice a funciilor hormonale. Ameliorarea n cretere, a prolificitii sau din contr castrarea imunologic sunt ntre principalele inte, a vaccinurilor antihormonale. ntre primele aplicri a fost mrirea foliculogenezei la ovine prin imunizarea cu hormoni steroizi (androsteron, testosteron, oestrodiol) conjugai la molecula carrier i adiionai la adjuvani uzuali. n faza experimental se utilizeaz i castrarea imunologic hormonal la femele i masculi.

14.6. MODUL DE APLICARE A VACCINURILOR Vaccinurile se administreaz la animale sntoase n scop profilactic, dozele de aplicare fiind n funcie de vaccin i de specia animal care se vaccineaz. Cile de administrare sunt parenterale, prin inoculare, sau enterale prin administrarea pe ci naturale. Vaccinrile parenterale devin greoaie sau chiar imposibile de aplicat n unitile industriale, n special la psri, numrul mare de animale fcnd intervenia individual inoperant. Vaccinrile pe ci naturale ofer avantajul administrrii colective n vaccinri de mas. Vaccinrile pe ci naturale sunt deosebit de eficiente n cazul
264

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE vaccinurilor vii atenuate, ntruct n numeroase afeciuni infecioase procesele patologice se desfoar la nivelul mucoaselor. O imunizare local blocheaz intrarea i fixarea germenilor la nivelul mucoaselor. Procesul de imunizare se caracterizeaz prin formarea de Atc. protectori de tipul IgA i parial IgM. Apariia de Atc. secretori este precedat de apariia de celule imunizante n mucoas, corionul fiind un strat al mucoaselor deosebit de activ pe plan imunologic. Atg. corpusculari administrai pe ci naturale sunt rapid absorbi n circulaia sanguin declannd imunitatea umoral. n general administrrile pe ci naturale, per os, conjunctival, prin aerosoli, necesit o supradozare a antigenului n scopul de-a oferi ansa ca toate animalele supuse operaiei de imunizare sa-i primeasc doza necesar imunizrii. Cile de vaccinare parenterale vaccinarea prin scarificare: se aplic n profilaxia variolelor aviare i const din scarificarea pielii pe faa anteroextern a gambei, peste care se badijoneaz vaccinul. Se poate utiliza i aplicarea vaccinului transcutanat prin presiune prin pielea normal, cu un aparat special numit Hiposprey-jet-injector; vaccinarea subcutanat este cea mai rspndit dintre cile de aplicare a vaccinurilor, se execut cu ace scurte pentru a evita introducerea vaccinului sub fascii. Ca loc de elecie se recomand: a) laturile gtului la animalele mari; b) faa intern a coapsei; c) zona posterioar a conchiei auriculare la porcine; d) prile laterale ale toracelui la carnivore; e) partea superioar a gtului la psri. vaccinarea intramuscular se practic rar, utilizndu-se ace lungi, avnd ca loc de elecie muchii fesieri i pectorali la psri. Vaccinarea intramuscular se recomand n cazul vaccinurilor vii; cele adiionate pe hidroxidul de aluminiu depreciaz calitatea crnii; vaccinarea intraperitoneal se practic cu ace cu bizoul scurt, respectnd reguli stricte de asepsie. Se recomand doar la purcei, n vaccinrile contra enteritelor. Cile de vaccinare enterale

265

vaccinarea conjunctival, se aplic la psri i const n instilarea vaccinului n sacul conjunctival; vaccinarea prin aerosoli se face sub forma unor suspensii antigenice fine de dimensiuni cuprinse ntre 20-60 nm. Se utilizeaz n aplicarea vaccinurilor virale, ndeosebi n imunizarea psrilor, vaccinul fiind pulverizat prin duze calibrate pentru obinerea de particule fine, la presiunea de 8 atmosfere. vaccinarea oral (per os) se utilizeaz prin administrarea vaccinului n furaj, n ap de but. Cantitatea de vaccin trebuie s fie mai mare, de circa 100 de ori, dect n administrarea parenteral ntruct aciditatea gastric i n general mediul gastrointestinal cenzureaz 99% din antigenul administrat. n prezent se utilizeaz vaccinuri enterale incapsulate n microsfere de copolimeri ai acidului lactic sau acidului glicolic. Antigenele din matricea polimeric, pot fi corpusculare sau sub form lichid; serovaccinarea const n administrarea simultan, dar n puncte separate, a agentului vaccinal nemodificat (virulent) i a unei cantiti de ser imun. Serul se administreaz pentru a a sigura protecie imediat animalelor vaccinate, att fa de intervenia unei tulpini slbatice a unui posibil agent etiologic specific, dar i mpotriva agenului vaccinal, cuia i atenueaz din patogenitatea potenial. Treptat efectul anticorpilor administrai prin serul specific scade, iar organismul ncepe s-i sintetizeze anticorpii specifici proprii, sub aciunea inductoare a vaccinului. Serovaccinarea a fost folosit nc de la sfritul secolului trecut i imunizarea antirujetic (metoda Loretz) i anticrbunoas (metoda Sobrenheim) i din 1906 s-a introdus n imunoprofilaxia pestei porcine, sub denumirea de serovirulizare, constituind timp de aproape cinci decenii metoda de baz n lupta mpotriva acesti grave boli. Aceast metoda de vaccinare prezint dificulti n privina unei echilibrri judicioase ntre germeni i ser (raportul antigen/anticorp), existnd posibilitatea ca virulena s fie neutralizat de ser (anticorpi) i n consecin s nu se mai instaleze o imunitate activ satisfctoare ca intensitate i durat. Pe de alt parte, organismele vaccinate ca agentul patogen folosit ca vaccin viu, pot deveni purttoare i eliminare de germeni (mai ales n cazul vaccinurilor antivirale) pentru perioade lungi de timp, ducnd la crearea artificial a unor focare staionare de boal. Profilaxia specific, prin utilizarea vaccinurilor reprezint pentru prezent modalitatea cea mai eficient n prevenirea bolilor
266

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE infecioase. Pentru viitor se prospecteaz prepararea de vaccinuri lipsite de antigeni de lest, care s conin numai fraciunea imunizant (subunit-vaccinuri) i utilizarea pe scar larg a paravaccinurilor (MAYR, 1980). Imunitatea pasiv Imunitatea pasiv se obine prin transfer de anticorpi gata formai de un organism donator i prezint urmtoarele caractere generale: se instaleaz fr participarea organismului, prin simplu transfer de anticorpi preparai de alt organism; se instaleaz imediat; este o imunitate de scurt durat, 14-21 zile.

14.7. SERURILE IMUNE Serurile imune sau terapeutice sunt produse biologice obinute din serul sanguin al unui animal imunizat activ prin vaccinare sau al unui convalescent imunizat activ prin trecere prin boal. n ambele cazuri, serul conine anticorpi protectori specifici, capabili s neutralizeze aciunea antigenului respectiv. Primele ncercri de folosire a serurilor n terapia antiinfecioas dateaz de la sfritul sec. XIX-lea, cnd s-a demonstrat c inocularea unei culturi bacteriene la un animal determin apariia n serul sanguin a unor substane care pot proteja nu numai organismul care le-a produs ci i alte organisme la care acest ser este inoculat. Clasificarea serurilor se face dup mai multe criterii i anume: 1. Dup cantitatea de anticorpi serurile se mpart n : a. seruri hiperimune, care conin o cantitate foarte mare de anticorpi i se obin prin administrarea antigenului nemodificat sau a toxinei ca atare; b. seruri de convalescent, se obin de la animale care au trecut prin boal n mod natural i conin o cantitate redus de Atc. c.concentrate gamaglobulinice, reprezint fraciunea globulinic din seruri, sunt foarte bogate n Atc. i ca atare se inoculeaz n cantitti mici, avnd o valoare de 4-5 ori mai mare dect serul integral.
267

2. Dup specia pe care s-a preparat serurile pot fi: a. omologe, care se prepar pe o specie animal i se administreaz la aceeai specie; b. heterologe cnd se prepar pe o specie i se aplic la alt specie animal dect specia pe care s-a preparat. 3. Dup natura antigenului cu care s-a preparat, serurile pot fi: a. seruri antimicrobiene, cnd antigenul folosit a fost o bacterie sau un virus; b. seruri antitoxice, cnd imunizarea s-a fcut cu toxine; c. seruri mixte care conin att Atc. microbieni ct i antitoxici;

14.8. MODUL DE PREPARARE A UNUI SER Serurile se prepar n biofabrici i necesit protocoale de lucru riguroase. n general n prepararea unui ser sunt necesare urmtoarele etape: alegerea Atg. bacterian, viral sau toxina care trebuie s ndeplineasc condiia puritii i antigenitii; stabilirea speciei animale pe care se face imunizarea. Se utilizeaz n mod special calul, bovinele i suinele; utilizarea animalelor mici este n general neeconomic. Bovinele i porcinele se utilizeaz pentru seruri strict omologe. Donatorul preferat rmne calul, care reacioneaz imunologic cu majoritatea Atg.,are o cantitate mare de snge i serul su este relativ bine suportat de alte specii. Animalele alese pentru imunizare trebuie s fie sntoase i indemne de boli infectocontagioase oculte. hiperimunizarea propriu-zis, const n inocularea i.v. a Atg. Primele 2-3 inoculri se fac cu vaccin, urmtoarele cu Atg. viu n doze progresive, dup un protocol de lucru bine stabilit, n funcie de fiecare ser n parte. sngerarea care se poate face parial, prin scoaterea a cca. 1/3 din volumul total de snge la cabaline i bovine, sau la alb prin scoaterea ntregii cantiti de snge prin puncia cordului (la porcine). recoltarea serului sau a plasmei, prin defibrinare cu perle de sticl n recipiente sterile, sau prin exprimarea serului dup coagulare pe baghete de sticl.
268

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE titrarea serului se face pentru a se determina cantitatea de Atc. Se evalueaz fa de seruri etalon standard i se exprim n uniti internaionale sau uniti de protecie. controlul puritii fa de eventualele infecii bacteriene sau micotice, aprute n timpul recoltrii serului. Dac serul este pur se introduce fenol 5% ca substan prezervant i se nfioleaz. Condiiile pe care trebuie s le ndeplineasc un ser bun Pentru a fi introdus n practic serul, trebuie s ndeplineasc o serie de condiii i anume: s fie activ, adic s conin o cantitate apreciabil de Atc.; s fie steril i s nu fie nociv pentru specia animal la care se administreaz. Serurile trebuie pstrate n condiii corespunztoare de temperatur i ntuneric. S-a dovedit c temperatura de 37C scade titrul unui ser aproximativ 20%, radiaiile solare reduc capacitatea protectoare cu 50%, iar ngheul i dezgheul duc la inactivarea total a serurilor imune.

14.9. MODUL DE APLICARE A SERURILOR Serurile imune se aplic n dou scopuri: a) n scop profilactic n focarul de boal la animalele sntoase; b) n scop curativ la animale bolnave (n special serurile antitoxice). Cile de inoculare pot fi intravenoase (cu riscuri de oc anafilactic pentru serurile heterologice), intraperitoneale, subcutan, intramuscular i subdural. Serurile nu se administreaz per os ntruct anticorpii sunt cenzurai de fermenii tubului digestiv; ele pot fi administrate pe aceast cale numai la animale nou-nscute.

269

CAPITOLUL 15
SUBSTANE IMUNOMODULATOARE, IMUNOSTIMULATOARE I IMUNOADJUVANTE 15.1. TERMENII FOLOSII PENTRU DESEMNAREA SUBSTANELOR CU EFECT ASUPRA SISTEMULUI IMUNITAR
Substanele cunoscute ca fiind capabile s acioneze pozitiv sau negativ asupra imunitii au fost denumite diferit de la un autor la altul. Astfel, POPOVICIU (1980) denumete aceste substane adjuvante i imunostimulente nespecifice; MAYR (1982) le atribuie calificativul de inductori de paraimunitate, TIZARD (1987) distinge dou categorii de asemenea substane i anume adjuvani care stimuleaz rspunsul imun dac sunt cuplai cu un antigen i respectiv substane imunostimulatoare care au un efect neantigen-specific. OLINESCU (1983) semnaleaz utilizarea ca sinonime a termenilor de imunomodulatori, imunoactivatori, imunorestauratori, iar VANSELOW (1987) simplific terminologia utiliznd termenul de adjuvant, introdus de RAMON n 1926 pentru a cuprinde o larg gam de substane cu proprieti imunomodulatoare, imunopotenatoare i imunoadjuvante. Potrivit acestui autor imunomodulatorii pot aciona asupra sistemului imun att n sens pozitiv ct i n sens negativ, adic sunt

270

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE capabili s restaureze starea de imunodepresie, dar i s determine un rspuns imun excesiv, de genul hipersensibilizrii. ntre imunomodulatori se enumer unele virusuri, bacterii i produsele lor, precum i alte produse biologice ale sistemului imun. Imunostimulatorii sau imunopotenatorii stimuleaz rspunsul imun n combinaie cu o stimulare antigenic. Unele substane cum ar fi: levamisolul MDP (muramildipeptidul), poate exercita un efect imunomodulator ct i imunopotenator. Imunoadjuvanii snt mai eficieni dac se asociaz cu administrarea unui antigen (de exemplu, polinucleotidele MDP, srurile de aluminiu, adjuvantul complet Freund, endotoxinele bacteriene). Cu toate acestea s-a constatat numeroi adjuvani care stimuleaz imunitatea chiar dac nu sunt cuplai cu un antigen (de exemplu, emulsiile de ap n ulei). n cele ce urmeaz vom folosi termenii de substane imunomodulatoare, imunoadjuvante pentru a cuprinde toate produsele extrem de diferite ca origine i structur, care influeneaz rspunsul imun fa de diveri antigeni i fa de tumori. Aciunile pe care le prezint aceste substane nu se exclud reciproc, ntruct o substan poate dispune concomitent de dou sau chiar trei din aceste proprieti. 15.2. CLASIFICAREA SUBSTANELOR IMUNOMODULATOARE Imunomodulatorii i imunoadjuvanii sunt reprezentai de numeroase substane extrem de diferite din punct de vedere al provenienii lor, a structurii lor chimice, a modului de aciune, nct i criteriile de clasificare sunt la fel de numeroase i diferite, de la un autor la altul. OLINESCU n 1989 utilizeaz drept criterii de clasificare a imunoadjuvanilor, modul de obinere (naturali-sintetici), provenien (chimic, biologic) i structur (simpl, molecular-complex, celular, pluricelular, tisular). THEILEN i MADEWELL n 1987 abordeaz imunoadjuvanii din punctul de vedere al imunoterapiei nespecifice a cancerului, clasificndu-i n: substane biologice, imunopotenatori chimici i sintetici. TIZARD n imunologia veterinar din 1987 distinge trei categorii: adjuvani care se administreaz concomitent cu un antigen respectiv, vaccinuri, substane imunomodulatoare i extractele leucocitare dializabile.
271

Cea mai cuprinztoare clasificare i-o datorm lui VANSELOW (1987) care grupeaz imunoadjuvanii n 5 categorii: a) substane biologice; b) produi chimici definii, bacterieni sau fungici; c) analogi biologici sintetici; d) preparate chimice; Cu toate c nici o clasificare nu este atotcuprinztoare n cele ce urmeaz vom da o list a imunoadjuvanilor dup autorii de mai sus i completat de noi (tabelul nr.15).

Tabelul 15 Lista adjuvanilor utilizai n medicina uman i veterinar A. SUBSTAN}E BIOLOGICE - Micobacteriile - M. tuberculosis ncorporat n adjuvantul lui Freund complet (AFC) - M. bovis var. Calmette-Guerin (BCG) - Fragmente micobacteriene - Corinebacteriile (C. parvum - denumit actual Propionibacterium acnes; C. granulosum) - Bordetella pertusis - Nocardia rubra - Bacillus subtilis - Probiotice (Produse bacteriene care blocheaz multiplicarea bacteriilor patogene i potenial patogene) - Unele virusuri, ntre care avi- i parapoxvirusurile - Saponinele - Vitamina A (retinol) - Vitamina E - Vitamina C - Vitamina D - Lanolina - Gelatina (microsferule) B. PRODUSE CHIMICE DEFINITE, BACTERIENE SAU MICOTICE - Lipopolizaharidele - Polizaharidele (glucanul, lentinanul din levuri) - Muramil dipeptidul (MDP) - Trehaloza dimicolat (cord factor) (TDM) - P 40 (glicoprotein asociat peptidoglicanului din peretele celular, derivat din C. granulosum)
272

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE - Omnadin, Aerodin, Zoodin, Polidin ( preparate polimicrobiene) - Cantastim (fraciuni subcelulare de Klebsiella pneumoniae) - ICB 10 ( preparat pe baz de candidin) - Statolon - Bestatin C. PRODUSE BIOLOGICE ALE SISTEMULUI IMUN - Hormoni timici - Limfokine i citokine, inclusiv interferonul D. PRODUSE BIOLOGICE TISULARE - Extracte tisulare de placent uman: PDE, Ombilicen, Coriocen, Amniocen - Extract tisular de splin STE - Extract tisular hepatic HTE E. ANALOGI BIOLOGICI SINTETICI - Homopolimerii ARN complementari dublu torsodai (poli I:C i poli A:U) - MDP sintetic - TDM sintetic - Lauroiltetrapeptidul (RP 40639) - Steariltirozina clorhidric F. SUBSTAN}E {I PREPARATE CHIMICE - Cuprul - Seleniul - Zincul - Compuii de aluminiu (Al(OH)3; ALSO4) - Fosfatul calcic - Dextranul sulimfociteat - Emusiile uleioase (adjuvantul Freund incomplet- AFI) - Levamisolul - Lipozomii - Adjuvanii poliacrilici - Dinitroclorbenzenul - Azimexona - Tufstinul - Sferule de albumin sferic - CP - 20.960 15.3. MODUL DE ACIUNE AL UNOR IMUNOADJUVANI SPECIFICI
273

Graie diversitii lor mai ales din punct de vedere chimic i al structurii, aproape fiecare grup de substane adjuvante i n unele cazuri fiecare substan au un mecanism propriu de aciune. VANSELOW n 1987 ncearc s grupeze mecanismele de aciune a imunoadjuvanilor n trei direcii: aciunea asupra antigenului; aciunea asupra organismului-gazd; aciunea simultan la ambele niveluri.

15.3.1. Aciuni asupra antigenului Imunoadjuvantul plus antigenul au un efect de depozitare care influeneaz rspunsul imun primar i mai puin pe cel secundar printrun aflux al celulelor fagocitare la locul de elecie. Unii imunoadjuvani cum ar fi bazele alkilice i cei uleioi pot determina modificri ale conformaiei i sarcinii electrice a moleculei de antigen care devin puternic imunogene. Ali adjuvani au posibilitatea de a transforma o hapten neimunogen ntr-una imunogen. S-a demonstrat c un imunogen puternic este alctuit dintr-o parte imunogen - haptena- i o parte cu caliti de adjuvant. Proteinele adugate prin acilare au tendin mai mare de agregare molecular i de aderen celular. Aceste tendine le sporesc imunogenitatea Atg., inclusiv prin aceea c proteinele ataate macrofagelor sunt mai imunogene dect cele libere. Efectul adjuvant al conjugatelor lipido-proteice, al substanelor lipidice i lipidofile se caracterizeaz prin accentuarea captrii Atg. de ctre macrofagele din limfonoduli, care are ca o consecin global, stimularea imunitii mediate celular. n sfrit, ali imunoadjuvani au capacitatea de a denatura antigenul prin emulsionare sau fragmentare prin adsorbie la alaun, bentonit sau alte substane. Antigenul astfel modificat ader la suprafaa macrofagelor i a celulelor dendritice ale limfonodulilor i splinei, ceea ce favorizeaz prezentarea lui la limfocite. 15.3.2. Aciuni asupra organismului-gazd

274

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Exist numeroase date privind efectul adjuvanilor asupra organismului gazd, care de fapt se adaug celor exercitate asupra antigenului. Una din ipotezele agreate i confirmate este aceea a depozitrii antigenului. Potrivit acestei teorii adjuvanii ntrzie nglobarea antigenului la locul de incoulare i l elibereaz treptat (eluie). Astfel, adjuvantul Freund complet (AFC) reine Atg. la locul inoculrii timp de 6 luni (OLINESCU, 1988). De aceleai efecte se bucur mai des, srurile de aluminiu i emulsiile ap-ulei (A/U). S-a demonstrat, deasemenea, retenia Atg. la nivelul limfonodurilor regionale. Numeroi adjuvani pot determina sechestrarea sau captarea limfocitelor (trapping) n organele limfoide. Captarea limfocitelor favorizeaz contactul optim ntre Atg. i celulele sistemului imun. Pe de alt parte, unii imunoadjuvani recruteaz macrofage limfocite i alte celule la sediul inoculrii cu formarea de granuloame. Imunoadjuvanii tensioactivi (endotoxine, ceara D, micobacteriile, retinolul, detergenii anionici i saponina) dispun de grupri distincte hidrofile sau lipofile care faciliteaz fixarea Atg. la membrana celular, eliberarea de limfokine i monokine, precum i lezionarea membranelor lizozomale. Rspunsul organismului gazd la administrarea adjuvanilor, poate fi diferit i n funcie de calea de administrare - local (topic) sau parenteral (sistemic) stimulnd imunitatea umoral sau pe cea celular. Unii imunoadjuvani i exercit aciunea imunoregulatoare prin intermediul nucleotidelor ciclice. Se cunoate c diferenierea limfocitelor este stimulat de cAMP (3'5' adenozinmonofosfatul ciclic) dar proliferarea este inhibat de cAMP. Activarea proliferrii Limfocite i Mcf este dependent de cGMP (guanozinmonofosfatul ciclic). Unii adjuvani (AFC i lipopolizaharidele) pot stimula prezentarea Atg. precum i exprimarea moleculelor Ia, pe membrana extern a macrofagelor care intervin n cooperarea dintre celulele T i Mcf. n sfrit, imunoadjuvanii pot stimula sau inhiba sinteza i eliberarea unor imunoregulatori naturali (citokine, prostaglandine, hormoni polipeptidici) a cror aciune asupra sistemului imun este binecunoscut.

15.4. MODUL DE ACIUNE A UNOR IMUNOADJUVANI SPECIFICI


275

La capitolul anterior (15.3.) au fost redate anumite aciuni generale ale adjuvanilor asupra antigenelor i organismului. n continuare, vom reda modul de aciune a unor adjuvani specifici. 15.5. PRODUSE CHIMICE DEFINITE, BACTERIENE SAU MICOTICE 15.5.1. Micobacteriile nc din 1924 LEWIS i LOOMIS au observat c la cobaii infectai cu BK are loc o sintez sporit de Atc fa de un Atg inoculat ulterior. Aa s-a ajuns la prepararea adjuvantului Freund complet (AFC) n anul 1942 de FREUND i McDERMOTT. Mai mult, s-a constatat c nu numai micobacteriile ci i fragmentele acestora exercit efecte imunoadjuvante. Cele mai ample studii au fost dedicate BCG-ului (M. bovis var. Calmette-Guerin) n imunoterapia cancerului la om i animale. Adjuvantul Freund complet (AFC) AFC este alctuit dintr-o emulsie ap-ulei (A/U) coninnd un Atg. i respectiv bacili tuberculoi vii sau omori. Mycobacterium tuberculosis poate fi substituit de alte micobacterii sau chiar de fragmente ale acestora cu ar fi TDM (trehaloz dimicolat). Antigenul este introdus n faza apoas iar micobacteriile n cea uleioas. Atg. specific ncorporat n AFC difuzeaz cu adjuvantul spre limfonodurile adiacente stimulnd att rspunsul imun umoral, ct i pe cel mediat celular. O singur inoculare s.c. sau i.m. de AFC provoac apariia Atc. n timp de 4-5 zile care pot fi detectai pn la 8-9 luni. Picturile de emulsie sunt vehiculate la distan de locul inoculrii i provoac o reacie inflamatorie sever, att la sediul inoculrii ct i la distan. Datorit acestui efect advers excesiv ca i datorit faptului c AFC include o reacie pozitiv la tuberculin, utilizarea lui a fost abandonat, pstrndu-i nealterat interesul experimental (TIZARD, 1983; VANSELOW 1987). Bacilul Calmette-Guerin (BCG) BCG (Mycobacterium bovis var. Calmette-Guerin) preparat iniial ca vaccin atenuat mpotriva tuberculozei i-a dovedit eficiena n stimularea imunitii naturale, ntr-o serie de tumori la om i la animale domestice i de laborator.
276

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE La animalele de laborator consanguine administrarea BCG determin regresia tumorilor induse experimental, dar la om i animale neconsanguine el determin regresia numai a tumorilor spontane localizate. BCG i exprim efectul mai net n cazul inoculrii intralezionale n tumori induse experimental la animale de laborator; hepatoame, osteosarcoame, cancer mamar i cel al vezicii urinare. La om i-a dovedit eficiena n terapia unor tumori spontane ale vezicii urinare, cancer pulmonar i cancer de sn. La animale s-au nregistrat succese n tratamentul limfosarcoamelor, osteosarcoamelor, tumorilor venerice, sarcoidoza cailor, etc. Stimularea imunitii antitumorale cu BCG se exercit prin mai multe mecanisme: activeaz capacitatea fagocitar i oxidativ a macrofagelor; stimuleaz proliferarea limfocitelor Tc i NK; stimuleaz citotoxicitatea anticorpodependent prin prezena unui efect imunogen nespecific datorit reactivitii ncruciate dintre BCG i anumii antigeni tumorali; reducerea fenomenului de toleran prin epurarea unor factori blocani din circulaie. Eficiena terapeutic a BCG depinde de mai muli factori cum ar fi, sursa utilizat, doza, protocolul terapeutic, frecvena administrrii i modul de preparare. Cile de administrare a BCG pot fi: intralezional, subcutan, intradermic i intravenoas (ultima n terapia metastazelor pulmonare i hepatice). Efectele secundare care apar n urma administrrii BCG pot fi severe i se refer la frisoane, stri de depresie, anorexie, febr, hipotensiune, limfadenopatie satelit, abcese la sediul inoculrii, abcese metastatice (mai ales n ficat), infecie diseminat cu BCG i anafilaxia. Deasemenea s-au constatat i reacii paradoxale n urma tratrii cu BCG a unor pacieni cu sarcom felin cnd tumoarea a fost stimulat (THEILEM i MADEWELL, 1987). Micobacteriile totale pot fi substituite de fragmente micobacteriene cum ar fi peretele celular al micobacteriilor, rezidul extras cu metanol (REM), ceara D, aa-numitul cord factor- adic trehaloza dimicolat (TDM) i muramil dipeptidul (MDP). Acesta din urm singur nu dispune de aciune antitumoral, necesitnd pentru aceasta un vehicol corespunztor. 15.5.2. Lipopolizaharidele i polizaharidele
277

Lipopolizaharidele extrase din peretele celular al bacteriilor Gram negative dispune de efecte imunoadjuvante care se datoreaz fraciunii lipidice. Ele activeaz funcia fagocitar a macrofagelor, mitogeneza pentru celulele B i stimuleaz producerea de limfocite T i B. Deasemenea s-a mai semnalat c lipopolizaharidele stimuleaz producerea de interferon i activeaz complementul (VANSELOW, 1987). Polizaharidele au aciuni asemntoare, ele imitnd inflamaia prin activarea complementului atrgnd PMN i macrofagele.

15.5.3. Propionibacterium acnes (Corynebacterium parvum). P. acnes stimuleaz imunitatea natural fa de boli virale, bacteriene i protozoare. El este un germen Gram-pozitiv anaerob. Efectul antitumoral se exercit cu precdere asupra tumorilor induse experimental, n timp ce asupra celor spontane de la animalele domestice nu s-a dovedit a fi la fel de eficient. P. acnes are efect antitumoral numai omort, fie prin cldur, fie fenolat. Principiul activ este un glicopeptid din peretele celular rezistent la formol i cldur. El acioneaz prin activarea macrofagelor care devin citostatice i citocide, accentueaz rspunsul umoral antitumoral prin reacie ncruciat cu antigenele tumorale, sporete producerea de limfocite, Killer (K) i supresoare, fiind considerat cel mai puternic inductor al captrii limfocitelor. Suspensia fenolat de P. acnes determin regresia unor tumori, murine (osteosarcomul, fibrosarcomul, carcinomul mamar i plasmocitomul) indiferent dac este administrat intraperitoneal, intralezional sau intravenos. Ea are i eficien antimetastatic tot n cazul unor tumori murine i efectul antitumoral maxim apare n cazul administrrii intratumorale. 15.5.4. Endotoxinele bacteriene mixte Endotoxinele bacteriene mixte sunt preparate din Streptococcus i Serratia spp. i s-au utilizat ntr-o gam de tumori maligne la om i animale. Se cunosc date puine cu privire la modul de aciune i efectul lor imunoadjuvant.

278

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE TIZARD susine c endotoxinele stimuleaz producerea de anticorpi, eliberarea de interleukine, producerea de interferoni, activeaz macrofagele i ar aciona ca mitogeni policlonali a celulelor B. Endotoxinele bacteriene mixte s-au dovedit efciente n cazul sarcoamelor i a adenocarcinomului mamar felin (MC. EWEN, 1980, cit. de VANSELOW). 15.5.5. Avipox i Parapoxvirusurile. Alte virusuri Utilizarea avipoxvirusurilor nevirulente ca stimulatoare a imunitii nespecifice la viei, debuteaz la sfritul anilor '70. MAYR n 1981, semnaleaz eficiena unor preparate standardizate de avipoxvirus (PIND-AVI) i respectiv parapoxvirus (PIND-ORF) (PIND deriv de la Paraimunitatsinducer = inductor de paraimunitate). Se mai utilizeaz preparatele DuphamumR i Domovac-InducerR care sunt tot avipoxvirusuri heterologe, incapabile de multiplicare. S-a demonstrat c i alte virusuri, respectiv unele vaccinuri stimuleaz nu numai rspunsul imun specific ci i pe cel nepsecific. ntre ele se numr virusul rinotraheitei infecioase bovine (IBR-IPV n preparatul Bayferon) i parainfluena-3 (vaccinul). n general aceste virusuri activeaz fagocitoza, stimuleaz limfocitele i mai ales induc formarea i eliberarea de interferon. Interesant c administrarea preparatului Pind-Avi la vaci postpartum nu numai c stimuleaz fagocitoza de ctre PMN i monocite dar mai determin i o involuie rapid a uterului. Toate aceste preparate au fost i sunt utilizate intensiv cu rezultate n general bune, n prevenia i chiar combaterea bolilor digestive neonatale i a bolilor respiratorii. 15.5.6. Saponinele Saponinele sunt glicozide prezente n numeroase plante, dar o saponin cu o nalt activitate adjuvant a fost extras din coaja plantei sudamericane Quillaja saponaria, denumit i Quil A. Ea se utilizeaz ca adjuvant n vaccinurile antiaftoase deoarece prin purificarea ei s-a redus considerabil reacia local. Saponinele acioneaz ca substane adjuvante prin mai multe mecanisme: stimuleaz prezentarea antigenelor celulelor imunocompetente ca substane tensioactive;

279

stimuleaz imunitatea mediat celular i anticorpogeneza fa de eritrocitele de oaie precum i fa de protozoarele parazite intracelular; introduse n vaccinuri, inclusiv n cel anti-Bacteroides nodosus, crete notabil titrul de anticorpi avnd i virtui curative n combaterea pododermatitei; saponinele purificate au intense efecte imunostimulatoare prin ataarea lor la proteinele de membran, complexele imunostimulatoare rezultate, purtnd numele de iscomi. Iscomii sunt puternic imunopotenatori i n acelai timp lipsii de efecte secundare.

15.6. PRODUSELE BIOLOGICE ALE SISTEMULUI IMUN ANALOGI SINTETICI

{I

15.6.1. Interferonii Interferonii sunt glicoproteine secretate de celulele nucleate, ca rspuns la infeciile virale i la imunostimularea cu diferite substane chimice. Ei sunt specifici pentru fiecare specie i sub aciunea lor celulele inhib replicarea virusurilor precum i creterea celulelor neoplazice. Interferonul gama inhib migrarea macrofagelor care la rndul lor favorizeaz distrugerea microorganismelor parazite intracelular. Interferonii acioneaz prin activarea celulelor ucigae natural Killer (NK), iar n funcie de doz i de timpul scurs dintre dou administrri stimuleaz sau supreseaz anticorpogeneza. Ei mai inhib hipersensibilitatea de tip ntrziat (tipul IV) i stimuleaz activitatea citotoxic a limfocitelor i macrofagelor. O bun parte dintre imunomodulatori sau imunoadjuvanii amintii anterior dar i alii acioneaz i prin inducerea de interferoni. 15.6.2. Hormonii timici i limfokinele Timozina cuprinde o familie de polipeptide acide cu greutatea molecular cuprins ntre 1000 i 15000 daltoni. Dintre aceste polipeptide, factorul umoral timic stimuleaz eliberarea de IL-2 precum i efectul citotoxic a limfocitelor T.Alimfocitea1 timostimulina stimuleaz producerea de IFN-gama, n timp ce
280

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE fraciunea 5 a timozinei determin regresia unor infecii virale (TIZARD, 1987). Timozina restaureaz rspunsul imun celular-mediat, inclusiv capacitatea de rezecie a unor alogrefe, stimulnd celulele B n reaciile gazd-gref. Deasemenea, blocheaz parial activitatea celulelor T supresoare, favoriznd astfel pe cea a celulelor T-helper i T-citotoxice. Limfokinele sunt proteine cu greutate molecular cuprins ntre 25000 i 75000 daltoni eliberate de limfocitele T activate dar care pot fi produse i de limfocitele B ca rspuns la unii stimuleni nespecifici de genul lipopolizaharidelor sau a tuberculinei PPD. Dintre ele fac parte i interferonii menionai anterior iar aciunea lor nu este antigen-specific dei mediaz peste 90 de aciuni (vezi. cap. 6.3.).

15.6.3. Homopolimerii ARN complementari dublu torsadai. Observaia c preparatele bogate n acizi nucleici au capacitatea de a restaura activitatea anticorpoformatoare a unor organisme iradiate a condus la cercetarea posibilei aciuni imunostimulatoare a polinucleotidelor sintetice. Astfel, amestecarea acidului poliadenilic cu perechea sa, acidul poliuridilic formeaz aa numitul complex poli A:U, iar amestecul acidului poliinozinic i policitidilic alctuiesc mpreun complexul poli I:C care constituite dau polinucleotide sintetice. Acestea stimuleaz formarea de anticorpi fa de numeroi antigeni acionnd pe diferite ci, dintre care mai important este creterea nivelului de cAMP. Pe aceast cale ele au un efect antiproliferativ i inductor de difereniere a limfocitelor. Polinucleotidele sintetice au i efect antitumoral, stimulnd intens producerea de interferoni. Ele sunt utilizate pentru a spori antigenitatea unor vaccinuri inactivate la animale cum ar fi cele mpotriva encefalomielitei ecvine, influena porcului, rabiei, febrei aftoase, tetanosului, brucelozei (VANSELOW, 1987).

15.7. SUBSTANE I PREPARATE CHMICE 15.7.1. Compuii de cupru


281

Cuprul intr n compoziia a numeroase enzime cu activitate oxidazic de genul aminooxidazelor, produse de fagocitele activate i care confer protecie organismelor fa de speciile bacteriene aerobe. Ceruloplasmina, principala form de cupru circulant este o aminooxidaz cu activitate histaminazic, a crei sintez hepatic este strict controlat de IL-2. Creterea concentraiei acestor enzime n strile inflamatorii septice, sau aseptice este menit s protejeze esuturile proprii i s defavorizeze supravieuirea germenilor patogeni. Aceste informaii au fost confirmate prin ncercri de reproducere experimental a bronhopneumoniei enzootice la viei cu Pasteurella multocida i respectiv cu PI-3, care au reuit numai la vieii carenai n cupru. Asocierea unui aport nutritiional de 100 ppm cupru cu vaccinarea antisalmonelic la pui a fost urmat de un rspuns imun primar superior fa de lotul martor n timp ce un aport de 200 ppm cupru la psrile bolnave de tifoz a mrit rata de supravieuire i chiar sporul de cretere. JONES i SUTTLE (1981) constat c n carena de cupru la ovine i bovine scade activitatea citotoxic a leucocitelor fa de Candida albicans. Suplimentarea hranei cu 250 ppm cupru la purceii nrcai de 8 sptmni a avut ca efect un spor de cretere superior. S-a formulat ipoteza c suplimentul de cupru ar avea un efect eubiotic asupra microflorei intestinale i ar aciona ca un imunostimulator. Deasemeni compuii de cupru mai dispun i de efecte antitumorale, fie direct pe tumori induse experimental, fie prin potenarea unor citostatice cum ar fi PTS (piruvaldehid- bis tiosemicarbozin) (GHERGARIU, 1980). 15.7.2. Vitamina E i seleniul Vitamina E i seleniul au un efect imunostimulator real dac se administreaz n cantiti ce depesc necesarul nutriional i dimpotriv, carena lor au ca rezultat imunodepresia, mai ales a mecanismelor mediate celular. La subiecii carenai n vitamina E i Se s-a identificat un factor seric transferabil care suprim rspunsul limfocitelor la mitogene i le aglutineaz (SHEFFY, 1979, cit. de GHERGARIU, 1980). Rolul seleniului n cancer a fost i continu s fie controversat. Este cert c la obolanii hrnii ca un aport crescut de Se (5,7 -10 ppm), s-a constatat o cretere a incidenei tumorilor hepatice (NELSON 1940, cit. de GHERGARIU n 1980).
282

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Dei efectul antitumoral al seleniului i compuilor si era cunoscut de al nceputul secolului, s-a renunat la utilizarea lui n terapia cancerului datorit toxicitii sistemice pe care o determin. Numeroi autori au relevat anticarcinogenitatea seleniului singur sau asociat cu tocoferolul i au evideniat c la oamenii bolnavi de cancer concentraia sanguin de seleniu este mult mai redus dect la cei sntoi. Prevenia carcinogenezei de ctre vitamina E i Se se datoreaz diminurii alterrii peroxidative a ADN. Efectul imunostimulator al vitaminei E i Se n cantiti care depesc necesarul nutritiional rmne incontestabil. 15.7.3. Compuii de zinc. Deficitul de zinc primar (dismetabolii ereditare) sau secundare (carene nutriionale) are ca efect involuia timic i imunodepresia. Hipoplazia timic este nsoit i de cea splenic i ganglionar. Carena de zinc provoac depresia funciei limfocitelor T-helper. Fr a se putea preciza mecanismele de aciune se cunoate c administrarea oral a compuilor de zinc stimuleaz vindecarea rnilor i mai ales la subiecii carenai. Efectul topic favorabil exercitat de compuii de zinc, n grbirea cicatrizrii rnilor, las s se intrevad mai curnd aciunea lui de farmacon. 15.7.4. Compuii de aluminiu Efectul adjuvant al compuilor de aluminiu este cunoscut de mult timp. Azi se folosesc numeroase vaccinuri adiionate cu diferii compui de aluminiu dintre care cel mai folosit este hidroxidul de aluminiu (Al(OH)3). Compuii de aluminiu acioneaz n special prin efectul de depozit care const cu alte cuvinte n reinerea antigenului timp ndelungat la locul de incoulare, favoriznd astefl prezentarea antigenului la componentele sistemului imun. Lista vaccinurilor adiionate cu compui de aluminiu folosii n medicina veterinar este relativ mare, incluznd att vaccinuri antibacteriene ct i antivirale. Compuii de aluminiu sunt n general, bine tolerai chiar dac administrai subcutant (n loc de instamuscular) pot provoca uneori abcese sterile i noduli persisteni. 15.7.5. Emulsiile uleioase
283

Emusiile uleioase utilizate ca adjuvant, sunt cunoscute azi sub denumirea generic de adjuvant Freund incomplet (AFI). AFI este alctuit n esen dintr-un ulei mineral sau vegetal cu greutate specific i vscozitate reduse, la care se adaug un emulsifiant. n diferite variante AFI a fost i este utilizat n scopul accenturii eficienei unor vaccinuri. Astfel, {TIRBU i colaboratorii n 1989, adiioneaz vaccinul antiaftos cu emulsii de ap-ulei; ulei-n-ap i apn-ulei- n ap, constatnd c rspunsul imun consecutiv este att de intens nct se poate reduce cantitatea de antigen de 4 ori fa de vaccinul adsorbit pe hidroxidul de aluminiu. Pe lng vaccinul antiaftos AFI a fost inclus cu avantaje similare i n alte vaccinuri ca: anti PI3, antirabic, antijigodios, antipestos porcin, etc. AFI acioneaz tot prin efectul de depozit ntrziind absorbia antigenului i stimulnd producerea local i sistemic de anticorpi. El are i un efect moderat de stimulare a imunitii mediatecelular. ntruct uleiurile minerale folosite determin o serie de efecte secundare nedorite (reacii locale i sistemice, persisten ndelungat la locul de inoculare, contaminarea cu hidrocarburi policiclice aromate carcinogene) ele au fost substituite cu uleiuri vegetale de arahide sau de susan. Aceste uleiuri spre deosebire de cele minerale sunt metabolizate de organism i excretate. Tot n scopul nlturrii unor efecte secundare s-au realizat aa numitele duble emulsii, ap-n-ulei-n-ap. Ele constau n reemulsificarea unei emulsii A/U ntru-un detergent neduntor, Tween 80. Aceste emulsii au avantajul c fiind mai puin vscoase sunt mai uor de administrat i mai puin iritante la locul de inoculare. Ulterior, s-a demonstrat c utilizarea emulsiilor uleioase determin un efect imunostimulator i n absena unui antigen administrat concomitent. S-a constatat deasemeni c emulsiile uleioase stimuleaz sistemul imun, fa de numeroi antigeni, alii dect cei coninui de un anumit vaccin i c ele pot fi utilizate ca atare n practica prevenirei unor boli la animale. 15.7.6. Levamisolul Levamisolul a fost iniial preparat ca un medicament antihelmintic, dar ulterior s-a demonstrat la toate speciile de mamifere i inclusiv la om c are remarcabile proprieti imunostimulatoare acionnd att asupra imunitii umorale ct i asupra celei celulare.

284

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Levamisolul este considerat un agent timomimetic (VANSELOW 1987) restaurnd funciile limfocitelor T i ale macrofagelor, dar fr a determina un rspuns imun exagerat. El stimuleaz fagocitoza, eliberarea de enzime lizozomale i citotoxicitatea intracelular precum i diferenierea precursorilor celulelor T. Crete chemotaxia pentru neutrofile i monocite precum i citotoxicitatea mediat de limfocite. Levamisolul mai reduce, deasemeni i funcia celulelor T supresoare, stimulmd n acest fel indirect, producerea de anticorpi, Efectele levamisolului de imunostimulator sau de imunomodulator depinde de doza, momentul administrrii i starea pacientului. De exemplu, o doz unic, stimuleaz imunitatea mediat celular 4 ore, iar administrarea repetat zilnic determin imunodepresie. SOPPI i colaboratorii au demonstrat c levamisolul are efecte diferite n funcie de doz, astfel 0,25 mg/Kg, stimuleaz rspunsul limfocitelor la mitogeni (PHA i ConA) n timp ce 2,5 mg/Kg stimuleaz numai rspunsul la PHA. Rezumnd calitile imunoadjuvante i imunomodulatoare ale levamisolului, LOWE, arat c el restaureaz numrul de celule T n caz de depleie i le activeaz; c stimuleaz fagocitoza, chemotaxia, producerea de limfokine, citotoxicitatea limfocitelor i macrofagelor i restaureaz hipersensibilitatea cutanat de tip ntrziat. Administrarea levamisolului are efecte benefice n: deficite imune congenitale; bolile aparatului respirator; infecii cronice recurente; infeciile herpetice recidivante (labiale i genitale); autoimunopatii i amiloidoz; inflamaii cronice (artrit reumatismal, spondiloartrita anchilozant); aftoz bucal recidivant. n terapia cencerului levamisolul s-a dovedit eficient numai combinat cu chimioterapia. 15.7.7. Dinitroclorbenzenul (DNCB) Substana stimuleaz reaciile locale mediate celular cu distrugerea pielii i a celulelor tumorale. Substana a fost utilizat cu succes n tratamentul unor tumori multiple cutanate i subcutanate la om. Deasemenea, DNCB s-a folosit n terapia carcinomului cu celule sarcomatoase induse de iradiaia solar. Subiecii sunt sensibilizai prin amplificarea topic a diluiilor de 1:100 pn la 1:1000 cu DNCB n emulsie lanolin-n-ap. Aplicnd ulterior DNCB pe suprafaa tumorii se produce o reacie local de tip ntrziat. Diluiile folosite la cini sunt duntoare pentru om (THEILON i MADEWELL, 1987).
285

15.7.8. Azimexon i Tufstin Azimexonul este un imunoadjuvant sintetic care intensific reacia de hipersensibilitate de tip ntrziat. Azimexonul poteneaz rspunsul imun fa de antigenii dependeni i imunodependeni de celulele T i efectul citostatic tumoral al macrofagelor fa de tumori. n acelai timp reduce efectul imunosupresor al ciclofosfamidei i al iradiaiilor. Tufstinul este un tetrapeptid bazic care poteneaz exclusiv rspunsul umoral la antigenii T-dependeni, activeaz efectul citostatic tumoral al macrofagelor i efectul citotoxicitii celulare mediate de anticorpi. 15.7.9. Lipozomii Lipozomii sunt vezicule de fosfolipide sintetice alctuite din unul sau mai multe straturi concentrice de lipide. Utilizate pentru includerea de proteine i medicamente lipozomii se utilizeaz i pentru ncorporarea antigenilor specifici, deci, n imunitatea specific. Ei pot, deasemenea transporta limfokinele la nivelul celulelor receptive. Ei sunt de obicei neantigenici sau slabi antigenici, netoxici, biodegradabili i prin ncorporarea antigenilor reduc riscul unor reacii alergice fa de acesta (VASELOW, 1987).

15.8. INOCUITATEA ADJUVANILOR n ciuda virtuiilor dovedite ale adjuvanilor n reglarea rspunsului imun i al paraimunitii, administrarea lor nu este lipsit de riscuri. S-au menionat n acest sens, efectele secundare redutabile ale AFC, care dei continu astzi s fie cel mai puternic adjuvant cunoscut, a trebuit s fie abandonat ca atare la mamiferele superioare, pstrnd doar o utilizare experimental. Unii adjuvani administrai n doze excesive pot determina imunosupresia sau pot deveni toxici. Alteori ei induc iniial imunodepresia de durat i abia ulterior devin imunostimulatori (de ex. levamisolul). Majoritatea adjuvanilor provoac granuloame, abcese, poliartrite, boala serului, nefrite, pot induce reacii anafilactice i ceea ce este mai grav, pot fi ei nsi oncogeni. Aceste efecte au putut fi nlturate parial prin realizarea unor imunorestauratori cu mas molecular mic, relativ netoxici.
286

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE Cu toate aceste limite, folosirea adjuvanilor (sau a imunorestauratorilor) are perspective deosebite n protecia unor mari populaii, n special n cazul expunerii lor la numeroii factori imunodepresori care acioneaz sinergic. Deocamdat aa cum arat VANSELOW nu exist reguli de standardizare a adjuvanilor, nici n cazul omului nici n cazul animalelor. Aceasta n pofida faptului c ei dispun oricum de efecte secundare, sau pot fi n anumite condiii, ineficieni, ca urmare a folosirii unor doze neadecvate, a unor ci de administrare nepotrivite sau a unor subieci incapabili s mai rspund la efectul lor. Dac oportunitatea adugrii unor adjuvani la antigenii specifici, respectiv la vaccinuri, nu mai este contestat de nimeni n opinia noastr cele mai largi perspective se deschid n faa administrrii adjuvanilor far antigen. Succesul unei asemenea ntreprinderi ar nsemna un cert progres n prevenia mbolnvirilor provocate de expunerea organismului concomitent la mai muli antigeni, caracteristic funciar a epidemiologiei marilor colectiviti.

BIBLIOGRAFIE SELECTIV
1. AILIESEI OCTAVIA Imunologie tehnici i metode de laborator. Ed. Univ. Al.I. Cuza, 2000 2. BARA C. Imunologie fundamental. Ed. Medical Bucureti, 1996. 3. BERCEANU T., EUGENIA PAUNESCU - Biologia i patologia imunitii. Ed. Academiei Romne, Bucureti, 1989; 4. BODIN G. - Immunologie generale, Tome I, II, III, E.M.V. de Nantes, E.M.V. de Toulouse, 1986-1987; 5. BOROS I., MORARU I., DOINA ONICA, PAUNESCU E., SULICA A. Dicionar encicopledic de imunologie, Ed. tiinific i Enciclopedic Bucureti, 1981; 6. CARP-CRARE M., TIMOFTE DORINA Imunologie i imunopatologie, Ed. Vasiliana, Iai, 1998
287

7. CARP-CRARE M. Microbiologie veterinar - Virusologie. Casa de editur Venus, Iai, 2001 8. COLITA D. - Introducere n imunologie. Ed. Medical, Bucureti, 1993; 9. COTEA V. C. Biologie celular - Embriologie general - Histologie general, Ed. Tehnopress, Iai, 2001 10. CRISTEA V. Imunologie fundamental. Ed. Medical Universitar, Iulia Haeganu, Cluj-Napoca, 1999 11. DEJICA D. Tratat de Imunologie Clinic. Vol. I, Ed. Dacia, Cluj-Napoca, 12. DEJICA D. Tratat de imunologie clinic. Vol. II Ed. Dacia, Cluj-Napoca, 1998. 13. DUCA M. Imunologie i Imunopatologie. I.M.F. Iai, 1985. 14. DUCA EUGENIA, DUCA M., FURTUNESCU G. - Microbiologie medical, Ed. a II-a, Ed. Medical Bucureti, 1984. 15. ENACHE T., GHERGARIU S., MOISE D. - Terapia nespecific n medicina veterinar, Ed. Apimondia, Bucureti, 1993; 16. FILIP V. - ndreptar de alergologie, Ed. medical. Bucureti, 1968; 17. GHERGARIU S. - Bolile alergice i autoimunopatiile la animale. Ed. Ceres, Bucureti, 1984. 18. GHERGARIU S. - Oligominerale i aligomineraloze. Ed. Academiei Romne, Bucureti, 1980; 19. GHERGARIU S., POP AL., KADAR L., SPANU MARINA Manual de laborator clinic veterinar. Ed. All, Bucureti, 2000 20. GHEA D. - Interrelaiile imunometabolice. Ed. Academiei Romne, Bucureti, 1987; 21. GHEIE V. - Semnale i receptori n imunologie, Ed. tiinific i Enciclopedic, Bucureti, 1977; 22. GHEIE V. - Anticorpii n aciune. Ed. Enciclopedic Romn Bucureti, 1971; 23. GIURGEA R. - Bursa lui Fabricius, Ed. Academiei Romne, Bucureti, 1982; 24. GRECIANU A., RUNCEANU L., CARP-CRARE M., HOLBAN D., RILEANU N., - Cercetri privind capacitatea imunomodulatoare a produsului PDE (placent uman denaturat emulsionat), Al. VI-lea Congres Naional de Medicin Veterinar Sinaia, 25-28 oct. 1994; 25. IONESCU-DOROHOI I., TITEICA M. - Practica diagnosticului imunochimic, Baze teoretice, metode logice, aplicaii chimice. Ed. Medical Bucureti, 1986. 26. ITU I., DUMITRACU DIANA Breviar de alergologie, Ed. Med.ical, Bucureti, 1996 27. JONES D.G., STTILE N.F. - Res. vet., Sci.31, 301-305, 1981; 28. MAYR A. - Znbl. Vet. Med., B.29, 5-23, 1982; 29. MESROBEANU I., BERCEANU ST. - Imunologie, imunochimie, imunopatologie. Ed. Academiei Romne. Bucureti, 1975; 30. MORARU I. - Imunologie (Bazele imunologice ale strii de sntate i boal). Ed. medical, Bucureti, 1984; 31. MORARU I. Imunologie, Ed. Medical, Bucureti, 1984
288

IMUNOLOGIE SI IMUNOPATOLOGIE
32. MO DANIELA- MARIANA Restructurri imunitare i imunomorfologice `n infestaia cu Oestrus ovis, Tez de doctorat , UAMV a Banatului, Timioara, 2002. 33. OLINESCU A. - Elemente de imunologie comparat. Ed. Ceres Bucureti,1988; 34. PASTORET P.P., GOVAERTS A., BAZIN H.- Immunologie animale, Medicine-Sciences Flamarion, Paris, 1990; 35. PARVU GHE., COSTE H., COSTE MIHAELA Nutriia, rspunsul imun i sntatea animalelor. Ed. Ceres, Bucureti, 1996. 36. PRAISLER P. Patologia bolilor imune la animale. Societatea de Med. Vet. R.S.R., Galai, 1982. 37. RAICU P., IONESCU-VARO M., VERONICA STOIAN - Celula vie, Ed. tiinific i Enciclopedic, Bucureti, 1978; 38. RDUCNESCU H. Compendiu de imunopatologie veterinar. Ed. Fundaiei Romnia de mine, Bucureti, 1999 39. RPUNTEANU GHE. Imunologie i Imunopatologie. Ed. Genis, ClujNapoca, 1996 40. ROITT I.M., BRESTOFF J., MALE D.K.- Immunologie fondamentale et applique. Medicine-Sciences. Paris, 1985; 41. ROITT I.M. - Esential Immunology, ed. a 2-a, Blackwell Scientific Publ., Oxford, 1974; 42. SASSON A - Biotehnologii i dezvoltare. Ed. Tehnic Bucureti, 1993; 43. THEILEN G.H., MADEWELL B.R. - Veterinary Cancer Medicine, ed. 2-a Leo and Febinger, Philadelphia, 1987; 44. TIMOFTE DORINA, ELEONORA GUGUIANU, C.CARP-CRARE, I. MISTREANU - Evidenierea anticorpilor fa de virusul parvovirozei canine
prin testul ELISA, Lucrri tiinitice, USAMV Iai, vol. 42 (44), pag.190

45. TIMOFTE DORINA, CARP-CRARE M., GUGUIANU ELEONORA, CARPCRARE C., VALENTIN C. Determinarea rspunsului imun umoral prin testul ELISA pentru coronaviroza canin. Simpozionul la 140 ani, ALMA MATER VETERINARIA BUCURESCENSIS, Rezumate 278, 2001, Bucureti. 46. DORINA TIMOFTE Cercetri privind imunitatea celular i umoral nespecific la unele specii de animale., Lucrri tiinifice, USAMV Iai, vol.42 (44) pag.190. 47. TIZARD I. - Veterinary Immunology, ed. 3-a Saunders Camp. Philadelphia, London, Toronto, Sydney, Tokyo, Hong Kong, 1987; 48. TRIF R., VIOR C. Patologia sistemului imunitar. Ed. Brumar, Timioara, 1996. 49. VANSELOW, B.A., Vet. Bul., 57, 881-886, 1987; 50. VIOR C., RADUCNESCU H., MANOLESCU N., POPOVICI A.,-Imunitatea i imunoprofilaxia la animale, Ed. Ceres, Bucureti, 1980; 51. ZARNEA G. - Tratat de microbiologie general vol.IV, Ed. Academiei Romne, Bucureti, 1990;
289

52. ZEAMA C. - Imunologie clinic. Ed. Medical. Bucureti, 1980; 53. *** - La reponse immunitare. Laboratoires Delande, (fr an); 54. *** - Third International Veterinary Immunology Symposium 17-20 aug. 1992, Budapeste, Ungaria;

290