UNIVERSITATEA DE TIINE AGRICOLE I MEDICIN VETERINAR ION IONESCU DE LA BRAD IAI

FACULTATEA DE ZOOTEHNIE

LUCIA CARMEN TRINC

CHIMIE I BIOCHIMIE
ANUL I, SEMESTRUL I+II

MATERIAL DE STUDIU I.D.

IAI, 2013

CUPRINS Pag. Cuprins..2 Introducere......7 Cap.I. GLUCIDE..........8 Oze (monoglucide).....8 Oligoglucide.17 Poliglucide........19 Rezumat capitol I......22 Test de autoevaluare capitol I...22 Intrebari recapitulative..23 Teme de verificare23 Referate.....23 Cap. II. LIPIDE..........24 Definiie, rspndire, rol, clasificare.........24 Constituienii chimici din structura lipidelor........24 Acizi grai.......24 Alcoolii din structura lipidelor26 Acizi biliari..27 Lipide simple....28 Gliceride..29 Steride......31 Lipide complexe...32 Glicerofosfolipide....32 Sfingolipide.....34 Rezumat capitol II....35 Test de autoevaluare capitol II..36 Teme de verificare/ Intrebari recapitulative..36 Referate.....36 Cap. III PROTIDE.........37 Aminoacizi........37 Peptide......43 Proteine.44 Clasificare....44
2

Structura proteinelor....45 Forma moleculelor proteice....48 Reprezentani ai proteinelor animale...49 Rezumat capitol III...53 Test de autoevaluare capitol III ...53 Teme de verificare/ Intrebari recapitulative..53 Referate.....53 Cap. IV. ACIZI NUCLEICI......54 Componentele structurale ale acizilor nucleici.....54 Nucleozide....55 Nucleotide.....56 Polinucleotide. Acizi nucleici...57 Caracterizare general i structura A.D.N....58 A.R.N structur, proprieti, rol biologic......60 Rezumat capitol IV...60 Teme de verificare/ Intrebari recapitulative..61 Referate.....61 Cap. V. ENZIME....62 Natura i structura chimic...62 Specificitatea enzimelor....63 Factorii care influeneaz activitatea enzimatic..64 Principalele clase de enzime.....66 Oxidoreductaze....66 Transferaze..........68 Hidrolaze.....70 Liaze70 Izomeraze....70 Ligaze......70 Rezumat capitol V....71 Test de autoevaluare capitol V.....71 Teme de verificare/ Intrebari recapitulative..72 Cap. VI. VITAMINE......73 Vitamine hidrosolubile.73 Vitamine liposolubile75 Rezumat capitol VI...78
3

Test de autoevaluare capitol VI....78 Teme de verificare/ Intrebari recapitulative..78 Cap. VII.HORMONI......79 Hormoni derivai din aminoacizi...82 Hormoni peptidici..84 Hormoni steroizi.89 Hormoni derivai din acizi grai.91 Rezumat capitol VII......91 Test de autoevaluare, Teme de verificare capitol VII......92 Cap. VIII METABOLISM......................................................................93 Consideraii generale .........93 Energetica metabolismului ........95 Procese generale n catabolism ..95 Ciclul Krebs ...96 Catena de respiraie i fosforilarea oxidativ.98 Rezumat cap. VIII .........99 Cap. IX METABOLISMUL GLUCIDELOR.....................................100 Digestia glucidelor ......100 Absorbia glucidelor ....101 Transportul glucidelor .....102 Catabolismul glucidic .....102 Catabolismul anaerob al glucidelor. Glicoliza ........103 Bilanul energetic al glicolizei .........107 Teme de lucru. Activiti......108 Glicogenoliza ......108 Catabolizarea aerob a glucozei .....109 Calea pentozo-fosfailor ......110 Sinteza pentozelor din hexoze 110 Sinteza hexozelor din pentoze ....112 Degradarea glucozei pe calea acizilor uronici ....113 Transformarea acidului gluconic n L xiluloz .114 Transformarea acidului gluconic n acid ascorbic ..115 Biosinteza glucozei .116 Glicogenogeneza i glicogenoneogeneza .......117 Biosinteza oligo- i poliglucidelor ......117
4

Biosinteza lactozei ......118 Reglarea metabolismului glucidic ......118 Rezumat cap. IX. Metabolism glucidic ...120 Teste de autoevaluare, Teme de verificare ......122 Cap. X. METABOLISMUL LIPIDELOR ......123 Catabolismul trigliceridelor. Lipoliza..........124 Metabolismul acizilor grai ....125 Catabolismul acizilor grai. -oxidare.126 Bisinteza trigliceridelor. Lipogeneza ......128 Corpi cetonici. Cetogeneza .....129 Metabolismul colesterolului 130 Reglarea metabolismului lipidic ......131 Tulburri ale metabolismului lipidic....131 Rezumat cap. X. Metabolism lipidic....132 Teste de autoevaluare...132 Teme ........134 Cap. XI. METABOLISMUL PROTIDELOR ....135 Digestia, absorbia i vehicularea protidelor .......135 Absorbia protidelor ....136 Metabolismul aminoacizilor ....136 Catabolismul aminoacizilor .....137 Transaminarea aminoacizilor ......137 Dezaminarea aminoacizilor .....138 Decarboxilarea aminoacizilor .....139 Metabolismul componentelor rezultate din degradarea aminoacizilor140 Metabolismul amoniacului ..140 Ureogeneza ..140 Ciclul acidului glutamic n organism ..142 Metabolismul componentelor carbonice rezultate din degradarea aminoacizilor ....144 Noiuni despre biosinteza proteinelor .........145 Rezumat cap. XI. Metabolism protidic ...146 Teste de autoevaluare...........147

Cap. XII. Interrelaii metabolice ..150 Transformri energetice ..............151 Lucrri practice de laborator Chimie analitic cantitativ: Volumetria...153 Alcalimetria....153 Acidimetria.........155 Permanganometria..156 Iodometria.......157 Clorometria.....158 Biochimie analitic calitativ...159 Reacii caracteristice monoglucidelor.....159 Reacii caracteristice diglucidelor...160 Reacii caracteristice poliglucidelor...161 Reacii caracteristice gliceridelor...162 Determinarea Ia i Is......162 Determinarea Ii...164 Reacii caracteristice proteinelor165 Reacii caracteristice nucleoproteinelor......168 Analiza biochimic a sngelui i urinei ......170 Dozarea clorului total din snge integral..170 Dozarea calciului din urin ...... .170 Dozarea proteinelor totale din ser .......173 Metoda azotometric Pregl-Parnas-Wagner ....173 Dozarea glutationului n snge ....176 Determinarea activitii catalazei sangvine .....176 Determinarea activitii amilazei sangvine .....178 Determinarea aciditii totale a urinei ... .179 Dozarea ionului NH4+ n urin ....180 Dozarea vitaminei C n urin ..181 Determinarea calitativ a proteinelor n urin .....182 Determinarea glucidelor n urin .........183 Bibliografie general....185

INTRODUCERE Chimia biologic are ca obiect studiul compoziiei chimice i a transformrilor de substan, energie i informaie care au loc n celulele organismelor vii, n strns legtur cu mediul nconjurtor. Fiind o tiin biologic a crei baz de studiu este materia vie, biochimia poate fi denumit i chimia vieii. Biochimia descriptiv studiaz compoziia chimic a materiei vii, structura i proprietile biomoleculelor componente. Biochimia dinamic studiaz transformrile biochimice de degradare i biosintez din celulele i esuturile materiei vii ce constituie procesele specifice metabolismului. Biochimia a devenit una din tiinele n care omenirea i pune mari sperane fiind legat direct de soluionarea problemelor de actualitate din domeniul medicinei, zootehniei, agriculturii i industriei alimentare. Conform programei analitice prezentul curs trece n revist principalele noiuni de biochimie descriptiv (prin prezentarea compoziiei chimice a materiei vii de origine animal, a structurii i proprietilor biomoleculelor care o compun), precum i principalele noiuni de biochimie dinamic prin redarea succesiunii i corelaiilor dintre procesele metabolice de degradare i biosintez a diverilor constituieni din organismul animal. Lucrarea a fost redactat pe baza unui bogat i variat material bibliografic de actualitate, autoarele strduindu-se s selecteze cele mai importante noiuni din domeniul biochimiei i s le prezinte n mod clar, sistematic i uor accesibil. Lucrrile practice cu caracter general de chimie analitic cantitativ (analiz volumetric) i biochimie calitativ din primul semestru asigur suportul pentru realizarea lucrrilor practice de biochimie analitic calitativ i cantitativ din semestrul II ce abordeaz analiza biochimic a lichidelor biologice (urin, snge, lapte).

Capitol I GLUCIDE

1.1. Consideraii generale Glucidele reprezint o clas important de substane organice naturale care, din punctul de vedere al structurii chimice, sunt combinaii polihidroxicarbonilice sau derivai ai acestora. Glucidele sunt substane ternare formate din carbon, hidrogen i oxigen, dar se cunosc i derivai ai acestora care conin i azot, fosfor sau sulf. Denumirea de glucide, utilizat mai ales n biochimie, este n strns legtur cu gustul dulce (glichis(gr.)=dulce) al multora dintre acestea. Din acelai considerent, glucidele se mai numesc zaharide sau zaharuri. 1.2. Clasificare Glucidele se clasific, n funcie de comportarea lor la hidroliz, n trei categorii: monoglucide, oligoglucide i poliglucide. Monoglucidele sunt glucide simple, nehidrolizabile. Oligoglucidele pun n libertate prin hidroliz 2-10 molecule de oze. Poliglucidele sunt macromolecule alctuite dintr-un numr mare de monoglucide, care se elibereaz prin hidroliz. 1.3. Rolul glucidelor n organismul animal Glucidele constituie principalul component al hranei i totodat principala surs de energie a acestuia, asigurnd pn la 70% din energia necesar; n celulele organismului viu oxidarea glucozei dezvolt o energie echivalent cu 4,1 kcal n organismul animal glucidele ndeplinesc i un rol structural (plastic) ca elemente de construcie ale celulei vii, intrnd n constituia acizilor nucleici, lipidelor complexe, coenzimelor. Nu trebuie neglijat nici rolul glucidelor ca furnizori de atomi de carbon necesari pentru biosinteza proteinelor, acizilor nucleici, lipidelor. 1.4. MONOGLUCIDE ( Oze ). 1.4.1. Definiie, clasificare, denumire Ozele sunt glucide simple i fac parte din clasa compuilor poli hidroximonocarbonilici-polihidroxialdehide sau polihidroxicetone Dup natura funciunii carbonil (C = O), ozele se clasific n aldoze, i cetoze.
8

Dup numrul atomilor de carbon din molecul, ozele se clasific n trioze, tetroze, pentoze, hexoze, heptoze, denumirea fcndu-se prin adugarea terminaiei "oz" la numeralul care arat numrul atomilor de carbon (lb. greac). Pentru oze se folosesc denumiri netiinifice, uzuale, date de cercettori, ca de exemplu: glucoza, manoza, xiloza, arabinoza, riboza etc., fiecare din acestea putnd fi aldoz sau cetoz. Pentru organismul animal cele mai importante oze sunt pentozele i hexozele, care se gsesc att n stare liber, ct i sub form de derivai.
H C=O 2 CH - OH 3 CH - OH 4 CH - OH 5 CH - OH 6 CH 2OH
1

CH 2 - OH C=O 3 CH - OH 4 CH - OH 5 CH - OH 6 CH 2OH

Aldoxehoza

Cetoxehoza

1.4.2 Structura ozelor Pentru structura ozelor s-au propus mai multe formulri care s concorde ct mai exact cu proprietile lor fizico-chimice. Formularea liniar (carbonilic) a ozelor atribuie acestora o caten liniar format din atomi de carbon, n care la C-1 sau C-2 este legat oxigenul carbonilic, la ceilali atomi de carbon fiind ataate gruprile hidroxil. Formularea liniar prezint n mod satisfctor structura moleculelor de oze, dar nu explic o serie de proprieti fizico-chimice constatate experimental, cum ar fi absena n unele cazuri a reaciilor specifice gruprii carbonil, prezena n anumite condiii a unei grupri hidroxil cu reactivitate mult mrit fa de a celorlalte i mutarotaia. Pentru rezolvarea neconcordanelor artate mai sus ntre structura aciclic i proprietile fizico-chimice respective, TOLLENS (1884) a propus pentru oze o structur ciclic, n care gruparea carbonil este parial "mascat" datorit formrii unei legturi semiacetalice cu una din gruprile hidroxil din aceiai molecul. Transformarea structurii liniare ntr-o structur ciclic are loc printr-o reacie de semiacetalizare. n structura ciclic obinut gruparea carbonil este modificat i n locul acesteia apare o nou grupare -OH de tip special, numit hidroxil glicozidic sau semiacetalic (semicetalic) deosebit de reactiv. Ozele care conin ciclul piranozic se numesc piranoze, iar cele care conin ciclul furanozic se numesc furanoze.

La aldohexoze structura piranozic se formeaz prin stabilirea punii de oxigen ntre C -1 i C -5, iar structura furanozic rezult prin stabilirea punii de oxigen ntre C -1 i C -4:
H - C - OH H-C=O H - C - OH HO - C - H H - C - OH HO - C - H O H-C H - C - OH CH 2OH

H - C - OH HO - C -H O HO - C - H C1 - C5 H - C - OH C 1 - C 4 H - C - OH H - C - OH H-C CH 2OH CH OH
2

- Glucopiranoza

Glucoza

- Glucofuranoza

La cetohexoze structura ciclic piranozic se formeaz prin stabilirea punii de oxigen ntre atomii de carbon C-2 i C-6, iar structura furanozic prin stabilirea punii de oxigen ntre atomii de carbon C -2 i C -5:

CH 2 - OH C - OH HO - C - H H - C - OH H - C - OH H 2C
-Fructopiranoza

CH 2OH CH 2OH C=O HO - C HO - C - H HO - C - H O H - C - OH O H - C - OH C2 - C6 C2 - C5 H - C H - C - OH CH 2OH CH 2OH

Fructoza -Fructofuranoza

Prin ciclizarea ozelor i formarea hidroxilului glicozidic, devine asimetric i atomul de carbon carbonilic, ceea ce face posibil existena a doi stereoizomeri, numii i -anomeri. Anomeria este o form de izomerie a ozelor n care izomerii se deosebesc ntre ei prin configuraia de la atomul de carbon carbonilic, numit din acest cauz i carbon anomer.Anomerii se deosebesc ntre ei prin orientarea diferit a hidroxilului glicozidic, care poate ocupa poziii sterice diferite, la dreapta () sau la stnga () atomului de carbon carbonilic. n soluie se stabilete un echilibru dinamic ntre cei doi anomeri i forma aciclic a ozelor; transformarea reciproc a - anomerilor n -anomerii corespunztori se numete mutarotaie. Cele dou forme anomere, dei au aceeai compoziie elementar difer prin unele din proprietile lor: -glucoza are rotaia specific () = + 112,20, iar -glucoz are rotaia specific () = + 18,70. Ambele forme au fost izolate n stare pur. Cnd anomerii i sunt dizolvai n ap, rotaia optic a fiecruia se modific treptat n timp, atingnd la echilibru valoarea () = + 52,70: mutarotaia se poate deci observa ca o
10

descretere a rotaiei optice a - anomerului sau ca o cretere a rotaiei optice a - anomerului la valoarea de echilibru. Structurile de perspectiv a ozelor Formele structurale ciclice propuse de Tollens nu respect unghiurile de valen reale iar legturile care formeaz puntea de oxigen fiind anormal de lungi, nu redau poziia exact a gruprilor hidroxil. Aceste structuri furanozice sau piranozice au de fapt o configuraie spaial. Pentru a reda ct mai corect structura spaial a ozelor, W. HAWORTH (1929) a adoptat formulele de perspectiv, conform crora ciclul piranozic este reprezentat ca un hexagon regulat, cel furanozic printr-un pentagon, plane, cu substituienii atomului de carbon dispui de-o parte i de alta a acestuia. Substienii care apar n formulele ciclice la dreapta catenei carbonice, se plaseaz n spatele planului ciclului, iar prin convenie se scriu dedesubt; substituienii care apar n formulele de proiecie la stnga catenei carbonice, se gsesc plasai n faa planului ciclului, iar prin convenie se scriu deasupra acestuia.
CH 2OH C5 H H C 4 OH OH C 3 H CH 2OH O H H C1 C 2 OH HCOH C4 H OH C3 O H OH C1

OH alfa - Glucopiranoza

H C2 H OH beta - glucofuranoza

Trebuie menionat c pentru glucoz este caracteristic structura piranozic, iar pentru fructoz structura furanozic. n soluie se creaz un echilibru dinamic ntre cei cinci izomeri: forma liniar carbonilic i cei patru anomeri i piranozici i furanozici. Tem de lucru: Scriei structurile de perspectiv ale fructozei 1.4.3. Proprieti fizice ale ozelor Ozele sunt substane solide, cristaline, incolore, cu gust dulce, uor solubile n ap datorit numeroaselor grupri hidroxil, greu solubile n alcool i insolubile n eter i cloroform. n mediu puternic acid ozele se deshidrateaz i se nnegresc, la temperatur nalt ozele se caramelizeaz, descompunndu-se. n soluie ozele sunt optic active i prezint fenomenul de mutarotaie. Activitatea optic a ozelor se datoreaz existenei n molecula lor a atomilor de carbon asimetrici (C) care
11

creaz o asimetrie a ntregii molecule, capabile s devieze planul luminii polarizate. Izomerii optici (enantiomeri) se deosebesc ntre ei numai dup sensul n care deviaz planul luminii polarizate, celelalte proprieti fizice i chimice fiind identice. Izomerii care deviaz planul luminii polarizate la dreapta se numesc dextrogiri i se noteaz cu semnul (+), iar izomerii care deviaz planul luminii polarizate spre stnga se numesc levogiri i se noteaz cu semnul (-). Ozele sunt substane optic active cu excepia dihidroxiacetonei, o cetotrioz care nu posed atom de carbon asimetric. Prezena atomului de carbon asimetric determin apariia stereoizomeriei, adic a izomerilor cu structuri sterice diferite, nesuperpozabile prin micri de rotaie sau translaie, fiecare din ele fiind imaginea de oglindire a celorlalte.De exemplu, aldehida gliceric, aldotrioza cu un singur atom de carbon asimetric, poate exista n dou forme stereoizomere diferite adic doi enantiomeri, care se deosebesc prin devierea planului luminii polarizate n sensuri opuse:
CH 2OH C=O CH 2OH Dihidroxiacetona H - C =O CH-OH CH 2OH H -C =O H -C -OH CH 2OH H - C =O HO - C - H CH 2OH Aldehida L (- ) glicerica

Aldehida glicerica Aldehida D (+) glicerica

n cazul ozelor care posed mai muli atomi de carbon asimetrici numrul izomerilor optici crete i se calculeaz dup relaia: I0 = 2n n care n este numrul atomilor de carbon asimetrici. Tem de lucru: s se calculeze numrul izomerilor optici pentru ozele cu 5 i 6 atomi de carbon Seriile D i L ale ozelor Pentru caracterizarea configuraiei sterice (spaiale) a substanelor optic active s-a introdus noiunea de serie steric, existnd o serie steric D i o serie steric L.Ozele aparin seriei D sau L dac C cel mai ndeprtat de gruparea carbonil, are aceeai configuraie ca i C din aldehida D - sau L - gliceric.
H-C=O H - C - OH HO - C - H H - C - OH H - C - OH CH 2OH D (+) Glucoza CH2OH C=O HO - C - H H - C -OH H - C - OH CH 2OH D ( - ) Fructoza H - C =O H - C - OH H - C - OH H - C - OH CH 2OH D ( - ) Riboza H - C =O H - C - OH HO - C - H HO - C - H CH 2OH L ( + ) Arabinoza

1.4.4. Propriei chimice ale ozelor Ozele fiind substane cu funcii mixte (carbonil i hidroxil) vor da reacii caracteristice acestor funcii.
12

1.4.4.1. Reacii datorate gruprii carbonil a). - Reacia de reducere:- n prezena hidrogenului activat catalitic, gruparea carbonil se transform n grupare hidroxil, cu formare de polialcooli.
C O H CH 2OH H - C - OH HO - C - H H - C - OH H - C - OH CH 2OH Sorbitol

H - C - OH HO - C - H H - C - OH H - C - OH CH 2OH Glucoza

CH 2OH C =O HO - C - H H - C - OH H - C - OH CH 2OH Fructoza

CH 2OH HO - C - H HO - C - H H - C - OH H - C - OH CH 2OH Manitol

b). - Oxidarea ozelor Produii care iau natere prin oxidarea ozelor difer prin gradul de oxidare a gruprii carbonil i a alcoolului primar. - Prin oxidarea blnd a aldozelor cu ap de brom sau de clor, gruparea carbonil trece n gruparea carboxil, cu formare de hidroxiacizi monocarboxilici, numii acizi aldonici. Datorit gruprii carbonil, respectiv hidroxilului glicozidic, ozele i unele diglucide posed proprieti reductoare, care se folosesc n practica de laborator. Astfel, ozele prin oxidare n mediu slab alcalin pot reduce unii cationi ai metalelor grele (Ag+, Cu2+). n acelai timp oza se oxideaz la acid aldonic. Aceste proprieti reductoare sunt folosite n laborator pentru determinarea calitativ i cantitativ a glucidelor reductoare. Cei mai folosii reactivi pentru recunoaterea glucidelor reductoare sunt: - soluia Fehling (format din sulfat de cupru, tartrat de sodiu i potasiu cu hidroxid de sodiu) nclzit n prezena glucozei, depune oxid cupros roucrmiziu; - soluia Tollens - hidroxid de argint amoniacal - nclzit cu glucoz la cald, depune o oglind de argint metalic (vezi caietul de lucrri practice de biochimie). - Oxidarea energic a ozelor cu acid azotic concentrat duce la acizii dicarboxilici, numii acizi zaharici, n care att gruparea carbonil, ct i hidroxilul alcoolic primar (de la C6 sunt transformate n grupri carboxil). - Oxidarea menajat a ozelor. Prin protejarea gruprii carbonil (cu formare de amid sau eter) se oxideaz numai hidroxilul alcoolic primar de la C6 rezultnd acizi uronici. Avnd o grupare carbonil liber, acizii uronici pot fi considerai acizi-aldehide.Acizii uronici sunt de o deosebit importan pentru organism, avnd un rol hotrtor n procesele de detoxifiere care au loc n ficat, ct i un rol plastic, intrnd n compoziia unor substane (mucopoliozide) din structura esutului conjuctiv.
13

c.) - Aciunea bazelor asupra ozelor Soluiile slab alcaline determin un proces de izomerizare (epimerizare) care const ntr-o transpoziie (rearanjare) la nivelul atomului de carbon carbonilic i a atomului de carbon vecin, fr a fi afectat structura celorlali atomi de carbon. Aceast transpoziie se numete epimerizare, iar ozele care difer ntre ele ca structur numai la atomii de carbon C1 i C2 se numesc oze epimere:
H-C=O H - C - OH HO - C - H H - C - OH H - C - OH CH2OH Glucoza H-C=O HO - C - H HO - C - H H - C - OH H - C - OH CH2OH Manoza CH2OH C=O HO - C - H H - C - OH H - C - OH CH2OH Fructoza

Acest proces are loc i n organism la nivelul ficatului sub aciunea enzimelor specifice numite epimeraze. Tem de lucru: Exemplificai o aldohexoz epimer cu fructoza i manoza 1.4.4.2. Reacii date de hidroxilul glicozidic. Glicozide. Hidroxilul glicozidic al ozelor reacioneaz uor cu alcooli, fenoli, amine, etc., cu formare de compui numii glicozide (glicozizi) sau heterozide. Glucoza, tratat la cald i n prezen de HCl, cu alcool metilic, formeaz i metilglucozide;
CH2OH O H H H OH O - CH3 HO H H OH alfa - Metilglicozid CH2OH O O - CH 3 H OH H H HO OH H H beta - Metilglucozid

CH3OH

Glucoza

CH3OH

1.4.4.3. Reacii datorate gruprii alcool a). Reaciile de esterificare Gruprile alcool din molecula ozelor pot fi esterificate att cu acizii anorganici, ct i cu cei organici. Dintre esterii anorganici, o importan deosebit pentru organism o reprezint esterii fosforici ai ozelor, apoi cei sulfurici ntlnii n mucopoliglucide i n unele lipide complexe (sulfatide).
H - C =O H - C - OH CH 2OH O

HO - P - OH OH

H - C =O H - C - OH CH 2 - O - P - H 2O

OH O OH

Aldehida glicerica

Aldehida glicerica - 3 - fosfat

Esterii fosforici ai glucozei i fructozei ndeplinesc un rol esenial ntr-o serie de procese metabolice de mare importan pentru organism, cum ar fi glicoliza, glicogenoliza, etc.
14

Tem de lucru: Scrieti ecuaia reaciei chimice de obinere a esterilor 1 i 6 fosforici ai glucozei i fructozei b). Deshidratarea ozelor n mediu puternic acid i la cald, ozele se deshidrateaz i se transform n cazul pentozelor n furfural, iar n cazul hexozelor n hidroximetil - furfural.
H H HO - C - C - OH H2SO4 conc. H-C C-H - 3H O 2 H OH OH C = O H Aldopentoza HC HC CH CH - C = O H

O Furfural

Furfuralul i derivaii si se condenseaz cu diferii fenoli i amine ciclice formnd compui colorai, care servesc la diferenierea hexozelor de pentoze i a aldozelor de cetoze.
Tem de lucru: Scriei reacia de deshidratare a unei aldohexoze

1.4.5 Reprezentani mai importani ai ozelor Cele mai importante oze pentru organismul animal sunt triozele, pentozele i hexozele, ntlnite n general sub form de esteri fosforici. Trioze -n aceast grup intr dou trioze; aldehida gliceric i dihidroxiacetona, intermediari n metabolismul glucidelor, unde apar sub form de esteri fosforici. Tetroze-n natur tetrozele - aldotetroze i cetotetroze - nu se gsesc n stare liber, ci rezult prin degradarea glucidelor n special a pentozelor. Cele mai ntlnite tetroze sunt treoza i eritroza, aldotetroze din seria D.
H-C=O HO - C - H H - C - OH CH2OH D ( + ) Treoza H-C=O H - C - OH H - C - OH CH2OH D ( + ) Eritroza

Pentozele-sunt foarte rspndite n natur. Unele pentoze se ntlnesc n structura acizilor nucleici, iar altele n procesul de fotosintez. Riboza are rol fiziologic, fiind o component a acizilor ribonucleici, a unor enzime i vitamine. Deoxiriboza (2-dezoxi- D- riboza) este o aldopentoz component a acizilor dezoxiribonucleici.

15

H-C=O H - C - OH H - C - OH H - C - OH CH2OH D ( - ) Riboza

H-C=O CH2 H - C - OH H - C - OH CH2OH Dezoxiriboza

H-C=O H - C - OH HO - C - H H - C - OH CH2OH D (+)Xiloza

H - C =O HO - C - H H - C - OH H - C - OH CH2OH D ( - ) Arabinoza

CH2OH C=O H - C - OH H - C - OH CH2OH D - Ribuloza

Hexozele sunt substane incolore, cristalizate, cu gust dulce, solubile n ap.: D (+) Glucoza (dextroza) este cea mai rspndit glucid avnd rol fiziologic important. I se mai spune i zahr de struguri i zahr de amidon. Glucoza reprezint o surs important de energie avnd o mare putere caloric, de aceea este socotit indispensabil organismului animal. n stare liber se afl n unele esuturi i organe, iar n regnul vegetal, n toate fructele coapte, struguri, flori, miere, alturi de D-fructoz i zaharoz. Mierea de albine este un amestec echimolecular de D(+)glucoz i D(-)fructoz. Combinat, glucoza se afl n glucide (maltoz, lactoz, zaharoz, celobioza), n numeroase glicozide i n poliglucide (amidon, glicogen i celuloz). Din combinaiile sale, glucoza rezult prin hidroliz cu acizi sau pe cale enzimatic.n snge, concentraia ei fiziologic variaz ntre 0,8 - 1,2 g%. n cazuri patologice, ea apare n urin (diabet). D (+) Manoza este epimer cu glucoza fiind idendificat n albuul de ou de gin, n bacilul tuberculozei, n unele complexe proteice din serul sangvin, n lapte i n structura unor poliglucide bacteriene. Manoza este solubil n ap, optic activ i prezint fenomenul de mutarotaie. D (+) Galactoza este una din cele mai rspndite glucide din regnul vegetal, n regnul animal se gsete n diglucidul lactoza, n lipide complexe galactocerebrozide, n gangliozide i glicoproteine. D (+) galactoza este dup riboz, dezoxiriboz i glucoz, cel mai rspndit monozaharid din regnul animal. D(-) Fructoza (levuloza) sau zahr de fructe face parte din cetohexozele cele mai rspndite. n stare liber se gsete n fructele dulci, roii coapte, mierea de albine, n legume. Condensat fructoza se gsete n oligoglucide (zaharoza, rafinoza i geniobioza) i n poliglucide (fructani i levani). Fructoza este cea mai dulce dintre oze. Este o cetoz cu activitate optic levogir i prezint fenomenul de mutarotaie avnd ()20D = - 930. n produsele naturale apare sub form furanozic. n celulele animale se ntlnesc esterii fosforici ai fructozei ca intermediari n degradarea anaerob a glucozei.

16

H-C=O H - C - OH HO - C - H HO - C - H H - C - OH CH2OH D (+) Galactoza

H-C=O HO - C - H HO - C - H H - C - OH H - C - OH CH2OH D ( + ) Manoza

CH2OH C=O HO - C - H H - C - OH H - C - OH CH2OH D ( - ) Fructoza

CH2OH C=O H - C - OH HO - C - H H - C - OH CH2OH D (-) Sorboza

1.5. OLIGOGLUCIDE Oligoglucide sunt cele mai simple hologlucide care conin n molecul 2-6 resturi de oze (oligo = puin).Unirea moleculelor de oze se face prin reacii de eterificare ntre gruprile hidroxil. Se formeaz astfel, diglucide, triglucide etc. Eliminarea moleculei de ap ntre ozele care se unesc se face n dou feluri: a). dac molecula de ap se elimin ntre hidroxilul glicozidic al unei oze i hidroxilul alcoolic al celeilalte oze, rezult un diglucid reductor care are un hidroxil glicozidic liber, capabil s se oxideze. b). dac molecula de ap se elimin ntre ambii hidroxili glicozidici ai ozelor care reacioneaz, rezult un diglucid nereductor, neavnd nici un hidroxil glicozidic liber. 1.5.1. Diglucide reductoare Maltoza (zahrul de mal) Maltoza este un diglucid format din dou molecule de glucoz legate monocarbonilic C1 - C4 Maltoza este un - glucopiranozil - 1,4 - glucopiranoz:
H HO CH2OH O H H OH H H OH H O CH2OH O H H OH H OH OH H oxidare H CH2OH O H H H OH H OH H O H CH2OH C - OH H OH H OH COOH

HO

Maltoza

Acid maltobionic

Maltoza reprezint unitatea structural a amidonului i glicogenului, care o elibereaz prin degradare hidrolitic sub aciunea enzimelor numite amilaze. Izomaltoza se gsete alturi de maltoz n structura amidonului i glicogenului: este format din dou molecule de glucoz legate 1,6 - - glicozidic, deci prin legtur monocarbonilic. Tem de lucru: Scriei structura izomaltozei

17

Lactoza (zahrul din lapte) este un diglucid reductor. Se gsete n lapte ntr-o concentraie de 2 - 6% i se formeaz n glanda mamar din glucoz. Lactoza este format dintr-o molecul de - galactoz i una de - glucoz legate 1,4 - - glicozidic:
HO H H CH2OH O OH H H OH O H CH2OH O H H OH H OH OH H HO oxidare H H CH2OH O OH H H OH O H H CH2OH C - OH

OH H COOH H OH

beta - galactopiranozil - 1,4 - alfa - glucopiranoza (Lactoza )

Acid lactobionic

Celobioza este format din dou molecule de - glucopiranoz legate 1,4 - glicozidic i reprezint unitatea structural a celulozei. Celobioza se formeaz ca produs de hidroliz a celulozei, sub aciunea enzimei celulaza. Asupra celobiozei acioneaz enzima celobiaza, scindnd-o n dou molecule de glucoz. Ambele enzime sunt secretate de flora microbian din tubul digestiv al rumegtoarelor.
H HO H HO Celobioza CH2OH O H OH H H H O CH2OH O OH H OH H H H OH

1.5.2. Diglucide nereductoare Zaharoza este un diglucid constituit dintr-o molecul de - glucopiranoz i una de - fructofuranoz, legate C1 - C2 printr-o legtur dicarbonilic. Deci este un - glucopiranozil - - fructofuranozid. Zaharoza este nereductoare i nu prezint mutarotaie, neavnd nici un hidroxil glicozidic liber. Este o substan cristalizat, uor solubil n ap, greu solubil n etanol i ali solveni organici: posed activitate optic dextrogir () = + 66,50.La temperatura de 1830 se topete i se carbonizeaz uor. Prin hidroliz acid sau enzimatic zaharoza formeaz un amestec echimolecular de glucoz cu ( ) + 52,50 i de fructoz cu ( ) = - 930, amestec numit zahr invertit.
H HO H HOCH 2 H H OH O O OH H CH 2OH CH 2OH O H H OH H Zaharoza alfa - Glucopiranozil beta - fructofuranozid

OH

18

Deoarece fructoza din amestec are o rotaie specific mai mare dect glucoza,soluia devine levogir, deci se schimb sensul de rotaie al planului luminii polarizate. Amestecul de zaharoz i zahr invertit este principalul constituient al mierii de albine, creia fructoza imprim gustul dulce pronunat. Sub aciunea enzimelor numite zaharaze ( glucozidaza i fructozidaza) prezente n sucul intestinal la animale, zaharoza este hidrolizat n cele dou componente. 1.6. POLIGLUCIDE (GLICANI) Poliglucidele sunt glucide macromoleculare cu structur liniar sau ramificat, formate prin policondensarea unui mare numr de oze sau derivai ai acestora (aminoglucide, acizi uronici), ntre care se stabilesc legturi glicozidice. Gradul de polimerizare variaz de la zece pn la mii de uniti monoglucidice. La baza structurii poliglucidelor stau unele diglucide reductoare (maltoza, izomaltoza, celobioza) care prin polimerizare formeaz poliglucidul macromolecular respectiv. Prin hidroliza parial sau total a poliglucidelor se elibereaz diglucidele sau ozele corespunztoare. Poliglucidele sau glicanii se clasific n homopoliglucide (homoglicani) i heteropoliglucide (heteroglicani). Homoglicanii elibereaz prin hidroliz un singur tip de oz (sau derivat), iar heteroglicanii elibereaz 2 - 4 tipuri de oze sau derivai ai acestora. 1.6.1. Homopoliglucide (poliglucide omogene) Din grupa poliglucidelor omogene fac parte substane cu o larg rspndire n regnul vegetal i animal, cum ar fi: amidonul, glicogenul, celuloza, chitina, acizii sialici. 1.6.1.1. Amidonul Amidonul este larg rspndit n regnul vegetal ca glucid de rezerv fiind depozitat sub form de granule n tuberculi, semine. n prezena iodului, amidonul d o coloraie albastr care dispare la cald i reapare la rece. Prin hidroliz enzimatic sau acid amidonul se scindeaz treptat n compui ce se pot identifica prin reacii de culoare cu iodul. Schematic, hidroliza amidonului poate fi reprezentat astfel:
Amidon Amilodextrine Eritrodextrine Acrodextrine Maltoza Glucoza

19

Amilodextrinele dau cu iodul o coloraie violet, eritrodextrinele - roiebrun, iar acrodextrinele, maltoza i glucoza nu coloreaz soluia de iod. Degradarea hidrolitic a amidonului reprezint modul de asimilare al acesteia n organism, deoarece amidonul nu poate fi absorbit de mucoasa intestinal dect sub form de glucoz. Structura chimic a amidonului: amidonul nu este o substan unitar, ci este format din dou componente structurale diferite: amiloz i amilopectina . Amiloza este componenta liniar a amidonului i este constituit din 250 2000 resturi de glucoz legate 1-4 glicozidic. Unitatea structural a amilozei este maltoza. Amiloza formeaz n ap cald o dispersie coloidal care se coloreaz n albastru cu iodul.
CH 2OH O H H O H OH H OH CH 2OH O H H O H OH CH 2OH O H H O n H OH CH 2OH O H O

H O

Structura amilozei

Amilopectina (Izoamiloza) este componenta ramificat a amidonului. Macromolecula sa este alctuit din resturi de glucopiranoz legate 1,4 i 1,6 - glicozidic.
CH2OH H O H OH H O H H H OH O CH2OH CH2OH O H H O H H H H H OH H OH O O OH OH H H CH2OH O H OH H H OH O CH2OH H O H OH H H OH O

H O

CH2 CH2OH CH2OH O H O H O H H H H OH H H O OH O O OH H OH H OH H OH

Structura amilopectinei

Amilopectina formeaz cu iodul o coloraie violet rocat, iar n ap cald formeaz un sistem dispers stabil cu vscozitate mare. 1.6.1.2 Glicogenul Glicogenul denumit i amidon animal este un poliglucid de rezerv fiind forma de depozit a glucozei n organismele animale. Se gsete n cantitate mare n ficat i n muchi, iar n urme i n alte organe. n stare pur, glicogenul este o pulbere alb, amorf, care cu apa cald formeaz o dispersie coloidal. Glicogenul d o coloraie roie - brun, n prezena soluiei de iod. Glicogenul are o structur

20

asemntoare cu amilopectina din amidon. Spre deosebire de aceasta, molecula glicogenului prezint ramificaii mai dese i mai scurte, macromolecula sa avnd masa molecular mult mai mare (106 - 107). Glucoza format prin degradarea glicogenului asigur o glicemie constant i reprezint pentru animale o surs important de energie. Excesul de glucoz se depune n ficat sub form de glicogen de rezerv. 1.6.1.3 Celuloza este un poliglucid vegetal, component principal al pereilor celulari ai plantelor, avnd rol de susinere. Masa molecular a celulozei variaz ntre 1,5 . 106 - 6 . 106.Celuloza pur este o substan amorf cu structur fibrilar. Lanurile liniare de celuloz sunt formate dintr-un numr mare de molecule de glucopiranoz legate - 1,4, avnd ca unitate structural diglucidul celobioza. Este deci un - glucan:
H O CH2OH O H OH H H H OH CH2OH O H O H OH H H H OH CH2OH O H O H OH H H CH2OH O H OH H H H OH

H O n

H OH

Structura chimica a celulozei

1.6.2 Heteropoliglucide (heteroglicani) Heteropoliglucidele sunt glucide complexe, de origine vegetal sau animal, alctuite din 2-4 monoglucide diferite sau derivai ai acestora. 1.6.2.1.Acidul hialuronic-este rspndit n nveliul celular, n substanele extracelulare din esutul conjuctiv, n lichidul sinovial. Acidul hialuronic este un polimer liniar, la baza structurii cruia st diglucidul format din acid glucuronic i N - acetilglucozamin legate 1,3 - - glicozidic.
CH 2OH O H OH H O H* O H NH C=O CH 3 H
4

COOH O OH H H* H OH

O H

CH 2OH COOH O O H H O OH H* O 3 OH H NH H OH H C=O n CH 3

Fragment din structura chimica a acidului hialuronic

1.6.2.2 Acizii condroitinsulfurici (condroitinsulfaii)- sunt alctuii din acid glucuronic i N - acetilgalactozamin esterificat cu acid sulfuric la C4, n cazul acidului condroitin - 4 sulfuric. ntre aceste dou componente care alctuiesc diglucidul de baz, condrozina, se stabilesc legturi 1,4 - -glicozidice:

21

OSO3H O H

CH2OH O H H H NH C=O CH3

H O

CH2OH COOH O O HO3SO H H O H OH H H H OH H H NH

O n

C=O CH3

Fragment din structura acidului condroitin - 4 - sulfuric

n cartilagii, acizii condroitinsulfurici se asociaz cu colagenul, contribuind astfel la dezvoltarea structurii fibrilare a acestuia. 1.6.2.3 Heparina este un sulf mucopoliglucid cu rol n prevenirea coagulrii sngelui (anticoagulant). Structura sa chimic are la baz acid glucuronic i glucozamin, legate 1,4 - - glicozidic, prima component fiind sulfonat la C2, iar a doua la gruparea - NH2:
COOH O H H O OH H CH 2OH H O H H H COOH O H CH 2OH O H H H OH O O 2 2 NH - SO 3H O - SO 3H H H

OH O H 2 O - SO 3H H

OH O 2 NH - SO 3H H

Fragment din structura chimica a heparinei

Rezumat CAPITOL 1: GLUCIDE MONOGLUCIDE - aldoze - cetoze OLIGOGLUCIDE - reductoare - nereductoare POLIGLUCIDE - neomogene - omogene

Teste de autoevaluare l. Ozele sunt combinaii: a). Polihidroxipolicarbonilice; b). Polihidroximonocarbonilice; c). Monohidroxipolicarbonilice; d). Polihidroxipolicarboxilice 2. Ozele prezint: a). Izomerie de caten; b). Izomerie geometric; c). Izomerie optic; d). Izomerie cis-trans. 3. Condiia ca o oz s aparin serie D este: a). s fie obligatoriu,o aldoz; b). s fie obligatoriu, dextrogir; c). s fie obligatoriu, anomer alfa; d). s aib configuraia Cx de referin identic cu cea a Cx din D (+) aldehida gliceric.
22

6. Formele i ale fructozei sunt: a). izomeri de poziie; b). forme anomere; c). izomeri geometrici; d). izomeri de caten. 7. Diglucidul numit celobioz este format din: a). -glucoz i -glucoz; a). -glucoz i -glucoz c). -glucoz i -glucoz; d). -glucoz i -fructoz. 8. Zaharoza prezint urmtoarele nsuiri: a). este un poliglucid; b). este un diglucid reductor; c). este un monoglucid; d). este un diglucid nereductor.

4. Fructoza: a). este principalul diglucid din snge; b). intr n constituia maltozei; c). este o cetoheoz; d). aparine serie, sterice L.

9. Prin hidroliz celuloza formeaz; a). -glucoz; b). -fructoz; c) -glucoz; d). maltoz. 5. Maltoza: 10. Indicai o reacie de recunoatere a a). este un diglucid nereductor; amidonului: b). este unitatea repetitiv din celuloz a). cu ionul feric; c). este un monoglucid nereductor; b). cu ionul feros; d). este un produs al hidrolizei digestive c). cu sulfatul de cupru; a amidonului. d). cu soluie de iod. Rspunsuri corecte: lb, 2c, 3d, 4c, 5d, 6b, 7c, 8d, 9 c, 10 d

ntrebri recapitulative 1. Care sunt principalii reprezentani ai mono, oligo i poliglucidelor? 2. Care este structura principalelor mono, oligo i poliglucide? 3. Care sunt proprietile biochimice ale principalelor mono, oligo i poliglucide? Teme 1. S se precizeze pentru glucoz i fructoz: apartenena la seria steric D sau L activitatea optic poziia hidroxilului glicozidic numrul de izomeri optici

2. S se scrie reacia de hidroliz a principalelor diglucide cu precizarea denumirii ozelor rezultate i a sensului de rotaie specific a amestecului de oze format n urma hidrolizei. 3. S se reprezinte schematic reacia de oxidare a principalelor diglucide i poliglucide. 4. S se defineasc ce este un poliglucid i s se fac o paralel ntre structura amidonului i glicogenului, cu evidenierea asemnrilor i deosebirilor structurale, precum i a tipurilor de legturi stabilite. Referate 1. Poliglucide de natur animal 2. Structurile ciclice anomere ale glucozei i fructozei

23

Capitol II LIPIDE

2.1. Definiie, rspndire, rol biochimic i clasificare Lipidele sunt substane organice care conin acizi grai, rspndite n toate celulele vii, avnd un rol metabolic deosebit de important. Lipidele se caracterizeaz prin insolubilitate n mediu apos, i solubilitate n solveni organici(benzen, eter, cloroform, etanol, tetraclorur de carbon), proprietate care le deosebete de glucide i proteine. Lipidele constituie pentru animale o important surs de energie: prin metabolizarea unui gram de lipide se elibereaz 9,3 calorii. Lipidele ndeplinesc i un rol plastic participnd la formarea membranei celulare i contribuind la reglarea permeabilitii celulare, respectiv la vehicularea unor substane prin biomembrane. Datorit acumulrii lor n esutul adipos, lipidele au rol de protecie mecanic i termic, de meninere a izolrii hidrice pentru piele, pr, pene. Dup localizarea i rolul lor n organism, lipidele se subdivid n lipide de constituie (care intr n structura celulei) i lipide de rezerv. n funcie de compoziia chimic elementar lipidele pot fi: - Lipide simple care conin ca elemente carbonul, hidrogenul i oxigenul; - Lipide complexe, care n afar de C, H, O mai conin i P, N, S; 2.2. Constituienii chimici din structura lipidelor n structura lipidelor intr doi constituieni de baz:un acid gras i un alcool. 2.2.1. Acizii grai. Acizii grai care intr n structura lipidelor sunt acizi monocarboxilici cu formula general R COOH i numr par de atomi de carbon, cu catena liniar, ramificat sau ciclic, saturai sau nesaturai. 2.2.1.1 Acizii grai liniari saturai intr n constituia lipidelor animale i vegetale, unde se gsesc n proporii variate.Acizii grai liniari saturai corespund formulei generale: CH3-(CH2)n-COOH n care n " este un numr par( 2 32) Cei mai rspndii acizi grai saturai sunt acizii palmitic i stearic. Lanul de atomi de carbon nu este liniar, ci are o configuraie spaial n zig - zag, din cauza unghiurilor egale de 1110 dintre atomii de carbon.

24

H 3C

CH 2 CH 2

CH 2 CH 2

CH 2 CH 2

CH 2 CH 2

CH 2 CH 2

CH 2 CH 2

CH 2 CH 2 COOH

Reprezentare spatiala a acidului palmitic

2.2.1.2 Acizii grai nesaturai se gsesc n lipide ntr-o proporie mai mare dect cei saturai. Un acid gras nesaturat este notat printr-o relaie care indic numrul atomilor de carbon, numrul dublelor legturi i poziia acestora. Exemple - acidul oleic (18.1 9); - acidul linoleic (18.2 9,12) - acidul linolenic (18.3 9,12,15) Tabelul 2.1. Principalii acizi grai nesaturai Denumirea Nr atomi C/ - cu o dubl legtur Palmitoleic Oleic Linoleic Linolenic 16 CH3-(CH2)5-CH=CH-(CH2)7-COOH 18 CH3-(CH2)7-CH=CH-(CH2)7-COOH - cu dou duble legturi 18 CH3-(CH2)4-CH=CH-CH2-CH=CH-(CH2)7-COOH - cu trei duble legturi 18CH3-CH2-CH=CH-CH2-CH=CH-CH2--CH=CH(CH2)7-COOH - cu patru duble legturi Arahidonic 20 CH3-(CH2)4-(CH=CH-CH2)4-CH2-CH2-COOH 5,8,11,14 9,12,15 9,12 9 9 Formula structural Poz. =leg.

Acizii grai eseniali (A.G.E.) Prin acizi grai eseniali se nelege un grup de acizi grai nesaturai( acizii linoleic, linolenic, arahidonic) care sunt absolut necesari pentru buna dezvoltare a organismului animal i care sunt biosintetizai n cantiti insuficiente de ctre acesta.Acizii grai eseniali intr n structura fosfolipidelor, componente de baz ale oricarei membrane celulare. 2.2.1.3 Proprietile fizico-chimice ale acizilor grai. Acizii grai sunt substane lichide (acizii butiric, caproic i caprilic) sau solide. Punctele de topire ale acizilor grai saturai cresc odat cu creterea masei

25

moleculare. Punctele de fierbere cresc de asemenea odat cu creterea masei moleculare i sunt, n general, foarte ridicate. Solubilitatea n ap scade cu creterea masei moleculare: termenii inferiori sunt solubili n ap, termenii superiori sunt insolubili. Din punctul de vedere al reactivitii chimice, acizii grai se comport asemntor cu acizii organici. Acizii grai sunt acizi foarte slabi, cu att mai slabi cu ct masa molecular este mai mare.
Tem de lucru: Scriei reaciile acizilor grai cu hidroxizii alcalini, cu alcoolii

precum i reaciile de adiie a hidrogenului i a halogenului la acidul oleic i linoleic. 2.2.2 Alcoolii din structura lipidelor n structura lipidelor naturale ntilnim alcooli alifatici cu sau fara azot, alcooli ciclici, mono sau polihidroxilici. 2.2.2.1. Alcoolii alifatici fr azot Glicerolul sau propantriolul este alcoolul trihidroxilic component principal al gliceridelor i al multor lipide complexe:
(alfa) 1. (beta) 2. (alfa) 3. CH2 - OH CH - OH CH2 - OH

2.2.2.2. Alcooli cu azot (aminoalcooli)- intr n structura lipidelor complexe: a)- Colamina (etanolamina) HO-CH2-CH2-NH2 b)- Colina (trimetilcolamina) HO-CH2-CH2-N+(CH3)3 c)- Serina (acid -amino--hidroxipropionic) este un aminoacid hidroxilat avnd o grupare alcoolic primar:HO-CH2-CH(COOH)-NH2 d)- Sfingozina este un aminodiol nesaturat cu 18 atomi de carbon din structura unor lipide complexe, din diferite esuturi animale:
CH3-(CH2)12-CH=CH-CH-CH-CH2-OH OH NH2

2.2.2.3. Alcooli policiclici monohidroxilici.Sterolii Sterolii sunt alcooli policiclici care fac parte din clasa steroidelor i au la baz structura steranului (ciclopentan-perhidro-fenantren).

26

R R' 11 C13 19 14 9 1 2 10 8 3A 5 B 7 4 6
12

R'' D 16
17

18

20

15

Steran (ciclopentanperhidrofenantren)

Colesterolul este cel mai important zoosterol, rspndit n toate esuturile organismului animal, mai ales n creier i nervi, n glanda suprarenal, glbenu de ou, calculi biliari, att n stare liber, ct i esterificat. Colesterolul este un alcool tetraciclic nesaturat cu o dubl legtur ntre C5 C6 i la C3 prezint o grupare hidroxil; de C17 este legat catena lateral format de 8 atomi de carbon. Cu acizii grai formeaz lipide numite colesteride. Colesterolul este important pentru participarea sa - alturi de fosfolipide - la formarea membranei celulare, a tecii mielinice a nervilor,astfel inct influeneaz permeabilitatea celular. Colesterolul are aciune antitoxic i antihemolitic: se combin cu unele substane hemolizante ca lizolecitinele i saponinele cu care formeaz compui insolubili. La nivelul intestinului subire colesterolul particip prin gruparea - OH hidrofil la emulsionarea lipidelor, micornd tensiunea superficial dintre ap i lipide. n organismul animal colesterolul este un precursor pentru numeroi ali steroizi: acizi biliari, hormoni corticosuprarenali i sexuali, vitamine. Bacteriile intestinale reduc colesterolul la coprosterol, care se elimin prin fecale. 2.2.2.4 Acizii biliari Acizii biliari sunt substane nrudite din punct de vedere al structurii chimice cu sterolii, se formeaz n ficat prin metabolizarea colesterolului, iar apoi sub form de sruri, sunt excretai prin bil n intestin. Acizii biliari sunt hidroxi-acizi monocarboxilici cu 24 atomi de carbon i pot fi considerai derivai hidroxilai ai acidului colanic, deosebindu-se ntre ei prin numrul i poziia gruprilor hidroxil.
CH 3
18

21
17 16

CH3

H3C

11

12

13
14

19

9 2 1 10 8 3 5 4 6 7

15

20 22 23

24

CO O H

Acid colanic

27

Principalii reprezentani sunt: acidul colic (acid 3,7,12 trihidroxicolanic), acidul deoxicolic (acid 3,12 dihidroxicolanic) i acidul litocolic (acid 3 hidroxicolanic), prezeni n fierea de om i taurine. Ultimul se gsete mai rar, mai ales n cazuri patologice.n structura acizilor biliari grupele hidroxil au configuraia alfa (trans): Acizii colic i chenodeoxicolic se biosintetizeaz n ficat din colesterol, din care cauz se numesc acizi biliari primari: acizii deoxicolic i litocolic se formeaz din acizii biliari primari sub aciunea microorganismelor din intestinul subire i sunt denumii acizi biliari secundari. Acizii biliari au caracter acid destul de pronunat. n bil, acizii biliari se gsesc combinai amidic cu taurina sau glicocolul, formnd acizi taurocolici, respectiv glicocolici:
R-COOH + H 2N-CH 2-COOH acid colic glicocol - H2 O O R-C-N-CH 2-COOH H acid glicocolic O R-C-N-(CH 2) 2-SO 3H H acid taurocolic

- H2 O

R-COOH + H 2N-(CH 2) 2-SO 3H acid colic taurina

Acidul glicocolic i acidul taurocolic se numesc i acizi biliari conjugai, primul se formeaz n bila de om, cellalt n bila animalelor.Acizii biliari conjugai, spre deosebire de cei neconjugai, sunt solubili n ap. Solubilitatea n ap a srurilor alcaline ale acizilor biliari (spunuri) i a acizilor conjugai confer acestora proprieti tensioactive, adic micoreaz suprafaa de separare dintre ap i lipide, ceea ce face ca unele substane s devin hidrosolubile. Acizii biliari i srurile biliare formeaz emulsii cu lipidele, cu alte cuvinte acioneaz ca ageni emulsionani. Acizii biliari i srurile lor reprezint produi finali catabolici ai metabolismului colesterolului, dar peste 90% din cantitatea secretat zilnic n intestin (20 - 30 g) este iari resorbit i transportat prin vena port la ficat, de unde sunt din nou secretai n bil. Acest proces ciclic se numete ciclul enterohepatic al acizilor biliari i prin el se asigur reutilizarea continu a acestora de ctre organism. 2.3. Lipide simple Lipidele simple sunt componente principale ale lipidelor de rezerv, formate din trei elemente (C,H,O) i care din punctul de vedere al structurii chimice sunt esteri ai acizilor grai cu unii alcooli.
28

Dup natura alcoolului constituient deosebim; gliceride, steride i ceride. 2.3.1. Gliceride (acilgliceroli) Gliceridele sunt esteri ai glicerolului cu diferii acizi grai. Dup cum sunt esterificate una, dou, sau toate gruprile hidroxilice ale glicerolului, rezult: - monogliceride (monoacilgliceroli); - digliceride (diacilgliceroli); - trigliceride (triacilgliceroli; Gliceridele au urmtoarele structuri chimice generale ( R-CO- este radicalul acidului gras denumit "acil"):
CH 2 - O - OC - R CH - OH CH 2 - OH Monoglicerida CH 2 - O - OC - R' CH - O - OC - R" CH 2 - OH Diglicerida CH 2 - O - OC - R CH - O - OC - R' CH 2 - O - OC - R" Triglicerida

Esterificarea glicerolului se poate face cu aceeai acizi grai, cnd se obin di - i trigliceride omogene, sau se poate face cu acizi grai diferii, cnd se obin di - i trigliceride mixte. Grsimile naturale sunt un amestec de mai multe gliceride mixte. Gliceridele pot prezenta izomeri de poziie n funcie de poziia hidroxilului esterificat, iar cele care conin atomi de carbon asimetrici (Cx) prezint izomerie optic. Numrul trigliceridelor este foarte mare din cauza posibilitilor multiple de combinare ale acizilor grai constituieni. Proprieti chimice Hidroliza gliceridelor are loc cu apa n prezena catalizatorilor chimici (acizi, baze) sau a enzimelor numite lipaze, din clasa hidrolazelor. Reacia are loc la nivelul legturilor esterice, care astfel se scindeaz cu eliberare de glicerol i acizi grai. Reacia de hidroliz st la baza obinerii glicerolului, iar acizii grai pui n libertate reprezint o mrime caracteristic, numit indice de aciditate (Ia).
CH 2 - O - OC - R CH - O - OC - R1 CH 2 - O - OC - R2 Triglicerida H2O - RCOOH CH2OH CH - O - OC - R1 CH2 - O - OC - R 2 Diglicerida H2O - R2 - COOH

CH2OH H2O CH - O - OC - R1 - R1 - COOH CH2OH Monoglicerida

CH 2 - OH CH - OH CH2 - OH Glicerol

29

Indicele de aciditate (Ia) este dat de numrul de miligrame de hidroxid de potasiu necesari pentru neutralizarea aciditii libere dintr-un gram de glicerid. Indicile de aciditate este n strns legtur cu gradul de prospeime al unei grsimi. Hidroliza enzimatic a gliceridelor este procesul biochimic de baz care are loc n timpul digestei acestora, datorit cruia lipidele devin asimilabile. Saponificarea gliceridelor se realizeaz sub aciunea bazelor tari (NaOH, KOH) i la cald, cu formarea de glicerol i sruri ale acizilor grai numite spunuri. Reacia are loc astfel:
CH 2 - O - OC - R CH - O - OC - R CH 2 - O - OC - R Triglicerida +3NaOH NNN OH CH 2 - OH CH - OH CH 2 - OH Glicerol

+ 3 R - COONa
Sapun

Indicele de saponificare (Is) reprezint cantitatea n miligrame de hidroxid de potasiu necesar pentru a saponifica 1 g de gliceride. Reacii specifice date de gliceridele nesaturate Hidrogenarea gliceridelor are loc la nivelul dublelor legturi cu transformarea acestora n gliceridele saturate corespunztoare.
CH2 - O - OC - (CH2) 7 - CH = CH - (CH2)7 - CH3 CH - O - OC - (CH2) 7 - CH = CH - (CH2) 7 - CH3 CH2 - O - OC - (CH2) 7 - CH = CH - (CH2) 7 - CH3 Trioleina 3 H2 (Ni) CH2 - O - OC - (CH2)16 - CH3 CH2 - O - OC - (CH2)16 - CH3 CH2 - O - OC - (CH2)16 - CH3 Tristearina

Reacia st la baza fabricrii margarinei din uleiurile vegetale, care apoi este vitaminizat i colorat cu pigmeni naturali sau sintetici Halogenarea gliceridelor nesaturate conduce la formarea de produi saturai halogenai. Cantitatea de iod adiionat este n funcie de numrul legturilor duble i ofer indicaii asupra structurii i gradului de nesaturare al gliceridei. Din acest punct de vedere n laborator se folosete o mrime numit indice de iod (Ii) ce se exprim prin gramele de iod adiionate la 100 g gliceride. Tem de lucru: Scriei ecuaia reaciei chimice de adiie a iodului la triolein cu obinerea hexaiodtristearinei Rncezirea gliceridelor-n prezena oxigenului din aer, a vaporilor de ap i a cldurii sau in prezena unor microorganisme, gliceridele sunt supuse unor transformri chimice cu formarea unor produi de degradare cu miros i gust neplcut, proces cunoscut sub numele de rncezire. Din punct de vedere chimic rncezirea const n reacii de hidroliz i oxidare. Rncezirea este cu att mai accelerat cu ct gliceridele posed un coninut mai ridicat de acizi grai nesaturai.
30

Rncezirea ncepe n prezena vaporilor de ap sau a lipazelor din microorganisme i consta n prima etap ntr-un proces de hidroliz a trigliceridelor cu formarea acizilor grai constituieni i a glicerolului. n urmtoarea etap acizii grai saturai se oxideaz la carbonul beta cu formarea unui beta - cetoacid, care prin decarboxilare d o metilceton cu gust neplcut.
R CH2 CH2 COOH O2 - H2O O O R - CH2 - C - CH2 - COOH - CO R - CH2 - C - CH3 2 beta - cetoacid beta-metilcetona

n aceleai condiii, acizii grai nesaturai se oxideaz la dubla legtur cu formare de peroxizi puin stabili care se descompun astfel:
CHO R-(CH2)n-CH=CH-(CH2)n- COOH

+ O2

R-(CH2)n-CH-CH-(CH2)n-COOH O O

R-(CH2)n-CHO Aldehida

(CH2)n COOH Acid-Aldehida

Procesul de rncezire poate continua cu oxidarea aldehidelor la acizi carboxilici. Procesul de rncezire poate fi ntrerupt sau prevenit prin adugarea unor cantiti mici de substane antioxidante.
R - (CH 2)n - CHO Aldehida

+ 1/2 O2

R - (CH 2)n - COOH Acid carboxilic

Reacii datorate glicerolului Glicerolul rezultat prin hidroliza gliceridelor, la cald i n prezena unui deshidratant, se transform n aldehid acrilic (acroleina):
CH 2 CH2 - OH KHSO 4 HO - C - H H - C - OH - 2 H2O H Glicerol C H - C - OH Enol nestabil
n

CH 2 taut. CH CHO Acroleina

n organismul animal, glicerolul se oxideaz cu formarea celor dou trioze aldehida gliceric i dihidroxiacetona 2.3.2. Steridele: sunt lipide simple formate prin esterificarea sterolilor cu acizi grai superiori. Acizii grai frecvent ntlnii n structura steridelor sunt acizii palmitic, stearic, oleic i linoleic. Steridele sunt substane solide, cristaline, de culoare alb, uor solubile n hidrocarburi, derivai halogenai ai hidrocarburilor, aceton i greu solubile n alcool etilic la rece: cu apa formeaz emulsii. Steridele au urmtoarea structur general:

31

3 CH3-(CH2)n-C-O O Structura chimica a unei steride

2.4. Lipide complexe Din punct de vedere chimic sunt esteri sau amide ale acizilor grai superiori.Lipidele complexe care conin n molecul un rest de acid fosforic se numesc fosfatide sau fosfolipide. Lipidele complexe predomin n organismul animal unde intr n alctuirea lipidelor de constituie din membranele celulare, avnd un rol important n reglarea permeabilitii acestora din urm. Lipidele complexe se mpart n funcie de natura alcoolului (glicerol sau sfingozin) n: - glicerofosfolipide (glicerofosfatide) - sfingolipide 2.4.1. Glicerofosfolipidele (Glicerofosfatide) Glicerofosfolipidele sunt lipide complexe cu fosfor, formate din glicerol esterificat cu cte un acid gras la C1 i C2 i cu acid fosforic la C3. Compuii cu aceast structur se numesc acizi fosfatidici. Acizii grai care intr n structura glicerofosfolipidelor sunt saturai (palmitic, stearic) i nesaturai (oleic, linoleic, arahidonic). Prin esterificarea acidului fosforic din acizii fosfatidici cu o serie de alcooli, rezult diferite glicerofosfolipide: - colinfosfatide - colaminfosfatide - serinfosfatide - acetalfosfatide - inozitolfosfatide a). Acizii fosfatidici sunt cele mai simple glicerofosfolipide, care conin n molecul glicerol, acizi grai i un rest de acid fosforic:
CH2-O-CO-R1 R CO-O-CH 2 O

CH2-O-P-OH OH

32

Radicalul acidului fosfatidic se numete fosfatidil. Acizii grai din structura acizilor fosfatidici sunt saturai i nesaturai cu 16, 18 i 20 atomi de carbon. Acizii fosfatidici se formeaz n organismul animal prin hidroliza enzimatic a glicerofosfolipidelor, fiind totodat i intermediari n biosinteza acestora. Datorit prezenei radicalului fosfat, sunt solubili n ap, avnd caracter acid, formeaz cu bazele sruri de sodiu i potasiu-solubile n ap. b). Colinfosfatide (lecitine). Sunt glicerofosfolipide azotate cu cea mai larg rspndire n organismele animale, ca i n cele vegetale. n celulele animale, lecitinele ndeplinesc un rol structural, participnd la structura membranelor celulare. Lecitinele se formeaz prin esterificarea acidului fosfatidic cu aminoalcoolul numit colin.
CH 2 - O - OC - R 1 R 2 - CO - O - CH O

CH 2 - O - P - O - CH 2 - CH 2 - N(CH 3) 3 OStructura unei lecitine

n careR1 = rest de acid gras saturat (palmitic sau stearic); R2 = rest de acid nesaturat (olelic, linolenic, arahidonic). Avnd dou sarcini electrice diferite, lecitinele au o structur amfionic, (au caracter amfoter), comportndu-se att ca acizi ct i ca baze. c). Colaminfosfatide (cefaline). Se gsesc n toate esuturile animale, alturi de lecitine, dar n cantitate mai mic. Au fost izolate prima dat din creier, din care cauz au fost denumite cefaline.Cefalinele mai sunt rspndite n ficat, rinichi, muchi, glbenu de ou.Cefalinele au structur chimic apropiat de a lecitinelor, cu deosebirea c au colamina n locul colinei.

Tem de lucru: Scriei structura cefalinei i artai asemnrile cu lecitinile

d). Serinfosfatide (serincefaline). Aceste lipide complexe azotate se gsesc n esutul cerebral unde formeaz 50% din totalitatea glicerofosfolipidelor. Structura chimic a serincefalinelor este format din acid fosfatidic esterificat la radicalul fosfat cu gruparea alcoolic a serinei:
CH 2 - O - OC - R 1 O R 2 - CO - O - CH CH 2 - O - P - O - CH 2 - CH - COOH + NH 3 O Serinfosfatida

33

Acizii grai din structura lor sunt acizii stearic i oleic.Serincefalinele dein un rol plastic, participnd la structura membranelor i un rol metabolic funcionnd ca donri de grupri fosfat. 2.4.2. Sfingolipide Sfingolipidele sunt lipide complexe, azotate care conin n molecul aminoalcoolul superior numit sfingozin. La aceste lipide acidul gras se leag de sfingozin printr-o legtur amidic cu formarea celui mai simplu compus al acestei lipide, numit ceramid(N-acilsfingozin):
CH 3 - (CH 2 ) 12 - CH = CH - CH - OH CH - NH - CO - R CH 2 - OH Structura unei ceram ide

Acizii grai din structura sfingolipidelor sunt acizi grai cu 24 atomi de carbon, saturai, nesaturai i hidroxilai (lingoceric, cerebronic, nervonic. Sfingolipidele se mpart n sfingofosfolipidele i sfingozidolipide, d A. Sfingofosfolipidele sunt sfingolipide cu fosfor care conin n molecul o ceramid i fosforilcolin (sau fosforilcolamin) i se numesc sfingomieline. Sfingomielinele predomin n esutul nervos unde particip la formarea tecii mielinice. De asemenea intr n structura membranelor celulare. Structura chimic a sfingomielinei este format din sfingozin, acid gras, acid fosforic i un aminoalcool (colin sau colamin). Sfingozina este legat amidic de molecula de acid gras, iar prin funcia alcool primar de fosforilcolin sau fosforilcolamin.Acizii grai componeni sunt de obicei acizi grai superiori cu 16 - 24 atomi de carbon.
CH3 - (CH2)12 - CH=CH- CH- OH CH- NH- CO- R O CH2 - O- P- O- CH2 - CH2 - N(CH3)3 O
Sfingomielina

B. Sfingozidolipidele Din sfingozidolipide fac parte urmtoarele lipide complexe: cerebrozidele, sulfatidele i gangliozidele.

34

a). Cerebrozidele sunt rspndite n structura membranelor celulare, n esutul nervos, mai ales n creier i mduva spinrii, n ficat, rinichi, splin eritrocite, unde sunt asociate cu lecitinele i alte sfingolipide.
CH3 - (CH2)12 - CH = CH - CH - OH HO CH2 - OH O O H OH H H H HO Galactocerebrozida CH - NH - CO - R CH2

b). Sulfatidele (cerebrosulfatide) se gsesc alturi de cerebrozide n esutul nervos, rinichi, splin, ficat.Sulfatidele au o structur asemntoare cu a cerebrozidelor, cu deosebirea c n molecula hexozei se gsesc resturi de acid sulfuric esterificate la hidroxilii din poziiile 2 sau 3:
CH3 - (CH2)12 - CH = CH - CH - OH H CH2 - OH O O H OH H H H OSO3H Sulfatida CH - NH - OC - R CH2

HO

Rezumat CAPITOL II: LIPIDE Lipide simple -gliceride -steride -ceride Lipide complexe -glicerofosfolipide: -acizi fosfatidici; - colinfosfatide; - colaminfosfatide; - serinfosfatide; - inozitolfosfatide -sfingolipide - sfingofosfolipide - sfingozidolipide

35

Teste de autoevaluare l. Acizii grai eseseniali sunt: a). acidul palmitoleic; b). acidul linoleic; c). acidul nervonic; d). acidul cerebromic. 2. Acizii grai nesaturai cu 18 C sunt: a). acid stearic; b). acid linolenic; c). acid arahidonic; d). acid lignoceric. 3. Gliceridele sunt: a). esteri ai acizilor grai; b). derivai de acid fosfatidic; c). amide ale acizilor grai; d). derivai de acid neuraminic. 4. Ce categorii de lipide nu conin N: a). colinfosfatide; b). serinfosfatide; c). acizi fosfatidici; d). colaminfostatide. 5.Adiioneaz iodul: a). distearopalmitina; b). dipalmitostearina; c). distearooleina d). tripalmitina 6.Glicerofosfatidele: a). sunt derivai de acid fosfatidic; b). conin un rest de acid gras; c). sunt compui macroergici; d). sunt compui liposolubili.

Rspunsuri corecte: 1 b, 2 b, 3 a, 4 c, 5 c, 6 a. Teme / ntrebri de verificare 1. Scriei reaciile ce caracterizeaz transformrile chimice care au loc n cadrul procesului de rncezire a gliceridelor. 2. Hidroliza unei trigliceride a pus n eviden prezena acizilor palmitic, stearic i linolenic. S se indice structura gliceridei i s se aprecieze gradul de consisten a acesteia. 3. S se stabileasc denumirile i structurile chimice ale lipidelor complexe formate din glicerol, acid stearic, acid oleic, acid ortofosforic; 4. S se discute comparativ structura i proprietile chimice ale urmtoarelor TAG: stearo-oleo-palmitina, linoleo-palmito-oleina, arahido-oleo-linoleina. 5. S se discute comparativ structura i proprietile chimice ale principalelor clase de lipide simple i complexe. Referate 1. Lipide simple i lipide complexe - rol i importan pentru organismul animal

36

Capitol III PROTIDE

Protidele reprezint o grup important de substane organice format din aminoacizi i toi compuii care prin hidroliz elibereaz aminoacizi. Conform acestei definiii rezult urmtoarea clasificare general: - aminoacizi Protide : - peptide - proteine. 3.1. AMINOACIZI 3.1.1. Constituie general, nomenclatur,clasificare: Structura general a unui - aminoacid este urmtoarea:

R - CH - COOH NH2
n care R este radicalul hidrocarbonat. Aminoacizii naturali difer ntre ei prin natura radicalului R, care reprezint catena lateral a acestora, spre deosebire de catena principal, HOOC - CH - NH2 care este comun pentru toi aminoacizii. Clasificarea aminoacizilor are n vedere natura radicalului R (aciclic, ciclic), felul i numrul gruprilor funcionale. -Monoaminomonocarboxilici -Aciclici -Monoaminomonocarboxilici hidroxilai -Monoaminomonocarboxilici cu sulf -Monoaminodicarboxilici Aminoacizi -Diaminomonocarboxilici

-Aromatici -Ciclici -Heterociclici

37

3.1.1.1. Aminoacizi aciclici Aminoacizi monoaminomonocarboxilici Aceti aminoacizi au o singur grupare amino i o singur grupare carboxil avnd un caracter chimic neutru. Radicalul R este de natur alifatic nepolar, cu caracter hidrofob ceea ce imprim o solubilitate redus n ap:
H2N - CH2 - COOH Glicocol (Gli) (Acid aminoacetic) CH3 - CH - CH - COOH CH NH2
3

CH3 - CH - COOH NH2 alfa - Alanina (Ala) (Acid alfa - aminoapropionic) CH3 - CH - CH2 - CH - COOH NH2 CH3 Leucina (Leu) (Acid alfa - aminoizocaproic)

Valina (Val) (Acid alfa - aminoizovalerianic)

CH3 - CH2 - CH - CH - COOH CH3 NH2 Izoleucina (Ile) (Acid alfa amino - beta - metilvalerianic)

Aminoacizi monoaminomonocarboxilici hidroxilai Aceti aminoacizi sunt solubili n ap datorit prezenei n molecula lor a gruprii hidroxil cu caracter hidrofil. Din aceast grup fac parte:
CH2 - OH CH - NH2 COOH Serina (Ser) Acid alfa - amino - beta - hidroxipropionic CH3 CH - OH CH - NH2 COOH Treonina (Tre) Acid alfa-amino-beta-hidroxibutiric

Aminoacizi monoaminomonocarboxilici cu sulf-(Tioaminoacizi) Aceti aminoacizi conin sulf n gruprile tiol ( - SH), disulfur (- S - S -) i tiometil (- S - CH3) grefate la carbonii sau din moleculele urmtoare:
CH2 - SH CH - NH 2 COOH Cisteina (Cis) (Acid alfa - amino - beta - tiolpropionic) S - CH3 CH 2 CH2 CH - NH 2 COOH Metionina H2C - S - S H - C - NH 2 COOH CH 2 HC - NH 2 COOH

Cistina (Cis)2

(Acid alfa - amino - gama - metiltiobutiric)

Aminoacizi monoaminodicarboxilici Prezena celei de a doua grupri de carboxil confer acestor aminoacizi un caracter acid pronunat:

38

COOH CH 2 CH-NH 2 COOH Acid aspartic (ASP) (Acid aminosuccinic)

COOH (CH 2) 2 CH - NH 2 COOH Acid glutamic (Glu) (Acid alfa - aminoglutaric)

De la aceti aminoacizi provin aminele lor, asparagina i glutamina, considerate deasemenea aminoacizi:
CO - NH2 CH2 CH - NH2 COOH Asparagina (Asn) CO - NH2 (CH2)2 CH - NH2 COOH Glutamina (Gln)

Aminoacizi diaminomonocarboxilici Aceti aminoacizi au o bazicitate crescut datorit prezenei celei de a doua grupri amino. Dintre acetea fac parte:
CH2 - NH2 CH2 (CH2)2 CH - NH2 COOH Lisina (Lis) Acid alfa epsilon - diaminocaproic) CH2 - NH2 CH2 - OH (CH2)2 CH - NH2 COOH Hidroxilisina (Lis - OH) NH - C - NH2 CH2 NH (CH2)2 CH - NH2 COOH Arginina(Arg) Acid alfa - amino - gama - guanidinovalerianic)

3.1.1.2. Aminoacizi ciclici Aminoacizii aromatici au ca reprezentani:

C 6H 5 - C H 2 - C H - C O O H NH 2 F e n ila la n in a (P h e ) H O - C 6H 4 - C H 2 - C H - C O O H NH 2 T iroz ina (T ir) (P - h id ro xife n ilala n in a )

Aminoacizi heterociclici Catena lateral a acestor aminoacizi este format dintr-un heterociclu cu azot (pirol, indol, imidazol):
H2C H2C H2 C CH - COOH HO - HC HN H2 C CH - COOH

N H

Prolina (Pro) (Acid alfa - pirolidincarboxilic)

N H Hidroxiprolina (Pro - OH)

39

HC

CH - CH2 - CH - COOH NH2 N NH CH Histidina (His)

H C C HC HC C H C N H

CH

CH - CH2 - CH - COOH NH2

(Acid - alfa - amino - beta - imidazolilpropionic)

Triptofan (Trp) Acid alfa - amino - beta - indolilpropionic)

3.1.2. Proprietile fizico-chimice ale aminoacizilor Stereoizomeria aminoacizilor Aminoacizii sunt substane optic active datorit prezenei n molecula lor a atomului de carbon asimetric alfa.Excepie face glicocolul care este optic inactiv. Structura amfionic Aminoacizii sunt substane cu caracter amfoter conferit de prezena celor dou funciuni chimice: funciunea carboxil cu caracter acid i funciunea amino cu caracter bazic. n soluie aminoacizii disociaz formnd amfiioni sau ioni bipolari:
R - CH - NH2 COOH Aminoacid R - CH - NH+ 3 COO Amfiion

Aminoacizii se comport n soluie, n funcie de pH-ul mediului, fie ca un acid, fie ca o baz; n mediu acid se comport ca baze, iar n mediu bazic ca acizi, n ambele cazuri rezultnd sruri:

+ R- CH- NH3 COO

R - CH- NH3 COO

+ H+ +OH

R - CH - NH+ 3 COOH
cation

HO R - CH - NH2 + 2 _ COO anion

n mediu acid aminoacizii primesc protoni, iar n mediu bazic cedeaz, n ambele situaii pH-ul soluiei nu se schimb n mod apreciabil, proprietate folosit la utilizarea aminoacizilor n prepararea soluiilor tampon. 3.1.3. Proprieti chimice ale aminoacizilor Aminoacizii (aa) prezint reacii chimice pentru gruprile funcionale COOH i - NH2, ct i reacii specifice pentru R. Proprieti chimice datorit funciunii carboxil Gruparea carboxil (-COOH) are tendin pronunat de a disocia cu transformarea aminoacidului ntr-un anion:

40

R - CH - COOH + HOH NH2

R - CH - COO + + H3O NH2

Reacia de esterificare-esterii aminoacizilor se formeaz la tratarea acestora cu diferii alcooli n mediu acid (HCl):
R - CH - NH2 COOH - H2O R - CH - NH2 CO - O - R' Ester

+ HO - R'
Alcool

Formarea amidelor: aminoacizii reacioneaz cu amoniacul cu formare de amide:

R - CH - NH2 COOH + NH3 aminoacid R - CH - NH2 CO - NH2 amida + H2O

Decarboxilarea aminoacizilor: aminoacizii formeaz prin decarboxilare amine primare:

R - CH - C O O H NH 2 a minoacid R - CH 2 - NH 2 a mina + CO2

n organismele vii decarboxilarea este un proces enzimatic care decurge sub aciunea decarboxilazelor cu formare de amine biogene, substane cu puternic activitate fiziologic. Dintre aminele biogene menionm tiramina, histamina, triptamina obinute prin decarboxilarea tirozinei, histidinei i respectiv triptofanului.
Tem de lucru

Scriei ecuaiile reaciilor chimice de formare a aminelor biogene prin decarboxilarea tirozinei, histidinei, triptofanului, acidului aspartic, acidului glutamic, cisteinei, ornitinei i lizinei Proprieti chimice ale aminoacizilor datorate gruprii amin Acilarea aminoacizilor:-gruparea amino poate fi acilat cu formare de N acilderivai.
HOOC - CH 2 - NH 2 + ClOC - C 6H 5 (NaOH) Glicocol Clorura de benzoil HOOC - CH 2 - NH - OC - C 6H 5 Benzoilglicocol (acid hipuric)

41

Alchilarea aminoacizilor-ntr-un mediu bazic i n prezena halogenurilor de metil, aminoacizii se alchileaz cu formarea derivailor cuaternari, complet metilai la azot, numii betaine:
OOC-CH -NH 3 + 3 CH 3I + 3 NaOH 2 glicocol betaina glicocolului

-OOC-CH 2-N(CH 3)

+3NaI +3 H O 2

Dezaminarea cu acid azotos-aminoacizii reacioneaz cu acidul azotos n soluie acid cu formare de alfa- hidroxiacizi i degajare de azot:
CH3 - CH - NH2 + O = N - OH COOH alfa - alanina CH3 - CH - COOH + N2 + H2O OH Acid lactic

Carboxilarea aminoacizilor-aminoacizii pot reaciona la gruparea amino cu CO2 cu formarea unor compui carbamino (- NH - COO-):

R - CH - NH 2 HO +CO 2 COOH

R - CH - NH - COO+ H2O COOH

Prin aceast reacie dioxidul de carbon se fixeaz pe gruprile amino libere din molecula hemoglobinei i n acest fel poate fi transportat de la esuturi la plmni. Reacia cu ninhidrina-aminoacizii reacioneaz cu ninhidrina la cald cu formarea unui compus colorat albastru-violet numit purpura lui Ruhemann. Reaciile aminoacizilor date de ambele grupri chimice Formarea legturilor peptidice Aminoacizii pot reaciona intermolecular prin intermediul celor dou grupri cu caractere chimice opuse cu formarea unor amide substituiete la azot numite peptide
H2N - CH - COOH + H2N - CH - COOH + H2N - CH - COOH R" R' R H2N - CH - CO - NH - CH - CO - NH - CH - COOH + 2 H2 O R' R R"

Legtura chimic - CO - NH - se numete legtur peptidic. Formarea legturilor chelatice. Reacia biuretului. n mediu alcalin aminoacizii reacioneaz cu srurile unor metale grele (Cu,Co,Ni) cu formarea unor combinaii complexe interne (chelai) colorate i greu solubile, care servesc la identificarea i dozarea acestora. Srurile de cupru formeaz cu aminoacizii un complex de culoare roz-violaceu, n structura cruia

42

metalul este legat prin dou legturi covalente i dou coordinative de dou molecule de aminoacid.Reacia este dat i de unele peptide.
CO - O Cu R - CH - NH2 O - CO H2N - CH - R

3.2. P E P T I D E 3.2.1. Definiie i structur Peptidele sunt amide care se formeaz prin condensarea a dou sau mai multe molecule de aminoacizi, prin eliminare de ap. Aminoacizii se unesc prin legturi peptidice - CO - NH - formate ntre gruparea carboxilic a unui aminoacid i gruparea - aminic de la aminoacidul urmtor:
H2N - CH - COOH + H2N - CH - COOH + H2N - CH - COOH R R' R" - H2O

H2N - CH - CO - NH - CH - CO - NH - CH - COOH R R' R" Tripeptida

3.2.2. Clasificarea peptidelor n funcie de numrul de aminoacizi constituieni peptidele se submpart n oligopeptide (2 - 10 aa) i polipeptide (>10 aa). n funcie de provenien peptidele pot fi vegetale, animale, bacteriene. 3.2.3. Proprietile peptidelor Peptidele sunt compui intermediari ntre aminoacizi i proteine i din acest considerent vor prezenta proprieti intermediare ntre cele dou grupe de substane. Proprietile chimice-sunt determinate de prezena gruprilor carboxil i amino libere. Ca i aminoacizii, peptidele au caracter amfoter, deci formeaz sruri solubile cu acizii i bazele. Cu srurile de cupru n mediu alcalin, oligopeptidele dau o coloraie albastru-violet, iar polipeptidele -violet intens (reacia biuretului), reacia servete la separarea oligo - de polipeptide. 3.2.4. Peptide animale Peptidele animale, n ceea mai mare parte, sunt substane active din punct de vedere fiziologic i biochimic. Tripeptide animale. Glutationul Glutationul este o tripeptid existent n toate celulele animale care este format din urmtorii aminoacizi: acid glutamic, cistein i glicocol:

43

CH CH H 2N - C H

CO - NH - CH - CO - NH - CH CH 2 2
2

- COOH

SH

G lu t a tio n

G lu ta m il - C is t e in il - G lic o c o l

COOH

Glutationul se gsete rspndit n toate celulele animale, dar n cantitate mai mare n ficat, splin. Glutationul particip la procesele de oxidoreducere din organism, fiind transportor i donator de hidrogen.
2 G - SH Glutation redus -2H +2H G-S-S-G Glutation oxidat

Tem de lucru: Referitor la structura glutationului s se analizeze caracterul chimic al celor 3 aa constituieni, grupele din care fac parte, precum i tipurile de legturi formate. Cum explicai participarea glutationului la procesele redox din organism? 3.3. P R O T E I N E 3.3.1.Caracterizare general Proteinele se ntlnesc n toate celulele vii, fiind constituieni ai protoplasmei i a nucleului celular. Din acest motiv, proteinele reprezint principalii purttori ai vieii,- n aceast calitate ele asigur meninerea structurii morfologice a celulelor, precum i manifestarea funciunilor vitale ale acestora. 3.3.2. Compoziia elementar a proteinelor Cu toat varietatea i complexitatea lor structural i funcional, proteinele sunt constituite dintr-un numr redus de elemente, n anumite proporii. n mod normal proteinele conin cel puin patru elemente: C, H, O, N, la care se mai poate aduga S, P, unele metale. Cunoaterea coninutului mediu (16%) de azot total din diferite produse biologice, ofer posibilitatea determinrii cantitii de protein: Proteina brut% = N% x 6,25 3.3.3. Clasificarea proteinelor Proteinele se clasific dup structur n dou mari grupe: - Proteine simple sau holoproteine care prin hidroliz pun n libertate numai aminoacizi; - Proteine conjugate (protide sau heteroproteine) care prin hidroliz pun n libertate pe lng aminoacizi i compui cu structur neproteic, care constituie componenta prostetic a heteroproteinei. Componenta neproteic poate fi de natur chimic diferit: glucide, lipide, acid fosforic, acizi nucleici, metale.

44

3.3.4. Structura proteinelor Proteinele sunt biopolimeri macromoleculari cu un nalt grad de organizare structural. Conformaia complex a moleculei de protein se definete prin 4 nivele variate de organizare: structura primar, structura secundar, structura teriar, structura cuaternar. 3.3.4.1. Structura primar a proteinelor este structura chimic de baz a moleculelor acestora i se refer la numrul, natura i secvena aminoacizilor n lanul polipeptidic. Secvena aminoacizilor n lanul polipeptidic se realizeaz prin intermediul legturilor peptidice formate ntre gruprile - carboxilice i aminice ale aminoacizilor nvecinai:

R1 - HN - CH

C O

H N

O CH R2 C N H

R3 CH C O

H N CH - CO R4

Fragment de proteina

Fragmentul - CO - NH - se numete legtur peptidic i are unele proprieti specifice. Datorit unor efecte de conjugare ntre atomii legturii peptidice apare legtura dubl C = N - cu toi cei 4 atomi coplanari, atomul de O i cel de H al grupei amino situndu-se, de regul, n poziia trans, mai stabil din punct de vedere energetic.
H C O : .. N .. C _ : O : .. H N +

n alctuirea unei proteine aminoacizii pot participa de mai multe ori, fr a exista o periodicitate n succesiunea lor. n organismele vii proteinele biosintetizate se difereniaz prin lungimea catenei i prin anumite secvene de aminoacizi. Din aceast cauz proteinele naturale se caracterizeaz printr-o nalt specificitate exprimat prin funcii biochimice diferite i care este dirijat de acizii nucleici participani la biosintez. Structura primar determin configuraia specific fiecrei proteine. 3.3.4.2. Structura secundar Se refer la aranjamentul spaial al catenei polipeptidice i la legturile chimice care o stabilizeaz. Cu ajutorul difraciei razelor X de ctre cristale de protein pur, Pauling i Corey au constatat c macromolecula proteic nu are o
45

form extins, ci lanurile polipeptidice pot fi rsucite n spiral ( - helix) sau dispuse n "foaie pliat". Structura secundar este stabilizat n spaiu prin legturi de H care se formeaz intra - i intercatenar ntre gruprile =C=O i -NH - din dou legturi peptidice diferite. Legturile de H sunt relativ slabe, dar fiind numeroase i repartizate uniform de-a lungul catenelor polipeptidice, asigur stabilitatea acestei structuri. Modeloul helicoidal ( - helix) rezult prin rsucirea catenei polipeptidice n jurul unui cilindru imaginar, lund forma unui helix (elice), orientat spre dreapta din cauza configuraie a aminoacizilor i stabil din punct de vedere energetic.

Pasul elicei cuprinde 3,6 resturi de aminoacizi i fiecare rest contribuie la avansarea elicei pe vertical cu 1,4 A0, ceea ce determin o nlime a pasului elicei de 5,4 A0. Stabilitatea helixului este dat de legturile de H intracaternare ntre gruparea = C = O a unui aminoacid i o grupare - NH - de la al 4-lea aminoacid care-i urmeaz n secven pe spiral. Legturile de H sunt dispuse aproape paralel cu axa - helixului, iar radicalii R ai aminoacizilor componeni sunt proiectai radial spre exterior. Modelul n planuri pliate este caracteristic proteinelor fibrilare de felul keratinei i fibroinei. Astfel pentru - keratin este caracteristic modelul paralel al planurilor pliate n care catenele polipeptidice sunt aranjate paralel i unite prin legturi de H, iar pentru fibroin este specific modelul antiparalel cu catenele orientate n sens opus antiparalel, iar radicalii R orientai ntr-o singur parte:
R C H N H R C H N H O C H C R O C H C R (a) H N R C C H O H C R O C N H R C H (b) C O H N H N C O R C H R C H N H O C H C R N C O

Structurile secundare ale - keratinei (a) i fibroinei (b)

46

Modelul tip colagen este o structur secundar de tip special atribuit colagenului, protein fibrilar din esuturile conjuctive, tendoane, cartilagii, oase, bogat n glicocol, prolin, hidroxiprolin. Prezena aminoacizilor - Pro i Pro (OH) 25% fac imposibil formarea legturilor de H i implicit existena structurilor helicoidale sau n planuri pliate.

Structura secundara"triplu helix" Structura secundar a colagenului este un triplu helix (superhelix) format din 3 catene polipeptidice elicoidale orientate spre stnga i rsucite una n jurul celeilalte i toate n jurul unui ax comun asemntor unui cablu format din 3 srme. ntre cele 3 catene se stabilesc legturi de H intermoleculare ntre gruprile - OH din hidroxiprolin i glicocol.Aceast structur ofer rigiditate deosebit moleculei de colagen. 3.3.4.3. Structura teriar reprezint un nivel superior de organizare a macromoleculei proteice i se datorete interaciunilor dintre radicalii R aparinnd catenelor polipeptidice mai lungi care posed o structur secundar proprie. Stabilitatea structurii teriare este dat de forele de atracie dintre catenele laterale ale lanurilor peptidice la care iau parte legaturi de hidrogen, legturi Van der Waals, legturi ionice, etc. Aceste tipuri de legturi chimice sunt mai slabe dect legturile chimice obinuite. Aceast structur i pierde stabilitatea sub aciunea factorilor fizici sau chimici, prin desfacerea acestor legturi, ceea ce duce la denaturarea proteinelor. Datorit acestor interaciuni catenele polipeptidice se repliaz, nfurnduse n regiunile respective, astfel c n ansamblu molecula prezin o organizare spaial complex format att din poriuni helicoidale ordonate, rigide, ct i din nfurri neelicoidale, flexibile. Structura teriar caracterizeaz proteinele globulare, ca de exemplu mioglobina, format din 153 de aminoacizi i la care poriunea helicoidal reprezint 70% din lungimea sa.

47

Structura teriar a mioglobinei 3.3.4.4. Structura cuaternar este caracteristic agregatelor moleculare formate prin asocierea mai multor structuri teriare ale proteinelor globulare. Stabilizarea acestora se face prin legturi de H sau electrostatice formate intermolecular, unind catene sau - helixuri n cadrul unor subuniti. Un exemplu de structur cuaternar tipic este cea a hemoglobinei, cromoprotein ce transport O2 n organismul animal. Hemoglobina este format din 4 catene polipeptidice, unite fiecare cu cte o molecul de hem.Cele patru catene polipetidice sunt identice dou cte dou, catenele alfa fiind formate din 2 x 141 aminoacizi iar catenele beta din 2 x 146 aminoacizi, cele identice alctuind o subunitate - n total 2 subuniti.

Structura cuaternara a hemoglobinei 3.3.5. Forma moleculelor proteice Configuraia spaial a moleculelor proteice, respectiv structura secundar i teriar, determin forma i solubilitatea proteinelor. Din acest punct de vedere se cunosc dou tipuri de proteine: fibrilare i globulare. Proteinele fibrilare au structur filiform format din catene polipeptidice lungi i stabilizat prin legturi de H intercaternare. Structura fibrilar se caracterizeaz prin rezisten mecanic i insolubilitate n ap. Dintre proteinele fibrilare fac parte keratinele, fibroina, colagenul, care confer elasticitate, protecie i rezisten mecanic esuturilor. Proteinele globulare au moleculele ovale cu o structur teriar mul ncolcit; sunt solubile n ap datorit gruprilor polare situate n exteriorul moleculei (cele hidrofobe sunt n exterior). Dintre proteinele globulare fac parte:

48

albuminele, globulinele, protaminele, histonele. n organism aceste proteine ndeplinesc funcii multiple i importante, printre care cea de enzime. Exist i numeroase forme intermediare cu caracter dublu, att de proteine globulare, ct i de proteine fibrilare, de exemplu, fibrinogenul, miozina etc. 3.3.6. Reprezentani ai proteinelor animale 3.3.6.1 Proteine globulare Albuminele sunt proteine rspndite n citoplasm i n diferite lichide biologice i prezint solubilitate n ap i n soluii diluate de electrolii. Dintre albuminele animale fac parte: ovalbuminele, lactalbuminele, mioalbuminele, serumalbuminele. Albuminele reprezint rezerva de proteine pentru organism, servesc la reglarea presiunii osmotice a sngelui i transportul unor substane (acizi grai, hormoni, medicamente). Globulinele sunt proteine globulare rspndite n esutul muscular (mioglobine), n lapte (lactoglobuline), n ou (ovoglobuline), n ser (serumglobuline). Globulinele au mas molecular mare, coaguleaz mai greu i au caracter acid pronunat datorit prezenei n cantitate mare a aminoacizilor dicarboxilici. Globulinele au un rol activ n transportul diferitelor substane din organism. Protaminele sunt proteine animale cu mas molecular mic i caracter bazic datorit aminoacizilor diaminici care predomin. Nu conin aminoacizi cu S, nu coaguleaz, iar pepsina nu le hidrolizeaz. Histonele sunt proteine animale puin mai complexe dect protaminele Histonele sunt solubile n H2SO4 diluat i pot fi hidrolizate de pepsin. La nclzire coaguleaz. Se gsesc libere n leucocite sau asociate cu acizii nucleici n nucleul unor celule glandulare, eritrocite. 3.3.6.2. Proteine fibrilare (Scleroproteine) Aceste proteine sunt specifice regnului animal i se gsesc rspndite n esuturile conjunctiv, de susinere, protecie i epidermice cu rol de susinere, protecie i rezisten mecanic. Scleroproteinele sunt insolubile n ap, nu se denatureaz i au un coninut ridicat de glicocol i cistein. Principalii reprezentani sunt: Keratinele sunt proteine fibrilare din pr, epiderm, pene, unghii, copite, coarne, cu un coninut mare de S,- datorit cistinei care predomin. Enzimele proteolitice nu le hidrolizeaz. Keratinele sunt rezistente, elastice, insolubile n ap.
49

Colagenele sunt proteine fibrilare raspndite n esuturile conjunctive, tendoane, cartilagii, oase, piele i reprezint 50% din proteinele animale. Au un coninut ridicat de glicocol, hidroxiprolin, hidroxilizin. Colagenele sunt insolubile n ap i rezistente la aciunea enzimelor proteolitice. Prin fierbere cu apa se transform n gelatin, solubil n ap. Elastinele sunt proteinele fibrilare care se gsesc n esuturile elastice din artere i tendoane. Se aseaman cu colagenele cu deosebirea c nu pot fi gelificate. Nu pot hidroliza sub aciunea enzimelor proteolitice. Dintre aminoacizii componeni predomin leucina, glicocolul, prolina. Miozina este proteina contractil din esutul muscular cu o structur dubl: o poriune filiform alctuit din trei catene helicoidale rsucite i o poriune globular la capetele catenelor. Datorit acestei structuri mixte miozina va avea un dublu caracter, att de protein globular, ct i fibrilar. Fibrinogenul este proteina fibrilar din plasma sanguin cu rol n procesul de coagulare a sngelui, proces ce const n transformarea ireversibil a fibrinogenului n fibrin, n prezena trombinei i a ionilor de calciu. 3.3.6.3. PROTEINE CONJUGATE (HETEROPROTEINE) Proteinele conjugate sunt combinaii ntre o protein i o component neproteic numit grupare prostetic. Heteroproteinele sunt deosebit de importante pentru organismul animal i se clasific n funcie de natura gruprii prostetice n mai multe categorii. Fosfoproteinele: sunt proteine conjugate care au ca grupare prostetic acid ortofosforic H3PO4 legat esteric de gruprile alcoolice - OH ale serinei sau treoninei, aminoacizi hidroxilai din molecula proteinei respective (albumin, globulin). Reprezentai ai fosfoproteinelor: - Cazeinele sunt fosfoproteine din lapte cu un coninut de 0,9% fosfor i care reprezint 80% dint totalul proteinelor din lapte. coaguleaz n mediu acid i n prezena Ca2+, proces care are loc i n stomac, unde totodat sunt parial hidrolizate de ctre enzimele proteolitice (pepsina i renina). - Ovovitelinele i fosfovitelinele sunt fosfoproteine din glbenuul de ou. Aceste fosfoproteine sunt asociate cu lecitinele i asigur rezerva de fosfor i aminoacizi necesar pentru dezvoltarea embrionului. Metalproteine: la aceste heteroproteine gruparea prostetic este un metal (Cu,Fe,Zn,Co,Mn,Mg) legat coordinativ de diferite grupri chimice donatoare de electroni ale proteinei (liganzi), complexul n ansamblu numindu-se chelat.
50

Metalul din structura heteroproteinelor confer acestora proprieti funcionale deosebite, mai ales enzimatice.Dintre metalproteinele cele mai importante pentru organismul animal sunt feroproteinele: feritina, siderofilina, transferina, hemoglobina, mioglobina. cuproproteine: hemocianinele, ceruloplasminele Glicoproteinele au gruparea prostetic format dintr-o component glucidic. Rolul biologic al glicoproteinelor const n primul rnd n participarea acestora la structura membranei celulare pe care o apr de atacul enzimelor sau a altor compui chimici. Glicoproteinele din snge determin specificitatea grupei sanguine sau pot interveni ca inhibitori n procesele de aglutinare a hematiilor. Lipoproteinele conin ca grupare prostetic o substan lipidic: fosfatide, sfingomieline, trigliceride, colesterol, steride. Lipoproteinele din limf i ser se difereniaz dup densitatea i respectiv, dup proporiile componentelor lipidice. Cromoproteinele au componenta prostetic format dintr-o substan colorat (pigment). Cele mai multe cromoproteine cuprind n molecul i un atom de metal, deci sunt i metaloproteine. n funcie de rolul lor i de structura componentei proteice, cromoproteinele se clasific n cromoproteine porfirinice i cromoproteine neporfirinice. Cromoproteine porfirinice Cromoproteinele porfirinice au componenta prostetic format din porfirin i se deosebesc prin componenta proteic care variaz de la o specie la alta. Porfirina are la baz substana numit porfin, alctuit din 4 nuclee pirolice unite prin 4 puni metinice i n structura creia opt atomi de carbon sunt substituii cu radicali saturai sau nesaturai: metil (- CH3), vinil (- CH = CH2) i propionil (- CH2 - CH2 - COOH):
3 4

HC
2

II NH N

CH
5

H3C H3C HC I

CH = CH2 CH II CH CH3 CH CH2 CH3

N III NH
6

N IV NH HN N HC III

HC
8

IV
7

CH

CH2

CH2 COOH CH2 CH2

COOH

PORFINA

PORFIRINA

Dintre cromoproteinele porfirinice de origine animal fac parte: hemoglobinele, mioglobinele, citocromii, enzimele heminice. Hemoglobinele sunt cromoproteine care au componenta prostetic format din hem i se deosebesc prin componenta proteic-globina, care variaz de la o
51

specie la alta. Hemul reprezint combinaia complex a protoporfirinei cu Fe2 . Molecula globinei format din patru catene polipeptidice va lega patru molecule de hem. Sub aceast form ionul Fe2+ pstreaz capacitatea de a fixa reversibil i alte molecule (O2, CO) sau anioni fr a-i modifica valena, proprietate care confer hemoglobinei rolul de transportor. Hemul este acelai la toate speciile, pe cnd globina difer de la o specie la alta Proprietile hemoglobinei: Reacia cu oxigenul-hemoglobina (Hb) are capacitatea de a fixa oxigenul molecular cu formare de oxihemoglobin
Hb + O2 HbO2

Reacia este reversibil i are o deosebit importan pentru organismele vii, deoarece sub form de oxihemoglobin oxigenul este transportat n timpul respiraiei de la plmni la esuturi. Reacia cu oxidul de carbon-Hemoglobina poate fixa i oxid de carbon printr-o legtur coordinativ mult mai puternic dect cea care leag oxigenul, cu formarea carboxihemoglobinei: Hb + CO = HbCO Reacia cu dioxidul de carbon-Hemoglobina are un rol important n fixarea dioxidului de carbon i transportul acestuia de la esuturi la plmni sub form de carbhemoglobina. Fixarea CO2 are loc la grupele aminice libere din catenele globinei sub form de compui carbaminici:
Hb - NH2 + CO2

+ Hb - NH - COO + H
Carbhemoglobina

Mioglobina n esuturile musculare ale organismelor animale se gsete mioglobina, cromoprotein cu o structur asemntoare hemo globinei, cu molecula format din 153 aminoacizi i care poate fixa o molecul de hem.Mioglobina are rolul de a transporta oxigenul n esutul muscular Mioglobina are o afinitate fa de oxigen de ase ori mai mare dect hemoglobina, cu formare de oximioglobin:
Mb + O2 MbO2

52

Rezumat CAPITOL III: PROTIDE Aminoacizi -aciclici -ciclici . Peptide Proteine -holoproteine -heteroproteine Teste de autoevaluare 1.Aminoacizii sunt combinaii: a). Monoaminomonocarbonilice; b). Monoaminomonocarboxilice; c). Monoaminodicarboxilice; d). Diaminomonocarboxilice. 2. Aminoacizii diamino monocarboxilici au caracter chimic 4.Acidul glutamic este un aa: a). monoaminomonocarboxilic; b). diaminomonocarboxilic; c). diaminodicarboxilic; d) monoaminodicarboxilic. 5. Peptidele sunt: a). compui care apar n organismele vii; a).acid; b). ndeplinesc funcii vitale; b).bazic; c). produi de hidroliz parial a c).amfoter; proteinelor; d).neutru. d). servesc la descifrarea structurii proteinelor. 3. Sunt aminoacizi eseniali: 6. Proteine globulare sunt: a). glicocol; a). albumine; b). alanin; b). globulime; c). lizina; c). hemoglobine; d).acid glutamic. d). keratine. Rspunsuri corecte: 1 b ,c, d , 2 -b , 3 c, 4 d, 5 toate, 6 a, b, c. Teme/ntrebri de verificare 1. S se scrie ecuaiile reaciilor de dezaminare i decarboxilare pentru aminoacizii biogeni.. 2. S se stabileasc structura chimic i denumirea pentapeptidei, format din acid glutamic, lizin, histidin, cistein, serin. 3. Comentai pe scurt structura proteinelor i artai care din cele 4 nivele de organizare determin configuraia specific fiecrei proteine. 4. Descriei proteinele care se gsesc n lapte Referat 1. Aminele biogene 2. Glutationul
53

Capitol IV ACIZII NUCLEICI

Acizii nucleici sunt compui macromoleculari ce reprezint polimeri ai unor uniti de baz numite nucleotide. Prin hidroliza acizilor nucleici se elibereaz fragmente mai mici, oligonucleotide, apoi mononucleotide i la urm componentele acestora: acid fosforic, pentoze, baze azotate. 4.1. Componentele structurale ale acizilor nucleici 4.1.1. Pentoza reprezint componenta glucidic a acizilor nuleici i este reprezentat de riboz sau de 2 - deoxiriboza n forma - furanozic:
(1') (2') (3') (4') (5') H-C=O H - C - OH H - C - OH H - C - OH H 2C - OH D - Riboza HOCH 2 O H H H H OH H-C=O H-C-H H - C - OH H - C - OH H 2C - OH D - Deoxiriboza H HO - CH 2 H

O
H

OH

OH OH

OH OH

4.1.2. Acidul fosforic ntr n molecula acizilor nucleici sub form de acid ortofosforic (H3PO4) i imprim acesteia un caracter acid. Acidul fosforic esterific pentozele n poziiile 2', 3' i 5' ale ribozei i 3' i 5' ale deoxiribozei. ntre mononucleotide H3PO4 stabilete legturi 3', 5' fosfodiesterice ntre dou pentoze vecine:
O CH 2 H H OH OH O H O O P OH CH 2 OH O O H H O H OH 1 C 2'C 3'C 4'C 5' O C O O P OH C 5' C 4' C 1' C 2 ' ' C 3

Legaturi 3'-5' fosfodiesterice

4.1.3. Bazele azotate n structura acizilor nucleici intr dou tipuri de baze azotate ciclice: - bazele pirimidinice, care deriv de la pirimidin; - bazele purinice, care deriv de la purin.

54

CH N HC CH CH N HC

CH CH CH N CH

N Pirimidina

N N Purina

Bazele pirimidinice - n structura acizilor nucleici se ntlnesc frecvent urmtoarele baze pirimidinice: Citozina (C), uracilul (U), timina (T).
NH2 N HO C N HO N OH U HO N OH T CH3

Citozina 2-hidroxi-6amino-pirimidina

N Uracilul 2,6 dihidroxipirimidina

N Timina 2,6 dihidroxi5-metil-pirimidina

Bazele purinice din structura acizilor nucleici sunt adenina (A) i guanina (G): adenina este 6 - aminopurina, iar guanina este 2 - amino, 6 - hidroxipurina.
NH2 N N N CH N H H2N N N OH N CH N H

Adenina (6-aminopurina)

Guanina (2-amino,6-hidroxipurina)

n acizii nucleici bazele azotate sunt repartizate astfel; citozina, adenina i guanina sunt componente ale ambelor categorii de acizi nucleici (ARN i ADN); uracilul intr n structura ARN, iar timina n ADN.

Activitate
S se scrie structura bazelor azotate din macromolecula ADN i s se arate care dintre acestea nu se regasete n structura ARN 4.1.4 Nucleozide Aceste substane reprezint produii de combinare a pentozelor cu bazele azotate i rezult prin hidroliza enzimatic parial a nucleotidelor. Nucleozidele pot fi considerate heterozide cu legtur N - glicozidic sau N - glicozide. Legtura dintre aceste dou componente se face prin intermediul atomului de N3 al bazelor pirimidinice i N9 al bazelor purinice cu hidroxilul alfa-glicozidic al ribozei sau deoxiribozei. Nucleozid = Baze azotate + pentoze Nucleozidele pot fi pirimidinice sau purinice, iar acestea la rndul lor pot fi ribo - sau deoxiribonucleozide, conform structurilor de mai jos.
55

O HN O HO - CH 2 H HO H O H N CH 3 N

NH 2 N CH N N

H H Deoxitimidina

HOCH 2 O H H H H OH OH Guanozina

4.1.5. Nucleotide Nucleotidele reprezint unitatea structural de baz a acizilor nucleici care sunt polinucleotide. Nucleotidele se formeaz prin esterificarea nucleozidelor cu acid fosforic, deci sunt esteri fosforici ai nucleozidelor: Nucleotid = Nucleozid + Acid fosforic. n nucleotide, acidul fosforic poate esterifica gruprile hidroxil din poziiile 2', 3', 5' ale ribozei sau cele din poziiile 3', 5' ale dezoxiribozei.Nucleozid 5 ' fosfaii predomin n stare liber n celule ndeplinind funcii metabolice importante. Nucleotidele au urmtoarele structuri generale:
OH O P-O-CH 2 O
O H

Baza N H H O HO - CH 2 O OH H P H O

Baza N HH H HOCH 2 O H H OH

Baza N H H OH O P OH Nucleozid 2' fosfat O

OH OH Nucleozid - 5' fosfat

OH Nucleozid 3' fosfat

Tem: S se indice structura nucleozidelor deoxiribozice i s se indice acidul

nucleic din care fac parte Nucleotide polifosforice O deosebit importan biochimic o au nucleotidele cu 2 i 3 radicali fosforici i anume nucleotide - 5' difosfat i nucleotide - 5' - trifosfat care particip n organism la procesele de nmagazinare i utilizare a energiei. Legturile dintre resturile de acid fosforic de tip anhidrid sunt legturi bogate n energie i se numesc legturi macroergice. Dintre nucleotidele polifosforice cele mai importante sunt adenozindifosfatul (ADP) i adenozintrifosfatul (ATP): ADP conine o legtur macroergic, iar ATP dou.

56

NH2 N N O HO - P OH O O-P OH O O-P OH O - H2C O H H H H OH OH ADP ATP Structura chimica a ADP si ATP
Legturile macroergice au rol important n energetica celular, ntruct prin hidroliza acestora se elibereaz 7 - 12 kcal/mol. Compuii macroergici au proprietatea de a ceda grupri fosfat i energia legturii macroergice unor nucleotide difosforice cu transformarea acestora n nucleotide trifosforice:
ADP + H3PO4 ATP

N CH N

4.2. Polinucleotide. Acizi Nucleici 4.2.1. Caracterizare general i structur Acizii nucleici sunt substane macromoleculare formate prin condensarea unui numr mare de mononucleotide, din care cauz se mai numesc i polinucleotide. Mononucleotidele reprezint unitatea structural de baz a polinucleotidelor i n funcie de natura acestora se deosebesc ribo - i deoxiribonucleotide. Mononucleotidele se unesc ntre ele prin intermediul H3PO4 formnd lanuri lungi polinucleotidice. Acidul fosforic stabilete legturi covalente 3' 5' fosfodiesterice ntre gruparea 3' (OH) a pentozei dintr-un mononucleotid i 5' (OH) a pentozei din mononucleotidul vecin. Astfel, n structura acizilor nucleici resturile de acid fosforic alterneaz cu resturile de pentoz, iar bazele azotate apar ca radicali laterali ai lanului polinucleotidic.

57

n ceea ce privete modul de organizare structural a macromoleculelor de acizi nucleici se deosebesc 3 nivele de organizare a acestora,-structura :primar, secundar i teriar. n funcie de structura primar se disting 2 tipuri principale de acizi nucleici: ARN i ADN. Acetia se deosebesc prin natura pentozei i prin bazele nucleice pe care le conin. Astfel ARN conine riboz,iar ca baze azotate adenina, guanina, citozina i uracil, iar ADN conine deoxiriboz, iar ca baze nucleice adenina, guanina, citozina i timina. Acizii nucleici au o structur tetranucleotidic, fiecare macromolecul fiind format din 4 nucleotide diferite - dou purinice i dou pirimidinice, care alterneaz ntre ele.

T
3' 3'

A
3'

C
3'

P P
5' 5'

P
5'

P
5'

Reprezentarea simbolica a structurii polinucleotidelor

Structura secundar a acizilor nucleici este diferit: ADN are o structur secundar bicatenar, dublu helicoidal, n timp ce ARN are o structur secundar monocatenar. 4.2.2. ADN - Structur, funcii, proprieti Structura primar a ADN: Acizii deoxiribonucleici sunt localizai n cea mai mare parte n nucleul celular, reprezentnd materialul genetic al cromozomilor. Structura primar a ADN se refer la succesiunea celor 4 mononucleotide principale dispuse ntr-o anumit secven specific i care alctuiesc o unitate tetranucleotidic. ntre mononucleotide se stabilesc legturi 3' 5' fosfodiesterice care unesc dou molecule de deoxiriboz din nucleozide alturate. Macromoleculele de ADN difer de la o specie la alta, dar sunt identice n organele aceleai specii. ADN se deosebesc ntre ei prin succesiunea mononucleotidelor i prin reprezentarea lor cantitativ. Datorit acestor diferene structurale (-numrul, secvena i proporia mononucleotidelor)-ADN este considerat o biomolecul informaional. Secvena nucleotidelor determin n
58

ADN codul genetic i asigur transmiterea, pstratea i exprimarea caracterelor ereditare. Structura secundar a ADN se refer la organizarea tridimensional, spaial a lanului polinucleotidic. Molecula de ADN este format din 2 lanuri lungi polinucleotidice rsucite ntr-o spiral dubl, orientat spre dreapta, n jurul unei axe comune simetrice, formnd un dublu helix. Cele dou lanuri polinucleotidice din spiral sunt orientate antiparalel, n direcii opuse

Schema spiralei duble a ADN Cele dou catene helicoidale sunt strns legate prin legturi de H intercaternare care se stabilesc dup o regul specific ntre anumite perechi de baze, una purinic i alta pirimidinic i care imprim stabilitatea stucturii secundare. Din punct de vedere structural i energetic este favorizat numai legarea adeninei cu timina i a guaninei cu citozina, ceea ce determin ca raportul lor s fie egal cu 1. Perechile de baze astfel formate sunt denumite baze complementare: A = T, C -G.

H Timina CH3
4

H O- - - -H

Adenina N
N N N

Citozina N-H ..............O

4 5 6 1N 3 2

Guanina N
N N

................... HN

5 6 1N 3 2

H------ N

N Pentoza

Pentoza

Pentoza

O .................. H-N H

Pentoza Imperecherea complementara a bazelor A = T si C = G

59

4.2.3.Acizii ribonucleici (ARN)-structur, proprieti Structura primar a ARN: Macromolecula de ARN este format dintr-o singur caten polinucleotidic liniar mai scurt dect ADN, alctuit din patru ribonucleotide care se succed ntr-o anumit secven specific i care sunt unite prin legturi 3'5' - fosfodiesterice. Structura secundar a ARN este diferit la cele trei tipuri principale de ARN identificate n celul: ARN de transfer (ARNt) i ARN mesager (ARNm) i ARN-ribozomal, (ARNr) ARNt se gsesc n citoplasm i au rolul de a transporta aa activai spre centrul de sintez al proteinelor(ribozomi). Fixarea aa se face la un capt al lanului polinucleotidic, care este identic la toi ARNt .Tot n cadrul lanului polinucleotidic se afl anticodonul (triplet de 3 baze azotate) care este complementar cu un alt triplet numit codon, dintr-o secven de pe ARNm.Fiecare aa din molecula proteinelor are cel puin un ARNt corespunztor. ARNm au via scurt, sunt sintetizai n nucleu pe un segment de ADN care le servete drept matri, iar secvena bazelor lor nucleice este complementar cu cea a catenei de ADN din care s-au format. Astfel informaia genetic din ADN este copiat enzimatic n ARNm, procesul numindu-se transcripie. ARNm transfer mesajul genetic codificat la nivelul ribozomilor citoplasmatici pentru a servi drept tipar la biosinteza proteinelor. ARNr nu se gsesc liberi ci asociai cu proteinele n ribozomi. Ribozomii au un rol important n procesul de sintez a proteinelor, proces care se desfoar n reticulul endoplasmatic. ARNr reprezint 80% din totalul ARN-ului celular.

Rezumat CAPITOL IV: ACIZI NUCLEICI Acizi nucleici -Baze azotate: A,C,G,T,U. -Pentoz: riboz/reoxiriboz -Acid fosforic Acizi nucleici -ADN -ARN(ARNt ARNm ARNr)

60

Teste de autoevaluare l). ADN conine: a). glucoz; b). 2-deoxiriboz; c). arabinoz; 2). Deoxiribonuleotide sunt: a). acidul deoxiadenilic; b). acidul deoxiguanilic; c). acidul deoxiuridilic; d). acidul deoxicitidilic; e). acidul deoxitimidilic. Rspunsuri corecte: 1 b, 2 a,b,d,e, 3 c, e. Teme / Intrebari recapitulative 1. Referitor la structura secundar a acizilor nucleici comentai deosebirile care exist ntre ADN i ARN. 2. S se reprezinte structurile chimice ale bazelor azotate din acizii nucleici i s se precizeze care fac parte din ADN i care din ARN. 3. S se indice structura chimic a secvenei de nucleotide ce conine CA-G, precum i a secvenei corespunztoare din catena replic de ADN.Precizai bazele complementare unite prin 3 legturi de hidrogen. 4. Artai ce este procesul de denaturare a ADN i indicai condiiile n care aceasta se poate renatura i hibrida. 5. S se stabileasc structura chimic a secvenei de nucleotide dintr-un fragment de ARNm sintetizat pe o caten de ADN ce are o secven n baze azotate (nucleotide).A-T-C-G-T-A. 3). Care din bazele nucleice formeaz legturi de hidrogen: a). adenina; b). timina; c). citozina; d). uracil; e). guanina.

Referate 1. 2. ARN rol i importan pentru organismul animal ADN. rol i importan pentru organismul animal

61

Capitol V ENZIME

5.1. Noiuni generale Enzimele sunt biocatalizatori specifici de natur proteic, produi de celulele vii, care catalizeaz transformrile chimice din organism, avnd rol fundamental n reglarea proceselor metabolice.Reaciile metabolice de degradare i biosintez catalizate de enzime se desfoar n celula vie n condiii blnde de temperatur, presiune i pH. Reaciile catalizate de enzime se numesc reacii enzimatice, iar substana care este transformat printr-o reacie catalizat enzimatic se numete substrat. 5.2. Natura i structura chimic a enzimelor Enzimele sunt substane organice mecromoleculare de natur proteic produse de organismele vii. n funcie de structur, enzimele se submpart n dou categorii: - enzime de natur exclusiv proteic formate n ntregime din protein; aceste enzime au deci o structur unitar; din aceast categorie de enzime fac parte ribonucleaza, ureaza, pepsina, tripsina, chimotripsina. - enzime de natur heteroproteic, alctuite din dou pri: una proteic nedializabil i termolabil, numit apoenzim i una neproteic, dializabil i termostabil, numit coenzim. Aceste enzime au deci o structur binar. Coenzima este implicat direct n reacia chimic catalizat de enzim. n cazul n care partea neproteic este puternic legat de enzim i nedisociabil, ea se numete grupare prostetic, iar enzima n ansamblu se comport, n acest caz ca o heteroprotein. n procesul enzimatic apoenzima fixeaz substratul, iar coenzima desvrete reacia chimic. Apoenzima condiioneaz i natura reaciei efectuat de coenzim. Coenzima poate fi comun mai multor enzime. Coenzima particip direct la mecanismul unor procese enzimatice (transport de hidrogen, de electroni, de grupri chimice). Coenzimele sunt formate din diferite substane organice cu molecule relativ mici, cu structuri chimice diferite, majoritatea dintre ele fiind vitamine sau derivai ai acestora, grupri hem, ioni metalici.

62

Pentru desvrirea reaciei enzimatice este necesar ca substratul s se fixeze pe enzim cu formarea unui complex activat enzim-substrat. Aceast fixare se face n zone bine determinate de pe suprafaa enzimei, numite centri activi. Centrul activ sau situsul activ este format din resturi de aminoacizi situai n catena polipeptidic n poziii diferite, dar apropiai n spaiu n urma plierii lanului polipeptidic. n situsul activ se gsesc dou poriuni: una de fixare a substratului i alta catalitic (situs catalitic) care acioneaz asupra substratului fixat, facilitnd reacia chimic. n general, aciunea catalitic a enzimelor holoproteice se datorete anumitor grupri funcionale libere, aezate la suprafaa moleculei (COO-, -OH, -NH2, -SH) i care aparin aminoacizilor care formeaz situsul catalitic, de obicei serina, cisteina, histidina, tirozina i lizina. Enzimele cu structur binar, prezint de obicei doi centri activi: unul situat n fragmentul proteic (situsul catalitic), iar cellalt n fragmentul prostetic, unde se leag coenzima. La aceste enzime, catalizarea reaciei este condiionat de prezena ambelor pri, apoenzima i coenzima; individual aceste sunt inactive, dar mpreun formeaz un complex activ, numit holoenzim: Apoenzim + Coenzim = Holoenzim

Centrii activi ai enzimelor 5.3. Specificitatea enzimelor Activitatea enzimatic se caracterizeaz printr-o nalt specificitate. Specificitatea de substrat-se refer la capacitatea enzimelor de a cataliza transformarea unui singur substrat sau a anumitor grupri funcionale i legturi chimice.

63

Unele enzime au o specificitate absolut n sensul c ele acioneaz numai asupra unui singur substrat. Aa de exemplu, ureaza, arginaza, acioneaz numai asupra unui singur substrat (ureea, respectiv arginina), cataliznd o singur reacie. Cnd o enzim catalizeaz transformarea mai multor substrate nrudite din punct de vedere chimic, specificitatea enzimatic este relativ. Astfel peptidazele catalizeaz hidroliza legturii peptidice din proteine i polipeptide, fosfatazele catalizeaz hidroliza esterilor fosforici ai diferitelor substane. Specificitatea de substrat este imprimat unei enzime de componenta sa proteic-apoenzima. Specificitatea de aciune: la enzimele cu structur heteroproteic, componena neproteic, coenzima, imprim enzimei specificitatea de aciune, respectiv determin tipul de reacie chimic care va transforma substratul. 5.4. Factorii care influeneaz activitatea enzimatic Viteza reaciilor enzimatice este influenat de o serie de factori i anume: concentraia substratului, concentraia enzimei, pH-ul, temperatura, efectorii enzimatici. 5.4.1. Influena concentraiei substratului Concentraia substratului este unul din cei mai importani factori care influeneaz viteza reaciei enzimatice. ntre enzim (E) i substrat (S) se formeaz un complex activat enzim-substrat (ES), labil care se scindeaz i pune n libertate produsul de reacie (P) i enzima regenerat, capabil s se combine cu o nou molecul de substrat. Viteza reaciei este proporional n orice moment cu concentraia complexului ES. Dac se menine constant concentraia enzimei, mrindu-se treptat concentraia substratului, viteza de reacie crete, pn cnd, la o anumit concentraie a substratului, toat cantitatea de enzim va fi transformat n complexul ES. Acestei concentraii a substratului,-numit concentraie de saturare- i corespunde viteza maxim a reaciei Vmax; din acest moment, viteza de reacie i KM rmn constante, orict s-ar mri concentraia substratului.

64

Curba vitezei de reacie functie de concentraia substratului lSl

Influena concentraiei enzimei asupra vitezei de reacie

5.4.2.Influena concentraiei enzimei ntr-un proces enzimatic viteza de reacie este dependent de concentraia enzimei: V=K[E].Variaia vitezei de reacie n funcie de concentraia enzimei se exprim grafic printr-o hiperbol. n cazul unor concentraii mari ale enzimei, proporionalitatea nu se respect, din cauza deplasrii n sens invers a echilibrului de reacie; de asemenea, prezena unor substane cu efect inhibitor sau activator modific cinetica reaciei enzimatice. 5.4.3. Influena pH-lui Activitatea enzimatic este dependent de concentraia ionilor de H+ din mediul de reacie, deci de pH. Dependena vitezei de reacie n funcie de pH se reprezint printr-o curb al crui maxim coincide cu pH-ul optim.

Influenta pH-ului 5.4.4. Influena temperaturii

Influena temperaturii asupra activitii enzimatice

n general, activitatea enzimatic se desfoar ntr-un interval larg de temperatur 200-500 C, n interiorul cruia fiecare enzim are un maxim de activitate la o anumit valoare numit temperatura optim. Temperaturile sczute

65

nu inactiveaz enzimele; n acest caz, activitatea enzimei scade foarte mult sau chiar devine nul, dar crete iar, cu ridicarea temperaturii. 5.4.5. Influena efectorilor enzimatici Efectorii pot fi activatori i inhibitori. Activatorii sunt substane care n cantiti mici mresc viteza reaciile enzimatice cum sunt: -unii ioni, n special cationi Ca2+, Mg2+, Fe2+, Zn2+, Cu2+; -unele vitamine i hormoni. Spre deosebire de activatori, inhibitorii sunt substane care ncetinesc sau chiar mpiedic o reacie enzimatic. Acetia pot fi: -substane care formeaz combinaii complexe cu metalele din structura enzimei sau cu metale care activeaz enzima. Astfel, monoxidul de carbon i cianurile blocheaz fierul din enzimele heminice; -diferite substane care au structur asemntoare cu substratul sau cu enzima (antivitaminele i antibioticele); -unele substane care pot bloca funciunile chimice ale enzimelor, de a cror prezen depinde activitatea lor. Astfel: Cu2+i Mg2+, blocheaz funciunea tiol 5.5. Prezentarea principalelor clase de enzime Actuala nomenclatur i clasificare a enzimelor a fost propus de Comisia de enzimologie a Uniunii Internaionale de Biochimie(1961) care a stabilit ca numele enzimelor s se formeze dup reacia chimic ce o catalizeaz ca principal criteriu, precum i dup natura substratului asupra cruia acioneaz.Sunt 6 clase de enzime difereniate dup mecanismele de reacie: oxidoreductaze, transferaze, hidrolaze, liaze, izomeraze i ligaze. 5.5.1.Oxidoreductaze n funcie de mecanismul de aciune, oxidoreductazele se clasific n trei grupe: dehidrogenaze (transhidrogenaze) = enzime transportoare de hidrogen; transelectronaze = enzime transportoare de electroni i oxidaze = enzime ce catalizeaz reaciile de oxidare ale substratului cu oxigen molecular. 5.5.1.1. Dehidrogenaze piridinnucleotidice:-sunt enzime anaerobe ce transport hidrogenul n interiorul celulelor, fiind prezente n toate celulele animale i vegetale. Coenzimele lor au la baz un piridinnucleotid. Se cunosc dou coenzime importante: nicotinamid adenin dinucleotid oxidat (NAD+), sau redus (NADH) i nicotinamid adenin dinucleotid fosfat oxidat (NADP+), sau redus (NADPH). Din punct de vedere chimic, ele sunt formate dintr-un derivat al

66

nicotinamidei (vitamina PP) i un nucleotid adenilic .Structura NADP+ este deosebit de a NAD+ prin prezena unui rest de acid fosforic la C2 al ribozei din nucleotidul adenilic: Reacia de transfer a hidrogenului de la un substrat la altul n acest caz se poate schematiza astfel:
SH 2 + NAD

+ +

S + NADH + H

SH 2 + NADP

+ S + NADPH+ H

Enzime flavinice. O alt subclas de oxidoreductaze extrem de important este cea a enzimelor flavinice. Ele conin drept coenzime derivai de riboflavin: flavin-adenin dinucleotid oxidat (FAD) sau redus (FADH2) i flavin mononucleotid oxidat(FMN), sau redus (FMNH2). n general, flavinenzimele sunt dehidrogenaze aerobe care iau hidrogenul de la hidrogenazele anaerobe (NAD+ sau NADP+) sau direct de la substrat i l cedeaz oxigenului formnd apa oxigenat, ce ulterior va fi descompus de peroxidaze sau catalaze.
SH2 + FAD FADH2 + O2 S + FADH2 FAD + H2O2

Mecanismul de aciune(reversibil) se realizeaz astfel:

R H 3C H 3C
8 7 6 5

R N
1 2 4 3

N
9 10

O NH

+2 H
-2H

H 3C H3C

N N H

H N

O NH

N O

Forma oxidata FAD (FMN)

O Forma redusa FADH2 (FMNH2)

5.51.2. Transelectronazele:-sunt enzime care catalizeaz reaciile de oxidoreducere prin transfer de electroni de pe un substrat donor pe un acceptor. Transeletronazele pot fi anaerobe (alt acceptor dect oxigenul) i aerobe, cnd acceptorul de electroni este oxigenul. Transelectronazele anaerobe se mai numesc i citocromi. Citocromii sunt cromoproteide feroporfirinice ce iau parte la procesele de respiraie celular. Prin intermediul fierului transport electroni, valena fierului modificndu-se dup urmtoarea schem redox:
Cit (Fe +) citocrom redus
2

-e +e

Cit (Fe3 +) citocrom oxidat

67

Citocromii iau parte la procesele de respiraie celular n mitocondrii,-n care se formeaz apa i se elibereaz energie. 5.5.1.3. Oxidazele-sunt enzime ce catalizeaz reaciile dintre anumite substraturi i oxigenul molecular. Hidroperoxidazele sunt oxidoreductaze care folosesc ca substrat apa oxigenat (H2O2), de exemplu peroxidazele i catalazele. Peroxidazele i catalazele sunt nrudite structural;ca structur sunt heminproteine, care conin n molecul Fe3+. Aceste enzime au mecanism de aciune asemntor, activeaz apa oxigenat, formnd complexe enzim-substrat, care funcioneaz ca acceptori de hidrogen de la diferite substrate. n reaciile catalizate de peroxidaze i catalaze, apa oxigenat are rol de acceptor de hidrogen(protoni + electroni):
H2 O2

2H

+ 2e

2H

n cazul peroxidazelor donorul de hidrogen poate fi orice substan, care prin potenialul su redox funcioneaz ca donor fa de H2O2:
AH2 + H 2 O 2
2

H 2O

+A

AH2 = donor forma redusa A = donor forma oxidata

n cazul catalazelor apa oxigenat funcioneaz ca donor de hidrogen:

H O2
2

+ H 2O 2

2H

+O 2

5.5.2. Transferaze Numite i enzime de transport, catalizeaz transferul unor grupri chimice de pe un substrat pe altul. Metiltransferazele sunt enzime care catalizeaz transferul gruprii metil de pe un substrat donor pe altul acceptor, conform reaciei:
S - CH3 + S' - H S - H + S' - CH3

Aciltransferazele-sunt enzime care catalizeaz reaciile de transfer ale radicalului acil (R-CO-) i au drept coenzim "coenzima A" (HSCoA). Radicalii acil se fixeaz pe coenzima A cu formare de acilcoenzima A, reacia are loc cu aport de energie de la ATP care i activeaz:
R-COOH + HS-C oA + ATP R-CO SCoA + AMP + P P

Acid activat

Apoi radicalii acili sunt transferai pe diferii acceptori (oze, amine, aminoacizi) cu eliberarea coenzimei A:
68

R-CO

SCoA + H-x

acil transferaze

HSCoA + R-CO-x

acceptor

n reaciile biochimice din organismul animal un rol important l are acetilcoenzima A numit i "acid acetic activat":
CH3 - CO SCoA

Acetilcoenzima A se formeaz prin catabolizarea glucidelor, acizilor grai, aminoacizilor i totodat servete ca substan iniial pentru biosinteza unor compui foarte importani: acizi grai, corpi cetonici, steroli, hormoni steroizi, acetil-colin. Glicoziltransferaze-sunt enzime de transfer al unui rest glucidic de pe un donor (oligoglucide, poliglucide, glicozizi, esteri fosforici) pe un acceptor (oze sau derivai ai ozelor. Aceste reacii sunt ntlnite n biosinteza oligo - i poliglucidelor, a glicozidelor Aminotransferaze (transaminaze). Aceste enzime catalizeaz reaciile de transfer ale gruprii amino (-NH2) de pe un aminoacid pe un -cetoacid, numite reacii de transaminare:
R H2N - C - H COOH R1 trans aminaza R C=O COOH

C=O COOH

R1 H2N - C - H COOH

Cele mai importante reacii de transaminare din organismul animal sunt cele dintre acidul glutamic i cetoacizii piruvic i oxalilacetic, catalizate de glutamat piruvat transaminaza (GPT) i respectiv glutamat oxaloacetat transaminaza (GOT), enzime cu valoare de diagnostic n unele afeciuni, mai ales hepatice. Fosfotransferazele-sunt enzime care transfer grupri fosfat sau pirofosfat de pe un substrat donor pe unul acceptor.Aceste grupri sunt donate cel mai adesea de unii nucleozid trifosfai bogai n energie i n special adenozintrifosfatul (ATP), reaciile fiind catalizate de ATP-fosfokinaza sau ATPpirofosfokinaza (fosfotransferazele se mai numesc i kinaze):
ATP ADP + R - O - PO3H2 fosfokinaza O O ATP AMP + R - O - P - O - P - OH ATP + R - OH pirofosfokinaza OH OH ATP + R - OH

69

5.5.3. Hidrolaze: enzimele din aceast clas catalizeaz reaciile de hidroliz conform reaciei generale:
R - O - R' + HOH R - OH + R' - OH

Variaiile de energie sunt mici n cazul acestei reacii reversibile. Scindrile hidrolitice sub aciunea hidrolazelor stau la baza proceselor de digestie ale glucidelor, lipidelor, proteinelor. Esterazele -sunt hidrolaze ce acioneaz asupra legturilor ester cu formare de acid i alcool. Esterazele se subdivid dup natura gruprii acide n carboxilesteraze, tioesteraze, fosfoesteraze. Glicozidaze (glicozid hidrolaze)aceast subclas cuprinde enzimele care acioneaz asupra legturilor glicozidice din oligoglucide, poliglucide sau heteroglucid. Peptidhidrolaze sau peptidaze cuprind hidrolazele care catalizeaz scindarea hidrolitic a legturilor peptidice. 5.5.4. Liazele Din acest clas fac parte enzimele care catalizeaz scindarea unor legturi chimice din molecula substratului, fr a fi nevoie de hidroliz. Legturile chimice scindate de liaze sunt: C-C; C-O; C-S; C-N; C-X. Liazele catalizeaz i apariia de duble legturi n molecula substratului (C=C i C=O). 5.5.5. Izomerazele sunt enzimele care catalizeaz reaciile de izomerizare. Dup tipul de izomerie, aceste enzime formeaz mai multe subclase: epimeraze, izomeraze cis-trans, oxidoreductaze intramoleculare, transferaze intramoleculare (mutaze). 5.5.6. Ligaze (Sintetaze) Aceast clas de enzime catalizeaz reacia de sintez a dou substrate, cu formare de legturi chimice noi, n prezena unui donor de energie (ATP sau un alt nucleotid trifosfat). Ligazele catalizeaz formarea de noi legturi chimice:C-C, CO, C-N, C-S, ntlnite n cursul reaciilor de biosintez ale proteinelor, lipidelor.

70

Rezumat CAPITOL V: Enzime 1.Oxidoreductaze -dehidrogenaze -electronaze -oxidaze 2. Transferaze -C1transferaze -aciltransferaze -glicoziltransferaze -fosfotransferaze 3. Hidrolaze -esteraze -glicozidaze -peptidhidrolaze 4. Liaze -C-C liaze -C-O liaze -C-S liaze -C-N liaze 5. Izomeraze -racemaze -epimeraze -cis-trans izomeraze -oxidoreductaze intramoleculare -mutaze 6. Ligaze -C-O ligaze -C-N ligaze -C-C ligaze -C-S ligaze Teste de autoevaluare 1. Enzimele sunt: a). lipide; b). glucide; c). protide; d). polinucleotide. 3. Viteza de reacie este: a). proporional cu concentraia substratului; b). independent de concentraia enzimei; c). independent de concentraia substratului; d). egal cu viteze maxim. 2. Enzimele se deosebesc de catalizatorii anorganici astfel: a). intervin doare n reacii posibile din punct de vedere termodinamic; b). au eficien catalitic mai mare; c). scad energia de activare a procesului chimic dat; d). nu modific echilibrele chimice la care conduc reacii reversibile. Rspunsuri corecte: 1 c, 2 b, 3 a, 4 a, b, c
71

4. Coenzime sunt: a). NAD+; b). NADP+; c). FAD; d). acidul dehidroascorbic.

Teme_ 1. S se prezinte factorii care influeneaz activitatea enzimatic 2. S se indice denumirea i pH-ul optim a principalelor enzime hidrolitice care particip la procesul de digestie. 3. S se arate care din coenzimele de mai jos particip la transferul hidrogenului de la substratul donor la cel acceptor:FAD, TPP, HSCoA, NAD+, NADP+, FMN. 4. S se arate din ce clas de enzime fac parte enzimele care catalizeaz reaciile de mai jos: R-COOH + HSCoA + ATP = RCO-ScoA + AMP + P-O- P Glucoz + ATP = G-1-P + ADP Triglicerid + HOH = glicerol + acid gras Zaharoz + HOH = glucoz + fructoz F-1,6-P = 2 trizofosfat Acid aspartic = -alanina + CO2 RH + CO2 + ATP = RCOOH + ADP + H3PO4

72

Capitol VI VITAMINE

6.1. Definiie i clasificare Vitaminele sunt substane organice de natur exogen, care difer prin structura chimic i proprieti, fr valoare plastic sau energetic, dar care posed activitate biologic n cantiti mici i sunt absolut necesare pentru asigurarea funciilor vitale ale organismului animal. Vitaminele au funcii numeroase att n ceea ce privete creterea i dezvoltarea normal a animalelor, ct i reglarea funciilor celulare. Lipsa vitaminelor din alimentaie (avitaminoze) sau insuficiena acestora (hipovitaminoze) determin disfuncii metabolice, modificri structurale la nivel de esut, ceea ce duce la mbolnvirea ntregului organism. n funcie de solubilitatea n ap vitaminele se clasific n dou grupe: vitamine hidrosolubile i liposolubile. 6.2. Vitamine hidrosolubile n marea lor majoritate sunt termolabile, instabile n mediu alcalin i stabile n mediu acid. n aceast grup sunt cuprinse vitaminele hidrosolubile din complexul B (din care fac parte vitaminele B1, B2, B6, B12, acidul pantotenic, acidul folic, vitamina PP, H, H') C, P, acidul lipoic, colina. Tiamina-( Vitamina B1) -are urmtoarea structur chimic:
NH2 N H3 C N CH2

+
N HC S

C - CH3 C - CH2 - CH2 - OH

Gruparea funcional alcool primar poate fi esterificat cu acid pirofosforic cu formare de tiaminpirofosfat (TPP) cu rol de coenzim n reaciile de decarboxilare a unor cetoacizi, n reaciile de transfer catalizate de transcetolaze. Carena n vitamina B1 produce la animale tulburri ale sistemului nervos central. La om avitaminoza tiaminic este cunoscut sub numele de boala beriberi care produce modificri degenerative ale sistemului nervos; n forma cronic a carenei se semnaleaz polinevrita (inflamarea nervilor) la nivelul membrelor inferioare, nsoit de tulburri pshice i chiar insuficien cardiac.

73

Riboflavina

(Vitamina

B2,

lactoflavina)-este

substan

solid,

cristalizat, de culoare galben, care din punctul de vedere al structurii chimice este derivatul dimetilat al izoaloxazinei pe care este grefat un rest ribitol. Lipsa sau carena n vitamina B2 din organismul animal duce la stagnarea creterii organismelor tinere, la scderea rezistenei la infecii, la tulburri de vedere, la cderea prului i chiar moartea subit a organismului adult.
CH 2 - (CHOH) 3 - CH 2OH H 3C H 3C N
8 7 6 5 9
10

CH 2 - (CHOH) 3 - CH 2OH H 3C H 3C N H N C=O NH C ll O

1 2C = 3NH 4

+2H -2H

C ll O

N H

Riboflavina Forma oxidata

Leucoriboflavina Forma redusa

Vitamina B6 (piridoxina, adermina) derivat al piridinei, se prezint sub forma a trei compui ce se deosebesc prin funciunea substituit la C4 i care au proprieti vitaminice: piridoxolul, piridoxalul i piridoxamina. Nucleul piridinic al vitaminei B6 are o grupare metil la C2, o grupare - OH la C3 i o grupare hidroximetil la C5. Carena n vitamin B6 este mai frecvent la suine i psri i se manifest prin tulburri nervoase, dermatite, anemii, ncetinirea creterii, insomnii, apetit redus.
R HO H 3C
3 2 4 5

CH=O CH 2OH HO H 3C N

N Piridoxal (R= -CH2OH) Piridoxal (R= -CH=O) Piridoxamina (R= -CH2NH2)

1 6CH

C - CH 2 - O - P - OH OH CH Piridoxal - 5 - fosfat

Vitamina PP (B5 nicotinamida) este amida acidului nicotinic:

HC HC H C C - COOH H C

HC HC

C - CO - NH2

CH N Acidul nicotinic

CH N Nicotinamida

Nicotinamida are un rol biologic deosebit, fiind componenta activ a dou coenzime nicotinamidadenindinucleotidice, notate prescurtat NAD+ i NADP+ Lipsa acidului nicotinic i a amidei sale din alimentaie produce boala numit pelagr caracterizat prin dermatite specifice i manifestri nervoase.

74

Acidul pantotenic ( Vitamina B3) este format dintr-un rest de acid pantoic i unul de -alanin, unite printr-o legtur amidic. Rolul biochimic al acidului pantotenic este legat de cel al coenzimei A, n structura creia intr. Aceast coenzim aparine enzimelor din clasa transferazelor, subclasa aciltransferazelor, cu rol n transferul radicalilor acil. Carena n acid pantotenic la diferite animale provoac ncetinirea creterii, dermatite descumative, tulburri ale sistemului neuro-vegetativ, afeciuni gastro-intestinale, depigmentarea i cderea prului.
CH3 OH HO-CH2-C-CH-CO-NH-CH2-CH2-COOH CH3

Vitamina C - Acidul ascorbic este un derivat al hexozelor i anume lactona acidului 2 - ceto - L - gulonic, cu puternice proprieti oxidoreductoare:
O=C HO - C l HO - C H-C HO - C - H CH2OH Acidul L - ascorbic (forma redusa) O=C O=C O O=C H-C HO - C - H CH2OH Acidul dehidro - L - ascorbic (forma oxidata)

O -2 H +2H

Aciunea biologic a acidului ascorbic este legat de capacitatea sa de a forma un sistem oxido-reductor (acid ascorbic - acid dehidroascorbic) pe baza creia acioneaz ca un transportor de hidrogen i electroni. Acidul ascorbic particip la o serie de procese metabolice (reacii de hidroxilare, oxidare, hidrogenare),-pe care unele substane ca aminoacizii, hormonii, sterolii, acizii grai, acidul folic, le sufer n organism. Avitaminoza C sau scorbutul se manifest prin fragilitate capilar nsoit de hemoragii la nivelul pielii, gingiilor, mucoaselor, mobilitatea i cderea dinilor, lezarea esutului cartilaginos i osos. Hipovitaminoza C se manifest prin oboseal, inapeten, somnoleln, scderea rezistenei la efort. 6.3. Vitamine liposolubile: n acest grup intr vitaminele A,D,E,K solubile n grsimi i solveni organici, care pot forma depozite n organismul animal (ficat sau esut adipos) i care din punctul de vedere al structurii chimice sunt, n general, compui izoprenoidici.

75

Vitaminele A retinolii Vitaminele A se formeaz n esuturile animale prin transformarea provitaminelor A denumite caroteni, pigmeni polinesaturai din plante, alge i microorganisme. Carotenii se gsesc n cantiti mari n vegetalele verzi i galbene (spanac, varz, morcovi, salat, ceap verde). Provitaminele A, preluate de animale odat cu hrana vegetal, sunt apoi scindate oxidativ n peretele intestinal sau ficat cu formare de vitamina A. n esuturi retinolii se gsesc n stare liber, dar mai ales sub form de esteri cu acidul palmitic, iar n snge circul sub forma unui complex lipoproteic.
H3C CH3 CH3 R R = - CH2OH R = - CH = O R = - COOH Structurile chimice ale vitaminei A1 H3C
2 3 1

Retinol Retinal Acid retinoic

CH3
6 5

R = - CH2OH R = - CH = O

3 - dehidroretinol 3 - dehidroretinal

CH3

Structurile chimice ale vitaminei A2

Vitamina A favorizeaz creterea animalelor tinere prin reglarea i stimularea creterii esutului osos. n procesele de reproducie retinolii asigur funcionarea normal a ovarului i testiculului.Vitaminele A mresc rezistena organismului la infecii prin asigurarea strii normale a epiteliilor i epidermei. Vitaminele A intervin direct n procesul vederii: retinalul intr n structura rodopsinei - protein conjugat din bastonaele retinei - care absoarbe radiaii n u.v. i vizibil, producnd senzaia vizual. Vitaminele D - Calciferolii
CH3 CH3 HO Structura chimica de baza a provitaminelor D HO Biosinteza vitaminelor D R CH3 R

u. v.

CH2 Calciferol

Aciunea biologic a vitaminelor D este cea antirahitic, legat de rolul pe care-l au n reglarea metabolismului fosfo-calcic cu asigurarea unui proces normal de osificare. La nivelul mucoasei intestinale vitamina D stimuleaz absorbia intestinal a calciului i favorizeaz biosinteza proteinei transportoare de Ca2+ n lichidele biologice. Vitamina D stimuleaz i calcifierea matricei osoase. La
76

nivelul rinichiului calciferolii favorizeaz reabsorbia fosfatului anorganic i mobilizarea ionilor de calciu. Lipsa vitaminei D la animalele tinere produce rahitismul, boal caracterizat prin demineralizarea oaselor n cretere; la animalele adulte avitaminoza D are ca rezultat osteomalacia i osteoporoza Vitaminele E tocoferolii se mai numesc i vitaminele antisterilitii, denumire legat de aciunea biologic principal de meninere a sarcinii. Ca structur chimic tocoferolii sunt derivai de croman (benzofuran) i anume 6 hidroxicroman, care n poziia 2 are un metil i un radical saturat cu 16 C (fitol) numit tocol:
CH3 HO H3C CH3 alfa - Tocoferol O CH3 R

Vitaminele E sunt substane uleioase, instabile n aer i lumin, cu puternic aciune antioxidant, datorat structurii lor uor oxidabile. Ca antioxidani, tocoferolii protejeaz lipidele nesaturate - componente ale membranelor celulare de aciunea radicalilor liberi. n cadrul metabolismului intermediar vitaminele E intervin n biosinteza proteinelor, a acizilor nucleici, a hemului.Hipovitaminozele E se manifest cel mai adesea asupra aparatului reproductor, dar afecteaz i hematopoieza, aparatul cardiovascular, sistemul muscular. Vitaminele K filochinone sunt derivai de 2 -metil - 1-4-naftochinon:
O CH3 R O Structura chimica generala a vitaminelor K

Rolul fiziologic al vitaminelor K este legat de procesul de coagulare a sngelui.

77

Rezumat CAPITOL VI: VITAMINE Vitamine Liposolubile -A Retinoli -D Calciferoli -E Tocoferoli -K Menaftone Vitamine Hidrosolibile -B1 tiamina -B2 riboflavina -B6 piridoxina -PP nicotinamide -B3 acid pantotenic -C acid ascorbic Test de autoevaluare l. n structura crei vitamine intr derivatul dehidrogenat al D-ribozei: a). Tiamina; b). Acidul ascorbic; c). Riboflavina; d). Piridoxamina. 2. Care din urmtoarele vitamine poate fi sintetizat din triptofan: a). acidul pantotenic; b). piridoxina; c). nicotinamida; d). biotina. 4.Care sunt sterolii de la care provin vitaminele D2 iD3: a). Ergosterol; b). Colesterol; c). 7-dehidrocolesterol d). Sitosterol 3. Calciferolii intervin n: a). procesul vederii b). coagularea sngelui; c). combaterea sterilitii; d). prevenirea rahitismului.

Rspunsuri corecte: 1 c, 2 c, 3 d, 4 a,c. Teme/ ntrebri de verificare 1. S se menioneze vitaminele din complexul B a cror coenzime particip la reaciile de transfer ale hidrogenului. 2. S se indice vitaminele care particip la procesele de oxidoreducere. 3. S se denumeasc vitamina a crei coenzim ia parte la transferul radicalilor acil i s se exemplifice printr-o reacie chimic. 4. S se precizeze care din vitaminele de mai jos manifest aciune antioxidant: Tiamina, Piridoxina, Acidul ascorbic, Retinolii,

Riboflavina, Tocoferolii.

78

Capitol VII HORMONI

7.1. Definiie, clasificare, rol biologic Hormonii sunt compui biochimici endogeni elaborai de esuturi glandulare specializate i organizate, deversai direct n snge i vehiculai la organele i esuturile "int", unde i exercit aciunea stimulatoare, reglatoare i integratoare asupra proceselor fiziologice i metabolice (hormao = a stimula). Hormonii glandulari sunt secretai de ctre glandele endocrine i anume: hipofiza, tiroida, paratiroida, timusul, pancreasul, suprarenalele i glandele sexuale. La mamifere, rol hormonal temporal ndeplinete i placenta. n afar de hormonii glandulari, mai exist i neurohormonii secretai de celulele nervoase, precum i hormonii tisulari, elaborai i secretai de alte celule specializate,- n afara glandelor, care sunt apoi preluai de snge sau alte lichide biologice i transportai la organele efectoare, unde i exercit la distan activitatea lor specific, de aceea au fost numii i mesageri chimici. Transportul hormonilor se realizeaz cu ajutorul sistemelor circulator i nervos, ceea ce asigur transmiterea informaiei de la un organ la altul, integrarea proceselor metabolice i biochimice n multitudinea reaciilor care asigur un echilibru armonios i o bun funcionare a ntregului organism. 7.2. Reglarea secreiilor hormonale Dezvoltarea armonioas a organismului animal, desfurarea normal a diferitelor funcii ale acestuia sunt condiionate de producerea continu a hormonilor, att calitativ, ct i cantitativ, ceea ce impune ca funcia glandelor endocrine s fie riguros reglat i controlat. Reglarea hormonal se face pe dou ci principale: - reglarea hormonal pe cale nervoas are la baz principiul ierarhiei, n care la cel mai nalt nivel se afl sistemul nervos, care prin factorii hipotalamici controleaz activitatea glandei hipofize. Hipofiza, la rndul ei, are sub control activitatea glandelor endocrine periferice, iar acestea prin secreiile lor influeneaz funciile organelor efectoare.

79

- autoreglarea hormonal prin mecanism feed-back, pozitiv sau negativ, prin care concentraia produilor de reacie influeneaz desfurarea proceselor la nivele reglatoare superioare. O trstur unic a sistemului endocrin este c producerea fiecrui hormon este reglat - direct sau indirect - de activitatea metabolic a hormonului nsui.

HIPOTALAMUS Factori eliberatori Factori inhibitori HIPOFIZA H glandotropi GLANDE PERIFERICE H glandulari Organ efector

stimulare inhibare stimulare inhibare mare mica conc.H. - sange

modificarea activitatii enz. inductia/represia enz. activitati metabolice specifice

Reglarea secreiei hormonale 7.3. Precursori hormonali Hormonii cu structur polipeptidic sau proteic sunt biosintetizai sub forma unui precursor hormonal, care este n general o protein sau o polipeptid cu molecul mai mare (caten polipeptidic mai lung) i de obicei inactiv. Prin scindare proteolitic sub aciunea unei proteaze specifice situat n reticulul endoplasmatic sau n aparatul Golgi, se elibereaz hormonul activ. 7.4. Mecanismul de aciune al hormonilor Hormonii, denumii i "mesageri chimici" sunt substane cu structuri chimice diferite, deci i cu aciuni chimice diferite cu rol n reglarea proceselor metabolice din celulele "int". La nivel de celul hormonii interacioneaz cu receptorii hormonali - molecule specializate de natur proteic cu afinitate specific pentru hormonul respectiv, capabile s recunoasc i s transmit mesajul chimic. n urma acestei interaciuni se formeaz un complex caracteristic hormon-receptor, care reprezint un mesager intermediar n reglarea proceselor biochimice din celulele "int". Receptorii hormonali sunt de dou tipuri; - receptori membranari, localizai la suprafaa celulelor int, cu afinitate pentru hormonii hidrosolubili - peptidici i derivai de aminoacizi - care traverseaz mai greu membrana celular;
80

- receptorii intracelulari citoplasmatici cu afinitate pentru hormonii steroidici, liposolubili, care pot traversa mai uor membrana celular. Mecanismele interaciunii hormonilor cu celulele "int" sunt diferite n funcie de structurile chimice ale hormonilor. I. Mecanismul de aciune al hormonilor cu receptori membranari hormonii peptidici, cateocolaminele, prostaglandinele: hormonii cu structur peptidic i cei derivai din aminoacizi acioneaz la suprafaa celulei i necesit un mediator intracelular - mesager secund - capabil s realizeze efecte rapide, condiionate de activarea enzimelor i proteinelor preexistente. Ca mesager secund poate funciona AMP-ciclic (adenozin -3' 5' monofosfat). Etapele mecanismului de aciune a hormonilor peptidici sunt urmtoarele: - formarea complexului hormon-receptor pe suprafaa membranei plasmatice, cuplat cu activarea alosteric a enzimei adenilat ciclaza; - adenilat ciclaza activat catalizeaz reacia de formare a AMP - ciclic prin transformarea ATP, n prezena cationilor de magneziu;

AMPc

AMPc + P - O - P

AMPC intervine ca mesager secund realiznd efectele intracelulare ale hormonilor - mesageri primi - fixai de receptorii membranari. - AMPC format intracelular activeaz proteinkinazele, prin fixarea sa pe subunitatea reglatoare a acestuia i eliberarea subunitii catalitice din complexul inactiv. - Proteinkinaza activat moduleaz activitatea unor proteine n celulele int prin fosforilare, n urma creia se produce o activare sau o inactivare a acestora. De exemplu, prin fosforilarea enzimelor ce catalizeaz procesele de biosintez, acestea sunt inactivate. Adenilat ciclaza, localizat n membrana celular, poate favoriza diferite procese de membran: permeabilitatea i ca atare transportul membranar de glucide, aminoacizi, cationi, nucleotide. Inactivarea AMPc, deci i a hormonului, are loc prin scindarea sa la 5-AMP, sub aciunea unei fosfodiesteraze specifice; II. Mecanismul de aciune al hormonilor cu receptori citoplasmatici hormoni steroidici: etapele mecanismului de aciune al acestor hormoni sunt: - Hormonii steroizi, eliberai de proteinele serice transportoare, ptrund n celule, respectiv n citosol, unde se leag de receptorii citoplasmatici specifici;

81

- Complexul hormon-receptor citoplasmatic, care reprezit un mesager intracelular, sufer o modificare conformaional, n urma creia poate ptrunde n nucleu; - n nucleu complexul hormono-receptor citoplasmatic se leag de receptorii nucleari - proteine specifice din cromatina nuclear i activeaz sinteza de ARNm din ADN (transcrierea), urmat de biosinteza de proteine enzimatice. - Procesul se ncheie prin decuplarea complexului din cromatin i ntreruperea transcrierii. Prin acest mecanism se explic intervenia hormonilor steroizi n procesul de biosintez a proteinelor enzimatice.
Pre - prohormon Reticul endoplasmatic Prohormon Aparat Golgi Hormon

7.5. Clasificarea hormonilor: Dup structura chimic hormonii se clasific n: a). Hormoni derivai din aminoacizi, printre care se numr hormonii medulosuprarenali i tiroidieni; b). Hormoni cu structur peptidic sau proteic; hormoni hipofizari, epifizari, hipotalamici, pancreatici, paratiroidieni; c). Hormoni steroizi, dintre care fac parte hormonii corticosuprarenali, hormonii sexuali; d). Hormoni derivai din acizi grai, n categoria crora se ncadreaz prostaglandinele. 7.5.1. Hormoni derivai din aminoacizi Principalii hormoni derivai din aminoacizi aromatici sunt; hormonii medulosuprarenali (adrenalina i noradrenalina) i hormonii tiroidieni (tiroxinele). Hormonii medulosuprarenali (catecolamine): Adrenalina i noradrenalina-sunt secretai de zona medular a glandei suprarenale i de celulele ganglionare ale sistemului nervos simpatic. Sub aciunea luminii i a oxigenului i pierd activitatea hormonal.

82

COOH CH - NH 2 CH 2 Tirozinaza oxidare OH Tirozina CH 2 - NH 2 CH-OH

COOH CH - NH 2 CH 2

DOPAdecarboxilaza - CO 2

NH 2 CH 2 CH 2

[O]

OH OH DOPA

OH OH DOPA-amina CH 2-NH - CH 3 CH - OH

DOPA-amina hidroxilaza

transmetilaza S- adenozilmetionina

OH OH D(-)Noradrenalina

OH OH D(-)Adrenalina

Aciunea fiziologic i biochimic - Principala aciune fiziologic a catecolaminelor este cea asupra sistemului vascular sangvin. Adrenalina menifest aciune de contractare a vaselor sangvine periferice, ceea ce duce la o mrire a tensiunii arteriale i la o accelerare a btilor inimii. Noradrenalina manifest aciune vasodilatatoare, dar este vasoconstrictoare asupra rinichilor, splinei, ficatului i pielii. Efectele lor sunt ns de scurt durat, deoarece sunt inactivai prin oxidare. Ambii hormoni sunt efectori ai strii nervoase i au un rol nsemnat n transmiterea fluxului nervos n sistemul nervos simpatic. Rolul biochimic al catecolaminelor: - n metabolismul glucidelor, catecolaminele duc la mobilizarea rezervei glicogenice, i o cretere consecutiv a concentraiei de glucoz n snge (efect hiperglicemiant). Aceast funcie biochimic a adrenalinei se explic prin aciunea asupra fosforilazei, care duce la epuizarea glicogenului hepatic i apoi a celui muscular. n metabolismul lipidelor catecolaminele intervin n lipoliz i n metabolismul lipidelor plasmatice. Efectul lipolitic al catecolaminelor necesit prezena glucocorticosteroizilor. Ei mresc sinteza adenilatciclazei.n circuitul hidromineral, adrenalina provoac o cretere a concentraiei ionilor Mg2+, Ca2+. Hormoni tiroidieni (iodtironine):-Glanda tiroid secret o serie de derivai iodurai dintre care prezint activitatea hormonal marcant urmtorii: - 3,3' - diiodtironina (T2), 3,5,3' - triiodtironina (T3), 3,5,3',5' - tetraiodtironina (T4). n glanda tiroid hormonii tiroidieni se gsesc sub form de tiroglobulin.
I HO I 3' 5' O I I 3 5' CH2 - CH - COOH NH2

3,5,3',5' - tetraiodtironina (tiroxina) T 4

83

Biosinteza acestor hormoni are loc n glanda tiroid. Iodul din alimente, introdus sub form de anion I--, este absorbit prin intestin i preluat de snge i transportat la tiroid unde este oxidat la atom de iod. Atomii de iod iodureaz nucleul tirozinic din tiroglobulin cu formare de tiroglobulin iodurat care prin cuplare oxidativ i eliberarea prin hidroliz a globulinei formeaz iodtironina. Rolul biochimic- Aciunile majore ale iodtiroinelor pot fi cuprinse n trei grupe; aciune somatotrop, calorigen i trofic general. Aciunea somatotrop const n creterea i dezvoltarea organismului, ca urmare a interveniei iodtironinelor n stimularea biosintezei proteinelor. Efectul calorigen al iodtironinelor const n stimularea proceselor de oxidoreducere celular, intervenind n cuplarea oxidrii cu oxidarea fosforilant. Rolul trofic al iodtironinelor const ndeosebi n stimularea biosintezei proteinelor, lipoproteinelor plasmatice i a adenilatciclazei. Histamina este o amin biogen provenit din histidin ce stimuleaz secreia glandelor exocrine, dilat capilarele,crete permeabilitatea membranelor pentru proteine. Histamina particip la rspunsul anafilactic i determin stri alergice prin efecte de cretere a sensibilitii organismului. Serotonina (5hidroxitriptamina) este amina biogen provenit de la triptofan secretat de celulele creierului i tiroid i rspndit n cantiti mari n sistemul nervos central, splin, plmni, n mucoasele gastrointestinale, snge. Serotonina are proprieti vasoconstrinctoare, acioneaz asupra musculaturii netede din vasele sanguine, aparatul respirator, tractul gastrointestinal. La nivelul sistemului nervos central serotonina favorizeaz transmisia influxului nervos, acionnd ca un neuromodulator. Tiramina i dopamina sunt amine biogene provenite de la tirozin i dihidroxifenilalanina. Aceste amine au rol n stimularea contraciei musculaturii netede a uterului i n creterea presiunii arteriale. Dopamina particip n sistemul nervos la controlul motricitii organismului i este un precursor n biosinteza hormonilor medulosuprarenali.Acidul - aminobutiric (GABA) este o amin biogen rezultat prin decarboxilarea acidului glutamic n esutul nervos. Are rol de mediator i modulator al transmiterii impulsului nervos. Asupra sistemului nervos central are o aciune inhibitoare. 7.5.2. Hormoni cu structur peptidic sau proteic Cei mai importani hormoni cu structur peptidic sunt hormonii hipotalamici, hipofizari, pancreatici, paratiroidieni.

84

Unii

dintre

aceti

hormoni(insulina,

glucagonul,

STH,

ACTH,

parathormonul,etc) sunt secretai sub form inactiv de prohormoni cu masa molecular mai mare, care sub aciunea specific a enzimelor din glanda endocrin, sunt secretai sub form de hormoni i transportai de ctre snge la organele "int" asupra crora acioneaz. Hormoni hipotalamici reglatori sunt din punct de vedere structural, peptide cu grad mic de policondensare. Se cunosc 10 hormoni hipotalamici cu funcii de eliberatori sau inhibitori ai hormonilor hipofizari. Pe lng aceste relaii ntre hipotalamus i hipofiz mai exist i altele: astfel, ocitocina i vasopresina, hormoni secretai de hipotalamusul anterior sunt transportate n hipofiza anterioar, de unde sunt eliberate n snge. Reglarea endocrin are loc n organism prin intermediul unui sistem ierarhizat constituit din hipotalamus-hipofiz-glande periferice-organ efector. n cadrul acestui sistem, nivelul reglator cel mai nalt este reprezentat de hipotalamus. n hipotalamus sunt secretai o serie de hormoni care stimuleaz secreia hormonilor hipofizari i care poart numele de factori de eliberare sau liberine, pe lng care sunt secretai i unii hormoni care inhib secreia hormonilor hipofizari, denumii statine. Tabel 7.1. Hormoni hipotalamici hipofizotropi Nume uzual(prescurtare) Sinonim

Tiroliberina (TRH) - hormon de eliberare a tirotropinei; Corticoliberin (CRH) - hormon de eliberare a corticotropinei; Folliberin (FSH-RH) - hormon de eliberare a hormonului foliculostimulator; Luliberin (LH-RH) - hormon de eliberare a hormonului luteotrop; Somatoliberin (SRH) - hormon de eliberare a hormonului somatotrop; Melanoliberin (MRH) - hormon de eliberare a hormonului melanotrop; Prolactoliberin (PRH) - hormon de eliberare a prolactinei; Melanostatin (MIH) - hormon inhibitor al eliberrii de hormon melanotrop; Prolactostatin (PIH) - hormon inhibitor al eliberrii de prolactin; Somatostatin (STH-IH) - hormon inhibitor al eliberrii de somatotropin.

85

Hormoni hipofizari Hormoni adenohipofizari Hormonul de cretere(HGH) sau hormonul somatotrop(STH)-intervine ca stimulator al intregului metabolism,favoriznd biosinteza proteinelor, stimulnd catabolismul lipidic prin intensificarea lipolizei i diminund metabolismul glucidic prin intensificarea glicolizei. Tulburrile de hiposecreie se manifest prin nanism hipofizar. La aduli apare obezitate, hipoglicemie. Hipersecreia apare n adenomul hipofizar i se manifest prin gigantism sau acromegalie. Hormonul adrenocorticotrop (ACTH) (corticotropina) este secretat n celulele bazofile ale adenohipofizei, iar n cantitate mai mic i n placent i hipofiza intermediar. Hormonul izolat din adenohipofiza diferitelor specii de animale este o polipeptid avnd M = 4500 - 4600, coninnd 39 de aminoacizi cu un procent de 2,3% sulf. Primii 23 aminoacizi sunt identici la diferite specii i reprezint fragmentul activ al hormonului. Aciune fiziologic i biochimic-rolul principal al ACTH este stimularea secreiei hormonilor steroizi de ctre corticosuprarenal. Pe lng aceast aciune, ACTH mai produce i o serie de modificri metabolice, acionnd sinergic cu somatotropinele n producerea hiperglicemiei i intervenind n mobilizarea acizilor grai liberi din esutul adipos. Aciunea fiziologic general a acestui hormon coincide n mare msur cu aciunea hormonilor suprarenali glucocorticoizi. ACTH-ul acioneaz n procesele de mai sus prin intermediul hormonilor steroizi i prin sistemul AMP-ciclicadenilatciclazei. Hormonul tirostimulator (TSH) este secretat de celulele bazofile tirotrope ale adenohipofizei, sub controlul hormonului hipotalamic eliberator (TRH). Din punct de vedere structural, este o glicoprotein cu masa molecular de 28000 coninnd aproximativ 8% glucide. Aciunea fiziologic i biochimic-TSH acioneaz asupra tiroidei, stimulnd printr-un mecanism AMP-ciclic adenilatciclaza toate etapele de biosintez al hormonilor tiroidieni. Prin intermediul acestor hormoni intervine n procesele redox, activnd reaciile exerogenice i controleaz intensitatea oxidoreducerilor tisulare, a utilizrii glucozei, a sintezei fosfolipidelor, a ARN. Hormoni gonadotropi. Hormonii gonadotropi (gonado-tropinele) controleaz funciile glandelor sexuale. Sub controlul hormonilor hipotalamici corespunztori hipofiza secret urmtoarele gonadotropine:

86

- hormonul foliculostimulator (FSH) care acioneaz asupra dezvoltrii glandelor sexuale; - hormonul stimulator al celulelor interstiiale (ICSH) i hormonul luteinizant (LH) sunt hormoni pereche, LH acioneaz n organismul feminin, iar ICSH n organismul masculin, activnd secreia hormonilor sexuali (estron i testosteron) i transformarea folicului n corp galben (efect luteinizant); - hormonul lactotrop (LTH) denumit i prolactin, stimuleaz secreia de lapte n glanda mamar, inducnd biosinteza lactozosintetazei, enzim care asigur sinteza lactozei. Se gsete n cantiti apreciabile n hipofiza de oaie. Din punct de vedere structural gonadotropinele hipofizare sunt glicoproteine, care spre deosebire de hormonii sexuali nu prezint specificitate de specie. Hormonii hipofizei intermediare Hipofiza intermediar secret hormonii stimulatori ai melanocitelor (MSH) sau hormoni melanofori cu rol n procesul de pigmentare a pielei. Hormonul melanocit este din punct de vedere chimic o oligopeptid. Rolul biologic al MSHului const n stimularea activitii melanocitelor i n consecin procesul de pigmentare al pielii att la animalele superioare, ct i la cele inferioare. Hormonii neurohipofizari Vasopresina i ocitocina sunt hormoni cu structur octo peptidic asemntoare. Rolul biologic al vasopresinei const n aciunea ei hipertensiv, ca urmare a contraciei fibrelor musculare netede din arteriole i mririi presiunii arteriale (aciune vasopresoare). Rolul biologic al ocitocinei const n stimularea contraciilor musculaturii netede a uterului, avnd rol important n declanarea i intensificarea contraciilor uterine, deci favorizeaz expulzarea ftului. Ocitocina stimuleaz de asemenea, secreia glandei mamare i producerea de lapte. Hormoni pancreatici Pancreasul este o gland mixt care posed att funcia exocrin productoare de enzime, ct i funcie endocrin, ndeplinit de insulele lui Langherhans. Insulina este un polipeptid cu 51 aminoacizi alctuit din dou catene diferite ca numr de aminoacizi. Insulina acioneaz n principal n cadrul metabolismului glucidic avnd efect hipoglicemiant, determinnd scderea glicemiei prin stimularea catabolizrii glucozei n esuturi. Insulina acioneaz asupra metabolismului lipidic i anume inhib lipoliza i stimuleaz biosinteza
87

gliceridelor prin utilizarea parial a glucozei.

Aciunea insulinei asupra

metabolismului proteic const n stimularea biosintezei proteinelor (aciune anabolizant) datorit acumulrii crescute de aminoacizi n celule, precum i a creterii sintazei de ARNm. Hiposecreia insulinei produce diabetul zaharat (Diabetes melytus) care se manifest prin modificri profunde ale metabolismului glucidic exprimate prin hiperglicemie, glicozurie, poliurie. Totodat se produc tulburri i n metabolismul lipidic: creterea lipolizei i a biosintezei corpilor cetonici, acidoz. Glucagonul este secretat de celulele din insulele Langherhans. Glucagonul este o polipeptid alctuit din 29 aminoacizi. Glucagonul i exercit aciunea ndeosebi la nivelul ficatului i a esutului adipos. Glucagonul are o aciune hiperglicemiant, antagonist cu a insulinei. Aciunea global a glucagonului este cea catabolizant, spre deosebire de aciunea anabolizant a insulinei. Efectul hiper glicemiant al glucagonului este n permanent echilibru cu efectul hipoglicemiant al insulinei, relaia dintre aceti doi hormoni modulnd concentraia activ de glucoz din circulaie. Hormonul paratiroidian (parathormon): Aciunea biologic principal a acestui hormon se manifest la nivelul metabolismului fosfo-calcic. Parathormonul are rolul de a menine concentraia intra- i extracelular a ionilor de calciu, ceea ce implic participarea sa la procesele de absorbie gastrointestinal a calciului, de depunere i mobilizare din oase i de excreie renal a calciului i fosforului. Calcitonina este un hormon cu structur polipeptidic alctuit din 32 aminoacizi, secretat de glandele paratiroide, dar i de ctre tiroid. Calcitonina are o aciune hipocalcemiant, antagonist aciunii parathormonului. Calcitonina regleaz calcemia, inhib mobilizarea calciului i fosforului din oase.Calcitonina stimuleaz mineralizarea oaselor, ceea ce determin scderea concentraiei sanguine de calciu i fosfat. Hormoni gastrointestinali i renali: mucoasa gastrointestinal secret o serie de substane de natur peptidic cu proprieti hormonale. Acetea sunt considerai hormoni tisulari fiind secretai de celule specializate neconstituite n glande, care manifest aciuni locale la nivelul esuturilor. Cei sunt gastrina, secretina, colecistokinina, eritropoietina, mai importani

angiotensinele,

plasmakinininele.

88

Hormonii steroizi: sunt secretai de glandele suprarenale i glandele sexuale. n organism aceti hormoni se formeaz prin catabolizarea colesterolului. Hormonii steroizi au la baz structura steranului pe care sunt grefate diferite grupri chimice funcionale. Din grupa hormonilor steroizi fac parte hormonii corticosuprarenali i cei sexuali. Hormonii corticosuprarenali (corticosteroizi) sunt secretai de regiunea cortical a suprarenalei sub controlul direct al hormonilor hipofizari (ACTH) i ai factorilor hipotalamici corespunztori, CHR. ACTH se fixeaz pe receptorii de membran a corticosuprarenalei, de unde acioneaz prin intermediul sistemului AMP ciclic-adenilat ciclaza, care activeaz mecanismele implicate n biosinteza acestor hormoni. Hormonii corticosteroizi au ca structur de baz un derivat al steranului numit pregnan cu 21 atomi de carbon. Toi aceti hormoni prezint o dubl legtur C4 - C5, dou funciuni ceto la C3 - C20, precum i o grupare alcool la C21.
CH 3 CH 2

Pregnan

Hormoni corticosteronul.
HO

glucocorticoizi

(glucotropi)

sunt:

cortizolul,

cortizonul,

OH CO - CH2OH O

OH CO - CH2O

Cortizol

O Cortizon

Aciune

fiziologic

biochimic-principala

aciune

hormonilor

glucocortizoizi se manifest n reglarea metabolismului glucidic. Manifest aciune antiinflamatoare i antialergic i sunt antagonitii adrenalinei i noradrenalinei, modernd tensiunea arterial produs n stri de stress. Hormonii mineralcorticoizi (mineralotropi): sunt: aldosteronul, 11deoxicorticosteron i 11- deoxicortizol a cror structur chimic este analoag cu a hormonilor glucocorticoizi. Cea mai intens activitate mineralcorticoid o manifest aldosteronul.
89

CHO HO CO - CH3 CO-CH3

O Aldosteron 11 - Deoxicorticosteron

Aciune fiziologic i biochimic-Hormonii mineralcorticoizi influeneaz metabolismul hidromineral, prin aciunea lor la nivelul tubilor renali, unde regleaz echilibrul apei i a unor ioni. Aa de exemplu, hormonii mineralcorticoizi activeaz reabsorbia apei i a ionilor de sodiu i favorizeaz eliminarea crescut a ionilor de potasiu i fosfat. Hormonii corticoizi sexuali Corticoizii sexuali cu activitate androgen sunt: adrenosteronul,

androstandiolul, 11-hidroxiandrostendionul.
O OH

O Androstendion

HO Androstandiol

Hormonii glandelor sexuale Hormonii sexuali au structur analoag hormonilor corticosuprarenali, cu absena catenei laterale de la C17; ei conin 19 atomi de carbon, din care cauz se mai numesc i C19 steroizi. Dintre hormonii androgeni, cel mai activ este testosteronul, a crui molecul are o grupare ceto la C3, o dubl legtur la C4-C5 i o grupare hidroxil la C17. Activitatea fiziologic i biochimic principal a acestor hormoni este cea androgenvirilizant care const n controlul apariiei i dezvoltrii organelor sexuale i a caracterelor sexuale secundare masculine.
OH

O Testosteron

Hormonii estrogeni sunt secretai de ovar i au un rol important n producerea estrului i dezvoltarea caracterelor sexuale femele secundare. Hormonii estrogeni apar n tot timpul gestaiei, concentraia lor antingnd valori maxime nainte de ftare.

90

OH

OH

Estradiol

OH

Estrona

Hormoni derivai din acizi grai Prostaglandinele- provin prin metabolizarea unor acizi grai polinesaturai superiori, cel mai adesea acidul arahidonic. Prostaglandinele acioneaz asupra adenilat ciclazei inhibnd formarea de AMP-ciclic. n acest mod prostaglandinele influeneaz secreia unor glande endocrine (tiroid, paratiroidele, suprarenalele, ovar), n acest fel ndeplinind rolul de modulatori ai activitii hormonale. Principala aciune metabolic a prostaglandinelor o constituie aciunea antilipolitic, antagonist efectului lipolitic al adrenalinei sau a altor hormoni.De asemenea, prostaglandinele intervin n metabolismul apei i al electroliilor mresc debitul urinar n excreia de sodiu, au efect hipercalcemiant.

Rezumat CAPITOL VII Hormoni -Derivai din aminoacizi -Peptidici -Steroizi -Derivai din acizi grai. Test de autoevaluare 1. Hormonii medulosuprarenali au ca precursori n organism urmtorii aminoacizi. a). Treonina b). Tirizina; c). Prolina; d). Fenilalanina. 2.Care din aminele biogene de mai jos provin din decarboxilarea histidinei: a). Serotonina; b). Tiramina; c). Histamina; d). Dopamina Rspunsuri coecte: 1 b, 2 c, 3 c.
91

3.Care din urmtorii hormoni conin iod n molecul: a). glucagon; b). ocitocina; c).tiroxine; d). somatotropina.

Teme 1. Alctuii un tabel cu glandele endocrine i hormonii secretai: Glanda secretoare Denumirea hormonului secretat Natura hormonului Organul asupra creia acioneaz

2. S se explice rolul biochimic al vasopresinei i ocitocinei. 3. Menionai care sunt hormonii secretai de corticosuprarenal i artai ce rol ndeplinesc. 4. S se precizeze direciile de aciune ale postaglandinelor.

92

Capitol VIII METABOLISM

CONSIDERATII GENERALE Organismele vii se caracterizeaz prin schimburi permanente cu mediul nconjurtor, precum i printr-o autorennoire continu a componentelor chimice care le alctuiesc, proprieti cunoscute sub numele de metabolism. Inexistent la materia nevie, metabolismul reprezint esena vieii, ntruct din el deriv toate funciile de baz ale materiei vii: creterea, nutriia, respiraia, reproducerea, ereditatea, variabilitatea. Fa de mediul nconjurtor, organismele vii se comport ca sisteme deschise care vor avea cu mediul nconjurtor att schimburi de energie, care se realizeaz prin metabolism. Se poate afirma deci c metabolismul reprezint totalitatea transformrilor fizice i chimice, de energie i informaie care au loc ntr-un organism viu. Metabolismul este un proces unitar alctuit din dou procese: catabolismul i anabolismul, care se gsesc ntotdeauna n echilibru. Prin procesul de degradare sau catabolism substanele organice (glucide, lipide, proteine) provenite din mediul nconjurtor se degradeaz n compui mai simpli i energie, care se depoziteaz sau se elimin. Prin procesul de biosintez sau anabolism, organismele vii i sintetizeaz din substanele luate din mediul nconjurtor compuii structurali i funcionali necesari. Un echilibru adecvat ntre catabolim i anabolism este obligatoriu pentru buna funcionare a organismului animal. Metabolismul se refer nu numai la schimburile de substan ci i la schimburile de energie. Astfel, n cadrul anabolismului, transformrile chimice care au loc decurg cu consum de energie (reacii endoergice), pe cnd n cadrul catabolismului se produc reacii chimice cu eliberare de energie (exergonice). Metabolismul furnizeaz energia necesar meninerii vieii organismului, energia degajat fiind condiia de baz pentru meninerea structurii labile a protoplasmei vii. Reducerea aportului de energie, adic ncetarea metabolismului, duce la modificri distructibile i ireversibile n structura materie vii.
93

Metabolismul cuprinde totalitatea transformrilor complexe fizice i chimice pe care substanele alimentare le sufer n organism, adic digestia, absorbia, transportul, metabolismul intermediar i excreia. Digestia reprezint totalitatea transformrilor mecanice (masticarea), fizice (dizolvarea, emulsionarea, mbibarea )i chimice (hidroliza, esterificarea, sinteza) pe care alimentele le sufer sub aciunea enzimelor din aparatul digestiv pn ce ajung la forma fizic i chimic cea mai simpl n care pot ptrunde n organism i pot fi asimilate de acesta. Prin absorbie, substanele nutritive din hran transformate n componente cu molecule mici, ptrund n mediul intern al organismului. Circulaia sngelui asigur transportul oxigenului i a substanelor nutritive spre toate celulele organismului, precum i eliminarea prin organele excretoare a compuilor corespunztori. Metabolismul intermediar cuprinde totalitatea reaciilor biofizice i biochimice care au loc la nivel de celul, procese care intervin n schimburile dintre protoplasm i substanele aduse din exterior. Metabolismul are loc prin secvene de reacii catalizate de enzime cu formarea unui nmr de produi intermediari. Substanele care apar n procesele metabolice se numesc metabolii. In cadrul metabolismului intermediar se disting dou grupe mari de transformri:reacii de degradare (catabolice); reacii de biosintez (anabolice) In cadrul reaciilor de degradare substanele complexe sunt scindate n substane simple. In aceste transformri energia eliberat este nmagzinat n legturile macroeergice din ATP. Caracteristic pentru procesele catabolice este faptul c ele converg spre o cale final comun dedegradare pn la CO2 i H2O a glucidelor, lipidelor i protidelor. In urma transformrilor metabolice ale glucidelor, lipidelor i protidelor rezult acid acetic activat care constituie punctul de legtur anabolic i catabolic din organism. Din acid acetic activat se formeaz mai multe clase de compui organici. Reaciile de biosintez au loc n sens invers i anume din substane cu structur mai simpl se sintetizeaz enzimatic componenii moleculari ai celulei (glucide, lipide, proteine, acizi nucleici). Aceste reacii au loc cu consum de energie. Procesele catabolice i anabolice au loc concomitent n celul i sunt nsoite de schimburi de energie; desfurarea acestor procese are loc n
94

compartimente celulare distincte cu mecanisme de reglare diferite, ceea ce face ca ele s fie ireversibile. n procesele metabolice organismul aplic cu strictee principiul economiei maxime a compuilor i reaciilor, adic pornin de la un numr mic de compui iniiali s se obin un numr foarte mare de compui intermediari i finali. Energetica metabolismului In cadrul proceselor metabolice transformrile substanelor sunt nsoite de schimbul i transformarea energiei; toate reaciile biochimice sunt nsoite de consum sau eliberare de energie. Astfel, reaciile de descompunere a substanelor complexe n substane mai simple sunt nsoite de obicei de o scdere a energiei libere a substanelor care se transform, n schimb sintezele biochimice au loc cu consum de energie. Un efect energetic deosebit de important l au reaciile de oxidoreducere, care reprezint principala surs de energie n organismul animal. Reactiile de degradare furnizeaza energia necesara reactiilor de biosinteza; orice intensificare a proceselor de biosinteza in organismele vii, pentru care este necesara energia libera, trebuie sa fie insotita de o intensificare a proceselor de degradare a substantelor care furnizeaza energia necesara realizarii acestor biosinteze. O mica parte din energia catabolica este transformata in caldura. Echilibrul chimic care exista intre diferite procese biochimice se realizeaza cu ajutorul anumitor sisteme de reglare, prin mecanisme specifice sau nespecifice. Reaciile biochimice pot fi controlate enzimatic i hormonal prin mecanisme interdependente cu ajutorul efectorilor enzimatici. PROCESE GENERALE N CATABOLISM Procese de oxidoreducere n organismele vii Calea de baz pentru valorificarea glucidelor, lipidelor, proteinelor este oxidarea biologic numit i respiraia sau proces catabolic prin care moleculele substanelor nutritive sunt degradate treptat sub aciunea oxigenului atmosferic cu formare de CO2 i eliberare de energie. In urma procesului de oxidare biologic, toate cele trei clase principale de substane nutritive (G,L,P) sunt transformate ntr-un intermediar comun i anume acetilcoenzima A sau acetatul activ; acesta se catabolizeaz n mitocondrii pn la CO2 i H2O n prezena O2 n cadrul a dou procese: Ciclul Krebs sau ciclul acizilor tricarboxilici, n care acetatul activ, prin intermediul unor acizi tricarboxilici este transformat n CO2 i atomi de hidrogen activai sub forma redus a coenzimelor unor dehidrogenaze;
95

Lanul transportorilor de hidrogen i electroni numit i lanul respirator sau catena de respiraie n care hidrogenul fixat pe dehidrogenaze este activat n continuare pn la starea de proton, prin preluarea electronilor i transportul acestora la oxigen, pe care-l activeaz sub form de anion, fiind astfel posibil formarea apei: 2 H+ + O2- = H2O In anumite etape ale acestei activri n care se elibereaz energie, se formeaz i ATP din ADP i Pa, proces numit i fosforilare oxidativ. Oxidarea biologic are loc n mitocondriile tuturor celulelor animale aerobe sub aciunea sistemelor multienzimatice care de la acest nivel catalizeaz transformrile biochimice respective, rolul acesteia fiind n primul rnd cel energetic. Ciclul Krebs Procesul biochimic prin care acetatul activat (CH3CO SCoA) provenit prin metabolizarea G,L,P, este catabolizat n scop energetic printr-o succesiune de reacii iniiat de condensarea sa cu acidul oxalil acetic, se reia ciclic odat cu regenerarea oxalil-acetatului. Etapele Ciclului Krebs Acetilcoenzima A se condenseaz cu acidul oxalil acetic sub aciunea citrat sintetazei, avnd loc totodat eliberarea hidrolitic a coenzimei A. Prima reactie este cea de condensare intre acidul acetic activat si acidul oxalil acetic cu formare de acid citric:
COOH O HOOC - H 2C - C - COOH + CH 3- CO SCoA + H2O acetil-CoA acid oxalilacetic
citratsintetaza

CH2 HO - C - COOH + H CH2 COOH acid citric

SCoA

Izomeria acidului citric. Acidul citric pierde o molecul de ap i trece n acid cis-aconitic care sub aciunea unei enzime numit aconitaz fixeaz o molecul de ap i trece n acid izocitric: CH2 - COOH HO - C - COOH CH2- COOH Acid citric - H2O CH - COOH C - COOH + H2O CHOH - COOH CH - COOH CH2 - COOH Acid izocitric

CH2- COOH Acid cis-aconitic

Oxidarea acidului izocitric are loc n prezena izocitrat dehidrogenazei cu NAD+ din mitocondrii cu transformarea grupei OH secunde n grupare cetonic cu
96

formarea acidului oxalil succinic, care este decarboxilat spontan la acidul cetoglutaric:
COOH CH - OH HC - COOH CH
2

COOH + NAD+ + - NADH + H C=O HC - COOH CH

2

COOH C=O - CO 2 CH2 CH 2 COOH acid alfa - cetoglutaric

COOH acid izocitric

COOH acid oxalil succinic

Decarboxilarea oxidativ a acidului cetoglutaric este realizat de un sistem enzimatic complex cu formare de succinil-CoA: CO - COOH + HSCoA + NAD CH2 CH2 COOH acid alfa-cetoglutaric Formarea acidului succinic CO SCoA + CH2 + NADH + H + CO2 CH2 COOH succinil CoA conine o legtur

Succenil-CoA

macroergic care este n general utilizat pentru formare de ATP din ADP i fosfat anorganic:
CO SCoA + ADP + H3 PO4 CH2 CH2 COOH succinil CoA CH2 - COOH + ATP + HSCoA CH2 - COOH acid succinic

Oxidarea acidului succinic are loc n prezena succinat dehidrogenazei care are drept coenzim FAD-ul cu formare de acid fumaric: CH2 - COOH CH2 - COOH acid succinic + FAD HOOC - CH HC - COOH acid fumaric + FADH2

Hidratarea acidului fumaric n prezena fumarazei cu formarea acidului malic:

HOOC - CH HC - COOH acid fumaric

+ H2O

HOOC - CH 2 HO - CH - COOH acid malic

Oxidarea acidului malic are loc n prezena malat-dehidrogenazei cu

NAD , la acid oxalilacetic:

HO - CH - COOH CH2 - COOH acid malic + + NAD O = C - COOH + + NADH + H

CH2- COOH acid oxalilacetic

97

Bilanul energetic al ciclului ATC. Acest ciclu constituie o surs

principal de energie pentru organism. Organismul utilizeaz aceast energie n mare parte pentru meninerea temperaturii corpului i pe de alt parte ca energie chimic cu formare de ATP ctigat prin fosforilare oxidativ. Un mol de NADH + H+ este echivalent cu 3 moli de ATP, iar un mol de FADH2 este echivalent cu 2 moli de ATP (coerspunde la o cantitate total de 12 moli ATP).
Catena de respiraie i fosforilarea oxidativ

Formarea apei din hidrogenul reultat prin dehidrogenarea substratelor i oxigenul preluat din aer este procesul metabolic hotrtor n producerea de energie i are loc n mitocondriile fiind continuare a ciclului Krebs. Energia reaciei de formare a apei se elibereaz treptat prin parcurgerea
+ unei catene de sisteme redox alctuit din transportori de H i e-: NADH+ + H +,

FAD, coenzima Q, citocromii b, c1, c, a i a3. Coenzimele care particip la procesele redox pot fi n stare redus sau oxidat, unele pot prelua hidrogenul de la substrat reducndu-se, altele preiau numai electronii. Succesiunea lor n catena de respiraie depinde de valoarea potenialului redox a substratelor. Coenzima iniial depinde de potenialul redox al substratului, iar cea final trebuie s fie capabil s transfere electronii oxigenului i s-l transforme n O2-: acesta este citocromul a3 care este uor autooxidabil. Schematizat, un lan respirator poate fi reprezentat astfel:
RH2 - 2 H
+ + NADH + H - 2 H +

FADH2 - 2 H FAD

CoQH2 - 2 H CoQ

2cit Fe

2+

2 cita3 Fe 2 +

- 2e R NAD
+ 2 e2 citFe3 +

2cita3Fe

3+

1/2 O 2

- 2e

2-

2-

+ 2H

H2O

Lungimea lanului respirator, dat de numrul i natura coenzimelor participante la transportul hidrogenului i electronilor este data de potenialul redox al substratului.
Oxidarea fosforilant este procesul prin care energia eliberat odat cu

transportul hidrogenului este utilizat pentru fosforilarea ADP la ATP. Legtura macroergic se poate forma numai n unele etape ale lanului de oxidare i anume n acele etape n care energia eliberat este mai mare dect energia de formare a legturii macroergice. In schema lanului respirator se formeaz 3 moli de ATP n etapele: NADH2/FAD;CoQH2/cit c1Fe3+ i cit a3Fe2+/oxigen.
98

Ca o regul general, la toate lanurile de oxidare, cnd ncep cu coenzimele NAD+ sau NADP+ se vor forma 3 legturi macroergice, iar cele care ncep cu FAD vor forma dou legturi macroergice.
Rezumat cap. VIII Metabolism

Metabolism: - catabolism -anabolism Transformri metabolice comune : - respiraia celular: -oxidarea carbonului: ciclul ATC -oxidarea hidrogenului: lanul respirator mitocondrial; -formarea ATP prin fosforilare oxidativ cuplat cu lanul respirator mitocondrial.

99

Capitol IX METABOLISMUL GLUCIDELOR

In procesele generatoare de energie din organism metabolismul glucidelor ocup un loc central, glucidele asigurnd cea mai mare parte peste 50% - din energia necesar desfurrii activitii celulare. Indeosebi celula nervoas este dependent de glucoz ca surs de energie. In organismele animalelor superioare glucoza poate constitui depozite de energie sub form de glicogen hepatic sau muscular. La plante acest rol l ndeplinete cu prioritate amidonul. Animalele fiind organisme heterotrofe i procur glucidele pe cale exogen, prin alimentaie, din regnul vegetal i numai cnd aportul acestora este insuficient i pe cale endogen, prin metabolizarea altor substane neglucidice, n special a proteinelor. Metabolismul general al glucidelor cuprinde transformri: digestia, absorbia, transportul, depozitarea, metabolismul intermediar i excreia.
Digestia glucidelor

Glucidele preluate din hran se gsesc n cea mai mare parte sub form de oligo-i poliglucide (amidon, celuloz) cu molecule complexe care nu pot fi absorbite direct prin membrana gastrointestinal, ci numai sub form de monoglucide sau ali metabolii cu molecule mici; de acea glucidele sunt supuse unor transformri biofizice i biochimice cunoscute sub numele de digestie i care constau n principal n scindarea hidrolitic a acestora pe traiectul digestiv, sub aciunea unor enzime specifice. Digestia glucidelor decurge difereniat la animalele monogastrice fa de poligastrice, la mamifere fa de psri, din care cauz se impune tratarea separat a acstora.
Digestia glucidelor la animalele monogastrice

In cavitatea bucal hrana este supus ntr-o msur mai mare transformrilor biofizice i mai puin transformrilor biochimice, aceste din urm constau n hidroliza parial a amidonului sub aciunea - amilazelor salivare cu formare de dextrine i eventual monoglucide.
La nivelul stomacului amidonul este hidrolizat n continuare n timp ce

oligoglucidele i celuloza nu pot fi digerate.

100

In intestinul subire amidonul, glicogenul i oligoglucidele sufer o

transformare hidrolitic complet pn la stadiul de monoglucide.

In intestinul gros celuloza este transformat printr-un proces complex

realizat de microorganismele saprofite. Celuloza este parial transformata n glucoz i aceasta din urm prin fermentaie anaerob n acizi inferiori (acetic, propionic, butiric,lactic) i n unele substane gazoase (CH4, H2, CO2, etc.). Erbivorele monogastrice valorific celuloza n proporie de circa 90%. In final, forma prevalent sub care se absorb glucidele este monoglucidul, ndeosebi glucoza i fructoza.
Digestia glucidelor la rumegtoare

Rumegatoarele au stomacul format din 4 compartimente: 3 prestomace (rumen, retea si foios) si stomacul propriu-zis. Celuloza, care predomina in hrana rumegatoarelor, va suferi un proces complex de digestie sub actiunea enzimelor (celulaze) secretate de catre microorganisme, deoarece prestomacele nu secreta enzime proprii. In prezenta unei cantitati mari de apa, microorganismele transforma toate glucidele, inclusiv celuloza prin hidroliza in oze. Acestea la rndul lor sunt fermentate pna la acizi inferiori care sunt absorbiti ca atare la nivelul rumenului si gaze. O mica parte din glucidele solubile ajung in stomacul propriu-zis, apoi in intestinul subtire unde sunt absorbite. In urma acestor procese de fermentaie acid pH-ul lichidului ruminal rmne totui uor alcalin, datorit sistemelor tampon de bicarbonai i fosfai din saliva diglutit care imprim coninutului su un pH = 5,5 7,5 favorabil dezvoltrii florei microbiene.
Digestia glucidelor la psri este diferit fa de mamifere i aceasta

datorit lipsei enzimelor de la nivelul cavitii bucale, a guei, i stomacului, unde transformrile la care este supus hrana sunt mai ales biofizice. n schimb datorit bacteriilor prezente de-a lungul ntregului tract intestinal ncepnd de la gu, glucidele inclusiv celuloza sunt scindate n totalitate. Scindarea bacterian a celulozei este deosebit de intens n cecum n regiunea proximal a intestinului gros.
Absorbia glucidelor are loc la nivelul intestinului subire sub form de

monoglucide i este n strns legtur cu o serie de transformri biofizice i biochimice care au loc la acest nivel. Absorbia ozelor poate avea loc i n cavitatea bucal sau stomac, dar numai ntr-o msur mai mic. Absorbia intestinal a pentozelor i hexozelor n stare liber are loc prin difuzie simpl,
101

fizic, fr consum de energie cu viteze ce depind de natura ozei n ordinea: galactoz> glucoza > fructoz > manoz > xiloz > arabinoz. n general hexozele au o vitez de absorbie mai mare dect pentozele. ntr-o msur mai mic are loc i o absorbia activ a hexozelor care implic fosforilarea lor n celulele intestinale sub aciunea hexozokinazelor ceea ce mrete viteza lor de absorbie. Acest proces activ necesit un mare consum de ATP, este reglat de hormonii corticosuprarenali i stimulat de unele vitamine din complexul B. Prin fosforilare, hexozele sunt transformate n esteri fosforici, form sub care sunt absorbite prin peretele intestinal.
Transportul i depozitarea glucidelor:

In urma procesului de absorbie hexozele defosforilate sunt vehiculate mpreun cu celelalte oze, sub form liber, pe cale sanguin, spre diferite esuturi i organe, n funcie de nevoile lor energetice sau biosintetice. Principala oz circulant este glucoza, iar glicogenul este forma de depozitare. In metabolismul glucidelor ficatul are un rol important ca organ de tranzit al acestora ntre intestin i circulaia general. Ficatul transform toate ozele n glucoz i las s treac n circulaia sanguin o cantitate mic pentru a asigura o concentraie constant a acesteia, numit glicemie. Glicemia are valori relativ constante (40-100mg/100ml snge) la diferite specii de animale. Restul de glucoza este transformat si depozitat sub forma de glicogen. Procesul de biosinteza a glicogenului se numeste glicogenogeneza iar procesul de transformare in glucoza a substantelor neglucidice se numeste

gluconeogeneza. La toate aceste transformari, la care se adauga lipogeneza din glucide, un rol important il joaca, pe lnga o serie de enzime si urmatorii hormoni: insulina, glucagonul, adrenalina, hormonii hipofizari si corticosuprarenali.
Catabolismul glucidelor

Organismul animal preia glucidele sub form de oze pe care ficatul le transform n glucoz prin reacii de izomerizare, epimerizare. Glucoza din snge n stare liber, circulant, este preluat de ctre celule i fosforilat sub aciunea hexokinazei la glucozo-6-fosfat. Esterul 6 fosforic al glucozei reprezint forma metabolic activ a glucozei fiind componenta de plecare pentru aproape toate transformrile glucidelor. Degradarea glucozo-6-fosfatului are loc pe mai multe ci, cele mai importante fiind: - glicoliza, proces anaerob prin care glucoza este degradat la acid lactic; - glicogenoliza, proces de degradare anaerob a glicogenului la acid lactic;
102

- calea aerob, la acid piruvic, iar prin intermediul ciclului Krebs i a lanului respirator cuplat cu fosforilarea oxidativ, pn la dioxid de carbon i ap cu eliberarea unei cantiti considerabile de energie.
Catalismul anaerob al glucidelor. Glicoliza

Glicoliza sau calea metabolic Embden-Meyerhoff-Parnas reprezint o cale de degradare anaerob a glucozei - provenit din glucoz liber sau glicogen pn la acid lactic. Glicoliza are loc n toate celulele, se desfoar n 11 etape, fiind catabolizat de enzime specifice solubilizate n citoplasm. Energia eliberat n cadrul procesului se nmagazineaz n moleculele de ATP. n esutul muscular glicoliza ncepe de la glicogen, n celelalte esuturi de la glucoz.
Etapele glicolizei 1. Fosforilarea glucozei. Pentru a intra n procesul de glicoliz, glucoza

este activat prin fosforilarea sa cu ATP i formarea de glucozo-6-fosfat. Reacia decurge n prezena glucokinazei i a ionilor de Mg2+:
CH2OH O H H OH H OH HO OH H H Glucoza CH2OPO3 ATP ADP O H H H OH H hexokinaza OH HO glucokinaza OH H glucozo-6-fosfat Ester Robison
2-

Reacia decurge cu o scdere mare a energiei libere (4 Kcal/mol) ceea ce nseamn c practic este ireversibil. Glucozo-6-fosfatul are o poziie cheie n metabolismul glucidic, fiind metabolizat n sens catabolic sau anabolic.
2. Izomerizarea glucozo-6-fosfatului la esterul fructozo-6-fosfat sub

aciunea glucozofosfatizomerazei din muchi:

CH2- O - P H HO O H H OH H OH P - OH2C 30% aldolaza 70% CH2OH H OH OH H HO H F-6-P O

OH H G-6-P

Aceast etap este o reacie de echilibru ntre forma piranozic (aldoz) i cea furanozic (cetoz), pentru raportul de 7/3.
3. Fosforilarea ireversibil a fructozo-6-fosfatului la fructoza-l,6difosfat. Aceast fosforilare necesit ATP ca donor de fosfat precum i prezena

103

fosfofructokinazei i a ionilor de Mg2+; Reacia este ireversibil, ntruct decurge cu o scdere mare de energie liber (3,4 Kcal/mol).
P - O H2C CH2OH H OH OH H OH H F - 6- P O ATP ADP P O H2C CH2O P H OH H OH OH H F - 1,6- P O

Fosfofructokinaza

Fosfofructokinaza eate o enzim alosteric, foarte puin activ, fiind un factor limitant al vitezei de reacie n esutul hepatic; concentraiile mari de ATP i citrat inhib enzima, n timp ce AMP i AMP-ciclic, o activeaz.
4. Scindarea fructozo 1,6 difosfatului cu formarea fosfailor de trioz sub aciunea aldolazei (fructozo-1,6-difosfatliaza); scindarea are loc la

nivelul legturii C3-C4:

CH2O- P C=O HO - C - H H - C - OH H - C - OH CH2O - P F - 1,6 - P CH2O- P C=O + H-C=O H - C - OH CH2O - P aldehida - 3fosfoglicerica

CH2OH dihidroxiaceton- fosfat

Reactia este reversibila echilibrul fiind favorabil fructozei; pe masura insa ce se formeaza fosfatii de trioza acestia sunt rapid transformati, ceea ce face ca echilibrul sa fie usor deplasat la dreapta, pna la scindarea intregii cantitati de fructozo-l,6- difosfat.
5. Interconversia fosfailor de trioz sub aciunea triozo-fosfat

izomerazei:
CH2 - O - P C=O CH2OH dihidroxiacetonfosfat (96,5%) H-C=O H - C - OH CH2 - O - P aldehida - 3-fosfoglicerica (3,5%)

Dintre cei doi fosfai de trioz, numai aldehida poate fi transformat n reaciile urmtoare ale glicolizei; prin scoaterea ei permanent din sistem, echilibrul reaciei se deplaseaz spre dreapta pn la transformarea total a dihidroxiacetonfosfatului. Aceast reacie ncheie primul stadiu al glicolizei i anume cel al hexozofosfailor, care este consumator de energie.
104

6. Transformarea aldehidei-3-fosfoglicerice n acid 1,3-difosfogliceric

este o reacie de oxidoreducere fosforilant catalizat de gliceraldehid-3-fosfat dehidrogenaza care are coenzim NAD+:
H-C=O H - C - OH H2C- O - P + NAD + H3PO 4
+

O=C-O H - C - OH

PO 3 H2 + NADH + H+

CH2 - O - P Acid 1,3 difosfogliceric (11,8 Kcal/mol)

Aceasta etapa este foarte importanta din punct de vedere energetic, deoarece in cadrul ei, concomitent cu procesul de oxidare, are loc si un proces de conservare a energiei rezultate din oxidare, sub forma compusului acilfosfat macroergic acidul 1,3 difosfogliceric, care prin hidroliza sa poate elibera 11,8 Kcal/mol. Aceasta reactie face trecerea la cel de-al doilea stadiu al glicolizei care este generator de energie.
7. Defosforilarea acidului 1,3-difosfogliceric la acid 3 fosfogliceric in

prezenta ATP-ului, a fosfoglicerokinazei si a ionilor Mg2+:

O = C - O PO3H2 H - C - OH + ADP Mg
+2

COOH H - C - OH + ATP CH2 - O - P Acid 3 fosfogliceric

CH2 - O - P Acid 1,3 difosfogliceric

In aceast transformare legtura fosfat macroergic a acidului 1,3 difosfogliceric este cedat unei molecule de ADP cu formare de ATP; se realizeaz astfel transferul fosfatului din gruparea acil-fosfatic pe molecula de ADP.Cele dou etape 6 i 7 sunt strns legate energetic, astfel c energia degajat n reacia de oxidare nu se elibereaz sub form de cldur, ci este nglobat n legtura macroergic acilfosfat i apoi transferat ADP-ului cu formare de ATP, rezervorul de energie al organismului.
8. Izomerizarea acidului 3 fosfogliceric la acid 2 fosfogliceric sub

aciunea unei fosfogliceromutaze i a unor cantiti difosfogliceric, cu rol de coenzim:

COOH H - C - OH COOH + H-C-O- P COOH H-C-O- P

mici de acid 2,3

COOH + H-C-O- P

CH2 - O - P CH2 - O - P Acid 3 fosfogliceric Acid 2,3 difosfogliceric

CH2- O - P CH2 - OH Acid 2,3 difosfoglicericAcid 2 fosfogliceric

105

9. Deshidratarea acidului 2-fosfogliceric la acid 2-fosfoenolpiruvic,

compus macroergic:
COOH H-C-O- P H 2 C- OH Acid 2 fosfogliceric enolaza Mg
+2

COOH C-O P + H2O

CH 2 Acid fosfoenolpiruvic (P.E.P.)

Formarea acidului fosfoenolpiruvic are o deosebit importan energetic, deoarece acest compus conine o grupare macroergic fosfoenolic provenit dintr-o legtur esterfosforic, fr participarea unei reacii de oxidare din afar. Prin hidroliza acestei legturi macroergice se elibereaz o cantitate mare de energie (14,8 Kcal/mol).
10. Transformarea acidului 2-fosfoenolpiruvic n acid piruvic sub aciunea piruvatkinazei:
COOH C-O P + ADP COOH C - OH + ATP CH2 Acid enolpiruvic

CH2 Acid - 2 - P - enolpiruvic

Prin tautomerizare acidul enolpiruvic trece n acid piruvic:

COOH C - OH CH2 Acid enolpiruvic COOH C=O CH3 Acid piruvic

Piruvatkinaza din muchi i ficat are rol de reglare i necesit ionii de Mg2+ Mn2+ i K+; ionii de Ca2+ inhib enzima.Acidul piruvic format n aceast etap prezint importan deosebit deoarece poate suferi ulterior o serie de transformri chimice a cror natur i direcie depind de condiiile de oxigenare a esuturilor i de particularitile specifice ale acestora. Aceast transformare este de asemenea foarte important din punct de vedere energetic i metabolic: transferul fosfatului pe ADP face ca energia legturii macroergice s fie ncorporat n ATP folosit ulterior la fosforilarea glucozei. Acidul piruvic format n aceast etap constituie un metabolit important reprezentnd punctul de plecare n catabolizarea aerob a glucozei i totodat

106

punct de legtur cu metabolismul proteinelor. In condiii de anaerobioz acidul piruvic este convertit la acid lactic.
11. Reducerea acidului piruvic la acid lactic reprezint ultima etap a

glicolizei catalizat de lactatdehidrogenaza (LDH) care necesit NADH.

COOH C = O + NADH + H+ CH3 Acid piruvic (LDH) COOH HO - C - H + NAD CH3 Acid L lactic
+

Coenzima oxidat (NAD+) este refolosit n etapa a 6 a glicolizei n felul acesta se realizeaz cuplarea proceselor reductive cu cele oxidative. Lactat dehidrogenza (LDH) este prezent n toate esuturile. Produsul final de metabolizare a glucozei n esuturile animale este acidul lactic; acesta se gsete n echilibru dinamic cu acidul piruvic n raport de 10/1 n funcie de gradul de oxigenare al esutului. Acidul lactic format este transportat de ctre snge la ficat, unde este parial oxidat aerob sau poate fi reconvertit n glucoz. Glicoliza se desfoar deosebit de intens n muchi, iar acumularea acidului lactic n esutul muscular, n timpul efortului de lung durat, provoac febra muscular datorit apariiei acidozei lactice. Un exemplu de acidoz lactic l formeaz acidoza rumenal determinat de consumul excesiv de glucide. Importana deosebit a glicolizei const n aceea c pe parcursul etapelor care dureaz 20-30 secunde se elibereaz treptat i n cantiti mici energia acumulat n molecula glucozei, astfel c organismul o poate folosi n mod raional.
Bilanul energetic al glicolizei se poate calcula fcnd diferena ntre

numrul de ATP rezultai n timpul procesului i numrul de ATP consumai, astfel n etapele de formare a glucozo-6-fosfatului i de formare a fructozo-1,6difosfatului (etapele 1 i 3) se consum 2 moli ATP pentru un mol glucoz. n etapele urmtoare (7 i 10) se sintetizeaz cte l mol ATP pentru o jumtate mol de glucoz, astfel: n etapa a 7 a se sintetizeaz 1 mol ATP pentru mol glucoz, adic 2 moli ATP pentru 1 mol glucoz (1 mol glucoz se transform n 2 moli acid 1,3 DPG). In etapa a 10 a se sintetizeaz tot 1 mol ATP pentru mol glucoz, ceea ce nseamn 2 moli ATP pentru l mol glucoz (2 moli acid 1,3 DPG formeaz 2 moli acid piruvic).

107

Bilanul energetic este deci de 4 moli de ATP sintetizai -2 moli ATP consumai = 2 moli ATP ctigai pentru 1 mol glucoz catabolizat la acid lactic pe cale glicolitic, n condiii anaerobe: 1 mol glucoz + 2 ADP + 2Pi = 2 moli acid lactic + 2 ATP + 2 H2O. Energia eliberat prin glicoliz este relativ mic, dar prezint o importan deosebit ntruct este asigurat organismului si n absena oxigenului. Din energia chimic produs n timpul glicolizei, n jur de 30% este nmagazinat n legturile macroergice din ATP, restul degajndu-se sub form de cldur.
Teme Scriei ecuaiile etapei consumatoare de energie din glicoliza anaerob. Scriei ecuaiile etapei productoare de energie din glicoliza anaerob. Precizai care sunt reaciile ireversibile din glicoliza anaerob . Reprezentai schematic glicoliza anaerob. Scriei reacia global a glicolizei. Care este bilanul energetic al glicolizei? Care este enzima cheie n glicoliza anaerob? Scriei ecuaia reaciei chimice

catalizate de ctre aceast enzim.

Glicogenoliza

In tesutul muscular glicoliza incepe de la glicogen; acesta este un glucan format din molecule de - glucopiranoza legate 1,4 si 1,6 - - glicozidic si reprezinta forma de rezerva in glucoza a organismului animal. Glicogenoliza reprezinta procesul de transformare a glicogenului in acid lactic si are ca scop eliberarea rapida a rezervei de glucoza in cazul eforturilor fizice. Pentru a intra in secventa glicolitica, sunt necesare mai multe etape, astfel:
Fosforoliza glicogenului sub aciunea acidului fosforic i n prezena

fosforilazei, n urma creia se scindeaz resturile terminale de glucoz de la captul nereductor al lanului cu formare de glucozo 1 fosfat; (glucan)n + H3PO4 = (glucan)n 1 + G 1 P In timpul fosforolizei se scindeaza legatura 1,4 - - glicozidica de la capatul catenei, iar restul glucozil este transferat pe fosfatul anorganic. In acest proces actioneaza forma activa a fosforilazei (a) obtinuta din forma inactiva (b) printr-un proces endergonic de fosforilare cu ATP.

108

4 ATP 4 ADP Fosforilaza a Fosforilaza b - 4 H3PO4 La nivelul ficatului fosforilaza este activata de catre AMP-ciclic si reglata de hormonii hiperglicemianti (adrenalina si glucagon), iar in muschi numai de catre adrenalina. Activarea fosforilazei b are loc mai cu seama cnd este necesara producerea unei cantitati mai mari de glucoza in cazul unui efort fizic intens. In cazul amilozei procesul continua pna la transformarea completa a catenelor liniare in G 1 P. In cazul amilopectinei partea ramificata a glicogenului, fosforilaza isi inceteaza activitatea cu 4 resturi de glucoza inaintea ramificatiilor 1,6 - - glicozidice. La acest nivel intervin enzimele de deramificare: 1,4 1,6 glucantransferaza si 1,6 glucozidaza care catalizeaza transferul a 3 resturi de glucoza din partea ramificata in partea liniara, continuata de scindarea hidrolitica a restului de glucoza legat 1,6. Dupa scindarea legaturilor 1,6 procesul de fosforoliza continua pna la transformarea completa a glicogenului in G 1 P.
Etapa a doua a glicogenolizei const n izomerizarea G 1 P la G 6

P sub aciunea glucofosfomutazei. In continuare G 6 P poate fi degradat pe calea glicolizei pn la acid lactic sau poate fi defosforilat la glucoz.
Bilanul energetic al glicogenolizei este de 3 moli ATP, deoarece fa de

glicoliz, se consum numai un mol de ATP (este exclus fosforilarea glucozei, deci din cei 4 moli sintetizai se va scdea 1 mol consumat). Aceast energie este de mare importan deoarece unele celule cum ar fi eritrocitele i procur numai pe aceast cale energia necesar.
Catabolizarea aerob a glucozei

Prin degradarea glicolitic, n condiii anaerobe, glucoza este transformat n acid lactic. n condiii aerobe, deci n cazul unui raport ndestultor de oxigen, etapa ultim a glicolizei formarea acidului lactic nu mai are loc deoarece coenzima NADH + H+ nu mai transfer hidrogenul i electronii acidului piruvic, ci prin lanul de oxidoreducere (respirator) i transfer oxigenului cu formare de ap. Acidul piruvic format n citoplasm trece n mitocondrie, unde urmeaz dou ci de metabolizare: decarboxilarea oxidativ cu formarea acidului acetic activat (acetil coenzima A); carboxilarea cu obinerea acidului oxalilacetic.
109

Decarboxilarea oxidativ a acidului piruvic este un proces complex,

ireversibil, n mai multe etape, catalizate de un complex multienzimatic- piruvat dehidrogenaza, care implic urmtorii factori: CoA, NAD+, acid lipoic, FAD, tiaminpirofosfat (TPP) i Mg2+. Reacia global catalizat de acest sistem este urmtoarea: CH3 CO COOH + NAD+ + HSCoA = CH3CO SCoA + NADH + H++ CO2 Reacia decurge cu o scdere apreciabil a energiei libere, din care cauz este considerat ireversibil. Acetil coenzima A, format n urma decarboxilrii oxidative a acidului piruvic, va fi oxidat ulterior n ciclul Krebs pn la CO2 i H2O.
Carboxilarea acidului piruvic. Dioxidul de carbon asimilat de

organismele animale produce carboxilarea acidului piruvic cu formare de acid oxalilacetic.Reacia este catalizat de piruvatcarboxilaza i necesit prezena biotinenzimei drept coenzim: CH3 CO COOH + CO2 HOOC CO CH2 - COOH Cele dou substane provenite din carboxilarea oxidativ i decarboxilarea acidului piruvic vor intra ulterior n ciclul Krebs i lanul respirator unde se vor transforma n CO2, H2O i energie.
Alte ci de degradare ale glucidelor Calea pentozo-fosfailor (untul pentozo-fosfailor)

Calea pentozo-fosfailor reprezint o cale de degradare anaerob oxidativ a glucozei, fiind o cale suntat care ocolete o serie de etape ale glicolizei. Aceast cale este dependent de glicoliz, unii intermediari ai acesteia participnd la glicoliz. Procesul are loc cu prioritate n ficat, esutul adipos, glanda mamar n lactaie, eritrocite, n prezena enzimelor amplasate n faza solubil a citoplasmei. Pe aceast cale secundar de degradare este transformat aproximativ 10-30% din cantitatea de glucoz. Calea pentozo-fosfailor cuprinde dou etape: -sinteza pentozelor din hexoze; -sinteza hexozelor din pentoze.
Sinteza pentozelor din hexoze se realizeaz printr-o succesiune de reacii

n care glucozo-6-fosfatul este dehidrogenat i decarboxilat la ribulozo-5-fosfat sub aciunea unor enzime specifice, NADP-dependente, astfel:

110

dehidrogenarea glucozo-6-fosfatului la lactona acidului 6-fosfogluconic este iniiat de glucozo-6-fosfat dehidrogenaza (GPDH) cu NADP drept coenzim, ca acceptor de hidrogen i electroni. 6-P-glucolactona este hidrolizata de catre glucono-lactonaza la acid 6-Pgluconic:
COOH CH2O P H2O HCOH O CH2O P GDPH HOCH O O OH HCOH OH OH OH + OH + OH HCOH NADP NADPH + H OH CH2O - P G-6-P 6-P-glucolactona Ac. 6-P-gluconic

In reacia urmtoare, catalizat de 6-P-gluconat dehidrogenaza (PGDH) are loc concomitent o dehidrogenare la C3 cu formare de acid 3-ceto-6-P-gluconic urmat de o decarboxilare la C1 cu formarea unei cetopentoze, ribulozo-5-fosfatul:
COOH COOH HCOH HCOH + NADP NADPH + H C=O HOCH HCOH HCOH CO2 HCOH HCOH CH2O - P CH2O - P acid 3 -ceto-6-PAc. 6 - P - gluconic gluconic CH2OH C=O HCOH HCOH CH2O- P Ribolozo-5-P

Prin epimerizare i izomerizare ribulozo-5-fosfatul se transform n xilulozo-5-fosfat, respectiv ribozo-5-fosfat:

H-C=O HCOH HCOH HCOH CH2O - P Ribulozo-5-P izom.

CH2O H C=O HCOH HCOH CH2O - P Ribulozo-5-P epim.

CH2OH C=O HOCH HCOH CH2O - P xiluloza-5-P

Rezult c oxidarea unui mol de glucozo-6-fosfat este nsoit de formarea unui mol de CO2 i 2 moli de NADPH+. Reacia global este urmtoarea: Glucozo-6-fosfat + 2 NADP+Ribozo-5-fosfat + CO2 + 2 NADPH + 2H+ NADPH2 este folosit n reaciile de biosintez, n special cele ale acizilor grai, din citoplasma extramitocondrial, iar ribozo-5-fosfatul este un precursor n sinteza nucleotidelor.
111

Sinteza hexozelor din pentoze

In celule ribozo-5-fosfatul este transformat partial in hexozo-fosfati prin reactii de transcetoliza si transaldoliza catalizate de transcetolaze si transaldolaze. a). Transcetolaza catalizeaz transferul unei grupri C2 glicol-aldehidice (CH2OH-CO-) de la xilulozo-5-fosfat la ribozo-5-fosfat cu formare de sedoheptulozo 7-fosfat i gliceraldehid-3-fosfat, prin care se face legtura cu secvena glicolitic:
CH2OH C=O HOCH HCOH CH2O - P xiluloza-5-P + CH2OH C=O trans. cetolaza HOCH HCOH HCOH HCOH + H-C=O HCOH CH2O - P glicer-aldehida-3-P

O=C-H HCOH HCOH HCOH CH2O - P Ribozo-5-P

CH2OP Sedoheptulozo-7-P

Coenzima transcetolazei este tiaminpirofosfatul (TPP) care leag i transfer cei doi carboni. b). Cei doi produi formai intr n reacia catalizat de transaldolaz care transfer o grupare de dihidroxiaceton (3 C) de la sedoheptulozo-7-fosfat la gliceraldehid-3-fosfat:

CH2OH C=O HOCH HCOH HCOH HCOH +

HC = O HCOH

trans. aldolaze

HC = O HCOH HCOH

CH2OH C=O

CH2O - P glicer-aldehida-3-P

+ HOCH HCOH CH2O - P HCOH Eritrozo-4-P CH2O - P CH2OP F-6-P

CH2O - P Sedoheptulozo-7-P

In urma transferului rezult fructozo-6-fosfatul, care face legtura cu glicoliz, i eritrozo-4-fosfatul. c). Din nou intrevin transcetolaza care transfer o grupare C2 (glicolaldehid) de pe xilulozo-5-fosfat pe eritrozo-4-fosfat:

112

CH2OH C=O HOCH HCOH CH2O - P X-5-P +

H-C=O HCOH HCOH CH2O - P Eritrozo-4-P trans. cetolaza

CH2OH C=O HOCH HCOH HCOH CH2O - P F-6-P + H-C=O HCOH CH2O - P glicer-aldehida-3-P

Din reacie au rezultat noi intermediari ai glicolizei . Reaciile catalizate de transcetolaze i trnasaldolaze asigur interconversia pentozo-i hexozo-fosfailor: donorii de C2i C3 sunt cetoze, iar acceptorii sunt aldoze. Fosfaii de trioz se pot transforma n intermediari ai glicolizei astfel: d). 2 triozo-fosfat fructozo-1,6-P e). fructozo-1,6-P + H2O F-6-P + Pi f). F-6-P G-6-P Odat cu formarea G-6-P procesul se poate relua . Procesul permite ocolirea unor etape ale glicolizei care au loc cu consum de ATP (F-6-P + ATP) i produce mari cantiti de fosfai de trioz. n ceea ce privete aspectul energetic, pentru cei 2 NADPH eliberai corespund 6 moli ATP pentru 1 mol de CO2, n total 6x6=36 moli ATP pentru cei 6 carboni ai glucozei, fapt care apropie calea pentozo-fosfailor din ciclul Krebs.
Degradarea glucozei pe calea acizilor uronici

Calea acizilor uronici reprezinta un proces de degradare a glucozei care se desfasoara in cea mai mare parte in ficat si mai putin in intestin si in rinichi, avnd ca rezultat obtinerea unor compusi de mare importanta biologica, acidul glucuronic si galacturonic, xiluloza, vitamina C, lactoza sau galactoza. CH2OH O H OH O- P + OH UTP OH Glucozo-1-fosfat CH2OH O H OH OH OH

O I UDP UDP-glucoza

+ P - O -P P

Reacia este catalizat de enzima glucozo-1-fosfaturidiltransferaza. b). UDP-glucoza este oxidat la nivelul gruprii alcool primar de la C6 sub aciunea UDP-glucozo-dehidrogenazei i transformat n acid glucuronic astfel:
113

CH2OH O H OH OH OH

COOH + NADH + + NAD O H2O H H O - UDP OH OH OH

O - UDP

UDP-glucuronatul reprezint forma activ a acidului glucuronic, care particip la diverse procese ce au loc n ficat ca: glucuronconjugarea bilirubinei sau a hormonilor steroizi, precum i la detoxifiere; sinteza mucopoliglucidelor; sinteza vitaminei C. Glucuronconjugarea reprezint condensarea acidului glucuronic cu compui cu funcie hidroxil, carboxil sau aminic (hormonii, bilirubin, substane strine, medicamente toxice) n scopul transformrii lor n compui solubili, uor de transportat i eliminat din organism. UDP-glucuronatul este hidrolizat la esterul-1-fosforic al acidului glucuronic, iar acesta din urm tot prin hidroliz elibereaz acidul glucuronic.
COOH O H OH OH OH UDP-glucuronat O - UDP UMP HOH COOH O OH O- P 1-fosfoglucuronat COOH +HOH O OH
+

Pi

OH acid glucuronic

Acidul glucuronic neangajat n reacii de conjugare se poate transforma pe dou ci principale cu formare de L xiluloz i acid ascorbic (vitamina C).
a). Transformarea acidului glucuronic n L-xiluloz;

La om, maimue primate i cobai, acidul glucuronic se oxideaz, trecnd prin stadiile de acid glucuronic, acid 3-cetogluconic, cu formare de CO2 i Lxiluloz. L-xiluloza se izomerizeaz la D-xiluloz i poate regenera glucoza pe calea pentozofosfailor.

114

O H HCOH OH-CH HCOH HC-OH COOH Acid D-glucuronic COOH HO-C-H HO-C-H H-C-OH H2COH Acid L-gulonic + NAD NADH + H + COOH HOCH C=O HCOH HO-C-H CH2OH Acid 3 ceto-L-gulonic CO 2 + NADPH + H + NADP C COOH HOCH HOCH HCOH HOCH CH2OH Acid L-gulonic CH2OH C=O HCOH HOCH CH2OH L-xiluloza CH2OH C=O HOCH HCOH CH2OH D-xiluloza

b). Transformarea acidului glucuronic n acid ascorbic

La plantele superioare i la majoritatea animalelor acidul gulonic format din acid glucuronic, se transform n L-gulconolacton care se oxideaz la acid ascorbic sub aciunea catalitic a enzimei L-gulonolactonoxidaza (aceast enzim lipsete la om, maimue i cobai). Procesul are loc n ficat, n ficat n fraciunea microzonal hepatic. Au loc urmtoarele reacii: Lactonizarea acidului gulonic:

COOH HOCH HOCH HCOH CH2OH Acid gulonic - H2O

O=C HOCH HOCH HC HOCH CH2OH L-gulonolactona O

Oxidarea lactonei la acid ascorbic:

O=C HOCH O NAD HOCH HC HOCH CH2OH L-gulonolactona + NADH + H O=C O=C HO - C

O O=C O HO - C HOCH HC HC HOCH HOCH CH2OH CH2OH Acid ascorbic 3-cetogulonolactona

115

Anabolismul glucidelor

n celulele vii degradarea glucidelor are loc simultan cu biosinteza lor. Anabolismul glucidic cuprinde dou aspecte fundamentale: biosinteza glucozei din compui glucidici (glucogenez) sau neglucidici (gluconeogenez).
Biosinteza glucozei n organismul animal prin glucogenez este un proces

care are loc din diferite glucide sau din compui de catabolizare a glucidelor. Animalele preiau prin intermediul hranei i alte glucide pe care le transform n glucoz prin procese de izomerizare, de epimerizare sau alte procese mai complicate catalizate de enzime specifice. Procesul de interconversie a diferitelor monoglucide n glucozo-fosfai este schematizat astfel:

GALACTOZA ATP ADP Galactoza-1- P

UDPglucoza

UDPgalactoza

GLICOGEN

Glucozo-1- P ATP ADP Glucozo-6- P Fructozo-6- P ATP ADP Fructozo-1,6- P MANOZA ATP ADP Manozo-6- P

FRUCTOZA ATP ADP Fructozo-1- P Gliceraldehida Dehidroxiaceton- P

Gliceraldehid-3- P

Glicogenoneogeneza (glico- sau gluconeogeneza) asigur aprovizionarea

organismului cu glucoz chiar i n cazul unui aport insuficient de glucide alimentare, prin capacitatea ficatului de a sintetiza glicogenul respectiv glucoza, plecnd i de la compui din alte clase de substane. Dintre aceste substane, denumite i substane glucoformatoare fac parte: acizii lactic, piruvic,citric, succinic, acetic, glicerolul i unii aminoacizi ca alanina, serina, treonina, valina, izoleucina, acidul glutamic, acidul aspartic, prolina, histidina i arginina. Intensitatea acestui proces de biosintez a glucozei din percursori neglucidici, n care ficatul joac rolul central, este redus la o ofert bogat n glucide sau n repaus i crescut n lips de glucide sau n eforturi fizice grele. Acest proces prezint un interes deosebit i pentru o serie de animale, cum sunt: carnivorele i ierbivorele, la care aportul alimentar de glucide este mai redus i deseori insuficient.

116

Secvena reaciilor gluconeogenetice este reprezentat astfel:

CO 2 + ATP Piruvat Carboxilaza ADP + Pi GTP ADP ATP
PEP - Carboxikinaza

Piruvat

Acid lactic

Fosfoenolpiruvat (PEP) Triozofosfati Fructozo - 1,6 - P Pi Fructozo - 1,6 - diofosfataza H2O Fructozo - 6 - P Glucozo - 6 - P Pi Glucozo - 6 - Fosfataza H2O Glucoza

GDP

Glicogenogeneza si Glicogenoneogeneza

Glicogenogeneza este procesul de sinteza a glicogenului din monozaharide ca glucoza, fructoza, manoza, galactoza. Glucida de plecare in sinteza glicogenului fiind numai glucoza, celelalte glucide sunt mai inti transformate sub actiunea unei izomeraze specifice in aceasta glucida, sub forma de ester glucozo6-fosforic. Acest ester este transformat apoi de o fosfomutaza in esterul glucozo1-fosforic care se condenseaza, in cele din urma, prin leganturi de tip 1,4 - glicozidice, formnd glicogenul. Ramificarea specific a moleculei de glicogen la C6 se face prin legturi 1,6-glicozidice sub aciunea unei enzime numit transglicozilaz sau enzim de ramificare. Reaciile care au loc la formarea glicogenului pot fi reprezentate schematic astfel:
Glucoza Glucokinaza glucozo - 6 - fosfat transglicozilaza Fosfoglucomutaza

glucozo - 1 - fosfat

glicogen

Biosinteza oligo- i poliglucidelor

Biosinteza oligo- si poliglucidelor in organismul animal se realizeaza printrun proces de transglicolizare la care monoglucidele componente participa sub forma activata. Activarea se realizeaza in majoritatea cazurilor cu acid uridin trifosforic
117

(UTP). Pentru organismul animal prezinta interes biosinteza lactozei si a glicogenului. Biosinteza acestora are ca punct de plecare esterul glucozo-1-fosfat care este activat cu ajutorul UTP sub forma de uridinfosfat-glucoza (UDP-glucoza).
Biosinteza lactozei

Lactoza se sintetizeaza in glanda mamara din glucoza sanguina, conform urmatorului mecanism:
P - P UDP - Glucoza UTP G-1-P G-6-P ADP ATP Glucoza 4 - epimeraza UDP - galactoza G-1- P UDP Lactozo - 1 - P H2O Pi Lactoza

In urma cuplrii UDP-galactozei cu glucozo-1-fosfat se realizeaz legtura 1,4 -glicozidic n lactozo-1-fosfat care dup hidroliz formeaz lactoza. UDP-galactoza + G-1-P Lactozo-1-P + UDP UDP + ATP = UTP + ADP Lactozo 1-P + H2O Lactoza + H3PO4 Procesul de biosinteza este catalizat de galactoziltransferaza si necesita un consum de 3 moli de ATP pentru un mol de lactoza deoarece se pleaca de la 2 moli de glucoza care sunt fosforilati de 2 moli ATP, al 3-lea mol ATP fiind necesar pentru regenerarea UTP-ului. UDP-galactoza se sintetizeaz i n ficat fiind utilizat i pentru sinteza lipidelor complexe i a mucopoliglucidelor constituite din galactozamin sau derivai ai acestora.
Reglarea metabolismului glucidelor

Reglarea glicemiei se face prin: -mecanisme de reglare prin aciune hipoglicemiant -mecanisme de reglare prin aciune hiperglicemiant.
Reglarea prin aciune hipoglicemiant are loc mai ales prin insulin,

hormon secretat de pancreas. Acest hormon i exercit aciunea sa hipoglicemiant prin: -creterea consumului de glucoz n muchi;
118

-stimularea transformrii glucozei din snge n glicogen hepatic i muscular; -inhibarea transformrii glicogenului hepatic n glucoz sanguin; -suprimarea gluconeogenezei; -stimularea biosintezei lipidelor din glucoz. Tot n acest grup de reglare prin aciune hipoglicemiant se poate include i eliminarea glucozei n urin cnd glicemia depete pragul renal de eliminare.
Reglarea prin aciune hiperglicemiant are loc prin factori care exercit

o aciune antagonist fa de cea a factorilor hipoglicemiani, dar care acioneaz asupra acelorai sisteme. Aceti factori acioneaz prin: -stimularea glicogenolizei hepatice care are drept urmare o deversare masiv de glucoz n snge, ducnd deci la o cretere a glicemiei; -stimularea glicogenolizei musculare care duce la o cretere a acidului lactic n esutul muscular. Acest acid nu poate fi transformat de musculatur n glucoz, dar ajuns pe cale sanguin n ficat este i el rapid transformat n glucoz, contribuind astfel la creterea glicemiei, reducerea sau chiar inhibarea folosirii glucozei n esuturi. Dintre aceti factori cu aciune hiperglicemiant fac parte mai ales hormonii adrenalina, glucagonul, precum i hormonii adenohipofizari i glicocorticosteroizi.
Diabetul zaharat se caracterieaz printr-o cretere anormal a glucozei

din snge (hiperglicemie) i este provocat de o hipofuncie insulinic care se poate datora , fie unei insuficiente secreii insulinice, fie unei anihilri a aciunii insulinei, chiar n conditiile unei secreii normale a acestui hormon. Simptomele grave ale diabetului sunt provocate de aa numiii corpii cetonici. Acetia fac parte din clasa cetonelor i sunt derivai ai acidului butiric (acid cetobutiric i hidroxibutiric) care pot provoca o hiperacidulare a sngelui (acidoz). Aceasta duce n cazuri grave la pierderea cunotinei (com diabetic) i n cele din urm la moarte.

119

Rezumat cap. 9: Metabolism glucidic

1. Aspecte biochimice ale digestiei i absorbiei glucidelor 2. Procese catabolice: glicoliza i glicogenoliza; ciclul pentozofosfailor; calea acizilor uronici; respiraia celular. glucogeneza i gluconeogeneza; glicogenogeneza;
Teste de autoevaluare

3. Procese anabolice: -

1. Conversia unui mol de glucoz la lactat produce: a). 2 moli ATP; b). 3 moli ATP; c). 6 moli ATP; d). 4 moli ATP; e). 1 mol ATP. Rspuns: a 2. Reaciile virtual ireversibile din glicoliz sunt: a). Glu - > Glu 6 P; b). fructozo-6-fosfat - > fructozo-1,6-difosfat; c). fosfoenol piruvat - > piruvat. Rspuns: a, b, c. 3. Oxidarea n ciclul Krebs a unui mol de izocitrat la succinat poate genera: a). 7 moli ATP; b). 8 moli ATP; c). 9 moli ATP; d). 10 moli ATP; e).12 moli ATP. Rspuns: a. 4. O reacie ADP + GTP ATP + GDP are loc n conexiune direct cu : a). glicogenoliza; b). glicoliza; c). ciclul Krebs; d). calea pentozofosfailor. Rspuns: c. 5. Att piruvat dehidrogeneza ct i -cetoglutarat dehidrogeneza: a). sunt sisteme multienzimatice; b). catalizeaz reacii implicnd HS-CoA; c). folosesc drept factor tiamin pirofosfat; d). sunt localizate mitocondrial. Rspuns: a, b, c, d.
120

6. In etapa neoxidativ a cii pentozo-fosfailor se formeaz : a). fructozo-6-fosfat; b). gliceraldehid-3-fosfat; c). glucozo-1-fosfat. Rspuns: a, b. 7. Calea pentozo-fosfailor: a). folosete ca susbtrat glucozo-6-fosfatul; b). are loc cu formare de NADH + H+; c). are ca intermediar 6-fosfogluconatul; d). este productoare de ATP. Rspuns: a, c. 8. Functionarea lantului respirator mitocondrial cuplat cu fosforilarea oxidativa conduce la formarea a: a). 3 moli ATP; b). 2 moli ATP; c). 11 moli ATP; d). 9 moli ATP; e). 12 moli ATP. Rspuns: c. 9. Nu constituie substrat pentru gluconeogenez: a). stearoil-CoA; b). lactatul; c). dihidroxiacetonfosfatul. Rspuns: a. 10. In procesul de gluconeogeneza alanina si lactatul se convertesc intr-o singura etapa la: a). oxaloacetat; b). acetil- CoA; c). piruvat. Raspuns: c. 11. Deramificarea moleculei de glicogen hepatic sau muscular se realizeaza: a). prin hidroliza resturilor singulare de glucoza legate -1,6 glicozidic din glicogenul partial degradat; b). prin hidroliza legaturilor -1,6-glicozidice, cu desprinderea catenelor lungi, ancorate in acele pozitii; c). sub actiunea -1,6 glucozidazei cunoscuta sub numele de enzima de deramificare. Raspuns: a,c.

121

Teme

1. Lantul transportor de electroni are mai multe etape. Se cere sa se scrie: -reactia globala a procesului; -care este ecuatia chimica prin care se cupleaza lantul transportor de electroni cu fosforilarea oxidativa. 2. Ciclul ATC incepe si se incheie cu acidul oxalilacetic. Se cere sa se precizeze: -cel putin 3 surse metabolice pentru acidul oxalilacetic; -care sunt compusii din ciclul ATC utilizati de organism in metabolismul aminoacizilor? - in ce directii este utilizat CO2 rezultat? -cte molecule de ATP se formeaza prin oxidarea completa a unui mol de acid acetic? -cte molecule de ATP rezulta prin oxidarea completa a unui mol de glucoza? 3. In catabolizarea glucidelor sunt cunoscute o varietate de cai si produsi. Se cere sa se precizeze: -care sunt principalele cai de catabolizare a glucozei si produsii finali? Dar ai glicogenului? -care este bilantul energetic al glicolizei? -prin ce reactie este scindat glicogenul? -pe ce cale pot fi transformate hexozele in pentoze si invers, adica pentozele in hexoze? -pe ce cale se formeaza acidul ascorbic?

122

Capitol X METABOLISMUL LIPIDELOR

Digestia, absorbia, vehicularea i depozitarea lipidelor

Lipidele exogene ptrund n organism n cea mai mare parte ca trigliceride. Metabolizarea lor, semnificativ cantitativ are loc sub influena lipazelor, dup o prealabil emulsionare localizat de ageni tensioactivi care se gsesc n bil. n lumenul intestinului subire, triacilglicerolii exogeni sunt degradai la acizi grai liberi, (AGL) i monoacilgliceroli (MAG) n prezena acizilor biliari conjugai i a lipazei pancreatice. Acizii biliari conjugai sunt detergeni (ageni tensioactivi) alctuii dintr-o parte lipidic solubil (steroid) i o parte polar (taurin, glicina). Acizii biliari, acizii grai i monoacilglicerolii formeaz micele. n micel partea nepolar este localizat central, partea polar se afl la periferie. Micelele servesc de asemenea drept vehicul de absorbie al vitaminelor liposolubile i colesterolului. Acizii biliari sunt absorbii pe calea port, vehiculai la ficat i sunt readui n intestin prin vezica biliar. Acizii grai liberi, monoacilglicerolii i triacilglicerolii nescindai sunt absorbii ca micele n celulele epiteliale ale intestinului subire unde au loc reaciile de formare ale trigliceridelor. Trigliceridele de neosintez, colesterolul alimentar, fosfolipidele de neosintez i proteinele de neosintez sunt combinate n reticulul endoplasmatic al celulelor epiteliale i sunt excretate de chilomicromi. Particulele de chilomicromi sunt stabile cu = 200 nm; ele trec n sistemul limfatic, apoi n canalul toracic pentru a ajunge prin vena subclavicular (cava cranial) n circulaia sistemic. Suspensia lptoas care conine chilomicronii este difuzat astfel n toat masa sngelui. Chilomicronii sunt preluai din snge foarte rapid, timpul lor de njumtire fiind de cca 10 minute. In condiii izocalorice, chilomicronii sunt transportai n esutul adipos pentru stocare. In condiii de nfometare, totui chilomicromii sunt utilizai cu precdere de muchiul scheletic rou, muchiul cardiac i ficat pentru acoperirea nevoilor energetice. Deoarece chilomicronii, pentru a fi utilizai de esutul int, trebuie s aib componenta trigliceridic degradat la acizi grai liberi, un
123

important factor regulator lipoproteinlipaza particip direct n acest proces degradativ. Ca urmare acizii grai liberi din chilomicroni vor fi transportai n esutul adipos pentru stocare. Dimpotriv, n condiii de nfometare, activitatea lipoprotein lipazei scade foarte mult n esutul adipos i crete abrupt n muchi, ficat, miocard, esuturi cu un necesar energetic ridicat. In aceste condiii, nici un chilomicron plasmatic nu va fi utilizat n esutul adipos, ci va fi abtut spre esuturi int importante, cum ar fi muchiul, pentru scopuri energetice. Pe msur ce acizii grai liberi ptrund n celulele adipoase, ca urmare a aciunii lipoprotein lipazei din vasele capilare adiacente, ei sunt rapid convertii n trigliceride. Celula grsoas matur are o citoplasm pelicular care nvelete o pictur mare de triglicerid care ocup 99% din volumul celulei. Celulele adipoase servesc drept depozit pentru rezerva energetic a ntregii economii animale. Locurile principale de depozitare a grsimilor n organism sunt maniamentele n esutul conjuctiv subcutan, muchiul i esutul mezenteric. La unii peti (cod, de exemplu) esutul de depozit este ficatul. Rezervele energetice de trigliceride sunt suficiente pentru aproximativ 40 zile la un adult. Acizii grai liberi sunt transferai n snge unde se combin cu fracia albuminic pentru a forma complexe solubile stabile. Complexul AGL-albumin este netoxic, solubil i rapid transportabil la ficat pentru utilizri ulterioare. In ficat acizii grai liberi sun eliberai din complex i utilizai pe diferite ci, n timp ce fracia albuminic este transferat din nou n circulaia sangvin pentru a-i relua activitatea de transportor.
Catabolismul trigliceridelor. Lipoliza

Lipoliza este procesul de scindare hidrolitic a trigliceridelor sub aciunea lipazelor i se realizeaz n trei etape distincte:
O H2C - O - C H2C - O - C O O R1 R2 trigliceridlipaza H2O R3 - COOH H2C - O - C HC - O - C H2C - OH Diglicerid monoglicerilipaza R2 H2O R2 - COOH H2C - OH HC - OH H2C - OH Glicerol O O R1 R2

R3 H2C - O - C Triglicerid digliceridlipaza H2O R1- COOH

H2C - OH HC - O - C H2C- OH

beta-monoglicerid

Prima faz a lipolizei catalizat de ctre triglicerid-lipaz, enzim hormonsensibil, reprezint etapa limitant a procesului, n acest fel se evit acumularea n celule a produilor intermediari (mono-i digliceridelor).
124

Triglicerid lipaza care hidrolizeaz trigliceridele din esutul adipos rspunde la mobilizarea acestor depozite de energie ale organismului. Trigliceridele ncorporate n complexele lipidoproteice sunt hidrolizate de ctre enzima lipoproteinlipaza, localizat n membrana celulelor endoteliilor capilare. Prin hidroliza enzimatic complet a trigliceridelor se formeaz glicerol i acizi grai. Glicerolul fiind o substan solubil (ca i glucoza i aminoacizii) circul prin snge ca atare. Acizii grai formai trec n snge unde circul legai de albumin sau se reesterific, rmnnd n esutul adipos.
Metabolismul glicerolului

Glicerolul liber se formeaz prin hidroliza complet a trigliceridelor i a altor glicerolipide i poate fi utilizat: la resinteza trigliceridelor i a altor lipide sau degradat oxidativ, n gluconeogenez. La aceste procese particip glicerol-fosfatul care se formeaz prin esterificarea glicerolului sub aciunea unei enzime specifice, glicerolkinaza.
H2COH HCOH H2COH Glicerol ATP ADP glicerolkinaza H2COH HCOH H2CO - P alfa - glicerol - P

Enzima se gsete numai n unele esuturi (ficat, intestin) i lipsete din esutul adipos. Ficatul este esutul care deine rolul principal n utilizarea glicerolului liber. Glicerol-fosfatul se mai formeaz n esuturi dintr-un intermediar glicolitic, dihidroxiaceton-fosfatul:
H2 COH C=O H2 CO - P Glicerol - P dehidrogenaza NADH + H+
+

H2 COH HCOH H2 CO - P

NAD

n acest mod glicerolul poate fi introdus n procesul glicolizei, fie n sensul degradativ, fie n cel al biosintezei (n gluconeogenez).
Metabolismul acizilor grai

In organismul animal acizii grai provin din sursa exogen (alimentaie) sau endogen (sintetizai n ficat din surpulsul de glucoz, sau n esutul adipos).
125

Rolul biologic fundamental al acizilor grai i al trigliceridelor care i elibereaz prin hidroliz este furnizarea de energie.
Catabolismul acizilor grai

Degradarea oxidativ a acizilor grai pn la dioxid de carbon i ap se desfoar n trei etape: - oxidarea; ciclul acizilor tricarboxilici i lanul respirator, ultimile dou fiind ci oxidative terminale comune i pentru alte substane energetice (glucoz, aminoacizi); - oxidarea reprezint calea specific de catabolizare a acizilor grai. Prima etap n degradarea acizilor grai liberi o reprezint activarea lor sub form de tiolesteri ai coenzimei A. Reacia de activare este cuplat energetic cu scindarea ATP-ului la AMP i pirofosfat.
O acil ATP + H3C (CH2)n - COOH tiokinazaH3C (CH2)n - C AMP + P - P

O
H3C (CH2)n - C P - P

acil O tiokinaza SCoA + AMP C H3C (CH2)n AMP + HS - CoA 2 Pi + Energie

pitofosfataza

Acizii grai activai la nivelul mitocondriei sunt degradai oxidativ printr-o succesiune de reacii reunite sub numele de - oxidare.
- oxidarea acizilor grai

Acizii grai cu numr par de atomi de carbon sunt catabolizai pe aceast cale prin fragmentarea catenei hidrocarbonate din doi n doi atomi de carbon (n poziia ) ca urmare a oxidrii. Prima reacie a procesului const n desaturarea acil CoA n poziia , cu formare de trans-enoil-CoA. Aceast reacie este catalizat de acil-CoAdehidrogenaza, o enzim FAD- dependent care se va reoxida n lanul respirator.
H3C (CH2)n-2 CH2 CH2 Acil-CoA acil-CoA O H dehidrogenaza C SCoA H3C (CH2)n-2C = C O H C SCoA FAD FADH2 beta-trans-enoil-CoA

Urmtoarea reacie este de hidratare sub aciunea trans-enoil-CoA-hidrazei (crotonazei), care acioneaz stereospecific formnd stereoizomerul L - hidroxiacil CoA;
126

H C = C C H3C (CH2) n 2 H O

Crotonza SCoA + HOH H3C (CH2) n

H
2

O C SCoA

C-C

H OH H L - beta - hidroxiacil - CoA

n continuare, sub aciunea L - - hidroxiacil CoA dehidrogenazei a crei coenzim este NAD+ se formeaz - cetoacil CoA. NADH-ul se va reoxida n lanul respirator.
H3 C (C H 2 ) n
2

H O C-C -C
H

SCoA

L-beta-hidroxiacil -CoA-dehidrogenaza NAD

+

H3C
+

(C H 2 ) n

O C - (C H 2 ) C

SCoA

H OH

N AD H + H

beta - cetoacil - CoA

Ultima reacie catalizat de -cetotiolaz este scindarea legturii dintre C C cu participarea unei molecule de CoA i formarea de acil-CoA cu doi atomi de carbon mai puin dect lanul iniial i de acetil-CoA.
O O H3C (CH2)n 2 C - CH2 - C -cetotiolaza O C H3C (CH2) n 2 (n-2)acil-CoA O SCoA + H3C- C SCoA Acetil-CoA

SCoA

Acetil-CoA se poate oxida n continuare prin ciclul acizilor tricarboxilici i lanul respirator pn la dioxid de carbon i ap, cu producere de ATP. Acil-CoA rezultat, avnd doi atomi de carbon mai puin dect lanul iniial poate parcurge o nou etap de degradare -oxidativ. n acest fel acizii cu numr par de atomi de carbon formeaz prin -oxidare n/2 molecule de acetil CoA.
Bilanul energetic al -oxidrii

Bilanul energetic difer de la un acid gras la altul. In cazul acidului palmitic ecuaia global a procesului de -oxidare este:
O H3C (CH2)
14

SCoA + 7 FAD + 7 H2O + 7 NAD++ 7 CoASH O

8 CH3 - C

SCoA + 7 FADH2 + 7 NADH + 7 H+

Dup cum se tie, oxidarea acetil-CoA n ciclul acizilor tricarboxilici produce 12 moli ATP, deci 8 moli x 12 moli ATP = 96 moli ATP. Reoxidarea fiecrei molecule de FADH2 n lanul respirator furnizeaz dou molecule de ATP, iar NADH furnizeaz trei molecule de ATP, deci:

127

7 x 2 = 14 moli ATP 7 x 3 = 21 moli ATP 35 moli ATP In total se elibereaz 131 moli ATP i dac se ine seama c prin activarea acizilor grai se consum un mol de ATP, ctigul net este de 130 moli ATP.
Biosinteza trigliceridelor. Lipogeneza

Completarea continua a rezervelor consumate din depozitele de grasimi ale organismului se face printr-o sustinuta biosinteza a trigliceridelor. Acizii grasi necesari pentru aceasta sinteza provin din trigliceride exogene sau endogene sau sunt sintetizati in organism din fragmente mici, formate din doi atomi de carbon (acetil CoA), care pot proveni la rndul lor din metabolismul glucidic, protidic si bineinteles din cel lipidic. Biosinteza trigliceridelor nu are loc numai n ficat i n esutul adipos, ea se desfoar destul de intens i n peretele intestinal. Mecanismul de sintez este ns peste tot acelai i are loc dup urmtoarea schem de reacie:
CH2 - OH CH - OH CH2 - O - P + 2 Acil-CoA CH2 - O - CO - R CH - O - CO - R CH2 - O - P Acid fosfatidic + Acil CoA CH2 - O - CO - R CH - O - CO - R CH2 - O - CO - R Triglicerida + HOH

alfa-glicerofosfat CH2 - O - CO - R CH - O - CO - R CH2 - OH alfa, beta-diglicerida

In aceast reacie -glicerofosfatul, provenit fie de la glicerolul ca atare, format n cadrul metabolismului lipidic cu ocazia hidrolizei complete a trigliceridelor, fie de la dihidroxiacetonfosfatul, produs intermediar al metabolismului glucidic, este esterificat mai nti cu dou molecule de acizi grai care pot reaciona ns numai sub forma lor activat de acil-CoA. Acidul fosfatidic rezultat trece n continuare prin desforilare n ,-diglicerida coerspunztoare, care poate reaciona cu o a treia molecul de acid gras activat cu formare de triglicerid. O alt cale de biosintez a trigliceridelor, care are loc n peretele intestinal, pornete de la -monogliceride care prin esterificri succesive cu acizi grai activai trec n cele din urm tot n trigliceride.
128

CH2 - OH CH - O - CO - R CH2- OH Beta-Monoglicerida

+ Acil CoA

CH2 - O - CO - R + Acil CoA CH - O - CO - R CH2 - OH alfa, beta-diglicerida

CH2 - O - CO - R CH - O - CO - R CH2 - O - CO - R Triglicerda

Corpii cetonici. Cetogeneza

In condiii normale, compuii intermediari rezultai prin degradarea acizilor grai nu se acumuleaz n organism, fiind consumai n scopuri energetice sau de biosintez. Dintre aceti produi fac parte i trei combinaii cu denumirea colectiv de corpi cetonici (derivai din clasa cetonelor) care sunt sintetizate numai de ficat (proces denumit cetogenez) i n cantiti foarte mici. Acestui grup de produi aparin: acidul acetilacetic (denumit i cetobutiric), acidul -hidroxibutiric i acetona.
beta alfa CH3 - CO CH2 - COOH ; acid acetilacetic sau acid beta-cetobutiric beta alfa CH3 - CHOH - CH2 - COOH ; CH3 - CO - CH3 acid beta-hidroxibutiric acetona

Dac ns din cauza lipsei de alimente n inaniie sau a unei valorificri insuficiente a glucidelor n diabet, organismul mobilizeaz o cantitate prea mare de acizi grai din rezervele sale lipidice, ficatul nu mai poate mobiliza n mod normal excesul de acetil-CoA format la degradarea acestor acizi i elibereaz cantiti crescute de corpi cetonici. Excesul de corpi cetonici astfel sintetizai nu mai poate fi nici el utilizat integral de esuturile extrahepatice, ceea ce duce, n cele din urm, la o acumulare a acestor corpi n snge (denumit cetonemia), apariia lor n urin (denumit cetonuria) i apariia mirosului de aceton n aerul expirat. Aceast stare a organismului poart numele de cetoz. Corpii cetonici fiind toxici pentru organism, apariia lor n cantiti crescute poate duce la complicaii grave i pierderea cunotinei (com diabetic). Doi dintre aceti corpi, fiind acizi organici destul de puternici, se elimin pe cale renal sub forma srurilor lor de sodiu i potasiu ceea ce duce la consumul rezervei alcaline a organismului i la scderea valorii de pH a sngelui. Aceasta este o complicaie cu urmri grave, denumit acidoz. Sinteza corpilor cetonici pornete de la dou molecule de acetil-CoA i are loc dup urmtoarea schem simplificat:

129

CH3 - CO SCoA + CH3 - CO SCoA Acetil - CoA Acetil - CoA ; - CoA SH SCoA CH3 - CO CH2 - CO Acetoacetil - CoA - CoA SH

CH3 - CO - CH2 - COOH Acid acetilacetic (sau beta-cetobutiric) Decarboxilare Reducere (+2H) ( CO2) CH3- CHOH - CH2- COOH ; acid beta-hidroxibutiric CH3 - CO - CH3 acetona

Metabolismul colesterolului

Cu excepia celulelor nervoase mature, toate celelalte celule nucleate ale organismului sunt capabile de biosinteza colesterolului. Ea urmeaz un drum lung i complicat i pornete, de asemenea de la acetil-CoA. Aportul de colesterol exogen cu hrana poate ncetini procesul de biosintez. In metabolismul colesterolului, ficatul ocup un loc central. Ficatul este organul care sintetizeaz cantiti considerabile de colesterol care este cedat lichidului biliar i contribuie, mpreun i cu alte substane, la emulsionarea lipidelor alimentare. Din intestin colesterolul este practic complet resorbit ajungnd din nou n ficat. Aceast cale ficat-intestin-ficat se numete circulaia enterohepatic a colesterolului. In ficat i are originea i aproape ntreaga cantitate de colesterol care circul n plasma sanguin sub form de lipoproteine n fraciunea -lipoproteic. Esterii colesterolului prezeni n plasma sanguin rezult din esterificarea colesterolului liber sub aciunea unei enzime elaborat tot de ficat. Acest fapt explic i scderea brusc a colesterolului esterificat n afeciuni acute ale ficatului. Ficatul efectueaz i degradarea oxidativ a colesterolului formnd acizii biliari (acidul colic i dezoxicolic). Ei formeaz produsul cantitativ cel mai important de degradare a colesterolului i sunt eliminai n lichidul biliar cu care ajung n intestin, unde ndeplinesc o funcie important n absorbia lipidelor. Acizii biliari sunt combinaii care posed trei atomi de carbon mai puini dect colesterolul i 1-3 grupri hidroxilice n plus. Dintre acizii biliari mai importani amintim acidul colic (OH fixat n poziiile 3, 7 i 12) i acidul dezoxilic (OH fixat n poziiile 3 i 12).

130

(OH)

COOH HO HO (OH)

Schema de oxidare a colesterolului cu formare de acizi biliari

Organismul utilizeaz acizii biliari cu mult economie. Doar o parte mic din cei sintetizai sunt eliminai prin intestin, restul este resorbit i se ntoarce din nou n ficat. In acest fel pot fi cedai zilnic pn la 20 g acizi biliari, fr ca pierderea prin excremente s depeasc 1 g. Aceast pierdere este acoperit din degradarea zilnic a colesterolului. Pe lng acizii biliari, n organism rezult i o serie de ali produi de degradare a colesterolului care, cu toate c din punct de vedere cantitativ sunt practic neglijabili, totui sunt de cea mai mare importan pentru organism. Din aceti produi fac parte hormonii steroidici elaborai de corticosuprarenal i hormonii sexuali formai n gonade. O alt cantitate mic a colesterolului este oxidat n ficat cu formare de 7-dehidrocolesterol, care depus n epiderm, se transform sub influena luminii ultraviolete (radiaia solar) n vitamina D. In acest fel organismul i acoper o cantitate important din necesarul acestei vitamine.
Reglarea metabolismului lipidic

Lipoliza i lipogeneza sunt reglate de aceeai hormoni care intervin i n metabolismul glucidic. Astfel, insulina mpiedic depozitarea lipidelor n esutul adipos i diminueaz concentraia acizilor grai n plasma sanguin. Din contra, adrenalina i noradrenalina stimuleaz lipoliza trigliceridelor i determin o cretere a concentraiei acizilor grai liberi n plasma sanguin. De asemenea, metabolismul lipidic este puternic influenat de starea funcional a glandei tiroide. Hipertiroidismul determin un consum rapid al lipidelor n timp ce hipotiroidismul favorizeaz depozitarea lor. Hormonul somatotrop (STH) determin la animalele tinere acumularea de acizi grai neesterificai n plasm, prin intensificarea lipolizei de la nivelul esutului adipos.
Tulburari ale metabolismului lipidic

Se cunosc o serie de mbolnviri cauzate de perturbri ale metabolismului lipidelor (lipidoze primare). Anumite tulburri ale metabolismului lipidic nsoesc ca fenomene secundare, alte dereglri, nelegate de metabolismul lipidic propriuzis (lipidoze secundare).
131

Din grupa lipidozelor primare fac parte o serie de afeciuni provocate mai ales de enzimopatii ereditare. Dintre acestea pot fi amintite: - hiperlipemia esenial, care este o stare patologic caracterizat printr-o cretere anormal a lipidelor neutre din snge i care confer sngelui o lactescen pronunat; - hipercolesterolemia idiopatic sau familial care este o boal caracterizat printr-o concentraie constant ridicat a colesterolului n snge, nsoit de predispoziii ctre ateroscleroz;
- boala lui Tay-Sachs, caracterizat printr-o acumulare de gangliozide n

celule nervoase, care duc la grave tulburri neuropshice. Lipidozele secundare se manifest la o serie de mbolnviri ale ficatului i rinichiului, la intoxicaii (cu cloroform, tetraclorur de carbon, alcoolism cronic), la diabet, obezitate i unele dereglri ale sistemului neuro-endocrin.

Rezumat cap. 10: Metabolism lipidic 1. Aspecte biochimice ale digestiei i absorbiei lipidelor 2. Procese catabolice:

catabolismul trigliceridelor lipoliza catabolismul acizilor grai; catabolismul colesterolului; catabolismul lipidelor complexe. biosinteza acizilor grai; biosinteza corpilor cetonici; biosinteza colesterolului; biosinteza lipidelor complexe.
Teste de autoevaluare

3. Procese anabolice:

1. Sunt implicate n -oxidarea mitocondrial a acizilor grai: a). NADP+; b). carnitina; c). FAD. Rspuns: c. 2. Numrul de moli de ATP rezultai prin oxidarea total a palmitatului activat este: a). 131 moli ATP; b). 40 moli ATP; c). 160 moli ATP. Rspuns: a
132

3. Acizii grai destinai -oxidrii sunt transferai n mitocondrie sub form de : a). acil-CoA; b). citrat; c). acil carnitin. Rspunss: c. 4. Detaarea unui fragment de acetil-CoA n cursul -oxidrii acid gras CoA implic desfurarea unei succesiuni de 4 reacii. Ordinea corect a acestei succesiuni este: a). oxidare, dehidratare, reducere, clivare; b). reducere, deshidratare, reducere, clivare; c). dehidrogenare, hidratare, dehidrogenare, clivare. Rspuns: c. 5. n cursul -oxidrii unui acid gras saturat s-a ajuns la intermediarul R CH = CH CO-SCoA care va fi implicat n reacia: a). hidrogenarea n prezena unei hidrogenaze cu coenzima NADH + H+; b). adiia de ap; c). tioliza. Rspuns: b. 6. Considernd calea major de sintez a corpilor cetonici, precursorul imediat al acidului acetilacetic este: a). acetoacetil-CoA; b).
-hidroxi--metilglutaril-CoA;

c).

hidroxibutiratul. Rspuns: b. 7. Cea mai important surs de echivaleni reductori pentru sinteza acizilor grai n ficat este: a). glicoliza; b). calea acizilor tricarboxilici; c). calea pentozofosfailor. Rspuns: c. 8. n sinteza extra-mitocondrial a acizilor grai, CO2 este necesar: a). n conversia malonil-CoA la -hidroxibutiril-CoA; b). n conversia acetil-CoA la malonil-CoA; c). pentru a evita formarea malonil-CoA. Rspuns: b. 9. Lipoproteinele plasmatice care au cel mai mare coninut procentual de colesterol sunt: a). chilomicronii; b). VLDL; c). LDL; d). HDL. Rspuns: c. 10. Diferenele comparative directe ntre biosinteza i degradarea acizilor grai sunt: a). sinteza utilizeaz NADPH + H+, pe cnd oxidarea utilizeaz NAD.
133

b). sinteza este accelerat pe cnd oxidarea este inhibat de insulin; c). malonil CoA este intermediar n sintez, nu i n oxidare; d). sinteza are loc n mitocondrie pe cnd degradarea n citoplasm. Rspuns: a, b, c.
Teme /Activiti

-Scriei secvena celor 4 reacii principale implicate n -oxidarea acidului palmitic (C16) i acidului stearic (C18). -Scriei secvena reaciilor implicate n -oxidarea acidului oleic. Discutai comparativ care sunt principalele diferene ce apar n cazul -oxidrii unui acid gras nesaturat fa de un acid gras saturat. -Scriei ecuaiile reaciilor chimice pentru transformrile metabolice implicate n cetoliz: acetoacetat acetoacetil CoA 2 acetil-CoA -Discutai (din punct de vedere biochimic) de ce animalele nu pot converti acizi grai n glucoz. -Scriei secvena reaciilor implicate n sinteza palmitatului. -Scriei ecuaia reaciei chimice implicate n esterificarea colesterolului; colesterol + acid gras colesterid + H2O -Care sunt principalii compui ce pot rezulta prin catabolizarea colesterolului?
ntrebri de verificare

1. n catabolizarea acizilor grai se cunosc mai multe ci. S se precizeze urmtoarele: care cale predomin n organismele animale? care este forma activ a acizilor grai? ci moli de acetil-CoA rezult la catabolizarea acidului stearic? sau nu un caz patologic. 3. Considernd biosinteza acizilor grai n organismele animale, se cere s se precizeze urmtoarele: enumerarea etapelor ce au loc n calea malonil-CoA; ce tipuri de acizi grai nesaturai se pot forma n organismul animal.

2. S se precizeze ce se nelege prin cetogenez i dac cetogeneza este

4. S se precizeze rolul AMP ciclic n lipoliz. 5. Care sunt principalii factori implicai n reglarea sintezei acizilor grai.

134

Capitol XI METABOLISMUL PROTIDELOR

Digestia, absorbtia si vehicularea protidelor

Protidele exogene sunt supuse procesului de degradare incepnd din stomac sub influenta pepsinei si HCl, ca si a chimozinei (prezenta numai la tineret, in faza de alaptare). Randamentul catabolizarii gastrice a protidelor este pna la 30%, termenii finali fiind polipeptidele. In intestin, cu deosebire in duoden si ileon, sub influenta endopeptidazelor pancreatice (tripsina si chimotripsina) si a

carboxipeptidazelor, proteinele nedigerate in stomac si polipeptidele sunt catabolizate la peptide simple si respectiv aminoacizi. Nucleoprotidele sunt hidrolizate in duoden de catre ribo- si dezoxiribonucleaza la peptide si acizi nucleici. Rumegtoarele prezint particulariti remarcabile ale mecanismelor de digestie, datorit interveniei microflorei i microfaunei din prestomace. Digestia la rumegtoare ncepe n rumen i este realizat prin intervenia enzimelor bacteriene specifice, care degradeaz protidele pn la termenii de acizi grai volatili (AGV), acetat, propionat, butirat, izovaleriant i NH3. Studiile cu N* i C* au artat c aminoacizii rezultai din hidroliza proteinelor n rumen sunt degradai complet prin dezaminare i decarboxilare. Moleculele AGV i NH3 care depesc cantitativ necesarul pentru sinteza proteic bacterian sunt absorbite ca atare prin peretele rumenal i transferate ficatului n care au loc sinteze ulterioare de glucide, acizi grai, uree. Proteina bacterian este metabolizat prin aceleai mecanisme ca i la monogastrice n abomasum i intestin pn la termenii de aminoacizi. Acetia sunt absorbii prin mucoasa intestinal i dirijai prin circulaia port la ficat pentru degradri i sinteze ulterioare. Trebuie subliniat faptul c intervenia florei bacteriene rumenale n digestia protidelor induce anumite avantaje metabolice: a). ridicarea valorii biologice a protidelor exogene ingerate (de regul de origine vegetal). b). valorificarea surselor exogene de azot neproteic. Ureea, de exemplu, cel mai frecvent utilizat n practica alimentaiei animalelor, este scindat de ureaz n NH3 i CO2
135

N H 2 - CO - N H 2

H2O ureaza

N H 3 + CO 2

Amoniacul rezultat, mpreun cu o cantitate adecvat de lanuri de carbon (furnizate de glucide uor hidrolizabile melas, n particular) servete drept precursor pentru sinteza proteic bacterian. Proteina bacterian servete apoi drept surs de aminoacizi pentru utilizri ulterioare.
Absorbia

La adult, absorbia proteinelor se realizeaz numai sub form de aminoacizi n intestin. La rumegtoare, n particular, absorbia lor se face n rumen i sub form de AG i NH3. Printr-un mecanism nc incomplet elucidat, n organismul animal sunt absorbii numai aminoacizi din seria L. Dup absorbia lor prin peretele intestinal, aminoacizii sunt vehiculai prin circulaia sanguin spre ficat i apoi n toate celelalte organe, formnd n totalitatea lor aa-numitul fond metabolic sau depozit metabolic. Acest depozit conine toi aminoacizii i st n permanen la dispoziia organismului. Acest depozit nu poate fi ns comparat cu depozitul glucidelor, sub form de glicogen sau cel al lipidelor, sub form de esut adipos, ci formeaz o cantitate relativ extrem de mic, de numai 0,6-3,5 g N. Cu toate acestea, din acest depozit este consumat zilnic numai pentru biosinteza proteinelor o cantitate de 25-95 g N, ceea ce devine posibil numai datorit unui proces metabolic extrem de ridicat care asigur o continu completare i renoire a materialului consumat.
Metabolismul aminoacizilor

Aminoacizii rezult din proteinele coninute n hran. Prin hidroliza acestora n intestin, aminoacizii se elibereaz din moleculele proteice i trec n sngele din vena port. Din acest motiv, concentraia lor crete considerabil n aceast ven dup un prnz bogat n proteine. Aceast cretere de aminoacizi liberi nu se observ ns i n restul circulaiei deoarece ficatul reine majoritatea lor i i folosete n biosinteza proteinelor hepatice i plasmatice sau i transform cu eliberare de amoniac i cetoacizi. Cetoacizii rezultai pot fi transformai apoi n acizi grai sau glucide sau pot fi degradai n CO2 i H2O cu eliberare de energie. Amoniacul eliberat este folosit n biosinteza unor compui azotai (baze purinice i pirimidinice). Excesul de amoniac este transformat n uree i eliminat din snge prin urin, dup ce a fost transportat la rinichi. Ficatului i revine deci o funcie de tamponare care previne, pe de o parte o suprancrcare a organelor periferice cu
136

aminoacizi i asigur, pe de alt parte, o aprovizionare normal a acestor organe ntre prnzuri prin vrsare continu de aminoacizi n snge. Aminoacizii pot suferi o serie de transformri i particip la o serie de reacii importante pentru organism, dintre care se amintesc: - sinteza de proteine proprii ale organismului, inclusiv a enzimelor; - sinteza de peptide biologic active (glutation, vasopresin, oxitocin); transformarea aminoacizilor n metabolii ai metabolismului lipidic (liponeogenez) i ai celui glucidic (gliconeogenez); - degradarea aminoacizilor cu formare de cetoacizi n scopul obinerii de energie; - transformri speciale ale aminoacizilor cu formarea unor metabolii de o importan vital (creatin, baze purinice i pirimidinice).
Catabolismul aminoacizilor

Cile generale i comune de degradare ale tuturor aminoacizilor sunt: degradarea prin transaminare, degradarea prin dezaminare i degradarea prin decarboxilare.
Transaminarea aminoacizilor.

Dintre

procesele

metabolice

ale

aminoacizilor, locul cel mai important l ocup transaminarea. Ea joac un rol deosebit n formarea ureei (degradarea aminoacizilor i eliminarea azotului aminic prin urin), n gluconeogenez din aminoacizi, precum i n biosinteza aminoacizilor. Prin transaminare se nelege o reacie reversibil ntre un aminoacid i un -cetoacid. Ca rezultat al reaciei, care se desfoar sub aciunea transaminazelor sau aminotransferazelor, -cetoacidul devine aminoacid, iar aminoacidul, -cetoacid. Reaciile de transaminare au loc mai ales n ficat i n rinichi. Drept cetoacizi sunt folosii de preferin acizii -cetoglutaric i -cetosuccinic, denumit i acid oxalilacetic. Reaciile generale de transaminare pentru aceti doi acizi pot fi prezentate astfel:

137

COOH CH2 CH2 R C = O + CH - NH2 COOH COOH Acid alfa-cetoglutaric Alfa- aminoacid

COOH CH2 CH2 COOH Acid glutamic R CH - NH2 + C = O COOH alfa cetoacid

COOH CH2 R

COOH CH2 COOH Acid aspartic R

C = O + CH - NH2 COOH COOH alfa Acid alfa-cetosuccinic aminoacid

CH - NH2 + C = O COOH alfa cetoacid

Cu ajutorul acestor reacii, organismul poate sintetiza orice aminoacid al crui lan de carbon poate fi biosintetizat sub form de cetoacid. Acest lucru nu este posibil n cazul aminoacizilor eseniali care trebuie de aceea procurai, prin apor extern cu hrana.
Dezaminarea aminoacizilor. O alt cale general de degradare a

aminoacizilor const n dezaminarea lor, care poate fi oxidativ (cnd rezult cetoacid), hidrolitic (cnd rezult un hidroxiacid), reductoare (cnd rezult un acid saturat) sau desaturant (cnd rezult un acid nesaturat). Reacii de dezaminare a aminoacizilor:

138

R I oxidativa CH2 + 1/2 O2 C = O COOH alfa cetoacid R

+ NH3

CH2 + NH3 hidrolitica R CH OH + H2O COOH CH2 Dezaminare alfaCH - NH2 hidroxiacid COOH alfa aminoacid R CH reducatoare 2 + NH3 CH2 + H2 COOH acid gras R CH2 desaturanta CH CH + NH3

COOH acid nesaturat

Toate aceste ci apar la diverse organisme i sunt catalizate de enzime speciale. n organismul animal se realizeaz ns n mod preferenial dezaminarea oxidativ.
Decarboxilarea aminoacizilor. O a treia cale general de degradare a

aminoacizilor

const

decarboxilarea

lor.

Sub

aciunea

aminoacid-

decarboxilazelor aminoacizii trec n aminele corespunztoare care poart i denumirea de amine biogene. Acestea pot avea un rol farmacodinamic bine determinat (histamin, tiramin, serotonin), pot servi ca puncte de plecare n sinteza unor compui biologic importani (acid -aminobutiric, etanolamin) sau pot fi substane toxice (putrescein, cadaverin). Acestea din urm rezult mai ales sub aciunea enzimelor bacteriilor intestinale i sunt eliminate din organism. Reacia general de decarboxilare a aminoacizilor:

139

R CH - NH2 COOH alfa aminoacid - CO2

R CH2 - NH2 amina

Metabolismul componentelor rezultate din degradarea aminoacizilor

S-a vzut c una din cile importante de degradare a aminoacizilor n organismul animal este dezaminarea, mai ales cea oxidativ. Din reacia de dezaminare rezult amoniac i o component carbonic ternar format din C, H i O, care n cazul dezaminrii oxidative este un cetoacid. n cele ce urmeaz se vor prezenta pe scurt metabolismul amoniacului i cel al componentei carbonice.
Metabolismul amoniacului. Amoniacul rezultat n organism din reaciile

de dezaminare a aminoacizilor, dar i n aciunea florei intestinale asupra proteinelor alimentare, este un toxic puternic pentru sistemul nervos central. Cantiti mici de amoniac n snge pot duce la com i moarte. Pentru a se apra de aciunea toxic a amoniacului, organismul animal dispune de mecanisme rapide i eficiente de detoxifiere care se realizeaz prin dou ci: - prin transformarea amoniacului n uree i eliminarea sa din organism sub aceast form; - prin transformarea amoniacului n glutamin i pstrarea sa n organism sub aceast form netoxic; La plante, detoxifierea amoniacului se face mai ales prin trecerea sa n asparagin.
Ureogeneza Sinteza ureei are loc n ficat i reprezint un proces consumator

de energie (proces endergonic). Ea se desfoar ca i multe alte importante reacii metabolice sub forma unui ciclu, denumit ciclul ureogenetic sau ornitinei, dup aminoacidul cheie din acest ciclu. Formarea ureei implic intervenia unor mecanisme enzimatice complexe i cuprinde o succesiune de reacii cuprinse n schema de mai jos. n prima faz, ornitina este transformat n citrulin prin intervenia carbamilfosfatului sintetizat cu ajutorul ATP-ului prin combinarea amoniacului cu CO2, ambii formai n decursul proceselor de degradare din organism. Carbamilfosfatul conine o legtur fosfat de nalt potenial energetic i constituie forma activ a gruprii carbamil care face posibil cuplarea cu ornitina. n continuare, citrulina este transformat n arginin prin ncorporarea unei a doua
140

molecule de amoniac, dar nu sub form liber, ci sub forma gruprii aminice din molecula acidului aspartic. Aceast grupare aminic provine de fapt din amoniac liber. Transformarea citrulinei n arginin este catalizat de argininsintetaza i are loc n dou etape i anume: prin condensarea citrulinei cu acidul aspartic se formeaz, n prima etap, acidul argininsuccinic, care este scindat n etapa urmtoare, sub aciunea unei liaze, n arginin i acid fumaric. Arginina, n sfrit, este scindat sub aciunea arginazei, n uree i ornitin, ncheindu-se astfel, ciclul, cu regenerarea ornitinei, care devine disponibil pentru o nou fixare de amoniac. Ureea format ajunge pe cale sanguin la rinichi i este eliminat prin urin.
H2N ATP NH2 C=O O P C=O H2C - NH H2C H2C H - C - NH2 CH2- NH2 CH2 CH2 CH - NH2 COOH ornitina H2C - NH - C - NH2 NH2 C=O NH2 uree H2C H2C H - C - NH2 COOH arginina HOOC H C C H COOH COOH citrulina COOH CH2 H2N - CH COOH acid aspartic COOH NH2 CH2 CH2 CH - NH2 COOH acid argininsuccinic CH2 COOH CH2 - NH - C = N - C - H

CO 2

NH3 carbamilfosfat

acid fumaric

Exist numeroase corelaii ntre ciclul ureogenetic i alte procese metabolice n organism. Astfel, prin formarea acidului fumaric, ciclul ureogenetic stabilete legtura cu ciclul Krebs de oxidare terminal a glucidelor, lipidelor i protidelor. Prin participarea acidului aspartic la ciclul ureogenetic exist posibilitatea ca toi aminoacizii transaminabili s poat participa la acest ciclu. O alt corelaie important exist ntre ciclul ureogenetic i sinteza bazelor pirimidinice, componente structurale principale ale acizilor nucleici.

141

Glutaminogeneza

Transformarea amoniacului n glutamin reprezint o cale de detoxifiere a acestui compus cu pstrarea sa n organism. Aceast reacie este de asemenea endergonic (consum de ATP) i are loc n ficat, dar i n alte organe i esuturi, mai ales n esutul nervos central sub aciunea catalitic a glutaminsintetazei. Glutamina format nu este toxic pentru organism i reprezint o form important de transport i de depozitare a amoniacului din care acesta poate fi preluat ori de cte ori este nevoie i folosit n diverse biosinteze i procese metabolice (ca de exemplu, n reglarea echilibrului acido-bazic n rinichi). Formarea glutaminei are loc prin fixarea amoniacului de acidul glutamic cu realizarea unei grupri amidice, dup urmtoarea schem de reacie: CONH2 COOH CH2 CH2 glutaminsintetaza CH2 + ADP + P CH2 + NH3 + ATP H - C -NH2 H - C -NH2 COOH COOH Glutamina Acid glutamic O parte din glutamin ajunge pe cale sanguin i n rinichi, unde sub aciunea glutaminazei are loc scindarea ei n acid glutamic i amoniac.

COOH CONH2 CH2 CH2 glutaminaza CH2 CH2 + NH3 H2O H - C -NH2 H - C -NH2 COOH COOH Glutamina Acid glutamic

Amoniacul rezultat formeaz aa-numitul amoniac urinar care poate fi eliminat ca atare, mpreun cu urina, sau folosit la neutralizarea acizilor excretai prin urin. Acidul glutamic la rndul su se ntoarce n ficat i n celelalte esuturi ale organismului, unde va fi folosit la o nou sintez de glutamin. S e poate vorbi deci de existena unui ciclu al glutaminei n organism, rezultatul schematic astfel:

142

FICAT

SANGE

RINICHI

GLUTAMINA GLUTAMINA GLUTAMINA

NH3 ACID GLUTAMIC AMINOACIZI ACID GLUTAMIC

NH3 ACID GLUTAMIC

URINA

Prin reacia de transaminare (1) toi aminoacizii trec n prezena acidului

-cetoglutaric n acid glutamic cu eliberarea concomitent a -cetoacizilor

corespunztori. Acidul glutamic rezultat este supus n continuare unei dezaminri oxidative (2), regenernd acidul -cetoglutaric i elibernd o molecul de amoniac. Amoniacul format, produs toxic pentru organismul animal este rapid neutralizat prin transformarea sa n compui inofensivi. Acest fapt se poate realiza prin dou mecanisme: prin formarea de glutamin, n urma reaciei sale cu acidul glutamic (3), fie prin transformarea sa n uree (4), dup parcurgerea ciclului ureogenetic din ficat.
AMINOACIZI (1) Transaminare + Acid alfa ( alfa-cetoacizi ) ceto-glutaric ACID GLUTAMIC (2) Dezaminarea oxidativa

(3)

NH3 + Acid alfa ceto-glutaric CITRULINA Ornitina Arginina

GLUTAMINA

UREE

143

Metabolismul componentei carbonice rezultate din degradarea aminoacizilor

Transaminarea i dezaminarea oxidativ reprezint cile majore de dezaminare ale aminoacizilor. Prin aceste procese aminoacizii sunt transformai n cetoacizii lor analogi. Acetia pot strbate n continuare mai multe ci de metabolizare, dintre care amintim urmtoarele: Degradarea total cu formare de CO2 i H2O . Acest proces reprezint

calea care elibereaz energia inclus n scheletul carbonic al aminoacizilor i se realizeaz prin includerea cetoacizilor n reaciile ciclului acizilor tricarboxilici i oxidarea lor complet n CO2 i H2O. Astfel, se tie c cetoacizii corespunztori acidului glutamic i aspartic, i anume acidul -cetoglutaric i -cetosuccinic, denumit i oxalilacetic, sunt componente directe ale acestui ciclu. Acidul piruvic la rndul su, care prezint cetoacidul analog alaninei, este chiar iniiatorul ciclului prin acetatul activ (acetil-CoA) generat de el, care se condenseaz cu acidul oxalil-acetic cu formare de acid citric, prima component n ciclul acizilor tricarboxilici. Prin reacia de transaminare a aminoacizilor cu acidul -cetoglutaric cu formare de acid glutamic i cuplarea acestei reacii cu dezaminarea oxidativ a acidului glutamic format se introduce n ciclul de degradare terminal componenta carbonic a tuturor aminoacizilor transaminabili sub forma lor de cetoacizi, care la rndul lor pot fi degradai n compuii finali CO2 i H2O.
-Aminarea cetoacizilor este o alt cale de metabolizare a scheletului

carbonic al aminoacizilor i duce la resinteza aminoacizilor corespunztori. Rolul hotrtor n aceast reacie deosebit de important pentru biosinteza aminoacizilor n organism l are tot acidul glutamic (pe lng cel aspartic), punnd la dispoziie gruparea sa aminic, care n reacia de transaminare este transferat pe cetoacizi cu formarea aminoacizilor coerspunztori.
- Transformarea aminoacizilor n glucide reprezint o cale de neogenez a

glucidelor din proteine i stabilete legtura dintre metabolismul proteic i cel glucidic. La aceast reacie pot participa ns numai anumii cetoacizi i anume cei corespunztori aa-numiilor aminoacizi glucogeni sau glucoformatori. Caracteristic pentru aceti aminoacizi este posibilitatea lor de a fi transformai n acid piruvic care, la rndul su, poate trece apoi n glucoz i mai departe n glicogen.

144

- Transformarea cetoacizilor n corpi cetonici are loc numai n cazul cetoacizilor derivai de la aa-numiii aminoacizi cetogeni. Caracteristic pentru aceti aminoacizi este faptul c prin metabolizarea lor pot genera radicalul acetil care, la rndul lui poate duce, n anumite condiii fiziologice, la formarea acizilor acetilacetic i -hidroxibutiric din clasa corpilor cetonici .
Exemple de aminoacizi glucogeni i cetogeni: aminoacizi glucogeni

alanina, fenilalanina, izoleucin, triptofan, acid glutamic, acid aspartic, metionin, treonin, valin; aminoacizi cetogeni alanin, fenilalanin, izoleucin, triptofan, leucin; aminoacizi gluco-i cetogeni -alanin, fenilalanin, izoleucin, triptofan.
Noiuni de biosintez a proteinelor

Biosinteza proteinelor este unul dintre cele mai interesante, dar totodat i unul din cele mai complicate procese biochimice. Multe aspecte ale acestui proces au fost clarificate abia recent i nc mai sunt numeroase probleme care ateapt s fie elucidate. n cele ce urmeaz se vor prezenta pe scurt noiunele de baz i fazele cele mai importante ale biosintezei proteinelor. Sinteza proteinelor are loc n citoplasm la nivelul ribozomilor (granulele lui Palade). Celulele care desfoar o sintez proteic ntens, cum sunt cele ale glandelor secretoare (de exemplu, partea exocrin a pancreasului), posed un numr crescut de ribozomi, fixai de regul pe membranele reticulului endoplasmatic. Dac activitatea de biosintez este mai redus, ribozomii se gsesc mai ales liberi n citoplasm i ntr-un numr mai redus. O celul hepatic de pild, conine peste un milion de ribozomi, dintre care aproximativ 75% sunt fixai de membrane. Ribozomii sunt de fapt ribonucleoproteine, adic sunt formai din acizi ribonucleici i din proteine i au o form aproape sferic. Ei sunt alctuii din dou subuniti de mrimi diferite. Biosinteza proteinelor fiind un proces endergonic, cu un consum ridicat de energie, presupune existena unei cantiti suficiente de ATP i totodat prezena tuturor aminoacizilor care intr n structura proteinelor ce urmeaz a fi sintetizate. Lipsa unui singur aminoacid esenial din hran reduce considerabil biosinteza proteinelor, formarea proteinei ntrerupndu-se mereu n acel loc al lanului polipeptidic n care conform secvenei determinate genetic ar fi trebuit s intre aminoacidul esenial lips. Indicaiile cu privire la secvena exact a aminoacizilor din lanurile polipeptidice (caracteristic pentru fiecare tip de de protein n parte),
145

sunt cuprinse sub forma unui mesaj genetic codificat n moleculele filiforme uriae ale acizilor dezoxiribonucleici localizai n cromozomi. Ca acest mesaj situat n nucleu s ajung la locul biosintezei proteinelor aflat n citoplasm el trebuie s fie mai nti transcris pe un mesager i apoi transportat de acesta din nucleu la locul de sintez. Acest proces, denumit transcripie se realizeaz prin acidul ribonucleic mesager (ARN-m numit i ARN informaional) care ajuns n citoplasm, interacioneaz cu ribozomii unindu-i sub forma lor activ de poliribozomi sau polizomi. Aminoacizii la rndul lor sunt adui la locul de sintez de acidul ribonucleic de transport (ARN-t, numit i ARN de transfer), care putnd citi i traduce mesajul genetic de pe ARN-m asigur includerea aminoacizilor n lanurile polipeptidice n ordinea dictat (proces numit translaie). Mesajul privitor la secvena aminoacizilor dintr-un lan polipeptidic se gsete scris pe ARN-m sub forma cifrat (cod genetic). Principiul acestui cod const n aceea c fiecare secven de trei baze azotate din lanul ARN-m, denumit triplet sau codon, codific un aminoacid. n felul acesta secvena bazelor azotate din molecula unui ARN-m corespunde unei secvene determinate de aminoacizi din lanul polipeptidic. La terminarea reaciei de biosintez, lanul polipeptidic (proteina) se desprinde de pe ribozomi. Biosinteza proteinelor cuprinde n mare, trei faze principale: activarea aminoacizilor i trecerea lor pe acidul ribonucleic de transfer (ARN-t); ataarea acidului ribonucleic de transfer, purttor de aminoacid, de acidul ribonucleic mesager din ribozomi i legarea specific a aminoacizilor ntre ei prin legturi peptidice cu formare de polipeptide i proteine; stoparea reaciei i desprinderea de pe ribozomi a polipeptidelor i proteinelor sintetizate, precum i formarea structurilor secundare, teriare i cuaternare specifice (spiralare, pliere, unificare sub form de uniti funcionale).

Rezumat cap.11: Metabolism protidelor i al acizilor nucleici

-Aspecte biochimice ale digestiei i absorbiei protidelor. -Procese catabolice comune ale aminoacizilor: -Metabolismul amoniacului -Catabolismul i biosinteza nucleotidelor -Biosinteza acizilor nucleici -Biosinteza proteinelor.
146

Teste de autoevaluare

1. Decarboxilarea endogen a urmtorilor aminoacizi conduce la aminele biogene corespunztoare, cu excepia: a). lizin -> cadaverin; b). cistein -> etanolamin; c). histidin - > histamin; d). ornitin- > putrescein. Rspuns: b. 2. Afirmaia incorect referitoare la reaciile ciclului ureogenetic este: a). ciclul ureogenetic debuteaz n mitocondriile celulelor prin sinteza carbamoil fosfatului; b). carbamoil fosfatul reacioneaz cu citrulina i formeaz ornitina; c). arginina este percursorul imediat al ureei. Rspuns: b. 3. Afirmaia incorect referitoare la metabolismul aminoacizilor este: a). cetoacizii care particip frecvent la reaciile de transaminare sunt acidul piruvic i acidul; -cetoglutaric; b). n transaminarea catalizat de GPT are loc transferul gruprilor aminice de la acidul aspartic la acidul -cetoglutaric; c). reaciile de transaminare sunt reversibile. Rspuns: b. 4. Afirmaiile corecte privind glutamina sunt: a). singura ei evoluie metabolic este hidroliza la glutamat; b). nu este prezent n proteinele tisulare; c). nu servete ca precursor biosintetic; d). sinteza sa din glutamat i NH3 este consumatoare de ATP. Rspuns: d. 5. Produii metabolici derivai din fenilalanin sunt: a). tirozina; b). leucina; c). melanina; d). malonil CoA. Rspuns: a, c. 6. Transaminarea: a). este o reacie termodinamic ireversibil; b). este o reacie termodinamic reversibil; c). joac un rol esenial n sinteza tuturor aminoacizilor neeseniali; d). este catalizat de enzime biotin-dependente; e). este implicat n catabolismul aminoacizilor. Rspuns: b, c.
147

7. Afirmaii corecte privind metabolismul fierului i hemului sunt: a). fierul este depozitat n ficat ca feritin; b). Fe3+ este inserat n proporfirina IX n ultima etap a sintezei hemului ; c). carbonul din glicocolul utilizat n biosinteza hemului este excretat ca bilirubin. Rspuns: a, c. 8. Sunt corecte afirmaiile: a). carnitina provine din hidroliza unor proteine ce conin trimetillizin; b). NO provine din arginin; c). S-adenozil metionina conine un atom de sulf ncrcat negativ; d). -aminobutiratul rezult prin decarboxilarea ornitinei. e). putresceina rezult prin decarboxilarea glutamatului. Rspuns: a,b. 9. Afirmaiile corecte sunt: a). serina este un aminoacid ce poate deveni surs de carbon pentru acidul tetrahidrofolic; b). arginina n form hidroxilat intr n structura colagenului; c). lizina prin prelucrare postraducere poate forma hidroxilizin. Rspuns: a, c. 10. Afirmaiile corecte referitoare la bilirubin sunt; a). bilirubina direct este cea conjugat i este hidrosolubil; b). bilirubina indirect este cea neconjugat i este greu solubil; c). stercobilinogenul se formeaz din bilirubin n intestin. Rspuns: a, b, c. 11. n legtur cu activitatea ARN-polimerazei este corect afirmaia: a). transcrierea AND de ctre ARN-polimeraz este semiconservativ; b). necesit participarea unei topoizomeraze; c). una din subunitile ARN-polimerazei are activitate exonucleazic; d). ARN-polimeraza nu poate verifica exactitatea transcrierii; e). catalizeaz ndeprtarea intronilor lui transcriptul primar. Rspuns: d. 12Aminoacil- ARNt interacioneaz cu: a). ARN-polimeraza; b). ADN-polimeraza; c). ARNm. Rspuns: c.

148

13. Cei patru atomi de azot din nucleul purinic sunt derivai din: a). aspartat, glutamin i glicin; b). glutamin, amoniac i aspartat; c). glicin i aspartat; d). amoniac, glicin i glutamat; e). uree, glicin i aspartat. Rspuns: d. 14. ARN-polimerazele; a). copiaz catena ADN template (matri) n direcia 3-5 a acesteia; b). produc pirofosfat ori de cte ori la captul polinucleotidic n cretere se adaug un nou nucleotid; c). sunt implicate n replicare; d). sintetizeaz polinucleotide n direcia 5-3. Rspuns: a, b, c, d.
Teme / ntrebri de verificare

-Scriei ecuaia reaciei chimice ce implic dezaminarea direct pentru: a). serin piruvat + NH4+; b). treonin -cetobutirat + NH4+. -Explicai din punct de vedere chimic de ce n intoxicaia cu uree se produce alcaloz rumenal (NH4+HO-) iar la nivel tisular se produce acidoz metabolic. -Artai care sunt principalele enzime implicate n catabolizarea acizilor nucleici i care sunt principalii produi obinui. -Specificai care sunt principalele etape ale catabolizrii nucleoprotidelor purinice i pirimidinice. -S se precizeze cile generale de catabolizare ale aminoacizilor, precum i modul de fixare a amoniacului n organismul animal. -Explicai termenul de pool aminoacid. -Discutai soarta metabolic ale scheletelor de carbon i a NH4+ ca principali produi rezultai prin degradarea aminoacizilor. -Care sunt principalele surse pentru biosinteza aminoacizilor.

149

Capitol XII INTERRELAII METABOLICE

ntre procesele metabolice din organism exist relaii strnse att n ceea ce privete substanele, ct i n ceea ce privete energia, Transformrile catabolice ale compuilor biochimici n organism furnizeaz energia necesar desfurrii proceselor specifice diverselor esuturi i organe odat cu generarea produilor finali comuni: CO2, H2O, NH3. Placa turnant a metabolismului adic punctul comun al interrelaiilor metabolice ale organismului animal l reprezint calea metabolic major i comun care este ciclul Krebs, prin care glucide, lipide, proteine se transform pn la CO2 i H2O. Pentru funcionarea adecvat a ciclul Krebs este necesar un raport adecvat intre acetil coenzima A i acidul oxalilacetic. Acetil-coenzima A este un intermediar cheie pentru sinteza compuilor proprii organismului. Acetilcoenzima A se formeaz att prin catabolismul acizilor grai (-oxidare) ct i prin catabolismul glucidelor, ceea ce asigur corelarea metabolismului glucidic cu cel lipidic n organism acetil coenzima A, urmeaz trei ci metabolice importante: a). acetil coenzima A se condenseaz cu acidul oxalo-acetic i iniiaz calea ciclului Krebs, proces care st la baza tuturor transformrilor metabolice fiind punctul comun al proceselor anabolice i catabolice. b). acetil coenzima A prin condensarea cu ea nsi (3 moli) formeaz hidroximetilglutaril coenzima A (HMG-CoA), primul intermediar n biosinteza nucleului stearic. Pe aceast cale se formeaz colesterolul, acizii biliari, hormonii steroizi, vitamina D. Cnd acetilcoenzima A exist n exces, n cadrul unui metabolism viciat (diabet) poate lua natere prin condensarea a dou molecule, acidul acetil-acetic (corp cetonic) i se instituie cetogeneza. c). prin carboxilarea sa i formarea malonilcoenzimei A, acetilcoenzima A servete la formarea acizilor grai. Un alt intermediar metabolic cheie comun metabolismului glucidic i lipidic este glicerofosfatul, care rezult din metabolismul glucidelor i servete la biosinteza gliceridelor i a fosfatidelor.

150

Corelaia metabolic dintre metabolismul glucidic i proteic se realizeaz prin intermediul acizilor -cetoglutaric, oxalilacetic i fumaric. Acetia pot proveni fie din dezaminrile oxidative ale aminoacizilor, fie din catabolizarea glucidelor. Acizii -cetoglutaric i oxalil-acetic sunt intermediari comuni metabolismului glucidic i proteic.Prin transaminare aceti acizi se transform reversibil n acizii aspartic i glutamic, fcndu-se legtura ntre ciclul Krebs i metabolismul proteinelor. Pe de o parte acidul aspartic ia parte la biosinteza bazelor pirimidinice nucleice. Acidul fumaric este intermediar comun pentru metabolismul glucidelor i proteinelor i face legtura cu ciclul ureogenetic. Acidul succinic realizeaz legtura cu metabolismul porfirinelor (Hb), bazelor purinice i pirimidinice, prin transformarea n acid aspartic.
Transformri energetice

Procesul final al transformrilor metabolice suferite de glucide, lipide i proteine este lanul respirator prin care H+ rezultat se oxideaz cu formare de ap (prin intermediul transportorilor de H+ i e-). Lanul respirator continu ciclul Krebs, proces ciclic n care se elimin CO2. Lanul respirator este cuplat n trei locuri cu fosforilarea oxidativ, sursa cea mai avantajoas de energie chimic liber. n principiu, lanul respirator poate fi cuplat cu toate dehidrogenrile dependente de NADH + H+. Legtura dintre ciclul Krebs i lanul respirator este strns, n primul rnd datorit apropierii spaiale n mitocondrii, n al doilea rnd deoarece n ciclul Krebs se produce o cantitate apreciabil de coenzim redus NADH2 i FADH2. Corelaia dintre ciclul Krebs, lanul respirator i fosforilarea oxidativ este calea major prin care celula se aprovizioneaz cu energie. Transformrile glucidelor, lipidelor, proteinelor din unele n altele au fost urmrite cu ajutorul carbonului radioactiv, administrndu-se n hrana animalelor glucoz marcat. Carbonul radioactiv a fost identificat ulterior n aminoacizi, glicerol, acizi grai i alte combinaii mai complexe ale acestora. Metaboliii comuni mai multor clase de substane formeaz pentru organism aa numitul fond metabolic comun (FMC) care este utilizat de organism n funcie de originea metabolic comun (aceasta deoarece n FMC moleculele substanelor se amestec, iar originea lor din glucide sau lipide nu mai poate fi precizat. Exemple de FMC: acetilcoenzima A, CO2, H2, acid piruvic, acid cetoglutaric, acid succinic, acid oxaloacetic, deci se observ c n general sunt
151

substane cu molecul mic, care rezult din diferite procese metabolice i pe care celula animal le folosete pentru procesele de biosintez care duc la formarea de molecule mai complicate. Exemple: acetil CoA se transform n acizi grai, steroli, corpi cetonici i energie. Bioxidul de carbon rezultat prin catabolismul glucidelor, lipidelor, proteinelor, servete la biosinteza bazelor nucleice ct i n ureogenez. Organismul animal are capacitatea de a-i autoregla procesele metabolice. Mecanismele moleculare de autoreglare metabolic acioneaz asupra factorilor de care depinde n special activitatea sistemelor enzimatice i anume concentraia substratului, inhibitorii i activatorii. Concentraia substratului, asupra cruia acioneaz enzima poate constitui un factor de autoreglare metabolic. Deobicei mecanismul de autoreglare funcioneaz prin retroinhibiie (feed-back), adic un proces enzimatic este inhibat de ctre un produs metabolic al su (un produs rezultat n urma reaciei), este un proces de inhibare alosteric a enzimei cheie. Astfel, CO2 care rezult n urma catabolismului glucidelor, lipidelor, proteinelor poate controla prin concentraia sa, att producerea lui nsi n ciclul Krebs, ct i carboxilarea piruvatului la oxaloacetat care iniieaz un nou ciclul Krebs (deci carboxilarea piruvatului este condiionat de nsi producerea CO2 n ciclul Krebs). Mecanismul central de reglare a metabolimului este S.N.C., form superioar de organizare a materiei vii, pe baza necesitilor vitale ale organismelor. S.N.C. intervine asupra metabolismului prin intermediul unor substane (hormoni, enzime, vitamine). Ca rezultat al transformrilor metabolice organismul animal se dezvolt uniform i consecvent.

152

LUCRRI PRACTICE Volumetria prin reacii de neutralizare Alcalimetria i acidimetria cuprind metodele volumetrice de determinare

cantitativ a acizilor i bazelor prin neutralizarea lor reciproc.Reacia care st la baza acestor metode este urmtoarea: H ++ OH- = H2O
Alcalimetria Determinarea factorului de corecie volumetric, a titrului i concentraiei n g/l a unei soluii aproximativ N/10 de NaOH cu ajutorul unei soluii etalon de acid oxalic N/10. Principiul metodei se bazeaz pe netralizarea unui volum msurat de

acid oxalic N/10 cu NaOH aprox. N/10, n prezena fenolftaleinei care servete ca indicator. Sfritul reaciei este indicat de apariia unei culor roz-pal care persist cteva secunde. Reacia care are loc este:
HOOC-COOH + 2NaOH = NaOOC-COONa + 2H2O Reactivi:

Hidroxid de sodiu aproximativ N/10. Un litru de soluie trebuie s conin 1/10, din echivalentul-gram al NaOH. Eq = M NaOH/nr.OH = 40/l, Eq/10 = 4 g NaOH Acid oxalic N/10 soluie etalon. Acidul oxalic fiind o titrosubstan putem prepara o soluie de normalitate exact. Deoarece acidul oxalic este o substan cristalizat cu dou molecule de ap, n calcularea echivalentului-gram se include i apa de cristalizare.(M/COOH/2 x 2 2H2O = 126,068) Eq = M / nr.H = 226,068/2 = 63,04, Eq/10 = 6,3034 Din calcul reiese c pentru prepararea unui litru de soluie de acid oxalic exact N/10 trebuie s cntrim cu mare precizie, deci la o balan analitic, o cantitate de 6,3034 g (COOH)2 chimic pur. Substana astfel cntrit se introduce cantitativ ntr-un balon cotat de l000 ml prin intermediul unei plnii. Se adaug circa 1/3 din volumul balonului ap distilat i se omogenizeaz. Soluia astfel preparat este trecut ntr-o sticl cu dop lefuit, special pentru pstrarea soluiilor titrate. Sticla se eticheteaz. Fenolftalein 1% soluie alcoolic, se dizolv 1g fenolftalein n 100ml alcool etilic.
153

Modul de lucru:Se msoar exact cu o pipet de 5ml soluie de (COOH)2

N/10, care se introduc ntr-un balon Erlenmeyer de capacitate 100ml. Se adaug o pictur fenolftalein i se spal pereii balonului cu puin ap distilat. Se nclzete soluia pe o sit de azbest la flacra unui bec de gaz pn la 70-800 C pn apar primele bule de gaz pentru ndeprtarea dioxidului de carbon liber din soluie. Trebuie evitat o nclzire prea puternic a soluiei, pentru a nu se descompune acidul oxalic. Se titreaz apoi cu soluie aprox. N/10 NaOH dintr-o biuret, pn la coloraia slab roz a soluiei din balon, care persist 15-20 secunde. Operaia de titrare se execut prin adugarea traptat, pictur cu pictur, apsnd uor pe clem a soluiei NaOH N/10 peste lichidul din balon. Balonul trebuie agitat, imprimndu-se lichidului o micare circular. Se noteaz numrul de ml folosii la titrare V2. Se repet titrarea fcndu-se media a trei titrri.
Calculul:

S presupunem c la titrare s-au folosit n medie 5,1 ml (V2) NaOH N/10 care au neutralizat acidul oxalic din 5ml (V1). Factorul de corecie volumetric se va calcula astfel: 5,l ml NaOH aprox.N/10 .. 5 ml (COOH)2 exact N/10 l ml NaOH aprox. N/10 ...f ml (COOH)2 exact N/10 f = 5/5,1 = 0,9803, este factorul de corecie volumetric al soluiei de NaOH aprox. N/10. La acelai rezultat se ajunge aplicnd noiunea de soluii echivalente: soluiile de aceai normalitate sunt echivalente i reacioneaz n volume egale, n cazul soluiilor de normalitate exact. Dac una din soluii este aproximativ volumele nu mai sunt egale, dar pot deveni egale prin nmulire cu factorii de corecie respectivi. Cnd soluiile au aceai normalitate se poate scrie urmtoarea egalitate: V1f1 = V2f2 (1) f2 = V1f1 / V2 (2) V1 f1 = volumul i factorul soluiei de normalitate exact; V2f2 = volumul i factorul soluiei de normalitate aproximativ. Titrul real al soluiei de normalitate aproximativ se deduce din relaia care definete factorul: f = Tr / Tt, de unde Tr = Tt . f . (3) Din definiia normalitii se poate calcula titrul teoretic Tt = E/N . 1000, la soluia de NaOH N/10 Tt = 40/10000 = 0,004 g NaOH. nlocuind valorile n relaia (3) obinem: Tr = 0,9803 . 0,004 = 0,00392 g NaOH /cc.

154

Concentraia n g/l = Tr . l000 = 0,00392 . 1000 = 3,9 g/l NaOH. Fcnd raportul dintre concentraia la litru i echivalent putem stabili normalitatea soluiei de analizat: 3,9 / 40 = aprox. 0,1 N.
Acidimetria Determinarea factorului de corecie volumetric, a titrului i a concentraiei
0

/00 a unei soluii aprox. N/10 de HCl cu ajutorul unei soluii

aprox. N/10 NaOH de factor cunoscut . Principiul: La baza metodei st neutralizarea unui volum msurat de NaOH

aprox. N/10 cu factor cunoscut, cu o soluie de HCl aprox.N/10 n prezena indicatorului metiloranj. Sfritul reaciei este stabilit de schimbarea culorii galbene a metiloranjului n mediu alcalin, n portocaliu n mediu acid: NaOH + HCl = NaCl + H2O.
Reactivi: 1. NaOH aprox. N/10, 2. HCl aprox.N/10 3. Metiloranj O,1% -

soluie apoas.
Modul de lucru: se msoar cu pipeta exact 5 ml NaOH aprox. 0,1 N cu

factor cunoscut care se introduc ntr-un balon Erlenmeyer. Se adaug 1-2 picturi metiloranj i 10 ml ap distilat. ntr-o biuret cu robinet de sticl se introduce soluia de HCl aprox. N/10 pn la diviziunea 0. Soluia din balon se titreaz cu HCl aprox. N/10 pn cnd culoarea galben a indicatorului vireaz a roz deschis. Se citete volumul de HCl folosit la titrare, se repet titrarea fcndu-se media a trei titrri.
Calculul: Se presupune c la titrare s-au folosit 4,7 ml HCl aprox. N/10, iar

factorul NaOH este cel stabilit anterior 0,9803. Pentru calcularea factorului HCl aprox. N/10 se poate folosi relaia (1) : V1f1 = V2f2 adic: NaOH aprox. N/10 5 . 0,9803 HCl aprox. N/10 4,7 . f2

f2= 5 . 0,9803 / 4,7 = 1,0319, este factorul soluiei HCl. nlocuind datele obinute de noi n relaia (3) determinm titrul real al soluiei de HCl aprox. N/10: Tr = Tt . f. Titrul teoretic al unei soluii de HCl aprox. N/10 se calculeaz astfel: 1000 ml HCl N/10 3,647 g HCl 1 ml HCl exact N/10 . 0,003647 g HCl Tt = 0,003647g HCl /ml Tr = 0,003647 . 1,0319 = 0,003763 g/ml. Concentraia 0/00 = Tr . 1000 = 3,763 g/l
155

Normalitatea soluiei este: 3,763 / 36,47 = aprox. 0,1 N

Volumetria prin reacii de oxido-reducere

Metoda volunmetric a oxido-reducerii se bazeaz pe reacii de schimb de electroni, deci oxidarea sau reducerea substanei de analizat cu ajutorul unei soluii titrate de oxidant sau reductor.
Permanganometria este o metod de analiz volumetric bazat pe reacii

redox n care oxidantul este permanganatul de potasiu n mediu acid, alcalin sau neutru.
Determinarea factorului de corecie, titrului i concentraiei n g/l a unei soluii de KmnO4 aprox. N/10 Principiul: se oxideaz un volum msurat de soluie etalon de acid oxalic

N/10 cu ajutorul unei soluii de KmnO4 aprox. N/10 n mediu de H2SO4 i la cald. Reacia care are loc este urmtoarea: KMnO4 + 3H2SO4 + 5 (COOH)2 = 2MnSO4 + K2SO4 + 10CO2 + 8H2O Mn7+ + 5 e- = Mn2+; -OOC COO- - 2 e- = 2CO2
Reactivi:Acid oxalic N/10 soluie etalon; KMnO4 aprox. N/10 Acid sulfuric 20%. Modul de lucru: se pipeteaz 5 ml (COOH)2 N/10 ntr-un flacon de titrare se

adaug 3 ml H2SO4 20%, se nclzete la 800C i se titraz pictur cu pictur cu soluie de KMnO4 din biuret pn la apariia culorii roz violet. Se citete la biuret volumul de KMnO4 folosit la titrare. Calcul: pentru oxidarea a 5 ml de (COOH)2 N/10 s-au folosit 5,2 ml KMnO4 aprox. N/10. Conform relaiei V1f1 = V2f2 rezult: FKMnO4 = V (COOH)2 . f (COOH)2 / VKMnO4 = 5 . 1 / 5,2 = 0,9615 Titrul teoretic al soluiei de KMnO4 N/10 este: Tt = 31,6 / 10.000 = 0,00316 g/ml Tr = Tt . f = 0,00316 . 0,9615 = 0,0030383 g/ml Concentraia n g/l = Tr . 1000 = 3,038 g/l KMnO4
Iodometria este o metod de analiz volumetric n care iodul are rol de

oxidant cnd trece de la starea de molecul la starea de ion i rol de reductor n reaciile n care trece n starea ionic n starea molecular
Rol de oxidant: I02 + 2 e- = 2 I- / Rol de reductor 2 I - - 2 e- = I20 (oxidare)

156

Stabilirea titrului i factorului de corecie volumetric a unei soluii de iod aprox. N/10 cu ajutorul unei soluii de Na2S2O3 aprox. N/10 cu factor cunoscut Principiul acestei metode se bazeaz pe reacia dintre iodul molecula i

tiosulfatul de sodiu: 2 Na2S2O3 + I2 = Na2S4O6 + 2 Na Sfritul reaciei este pus n eviden cu o soluie de amidon 1%.
Reactivi: Tiosulfat de sodiu N/10 cu factor cunoscut (25g/l); soluie de iod

aprox. N/10 (12,7 g/l); amidon 1%.

Modul de lucru: din soluia de iod aprox. N/10 se pipeteaz 5 ml ntr-un

flacon de titrare. Se titreaz cu tiosulfatul din biuret pn la apariia culorii galben-pal, cnd se adaug 2 picturi de amidon 1%. Soluia se coloreaz n albastru intens. Se continu titrarea pn la incolor. Se noteaz volumul de tiosulfat aprox.N/10 citit la biuret.
Calcul: presupunem c pentru titrarea iodului din cei 5 ml de soluie aprox.

N/10 s-au folosit 4,9 ml soluie de tiosulfat aprox. N/10 cu f = 1,0102. Factorul soluiei de iod va fi : f iod = V1 . f1 / V2 = 4,9 . 1,0102/5 = 0,9899. Tr = Tt . f Titrul teoretic al soluiei de iod va fi: 1000 ml sol. I N/10 . 12,7 g i 1 ml 12,7/ l000 = 0,0127 g iod Tr = 0,0127 . 0,9899 = 0,012572 g iod. Concentraia n g/l = 0,012572 . 1000 = 12,57 g iod/l.

157

Volumetria prin reacii de precipitare Clorometria (Argentometria)

Clorometria este o metod de analiz volumetric bazat pe reacii de precipitare n care azotatul de argint precipit ionii halogenilor sub form de halogenuri. Se folosesc dou metode: Mohr i Volhard.
Determinarea clorurilor prin metoda Mohr Principiul: soluia neutr sau slab alcalin a clorurii (pH = 6-10) se titreaz

cu AgNO3 n prezena cromatului de potasiu drept indicator. Excesul de argint NO3 cu cromatul va precipita cromatul de argint, rou-crmiziu care arat sfritul reaciei. Reaciile careau loc sunt urmtoarele: Cl- + AgNO3 = AgCl + NO-3 2AgNO3 + K2CrO4 = Ag2CrO4 + 2 KNO3
Reactivi Azotat de argint N/10 (16,98 g/l) Cromat de potasiu 10% Modul de lucru: ntr-un balon Erlenmeyer se pipeteaz 5 ml soluie NaCl

de analizat i se adaug 1-2 picturi de K2CrO4. Se titreaz cu soluia de AgNO3 N/10 dintr-o biuret agitndu-se puternic pn la apariia unui precipitat de roucrmizie, care se rspndete n tot lichidul i face posibil sesizarea sfritului titrrii. Se citete la biuret volumul de AgNO3 N/10 folosit. Metoda d rezultate exacte dac se titraz soluii mai concentrate de cloruri (0,05 0,1 M).

158

BIOCHIMIE ANALITICA CALITATIVA GLUCIDE Reacii de identificare a ozelor

Pentru identificarea ozelor se pot folosi reacii de culoare, reacii de reducere i reacii de condensare
Reacii de culoare Reacia Molisch: Ozele dau cu o soluie de alfa-naftol i acid sulfuric

concentrat o coloraie roie-violet intens. n acest caz are loc deshidratarea ozei cu formare de furfural sau hidroximetil furfural iar acetia prin condensare cu alfa-naftol determin apariia unui compus colorat n rou violet. Modul de lucru: ntr-o eprubet se introduc 2 ml soluie de glucoz 2% i 2-3 picturi din soluia de alfa-naftol 5%. Cu o pipet se introduce cu atenie, la fundul eprubetei 1 ml acid sulfuric concentrat, n aa fel ca cele dou straturi s nu se amestece. La zona de separare dintre cele dou straturi apare un inel colorat n rou-violet.
Reacia Selivanov. Cetozele, n prezena rezorcinei (reactiv Selivanov)

formeaz, n mediu de acid clorhidric i la cald, compui colorai n rou intens. Aceast reacie difereniaz cetozele de aldoze, care nu dau aceast reacie.
Modul de lucru. ntr-o eprubet se introduc 2 ml soluie de glucoz 2%, iar n alta

2 ml soluie de fructoz 2%. Se adaug n fiecare 2 ml reactiv Selivanov. Ambele eprubete se introduc ntr-o baie cu ap care fierbe. Se observ c soluia din eprubeta cu fructoza se coloreaz n rou intens, spre deosebire de eprubeta cu glucoz, n care lichidul se coloreaz n galben-portocaliu.
Reacii de reducere Reacia Fehling: ozele prezint proprieti reductoare datorit prezenei, n

molecula acestora a gruprii carbonil. n mediul alcalin i la cald, ozele reduc reactivul Fehling la oxid cupros, cu producerea unui precipitat de culoare roie crmizie, conform reaciilor. CuSO4 + 2 NaOH = Cu(OH)2 + Na2SO4 2 Cu(OH)2 + R CHO = Cu2O + R COOH + H2O

159

Reactivi:

-Fehling I (40 g CuSO4 ntr-un litru de ap distilat) -Fehling II (150 g NaOH, 100 g tartrat de Na i K la un litru soluie apoas) -Glucoz 2%
Mod de lucru. ntr-o eprubet se prepar reactivul Fehling msurndu-se

cte un ml din soluiile de I i II. Se adaug apoi 1 ml glucoz i se nclzete la fierbere, cnd se constat apariia unui precipitat rou-crmiziu de Cu2O.
Observaii. Introducerea tartratului dublu de sodiu i potasiu n soluia

Fehling II are rol de a menine n soluie hidroxidul cupric format, atunci cnd se adaug Fehling II peste Fehling I.
Reacia Tollens. Glucoza reduce hidroxidul de argint amoniacal la cald la

argint metalic, care se depune pe pereii eprubetei, ca o oglind. Reaciile care au loc sunt urmtoarele: AgNO3 + NH4OH = AgOH + NH4NO3 2 AgOH = Ag2 + H2O Ag2O + 4 NH4OH = 2 (Ag(NH3)2OH- + 3 H2O 2(Ag(NH3))2OH- + R CHO = 2 Ag + 4 NH3 + H2O + R COOH
Modul de lucru. ntr-o eprubet foarte curat se pun 5 ml soluie de azotat

de argint , peste care se adaug amoniac diluat, pn ce se dizolv precipitatul ce se formase iniial. Se mai adaug o pictur de hidroxid de sodiu concentrat i apoi 1 ml soluie de glucoz sau fructoz.Se omogenizeaz i se nclzete uor la flacr. Glucoza sau fructoza reduc azotatul de argint n mediu alcalin i la cald n argint metalic, ce se depune pe pereii eprubetei ca o oglind strlucitoare.
Reaciile diglucidelor

Diglucidele n care ozele se leag monocarbonilic (maltoza i lactoza) au proprieti reductoare. Prin fierbere cu soluii de Fehling dau un precipitat roucrmiziu de oxid cupros. Diglucidele n care ozele se leag dicarbonilic nu au proprieti reductoare, nereducnd soluia Fehling.
Reacia Fehling. Se pregtete soluia Fehling din volume egale de Fehling

I i II i se mparte n trei eprubete, se fierbe, se adaug apoi ntr-una din cele trei eprubete 2 ml soluie maltoz, n a doua 2 ml lactoz, iar n a treia 2 ml zaharoz. Se continu fierberea. Se va constata c n eprubeta n care s-a pus zaharoz nu apare precipitat de oxid cupros, ca n cazul eprubetelor n care s-a pus soluia de

160

maltoz i lactoz. Maltoza i lactoza au deci, proprieti reductoare, pe cnd zaharoza nu are aceste proprieti.
Invertirea zaharozei. Prin fierbere cu acid clorhidric diluat, zaharoza se

desface n componenii si (glucoz i fructoz). Totodat se produce i o inversiune n activitatea optic a zaharozei. nainte de fierbere cu HCl diluat, zaharoza este dextrogir. Dup fierberea cu HCl diluat datorit desfacerii sale n glucoz i fructoz, devine levogir. Din aceast cauz descompunerea zaharozei n ozele componente se numete invertire.
Modul de lucru. ntr-o eprubet se pipeteaz 2 ml soluie zaharoz, peste

care se adaug 2-3 picturi acid clorhidric diluat i se fierbe. Peste soluia de zaharoaz fiart cu acid clorhidric diluat se adaug carbonat de sodiu pn la neutralizare i apoi soluie Fehling i se continu fierberea. Se va obine un precipitat rou-crmiziu de oxid cupros, datorit gruprilor carbonilice ale glucozei i fructozei rezultate prin hidroliza zaharozei.
Reaciile poliglucidelor Reacia iodului

Amidonul i glicogenul dau coloraii diferite cu o soluie de iod: Amidonul formeaz cu iodul o coloraie albastr Glicogenul formeaz cu iodul o coloraie roie-crmizie. ntr-o eprubet se pun 2 ml soluie amidon,iar n alta 2 ml soluie glicogen. Se adaug apoi n ambele eprubete 2-3 picturi de soluie de iod. n eprubeta cu soluie de amidon apare o coloraie albastr, iar n eprubeta cu soluie de glicogen apare o coloraie roie-crmizie.
Hidroliza amidonului

Prin fierbere cu acizi minerali (acid clorhidric sau sulfuric), amidonul hidrolizeaz punnd n libertate un amestec de dextrine, maltoz i n final molecule de glucoz. Degradarea amidonului se poate pune n eviden folosind reacia cu iod.

161

Lipide Reaciile gliceridelor

Gliceridele sunt esteri ai acizilor grai cu glicerolul, insolubile n ap i solubile n solveni organici.
Identificarea acizilor grai

n mediu alcalin i la cald gliceridele hidrolizeaz cu formare de glicerol i acizi grai, care n mediul respectiv formeaz spunuri.
Reactivi:Soluie alcoolic de NaOH /Acid acetic glacial. Modul de lucru:ntr-o eprubet se introduc 4-5 picturi ulei de floarea soarelui,

se adaug 3-4 ml alcool sodat i se nclzete pe baia de ap 10-15 minute, pn la dispariia grsimii. Gliceridele hidrolizeaz cu eliberarea acizilor grai, care n mediu alcalin formeaz srurile de sodiu, numite spunuri. Se adaug 10 ml ap i se observ formarea unei soluii de spun care prin agitare spumeaz. Apoi se aciduleaz soluia cu acid acetic glacial, cnd se elibereaz acizii grai insolubili n ap, sub forma unui precipitat (turbiditate).
Determinarea indicelui de aciditate (is)Prin indice de aciditate se

nelege cantitatea de miligrame de hidroxid de potasiu necesar pentru neutralizarea acizilor grai liberi dintr-un gram de glicerid. Se neutralizeaz acizii grai liberi dintr-o cantitate exact cntrit de glicerid cu o soluie alcoolic de hidroxid de potasiu de concentraie cunoscut, folosind ca indicator fenolftaleina. Rezultatul se exprim n mg KOH la 1 g glicerid.
Reactivi

Solvent neutru (1 volum alcool etilic + 4 volume eter etilic) KOH soluie alcoolic N/10 (se dizolv aproximativ 5,6 g KOH n foarte puin ap distilat i se completeaz pn la un litru cu alcool etilic). Se determin factorul de corecie cu ajutorul unei soluii etalon de aceeai normalitate. Fenolftalein 2% (soluie alcoolic).
Mod de lucru

ntr-un balon Erlenmeyer uscat se introduce o cantitate de glicerid cntrit (1 g), peste care se adaug solvent neutru pn la dizolvare (10 ml). Se titreaz cu soluia alcoolic de hidroxid de potasiu N/10 pn la completa neutralizare (culoarea roz slab). Dac coninutul balonului se tulbur n timpul titrrii, se nclzete uor pe baia de ap.

162

Calcul

Pentru aflarea indicelui de aciditate se transform n mg volumul de KOH N/10 folosit la titrare i apoi se raporteaz la 1 g glicerid. Aciditatea permis unei gliceride este de 4 mg / 1 g grsime sau 20 mg acid oleic / 1 g glicerid. Dac aciditatea gliceridei este mare se va folosi la titrare o soluie alcoolic de KOH N/2. Calcularea practic a indicelui de aciditate se face dup relaia: Ia = 5,6 . V . f / a mg KOH n care : 56 = Eq KOH; V, f = volumul i factorul soluiei de KOH N/10 folosit la titrare (n ml); a = cantitatea de grsime analizat
Determinarea indicelui de saponificare (is)

Indicele de saponificare reprezint cantitatea n mg de KOH necesar pentru a saponifica un gram de glicerid.
Principiu: Se saponific o cantitate cunoscut (exact cntrit) de gliceride

cu un volum de KOH alcoolic, de concentraie cunoscut, luat n exces. Se titreaz excesul de KOH cu o soluie echivalent de HCl n prezena fenolftaleinei. Din cantitatea total de KOH adugat peste glicerid se scade excesul, aflndu-se astfel cantitatea de KOH care a saponificat glicerida.
Modul de lucru: ntr-un balon Erlenmeyer la care se adapteaz un

refrigerent cu reflux se introduce o cantitate precis cntrit de ulei (a grame). Se adug 10 ml soluie alcoolic de KOH 0,5 N exact msurat, dup care balonul cu refrigerentul se introduc ntr-o baie de ap care fierbe i se menine 30 min.Dup acest interval se rcete balonul, se scoate refrigerentul i se adaug 1-2 picturi de fenolftalein. Se titreaz excesul de KOH cu o soluie de HCl 0,5 N pn la dispariia culorii roii. Se citete la biuret volumul de HCl consumat. n paralel se execut i o prob martor n aceeleai condiii, dar fr ulei. Din cei 10 ml KOH N/2 luat n lucru, numai o parte va saponifica glicerida, iar alta va rmne liber n exces, fiind echivalent cu cantitatea de HCl 0,5 N folosit la titrare. Pentru calcul se folosete urmtoarea formul: Is = 56 . (10 V) . f / 2.a mg KOH /g grsime n care: 56 = Eq KOH; V, f, = volumul i factorul soluiei de HCl 0,5 N folosit la titrare; a = grame grsime luat n lucru.

163

Determinarea indicelui de iod

Indicele de iod reprezint cantitatea n grame de iod care adiioneaz la 100 g glicerid. Valoarea acestui indice d indicaii asupra gradului de nesaturare al unei gliceride i respectiv asupra proporiei de acizi grai nesaturai.
Principiul: glicerida se trateaz cu o cantitate cunoscut i n exces de iod.

Acizii grai nesaturai din compoziia gliceridei adiioneaz iodul la dubla legtur, conform schemei: CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7COOH+I2=CH3(CH2)7CH(I)-CH(I)-(CH2)7COOH acid oleic acid 9,10 diiodstearic Excesul de iod se determin exact prin titrare cu tiosulfat de sodiu, n prezena amidonului ca indicator: 2Na2S2O3+I2=Na2S4O6+2NaI
Modul de lucru Proba de analizat: ntr-un balon iodometric cu dop lefuit se cntresc a g ulei

(0,1-0,2 g) se adaug 10 ml cloroform pentru dizolvarea uleiului 2,5 ml reaciv Hanus (soluie acetic de bromur de iod) i se las s reacioneze 15 min. la ntuneric, agitnd din cnd n cnd. Dup acest interval se adaug 15 ml KI 10%, 5 ml ap distilat 2 picturi amidon ca indicator i se titreaz cu o soluie de tiosulfat de sodiu 0,1 N i factor cunoscut pn la incolor. Proba martor se execut paralel cu proba de analizat i n aceleai condiii adugndu-se toi reactivii minus uleiul. Aceast prob servete la stabilirea titrului de iod al reactivului Hanus.
Calculul se face dup urmtoarea formul:

Ii = (V1-V2) . f . o,o127 . 100 / a g iod n care: V1 = volumul soluiei de tiosulfat N/10 folosit la titrarea probei martor (echivalent cu cantitatea total de iod); V2 = volumul soluiei de tiosulfat N/10 folosit la titrarea probei de analizat (echivalent cu excesul de iod); f = factorul soluiei de tiosulfat de sodiu; a = grame de grsime analizat; 0,0127 = titrul teoretic al iodului. Ii d indicaii asupra gradului de conservare a gliceridelor, deoarece n timpul rncezirii scade numrul dublelor legturi, deci i valoarea acestuia. Indicele de

164

iod servete la caracterizarea gliceridelor naturale, precum i la clasificarea lor n sicative (Ii = 130-200), semisicative (Ii=95-130) i nesicative (Ii sub 90).
Glicerida Indice de iod

Ulei de floarea-soarelui Ulei de porumb Grsime de porc Unt

119 134 79 85 46 - 70 28 - 38

Reacii de identificare pentru proteine

Proteinele dau dou tipuri de reacii: -Reacii de precipitare - Reacii de culoare

Reacii de precipitare se datoreaz n parte proprietilor fizice ale

substanelor proteice. Avnd o structur macromolecular proteinele dau prin dizolvare soluii coloidale. n soluii, protinele se gsesc sub form de molecule mari, agregate sau micele. Stabilitatea acestor micele depinde de mrimea lor de ncrcarea electric, de densitatea dizolvantului de temperatur, aa nct reaciile de precipitare sunt dependente de aceti factori.Ele se pot mpri n dou grupe
I. Reaciile reversibile de precipitare, n care proteinele precipitate nu

sufer transformri profunde i de aceea pot fi readuse n stare de soluie. Dintre reaciile reversibile de precipitare menionm salifierea proteinelor.
Modul de lucru: ntr-o eprubet se introduce puin ser sangvin sau albu de

ou diluat i se adaug sulfat de amoniu solid pn nu se mai dizolv substana. Se observ c odat cu salifierea se formeaz un precipitat de protein. Dac se adaug ap distilat precipitatul se dizolv, deoarece a sczut concentraia n sulfat de amoniu. Adugnd din nou sulfat de amoniu, cnd se ajunge din nou la saturaie, apare din nou precipitatul. Salifierea servete la separarea albuminelor de globulime; globulimele precipit cu o soluie de sulfat de amoniu semisaturat, iar albuminele precipit cu o soluie saturat de sulfat de amoniu.
II Reacii ireversibile de precipitare n cadrul crora proteinele sufer

transformri profunde. n acest caz are loc o denaturare a proteinelor astfel nct o dat precipitate nu mai pot fi readuse n stare de soluie. Ca exemple de reacii ireversibile de precipitare menionm: precipitarea prin cldur, cu sruri ale
165

metalelor grele, cu acizi minerali concentrai, cu acizii organici i cu reactivii alcaloizilor. Ca surs de protein se folosete albu de ou diluat sau ser sangvin.
Precipitarea prin cldur: proteinele precipit la cald i se denatureaz.

Mecanismul denaturrii termice este legat de restructurarea moleculei proteice. Un rol important n coagularea proteinelor l joac prezena srurilor neutre i concentraia n ioni de hidrogen. Coagularea cea mai complet i cea mai rapid se produce la punctul izoelectric adic la un pH la care particulele coloidale de protein au cea mai mare stabilitate.
Modul de lucru n cinci eprubete, notate de la 1 la 5 se introduc cte 2 ml ser

sangvin sau albu de ou diluat. Se nclzete prima eprubet i se observ formarea unui precipitat. n a doua eprubet se adaug o pictur de acid acetic i se nclzete. Precipitatul se formeaz mai reprede i mai complet pentru c prin adugare de acid acetic proteina a fost adus mai aproape de punctul izoelectric. n a treia eprubet se adaug 0,5 ml acid acetic 10% i se nclzete; nu apare precipitat, mediul fiind prea acid. n a patra eprubet se nclzesc 0,5 ml acid acetic 10% i civa cristali de clorur de sodiu; va apare un precipitat deoarece n mediul acid s-a adugat o sare neutr. n a cincea eprubet se adaug 0,5 ml NaOH concentrat i se nclzete; precipitatul nu mai apare deoarece mediul este prea alcalin. n concluzie proteinele nu precipit n medii prea acide sau prea alcaline. n mediul acid prezena srurilor neutre nlesnete precipitarea.
Precipitarea cu sruri ale metalelor grele

Proteinele n soluii precipit ireversibil n prezena srurilor metalelor grele ca Pb, Cu, Hg, Ag, etc.
Modul de lucru se iau dou eprubete n care se pune 1 ml soluie protein, ntr-

una se adaug cteva picturi de soluie de acetat de plumb iar n cealalt cteva picturi de sulfat de cupru. n ambele eprubete apare precipitat.
Precipitarea cu acizi minerali concentrai. Acetea provoac precipitarea

proteinelor cu excepia acidului fosforic care nu precipit substanele proteice.

Modul de lucru: n dou eprubete se pune soluie de protein i se adaug ntr-

una acid azotic concentrat, iar n cealalt acid clorhidric concentrat. n ambele eprubete se formeaz un precipitat alb. Se adaug n fiecare acid azotic respectiv acid clorhidric n exces. Se va constata c n eprubeta care s-a lucrat cu acidul azotic precipitatul nu se dizolv, n timp ce n eprubeta care s-a lucrat cu acid clorhidric precipitatul se dizolv.
166

Precipitarea cu acizi organici: proteinele n soluie precipit i cu acizii

organici. Acizii tricloracetic respectiv sulfosalicilic sunt reactivi foarte sensibili i specifici pentru proteine.
Modul de lucru ntr-o eprubet se adaug cteva picturi de acid tricloracetic

20% peste o soluie de protein, se obine un precipitat alb.Reacia cu acid sulfosalicilic se execut n acelai fel. Aceste reacii servesc la deproteinizarea
lichidelor biologice, operaie numit i defecare. Precipitarea cu reactivii alcaloizilor. Soluiile de proteine pot forma

precipitate cu reactivii care precipit alcaloizii ca: Esbach, Bouchardat i soluie saturat de acid picric. Precipitarea are loc n mediu acid . n mediu alcalin precipitatul se dizolv.
Modul de lucru: se iau trei eprubete n care se introduce soluie de protein: n

prima eprubet se adaug cteva picturi de reactiv Esbach, n a doua se adaug cteva picturi de soluie saturat de acid picric, iar n a treia cteva picturi de reactiv Bouchardat. n prima i a doua eprubet apare un precipitat galben, insolubil la cald, iar n a treia eprubet se obine un precipita rou-brun.
Reacii de culoare

Reaciile de culoare se datoreaz proprietilor chimice ale proteinelor i aparin de fapt reaciilor unui anumit aminoacid din compoziia lor. Cele mai importante reacii de culoare sunt: Reacia biuretului, reacia xantoproteic, reacia Adamkiewicz, reacia Millon, reacia sulfului, reacia ninhidrinei.
Reacia biuretului. Proteinele i unii produi de hidroliz ai proteinelor dau

n mediul alcalin, cu cantiti mici de sulfat de cupru, o coloraie roz-violet, datorit formrii unui derivat peptidic sau peptidic cupro-alcalin.
Modul de lucru: ntr-o eprubet se introduc 2 ml soluie protein, se alcalinizeaz

cu 2-3 picturi NaOH 10% i se adaug apoi cu atenie, pictur cu pictur ,sulfat de cupru 1%. Se obine o culoare roz-violet.
Reacia xantoproteic este reacia pe care o dau proteinele cu acidul azotic

concentrat. Astfel la rece se formeaz un precipitat alb care la nclzire devine galben, iar n mediu alcalin culoarea se schimb n galben-portocaliu.Aceast reacie de culoare se datoreaz formrii de nitroderivai aromatici din aminoacizii cu nucleu aromatic, coninui n protide.
Modul de lucru: ntr-o eprubet se introduc 2ml soluie protein peste care se

adaug 1 ml HNO3 concentrat. Se formeaz un precipitat alb care la nclzire

167

devine galben deschis. Prelungind nclzirea, substana protidic se dizolv parial i lichidul capt o culoare galben frumoas. Prin alcalinizare cu amoniac concentrat se obine o culoare galben-portocalie.
Reacia Adamkiewicz: are loc cnd soluia de protein reacionez cu

acidul glioxilic (HOOC CHO) n prezena H2SO4, se obine o coloraie roieviolet. Reacia se datoreaz prezenei triptofanului n molecula proteic.
Modul de lucru; ntr-o eprubet se introduc 2ml soluie protein i 2ml acid acetic

concentrat. Se introduce apoi la fundul eprubetei 1 ml H2SO4 concentrat. La limita de separaie dintre cele dou lichide apare un inel rou-violet.
Reacia Millon este dat de proteine cu reactivul Millon n urma creia se

formeaz un precipitat alb gelatinos care prin nclzire devine spongios i capt o culoare roie-crmizie. Aceast reacie este dat de aminoacizii cu nucleu fenolic (tirozina) oninui n molecula proteic.
Modul de lucru: se introduc ntr-o eprubet 2 ml soluie de protein i cteva

picturi de reactiv Millon. Prin nclzire precipitatul se strnge, devine spongios i capt o culoare roie-crmizie. Reactivul Millon este un amestec complex de azotat mercuric, azotat mercuros, acid azotic i acid azotos.
Reacia sulfului este dat de proteinele care conin aminoacizi cu sulf

(metionina, cistina, cisteina) i are loc la nclzire n mediul alcalin, n urma reaciei sulful se elibereaz sub form de H2S, care, cu o sare de plumb d un precipitat negru de sulfur de plumb.
Reacii pentru recunoaterea componenilor din structura nucleoproteidelor

Nucleoproteidele sunt hetroproteide ale cror molecule conin drept grupare prostetic molecule de acizi nucleici.
Hidroliza nucleoproteidelor Principiul metodei: . prin hidroliz menajat i treptat, chimic sau

enzimatic nnucleoproteidele sunt desfcute n componenii lor. Partea protidic poate fi identificat prin reacii specifice proteinelor descrise anterior. Componentele acizilor nucleici sunt identificate printr-o serie de reacii specifice acestora.
Mod de lucru: ntr-un balon cu refrigerent ascendent se introduc 5 g drojdie de

bere i 30-40 ml H2SO4 2%. Amestecul se nclzete pe o baie de nisip 1-2 ore. Se filtreaz i n filtratul obinut se vor executa reaciile de recunoatere a ribozei i deoxiribozei, bazelor azotate i acidului fosforic.

168

Recunoatrea pentozelor Principiul: pentozele dau reacii de culoare i reducere, care au fost tratate

la capitolul Glucide.
Reactivi Soluie alcalin de alfa-naftol 10%; Acid sulfuric concentrat; Reactiv

Fehling; Soluie de NaOH 10%

Mod de lucru se msoar n dou eprubete cte 2 ml filtrat. ntr-una din eprubete

se execut reacia Molisch n modul urmtor: peste filtrat se adaug 5 picturi alfa-naftol i 3 ml H2SO4 concentrat, care se las s curg pe pertele interior al eprubetei. La nivelul de separaie dintre cele dou soluii se formeaz un inel de culoare violet. n cealalt eprubet se execut reacia Fehling. Se neutralizeaz filtratul cu NaOH 10%, se adaug apoi 1 ml Fehling i i 1 ml Fehling II . La nclzire apare un precipitat rou-crmiziu de oxid cuprod (Cu2O).
Recunoaterea bazelor azotate Principiul: bazele purinice i pirimidinice, n soluie amoniacal i n

prezena azotatului de argint, formeaz derivai argintici de culoare brun.

Reactivi: Amoniac concentrat; Soluie de AgNO3 5%; Mod de lucru: la 2-3 ml filtrat se adaug amoniac pn la o reacie net alcalin.

Se filtreaz i se adaug 1 ml AgNO3 5%. Dup cteva minute apare un precipitat brun, datorit compuilor argentici ai bazelor purinice.
Recunoaterea acidului ortofosforic

Ionul fosforic la cald, n mediu de acid azotic i n prezena molibdaturlui de amoniu, formeaz un precipitat galben de fosfomolibdat de amoniu.

Analiza biochimic a sngelui Dozarea clorului plasmatic

ntr-un balon Erlenmeyer se msoar 1 ml plasm. Pipeta se spal apoi cu ap distilat de 2-3 ori, adugndu-se apele de splare n balon. Se adaug 5 ml AgNO3 N/50, 2,5 ml HNO3 concentrat i 1 ml soluie saturat de KMnO4. Soluia saturat de permanganat de potasiu servete la oxidarea substaneelor organice din ser, iar excesul este redus prin adugare de glucoz. Coninutul balonului se nclzete la fierbere observndu-se formarea precipitatului alb de AgCl. Se continu fierberea pn la decolorarea lichidului, adugndu-se la nevoie nc cteva picturi de KMnO4 soluie. Dup decolorare lichidul se rcete, apoi se adaug 10 ml ap distilat i 2-3 picturi de soluie de
169

alaun feric. Excesul de AgNO3 se titreaz apoi cu o soluie de sulfocianur de amoniu N/50 pn la apariia culorii roz deschis persistente.
Calcul:Cantitatea de clor plasmatic din snge se poate calcula dup formula:

gCl/1 = 0,71(n1f1 n2f2 ): n care: n1 = ml soluie AgNO3 N/50; f1 = factorul soluiei de AgNO3 N/50; n2 = ml soluie de NH4SCN N/50; f2= factorul soluiei de NH4SCN N/50; 0,71 = Eq x 1/50 = 35,5/50 /g Cl dintr-un l soluie N/50;
Dozarea clorului total din snge integral

Se procedeaz ntocmai ca la plasm, cu singura deosebire c se folosesc iniial 3 ml soluie saturat de KMnO4, n loc de 1 ml. Calculul pentru cantitatea de Cl sau NaCl se face dup aceleai formule folosite n cazul clorului plasmatic.
Interpretarea rezultatelor

Clorul reprezint cel mai important anion din snge, predominnd n lichidele extracelulare. n organism, clorul particip la reglarea presiunii osmotice i a echilibrului acido-bazic i ntr n compoziia sucului gastric. Clorul total al sngelui variaz n mod normal ntre 2,5-3,6 grame/mie, n funcie de specie. Raportul dintre clorul total din snge i clorul din ser nu depete 0,5-0,75. O cretere a clorului n snge se observ la anemii, afeciuni renale, care tulbur capacitatea esutului renal de a elimina NaCl, dup administrarea de NaCl, n abuzul de cortizon sau ali steroizi. Strile de hipocloremie apar n tulburri gastrointestinale n primele faze ale pneumoniei, tuberculoz, insuficien corticosuprarenal, leziuni renale, transpiraie abundent, intoxicaii cu sublimat.
Dozarea calciului n urin

Ionii de calciu prezint un interes deosebit, dozarea acestora n snge oferind indicaii preioase asupra strii de sntate a organismului, i mai ales n elucidarea unor tulburri metabolice. Metabolismul calciului este strns legat de cel al fosforului, astfel nct dozarea calciului nu poate fi separat de cea a fosforului.

170

Metoda de Waard Principiul metodei.Calciul este precipitat sub form de oxalat de calciu,

insolubil n ap i amoniac, ns uor solubil n mediu acid: (Ca2+ + 2Cl-) + (2NH4 + (COO)2 2 = Ca(COO)2 + 2 (NH4+ + Cl-) Oxalatul de calciu format se spal cu o soluie de amoniac pentru a ndeprta excesul de oxalat de amoniu, dup care este descompus la cald cu acid sulfuric n acid oxalic: Ca(COO)2 + H2SO4 = CaSO4 + HOOC COOH Acidul oxalic rezultat este titrat la cald i n mediu acid cu o soluie de KMnO4: 5(COOH)2 + 2 KMnO4 + 3 H2SO4 = 2 MnSO4 + K2SO4 + 8 H2O + 10 CO2 Dup cantitatea de permanganat consumat la titrare se determin coninutul n calciu al serului de analizat. n aceast metod calciul este precipitat sub form de oxalat de calciu direct din ser, fr defecare prealabil. Precipitatul este solubilizat ntr-o soluie de acid sulfuric 10%, apoi se titraz cu o soluie de permanganat de potasiu acidul oxalic eliberat.
Reactivi:

soluie saturat de oxalat de amoniu 20%; soluie de hidroxid de amoniu 2%; soluie de acid sulfuric 10%; soluie de permanganat de potasiu N/100
Modul de lucru:

Se execut o prob cu ser i una n alb.

Proba cu ser: ntr-o eprubet de centrifug se introduce 1 ml ser sangvin

proaspt i 1 ml soluie saturat de oxalat de amoniu, se agit eprubeta i se las n repaus 15 minute, dup care coninutul eprubetei se centrifugheaz 15 minute la 4000 ture/minut. Cu o pipet se extrage lichidul supernatant fr a antrena precipitatul de oxalat de calciu de la partea inferioar a eprubetei. Precipitatul format se spal cu 3 ml ap distilat, dup care coninutul eprubetei se centrifugheaz din nou, timp de 15 minute. Dup centrifugare se ndeprteaz lichidul supernatant. Operaia de splare se repet de 2-3 ori cu cte 3 ml soluie de hidroxid de amoniu 2%. Precipitatul rmas dup ultima splare se dizolv n 2 ml soluie de H2SO4 10%, apoi se nclzete pe o baie de ap care fierbe, timp de 2-3 minute, pn la dizolvarea complet a precipitatului. Soluia din eprubet se titreaz la cald cu soluie de permanganat de potasiu N/100 pn la culoarea slab roz, persistent timp de 1 minut.

171

Proba n alb: n alt eprubet de centrifug se introduc 2 ml acid sulfuric

10%, apoi se nclzete proba pe o baie de ap la fierbere concomitent cu proba de analizat.

Calcul: mg Ca% = (n1 n2) .f . 0,2 . 100

n care: n1 = ml permanganat folosii la titrarea probei cu ser; n2 = ml permanganat folosii la titrarea probei n alb; f = factorul soluiei de permanganat; 1 ml soluie permanganat de potasiu N/100 corespunde la 0,2 mg Ca.;
Interpretarea rezultatelor

Valorile normale ale calcemiei, exprimate n mg Ca total la 100 ml ser sunt urmtoarele:
Cabaline: 10,8 14 Porcine: 10 12,5 Bovine: 10 12 Cine:

10 12,5

Calcemia are valori peste limitele normale n hipertiroidism sau la un consum mare de calciu din alimentaie, precum i n cazul administrrii unor doze mari de calciferoli i scade sub 9 mg Ca % n strile de insuficien paratiroidian. La rumegtoare hipocalcemia apare dup perioada de inaniie sau n timpul cetonemiilor cnd calciul trece n urin. Hipocalcemiile se manifest la toate animalele prin tetanii, iar la rumegtoarele mari prin stri de com. Calcemia este influenat i de unele tulburri digestive, de modificarea echilibrului acido-bazic, de activitatea glandelor cu secreie intern. Variaiile calcemiei trebuie puse n legtur cu starea magneziemiei, cunoscndu-se aciunea inhibitoare a ionilor de magneziu asupra excitabilitii neuromusculare, ct i cu valorile pH-ului sangvin. Alcaloza mrete tendina spre spasmofilie prin imposibilitatea ionizrii calciului sangvin, iar acidoza mrete tendina la somnolen sau com, consecin a ionizrii exagerate a calciului. Ftarea i apariia colostrului determin hipocalcemie, care poate ajunge pn la 8-7,5 mg%, calcemia normal poate fi restabilit pe cale hormonal.

172

Dozarea proteinelor totale din ser Metoda Hinsberg-Lang Principiul metodei. Se precipit proteinele totale din ser sau plasm cu

sulfat de amoniu, iar precipitatul se usuc i se cntrete. Precipitarea are loc la cald n prezena unei soluii tampon.
Reactivi:

soluie acid acetic acetat de sodiu (53 g acetat, 28 ml acid acetic n 1 l soluie apoas); soluie saturat de sulfat de amoniu cu pH = 7: 100 g sulfat de amoniu + 120 ml ap distilat la fierbere; alcool eter, amestec 3/1; eter etilic; soluie de clorur de bariu10%.
Modul de lucru

ntr-o eprubet larg se msoar 1 ml ser sau plasm, 3 ml soluie tampon acid acetic-acetat i 3-4 picturi soluie saturat de sulfat de amoniu. Amestecul se ine 30 minute pe baia de ap la fierbere. n acest timp se pregtesc dou filtre cu greutate egal, se introduc unul n altul i prin ele se filtreaz soluia cu ap fierbinte, pn cnd apa de splare nu mai precipit cu o soluie de clorur de bariu 10% (eliminarea sulfatului). Se spal apoi precipitatul cu un amestec de alcool i eter i apoi numai cu eter, se las la etuv la 105 0 C timp de o or i se rcesc ntr-un exicator. Se cntresc cele dou filtre, iar diferena lor reprezint proteinele totale dintr-un ml ser. Valoarea obinut se nmulete cu 100 pentru a exprima n grame proteinele totale la 100 ml ser: G . 100 = grame proteine totale/100 ml ser.
Metoda azotometric Parnas-Wagner Principiul metodei. Metoda const n transformarea azotului organic n

azot mineral, sub form de sulfat de amoniu. Acidul sulfuric concentrat, cu sulfatul de cupru i sulfatul de potasiu acioneaz ca oxidant i distrug materia organic. Carbonul, hidrohenul i oxigenul se ndeprteaz sub form de CO2 i ap, iar azotul este fixat sub form de sulfat de amoniu. Amoniacul din sulfatul de amoniu este distilat n mediu puternic alcalin i fixat ntr-un exces de acid sulfuric exact titrat. Prin diferen, cunoscnd cantitatea de acid sulfuric neutralizat de ctre amoniacul distilat, se poate cunoate cantitatea de amoniac i deci aceea de azot.

173

Reactivi:

acid sulfuric concentrat, d = 1,84; sulfat de cupru cristale; sulfat de potasiu cristale; soluie hidroxid de sodiu 40%; soluie acid sulfuric N/100; soluie hidroxid de sodiu N/100; soluie fenolftalein 1%; soluie rou de metil 0,25g/1000ml.
Mod de lucru

Mineralizarea - ntr-un balon Kjeldahl se introduc: 1 ml ap distilat, 0,l ml plasm, 1 ml acid sulfuric concentrat, un cristal sulfat de cupru i un cristal sulfat de potasiu. Este necesar s se fac dou probe. n gtul balonului Kjeldahl se pune o plnie mic i apoi se aeaz balonul n poziie nclinat (650), pe o sit metalic, deasupra unei flcri mici de bec Bunsen. La nceputul nclzirii se formeaz o spum abundent, n care timp balonul trebuie supravegheat mereu pentru reglarea flcrii n timpul fierberii. Coninutul balonului se brunific, apoi ncepe s se degajeze un fum alb(oxizi de sulf) i coninutul se decoloreaz din ce n ce mai mult. Se continu fierberea pn nu se mai degaj fum i decolorerea coninutului este complet. n aceste condiii substana organic este disturs i tot azotul este transformat n sulfat de amoniu. Dup rcirea balonului Kjeldahl, coninutul cristalizat se preia cu 2 3 ml ap distilat, se agit, se nclzete usor la flacr pentru a se dizolva sulfatul de amoniu i apoi se trece n aparatul de distilat Parnas-Wagner. Distilarea amoniacului Se deschid robinetele R i R4 i se nchide robinetul R2. Se nclzete apa din balonul B1 ce servete drept generator de vapori de ap pentru antrenarea amoniacului. Vaporii se evacueaz prin rezervorul intermediar C i robinetul R4. ntr-un pahar se msoar 10 ml din soluia de acid sulfuric N/100 i paharul se aeaz n poziia I. Se introduc 5 picturi din soluia de rou de metil.
Aparat de distilat Parnas - Wagner

174

Se deschide robinetul R3 i se aduce coninutul balonului Kjeldahl n care s-a fcut mineralizarea, n plnia P. Coninutul ajunge astfel n balonul A. Se cltete balonul Kjeldahl cu ap distilat, care de asemenea se aduce n plnia P i de acolo n balonul A. Se introduc apoi cteva picturi de fenolftalein i se adaug soluia de hidroxid de sodiu 40% pn la viraj roz. Se nchide robinetul R3 i se las s circule n refrigerent ap ct mai rece. Se nclzete balonul A. Se nchide robinetul R4 i se deschide robinetul R2, avndu-se grij ca n balonul A s barboteze vaporii de ap din generatorul B. Se distil timp de 10 minute i se prinde distilatul n paharul cu acid sulfuric, apoi se schimb poziia paharului din I n II i se mai distil cteva minute. Se spal cu civa ml de ap distilat vrful refrigerentului. Se face apoi un martor n felul urmtor: ntr-un balon Kjeldahl se introduc 1 ml ap distilat, 1 ml acid sulfuric concentrat, un cristal de sulfat de cupru, un cristal de sulfat de potasiu. Se neutralizeaz cu soluia de NaOH 40%, n prezen de fenolftalein, exact ca la proba cu snge. Se procedeaz apoi la fel ca la prob. Titrarea se titreaz cu o soluie de NaOH N/100 acidul sulfuric N/100, aflat n exces pn la virarea culorii din rou n galben pai i se noteaz numrul de mililitri utilizai cu n. Se face i titrarea martorului i se noteaz cu n numrul de mililitri de NaOH N/100 utilizai.
Calcul

(n n ) . 14 = g azot la 1000 ml ser; 14 reprezint greutatea atomic a azotului.Pentru a transforma n grame proteine se nmulete rezultatul cu 6,25.
Dozarea glutationului n snge

Glutationul este o tripeptid (gama glutamil cisteinil glicocol), rspndit n toate celulele animale. Datorit gruprii tiol libere de la restul de cistein, glutationul se oxideaz uor trecnd n forma oxidat (disulfur). Procesul este reversibil i st la baza proprietii glutationului de a aciona n organism ca sistem redox. Totodat glutationul ndeplinete i rolul de transportor i donator de hidrogen.
Principiu:Glutationul redus este determinat volumetric cu o soluie de

iodat de potasiu N/1000, al crui titru a fost stabilit fa de glutation. Glutationul total se determin dup o prealabil tratare cu Zn pulbere i o nou titrare cu iodat de potasiu N/1000. Diferena ntre cele dou forme reprezint glutationul oxidat.

175

Reactivi:

oxalat de potasiu; soluie de acid sulfosalicilic 4% i 25%; soluie de iodur de potasiu 5%; soluie de iodat de potasiu N/1000 n acid sulfosalicilic 2%; soluie de amidon 2%; glutation redus, substan pur; zinc pulbere.
Mod de lucru Dozarea glutationului redus

Determinarea glutationului redus se face pe snge recoltat pe oxalat de potasiu n prima or de la recoltare. ntr-un pahar Erlenmeyer se pipeteaz 4 ml snge, 32 ml ap distilat i 4 ml acid sulfosalicilic 25%. Se filtreaz amestecul pe un filtru uscat. 10 ml filtrat se trec ntr-un pahar Erlenmyer, se adaug 2,5 ml soluie de acid sulfosalicilic 4%, 2,5 ml soluie KI 5% i dou picturi de amidon. Se titreaz imediat cu o soluie de iodat de potasiu N/1000 pn la coloraia albastr.
Calcul:

Se face innd seama c 3,26 ml soluie iodat de potasiu N/1000 titreaz 1 mg de glutation. n ml KIO3 / 3,26 = mg glutation/100 ml snge.
Dozarea glutationului total:

ntr-un balon Erlenmeyer se msoar 12 15 ml filtrat rmas de la dozarea glutationului redus, peste care se adaug 20-40 mg Zn pulbere, cu rol de a reduce tot glutationul. Se las 20 minute la temperatura camerei, agitndu-se continuu. Excesul se ndeprteaz printr-o filtrare pe hrtie de filtru uscat. Din filtrat se msoar 10 ml i se procedeaz ca i la titrarea glutationului redus. Pentru a obine glutationul oxidat se face diferena ntre glutationul total, dozat dup adugarea zincului i glutationul redus, dozat iniial.
Detrminarea activitii catalazei sangvine Metoda Bach-Zubkova

Catalaza este o oxidoreductaz rspndit n celulele animale i vegetale i care ndeplinete o funcie important n fenomenele de oxidoreducere celular i anume descompunerea apei oxigenate: 2 H2O2 = 2 H2O + O2 Catalaza este o enzim cu o nalt specificitate i foarte activ, descompunnd la 00C, timp de un minut, un nunmr de 2,6 milioane moli ap oxigenat.

176

Principiul: are la baz dozarea excesului de ap oxigenat nedescompus,

dup ntreruperea aciunii catalazei, prin titrare cu o soluie de permanganat de potasiu n mediu acid: 5 H2O2 + 2 KMnO4 + 4 H2SO4 = 2 MnSO4 + 2 KHSO4 + 8 H2O + 5 O2 Determinarea activitii catalazice se face prin diferena ntre cantitatea de KMnO4 utilizat nainte i dup aciunea enzimei asupra apei oxigenate.
Reactivi:

soluie H2O2 proaspt preparat din perhidrol; soluie acid sulfuric 10%; soluie permanganat de potasiu 0,1 N.
Mod de lucru:

Pentru determinarea activitii catalazice se folosete snge diluat 1 / 1000. n dou baloane Erlenmeyer se msoar cte 1 ml snge diluat i 7ml ap distilat. Unul din baloane, care constituie proba martor se fierbe 3-5 minute pentru inactivarea catalazei apoi se rcete. n ambele probe se adaug 2 ml H2O2 soluie 1% agitndu-se bine. Ambele probe se introduc pentru 30 minute ntr-o baie de ap la 170C, timp n care se observ degajarea bulelor de oxigen n proba cu enzim datorit descompunerii apei oxigenate de ctre catalaz, pe cnd n proba martor, n care catalaza a fost inactivat prin fierbere, aceast degajare nu se observ. Se adaug n fiecare prob 5 ml soluie H2SO4 10% n scopul blocrii reaciei de descompunere a apei oxigenate de ctre catalaz. Probele se titreaz apoi cu o soluie de permanganat de potasiu 0,1 N pn la apariia culorii roz pal persistent 30 secunde.
Calcul: Activitatea catalazic este dat de indicile catalazic, care

reprezint numrul de miligrame H2O2 descompus de 0,1 ml snge n decurs de 30 minute. Pentru calcul se utilizeaz urmtoarele notaii: n1 = ml soluie KMnO4 0,1 N folosii la titrarea probei martor; n2 = ml soluie KMnO4 0,1 N folosii la titrarea apei oxigenate rmas nedescompus din proba cu enzim. Calculul se face avnd n vedere c 1 ml soluie KMnO4 0,1 N este echivalent cu 1 ml soluie H2O2 0,1 N. n acest caz diferena n1 n2 reprezint numrul de ml H2O2 0,1 N descompui de ctre catalaza sangvin. Deoarece 1 ml soluie H2O2 0,1 N corespunde la 1,7 mg H2O2, activitatea catalazei exprimat n mg H2O2 descompuse n 30 minute va fi egal cu : 1,7 . (n1 n2).
177

Determinarea activitii amilazei sangvine. Metoda Wohlgemuth Principiul:Amilaza este enzima care hidrolizeaz macromolecula

poliglucidelor pn la maltoz, trecnd prin stadii intermediare de dextrine, care n final nu mai dau reacii de culoare cu iodul. Se determin diluia maxim la care amilaza din materialul de cercetat hidrolizeaz complet o anumit cantitate de amidon.
Reactivi:

soluie de NaCl 0,85%; soluie de amidon 1% n soluia de NaCl 0,85%; soluie de iod N/10.
Mod de lucru:ntr-o serie de 10 eprubete mici se face o scar de diluie de

ser de la 1/1 la 1/512, i anume: n eprubeta 1 se msoar 2 ml ser limpede,n eprubetele 2 10 cte 1 ml soluie NaCl 0,85%. Din prima eprubet se ia 1ml lichid, se trece n eprubeta a doua, se amestec bine i din eprubeta a doua se trece 1 ml n urmtoarea. Operaia se repet n acelai mod pn la ultima eprubet, din care se arunc 1 ml amestec. Se adaug apoi n fiecare eprubet 2 ml din soluia de amidon, se agit i se incubeaz la 370C, timp de 30 minute. Se rcesc apoi eprubetele la un curent de ap i se adaug n fiecare cte 1 3 picturi de soluie de iod N/10. Eprubetele care conin amidon nehidrolizat prezint o culoare albastr. Eprubetele care conin amidon hidrolizat se vor colora n rou-albastru, albastruviolet, rou-glbui sau galben. Limita inferioar a aciunii enzimatice este indicat de prima eprubet din seria care prezint culoarea rou-albastru. Ultima eprubet n care se dezvolt culoarea albastr este culoarea limit. Se citete eprubeta imediat anterioar (culoarea rocat).
Calcul

Se obine rezultatul n uniti Wohlgemuth (W) nmulind cu 2 numitorul fraciei de diluie. O unitate de amilaz sau unitate Wohlgemuth este cantitatea de enzim care poate hidroliza 1 mg amidon n 30 minute la 370C, pn la stadiul de dextrin.
9
Eprubeta Diluia serului Diastaz 370C/30 min.

1 10 1 /512

1 /1

2 /2

3 /4

4 /8

5 /16

6 /32

7 /64

8 /128

9 /256 5

1 1024

16

32

64

128

256

512

178

Exemplu de calcul

Dac culoarea rou-albastru se vede n eprubeta 6, calculul se face pe baza eprubetei 5, a crei diluie este 1/16. Rezultatul se obine n uniti Wolgemuth, nmulind titrul diluiei cu 2. Activitatea amilazic pentru 1 ml ser, n exemplul dat este de 32 uniti Wohgemuth. Valori normale: 7-21 W.
Interpretare. Se observ creteri importante n pancreatite acute, iar

creteri moderate apar n pancreatite cronice, litiaz pancreatic i biliar.

Determinarea aciditii totale a urinei prin metoda Maly-Deniges Principiul:Fosfaii i carbonaii acizi din urin se precipit cu o soluie de

clorur de bariu sub form de sruri neutre: 2 NaHCO3 + BaCl2 = BaCO3 + 2 NaCl + H2O + CO2 Precipitatul format se ndeprteaz prin filtrare, iar un volum exact msurat din filtratul limpede se titreaz cu o soluie de NaOH N/10 cu factor cunoscut, n prezena fenolftaleinei.
Reactivi:

soluie de clorur de bariu 10%; soluie de hidroxid de sodiu N/10; soluie de acid sulfuric N/10; soluie alcoolic de fenolftalein 1%.
Mod de lucru:

ntr-un cilindru gradat de 50 ml se introduc 10 ml urin, 10 ml NaOH N/10, 5 ml BaCl2 10% i 25 ml ap distilat. Se agit uor i dup 5 minute se filtreaz. 5 ml. filtrat limpede care corespund la 1 ml urin, se introduc ntr-un pahar Berzelius, se adaug 1 ml H2SO4 N/10 pentru neutralizarea NaOH introdus iniial i 1-2 picturi de fenolftalein ca indicator. Se titreaz coninutul paharului cu NaOH N/10 pn la obinerea unei coloraii roz pal persistent.
Calcul:

Se exprim aciditatea urinei n g acid sulfuric la litrul de urin: g acid sulfuric/1 urin = V . f . 0,0049 . 1000; n care: V = volumul soluiei de NaOH N/10 n ml; f = factorul soluiei de NaOH N/10; 0,0049 = grame acid sulfuric echivalente cu 1 ml soluie NaOH N/10.
Interpretare: reacia urinei este n funcie de regimul alimentar i de

starea fiziologic a animalelor. La rumegtoare (bovine) urina este alcalin i limpede, spre deosebire de nerumegtoare (cabaline) a cror urin este tulbure datorit cantitilor mari de carbonat de calciu. La carnivore urina este acid i slab colorat. Omnivorele au urina slab acid sau alcalin, n funcie de
179

alimentaie, cu cantiti relativ mari de acid uric i urai. n cazul mbolnvirii aparatului digestiv nsoit de parezia prestomacelor, inaniie, intoxicaii, reacia urinei la ierbivore devine acid. Urina acid se ntlnete i n tulburri de metabolism (diabet) leziuni organice, stri catarale intestinale, pulmonare, precum i la animalele cu febr aftoas. La ierbivorele alimentate cu concentrate ,urina devine neutr sau slab acid. Tineretul sugar are urina acid datorit lactalbuminelor ingerate.
Dozarea ionului amoniu (NH4+) n urin. Metoda cu formol Sorensen-Ronchese Principiul:Srurile de amoniu din urin reacioneaz cu aldehida formic

elibernd o cantitate echivalent de acid, care este titrat n prezena de fenolftalein, cu o soluie de hidroxid de sodiu de concentraie cunoscut; 4 NH4Cl + 6 CH2O = 4 HCl + (CH2)6N4 + 6 H2O (CH2)6N4 = hexametilentetramina (urotropina) HCl + NaOH = NaCl + H2O Aminoacizii prezeni n urin reacioneaz i ei cu formolul, pierznd caracterul bazic i rmnnd cu funcia carboxil care se titreaz cu soluia de hidroxid de sodiu folosit la titrarea acidului clorhidric. H2N R COOH + NaOH = H2N R COONa + H2O Prezena aminoacizilor face ca rezultatele obinute la dozare s corespund amoniacului n proporie de 80-90%.
Reactivi:

soluie de NaOH 0,1 N; soluie fenolftalein 2%; soluie neutr de formol 1/1.
Mod de lucru:

ntr-un pahar Berzelius se introduc 5 ml urin i 5 ml ap distilat fiart i rcit pentru ndeprtarea CO2. Se adaug o pictur fenolftalein i se titreaz cu NaOH N/10 pn la coloraia roz (prima titrare folosete la neutralizarea aciditii libere din urin). Se adaug 10 ml soluie neutr de formol 1/1. Amestecul se decoloreaz la adugarea formolului din cauza acidului pus n libertate din descompunerea srurilor de amoniu. Se titreaz aciditatea eliberat cu NaOH N/10 pn la coloraia roz pal i se noteaz volumul folosit la a doua titrare.
Calcul:1 ml NaOH 0,1 N este echivalent cu 1 ml NH3 0,1 N, adic cu

0,017 g amoniac. g NH3/1 = n . 0,017 . 200

180

n = ml NaOH 0,1 N folosii la a doua titrare (dup adugarea formolului).

Interpretare: amoniacul urinar se gsete n cantiti mici n urina

animalelor sntoase: bovine = 0,0013-0,064, ovine = 0,01g/1. Valoarea sa crete n cursul diabetului, paralel cu excreia acizilor organici. Eliminarea de amoniac n urin crete mult n afeciunile nsoite de acidoz. n leziunile renale cantitatea de amoniac scade mult, n acelai timp scznd i pH-ul urinar. n cistite i pielonefrite, amoniuria crete foarte mult i se observ prin miros.
Dozarea vitaminei C n urin. Metoda Tillmans Principiul:Vitamina C (acidul ascorbic) este oxidat cu reactivul Tillmans

(2,6-diclor-indofenol) la acid dehidroascorbic, iar colorantul este redus la leucoderivatul corespunztor.

OH O= CCO + N HHO - C CH2OH acid L Cl Cl
=

OH O= C= C= O HHO - C CH2 OH acid Cl Cl NH

O 2,6 diclor

OH leucoderiv

Reactivi:

acid acetic concentrat; soluie tampon fosfai pH= 7 (120 ml soluie fosfat monopotasic M/15 i 180 ml soluie fosfat disodic M/15); reactiv Tillmans N/1000: 0,15 g 2,6 diclor indofenol se dizolv n 100 ml ap distilat fierbinte, se adaug 300 ml soluie tampon fosfai i apoi se completeaz cu ap distilat pn la litru. Se las 24 ore la ntuneric i se filtreaz. Titrul reactivului Tillmans. ntr-un pahar Berzelius se pipeteaz 10 ml reactiv Tillmans i se titreaz cu acid ascorbic de concentraie cunoscut pn la dispariia culorii roz. Titrul reactivului Tillmans = ml soluie acid ascorbic . Tacid / 10.
Mod de lucru;

ntr-un pahar Berzelius se introduc 5 ml urin, se adaug 50 ml ap distilat i 0,5 ml acid acetic concentrat. Se titreaz cu reactiv Tillmans pn la coloraia roz persistent 30. pentru comparaie se poate face un martor din 5 ml urin i 50 ml ap distilat.
181

Calcul:

Un ml reactiv Tillmans N/1000 corespunde la 0,088 mg vitamina C. mg vitamina C / 1 = n .f . 0,088 . 1000 / 5 n care: n = ml reactiv Tillmans N / 1000 folosii la titrare; f = factorul de corecie volumetric a reactivului Tillmans; 5 = ml urin luai n lucru.
Interpretare: cantiti sczute de vitamina C se ntlnesc n avitaminoza

C, colit, diaree. Avitaminoza C determin osteoporoza, afeciuni dentare, articulare, apare n infecii, intoxicaii i parazitoze cronice, mai ales la porcine.
Determinarea calitativ a proteinelor din urin Principiul:n urinele acide i care conin electrolii, determinarea

calitativ a proteinelor se face prin precipitarea acestora cu acizi minerali i organici acidul azotic, acidul acetic, acidul tricloracetic, acidul sulfosalicilic.
Metoda cu acidul sulfosalicilic

Acidul sulfosalicilic determin, n funcie de concentraia proteinelor din urin, apariia unei turbiditi, sau chiar a unui precipitat.
Reactivi

acid sulfosalicilic 20%

Mod de lucru;

ntr-o eprubet se introduc 3 ml urin i 8 picturi de acid sulfosalicilic 20%. Apariia unui precipitat indic prezena proteinelor. n cazul urinei neutre sau alcaline, acestea se aciduleaz n prealabil cu acid acetic 10%.
Metoda Heller Principiu: Peste 5 ml urin se adaug 2 ml reactiv nitric-nitros cu o pipet, la

fundul eprubetei. Reactivul nitric-nitros se poate nlocui cu acid azotic concentrat. n prezena albuminei apare un inel opalescent la limita de separare dintre cele dou lichide.
Metoda cu acid acetic la cald:

Aceast metod are la baz coagularea albuminelor prin nclzire n mediu acid.
Mod de lucru:1o ml urin filtrat este trecut ntr-o eprubet care se nclzete la

partea superioar, partea inferioar rmnnd rece. Apariia unei tulbureli se datoreaz fie proteinelor, fie fosfailor. Pentru difereniere se adaug cteva picturi de acid acetic concentrat sau acid tricloracetic 10% urinei nclzite. Precipitatul dispare n cazul fosfailor i se menine n cazul proteinelor.
182

Determinarea glucidelor din urin

Glucoza este principalul component anormal de natur glucidic din urin. Recunoaterea glucidelor din urin are la baz proprietile reductoare ale acestora.
Proba calitativ Benedict Principiu:n mediu alcalin i la cald, glucoza reduce hidroxidul cupric la oxid

cupros, de culoare roie-crmizie. Reactiv Benedict: soluie sulfat de cupru 17,3 %, se adaug peste o soluie nclzit din 100 g carbonat de sodiu anhidru, 173 g citrat trisodic i 700 ml ap distilat. Dup rcire se completeaz volumul la 1 litru cu ap distilat i se filtreaz.
Mod de lucru:

ntr-o eprubet se fierbe 5 ml reactiv Benedict i 8 picturi de urin. Dac urina conine glucoz se va obine un precipitat a crui culoare ne d indicaii asupra cantitii de glucoz. verde = 0,5 0,8g% glucoz galben = 1 g% glucoz rou = peste 2 g% glucoz.

Proba calitativ Fehling Principiu:Glucoza, ca principal component glucidic anormal din urin

reduce la cald, n mediu alcalin reactivul Fehling la oxid cupros, de culoare roiecrmizie. Culoarea i abundena precipitatului de oxid cupros variaz n funcie de concentraia glucozei n urin. Reaciile care au loc sunt urmtoarele: CuSO4 + 2 NaOH = Cu(OH)2 + Na2SO4 R CHO + 2 Cu(OH)2 = Cu2O + R COOH + 2 H2O glucoz
Reactivi:

acid gluconic

soluie Fehling I i II n momentul folosirii se amestec n volume egale cele dou soluii.
Mod de lucru:

ntr-o eprubet se introduc 2 ml reactiv Fehling i 2 ml urin. Se nclzete la fierbere timp de 3-4 minute, iar dup rcire se trece la aprecierea rezultatului.

183

Interpretare:

n cazul urinei normale culoare rmne nemodificat; reacie negativ. n cazul apariiei precipitatului, reacia se apreciaz ca fiind pozitiv, culoarea i abundena acestuia dnd indicaii asupra concentraiei glucozei n urin; reacia se intensific n ordinea culorilor urmtoare: verde-msliniu, verde-glbui, galben, portocaliu, rou-crmiziu. Orice modificare a culorii albastre a soluiei Fehling spre culoarea verde sau maronie, fr apariia unui precipitat este nesemnificativ.

184

Bibliografie 1. Tma V, erban M, Cotru M,- Biochimie Medical Veterinar, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti,1981 2. Lehninger Al,- Biochimie, vol. 1 i 2, Editura Tehnic, Bucureti, 1992 3. Ivas E, Trinc L, Biochimie structural, Ed. UAMV,2001. 4. Ivas E, Ivas C, Biochimie Dinamic-Metabolism Ed. Pim,2009 5. Popescu O, Trinc LC,- Biochimie, Metabolism, Litografia U.A.M.V. Iai, 1997 6. Lucia Trinc, Elena Ivas , Chimie i Biochimie, Editura Tehnopress, Iai, ISBN 973-8377-80-3, 231 pagini, 2003 7. Neniescu CD,-Chimie organic Vol I i II, ed.VII, Editura Didactic i Pedagogic, Bucureti, 1974 8. Popescu O, - Biochimie, Litografia U.A.M.V. Iai, 1993 9. Elena Ivas, Lucia Trinc, Fl. Cura, Tehnici de laborator n biochimia animal, Editura Pim, Iai, ISBN 973-8490-55-3,107 pagini,2003

185